DE3506307C2 - - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft Prolin-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und sie enthaltende Arzneimittel gemäß den vorangehenden Patentansprüchen.

Die Prolin-Derivate der allgemeinen Formel (1) hemmen das Angiotensin-Converting-Enzym. Sie eignen sich deshalb zur Behandlung von Hochdruck. Bei oraler Gabe können die Prolin- Derivate innerhalb kurzer Zeit resorbiert werden und eine protrahierte Wirkung zeigen. Die Verbindungen der Erfindung und ihre Salze zeichnen sich durch eine niedrige Toxizität aus. Ferner verbessern sie die Immunitätslage, sie wirken expektorierend und vermindern den Innendruck des Ohres. Sie können deshalb als Immunostimulantien, Expektorantien oder zur Behandlung von Glaukom verwendet werden.

Bekannteste Verbindungen, die das Angiotensin-Converting- Enzym hemmen, sind z. B. Aminosäure-Derivate, die in der EP 12 401 A1 beschrieben sind. Verbindungen der Erfindung der allgemeinen Formel (1), in der R₁ ein verzweigter oder unverzweigter Alkylrest mit 5 oder 6 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise eine n-Pentyl- oder n-Hexylgruppe ist, n den Wert 0 hat, R₄ ein Wasserstoffatom oder ein C₁-C₆-Alkylrest ist und R₂ und R₃ die im Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, können unter die allgemeine Formel der Aminosäure-Derivate der EP 12 401 A1 fallen, sie sind jedoch in dieser Offenlegungsschrift nicht speziell offenbart. Die vorgenannten Verbindungen der Erfindung sind bessere Inhibitoren des Angiotensin-Converting-Enzyms als die in der EP 12 401 A1 speziell beschriebenen Verbindungen und die Wirkung kann rascher eintreten als bei den bekannten Verbindungen.

Beispiele für die Reste R₁ bis R₆ in der allgemeinen Formel (1) werden nachstehend gegeben.

Beispiele für C₅-C₁₄-Alkylreste sind unverzweigte oder verzweigte Reste, wie die Phenyl-, Isopentyl-, 2-Methylbutyl-, 1-Methylbutyl-, Neopentyl-, Hexyl-, 2-Methylpentyl-, 3-Methylpentyl-, 4-Methylpentyl-, 2,2-Dimethylbutyl-, 3,3-Dimethylbutyl-, Heptyl-, Octyl-, Nonyl-,, Decyl-, Undecyl-, Dodecyl-, Tridecyl-, Tetradecyl-, 6-Methylheptyl-, 7-Methyloctyl-, 8-Methylnonyl-, 9-Methyldecyl-, 10-Methylundecyl-, 11-Methyldodecyl- und 12-Methyltridecyl­ gruppe.

Beispiele für eine C₂-C₆-Alkenylgruppe sind die Vinyl-, Allyl-, 2-Butenyl-, 3-Butenyl-, 3-Methyl-2-butenyl-, 1-Methylallyl-, 2-Pentenyl- und 2-Hexenylgruppe.

Beispiele für C₃-C₈-Cycloalkylreste in der C₃-C₈--Cycloalkyl- C₁-C₆-alkylreste sind die Cyclopropyl-, Cyclobutyl-, Cyclopentyl-, Cyclohexyl-, Cycloheptyl- und Cyclooctylgruppe. Beispiele für den C₃-C₈-Cycloalkyl-C₁-C₆-alkylrest sind die Cyclopropylmethyl-, Cyclobutylmethyl-, Cyclopentylmethyl-, Cyclohexylmethyl-, Cycloheptylmethyl-, Cyclooctylmethyl-, 1-Cyclopentyläthyl-, 2-Cyclopentyl-äthyl-, 1-Cyclohexyläthyl-, 2-Cyclohexyläthyl-, 1-Cyclohexylpropyl-, 2-Cyclohexylpropyl-, 3-Cyclohexylpropyl-, 4-Cyclohexylbutyl-, 5-Cyclohexylpentyl- und 6-Cyclohexyl­ hexylgruppe.

Beispiele für C₁-C₆-Alkylreste sind die Methyl-, Äthyl-, Propyl-, Isopropyl-, Butyl-, Isobutyl-, tert.-Butyl-, Pentyl- und Hexylgruppe.

Beispiele für C₁-C₁₄-Alkylreste R₅ sind die gleichen, wie sie für C₅-C₁₄-Alkyl- und C₁-C₆-Alkylreste gegeben sind.

Beispiele für Phenyl-C₁-C₆-alkylreste sind die Benzyl-, α-Phenäthyl-, β-Phenäthyl-, 3-Phenylpropyl-, 4-Phenylbutyl-, 5-Phenylpentyl-, 6-Phenylhexyl-, 1,1-Dimethyl-2- phenyläthyl- und 1-Methyl-2-phenyläthylgruppe.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (1) enthalten in ihrem Molekül asymetrische Kohlenstoffatome. Deshalb können sie in Form von optischen Isomeren vorliegen. Die Erfindung betrifft die in der allgemeinen Formel (1) des Anspruchs 1 gekennzeichneten Isomeren.

Die Salze der Prolin-Derivate umfassen auch pharmazeutisch verträgliche Salze mit Säuren. Beispiele für die zur Salzbildung verwendbaren Säuren sind anorganische Säuren, wie Salzsäure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure, oder Bromwasserstoffsäure, und organische Säuren, wie Oxalsäure, Maleinsäure, Fumarsäure, Apfelsäure, Weinsäure, Citronensäure, Benzoesäure und Picrinsäure.

Die Prolin-Derivate, die in ihrem Molekül einen oder mehrere saure Gruppen enthalten, können durch Umsetzung mit einer Base in die entsprechenden Salze überführt werden. Diese Salze umfassen ebenfalls pharmazeutisch verträgliche Salze. Beispiele für die zur Salzbildung verwendbaren Basen sind anorganische Basen, wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Calciumhydroxid, Natriumcarbonat und Kaliumbicarbonat, sowie organische Basen, wie Lysin, Arginin, Ornithin, Morpholin, Piperazin, Piperidin, Äthylamin, Dimethylamin, Triäthylamin und Dicyclohexylamin.

Die Prolin-Derivate der Erfindung sowie Zwischenprodukte zu ihrer Herstellung können beispielsweise nach Verfahren hergestellt werden, die in den folgenden Reaktionsschemata wiedergegeben sind.

Reaktionsschema

In diesen Formeln haben R₁, R₂, R₃ und n die in den Patentansprüchen angegebene Bedeutung. R₇ ist eine Hydroxyl- oder C₁-C₆-Alkoxygruppe oder eine Gruppe

in der R₄ die in den Patentansprüchen angegebene Bedeutung hat. X ist ein Halogenatom, eine Alkylsulfonyloxy- oder Arylsulfonyloxygruppe.

Beispiele für Halogenatome X in den Propionsäure-Derivaten der allgemeinen Formel (1) sind das Chlor-, Brom- und Jodatom. Spezielle Beispiele für Alkylsulfonyloxygruppen in den Derivaten der allgemeinen Formel (3) sind die Methansulfonyloxy- und Äthansulfonyloxygruppe. Beispiele für Arylsulfonyloxygruppen sind die p-Toluolsulfonyloxy- und Benzolsulfonyloxygruppe.

Nach dem Reaktionsschema 1 wird das Cystein-Derivat (2) mit dem Propionsäure-Derivat (3) kondensiert. Man erhält eine Verbindung (1a). Die Kondensationsreaktion wird in einem Lösungsmittel in Gegenwart eines Säureakzeptors durchgeführt. Beispiele für geeignete Lösungsmittel sind Alkohole, wie Methanol, Äthanol, Isopropanol und tert.-Butanol, Äther, wie Diäthyläther, Tetrahydrofuran (THF) und Dioxan, sowie aprotische polare Lösungsmittel, wie Dimethylformamid (DMF), Dimethylsulfoxid (DMSO) und Hexamethylphosphorsäuretriamid (HMPA). Beispiele für geeignete Säureakzeptoren sind Alkalimetallcarbonate, wie Natriumcarbonat und Kaliumcarbonat, sowie Alkalimetallhydrogencarbonate, wie Natriumhydrogencarbonat und Kaliumhydrogencarbonat, sowie organische tertiäre Amine, wie Triäthylamin, Pyridin und 1,8-Diazabicyclo[5,4,0]undecan-7-en (DBU). Der Säureakzeptor wird im allgemeinen in einer Menge von etwa 1 bis etwa 2 Mol, vorzugsweise etwa 1 bis etwa 1,2 Mol, pro Mol Cystein-Derivat (2) verwendet. Das Propionsäure-Derivat (3) wird im allgemeinen in einer Menge von mindestens 1 Mol, vorzugsweise etwa 1 bis etwa 1,2 Mol, pro Mol des Cystein-Derivats (2) verwendet. Die Umsetzung wird im allgemeinen bei einer Temperatur von etwa 0 bis 80°C, vorzugsweise bei Raumtemperatur, durchgeführt. Sie ist innerhalb etwa 3 bis 72 Stunden beendet.

Das verfahrensgemäß eingesetzte Cystein-Derivat (2) kann nach Verfahren hergestellt werden, die beispielsweise in folgenden Druckschriften beschrieben sind: J. Org. Chem., Bd. 16 (1959), 749; Helv. Chim. Acta, Bd. 32 (1949), 866; J. Biol. Chem., Bd. 140 (1941), 131.

Reaktionsschema 2

R₁, R₂, R₃ und n haben die in den Patentansprüchen angegebene Bedeutung, R_7a ist eine C₁-C₆-Alkoxygruppe oder eine Gruppe

wobei R_4a ein C₁-C₆-Alkyl- oder Phenyl-C₁-C₆-alkylrest ist, und R_7b eine Hydroxylgruppe oder eine Gruppe

ist.

Die Verbindung (1a′′) kann durch Umsetzung der Verbindung (1a′) mit einer Säure in Gegenwart eines Scavengers, wie Anisol, Thioanisol oder Dimethylsulfid, hergestellt werden.

Beispiele für geeignete Säuren sind organische Säuren, wie Essigsäure, Trifluoressigsäure, (TFA), Methansulfonsäure und Trifluormethansulfonsäure, sowie anorganische Säuren, wie Salzsäure, Bromwasserstoffsäure und Fluorwasserstoffsäure. Die Umsetzung kann in einem Lösungsmittel durchgeführt werden. Beispiele für geeignete Lösungsmittel sind Äther, wie Diäthyläther, THF und Dioxan, Ester, wie Methylacetat und Äthylacetat, sowie halogenierte Kohlenwasserstoffe, wie Methylenchlorid und Chloroform. Bei Verwendung von Trifluoressigsäure ist kein zusätzliches Lösungsmittel erforderlich. Deshalb wird diese Säure bevorzugt. Das Scavengar, wie Anisol wird in einer Menge von gewöhnlich etwa 1 bis 10 Mol, vorzugsweise etwa 3 bis 5 Mol, pro Mol der Verbindung (1a′) verwendet. Die Umsetzung wird bei einer Temperatur von etwa 0 bis 50°C, vorzugsweise von etwa 0 bis 25°C, durchgeführt. Sie ist innerhalb etwa 1 bis 10 Stunden beendet.

Reaktionsschema 3

In den Formeln haben R₁, R₂, R₃ und n die in den Patentansprüchen angegebene Bedeutung.

