DE69414396T2 - Acylphenylglycin-derivat und dieses als aktivbestandteil enthaltendes vorbeugungs -und heilmittel gegen durch erhöhte collagenaseaktivität verursachte krankheiten - Google Patents

Acylphenylglycin-derivat und dieses als aktivbestandteil enthaltendes vorbeugungs -und heilmittel gegen durch erhöhte collagenaseaktivität verursachte krankheiten

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Description

  • Die vorliegende Erfindung betrifft neue Acylphenylglycin-Derivative oder pharmazeutisch verträgliche Salze davon mit Collagenaseinhibierender Aktivität sowie Mittel, die diese als Wirkstoff enthalten, zur Prophylaxe und Behandlung von Erkrankungen, die von erhöhter Collagenaseaktivität verursacht werden. Insbesondere betrifft die vorliegende Erfindung ein neues Acylphenylglycinderivat der Formel (I),
  • worin R¹ für ein Wasserstoffatom, Methyl, Methylaminomethyl oder Morpholinomethyl steht; R² für ein Wasserstoffatom, Hydroxy, ein Fluoratom oder geradkettiges oder verzweigtes C&sub1;-C&sub4;-Alkyl steht; und R³ für geradkettiges oder verzweigtes C&sub1;-C&sub4;-Alkyl steht, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon mit Collagenase-inhibierender Aktivität und ein Mittel, das diese als Wirkstoff enthält, zur Porophylaxe und Behandlung von Erkrankungen, die von erhöhter Collagenaseaktivität verursacht werden.
    • STAND DER TECHNIK
  • Collagenase ist ein Enzym, das am Metabolismus der Bindegewebsmatrix beteiligt ist. Eine erhöhte Collagenaseaktivität wird als eine Hauptursache einer Reihe von Erkrankungen, einschließlich Geslenkserkrankungen, Erkrankungen aufgrund von Knochenresorption, periodontaler Erkrankungen, Hornhautgeschwüren, Epidermolysis Bullosa lind dergleichen, betrachtet.
  • Z. B. wurde bei Erkrankungen der Gelenke, wie rheumatoider Arthritis wund Osteoarthritis, von E. K. Gravallese et al. (Arthritis Rheum., 34(9): 1076 (1991)) eine erhöhte Collagenaseaktivität berichtet. Bei Erkrankungen aufgrund von Knochenresorption handelt es sich um eine Klasse von Erkrankungen, die die Folge eines Erneuerungsprozesses sind, der aus der Bildung und Resorption des Knochens besteht und zugunsten der Knochenresorption verschoben ist, und spezielle Erkrankun gen, wie Hypercalcämie, Osteoporose, gehören bekanntermaßen zu dieser Klasse. Aufmerksamkeit ist der Beteiligung der Cysteinproteasen, wie Cathepsin L, bei der erhöhten Knochenresorption bei diesen Erkrankungen zuteil geworden. Ein kürzlicher Bericht von V. Everts et al. (J. Cell. Physiol., 150: 221 (1992)) weist jedoch auf eine zusätzliche Beteiligung der Collagenase hin.
  • Daher wurden verschiedene Verbindungen mit Collagenase-inhibierender Aktivität untersucht, da sie eine Möglichkeit darstellen, bei solchen Erkrankungen mit erhöhter Collagenaseaktivität Linderung zu verschaffen. Es sei z. B. auf die JP-A-62-103052 und JP-A-62-230757, JP-A-04- 502008, und das U. S.-Patent Nr. 5,114,953, verwiesen. Diese Verbindungen sind jedoch nicht ausreichend, um nach Verabreichung an einen lebenden Körper eine inhibierende Aktivität im Blut aufrecht zu erhalten. Es besteht daher ein Bedürfnis nach der Entwicklung einer Verbindung, die es gestattet, die Collagenase-inhibierende Aktivität im lebenden Körper nach Verabreichung eine längere Zeitspanne auf höheren Werten zu halten.
    • OFFENBARUNG DER ERFINDUNG
  • Gegenstand der Erfindung ist die Bereitstellung einer neuen Verbindung, mit der im lebenden Körper nach der Verabreichung eine Collagenase-inhibierende Aktivität über eine lange Zeitspanne auf höheren Werten gehalten werden kann, und die Bereitstellung eines Mittels, das die Verbindung als Wirkstoff enthält, zur Prophylaxe und Behandlung von Erkrankungen, die durch erhöhte Collagenaseaktivität verursacht werden.
  • Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben gefunden, dass ein Acylphenylglycinderivat der Formel (I),
  • worin R¹ für ein Wasserstoffatom, Methyl, Methylaminomethyl oder Morpholinomethyl steht; R² für ein Wasserstoffatom, Hydroxy, ein Fluor atom oder geradkettiges oder verzweigtes C&sub1;-C&sub4;-Alkyl steht; und R³ für geradkettiges oder verzweigtes C&sub1;-C&sub4;-Alkyl steht, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon diese Anforderungen erfüllt.
  • In der vorliegenden Beschreibung umfasst die geradkettige oder verzweigte C&sub1;-C&sub4;-Alkylgruppe z. B. Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n- Butyl, sec-Butyl oder tert-Butyl.
  • Unter den erfindungsgemäßen Verbindungen weist ein Acylphenylglycinderivat, in dem in der Formel (I) R¹ und R³ beide für Methyl stehen und R² für ein Wasserstoffatom steht, oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon eine hervorragende Aktivität im lebenden Körper auf und ist daher besonders bevorzugt.
  • Aufgrund der chiralen Kohlenstoffatome 1, 2 und 3 in der nachstehenden Formel existieren Stereoisomere, wenn R¹ in der Formel (I) für Methyl, Methylaminomethyl oder Morpholinomethyl steht, und Stereoisomere aufgrund der chiralen Kohlenstoffatome 1 und 2 in der Verbindung, in der R¹ für ein Wasserstoffatom steht.
  • (worin R¹, R² und R³ die oben angegebenen Bedeutung haben).
  • Die erfindungsgemäße Verbindung umfasst alle dieser Stereoisomere und Gemische davon. Von diesen Stereoisomeren weist die Verbindung mit der Konfiguration (S) am chiralen Kohlenstoff 1 und (R) am chiralen Kohlenstoff 2 eine starke Aktivität auf und ist daher besonders bevorzugt.
  • Ausführungsformen der erfindungsgemäßen Verbindung (I) sind unter anderem z. B.:
  • [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-phenylglycin-N- methylamid,
  • [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-p-hydroxyphenylglycin-N- methylamid,
  • [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3(R)-morpholinomethylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid,
  • [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3(S)-morpholinomethylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid,
  • [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3(R)-methylsuccinyl]-L-phenylglycin- N-methylamid,
  • [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3(S)-methylsuccinyl]-L-phenylglycin- N-methylamid,
  • [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3(R)-methylaminomethylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid,
  • [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3(S)-methylaminomethylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid,
  • [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-(p-isopropylphenyl)glycin-N-methylamid,
  • [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-phenylglycin-N-ethylamid.
  • Davon zeigt [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid (die Verbindung von Beispiel 5) eine hervorragende Aktivität im lebenden Körper und ist daher besonders bevorzugt.
  • Beispiele der pharmazeutisch verträglichen Salze der erfindungsgemäßen Verbindung (I) sind unter anderem z. B. Metallsalze, wie das Natriumsalz, Kaliumsalz, Calciumsalz und dergleichen. Bei den Verbindungen, in denen R¹ für Methylaminomethyl oder Morpholinomethyl steht, sind die mit anorganischen Säuren, wie Salzsäure und Salpetersäure, gebildeten Salze und die mit organischen Säuren, wie Fumarsäure, Maleinsäure, Methansulfonsäure, gebildeten Salze ebenfalls als Beispiele eingeschlossen.
  • Die Verbindung (I) und ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon können nach dem nachstehenden Verfahren (A) hergestellt werden: Verfahren (A)
  • worin Bzl für Benzyl steht, R&sup4; für ein Wasserstoffatom, Methyl, N- Benzyl-N-methylaminomethyl oder Morpholinomethyl steht und R¹, R² und R³ die oben angegebene Bedeutung haben.
  • Somit kann die erfindungsgemäße Verbindung (I) oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon durch Hydrierung der Verbindung (II) hergestellt werden. Die Hydrierung der Verbindung (II) kann gewöhnlich in einem niederen Alkohol, wie Methanol oder Ethanol, der gegebenenfalls Wasser, Salzsäure oder N,N-Dimethylformamid (als DMF abgekürzt) enthalten kann, in Gegenwart eines Katalysators, wie 10%-igem Pd/C unter einer Wasserstoffatmosphäre oder unter Wasserstoffdruck bei Raumtemperatur bis 60ºC erfolgen.
  • Eine optisch aktive Verbindung (I) kann durch Hydrierung einer optisch aktiven Vorläuferverbindung (II) hergestellt werden. Alternativ kann eine optisch aktive Verbindung (I) hergestellt werden, indem ein diastereomeres Gemisch der Verbindung (II) der Hydrierung unter Erhalt der Verbindung (I) unterworfen wird und eine Trennung durch Kristallisation oder eines der chromatographischen Verfahrenen (Hochleistungsflüssigchromatographie (HPLC), präparative Dünnschichtchromatographie (P. TLC), etc.) durchgeführt wird.