Die Verbindung (5) kann durch Umsetzung des Cystein-Derivats (2) mit der α-Ketosäure (4) hergestellt werden. Die intermediär bei der Umsetzung des Cystein-Derivats (2) mit der α-Ketosäure (4) gebildete Schiff-Base wird in Gegenwart eines komplexen Metallhydrids reduziert. Beispiele für verwendbare komplexe Metallhydride sind Natriumborhydrid, Lithiumborhydrid, Natriumcyanoborhydrid und Lithiumcyanoborhydrid. Das komplexe Metallhydrid wird gewöhnlich in einer Menge von etwa 2 bis 6 Mol, vorzugsweise etwa 2 bis 3 Mol, pro Mol Cystein-Derivat (2) verwendet. Die α-Ketosäure (4) wird gewöhnlich in einer Menge von etwa 1 bis 10 Mol, vorzugsweise etwa 3 bis 5 Mol, pro Mol des Cystein- Derivats (2) verwendet. Die Umsetzung wird in einem inerten Lösungsmittel durchgeführt, das bei der Reaktion nicht stört. Beispiele für geeignete Lösungsmittel sind Wasser, Alkohole, wie Äthanol, Methanol und Isopropanol, Äther, wie Diäthyläther, THF und Dioxan, sowie aprotische polare Lösungsmittel, die DMF und DMSO. Diese Lösungsmittel können entweder allein oder im Gemisch verwendet werden. Die Umsetzung wird gewöhnlich bei einer Temperatur von etwa 0 bis 50°C, vorzugsweise bei Raumtemperatur, durchgeführt. Sie ist innerhalb etwa 3 bis 24 Stunden beendet. Bei Verwendung von Natriumcyanoborhydrid oder Lithiumcyanoborhydrid verläuft die Umsetzung bei einem pH-Wert von etwa 6,5 bis 8,5, vorzugsweise im neutralen pH-Bereich, sehr rasch.

Reaktionsschema 4

In den Formeln haben R₃ und n die in den Patentansprüchen angegebene Bedeutung, R_1a ist ein C₅-C₁₄-Alkyl-, C₂-C₆-Alkenyl- oder C₃-C₈-Cycloalkyl-C₁-C₆-alkylrest oder eine Gruppe der allgemeinen Formel

wobei R_6aein C₁-C₆-Alkylrest ist und R₅ die in den Patentansprüchen angegebene Bedeutung hat, R_2a ist ein C₁-C₆-Alkylrest, R_4a ist ein C₁-C₆-Alkylrest, R_4a ist ein C₁-C₆-Alkyl- oder Phenyl-C₁-C₆-alkylrest.

Nach dem Reaktionsschema 4 wird die Verbindung (1b) durch Umsetzung der gemäß Reaktionsschema 1 bis 3 erhaltenen Carbonsäure (6) mit dem Amin (7) hergestellt. Die Umsetzung kann in üblicher Weise durchgeführt werden. Beispiele werden nachstehend gegeben.

• (i) Kondensation der Carbonsäure (6) mit dem Amin (7) in Gegenwart eines Kondensationsmittels;
• (ii) Umsetzung der Carbonsäure (6) mit einem Halogen­ ameisensäurealkylester zum gemischten Anhydrid, das sodann mit dem Amin (7) umgesetzt wird;
• (iii) Umwandlung der Carbonsäure (6) in einen reaktionsfähigen Ester, z. B. ein p-Nitrophenylester, N-Hydroxysuccinimidester oder N-Hydroxy-5-norbornen- 2,3-dicarboximidester, der sodann mit dem Amin (7) umgesetzt wird;
• (iv) Umsetzung des Halogenids der entsprechenden Carbonsäure (6) mit dem Amin (7).

Die Carbonsäure (6) wird mit einem wasserabspaltenden Mittel, wie Essigsäureanhydrid, zu einem Säureanhydrid umgesetzt, das mit dem Amin (7) umgesetzt wird. Man kann auch das Amin (7) mit einem niederen Alkylester der Carbonsäure (6) umsetzen.

Die vorstehend unter (i) bis (iv) beschriebenen Verfahren werden in an sich bekannter Weise durchgeführt. Das Verfahren (i) ist bevorzugt und wird deshalb eingehender beschrieben. Bei dem Verfahren (i) wird als Kondensationsmittel N,N′-Dicyclohexylcarbodiimid (DCC), DCC-N-hydroxysuccinmid, DCC-N-hydroxybenzotriazol, DCC-N-hydroxy-5- norbornen-2,3-dicarboximid, Diphenylphosphorylazid (DPPA)-triäthylamin oder Diäthylphosphorocyanidat (DEPC)- triäthylamin verwendet. Die Aufzählung ist beispielhaft. Die Umsetzung wird gewöhnlich in einem Lösungsmittel durchgeführt. Als Lösungsmittel kommen die verschiedenen üblichen Lösungsmittel in Frage, die die Reaktion nicht stören. Beispiele für geeignete Lösungsmittel sind halogenierte Kohlenwasserstoffe, wie Methylenchlorid, Chloroform und Dichloräthan, aromatische Kohlenwasserstoffe, wie Benzol, Toluol und Xylol, Äther, wie Diäthyläther, THF und Dioxan, Ester, wie Methylacetat und Äthylacetat, sowie aprotische polare Lösungsmittel, wie DMF, DMSO und HMPA. Das Amin (7) wird gewöhnlich in einer Menge von mindestens etwa 1 Mol, vorzugsweise etwa 1 bis 1,2 Mol, pro Mol Carbonsäure (6) verwendet. Das Kondensationsmittel wird in einer Menge von etwa 1 bis 2 Mol, vorzugsweise etwa 1 bis etwa 1,2 Mol pro Mol der Carbonsäure (6) verwendet. Die Umsetzung wird im allgemeinen bei einer Temperatur von etwa -20°C bis +30°C, vorzugsweise etwa -10°C bis Raumtemperatur durchgeführt. Die Umsetzung ist innerhalb etwa 3 bis 24 Stunden beendet.

Reaktionsschema 5

In den Formeln haben R₁, R₂, R₃, R₄ und n die in den Patentansprüchen angegebene Bedeutung. R_1b ist ein C₅-C₁₄- Alkyl-, C₂-C₆-Alkenyl- oder C₃-C₈-Cycloalkyl-C₁-C₆-alkylrest oder eine Gruppe der allgemeinen Formel

wobei R₅ die vorstehend angegebene Bedeutung hat, mit der Maßgabe, daß in der Formel (1b) die Reste R₂, R₄ und R₆ nicht gleichzeitig Wasserstoffatome sind.

Nach dem Reaktionsschema 5 werden die Verbindungen der allgemeinen Formel (1d) durch Hydrolyse einer Verbindung der allgemeinen Formel (1b) hergestellt, wobei mindestens einer der Reste R₂, R₄ udn R₆ eine Estergruppe ist. Die Hydrolyse kan in einem Lösungsmittel und in Gegenwart einer Base durchgeführt werden. Beispiele für geeignete Lösungsmittel sind Gemische aus Wasser und einem organischen Lösungsmittel, z. B. einem niederen Alkohol, wie Methanol oder Äthanol, einem Äther, wie Diäthyläther, THF oder Dioxan, und Acetonitril. Beispiele für geeignete Basen sind Alkalimetallhydroxide, wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid und Lithiumhydroxid.

Wenn derRest R₁ ein C₅-C₁₄-Alkyl-, C₂-C₆-Alkenyl- oder C₃-C₈-Cycloalkyl-C₁-C₆-alkylrest ist, wird die Base im allgemeinen in einer Menge von etwa 2 bis 3 Mol, vorzugsweise etwa 2 bis 2,2 Mol, pro Mol der Verbindung der allgemeinen Formel (1b) verwendet. Wenn der Rest R₁ die Gruppe

ist, wird die Base im allgemeinen in einer Menge von etwa 3 bis 4 Mol, vorzugsweise etwa 3 bis 3,3 Mol, pro Mol der Verbindung (1b) verwendet. Die Umsetzung wird gewöhnlich bei einer Temperatur von etwa 0 bis 40°C, vorzugsweise unterhalb Raumtemperatur, durchgeführt. Sie ist innerhalb etwa 30 Minuten bis 12 Stunden beendet.

Die nach den Reaktionsschemata 1 bis 5 erhaltenen Verbindungen lassen sich aus dem Reaktionsgemisch leicht abtrennen und nach üblichen Methoden reinigen. Beispiele für derartige Methoden sind Lösungsmittelextraktion, Verdünnen, Destillation und Umkristallisation, Säulenchromatographie, präparative Dünnschichtchromatographie, Ionen­ austauschchromatographie und Gelchromatographie.

Als Arzneistoffe werden die Verbindungen der Erfindung gewöhnlich als solche oder nach Vereinbarung zu Arzneimitteln gegeben. Zur Herstellung von Arzneimitteln werden die üblichen Trägerstoffe, Verdünnungsmittel und Excipientien verwendet, z. B. Füllstoffe, Streckmittel, Bindemittel, Netzmittel, Sprengmittel, grenzflächenaktive Stoffe und Glasiermittel.

Die Arzneimittel können z. B. in Form von Tabletten, Pillen, Pulvern, Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Granulaten, Kapseln, Suppositorien oder Injektionspräparaten vorliegen. Die Herstellung dieser Arzneimittel erfolgt in an sich bekannter Weise und nach üblichen Methoden. Der Wirkstoffgehalt in den Arzneimitteln kann in einem verhältnismäßig breiten Bereich liegen. Gewöhnlich beträgt der Wirkstoffgehalt etwa 1 bis 70 Gewichtsprozent, vorzugsweise etwa 1 bis 30 Gewichtsprozent. Die Dosierungseinheit kann etwa 1 bis 500 mg Wirkstoff enthalten.

Die Prolin-Derivate der Erfindung können oral, parenteral oder rektal in einer Tagesdosis von 0,06 bis 50 mg pro kg Körpergewicht unterteilt in 1 bis 3 Dosen gegeben werden.

Nachstehend werden Beispiele zur Herstellung der Ausgangsverbindungen und der Endprodukte gegeben. In den Beispielen haben die Ausdrücke α- und β-Isomer und A- und B-Isomer folgende Bedeutung:

• (i) Von den zwei Isomeren, die bei der Umsetzung von S-Alkyl-L-cystein-äthylester und 2-Brompropionsäure- tert.-butylester anfallen, wird das bei der Kieselgel- Säulenchromatographie mit Diäthyläther/n-Hexan erhaltene erste Eluat als α-Isomer und das zweite Eluat als β-Isomer bezeichnet. Sämtliche aus einem α-Isomer hergestellte Verbindungen werden ebenfalls als α-Isomere bezeichnet. Die aus einem β-Isomer hergestellten Verbindungen werden dementsprechend als b-Isomere bezeichnet.
• (ii) Die 2 oder 4 Isomeren, die bei der Umsetzung von S-[1-Äthoxycarbonylalkyl]-L-cysteinäthylester mit 2-Brompropionsäure-tert.-butylester anfallen, wird das bei der Kieselgel-Säulenchromatographie mit Diäthyläther/ n-Hexan anfallende erste Eluat als A-Isomer und das als zweite Eluat anfallende Produkt als B-Isomer bezeichnet. Dementsprechend werden die aus einem A-Isomer hergestellten Verbindungen als A-Isomere und die aus einem B-Isomer anfallenden Produkte als B-Isomere bezeichnet.

Versuch 1 Hemmung des Angiotensin-Converting-Enzyms (ACE)

100 µl einer aus Kaninchenlungen-Acetonpulver (Sigma Chemical Co., Ltd., USA) hergestellten Enzymlösung werden mit 100 µl einer Lösung der zu untersuchenden Probe vermischt. Das Gemisch wird 10 Minuten bei 37°C vorsichtig geschüttelt. Danach wird das Reaktionsgemisch mit 100 µl einer Lösung versetzt, die 6,99 mMol Hippurylhistidyl- leucin als Substrat enthält. Das Gemisch wird 45 Minutne unter Schütteln bei 37°C umgesetzt. Danach wird die Reaktion durch Zugabe von 200 µl 1 n Schwefelsäure abgebrochen. Sodann wird das Reaktionsgemisch mit Natriumchlorid gesättigt und mit 2 ml Diäthyläther versetzt, um die bei der Umsetzung entstandene Hippursäure zu extrahieren. Das erhaltene Gemisch wird 15 Minuten kräftig geschüttelt und 5 Minuten bei 2000 U/min zentrifugiert. Es werden 1,5 ml der Ätherschicht abgetrennt. Die Lösungsmittel wird abdestilliert und der Rückstand in 1,5 ml destilliertem Wasser aufgenommen und die Absorption bei 228 nm bestimmt. Zur Kontrolle wird das gleiche Verfahren wiederholt, jedoch werden 100 µl destilliertes Wasser anstelle der Probelösung verwendet.

Die Hemmwirkung wird durch Subtraktion des Absorptionswertes des Rückstandes nach Zugabe der Probelösung vom Absorptionswert der Kontrollprobe berechnet. Der erhaltene Wert wird durch den Absorptionswert des Kontrollwertes dividiert und mit 100 multipliziert. Dies ergibt die prozentuale Hemmung. Die Hemmwirkung wird ausgedrückt durch den Wert IC₅₀, d. h. die Konzentration der Probelösung im Reaktionsgemisch, bei der eine 50prozentige Hemmung erreicht wird.

Die in diesem Versuch verwendeten Testverbindungen sind nachstehend zusammengefaßt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 25 zusammengefaßt.

Testverbindung
Name der Testverbindung
1
N-[(R)-1-Carboxy-2-hexylthioäthyl]-alanyl-(S)-prolin (β-Isomer) (Beispiel 10)
2	N-[(R)-1-Carboxy-2-hexylthioäthyl]-(R,S)-alanyl-(S)-prolin (Beispiel 11)
3	N-[(R)-1-Carboxy-2-pentylthioäthyl]-alanyl-(S)-prolin (β-Isomer) (Beispiel 12)
4	N-[(R)-1-Carboxy-3-methylthiopropyl]-(R,S)-alanyl-(S)-prolin (Beispiel 17 der EP 12 401 A1)
5	N-[(R)-1-Methoxycarbonyl-3-methylthiopropyl]-(R,S)-alanyl-(S)-prolin--hydrochlorid (Beispiel 16 der EP 12 401 A1)

Testverbindung
ACE-Hemmung IC₅₀
Mol/Liter
1
5,21 × 10-10
2	1,35 × 10-9
3	1,04 × 10-10
4	1,27 × 10-8
5	5,24 × 10-6

Aus Tabelle 25 ist ersichtlich, daß die untersuchten Verbindungen der Erfindung eine höhere ACE-Hemmwirkung haben als die Testverbindungen Nr. 4 mit der höchsten Hemmwirkung. Die Testverbindungen 1, 2 und 3 haben einen 24, 9, 4 bzw. 112 mal höhere Wirkung als die Testverbindung Nr. 4.

Versuchsbeispiel 2 ACE-Hemmwirkung bei normotensiven Ratten

Männliche Wistar-Ratten mit einem Körpergewicht von 200 bis 400 g wurden durch intraperitoneale Injektion von Urethan (1,25 g/kg) narkotisiert und in Rückenlage gehalten. Das Ausmaß der Hemmung der Pressur-Antwort auf Angiotensin I (A I) wurde bestimmt. Der Blutdruck wurde mittels einer Femoral-Arterien-Kanüle gemessen, die mit einem Schreiber (Nihon Kohden Kabushiki Kaisha, Japan, Modell MPU-0,5-290-0-III) verbunden war. Es wurde der mittlere Blutdruck mittels eines Verstärkers (Nihon Kohden Kabushiki Kaisha, Japan, Modell RP-5) auf einem Mehrzweck-Polygraph (Nihon Kohden Kabushiki Kaisha, Japan, Modell RM-85 aufgezeichnet. Zunächst läßt man die Ratten 1 Stunde den Blutdruck stabilisieren. Sodann werden die Versuche begonnen. Da die Größe der Pressor-Antwort auf AI mit der Zeit variiert, wird das Verhältnis der Antwort auf AI und AII (AI/AII-Verhältnis) zur Bestimmung der Größe der Pressor-Antwort auf AI verwendet, da dieses Verhältnis konstanter bleibt. Durch die kanülierte Femoralvene wurde AI (300 ng/kg) zuerst und AII (300 ng/kg) nach 5 Minuten gegeben, um das AI/AII-Verhältnis zu bestimmen. 30 Minuten nach der ersten Gabe von AI wurden nochmals 300 ng/kg AI sowie 300 ng/kg AII nach 5 Minuten gegeben. Danach wurde das AI/AII-Verhältnis bestimmt. Dieses Verfahren wird wiederholt, bis ein konstanter Wert für das AI/AII-Verhältnis erhalten wird. Der Mittelwert der AI/ AII-Verhältnis wird in der nachstehend wiedergegebenen Gleichung als "C" dargestellt. 10 Minuten nach der letzten Zugabe von AII wird eine wäßrige Lösung, die 1 mg/kg der Testverbindung enthält, unmittelbar in den Magen durch eine Magensonde gegeben. 15 Minuten nach Verabfolgung der Testverbindung werden 300 n/kg AI und 5 Minuten später 300 ng/kg AII gegeben. Danach wird das AI/AII-Verhältnis bestimmt, das in der nachfolgenden Gleichung mit "E" bezeichnet wird. Die prozentuale ACE-Hemmung wird mit der nachstehend wiedergegebenen Gleichung berechnet.

Anschließend werden 60, 120 und 240 Minuten nach Verabfolgung der Testverbindung 300 ng/kg AI in gleicher Weise wie vorstehend gegeben, sowie nach 5 Minuten 300 ng/kg AII. Die prozentuale ACE-Hemmung wird in gleicher Weise berechnet.

Die Ergebnisse sind nachstehend in Tabelle 26 zusammengefaßt.

Tabelle 26

Die Beispiele A bis Z und A′ bis W′ betreffen die Herstellung von Ausgangsverbindungen, die Beispiele 1 bis 85 die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen.

Beispiel A Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]- alanin-tert.-butylester (α- und β-Isomere)

Eine Lösung von 2,5 g S-Hexyl-L-cysteinäthylester und 2,3 g 2-Brompropionsäure-tert.-butylester in 6 ml HMPA wird mit 1,5 ml Triäthylamin versetzt. Das Gemisch wird 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Reaktionsgemisch in Eiswasser gegossen und mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser gründlich gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird durch Kieselgel-Säulenchromatographie mit einem 1 : 2-Gemisch aus Diäthyläther und n-Hexan gereinigt. Es wird das α-Isomer der Titelverbindung als farbloses Öl aus dem ersten Eluat erhalten. Ausbeute 1,2 g.

[α] = +27,3° (c = 1,2 Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J=5Hz), 1,27 (3H, d, J=7Hz),
1,29 (3H, t, J=7Hz), 1,3-1,8 (8H, m),
1,45 (9H, s), 2,55 (2H, t, J=7Hz),
2,80 (2H, d, J=6Hz), 3,32 (1H, q, J=7Hz),
3,46 (1H, t, J=7Hz), 4,20 (2H, q, J=7Hz),

Das β-Isomer der Titelverbindung wird als farbloses Öl aus dem zweiten Eluat erhalten. Ausbeute 1,1 g.

[α] = -40,4° (c = 0,8 Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,89 (3H, t, J=5Hz), 1,29 (3H, t, J=7Hz),
1,29 (3H, d, J=7Hz), 1,4-1,8 (8H, m),
1,47 (9H, s), 2,54 (2H, t, J=7Hz), 2,70, (1H, d-d, J=13 Hz, 7,5 Hz),
2,92 (1H, d-d, J=13Hz, 5Hz),
3,29 (1H, q, J=7Hz),
3,47 (1H, d-d, J=7,5Hz), 4,21 (2H, q, J=7Hz)

Beispiel B Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-pentylthioäthyl]- alanin-tert.-butylester (α- und b-Isomere)

8,6 g S-Pentyl-L-cysteinäthylester werden mit 8,2 g 2-Brompropionsäure-tert.-butylester und 5,5 ml Triäthylamin gemäß Beispiel A umgesetzt. Das α-Isomer wird als farbloses Öl aus dem ersten Eluat erhalten. Ausbeute 3,9 g.

[α] = +28,6° (c = 1,0 Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,90 (3H, t, J=5,5Hz), 1,28 (3H, d, J=7Hz),
1,29 (3H, t, J=7Hz), 1,45 (9H, s), 1,3-1,8 (6H, m),
2,56 (2H, t, J=7Hz),
2,81 (2H, d, J=6Hz), 3,32 (1H, q, J=7Hz),
3,46 (1H, t, J=6Hz), 4,20 (2H, q, J=7Hz),

Zweites Eluat β-Isomer, Ausbeute 3,6 g.

[α] = -42,2° (c = 1,0 Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): w
0,90 (3H, t, J=5Hz), 1,30 (3H, d, J=7Hz),
1,30 (3H, d, J=7Hz), 1,47 (9H, s) 1,3-1,8 (6H, m),
2,23 (1H, br,s), 2,54 (2H, t, J=7Hz),
2,70, (1H, d-d, J=13 Hz, 7,5 Hz, 8Hz),
2,92 (1H, d-d, J=13Hz, 5,5Hz),
3,29 (1H, q, J=7Hz), 3,45 (1H, d-d, J=8Hz, 5,5Hz),
4,21 (2H, q, J=7Hz)

Beispiel C Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]- alanin (α-Isomer)

800 mg gemäß Beispiel A hergestelltes (α-Isomer werden in 5 ml TFA gelöst. Die Lösung wird 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das TFA unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in Eiswasser gegossen. Das Gemisch wird mit gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung auf einen pH-Wert von 4 eingestellt und mit Methylenchlorid extrahiert. Der Methylenchloridextrakt wird mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand aus Methylenchlorid umkristallisiert. Es wird das α-Isomer der Titelverbindung erhalten. Ausbeute 580 mg.
F. 134 bis 136°C.

[α] = +20,9° (c = 0,6; DMF)

Beispiele D-F

Die nachstehend in Tabelle 1 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel C hergestellt.

Tabelle 1

Beispiel G Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]- (R, S)-alanin

Eine Lösung von 1,4 g S-Hexyl-L-cysteinäthylester in 25 ml Äthanol wird mit 10 ml Wasser versetzt. Das Gemisch wird unter Eiskühlung mit 2,6 g Brenztraubensäure versetzt und mit 4 n Natronlauge auf einen pH-Wert von 7 eingestellt. Sodann wird das Gemisch allmählich mit 750 mg Natriumcyanoborhydrid versetzt und 14 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in einer gesättigten wäßrigen Lösung von Natriumhydrogencarbonat gelöst. Es wird eine schwach alkalische Lösung erhalten, die mit Diäthyläther gewaschen wird. Die wäßrige Phase wird mit 1 n Salzsäure auf einen pH-Wert von 4 eingestellt und das Gemisch mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Es hinterbleiben 1,5 g der Titelverbindung

Beispiel 1 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]- (R, S)-prolin-tert.-butylester (α-Isomer)

Eine Lösung von 650 mg 90prozentigem DEPC in 2 ml DMF wird unter Eiskühlung zu einer Lösung von 1,0 g des in Beispiel C erhaltenen α-Isomers und 620 mg (S)-Prolin-tert.-butylester in 10 ml DMF gegeben. Sodann wird eine Lösung von 0,5 ml Triäthylamin in 2 ml DMF langsam eingetropft. Das Gemisch wird 2 Stunden unter Eiskühlung und weitere 10 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Reaktionsgemisch in Eiswasser gegossen und mit gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung schwach alkalisch gemacht. Anschließend wird das Gemisch mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird der Extrakt unter vermindertem Druck destilliert. Der Rückstand wird durch Kieselgel- Säulen-Chromatographie mit einem 30 : 1 Gemisch aus Chloroform und Methanol gereinigt. Es wird das α-Isomer der Titelverbindung als farbloses Öl in einer Ausbeute von 1,5 g erhalten.