  • Eine Verbindung (Ia), in der R¹ in der Formel (I) für Methyl steht, kann nach dem folgenden Verfahren (B) hergestellt werden. Verfahren (B)
  • worin Bzl, R² und R³ die oben angegebene Bedeutung haben.
  • Somit kann die Verbindung (Ia) durch katalytische Reduktion der Verbindung (III) erhalten werden. Zur katalytischen Reduktion der Verbindung (III) können analoge Bedingungen herangezogen werden, wie die für das vorstehende Verfahren (A) gezeigten.
  • Beim Verfahren (B) kann eine optisch aktive Verbindung (Ia) erhalten werden, indem eine optisch aktive Vorläuferverbindung (III) der Umsetzung unterworfen wird und das erhaltene diastereomere Gemisch (Ia) nach einem der vorstehend angesprochenen Mittel getrennt wird.
  • Die nach einem der Verfahren (Verfahren A oder B) erhaltene erfindungsgemäße Verbindung (I) kann nach einem herkömmlichen Verfahren in ein pharmazeutisch verträgliches Salz umgewandelt werden.
  • Die Herstellung der in den Verfahren (A) und (B) verwendeten Vorläuferverbindungen ist nachstehend gezeigt.
  • Von der im Verfahren (A) verwendeten Vorläuferverbindung (II) kann eine Verbindung (IIa), in der R&sup4; für ein Wasserstoffatom steht, nach folgendem Verfahren hergestellt werden:
  • worin Bzl, R² und R³ die oben angegebene Bedeutung haben.
  • Somit wird zuerst eine Verbindung (VI) erhalten, indem, man ein bekanntes Anhydrid (V) mit einer äquivalenten Menge o-Benzylhydroxylamin in Ether, Tetrahydrofuran (im folgenden als THF abgekürzt) oder einem gemischten Lösungsmittel davon bei -78 bis 0ºC 1 bis 5 Stunden lang reagieren lässt.
  • Die Verbindung (VI) und ein Amin (IV) werden dann der Kondensation unterworfen. Die Kondensationsreaktion kann unter Verwendung eines gewöhnlich in der Peptidsynthese verwendeten Kondensationsreagenzes (z. B. Dicyclohexylcarbodiimid (im folgenden als DCC abgekürzt), 1- Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimid-hydrochlorid (im folgenden als WSC abgekürzt)) in einem aprotischen Lösungsmittel, wie DMF, THF oder Dichlormethan, durchgeführt werden. Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen bei 0ºC bis Raumtemperatur 2 bis 24 Stunden lang. Das molare Verhältnis der zur Umsetzung verwendeten Verbindungen beträgt: 0,8-1,5 mol für die Verbindung (VI) bzw. 1,0-1,5 mol für das Kondensationsreagenz, auf 1 mol Amin (IV).
  • Die Kondensationsreaktion zwischen der Verbindung (VI) und dem Amin (IV) kann nach dem Verfahren der gemischten Säureanhydride erfolgen. In diesem Fall wird das gemischte Säureanhydrid hergestellt, indem man zuerst die Verbindung (VI) in einem oben angesprochenen aprotischen Lösungsmittel löst, hierzu eine äquivalente Menge tertiäres Amin, wie Triethylamin oder N-Methylmorpholin, gibt und dann vorzugsweise einen Chlorcarbonsäureester, wie Ethylchlorformiat, oder ein Säurechlorid, wie Pivaloylchlorid, bei -20 bis 5ºC zugibt. Die angestrebte Verbindung (IIa) kann durch Zugabe des Amins (IV) und Stehenlassen des Reaktionsgemisches bei 0ºC bis Raumtemperatur über 2 bis 8 Stunden erhalten werden. Für diese Umsetzung werden im Allgemeinen 0,8-1,2 mol der Verbindung (VI) und 1,0-1,2 mol Chlorcarbonsäureester oder eines Säurechlorids, bezogen auf 1 mol Amin (IV), verwendet.
  • Eine optisch aktive Verbindung (IIa) kann durch Umsetzung einer op- tisch aktiven Verbindung (VI) und eines optisch aktiven Amins (IV) erhalten werden, das sich von D- oder L-Phenylglycin ableitet. Eine op- tisch aktive Verbindung (VI) kann durch optische Auflösung der Verbindung (VI), die nach dem vorstehenden Verfahren als racemisches Gemisch erhalten worden ist, nach einem üblichen Verfahren unter Verwendung eines optisch aktiven Amins, z. B. Cinchonidin oder D-1-Phenylethylamin, als Auflösungsmittel erhalten werden.
  • Als im vorstehenden Verfahren (A) einsetzbare Vorläuferverbindung (II) kann eine Verbindung (IIb), in der R&sup4; für Methyl, N-Benzyl-N- methylaminomethyl oder Morpholinomethyl steht, nach dem folgenden Verfahren hergestellt werden:
  • worin R&sup5; für Methyl, N-Benzyl-N-methylaminomethyl oder Morpholinomethyl steht, R&sup6; für N-Benzyl-N-methylaminomethyl oder Morpholinomethyl steht, TFA für Trifluoressigsäure steht, und Bzl, R² und R³ die oben angegebene Bedeutung haben.
  • Somit wird Dibenzylmalonat zuerst mit 2-Brom-4-methylpentansäure-t- butylester (dieser kann durch Umsetzung von 2-Brom-4-methylpentansäure (einer bekannten Verbindung) mit 2-Methylpropen nach einem üblichen Verfahren hergestellt werden) in DMF in Gegenwart von Kalium-t-butoxid umgesetzt, und das so erhaltene t-Butylesterderivat wird mit Trifluoressigsäure zersetzt, wobei das Carbonsäurederivat (VII) erhalten wird.
  • Dann wird dieses Carbonsäurederivat (VII) nach dem vorstehend angesprochenen Verfahren mit einem Kondensationsreagenz oder dem Verfahren der gemischten Säureanhydride mit dem Amin (IV) kondensiert. Der erhaltene Dibenzylester (VIII) wird dann der Hydrierung unterworfen und die so erhaltene Dicarbonsäure läßt man mit Formaldehyd reagieren, wobei das α-Methylencarbonsäurederivat (IX) erhalten wird. Zur Hydrierung des Dibenzylesters (VIII) sind neben den Reaktionsbedingungen, die vorstehend zur Hydrierung der Verbindung (II) angesprochen sind, weitere anwendbar, z. B. die Umsetzung, bei der eine Reduktion in Gegenwart eines Reduktionskatalysators, wie 10%-igem Pd/C oder Raney- Nickel, unter Verwendung von Ameisensäure oder Ammoniumformiat als Wasserstoffquelle erfolgt. Vorzugsweise erfolgt die Umsetzung zwischen der Dicarbonsäure und dem Formaldehyd durch Vermischen der Dicarbonsäure, einer äquimolaren Menge Base (z. B. Piperidin) und eines großen Überschusses, vorzugsweise der 5- bis 6-fachen molaren. Menge, wässriger Formaldehydlösung und Rühren über Nacht bei Raumtemperatur und anschließendem weiteren Erhitzen unter Rückfluß über 1 bis 2 Stunden.
  • Dann wird die Verbindung (IX) mit N-Benzylmethylamin oder Morpholin umgesetzt, wobei die Verbindung Xa erhalten wird, in der R&sup5; in der Formel (X) für N-Benzyl-N-methylaminomethyl oder Morpholinomethyl steht. Vorzugsweise wird die Umsetzung unter Verwendung einer äquimolaren bis 30-fachen molaren Menge N-Benzylmethylamin oder Morpholin und in einem Lösungsmittel, wie THF, oder lösungsmittelfrei bei Raumtemperatur bis 100ºC innerhalb von einigen bis 24 Stunden durchgeführt. Alternativ kann die Verbindung Xa erhalten werden, indem man die Verbindung (IX) in ihren Benzylester, Verbindung (XI), umwandelt, diese durch Umsetzung mit N-Benzylmethylamin oder Morpholin zur Verbindung (XII) umwandelt und dann die Verbindung (XII) hydriert.
  • Andererseits kann die Verbindung Xb, in der R&sup5; in der Formel (X) für Methyl steht, durch katalytische Reduktion der Verbindung (IX) erhal ten werden. In diesem Fall können die selben Reaktionsbedingungen angewendet werden, wie vorstehend bei der katalytischen Reduktion im Verfahren (B) angesprochen.
  • Schließlich werden die Verbindung (X) und O-Benzylhydroxylamin nach dem vorstehend angesprochenen Verfahren mit einem Kondensationsreagenz, wie DCC oder WSC, oder dem Verfahren der gemischten Säureanhydride kondensiert, wobei die Verbindung (IIb) d. h. die. Verbindung, in der R&sup4; in der Formel (II) für Methyl, N-Benzyl-N-methylaminomethyl oder Morpholinomethyl steht, erhalten wird.