[α] = -28,2° (c = 0,8 Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J=5Hz), 1,2-1,5 (6H, m),
1,45, 1,46 (i.g. 9H, jew. s),
1,2-1,8 (8H, m), 1,8-2,5 (4H, m), 2,5-3,0 (4H, m),
3,4-3,9 (4H, m), 4,1-4,5 (3H, m)

Beispiel 2 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (β-Isomer)

Gemäß Beispiel 1 werden 1,0 g des in Beispiel D erhaltenen β-Isomers umgesetzt. Es werden 1,4 g des β-Isomers der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.
[α] = -97,2° (c = 0,9 Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J=5Hz), 1,29 (3H, t, J=7Hz),
1,29 (3H, d, J=6,5 Hz), 1,44, 1,46 (i.g. 9H, jew. s),
1,2-1,8 (8H, m), 1,8-2,2 (4H, m)
Anm.:
i. g. = insgesamt
jew. = jeweils
2,54 (2H, d, J=7Hz), 2,70 (1H, d-d, J=13Hz, 7,5Hz),
2,92 (1H, d-d, J=13Hz, 5Hz), 3,2-3,7 (4H, m),
4,20 (2H, q, J=7Hz), 4,3-4,5 (1H, m)

Beispiel 3 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-pentylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (b-Isomer)

Gemäß Beispiel 1 werden 1,5 g gemäß Beispiel F hergestelltes β-Isomer umgesetzt. Es werden 2,2 g des β-Isomers der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

[α] = -94,3° (c = 1,0 Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,89 (3H, t, J=5Hz), 1,29 (3H, t, J=7Hz),
1,29 (3H, d, J=7Hz), 1,44, 1,47 (i.g.9 H, jew. s),
1,3-1,8 (6H, m), 1,8-2,3 (4H, m),
2,52 (2H, t, J=7Hz), 2,68, d-d, J=13Hz, 7Hz),
2,90 (1H, d-d, J=13Hz, 6Hz),
3,31 (1H, q, J=7Hz), 3,58 (1H, d-d, J=7HZ, 6Hz),
3,4-3,7 (2H, m), 4,20 (2H, q, J=7Hz),
4,3-4,5 (1H, m)

Beispiel 4 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin (α-Isomer und dessen L-Argininsalz

670 mg N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]-alanyl- (S)-prolin-tert.-butylester (α-Isomer und 0,5 ml Anisol werden in 4 ml TFA gelöst. Die Lösung wird 2½ Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das TFA unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird in gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung gelöst. Die Lösung hat einen pH-Wert von 8. Die Lösung wird mit Diäthyläther gewaschen. Die wäßrige Phase wird mit 1 n Salzsäure auf einen pH-Wert von 4 eingestellt und mit Methylenchlorid extrahiert. Der Methylenchloridextrakt wird mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Es wird das α-Isomer der Titelverbindung als farbloses Öl in einer Ausbeute von 540 mg. erhalten.

500 mg des Produkts werden in 10 ml Äthanol gelöst und mit einer Lösung von 217 mg L-Arginin in 4 ml Wasser versetzt. Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird mit Äthanol versetzt und das Äthanol erneut unter vermindertem Druck abdestilliert. Dieses Verfahren wird mehrmals wiederholt. Schließlich wird der Rückstand mit wasserfreiem Diäthyläther versetzt. Die ausgefällten Kristalle werden abfiltriert. Es wird das L-Argininsalz der Titelverbindung erhalten. Ausbeute 580 mg.
F. 63 bis 65°C.

[α] = -32,7° (c = 0,8 Äthanol).

Beispiel 5 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin (β-Isomer und dessen L-Argininsalz

Beispiel 4 wird mit 690 mg N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (β-Isomer; hergestellt gemäß Beispiel 2) wiederholt. Es wird das β-Isomer der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten. Ausbeute 520 mg. Das L-Argininsalz der Titelverbindung schmilzt bei 73 bis 76°C.

[α] = -61,7° (c = 1,0 Äthanol).

Beispiel 6 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-pentylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin (β-Isomer und dessen L-Argininsalz

Das β-Isomer der Titelverbindung wird als farbloses Öl aus 660 mg des gemäß Beispiel 3 hergestellten N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl- 2-pentylthioäthyl-alanyl]-(S)-prolin-tert.-butylester (β-Isomer) gemäß Beispiel 4 hergestellt. Ausbeute 590 mg. Das L-Argininsalz der Titelverbindung schmilzt bei 72 bis 80°C.

[α] = -38,2° (c = 0,8 Äthanol).

Beispiel 7 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]- (R,S)-alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester

Gemäß Beispiel 1 werdem 1,0 g des gemäß Beispiel G hergestellten N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]-(R,S)- alanins umgesetzt. Es werden 1,4 g der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

[α] = -61,0° (c = 1,0 Äthanol).
¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J=5Hz), 1,2-1,4 (6H, m),
1,44, 1,49 (i.g. 9H, jew. s), 1,2-1,8 (8H, m),
1,8-2,3 (4H, m),. 2,3-2,9 (4H, m),
3,3-3,8 (4H, m), 4,0-4,5 (3H, m)

Beispiel 8 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]- (R,S)-alanyl-(S)-prolin und dessen L-Argininsalz

Gemäß Beispiel 4 werdem 600 mg N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2- hexylthioäthyl]-(R,S)-alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (hergestellt gemäß Beispiel 7) mit 0,41 ml Anisol und 4 ml TFA umgesetzt. Es werden 480 mg der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten. Das L-Argininsalz der Titelverbindung schmilzt bei 55 bis 65°C.

[α] = -39,5° (c = 0,7 Äthanol).

Beispiel 9 Herstellung von N-[(R)-1-Carboxy-2-hexylthioäthyl]-alanyl- (S)-prolin (α-Isomer)

Eine Lösung von 600 mg N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin (α-Isomer; hergestellt in Beispiel 4) in 8 ml Äthanol wird unter Eiskühlung und Rühren mit 3,2 ml einer 1 n Natronlauge versetzt. Das Gemisch wird weitere 2½ Stunden bei Raumtemperatur gerührt und sodann auf eine mit Dowex 50W-X8 in der H⁺-Form) gefüllte Säule aufgesetzt. Das Reaktionsprodukt wird mit Wasser gewaschen und mit 4prozentiger wäßriger Pyridinlösung eluiert. Fraktionen der Titelverbindung werden gesammelt und gefriergetrocknet. Das erhaltene Pulver wird aus einem Gemisch von Äthanol und Diäthyläther umgefällt. Es wird die Titelverbindung erhalten. Ausbeute 270 mg.
F. 109 bis 112°C.

[α] = -45,6° (c = 0,6 Äthanol).

Beispiele 10 bis 12

Die nachstehend in Tabelle 2 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 9 hergestellt.

Tabelle 2

Beispiel H Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]- alanin-tert.-butylester (α- und β-Isomere)

Eine Lösung von 5,9 g S-Heptyl-L-cysteinäthylester und 5,5 g 2-Brompropionsäure-tert.-butylester in 20 ml HMPA wird mit 3,4 ml Triäthylamin versetzt. Das Gemisch wird 24 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Reaktionsgemisch in Eiswasser eingegossen und mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand durch Kieselgel-Säulenchromatographie mit einem 1 : 3 Gemisch aus Diäthyläther und n-Hexan gereinigt. Aus dem ersten Eluat wird das α-Isomer der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten. Ausbeute 2,8 g.

[α] = +26,9° (c = 0,9 Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J=5Hz), 1,27 (3H, d, J=7Hz),
1,29 (3H, t, J=7Hz), 1,4-1,8 (10H, m),
1,45 (9H, s), 2,55 (2H, t, J=7Hz),
2,80 (2H, d, J=6Hz), 3,32 (1H, q, J=7Hz),
3,46 (1H, t, J=7Hz), 4,20 (2H, q, J=7Hz)

Das β-Isomer der Titelverbindung wird als farbloses Öl aus dem zweiten Eluat erhalten. Ausbeute 2,6 g.

[α] = -38,6° (c = 1,3 Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): w
0,88 (3H, t, J=5Hz), 1,29 (3H, t, J=7Hz),
1,30 (3H, d, J=7Hz), 1,4-1,8 (10H, m),
1,47 (9H, s), 2,54 (2H, t, J=7Hz),
2,70 (1H, d-d, J=13Hz, 7,5 Hz),
2,92 (1H, d-d, J=13Hz, 5Hz), 3,29 (1H, q, J=7Hz),
3,47 (1H, d-d, J=7,5Hz, 5Hz), 4,21 (2H, q, J=7Hz)

Beispiele I-K

Die nachstehend in Tabelle 3 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel H hergestellt.

Tabelle 3

Tabelle 3 (Fortsetzung)

Beispiel L Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]- alanin (α-Isomer)

2,7 g gemäß Beispiel A hergestelltes α-Isomer von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]-alanin-tert.-butylester werden in 10 ml TFA gelöst. Die Lösung wird 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das TFA unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird in Eiswasser gegossen und das Gemisch mit gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung auf einen pH-Wert von 4 eingestellt. Danach wird mit Mehtylenchlorid extrahiert. Der Mehtylenchloridextrakt wird mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Anschließend wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird aus Methylenchlorid umkristallisiert. Es wird das α-Isomer der Titelverbindung erhalten. Ausbeute 2,0 g. F. 130 bis 132°C.

[α] = +20,5° (c = 0,8 DMF)

Beispiele M bis S

Die nachstehend in Tabelle 4 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel L hergestellt.

Tabelle 4

Beispiel T Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]- (R,S)-alanin

Eine Lösung von 5 g S-Heptyl-L-cystein-äthylester-hydrochlorid in 70 ml Äthanol wird mit 10 ml Wasser und sodann unter Eiskühlung mit 2,8 g Brenztraubensäure versetzt. Das Gemisch wird mit 4 n Natronlauge auf einen pH-Wert von 7 eingestellt. Sodann werden langsam 2,3 g Natriumcyanoborhydrid eingetragen, und das Gemisch wird 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird in gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung gelöst. Es wird eine schwach alkalische Lösung erhalten. Die Lösung wird mit Diäthyläther gewaschen. Die wäßrige Phase wird mit 1 n Salzsäure auf einen pH-Wert von 4 eingestellt und mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck abdestilliert. Es werden 3,9 g der Titelverbindung erhalten.

Beispiel 13 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]- alanin-(S)-prolin-tert.-butylester (β-Isomer)

Eine Lösung von 1,0 g des gemäß Beispiel M erhaltenen β-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]- alanin und 580 mg (S)-Prolin-tert.-butylester in 14 ml DMF wird unter Eiskühlung und Rühren mit einer Lösung von 590 mg 90prozentigem DEPC in 2 ml DMF versetzt. Sodann wird in das Gemisch langsam eine Lösung von 1,43 ml Triäthylamin in 2 ml DMF eingetropft. Das erhaltene Gemisch wird 2 Stunden unter Eiskühlung und weitere 10 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Reaktionsgemisch in Eiswasser gegossen und mit einer gesättigten wäßrigen Lösung von Natriumhydrogencarbonat schwach alkalisch gemacht. Das Gemisch wird mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird durch Kieselgel-Säulenchromatographie mit einem 20 : 1 Gemisch aus Chloroform und Methanol gereinigt. Es wird die Titelverbindung als farbloses Öl erhalten. Ausbeute 1,4 g.

[α] = -92,0° (c = 0,7 Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J=5Hz), 1,29 (3H, t, J=7Hz),
1,29 (3H, d, J=6,5Hz), 1,2-1,8 (10H, m),
1,44, 1,46 (i.g. 9H, gew. s), 1,8-2,3 (4H, m),
2,52 (2H, t, J=7Hz), 2,69 (1H, d-d, J=13Hz, 7,5Hz),
2,91 (1H, d-d, J=13Hz, 6Hz),
3,2-3,7 (4H, m), 4,20 (2H, q, J=7Hz),
4,3-4,5 (1H, m).

Beispiel 14-16

Die nachstehend in Tabelle 5 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 13 hergestellt.

Tabelle 5

Beispiel 17 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin (β-Isomer) und dessen L- Argininsalz

750 mg des gemäß Beispiel 13 hergestellten β-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]-alanyl-(S)- prolin-tert.-butylester und 0,52 ml Anisol werden in 5 ml TFA gelöst. Die Lösung wird 2½ Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das TFA unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in einer gesättigten wäßrigen Lösung von Natriumhydrogencarbonat gelöst. Der pH- Wert der Lösung beträgt 8. Die Lösung wird mit Diäthyläther gewaschen. Die wäßrige Phase wird mit 1 n Salzsäure auf einen pH-Wert von 4 eingestellt und mit Methylenchlorid extrahiert. Der Methylenchloridextrakt wird mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck abdestilliert. Es hinterbleibt das β-Isomer der Titelverbindung als farbloses Öl. Ausbeute 580 mg.