  • Zum Erhalt einer optisch aktiven Verbindung (IIb) wird zuerst unter Verwendung einer optisch aktiven Carbonsäure (VII) und eines optisch aktiven Amins (IV) eine optisch aktive Verbindung (IX) hergestellt. Dann liefert die Reduktion oder die Umsetzung mit Morpholin oder N- Benzylmethylamin die Verbindung (X) als diastereomeres Gemisch. Das angestrebte Konfigurationsisomer wird dann durch Kristallisation, HPLC oder dergleichen isoliert und mit O-Benzylhydroxylamin umgesetzt, wobei die optisch aktive Verbindung (IIb) erhalten wird. Alternativ kann die optisch aktive Verbindung (IIb) durch Kondensation der Verbindung (X) in Form des diastereomeres Gemischs mit O-Benzylhydroxylamin und Isolieren der optisch aktiven Verbindung (IIb) aus dem derart erhaltenen diastereomeren Gemisch der Verbindung (IIb) nach dem gleichen Verfahren wie vorstehend angesprochen erhalten werden.
  • Die im Verfahren (B) eingesetzte Vorläuferverbindung (III) kann nach dem folgenden Verfahren aus der vorstehend angesprochenen Verbindung (IX) hergestellt werden:
  • D. h., wie im Fall der Kondensation der Verbindung (X) und O-Benzylhydroxylamin, kann die Verbindung (III) durch Kondensation der Verbindung (IX) mit O-Benzylhydroxylamin unter Verwendung eines Kondensati onsreagenzes oder nach dem Verfahren der gemischten Säureanhydride erhalten werden.
  • Eine optisch aktive Verbindung (III) kann ohne weiteres durch Umsetzung eines optisch aktiven Isomers der Verbindung (IX) mit O- Benzylhydroxylamin erhalten werden.
  • Die erfindungsgemäße Verbindung (I) oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon kann einem Menschen auf oralem oder parenteralem Weg verabreicht werden.
  • Beispiele der pharmazeutischen Zubereitungsformen zur oralen Verabreichung sind unter anderem feste Formen, wie Tabletten, Granalien, Pulver, Feingranulat, Hartkapseln und dergleichen, sowie flüssige Formen, wie Sirup und Weichkapseln.
  • Diese pharmazeutischen Zubereitungen können nach üblichen Verfahren hergestellt werden, d. h. Tabletten, Granalien, Pulver und Feingranulat können durch Vermischen der erfindungsgemäßen Verbindung (I) oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon mit üblichen pharmazeutischen Hilfsstoffen, wie Lactose, Stärke, kristalliner Cellulose, Magnesiumstearat, Hydroxypropylmethylcellulose, Talk und dergleichen hergestellt, werden; und Hartkapseln können durch die Einkapselung des vorstehenden Feingranulats oder Pulvers erhalten werden.
  • Ein Sirup kann durch Auflösen oder Suspendieren der erfindungsgemäßen Verbindung (I) oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon in einer Zucker, Carboxycellulose und dergleichen enthaltenden Lösung hergestellt werden. Weichkapseln können durch Auflösen oder Suspendieren der erfindungsgemäßen Verbindung (I) oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon in einem Lipidträger, wie Pflanzenöl, ölhaltiger Emulsion, Glycolen und dergleichen, und Einfüllen dessen in Weichkapselhüllen hergestellt werden.
  • Beispiele pharmazeutischer Zubereitungsformen zur parenteralen Verabreichung sind unter anderem, neben Injektionen, Suppositorien, wie ein Analsuppositorium und ein Vaginalsuppositorium, und nasal zu verabreichende Formen, wie ein Spray. Diese pharmazeutische Zubereitungen können nach üblichen Verfahren hergestellt werden. Z. B. können Injektionen durch Auflösen oder Emulgieren der erfindungsgemäßen Verbindung (I) oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon in physiologischer Kochsalzlösung oder einem Lipidträger, wie Pflanzenöl, ölhaltiger Emulsion, Glycolen und dergleichen, und aseptisches Einfüllen der Flüssigkeit in eine Ampulle oder ein Fläschchen hergestellt werden.
  • Die Dosierungshöhen der erfindungsgemäßen Verbindung (I) können je nach Alter, Geschlecht, Körpergewicht, den Symptomen und dergleichen variieren. Im Allgemeinen sind, gerechnet als Verbindung (I), Dosierungshöhen von 0,1 bis 200 mg/kg Körpergewicht/Tag, vorzugsweise 1 bis 100 mg/kg Körpergewicht/Tag angemessen, und die täglichen Dosen werden auf einmal oder zu 2 bis 4 Anwendungszeitpunkten verabreicht.
  • Die erfindungsgemäße Verbindung zeigt eine starke Collagenaseinhibierende Aktivität über eine ausgedehnte Zeitspanne im lebenden Körper nach der Verabreichung und weist außerdem eine gute Absorbierbarkeit auf. Dies ist in Tierversuchen (s. die nachstehenden Testbeispiele 1 und 2) gezeigt worden.
  • Eine Untersuchung ihres Effekts auf Arthritis erfolgte in einem Adjuvans-Arthritis-Modell, wobei die Erythrozytensedimentationsgeschwindigkeit und das Anschwellen der Hinterpfote (Volumenzunahme der nicht- Adjuvans-injizierten Pfote) als Indizes herangezogen wurden, was bestätigte, dass die erfindungsgemäße Verbindung eine hervorragende Wirksamkeit aufweist (siehe nachstehendes Testbeispiel. 3). Man beobachtete auch supprimierende Effekts auf Zunahmen der Hydroxyprolinausscheidung im Harn (Verhältnis zu Kreatinin) und der Serumcalciumkonzentration (siehe nachstehendes Testbeispiel 3).
  • Darüber hinaus erfolgte eine Untersuchung ihres supprimierenden Eeffekts auf die Knochenresorption, indem die erfindungsgemäße Verbindung an Ratten verabreicht wurde, die auf Calcium-Mangeldiät gehalten wurden, wobei die Hydroxyprolinausscheidung im Harn (Verhältnis zu Kreatinin) als Index herangezogen wurde. Hierbei wurde gefunden, dass die erfindungsgemäße Verbindung die Menge an Hydroxyprolin im Harn (Verhältnis zu Kreatinin) verringerte (siehe nachstehendes Testbeispiel 4).
  • Andererseits zeigt die erfindungsgemäße Verbindung nur eine geringe Toxizität. Zum Beispiel wurde kein Todesfall nach oraler Verabreichung der Verbindung aus Beispiel 5 an Mäuse (3000 mg/kg Körpergewicht) beobachtet. Daher ist die erfindungsgemäße Verbindung (I) oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon als prophylaktisches und therapeutisches Mittel gegen Erkrankungen brauchbar, die von erhöhter Collagenaseaktivität verursacht werden, z. B. Erkrankungen der Gelenke, wie rheumatoide Arthritis und Osteoarthritis, und Erkrankungen aufgrund von Knochenresorption, wie Hypercalcämie und Osteoporose. Die Wirkung und der Effekt der vorliegenden Erfindung sind im einzelnen in den nachstehenden Testbeispielen beschrieben.