550 mg des Produkts werden in 10 ml Äthanol gelöst. Die Lösung wird mit 230 mg L-Arginin in 4 ml Wasser versetzt. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird mit Äthanol versetzt und unter vermindertem Druck eingedampft. Dieses Verfahren wird mehrmals wiederholt. Schließlich wird der Rückstand aus einem Gemisch von Äthanol und Diäthyläther umgefällt. Es werden 650 mg L-Argininsalz der Titelverbindung erhalten. F. 64-68°C.

[α] = -57,3° (c = 0,8 Äthanol)

Beispiel 18 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin (β-Isomer) und dessen Maleat

720 mg des gemäß Beispiel 17 erhaltenen β-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]-alanyl-(S)- prolin werden in 10 ml Diäthyläther gelöst. Die Lösung wird unter Eiskühlung mit einer Lösung von 200 mg Maleinsäure in 15 ml Äthylacetat versetzt. Die entstandenen Kristalle werden abfiltriert und aus einem Gemisch von Äthylacetat und Diäthyläther umkristallisiert. Es werden 670 mg der Titelverbindung vom F. 76 bis 79°C erhalten.

[α] = -62,3° (c = 0,7 Äthanol)

Beispiele 19-21

Die nachstehend in Tabelle 6 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 17 hergestellt.

Tabelle 6

Beispiel 22 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]- (R,S)-alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester

Die Titelverbindung wird gemäß Beispiel 13 aus 1,0 g gemäß Beispiel T hergestelltem N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2- heptylthioäthyl]-(R,S)-alanin hergestellt. Ausbeute 1,3 g farbloses Öl.

[α] = -54,3° (c = 0,8; Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J=5Hz), 1,2-1,4 (6H, m),
1,44, 1,46 (i.g. 9H, gew. s), 1,2-1,8 (10H, m),
1,8-2,3 (4H, m), 2,3-2,9 (4H, m),
3,3-3,8 (4H, m), 4,0-4,5 (3H, m).

Beispiele 23-27

Die nachstehend in Tabelle 7 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 22 hergestellt.

Tabelle 7

Beispiel 28 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]- (R,S)-alanyl-(S)-prolin und dessen L-Argininsalz

530 mg des gemäß Beispiel 22 erhaltenen tert.-Butylesters von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]-(R,S)-alanyl-(S)- prolin und 0,4 ml Anisol werden in 4 ml TFA gelöst. Das Gemisch wird 2½ Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das TFA unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird in gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung gelöst. Der pH-Wert der Lösung beträgt 8. Die Lösung wird mit Diäthyläther gewaschen und die wäßrige Phase mit 1 n Salzsäure auf einen pH-Wert von 4 eingestellt und mit Methylenchlorid extrahiert. Der Methylenchloridextrakt wird mit Wasser gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Es werde 370 mg der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

330 mg des Produkts werden in 8 ml Äthanol gelöst. Die Lösung wird mit 137 mg L-Arginin in 3 ml Wasser versetzt. Danach wird das Gemisch unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird mit Äthanol versetzt und das Gemisch unter vermindertem Druck eingedampft. Dieses Verfahren wird mehrmals wiederholt. Sodann wird der Rückstand mit wasserfreiem Diäthyläther versetzt und die entstandenen Kristalle werden abfiltriert. Es werden 370 mg des L-Arbininsalzes der Titelverbindung vom F. 55-64°C erhalten.
[α] = -40,3° (c = 0,7; Äthanol)

Beispiele 29-33

Die nachstehend in Tabelle 8 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 28 hergestellt.

Tabelle 8

Beispiel 34 Herstellung von N-[(R)-1-Carboxy-2-heptylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin (β-Isomer)

Eine Lösung von 373 mg des in Beispiel 17 erhaltenen β-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin in 4 ml Äthanol wird mit 2,0 ml 1 n Natronlauge unter Eiskühlung und Rühren versetzt. Danach wird das Gemisch noch 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und sodann auf eine mit Dowex 50W-X8 in der H⁺-Form gefüllte Säule gegeben. Das Reaktionsprodukt wird mit Wasser gewaschen und mit einer 4prozentigen wäßrigen Lösung von Pyridin eluiert. Fraktionen der Titelverbindung werden gesammelt und gefriergetrocknet. Das erhaltene Pulver wird aus einem Gemisch von Äthanol und Diäthyläther umgefällt. Es werden 240 mg der Titelverbindung vom F. 75 bis 83°C erhalten.

[α] = -108,1° (c = 0,6; Äthanol).

Beispiele 35-38

Die nachstehend in Tabelle 9 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 34 hergestellt.

Tabelle 9

Beispiele 39-42

Die nachstehend in Tabelle 10 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 13 hergestellt.

Tabelle 10

Beispiele 43 und 44

Die nachstehend in Tabelle 11 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 17 hergestellt.

Tabelle 11

Beispiel U Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanin-tert.-butylester (A- und B-Isomere)

5,3 g S-Äthoxycarbonylmethyl-L-cysteinäthylester und 4,7 g 2-Brompropionsäure-tert.-butylester werden in 10 ml HMPA gelöst. Die Lösung wird mit 2,3 g Triäthylamin versetzt und 62 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Reaktionsgemisch mit Eiswasser versetzt und mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser und gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird der Extrakt unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird durch Kieselgel- Säulenchromatographie mit einem 5 : 3-Gemisch aus Diäthyläther und n-Hexan gereinigt. Aus dem ersten Eluat wird das A-Isomer der Titelverbindung als farbloses Öl in einer Menge von 2,1 g erhalten.

[α] = +26,9° (c = 1,1; Methanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
1,27 (3H, d, J = 7 Hz), 1,29 (6H, t, J = 7 Hz),
1,44 (9H, s), 2,15 (1H, br s), 2,94 (2H, d,
J = 5 Hz), 3,30 (1H, q, J = 7 Hz), 3,33 (2H, s),
3,53 (1H, t, J = 5 Hz), 4,19 (2H, q, J = 7 Hz),
4,20 (2H, q, J = 7 Hz).

Das B-Isomer der Titelverbindung wurde aus dem zweiten Eluat als farbloses Öl in einer Ausbeute von 2,24 g erhalten.

[α] = -43,1° (c = 1,1; Methanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
1,29 (3H, d, J = 7 Hz), 1,29 (6H, t, J = 7 Hz),
1,46 (9H, s), 2,0 (1H, br s), 2,82 (1H, d-d,
J = 13 Hz, 7 Hz), 3,05 (1H, d-d, J = 13 Hz, 6 Hz),
3,30 (1H, q, J = 7 Hz), 3,31 (2H, s), 3,57 (1H,
d-d, J = 7 Hz, 6 Hz), 4,19 (2H, q, J = 7 Hz), 4,21
(2H, q, J = 7 Hz).

Beispiel V Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanin (A-Isomer)

Eine Lösung von 1,04 g des nach Beispiel U erhaltenen A-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanin-tert.-butylester in 5 ml TFA wird mit 0,93 g Anisol versetzt und 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das TFA unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird mit gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und das Gemisch mit Diäthyläther gewaschen. Die wäßrige Phase wird mit Citronensäure auf einen pH-Wert von 4 eingestellt. Danach wird das Gemisch mit Methylenchlorid extrahiert, der Methylenchloridextrakt über Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck eingedampft. Es hinterbleibt das A-Isomer der Titelverbindung als amorphes Produkt. Ausbeute 0,50 g.

[α] = +17,3° (c = 1,0; Methanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
1,29 (6H, t, J = 7 Hz), 1,43 (3H, d, J = 7 Hz),
2,90 (1H, d-d, J = 13 Hz, 7H), 3,16 (1H, d-d,
J = 13 Hz, 6 Hz), 3,30 (2H, s), 3,44 (1H, q,
J = 7 Hz), 3,65 (1H, d-d, J = 7 Hz, 6 Hz), 4,20 (2H,
q, J = 7 Hz), 4,23 (2H, q, J = 7 Hz)

Beispiel W Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanin (B-Isomer)

Eine Lösung von 1,09 g des gemäß Beispiel U erhaltenen B-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanin-tert.-butylester in 5 ml TFA wird mit 0,97 g Anisol versetzt. Danach wird gemäß Beispiel V aufgearbeitet. Das B-Isomer der Titelverbindung wird als amorphe Substanz in einer Ausbeute von 0,43 g erhalten.

[α] = -32,0° (c = 0,8; Methanol)

¹H-NMR (CDCl₃): w
1,29, 1,30 (6H, t, J = 7 Hz), 1,46 (3H, d,
J = 7 Hz), 2,79 (1H, d-d, J = 13 Hz, 9 Hz), 3,12
(1H, d-d, J = 13 Hz, 5 Hz), 3,27 (2H, s), 3,35
(1H, 1, J = 7 Hz), 3,48 (1H, d-d, J = 9 Hz, 5 Hz),
4,20 (2H, q, J = 7 Hz), 4,21 (2H, q, J = 7 Hz)

Beispiel 45 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (A-Isomer)

Eine Lösung von 520 mg gemäß Beispiel V erhaltenen A-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanin , 319 mg (S)-Prolin-tert.-butylester und 304 mg DEPC in 5 ml DMF wird tropfenweise mit einer Lösung von 188 mg Triäthylamin in 3 ml DMF unter Eiskühlung und Rühren versetzt. Danach wird das Gemisch noch 12 Stunden gerührt, wobei die Temperatur langsam auf Raumtemperatur erhöht wird. Hierauf wird das Reaktionsgemisch mit Eiswasser versetzt und mit gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung schon alkalisch gemacht. Sodann wird das Gemisch mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser und gesättigter wäßriger Kochsalzlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird der Extrakt unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird durch Kieselgel-Säulenchromatographie mit einem 10 : 1 Gemisch aus Chloroform und Methanol gereinigt. Das A-Isomer der Titelverbindung wird als farbloses Öl in einer Ausbeute von 400 mg erhalten.

[α] = -46,2° (c = 1,0; Methanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
1,29 (3H, t, J = 7 Hz), 1,33 (3H, t, J = 7 Hz),
1,3-1,5 (3H, m), 1,44, 1,46 (total 9H, each
s), 1,8-3,8 (13H, m), 4,08 (4H, q, J = 7 Hz)

Beispiel 46 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (B-Isomer)

Beispiel 45 wird mit 450 mg des in Beispiel W erhaltenen B-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanin wiederholt. Es werden 560 mg des B-Isomers der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

[α] = -93,6° (c = 1,0; Methanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
1,29 (3H, t, J = 7 Hz), 1,33 (3H, t, J = 7 Hz),
1,3-1,5 (3H, m), 1,44, 1,46 (insges. 9H, jew. s), 1,8-3,8 (13H, m), 4,08 (4H, q, J = 7 Hz).

Beispiel 47 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin (A-Isomer) und dessen Maleat

Eine Lösung von 340 mg des gemäß Beispiel 45 erhaltenen A-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester in 3 ml TFA werden mit 240 mg Anisol versetzt. Sodann wird gemäß Beispiel V aufgearbeitet. Es wird das A-Isomer der Titelverbindung als farbloses Öl in einer Ausbeute von 80 mg erhalten.

80 mg des Produkts in 3 ml Diäthyläther werden mit 23 mg Maleinsäure unter Rühren versetzt. Die entstandenen Kristalle des Maleats der Titelverbindung werden abfiltriert. Ausbeute 30 mg.

[α] = -3,2° (c = 0,4; Methanol)

¹H-NMR (CD₃OD): δ
1,28 (3H, t, J = 7 Hz), 1,33 (3H, t, J = 7 Hz),
1,57 (3H, t, J = 7 Hz), 1,9-2,3 (4H, m), 3,1-3,9
(5H, m), 3,46 (2H, s), 4,19 (2H, q, J = 7 Hz),
4,32 (1H, q, J = 7 Hz), 4,3-4,5 (1H, m), 6,29
(2H, s).

Beispiel 48 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin (B-Isomer) und dessen Maleat

Gemäß Beispiel V wird das B-Isomer der Titelverbindung aus 520 mg des in Beispiel 46 erhaltenen B-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-äthoxycarbonylmethylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester hergestellt. Ausbeute 340 mg farbloses Öl.

Gemäß Beispiel 47 werden 340 mg des Produkts in das Maleat der Titelverbindung überführt. Ausbeute 320 mg.

[α] = -54,6° (c = 0,9; Methanol)

¹H-NMR (CD₃OD): δ
1,28 (3H, t, J = 7 Hz), 1,33 (3H, t, J = 7 Hz),
1,61 (3H, d, J = 7 Hz), 1,9-2,4 (4H, m), 3,2-3,8
(5H, m), 3,42 (2H, s), 4,20 (4H, q, J = 7 Hz),
4,32 (1H, q, J = 7 Hz), 4,3-4,5 (1H, m), 6,29
(2H, s).

Beispiel X Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1- äthoxycarbonylhexylthio-äthyl]-(R,S)-alanin

Eine Lösung von 7,7 g S-[(R,S)-1-Äthoxycarbonylhexyl]-L- cysteinäthylester in 25 ml Äthanol wird mit 10 ml Wasser und sodann mit 11,1 g Brenztraubensäure versetzt. Das erhaltene Gemisch wird mit 4n Natronlauge neutralisiert. Sodann werden langsam 3,2 g Natriumcyanoborhydrid unter Eiskühlung und Rühren eingetragen, die Umsetzung wird 14 Stunden bei Raumtemperatur durchgeführt. Nach beendeter Umsetzung wird das Äthanol abdestilliert und das Reaktionsgemisch mit gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung schwach alkalisch gemacht. Die Lösung wird mit Diäthyläther gewaschen und die wäßrige Phase abgetrennt. Die wäßrige Phase wird mit 10prozentiger Salzsäure auf einen pH-Wert von 4 eingestellt und das Gemisch mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser und gesättigter wäßriger Kochsalzlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird der Extrakt unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird durch Kieselgel-Säulenchromatographie mit einem 10 : 1 Gemisch aus Chloroform und Methanol gereinigt. Es wird die Titelverbindung als farblose amorphe Substanz in einer Ausbeute von 7,0 g erhalten.

[a] = -7,4° (c = 1,1; Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,89 (3H, t, J = 5 Hz), 1,29 (6H, t, J = 7 Hz),
1,39 (3H, d, J = 7 Hz), 1,3-2,1 (8H, m), 2,7-3,8 (5H, m),
4,21 (2H, q, J = 7 Hz), 4,22 (2H, q, J = 7 Hz).

Beispiele Y-B′

Die nachstehend in Tabelle 12 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel X hergestellt.

Tabelle 12

Beispiel C′ Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1-tert.- butoxycarbonylhexylthioäthyl]-(R,S)-alanin

Die Titelverbindung wird gemäß Beispiel X aus 5,5 g S-[(R,S)-1-tert.-Butoxycarbonylhexyl]-L-cysteinäthylester hergestellt. Ausbeute 5,37 g farblose amorphe Substanz.

[α] = +11,0° (c = 1,2; Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,89 (3H, t, J = 5 Hz), 1,29 (3H, t, J = 7 Hz),
1,48 (9H, s), 1,3-2,0 (11H, m), 2,8-3,8
(5H, m), 4,22 (2H, q, J = 7 Hz).

Beispiel 49 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1- äthoxycarbonylhexylthio]-äthyl]-(R,S)-alanyl-(S)- prolin-t-butylester

Die Titelverbindung wird gemäß Beispiel 45 aus 2,0 g nach Beispiel X erhaltenem N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1- äthoxycarbonylhexylthio]-äthyl]-(R,S)-alanin hergestellt. Ausbeute 2,8 g farbloses Öl.

[α] = -46,2° (c = 0,9; Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 5 Hz), 1,28 (6H, t, J = 7 Hz),
1,3-1,5 (3H, m), 1,44, 1,46 (total 9H, each s),
1,5-2,3 (12H, m), 2,8-3,0 (2H, m),
3,1-3,8 (6H, m), 4,19 (4H, q, J = 7 Hz).

Beispiele 50-53

Die nachstehend in Tabelle 13 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 49 hergestellt.

Tabelle 13

Beispiel 54 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1-tert.- butoxycarbonylhexylthio]-äthyl]-(R,S)-alanyl-(S)-prolin- tert.-butylester

Beispiel 45 wird mit 1,0 g des gemäß Beispiel C′ erhaltenen N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1-tert.-butoxycarbonylhexylthio]- äthyl]-(R,S)-alanyl wiederholt. Das Produkt wird durch Kieselgel-Säulenchromatographie mit einem 20 : 1 Gemisch aus Chloroform und Methanol gereinigt. Es werden 1,03 g der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

[α) = -26,2° (c = 0,9; Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 5 Hz), 1,28 (3H, t, J = 7 Hz),
1,44, 1,47 (insges. 9H, jew. s), 1,48 (9H, s),
1,3-2,4 (15H, m), 2,8-3,0 (2H, m),
3,1-3,8 (6H, m), 4,19 (2H, q, J = 7 Hz).

Beispiele 55 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1- äthoxycarbonylhexylthio]-äthyl]-(R,S)-alanyl-(S)-prolin und dessen L-Argininsalz

Beispiel V wird mit 407 g des gemäß Beispiel 49 erhaltenen tert.-Butylester von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2- [(R,S)-1-äthoxycarbonylhexylthio]-äthyl]-(R,S)-alanyl- (S)-prolin wiederholt. Es werden 110 mg der Titelverbindung als farblose amorphe Substanz erhalten.

Eine Lösung von 300 mg des Produkts in 5 ml Äthanol wird mit einer Lösung von 110 mg L-Arginin in 1,5 ml Wasser versetzt. Danach wird das Gemisch zur Trockene eingedampft. Es hinterbleibt das L-Argininsalz der Titelverbindung als farbloses Pulver. Ausbeute 342 mg vom F. 50-55°C.

[α) = -33,0° (c = 0,96; Äthanol).

Beispiele 56-59

Die nachstehend in Tabelle 14 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 55 hergestellt.

Tabelle 14

Beispiel 60 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1- carboxyhexylthio]-äthyl]-(R,S)-alanyl-(S)-prolin und dessen Di-L-argininsalz

Beispiel V wird wiederholt mit 500 mg des in Beispiel 54 erhaltenen tert-Butylesters von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl- 2-[(R,S)-1-tert.-butoxycarbonylhexylthio]-äthyl]-(R,S)- alanyl-(S)-prolin. Das Produkt wird durch Kieselgel- Säulenchromatographie mit einem 10 : 1 Gemisch von Chloroform und Methanol gereinigt. Es werden 187 mg der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

¹H-NMR (CD₃OD): w
0,88 (3H, t, J = 5 Hz), 1,28 (3H, t, J = 7 Hz),
1,3-2,4 (15H, m), 2,8-3,8 (8H, m), 3,48 (1H,
s), 4,21 (2H, q, J = 7 Hz).

72 mg des Produkts werden gemäß Beispiel 55 mit 56 mg (2 Äquivalente) L-Arginin umgesetzt. Es wird das Di-L- argininsalz der Titelverbindung als farbloses Pulver erhalten. Ausbeute 110 mg vom F. 92 bis 97°C.

[α] = -16,5° (c = 0,6; Äthanol).

Beispiel 61 Herstellung von N-[(R)-1-Carboxy-2-[(R,S)-1-carboxyhexylthio]- äthyl]-(R,S)-alanyl-(S)-prolin

Eine Lösung von 472 mg gemäß Beispiel 55 erhaltenem N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1-äthoxycarbonylhexylthio]- äthyl]-(R,S)-alanyl-(S)-prolin in 3 ml Äthanol wird mit 3,3 ml 1n Natronlauge versetzt und 2½ Stunden bei Raumtemperatur gerührt.

Danach wird das Reaktionsgemisch mit einer geringen Menge Wasser versetzt und auf eine mit Dowex 50W-X8 in der H⁺- Form gefüllte Säule aufgesetzt. Danach wird die Säule mit Wasser gewaschen und mit 4prozentiger wäßriger Pyridinlösung eluiert. Die produkthaltigen Fraktionen werden gesammelt und gefriergetrocknet. Das erhalten Pulver wird mit Diäthyläther gewaschen und unter vermindertem Druck getrocknet. Es werden 106 mg der Titelverbindung in farblosen Kristallen erhalten. F. 98 bis 104°C.

[α] = -66,8° (c = 0,48, Äthanol)

¹H-NMR (CD₃OD): δ
0,9 (3H, t, J = 5 Hz), 1,1-2,5 (15H, m),
2,9-3,9 (5H, m), 4,1-4,6 (3H, m).

Beispiel D′ Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1-äthoxycarbonylheptylthio]- äthyl]-(R,S)-alanin

Beispiel X wird mit 11,3 g S-[(R,S)-1-Äthoxycarbonylheptyl]- L-cysteinäthylester, 15,6 g Brenztraubensäure, 4 n Natronlauge und 4,5 Natriumcyanoborhydrid wiederholt. Es werden 6,8 g der Titelverbindung als farblose Kristalle erhalten.

[α] = -3,1° (c = 1,2, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 5 Hz), 1,2-1,5 (9H, m),
1,3-2,1 (10H, m), 2,7-3,8 (5H, m),
4,20 (4H, q, J = 7 Hz).

Beispiel 62 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1-äthoxycarbonylheptylthio]- äthyl]-(R,S)-alanyl-(S)-prolin- tert.-butylester

Beispiel 45 wird mit 900 mg gemäß Beispiel D′ erhaltenem N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1-äthoxycarbonylheptylthio]- äthyl]-(R,S)-alanin wiederholt. Es werden 1,1 g der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

[α] = -28,6° (c = 0,7, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 5 Hz), 1,2-1,4 (9H, m),
1,44, 1,47 (i. g. 9H, jew. s), 1,5-2,3 (14H,
m), 2,7-3,0 (2H, m), 3,1-3,8 (5H, m), 4,19
(4H, q, J = 7 Hz), 4,0-4,3 (1H, m).

Beispiel 63 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)-1-äthoxycarbonylheptylthio]- äthyl]-(R,S)-alanyl-(S)-prolin und dessen Maleat

Beispiel V wird mit 900 mg des in Beispiel 62 erhaltenen tert.-Butylesters von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-[(R,S)- 1-äthoxycarbonylheptylthio]-äthyl]-(R,S)-alanyl-(S)-prolin wiederholt. Es werden 650 mg der Titelverbindung als farblose amorphe Substanz erhalten.

230 mg des Produkts werden gemäß Beispiel 47 in das Maleat überführt. Ausbeute 250 mg.

[α] = -25,1° (c = 0,6, Äthanol)

¹H-NMR (CD₃OD): δ
0,9 (3H, t, J = 5 Hz), 1,1-1,6 (9H, m),
1,6-2,4 (14H, m), 3,1-3,9 (7H, m), 4,21 (4H,
q, J = 7 Hz), 4,2-4,5 (1H, m), 6,28 (2H, s).

Beispiel E′ Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanin-tert.-butylester (A- und B-Isomer)

Eine Lösung von 6,1 g S-[(R,S)-1-Äthoxycarbonylhexyl]-L- cysteinäthylester und 4,2 g 2-Brompropionsäure-tert.-butylester in 20 ml HMPA wird mit 2,0 g Triäthylamin versetzt. Das Gemisch wird 72 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, danach mit Eiswasser versetzt und mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser und gesättigter wäßriger Kochsalzlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird der Extrakt unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird durch Kieselgel-Säulenchromatographie mit einem 1 : 3-Gemisch aus Diäthyläther und n-Hexan gereinigt. Aus dem ersten Eluat werden 2,2 g des A-Isomers der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

[α] = +13,0° (c = 1,0, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,27 (3H, d, J = 7 Hz),
1,28 (6H, t, J = 7 Hz), 1,45 (9H, s), 1,3-1,9
(8H, m), 2,23 (1H, s), 2,7-3,0 (2H, m),
3,2-3,6 (3H, m), 4,20 (4H, q, J = 7 Hz).