  • (Testbeispiel 1) Inhibierungsrate der Collagenaseaktivität (bei Mäusen)
    • 1. Getestete Verbindungen
  • Verbindung A: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl)-L- phenylglycin-N-methylamid (Verbindung aus Beispiel 1)
  • Verbindung B: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl)-L-(p- hydroxyphenyl)glycin-N-methylamid (Verbindung aus Beispiel 2)
  • Verbindung C: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-(morpholinomethyl)- succinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid-hydrochlorid (Verbindung aus Beispiel 4)
  • Verbindung D: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid (Verbindung aus Beispiel 5)
  • Verbindung E: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-(methylaminomethyl)succinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid (Verbindung aus Beispiel 6)
  • Verbindung F: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl)-L- phenylglycin-N-ethylamid (Verbindung aus Beispiel 7)
  • Verbindung G: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-(p- fluorphenyl)glycin-N-methylamid (Verbindung aus Beispiel 8)
  • Verbindung H: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-(p- isopropylphenyl)glycin-N-methylamid (Verbindung aus Beispiel 9)
  • Bekannte Verbindung X: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl)-L-O- methyltyrosin-N-methylamid (in der JP-A-62-103052 beschriebene Verbindung)
  • Bekannte Verbindung Y: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3(S)-(2- thienyl)thiomethylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-methylamid (in der JP-A- 4-502008 beschriebene Verbindung)
  • Bekannte Verbindung Z: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl)-L- tryptophan-N-methylamid (im US-Patent Nr. 5114953 beschriebene Verbindung)
    • 2. Testverfahren
  • Die Testverbindungen wurden in 0,5%-iger CMC suspendiert und oral an drei Mäuse pro Gruppe verabreicht (Dosis der Testverbindung: 30 mg/kg), und nach einem bestimmten Zeitabschnitt wurde das Blut in Gegenwart von Heparin gesammelt und eisgekühlt. Das Plasma wurde durch Zentrifugieren dieses Bluts bei 10000 U/min über 5 min bei 4ºC gewonnen. 400 ul von diesem Plasma wurden zu 600 ul destilliertem Wasser gegeben und 10 min lang auf 100ºC erwärmt. Nach dem Abkühlen wurde das Gemisch 5 min lang bei 10000 U/min zentrifugiert und über eine Mikrovolumen-Ultrafiltrationseinheit (Molcut II, Millipore) filtriert, wobei eine Probe (A) zur Verwendung in der Collagenaseaktivitätsmessung erhalten wurde. Unter Verwendung dieser Probe wurde die Inhibierungsrate der Collagenaseaktivität im Blut nach dem folgenden Verfahren bestimmt:
  • Die vorstehend erhaltene Probe (A) wurde mit einer bekannten Menge Collagenase (die verwendete Collagenase wurde nach dem in der JP-A-3- 103178 beschriebenen Verfahren hergestellt) in einem Puffer zur Messung (50 mM Tris-HCl-Puffer, pH 7,5, enthaltend 0,2 M Natriumchlorid, 5 mM Calciumchlorid, 0,05% Brij-35 und 0,02% Natriumazid) aufgelöst, und die Collagenaseaktivität A wurde nach dem Verfahren nach Nagai et al. (Japanese Journal of Inflammation, 4, 123 (1984)) unter Verwendung eines Fluorescein-isothiocyanat-markierten Typ-I-Collagens als Substrat gemessen. Gleichzeitig wurde die Probe (B) nach der Beschreibung des Vorgehens für die Probe (A) hergestellt, wobei das aus den Mäusen gesammelte Blut verwendet wurde, die keine Testverbindung erhalten hatten. Die Collagenaseaktivitätsmessung erfolgte nach dem gleichen Verfahren. Die Inhibierungsrate wurde gemäß der folgenden Gleichung bestimmt:
  • Inhibierungsrate (%) = (1 - A/B) · 100
    • 3. Ergebnisse
  • Tabelle 1 zeigt die Inhibierungsraten der Collagenaseaktivität im Blut nach 1 und 3 Stunden nach oraler Verabreichung.
  • Tabelle 1
  • Collagenase-Inhibierungsraten (%) im Blut nach oraler Verabreichung
  • (Testbeispiel 2) Inhibierungsrate der Collagenaseaktivität (in Ratten)
    • 1. Getestete Verbindungen
  • Verbindung A: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid (Verbindung aus Beispiel 1)
  • Bekannte Verbindung X: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-O- methyltyrosin-N-methylamid (in der JP-A-62-103052 beschriebene Verbindung)
    • 2. Testverfahren
  • Es wurde das gleiche Verfahren wie im Testbeispiel 1 befolgt, außer dass die Mäuse durch Ratten (3 Ratten/Gruppe) ersetzt wurden und die Dosis der getesteten Verbindungen so gewählt wurde, dass sie 100 mg/kg betrug.
    • 3. Testergebnisse
  • Tabelle 2 zeigt die Inhibierungsraten der Collagenaseaktivität im Blut nach 1, 3 und 6 Stunden nach oraler Verabreichung. Tabelle 2 Collagenase-Inhibierungsraten (%) im Blut nach oraler Verabreichung
  • (Testbeispiel 3) Test an einem Arthritismodell
    • 1. Getestete Verbindungen
  • Verbindung D: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid (Verbindung aus Beispiel 5)
  • Bekannte Verbindung Y: [4- (N-Hydroxyamino)-2 (R)-isobutyl-3 (S)-(2- thienyl)thiomethylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-methylamid (in der JP-A- 4-502008 beschriebene Verbindung)
    • 2. Testverfahren und Bewertungskriterien
  • 8 Wochen alte männliche Lewis-Ratten (Charles River Japan, K. K.) wurden in 4 Gruppen (normale Kontrollgruppe, Kontrollgruppe und zwei Gruppen für die Testverbindungen) von jeweils 7 Tieren unterteilt. Jede Ratte der Kontrollgruppe und der Testverbindungsgruppen erhielt eine intradermale Injektion mit 0,6 mg wärmeinaktiviertem M. butyricum in 0,1 ml flüssiger Paraffinsuspension in die rechte Hinterpfote, um eine Adjuvans-Arthritis hervorzurufen. Die Testverbindungen wurden in 0,5% CMC suspendiert und den Ratten der Testverbindungsgruppe in ei ner Dosis von 100 mg/kg pro Verabreichung unmittelbar nach der Injektion des Adjuvans und danach nach 12-stündigen Pausen über eine Spanne von 20 Tagen verabreicht. Die Ratten der Kontrollgruppen erhielten 0,5 % CMC unmittelbar nach der Injektion des Adjuvans und danach nach 12- stündigen Pausen über eine Spanne von 20 Tagen. Die Ratten der Normalkontrollgruppe erhielten keine Injektion mit Adjuvans, sondern an sie wurde analog zu der Verabreichung der Testverbindungen lediglich 0,5% CMC verabreicht.
  • Die Bewertungskriterien und die Verfahren zu ihrer Messung sind wie folgt.
    • 1) Hinterpfotenvolumem
  • Das Volumen der Hinterpfote wurde unmittelbar vor und am 3., 7., 10., 14, 17, und 20. Tag nach der Injektion des Adjuvans unter Verwendung einer Fußvolumenmessvorrichtung gemessen. Die Analyse erfolgte unter Anwendung des t-Tests bezüglich der Überlegenheit der Testverbindungsgruppe über die Kontrollgruppe.
    • 2) Erythrozytensedimentationsgeschwindigkeiten
  • Das Blut wurde am 21. Tag vollständig entfernt und als Probe verwendet. Es wurde für die Messung eine Erythrozytensedimentationsmess- Vorrichtung (Matsuyoshi's Erythrocyte Sedimentation rack) verwendet und es erfolgte eine statistische Analyse nach dem Dunnett's Verfahren bezüglich der Überlegenheit der Testverbindungsgruppe über die Kontrollgruppe.
    • 3) Calciumkonzentration im Blut
  • Die Messung erfolgte an der gleichen Probe wie vorstehend unter 2), wobei der Calcium Test WAKO (Wako Junyaku) verwendet wurde, und es erfolgte eine statistische Analyse nach dem Dunnett's Verfahren bezüglich der Überlegenheit der Testverbindungsgruppe über die Kontrollgruppe.
    • 4) Hydroxyprolin im Harn
  • Nach der letzten Verabreichung der Testverbindungen am 20. Tag wurden die Ratten in metabolische Käfige überführt, und es wurden über Nacht Harnproben ohne Zufuhr von Nahrung oder Wasser gesammelt. Das Harnvolumen und die Mengen an Kreatinin und Hydroxyprolin wurden nach dem folgenden Verfahren bestimmt und die Hydroxyprolinausscheidung im Harn als Verhältnis zu Kreatinin ausgedrückt. Es erfolgte eine statistische Analysis nach dem Tukey's Verfahren bezüglich der Überlegenheit der Testverbindungsgruppe über die Kontrollgruppe. Die Bestimmung von Kreatinin erfolgte unter Verwendung des Kreatinin-Tests WAKO (Wako Junyaku).
  • Hydroxyprolin wurde bestimmt, indem die Harnprobe zuerst mit 6 N Salzsäure hydrolysiert wurde, dann an einem Hochleistungsflüssigchromatographen isoliert wurde, der mit einer Ionenaustauschsäule (Hitachi Gel #2619) ausgerüstet war, mit o-Phthalaldehyd unter Bildung eines Hydroxyprolinderivativs umgesetzt und an einem Fluorophotometer gemessen wurde.
    • 4. Testergebnise 1) Hinterpfotenvolumen
  • Fig. 1 zeigt den zeitlichen Verlauf der Volumenveränderung der Hinterpfote ohne Adjuvansinjektion. In der Figur bedeuten die Linien n, c, y bzw. d das Volumen der Hinterpfote für die folgenden Gruppen:
  • n: Normalgruppe
  • c: Kontrollgruppe
  • y: Gruppe, der die bekannte Verbindung Y verabreicht wurde
  • d: Gruppe, der die Verbindung D verabreicht wurde
  • Es erfolgte eine statistische Analyse unter Anwendung des t-Tests bezüglich des signifikanten Unterschieds der Testverbindungsruppe von der Kontrollgruppe. Die Ergebnisse sind mit einem * und ** dargestellt. * p < 0,05; ** p < 0,01.
  • Die Verbindung D unterdrückte das Anschwellen (Volumenzunahme) der Hinterpfote ohne Adjuvansinjektion, das durch Injektion des Adjuvans verursacht wurde.
    • 2) Erythrozytensedimentationsgeschwindigkeiten
  • Tabelle 3 zeigt die Erythrozytensedimentationsgeschwindigkeiten.