Aus den zweiten Eluat werden 1,7 g des B-Isomers der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

[α] = -30,8° (c = 1,2, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,28 (3H, d, J = 7 Hz),
1,28 (6H, t, J = 7 Hz), 1,3-1,9 (8H, m), 2,04 (1H, s),
2,6-3,0 (2H, m), 3,1-3,6 (3H, m), 4,20 (4H, q, J = 7 Hz).

Beispiel F′ Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanin (A-Isomer)

1,71 g des in Beispiel E′ erhaltenen tert.-Butylesters von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanin in 5 ml TFA werden 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das TFA unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung auf einen pH-Wert von 8 eingestellt. Das Gemisch wird mit Diäthyläther gewaschen, mit 10prozentiger Salzsäure auf einen pH-Wert von 4 eingestellt und mit Methylenchlorid extrahiert. Der Methylenchloridextrakt wird über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Es hinterbleiben 1,37 g des A-Isomers der Titelverbindung.

[α] = +6,9° (c = 0,7, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,2-1,5 (9H, m), 1,3-2,0
(8H, m), 2,9-3,9 (5H, m), 4,21 (2H, q,
J = 7 Hz), 4,23 (2H, q, J = 7 Hz), 6,8 (1H, br s).

Beispiel G′ Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanin (B-Isomer)

1,40 g des gemäß Beispiel E′ erhaltenen tert.-Butylesters von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanin werden mit 5 ml TFA versetzt. Danach wird gemäß Beispiel F′ aufgearbeitet. Es werden 1,25 g des B-Isomers der Titelverbindung erhalten.

[α] = -16,2° (c = 0,9, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,2-1,5 (9H, m), 1,3-2,0
(8H, m), 2,6-3,8 (5H, m), 4,20 (2H, q,
J = 7 Hz), 4,24 (2H, q, J = 7 Hz), 5,8 (1H, br s).

Beispiel 64 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanyl-S-prolin-tert.-butylester (A-Isomer)

Eine Lösung von 1,26 g des gemäß Beispiel F′ erhaltenen A-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanin, 629 mg (S)-Prolin-tert.-butylester und 666 mg DEPC in 5 ml DMF wird unter Eiskühlung und Rühren tropfenweise mit einer Lösung von 371 mg Triäthylamin in 5 ml DMF versetzt. Danach wird das Gemisch 12 Stunden gerührt, wobei die Temperatur langsam auf Raumtemperatur gebracht wird. Das Reaktionsgemisch wird anschließend in Eiswasser versetzt und mit gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung schwach alkalisch gemacht und mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser und gesättigter wäßriger Kochsalzlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird der Extrakt unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand durch Kieselgel-Säulenchromatographie mit einem 20 : 1-Gemisch aus Chloroform und Methanol gereinigt. Es werden 1,60 g des A-Isomers der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

[α] = -23,1° (c = 1,2, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,29 (3H, d, J = 7 Hz),
1,29 (6H, t, J = 7 Hz), 1,44, 1,47 (i. g. 9H,
jew. s), 1,3-2,7 (12H, m), 2,27 (1H, br s),
2,8-3,0 (2H, m), 3,1-3,8 (5H, m), 4,20 (4H,
q, J = 7 Hz), 4,4-4,7 (1H, m).

Beispiel 65 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (B-Isomer)

Beispiel 64 wird mit 1,08 g des in Beispiel G′ erhaltenen B-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanin wiederholt. Es werden 1,56 g des B-Isomers der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

[α] = -63,7° (c = 1,0, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,1-1,5 (9H, m),
1,44, 1,46 (i. g. 9H, jew. s), 1,3-2,5 (12H,
m), 2,26 (1H, br s), 2,6-3,0 (2H, m),
3,1-3,8 (5H, m), 4,20 (4H, q, J = 7 Hz),
4,3-4,5 (1H, m).

Beispiel 66 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin (A-Isomer) und dessen L-Argininsalz

530 mg des in Beispiel 64 erhaltenen A-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester werden mit 3 ml einer 25prozentigen Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäure versetzt. Das Gemisch wird 40 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung auf einen pH-Wert von 8 eingestellt. Das erhaltene Gemisch wird mit Diäthyläther gewaschen und sodann mit 10prozentiger Salzsäure auf einen pH-Wert von 4 eingestellt. Danach wird das Gemisch mit Methylenchlorid extrahiert. Der Methylenchloridextrakt wird über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Es werden 452 mg des A-Isomers der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

242 mg des erhaltenen Produkts in 4 ml Äthanol werden unter Rühren mit einer Lösung von 89 mg L-Arginin in 1,5 ml Wasser versetzt. Danach wird das Gemisch unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Es werden 143 mg des L-Argininsalzes der Titelverbindung als hellgelbes Pulver erhalten.

[α] = -12,5° (c = 0,3, Äthanol)

¹H-NMR (CD₃OD): δ
0,90 (3H, t, J = 7 Hz), 1,2-1,5 (9H, m),
1,5-2,5 (16H, m), 2,6-3,8 (10h, m),
4,19 (4H, q, J = 7 Hz), 4,3-4,5 (1H, m).

Beispiel 67 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin (B-Isomer) und dessen L-Argininsalz und Maleat

Gemäß Beispiel 66 wird das B-Isomer aus 522 mg des gemäß Beispiel 65 erhaltenen B-Isomers von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl- 2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)-äthyl]-alanyl-(S)-prolin- tert.-butylester hergestellt. Ausbeute 230 mg farbloses Öl.

Gemäß Beispiel 66 werden 230 mg des Produkts in das L-Argininsalz überführt. Ausbeute 270 mg farbloses Pulver.

[a] = -27,7° (c = 0,3, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,90 (3H, t, J = 7 Hz), 1,2-1,5 (9H, m),
1,5-2,3 (16H, m), 2,7-3,8 (10H, m),
4,19 (4H, q, J = 7 Hz), 4,3-4,5 (1H, m).

In gleicher Weise wird aus 380 mg des Produkts das Maleat hergestellt. Ausbeute 382 mg.

[α] = -38,3° (c = 0,7, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,2-1,5 (9H, m), 1,5-2,5
(12H, m), 3,0-3,9 (5H, m), 4,20 (4H, q,
J = 7 Hz), 4,3-4,5 (1H, m), 6,32 (2H, s).

Beispiel H′ Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanin-tert.-butylester (A- und B-Isomere)

Beispiel E′ wird mit 5,5 g S-[(R,S)-1-Äthoxycarbonylheptyl]- L-cystein-tert.-butylester, 3,6 g 2-Brompropionsäure- tert.-butylester, 2,4 ml Triäthylamin und 16 ml HMPA wiederholt. Es werden das A-Isomer und das B-Isomer der Titelverbindung als farbloses Öl aus dem ersten bzw. zweiten Eluat der Kieselgel-Säulenchromatographie erhalten.

A-Isomer: Ausbeute 1,9 g

[α] = +18,6° (c = 0,7, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,87 (3H, t, J = 5 Hz), 1,28 (3H, d, J = 7 Hz),
1,29 (6H, t, J = 7 Hz), 1,44 (9H, s), 1,3-1,8
(10H, m), 2,8-3,0 (2H, m), 3,2-3,6 (3H, m),
4,20 (4H, q, J = 7 Hz).

B-Isomer: Ausbeute 1,9 g

[α] = -26,0° (c = 0,7, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): w
0,88 (3H, t, J = 5 Hz), 1,28 (3H, d, J = 7 Hz),
1,29 (6H, t, J = 7 Hz), 1,47 (9H, s), 1,3-2,0
(10H, m), 2,6-3,2 (2H, m), 3,2-3,6 (3H, m),
4,20 (4H, q, J = 7 Hz).

Beispiel I′ Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanin (A-Isomer)

Beispiel F′ wird mit 1,8 g N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1- äthoxycarbonylheptylthio)-äthyl]-alanin-tert.-butylester (A-Isomer) wiederholt. Es werden 1,5 g des A-Isomers der Titelverbindung erhalten.

[α] = +16,5° (c = 0,7, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,29 (6H, t, J = 7 Hz),
1,40 (3H, d, J = 7 Hz), 1,5-2,1 (10H, m),
2,7-3,2 (2H, m), 3,2-3,7 (3H, m), 4,20 (4H,
q, J = 7 Hz), 6,41 (1H, br s).

Beispiel J′ Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanin (B-Isomer)

Beispiel F′ wird mit 1,8 g N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2- (1-äthoxycarbonylheptylthio)-äthyl]-alanin-tert.-butylester (B-Isomer) wiederholt. Es werden 1,3 g des B-Isomers der Titelverbindung erhalten.

[α] = -12,3° (c = 0,6, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,30 (6H, t, J = 7 Hz),
1,43 (3H, d, J = 7 Hz), 1,5-2,1 (10H, m),
2,5-3,1 (2H, m), 3,1-3,5 (3H, m), 4,20 (2H,
q, J = 7 Hz), 4,24 (2H, q, J = 7 Hz), 5,59 (1H, br s).

Beispiel 68 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (A-Isomer)

Beispiel 64 wird mit 1,2 g des in Beispiel I′ erhaltenen N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanin (A-Isomer), 530 mg (S)-Prolin-tert.-butylester, 550 mg DEPC und 0,43 Triäthylamin wiederholt. Es werden 1,36 g des A-Isomers der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

[α] = -12,4° (c = 0,6, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,87 (3H, t, J = 7 Hz), 1,29 (6H, t, J = 7 Hz),
1,31 (3H, d, J = 7 Hz), 1,44, 1,47 (i. g. 9H,
jew. s), 1,5-2,2 (14H, m), 2,7-3,0 (2H, m),
3,1-3,9 (5H, m), 4,20 (4H, q, J = 7 Hz), 4,0-4,5 (1H, m).

Beispiel 69 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (B-Isomer)

Beispiel 64 wird mit 1,05 g des in Beispiel J′ erhaltenen N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanin (B-Isomer) wiederholt. Es werden 1,3 g des B-Isomers der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

[α] = -67,5° (c = 1,0, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,2-1,5 (9H, m), 1,44,
1,46 (i. g. 9H, jew. s), 1,6-2,5 (14H, m),
2,6-3,8 (7H, m), 4,19 (4H, q, J = 7 Hz), 4,2-4,5 (1H, m).

Beispiel 70 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (A-Isomer) und dessen Maleat

Beispiel V wird mit 398 mg des in Beispiel 68 erhaltenen N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (A-Isomer) wiederholt. Es werden 270 mg des A-Isomers der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

270 mg des Produkts werden gemäß Beispiel 47 zum Maleat umgesetzt. Ausbeute 310 mg.

[α] = -28,3° (c = 0,6, Äthanol)

¹H-NMR (CD₃OD): δ
0,90 (3H, t, J = 7 Hz), 1,1-1,6 (9H, m), 1,5-2,4
(14H, m), 3,0-3,9 (7H, m), 4,21 (4H, q,
J = 7 Hz), 6,28 (2H, s).

Beispiel 71 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanin-(S)-prolin (B-Isomer) und dessen L-Arginat und Maleat

Beispiel 66 wird mit 450 mg des in Beispiel 69 erhaltenen tert.-Butylesters von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin (B-Isomer) wiederholt. Es werden 516 mg des L-Argininsalzes der Titelverbindung als farbloses amorphes Pulver erhalten.

[α] = -36,9° (c = 0,5, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,87 (3H, t, J = 7 Hz), 1,2-1,5 (9H, m), 1,5-2,5
(18H, m), 2,7-3,8 (10H, m), 4,20 (4H, q,
J = 7 Hz), 4,5-4,6 (1H, m).

Beispiel 47 wird mit 430 mg des tert.-Butylesters von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin (B-Isomer) wiederholt. Es werden 457 mg des Maleats der Titelverbindung erhalten.