    • Tabelle 3
  • Gruppe Erythrozytensedimentationsgeschwindigkeit
  • Normalkontrollgruppe 1 ± 0,1
  • Kontrollgruppe 33 ± 2
  • Verbindung D-Gruppe 20 ± 2**
  • Verbindung Y-Gruppe 30 ± 3
  • **P < 0,01 (v. s. Kontrollgruppe)
  • Während die Verbindung D die von der Adjuvansinjektion verursachte Erhöhung der Erythrozytensedimentationsgeschwindigkeiteri signifikant unterdrückte, wurde für die Verbindung Y kein derartiger Effekt festgestellt.
    • 3) Serumcalciumkonzentrationen
  • Die Serumcalciumkoncentrationen sind in Tabelle 4 gezeigt.
    • Tabelle 4
  • Gruppe Serumcalciumkonz. (mg/dl)
  • Normalkontrollgruppe 8,6 ± 0,1
  • Kontrollgruppe 9,5 ± 0,1
  • Verbindung D-Gruppe 8,9 ± 0,1**
  • Verbindung Y-Gruppe 9 6 ± 0 1
  • ** P < 0,01 (v. s. Kontrollgruppe)
  • Während die Verbindung D den Anstieg der Serumcalciumkonzentration signifikant unterdrückte, wurde für die Verbindung Y kein derartiger Effekt festgestellt.
    • 4) Hydroxyprolinausscheidung im Harn
  • Die Ergebnisse der Messungen der Hydroxyprolinausscheidung im Harn (Verhältnis zu Kreatinin) sind in Tabelle 5 gezeigt.
    • Tabelle 5
  • Gruppe Hydroxyprolinausscheidung im Harn (ug/mg Kreatinin)
  • Normalkontrollgruppe 71,8 ± 2,6
  • Kontrollgruppe 94,3 ± 1,8
  • Verbindung D-Gruppe 78,4 ± 6,1
  • Verbindung Y-Gruppe 107,1 ± 6,5
  • Die Verbindung D tendierte dazu, den Anstieg der Hydroxyprolinausscheidung im Harn zu unterdrücken.
  • (Testbeispiel 4) Test auf Inhibierung der Knochenresorption
    • 1. Getestete Verbindungen
  • Verbindung D: [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl)-L- phenylglycin-N-methylamid (Verbindung aus Beispiel 5)
  • Bekannte Verbindung Y: [4- (N-Hydroxyamino)-2 (R)-isobutyl-3 (S)-(2- thienyl)thiomethylsuccinyl]-L-phenylalanin-N-methylamid (in der JP-A- 4-502008 beschriebene Verbindung)
    • 2. Testverfahren
  • Sechs Wochen alte männliche Wister-Ratten (SLC Japan) wurden auf Calciummangel-Diät (Oriental Yeast, 0,0105-0,012% Calcium, 0,62% Phosphor) gehalten; es wurden ihnen 100 mg/kg Verbindung h oder Y in einer 0,5%-igen CMC-Suspension am 6. Tag oral verabreicht und unmittelbar danach wurde 16 Stunden lang Harn unter Fastenbedingungen mit freiem Zugang zu Wasser gesammelt. Das Harnvolumen und der Hydroxyprolin- und Kreatiningehalt im Harn wurden nach dem in Beispiel 3 beschriebenen Verfahren gemessen und das Hydroxyprolin-/Kreatininverhältnis im Harn wurde berechnet. Es erfolgte eine statistische Analyse: unter Anwendung des Tukey-Verfahrens bezüglich der Überlegenheit der Testverbindungsgruppe über die Kontrollgruppe.
    • 4. Testergebnisse
  • Das Hydroxyprolin-/Kreatininverhältnis im Harn ist in Tabelle 6 gezeigt.
    • Tabelle 6
  • Gruppe Hydroxyprolinausscheidung im Harn (ug/mg Kreatinin)
  • Normalkontrollgruppe 134 ± 7
  • Kontrollgruppe 174 ± 7
  • Verbindung D-Gruppe 144 ± 5*
  • Verbindung Y-Gruppe 161 ± 3
  • *P < 0,05 (v. s. Kontrollgruppe)
  • Im Vergleich mit der Normalkontrollgruppe stieg das Hydroxyprolin- /Kreatininverhältnis in der Kontrollgruppe signifikant an. Während die Verbindung Y diesen Anstieg kaum unterdrückte, zeigte die Verbindung D eine signifikante Unterdrückung bezüglich des Niveaus der Kontrollgruppe.
    • KURZBESCHREIBUNG DER ABBILDUNG
  • Fig. 1 zeigt das zeitliche Profil des Volumens der Hinterpfote ohne Adjuvansinjektion im Test auf Prophylaxe der adjuvansinduzierten Arthritis (Testbeispiel 3).
    • BESTE AUSFÜHRUNGSFORM DER ERFINDUNG
  • Die vorliegende Erfindung wird nun mit Bezug auf die Vergleichsbeispiele und Beispiele näher erläutert.
    • Vergleichsbeispiel 1
  • Herstellung von [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid (optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (IIa) R² für ein Wasserstoffatom und R³ für Methyl steht]
    • (1) 4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylbernsteinsäure:
  • 124 g Dihydro-3-(RS)-(2-methylpropyl)-2,5-furandion wurden in 400 ml Ether gelöst, und zu dieser Lösung wurden bei 0ºC tropfenweise 400 ml einer etherischen Lösung von 128 g O-Benzylhydroxylamin-hydrochlorid gegeben, das mit Kaliumcarbonat neutralisiert worden war. Nach 3,5- stündigem Rühren wurde der erhaltene weiße Feststoff durch Filtration gesammelt. Waschen mit 300 ml eines Lösungsmittelgemischs aus Ether und Ethylacetat (Ether/Ethylacetat = 2/1) ergab 98,6 g 4-(N-Benzyloxyamino)-2(RS)-isobutylbernsteinsäure. Dann wurden die erhaltenen 98,6 g 4-(N-Benzyloxyamino)-2(RS)-isobutylbernsteinsäure in 2000 ml DMF gelöst und nach Zugabe von 42,8 g D-1-Phenylethylamin, das in 1000 ml DMF gelöst worden war, ließ man das Gemisch über Nacht bei Raumtemperatur stehen. Die erhaltenen Kristalle wurden aus 2000 ml DMF umkristallisiert. Zu den so erhaltenen Kristallen gab man 600 ml 2 N Salzsäure, extrahierte das Gemisch mit 500 ml Ethylacetat, wusch mit Wasser und trocknete über Magnesiumsulfat. Nach Verdampfen des Lösungsmittels im Vakuum erhielt man 30,5 g 4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)- isobutylbernsteinsäure.
  • Schmelzpunkt: 93-95ºC
  • [&alpha;]D = +21º (C = 0.5; MeOH)
  • ¹H-NMR (DMSO-d6) &delta;: 0.85 (6H, t), 1.12-1.22 (1H, m), 1.37-1.60 (2H, m), 2.05 (1H, dd), 2.24 (1H, dd), 2.64-2.73 (1H, m), 4.76 (2H, s), 7.38 (5H, s), 11.0 (1H, s), 12.2 (1H, s).
    • (2) N-Benzyloxycarbonyl-L-phenylglycin-N-methylamid:
  • 35,2 g N-Benzyloxycarbonyl-L-phenylglycin und 14,9 g Triethylamin wurden in 900 ml THF gelöst. Hierzu gab man unter Eiskühlung tropfenweise 16,0 g Ethylchlorformiat und rührte das Gemisch etwa 30 min lang bei 5-6ºC zur Herstellung eines gemischten Säureanhydrids, worauf die Zugabe von 28,7 g einer 40%-igen Methylamin-Methanollösung und 2- stündiges Rühren unter Eiskülung erfolgten. Nach dem Abfiltrieren unlöslichen Materials gab man Ethylacetat zur Lösung und wusch das Gemisch nacheinander mit 1 N Salzsäure, gesättigter wässriger Natriumbicarbonatlösung und dann mit Wasser. Die Ethylacetatschicht wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet, und das Lösungsmittel wurde im Vakuum abgedampft. Nach dem Waschen des Rückstands mit einem Lösungsmittelgemisch aus n-Hexan und Ether erhielt man 33,3 g N- Benzyloxycarbonyl-L-phenylglycin-N-methylamid (Ausbeute: 90,7%).
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 2.55 (3H, d), 4.98 (2H, s), 5.16 (1H, d), 7.2-7.5 (10H, m), 7.6-7.4 (1H, m), 7.95-8.2 (1H, d).
    • (3) [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl)-L-phenyl-glycin-N- methylamid:
  • Zu 27 g N-Benzyloxycarbonyl-L-phenylglycin-N-methylamid, das in 400 ml Methanol gelöst worden war, gab man 500 mg 10%-iges Pd/C und führte eine katalytische Reduktion unter einer Wasserstoffatmosphäre bei 3-4 kg/cm² durch. Nach dem Entfernen des Katalysators durch Filtration und Einengen im Vakuum erhielt man L-Phenylglycin-N-methylamid als Öl. Dieses Öl wurde in 400 ml DMF gelöst und man gab 24,4 g 4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylbernsteinsäure und 17,8 g WSC dazu und rührte das Gemisch über Nacht bei Raumtemperatur. Nach dem Einengen im Vakuum wurde der erhaltene Rückstand in 1 l Chloroform gelöst und die Lösung nacheinander mit 0,1 N Salzsäure, gesättigter wässriger Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Nach dem Abdampfen des Chloroforms wurde der so erhaltene Feststoff aus einem Lösungsmittelgemisch aus Ethylacetat/Methanol umkristallisiert, wobei 29 g farblose Kristalle erhalten wurden (Ausbeute: 73%).
  • Schmelzpunkt: 230-232ºC.
  • ¹H-NMR (DMSO-d5) &delta;: 0.82 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.87 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.0- 1.1 (1H, m), 1.35-1.55 (2H, m), 1.97 (1H, dd, J = 7, 14.4 Hz), 2.13 (1H, dd, J = 7.4, 14.4 Hz), 2.57 (3H, d, J = 4.5 Hz), 2.8-2.95 (1H, m), 4.66 (1H, d, J = 11 Hz), 4.71 (1H, d, J = 11 Hz), 5.38 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.2-7.4 (5H, m), 8.13 (1H, q, J = 4.5 Hz), 8.45 (1H, d, J = 7.8 Hz), 10.9 (1H, s).
  • IR (KBr) cm&supmin;¹. 3292, 3224, 2960, 1660, 1646, 1566, 1538.
  • Elementaranalyse (für C&sub2;&sub4;H&sub3;&sub1;N&sub3;O&sub4;)
  • Ber.(%) C, 67.74; H, 7.34; N, 9.87
  • Gef. (%) C, 67.49; H, 7.25; N, 9.73
    • Vergleichsbeispiel 2
  • Herstellung von ([4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-p- hydroxyphenyl)glycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (IIa) R² für Hydroxy und R³ für Methyl steht]
  • 1,3 g 4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylbernsteinsäure und 0,7 g L-(p- Hydroxyphenyl)glycin-N-methylamid (hergestellt nach dem in der JP-A- 54-84546 beschriebenen Verfahren) wurden in 20 ml DMF gelöst. Hierzu gab man tropfenweise 0,54 g WSC unter Eiskühlung und Rühren, und das Gemisch wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Nach dem Einengen im Vakuum gab man zum erhaltenen Rückstand 15 ml Chloroform und 15 ml 0,1 N Salzsäure und rührte das Gemisch. Der ausgefallene Feststoff wurde durch Filtration gesammelt und aus einem THF-Hexan- Lösungsmittelgemisch umkristallisiert, wobei 0,54 g farblose Kristalle erhalten wurden (Ausbeute: 24,8%).
  • ¹H-NMR(DMSO-d&sub6;) &delta;: 0.81 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.86 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.0- 1.1 (1H, m), 1.35-1.55 (2H, m), 1.96 (1H, dd, J = 7, 14.5 Hz), 2.12 (1H, dd, J = 7.3, 14.5 Hz), 2.56 (3H, d, J = 4.5 Hz), 2.6-2.7 (1H, m), 4.68 (1H, d, J = 10.9 Hz), 4.72 (1H, d, J = 10.9 Hz), 5.25 (1H, d, J = 7.7 Hz), 6.67 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.16 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.36 (5H, s), 7.97 (1H, q, J = 4.5 Hz), 8.28 (1H, d, J = 7.8 Hz), 9.34 (1H, s), 10.96 (1H, s).
    • Vergleichsbeispiel 3
  • Herstellung von [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3- (morpholinomethyl)succinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer (Diastereomer "a' "), in dem in der Formel (IIb) R² für ein Wasserstoffatom, R³ für Methyl und R&sup5; für Morpholinomethyl steht]
    • (1) 2(R)-Brom-4-methylpentansäure-t-butylester:
  • 33 g 2(R)-Brom-4-methylpentansäure (hergestellt aus D-Leucin) wurden in 100 ml Methylenchlorid gelöst. In diese Lösung führte man unter Rühren bei -40ºC 47 g 2-Methylpropen ein und rührte Glas Gemisch nach Zugabe von 0,8 ml Schwefelsäure über Nacht bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum auf 1/2 eingeengt und mit 10%iger wässriger Natriumcarbonatlösung gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Die Lösung wurde dann im Vakuum eingedampft, wobei 37,4 g 2(R)-Brom-4-methylpentansäure-t-butylester erhalten wurden.
  • [&alpha;]D = +29 (c = 2, MeOH)
  • ¹H-NMR (CDCl&sub3;) &delta; : 0.92 (3H, d), 0.95 (3H, d), 1.45 (9H, s), 1.7-2.0 (3H, m), 4.18 (1H, t).
    • (2) 2-Benzyloxycarbonyl-3(R)-hydroxycarbonyl-5-methyl- hexansäurebenzylester:
  • Zu 68 g Dibenzylmalonat, das in 500 ml DMF gelöst worden war, gab man nach und nach 26,5 g Kalium-t-butoxid unter Eiskühlung und Rühren. Hierzu gab man dann tropfenweise innerhalb 1 Stunde bei 0ºC 54,5 g 2(R)-Brom-4-methylpentansäure-t-butylester, der in 100 ml DMF gelöst worden war, und rührte das Gemisch bei 0-5ºC 4 Tage lang. Zu dem Rektionsgemisch gab man 500 ml Ethylacetat und 300 ml gesättigte wässrige Ammoniumchloridlösung und rührte das Gemisch gut. Die organische Schicht wurde dann abgetrennt, und die wässrige Schicht wurde mit 500 ml Ethylacetat extrahiert. Die vereinte organische Schicht wurde mit wässriger NaCl-Lösung gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft, wobei ein Öl erhalten wurde. Dieses wurde der Isolierung und Reinigung mittels Kieselgel- Mitteldruckflüssigchromatographie unterworfen (n-Hexan/Ethylacetat = 30 : 1), wobei 48,9 g 2-Benzyloxy-3(R)-t-butoxycarbonyl-5- methylhexansäurebenzylester erhalten wurden.
  • Anschließend wurden 23,2 g von diesem 2-Benzyloxycarbonyl-3(R)-t- butoxy-5-methylhexansäurebenzylester in 75 ml 95%-iger wässriger Trifluoressigsäurelösung gelöst und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Trifluoressigsäure wurde im Vakuum abgedampft, der Rückstand wurde in 100 ml Methylenchlorid gelöst, mit gesättigter wässriger NaCl-Lösung gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Nach dem Einengen im Vakuum wurde der so erhaltene Sirup in 70 ml Ether gelöst und die nach Zugabe von 200 ml n-Hexan ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde im Vakuum eingeengt, wobei 12,5 g 2-Benzyloxy-3(R)-hydroxycarbonyl-5- methylhexansäurebenzylester erhalten wurden.
  • [&alpha;]D = +30º (c = 2, MeOH)
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 0.77 (6H, d, J = 6.4 Hz), 1.0-1.1 (1H, m), 1.4-1.6 (2H, m), 2.8-3.0 (1H, m), 3.71 (1H, d, J = 10 Hz), 5.09-5.25 (2H, m), 7.2-7.4 (10H, m).
    • (3) [4-Benzyloxy-3-benzyloxycarbonyl-2(R)-isobutylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (VIII) R² für ein Wasserstoffatom und R³ für Methyl steht]
  • 23 g 4-Benzyloxy-3-benzyloxycarbonyl-2(R)-isobutylbernsteinsäure und 10,3 g L-Phenylglycin-N-methylamid wurden in 100 ml DMF gelöst. Zu dieser Lösung gab man unter Eiskühlung 10,6 g N-Hydroxybenzotriazol, 3,6 g 4-Dimethylaminopyridin und 13,3 g WSC und rührte das Gemisch über Nacht bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingeengt, und der Rückstand wurde in 800 ml Ethylacetat gelöst und mit Wasser, 0,1%-iger Salzsäure, gesättigter wässriger Natriumbicarbonatlösung und gesättigter wässriger Natriumchloridlösung gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft, wobei [4-Benzyloxy-3-benzyloxycarbonyl-2(R)-isobutylsuccinyl]- L-phenylglycin-N-methylamid als farblose Kristalle erhalten wurde (26,6 g, Ausbeute: 95%).
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 0.75 (3H, d, J = 6.5 Hz), 0.82 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.0- 1.1 (1H, m), 1.4-1.6 (2H, m), 2.56 (3H, d, J = 4.6 Hz), 3.2-3.35 (1H, m), 3.67 (1H, d, J = 10 Hz), 4.95 (2H, s), 5.07 (1H, d, J = 12.4 Hz), 5.16 (1H, d, J = 12.4 Hz), 5.39 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.15-7.45 (15H, m), 8.11 (1H, q, J = 4.6 Hz), 8.74 (1H, d, J = 7.7 Hz).