[α] = -38,3° (c = 0,8, Äthanol)

¹H-NMR (CD₃OD): δ
0,90 (3H, t, J = 7 Hz), 1,2-1,5 (9H, m), 1,6-2,5
(14H, m), 2,8-3,8 (7H, m), 4,22 (4H, q,
J = 7 Hz), 4,5-4,6 (1H, m), 6,28 (2H, s).

Beispiel K′ Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonyloctylthio)- äthyl]-alanin-tert.-butylester (A- und B-Isomere)

Eine Lösung von 10 g S-[(R,S)-1-Äthoxycarbonyloctyl]-L- cysteinäthylester und 6,9 g 2-Brompropionsäure-tert.-butylester in 16 ml HMPA wird mit 4,6 ml Triäthylamin versetzt und 48 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Danach wird das Reaktionsgemisch mit Eiswasser versetzt und mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser und gesättigter wäßriger Kochsalzlösung gewaschen und über Natriumsulfat getrocknet. Danach wird der Extrakt unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird durch Kieselgel-Säulenchromatographie mit einem 1 : 3-Gemisch aus Diäthyläther und n-Hexan gereinigt. Aus dem ersten Eluat werden 2,7 g des A-Isomers der Titelverbindung als fabloses Öl erhalten.

[α] = +13,2° (c = 1,2, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,2-1,4 (9H, m), 1,45
(9H, s), 1,2-2,1 (12H, m), 2,24 (1H, br s),
2,8-3,1 (2H, m), 3,1-3,6 (3H, m), 4,20 (4H, q, J = 7 Hz).

Aus dem zweiten Eluat werden 2,2 g des B-Isomers der Titelverbindung als fabloses Öl erhalten.

[α] = -25,9° (c = 0,9, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,2-1,4 (9H, m), 1,47
(9H, s), 1,2-2,2 (13H, m), 2,76 (1H, d-d,
J = 13 Hz, 8 Hz), 3,03 (1H, d-d, J = 13 Hz, 5 Hz),
3,1-3,6 (3H, m), 4,20 (4H, q, J = 7 Hz).

Beispiele L′ und M′

Die nachstehend in Tabelle 15 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel K′ hergestellt.

Tabelle 15

Beispiel N′ Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonyloctylthio)- äthyl]-alanin (B-Isomer)

2,2 g des gemäß K′ erhaltenen B-Isomers von N-[(R)-1- Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonyloctylthio)-äthyl]- alanin-tert.-butylester werden in 6 ml einer 25prozentigen Lösung von Bromwasserstoff in Essigsäure gelöst. Das Gemisch wird 40 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Danach werden der Bromwasserstoff und die Essigsäure unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wird mit gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung auf einen pH-Wert von 8 eingestellt und das Gemisch wird mit Diäthyläther gewaschen. Die wäßrige Phase wird mit Citronensäure auf einen pH-Wert von 4 eingestellt und das Gemisch mit Methylenchlorid extrahiert. Der Methylenchloridextrakt wird über Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck abdestilliert. Es hinterbleiben 1,8 g der Titelverbindung.

[α] = -15,7° (c = 0,8, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,30 (6H, t, J = 7 Hz),
1,43 (3H, d, J = 7 Hz), 1,2-2,1 (13H, m),
2,3-3,5 (5H, m), 4,20 (4H, q, J = 7 Hz), 4,23
(2H, q, J = 7 Hz), 5,25 (1H, br s).

Beispiele O′ und P′

Die nachstehend in Tabelle 16 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel N′ hergestellt.

Tabelle 16

Beispiel 72 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonyloctylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (B-Isomer)

Eine Lösung von 1,52 g des in Beispiel N′ erhaltenen N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonyloctylthio)- äthyl]-alanins (B-Isomer), 705 mg (S)-Prolin-tert.-butylester und 747 mg 90prozentiges DEPC in 30 ml DMF wird unter Eiskühlung und Rühren tropfenweise mit einer Lösung von 417 mg Triäthylamin in 5 ml DMF versetzt. Danach wird das Gemisch weitere 12 Stunden gerührt. Die Temperatur wird langsam auf Raumtemperatur gebracht. Anschließend wird das Reaktionsgemisch in Eiswasser gegossen und mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird durch Kieselgel-Säulenchromatographie mit einem 35 : 1-Gemisch aus Chloroform und Methanol gereinigt. Es werden 2,08 g der Titelverbindung als fabloses Öl erhalten.

[α] = -60,6° (c = 1,5, Äthanol)

¹H-NMR (CDCl₃): δ
0,88 (3H, t, J = 7 Hz), 1,28 (6H, t, J = 7 Hz),
1,30 (3H, d, J = 7 Hz), 1,44, 1,46 (i. g. 9H,
jew. s), 1,2-2,5 (17H, m), 2,6-3,7 (7H, m),
4,19 (4H, q, J = 7 Hz), 4,4-4,5 (1H, m).

Beispiele 73 und 74

Die nachstehend in Tabelle 17 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 72 hergestellt.

Tabelle 17

Beispiel 75 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonyloctylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin (B-Isomer) und dessen L-Argininsalz

Beispiel N′ wird mit 2,1 g des in Beispiel 72 erhaltenen tert.-Butylesters von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonyloctylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin (B-Isomer) wiederholt. Es werden 1,0 g der Titelverbindung als farbloses Öl erhalten.

1,0 g des Produkts in 20 ml Äthanol werden mit 650 mg L-Arginin in 10 ml Wasser versetzt. Das Gemisch wird unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird mit Äthanol versetzt und erneut eingedampft. Dieses Verfahren aus einem Gemisch von Äthylacetat und n-Hexan umkristallisiert. Es werden 400 mg des L-Argininsalzes der Titelverbindung als fabloses Öl erhalten.

[α] = -42,0° (c = 0,6, Äthanol)

¹H-NMR (CD₃OD): w
0,89 (3H, t, J = 7 Hz), 1,2-1,4 (9H, m), 1,2-2,2
(20H, m), 2,5-3,7 (10H, m), 4,18 (4H, q,
J = 7 Hz), 4,3-4,5 (1H, m).

Beispiele 76 und 77

Die nachstehend in Tabelle 18 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 75 hergestellt.

Tabelle 18

Beispiele 78 und 79

Die nachstehend in Tabelle 19 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 65 hergestellt.

Tabelle 19

Beispiel 80 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-octylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin-tert.-butylester (β-Isomer)

Unter Verwendung der entsprechenden Ausgangsverbindungen wird die Titelverbindung gemäß Beispiel 13 hergestellt.

[α] = -85,7° (c = 0,7, Äthanol)

¹H-NMR (CD₃OD): δ
0,88 (3H, t, J = 5 Hz), 1,28 (3H, t, J = 7 Hz),
1,29 (3H, d, J = 6 Hz), 1,2-1,8 (12H, m), 1,44,
1,46 (i. g. 9H, jew. s), 1,8-2,3 (4H, m)
2,52 (2H, t, J = 7 Hz), 2,70 (1H, d-d, J = 13 Hz,
7,5 Hz), 2,89 (1H, d-d, J = 13 Hz, 6 Hz), 3,2-3,7
(4H, m), 4,2 (2H, q, J = 7 Hz), 4,3-4,5 (1H, m).

Beispiel 81 Herstellung von N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-octylthioäthyl]- alanyl-(S)-prolin (β-Isomer) L-Argininsalz

Die Titelverbindung wird gemäß Beispiel 17 aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen hergestellt.

[α] = -56,5° (c = 0,5; Äthanol)
F. 70-81°C.

Beispiele Q′ und R′

Die nachstehend in Tabelle 20 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel H hergestellt.

Tabelle 20

Beispiele S′ und T′

Die nachstehend in Tabelle 21 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel M hergestellt.

Tabelle 21

Beispiele 82 und 83

Die nachstehend in Tabelle 22 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 13 hergestellt.

Tabelle 22

Beispiele 84 und 85

Die nachstehend in Tabelle 23 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel 18 hergestellt.

Tabelle 23

Beispiele U′ und V′

Die nachstehend in Tabelle 24 aufgeführten Verbindungen wurden gemäß Beispiel H hergestellt.

Tabelle 24

Beispiele W′

Die Verbindung der nachstehend wiedergegebenen Formel wird gemäß Beispiel M hergestellt.

b-Isomer

[α] = -23,2° (c = 0,6; DMF)
F. 125-127°C.

Claims (4)

1. Prolin-Derivate der allgemeinen Formel (1) in der R₁ einen C₅-C₁₄-Alkyl-, C₂-C₆-Alkenyl-, C₃-C₈-Cycloalkyl- C₁-C₆-alkylrest oder wobei R⁵ ein Wasserstoffatom, ein C₁-C₁₄-Alkylrest oder eine Phenylgruppe und R₆ ein Wasserstoffatom oder ein C₁-C₆-Alkylrest ist,
R₂ ein Wasserstoffatom oder einen C₁-C₆-Alkylrest,
R₃ einen C₁-C₆-Alkylrest,
R₄ ein Wasserstoffatom, einen C₁-C₆-Alkyl- oder einen Phenyl- C₁-C₆-alkylrest und
n 0,1 oder 2 bedeutet, und ihre pharmazeutisch verträglichen Salze.

2. N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]-alanyl- (S)-prolin (β-Isomer),
N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]-alanyl-(S)- prolinmethylester (β-Isomer),
N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]-alanyl- (S)-prolinäthylester (β-Isomer),
N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-octylthioäthyl]-alanyl-(S)- prolin (β-Isomer),
N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]-alanyl-(S)- prolin-benzylester (β-Isomer),
N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylhexylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin (B-Isomer),
N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-(1-äthoxycarbonylheptylthio)- äthyl]-alanyl-(S)-prolin (B-Isomer),
N-[(R)-1-Äthoxycarbonyl-2-hexylthioäthyl]-alanyl-(S)- prolin (β-Isomer),
N-[(R)-1-Isobutyloxycarbonyl-2-heptylthioäthyl]-alanyl- (S)-prolin (β-Isomer),
wobei das β-Isomere dasjenige ist, das sich von dem Isomeren ableitet, das bei der Umsetzung von S-Alkyl-L-cystein-C₁-C₆- alkylester mit 2-Halogenpropionsäure-C₁-C₆-alkylester anfällt, und das bei der Kieselgel-Säulenchromatographie mit Diäthyläther/ n-Hexan als zweites Eluat erhalten wird, und wobei das B-Isomere dasjenige ist, das sich von dem Isomeren ableitet, das bei der Umsetzung von S-[1-C₁-C₆-alkoxycarbonylalkyl]- L-cystein-C₁-C₆-alkylester mit 2-Halogenpropionsäure- C₁-C₆-alkylester anfällt, und das bei der Kieselgel-Säulenchromatographie mit Diäthyläther/n-Hexan als zweites Eluat erhalten wird.

3. Verfahren zur Herstellung der Prolin-Derivate nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man jeweils in an sich bekannter Weise entweder

• (A) eine Verbindung der allgemeinen Formel (2) in der R₁, R₂ und n die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, mit einem Propionsäure-Derivat der allgemeinen Formel (3) in der R₃ und R₄ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben und X ein Halogenatom, eine Alkylsulfonyloxy- oder Arylsulfonyloxygruppe ist, umsetzt, oder
• (B) eine Verbindung der allgemeinen Formel (6) in der R₁, R₃, n und R₅ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, R₆ einen C₁-C₆-Alkylrest und R₂ einen C₁-C₆-Alkylrest bedeuten mit einer Verbindung der allgemeinen Formel (7) umsetzt, in der R₄ einen C₁-C₆-Alkyl- oder Phenyl-C₁-C₆- alkylrest bedeutet und gegebenenfalls die erhaltene Verbindung der allgemeinen Formel (1) hydrolysiert und erforderlichenfalls mit einer anorganischen oder organischen Säure oder mit einer anorganischen oder organischen Base umsetzt.

4. Arzneimittel, gekennzeichnet durch einen Gehalt an mindestens einem Prolin-Derivat oder dessen pharmazeutisch verträglichem Salz nach Anspruch 1 neben üblichen Trägerstoffen.