    • (4) [4-Hydroxy-2(R)-isobutyl-3-methylensuccinyl]-L-phenylglycin-N- methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (IX) R² für ein Wasserstoffatom und R³ für Methyl steht]
  • 26 g der vorstehend unter (3) erhaltenen Verbindung wurden in 600 ml Ethanol gelöst. Zu dieser Lösung gab man 20 g Ammoniumformiat und 6 g 10%-iges Pd/C und rührte das Gemisch 1,5 Stunden lang bei Raumtemperatur. Nach dem Entfernen des Pd/C durch Filtration wurden 5,2 g Piperidin zu dem Filtrat gegeben, und das Gemisch wurde 30 min lang gerührt. Dann wurde das Gemisch nach Zugabe von 32,7 ml wässriger Formaldehydlösung (37%) und 18-stündigem Rühren bei Raumtemperatur 1,5 Stunden lang unter Rückfluß zum Sieden erhitzt. Nach dem Einengen im Vakuum wurde der derart erhaltene Rückstand in 500 ml 10%-iger wässriger Natriumcitratlösung gelöst und mit Ethylacetat (500 ml, fünfmal) extrahiert. Dann wusch man die organische Schicht mit 10%-iger wässriger Kaliumcarbonatlösung (dreimal 300 ml), stellte den Extrakt mit verdünnter Salzsäure auf pH 4 ein und extrahierte mit Methylenchlorid (fünfmal 400 ml). Der vereinigte Extrakt wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft, wobei [4-Hydroxy- 2(R)-isobutyl-3-methylensuccinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid als farbloses kristallines Pulver erhalten wurde (12,3 g, Ausbeute: 69%).
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 0.83 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.88 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.3- 1.7 (1H, m), 1.4-1.6 (2H, m), 2.57 (3H, d, J = 4.6 Hz), 3.6-3.7 (1H, m), 5.37 (1H, d, J = 7.8 Hz), 5.6 (1H, s), 6.1 (1H, s), 7.2-7.4 (5H, m), 8.16 (1H, q, J = 4.6 Hz), 8.33 (1H, d, J = 7.8 Hz), 12.6 (1H, bs).
    • (5) [4-Hydroxy-2(R)-isobutyl-3(RS)-(morpholinomethyl)succinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid [diastereomeres Gemisch der Verbindung, in der R² für ein Wasserstoffatom, R³ für Methyl und R&sup5; für Morpholinomethyl steht]
  • Zu 12 g der unter (4) erhaltenen Kristalle gab man 100 ml Morpholin und rührte das Gemisch 2 Tage lang bei 40-45ºC. Nach dem Einengen im Vakuum wurde der erhaltene Rückstand in 300 ml 5%-iger wässriger Natriumbicarbonatlösung gelöst und mit Ether gewaschen. Die wässrige Schicht wurde mit verdünnter Salzsäure auf pH 1 eingestellt, im Vakuum eingeengt, bis die Lösungsmittelmenge auf 1/5 - 1/6 verringert war, und mit Chloroform (fünfmal 300 ml) extrahiert. Der Extrakt wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft, wobei 11,6 g [4-Hydroxy-2(R)-isobutyl-3(RS)-(morpholinomethyl)succinyl]- L-phenylglycin-N-methylamid-hydrochlorid (Gemisch zweier Diastereomere, die sich vom chiralen Kohlenstoffatom an Position 3 ableiten) erhalten wurde (Ausbeute: 70%).
  • Eine geringe Menge dieses diastereomeren Gemisches wurde zu analytischen Zwecken mittels HPLC unter den folgenden Bedingungen aufgetrennt:
  • HPLC-Bedingungen: Säule: Inertsil ODS-2 (4,6 · 150 mm), GL Science, Mobile Phase: 0,1%-ige wässrige TFA/Acetonitril = 7 : 3 Fließgeschwindigkeit: 1 ml/min
  • Die NMR-Untersuchung eines der Diastereomere zeigte das folgende Spektrum:
  • ¹H-NMR (DMSO-d5) &delta;: 0.84 (3H, d, J = 6.5 Hz), 0.90(3H, d, J = 6.4 Hz), 1.1- 1.2 (1H, m), 1.45-1.65 (2H, m), 2.57 (3H, d, J = 4.6 Hz), 2.9-3.15 (7H, m), 3.16-3.9 (5H, m), 5.38 (1H, d, J = 7.4 Hz), 7.2-7.5 (,5H, m), 8.6 (1H, q, J = 4.6 Hz), 8.81 (1H, d, J = 7.6 Hz).
    • (6) [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3-(morpholinomethyl)succinyl)- L-phenylglycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (IIb) R² für ein Wasserstoffatom, R³ für Methyl und R&sup5; für Morpholinomethyl steht (Diastereomer "a' ")]
  • Dann wurden 2,65 g des vorstehenden diastereomeren Gemisches unter (5) und 1,08 g O-Benzylhydroxylamin-hydrochlorid und 1 g Hydroxybenzotriazol in einem Lösungsmittelgemisch aus 50 ml Methylenchlorid/25 ml DMF gelöst, hierzu gab man unter Eiskühlung 1,29 g WSC und dann 1,2 ml N- Methylmorpholin und rührte das Gemisch über Nacht bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingedampft, der so erhaltene Rückstand wurde in Chloroform gelöst, mit Wasser und dann mit gesättigter wässriger Natriumbicarbonatlösung gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Nach dem Einengen im Vakuum erhielt man einen Feststoff, bei dem es sich um ein Gemisch zweier Stereoisomere handelte (als Diastereomer "a' " bzw. "b' " bezeichnet), die mit einer Retentionszeit von 5,9 min bzw. 6,6 min bei der folgenden HPLC- Analyse eluiert wurden:
  • HPLC-Bedingungen: Säule: Inertsil ODS-2 (4,6 · 150 mm), GL Science, Mobile Phase: 0,1% wässrige TFA/Acetonitril = 7 : 3 Fließgeschwindigkeit: 1 ml/min (das Peakflächenverhältnis der Diastereomere "a' " und "b' " betrug etwa 5 : 1)
  • Das Gemisch der Diastereomere "a' " und "b' " wurde in Methanol gelöst und Kristallisation erfolgte durch Zugabe von Ether, wobei 1,56 g eines optisch aktiven Isomers von [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3- (morpholinomethyl)succinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid (Diastereomer "a' ") erhalten wurden (Ausbeute: 51%).
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta;: 0.77 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.82 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.85- 0.9 (1H, m), 1.35-1.45 (2H, m), 1.73 (1H, dd, J = 3.1, 1.1.8 Hz), 1.9-2.0 (2H, m), 2.55-2.7 (2H, m), 2.57 (3H, d, J = 4.6 Hz), 3.3-3.5 (4H, m), 4.76 (1H, d, J = 11.3 Hz), 4.81 (1H, d, J = 11.3 Hz), 5.45 (1H, d, J = 8 Hz), 7.2-7.45 (10H, m), 8.1 (1H, q, J = 4.6 Hz), 8.71 (1H, d, J = 8 Hz), 11.0 (1H, s).
    • Vergleichsbeispiel 4 [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylensuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (III) R² für ein Wasserstoffatom und R³ für Methyl steht]
  • 0,3 g des im Vergleichsbeispiel 3 (4) erhaltenen [4-Hydroxy-2(R)- isobutyl-3-methylensuccinyl]-L-phenylglycin-N-methylamids und 0,1 g Triethylamin wurden in 20 ml THF gelöst, und man gab zur Lösung unter Eiskühlung und Rühren 0,108 g Ethylchlorformiat und rührte das Gemisch 10 min lang. Zu dem Gemisch gab man dann 0,144 g O-Benzylhydroxylaminhydrochlorid und 0,1 g Triethylamin und rührte das Gemisch 1 Stunde lang bei Raumtemperatur. Nach dem Entfernen unlöslichen Materials durch Filtration wurde das Filtrat mit 1 N Salzsäure und dann mit Wasser gewaschen, über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Die Reinigung des so erhaltenen Rückstands durch präparative TLC lieferte 135 mg [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3- methylensuccinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid (34,3%).
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 0.81 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.86 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.25- 1.65 (3H, m), 2.56 (3H, d, J = 4.5 Hz), 3.58 (1H, t, J = 7 Hz), 4.79 (2H, s), 5.36 (1H, d, J = 7.9 Hz), 5.37 (1H, s), 5.58 (1H, s), 7.2-7.45 (10H, m), 8.21 (1H, g, J = 4.5 Hz), 8.48 (1H, d, J = 7.8 Hz), 11.4 (1H, s).
    • (5) Vergleichsbeispiel 5 [4-(N-Benzyloxyamino-2(R)-isobutyl-3-(N-benzyl-N-methylamino)methylsuccinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (IIb) R² für ein Wasserstoffatom, R³ für Methyl und R&sup5; für N-Benzyl-N-methylaminomethyl steht] (1) [4-Benzyloxy-2(R)-isobutyl-3-methylensuccinyl]-L-phenylglycin-N- methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (XI) R² für Wasserstoff und R³ für Methyl steht]:
  • 3,0 g des im Vergleichsbeispiel 3 (4) erhaltenen [4-Hydroxy-2(R)- isobutyl-3-methylensuccinyl]-L-phenylglycin-N-methylamids wurden in 50 ml DMF gelöst, und zu dieser Lösung gab man 1,5 g Natriumbicarbonat und 7,7 g Benzylbromid und rührte das Gemisch 21 Stunden lang bei Raumtemperatur. Zu dem Reaktionsgemisch gab man 100 ml. Wasser und das Gemisch wurde mit Ethylacetat extrahiert, über wasserfreiem Magnesium sulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Die Isolierung und Rienigung des so erhaltenen Rückstands durch Kieselgel-Mitteldruckflüssigchromatographie (n-Hexan/Ethylacetat = 2/1) lieferte 2,8 g [4- Benzyloxy-2(R)-isobutyl-3-methylensuccinyl]-L-phenylglycin-N- methylamid.
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 0.81 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.83 (3H, d, J = 6.4 Hz), 1.3- 1.6 (2H, m), 1.6-1.7 (1H, m), 2.57 (3H, d, J = 4.6 Hz), 3.7-3.8 (1H, m), 5.1-5.2 (2H, m), 5.38 (1H, d, J = 7.8 Hz), 5.65 (1H, s), 6.17 (1H, s), 7.2-7.4 (10H, m), 8.19 (1H, d, J = 4.6 Hz), 8.51 (1H, d, J = 7.8 Hz)
    • (2) [4-Benzyloxy-2(R)-isobutyl-3-(N-benzyl-N-methylaminomethyl)succinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (XII) R² für ein Wasserstoffatom, R³ für Methyl und R&sup6; für N-Benzyl-N-methylaminomethyl steht]
  • 1,0 g der vorstehend unter (1) erhaltenen Verbindung und 0,32 g N- Benzylmethylamin wurden zusammen 2 Stunden lang bei 60ºC gerührt. Das so erhaltene Gemisch von Diastereomeren (Verhältnis 5 : 1) wurde durch TLC gereinigt, wobei 0,4 g [4-Benzyloxy-2(R)-isobutyl-3-(N-benzyl-N- methylaminomethyl)succinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid als einzelnes optisch aktives Isomer erhalten wurde.
  • ¹H-NMR (CDCl&sub3;) &delta; : 0.8 (3H, d, J = 6.5 Hz), 0.85 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.0-1.6 (3H, m), 2.1 (3H, s), 2.1-2.4 (2H, m), 2.8 (3H, s) 5.3 (1H, s), 5.8 (2H, s), 7.2-7.8 (15H, m).
    • (3) [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3-(N-benzyl-N- methylaminomethyl)succinyl)-L-phenylglycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (IIb) R² für ein Wasserstoffatom, R³ für Methyl und R&sup5; für N-Benzyl-N-methylaminomethyl steht]:
  • 0,4 g des vorstehend unter (2) erhaltenen optisch aktiven Isomers wurden in 30 ml Methanol gelöst, und nach der Zugabe von 100 mg 10%-igem Pd/C erfolgte eine katalytische Reduktion unter einer Wasserstoffatmosphäre. Der Katalysator wurde dann durch Filtration entfernt, und der durch Einengen im Vakuum erhaltene Feststoff wurde einer der dem Vergleichsbeispiel 3 (6) ähnlichen Umsetzung unterworfen, wobei 0,12 g der optisch aktiven Verbindung [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3- (N-benzyl-N-methylamino)methylsuccinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid erhalten wurden.
  • ¹H-NMR (CDCl&sub3;) &delta; : 0, 8 (3H, d, J = 6.5 Hz), 0.85 (3H, d, J = 6.5 Hz), 1.0-1.6 (3H, m), 2.1 (3H, s), 2.1-2.3 (2H, m), 2.75 (3H, s), 2.7-3.5 (2H, m), 4.1 (2H, s), 4.85 (2H, s), 5.5 (1H, s), 7.3-7.5 (15H, m).
    • Vergleichsbeispiel 6 Herstellung von [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-ethylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (IIa) R² für ein Wasserstoffatom und R³ für Ethyl steht] (1) N-Benzyloxycarbonyl-L-phenylglycin-N-ethylamid
  • Unter Befolgung der gleichen Reaktionsweise wie im Vergleichsbeispiel 1 (2), mit der Ausnahme, dass Ethylaminlösung in Methanol anstelle von Methylaminlösung in Methanol verwendet wurde, wurde N- Benzyloxycarbonyl-L-phenylglycin-N-ethylamid aus N-Benzyloxycarbonyl- L-phenylglycin erhalten.
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 1.03 (3H, t), 2.9-3.3 (2H, m), 5.03 (2H, s), 5.20 (1H, d), 7.2-7.6 (11H, m), 8.0-8.3 (1H).
    • (2) [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl)-L-phenyl-glycin-N- ethylamid
  • Unter Befolgung der gleichen Reaktionsweise wie im Vergleichsbeispiel (3), mit der Ausnahme, dass N-Benzyloxycarbonyl-L-phenylglycin-N- ethylamid anstelle von N-Benzyloxycarbonyl-L-phenylglycin-N-methylamid verwendet wurde, wurde [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl)-L- phenylglycin-N-ethylamid erhalten.
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 0.82 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.88 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.98 (3H, t, J = 7.2 Hz), 0.95-1.17 (1H, m), 1.30-1.55 (2H, m), 1.98 (1H, dd, J = 7.2 Hz, 14.3 Hz), 2.14 (1H, dd, J = 7.4 Hz, 14.3 Hz), 2.85-2.98 (1H, m), 3.02-3.12 (2H, m), 4.67 (1H, d, J = 11.1 Hz), 4.71 (1H, d, J = 11.1 Hz), 5.41 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.20-7.42 (10H, m), 8.14 (1H, t, J = 5.4 Hz), 8.44 (1H, d, J = 8.1 Hz), 10.97 (1H, s).
    • Vergleichsbeispiel 7 Herstellung von [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-(p- fluorphenyl)glycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (IIa) R² für ein Fluoratom und R³ für Methyl steht] (1) N-Benzyloxycarbonyl-L-(p-fluorphenyl)glycin-N-methylamid:
  • Ein Gemisch von 220 mg L-(p-Fluorphenyl)glycin, das nach einem literaturbekannten Verfahren [Bull. Chem. Soc. Jpn., 65, 2359-2365 (1992)] hergestellt worden war, 20 ml Wasser und 551 mg Natriumcarbonat wurde mit 244 mg Benzyloxycarbonylchlorid in Dioxan unter Eiskühlung umgesetzt, mit Ethylacetat gewaschen, die wässrige Lösung wurde mit Salzsäure angesäuert, mit Chloroform extrahiert und über Magnesiumsulfat getrocknet. Nach dem Abdampfen des Lösungsmittels im Vakuum erhielt man als öligen Rückstand 400 mg einer N-Benzyloxycarbonylverbindung. Diese wurde mit N-Methylamin auf ähnliche Weise wie im Vergleichsbeispiel 1 (2) umgesetzt, wobei 262 mg Benzyloxycarbonyl-L-(p- fluorphenyl)glycin-N-methylamid erhalten wurden.
  • ¹H-NMR (CDCl&sub3;) &delta;: 2.8 (3H, d), 5.05 (2H, s), 5.11 (1H, d), 5.6-5.8 (1H, m), 6.0-6.2 (1H, m), 6.8-7.5 (9H, m).
    • (2) [4-(N-Benzyloxyamino)-2 (R)-isobutylsuccinyl]-L-(p-fluorphenyl)glycin-N-methylamid:
  • Unter Befolgung der gleichen Reaktionsweise wie Vergleichsbeispiel 1 (3), mit der Ausnahme, dass N-Benzyloxycarbonyl-L-(p- fluorophenyl)glycin-N-methylamid anstele von N-Benzyloxycarbonyl-L- phenylglycin-N-methylamid verwendet wurde, wurde [4-(Ni-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-(p-fluorphenyl)glycin-N-methylamid erhalten.
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta;: 0.81 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.85 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.0- 1.1 (1H, m), 1.35-1.52 (2H, m), 1.96 (1H, dd, J = 7.0 Hz, 14.5 Hz), 2.12 (1H, dd, J = 7.5 Hz, 14.5 Hz), 2.57 (3H, d, J = 4.6 Hz), 2.8-2.9 (1H, m), 4.65 (1H, d, J = 12 Hz), 4.69 (1H, d, J = 12 Hz), 5.38 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.11 (2H, dd, J = 8.9 Hz, 8.9 Hz), 7.35 (5H, s), 7.40-7.45 (2H, m), 8.13 (1H, q, J = 4.6 Hz), 8.47 (1H, d, J = 7.8 Hz), 10.95 (1H, s).
    • Vergleichsbeispiel 8 Herstellung von [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl)-(p- isopropylphenyl)glycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (IIa) R² für Isopropyl und R³ Für Methyl steht] (1) N-Benzyloxycarbonyl-L-(p-isopropylphenyl)glycin-N-methylamid:
  • L-(p-Isopropylphenyl)glycin, das nach einem literaturbekannten Verfahren [Bull. Chem. Soc. Jpn., 65, 2359-2365 (1992)] hergestellt worden war, wurde auf ähnliche Weise N-benzyloxycarbonyliert, wie im Vergleichsbeispiel 7 (1) beschrieben, und dann auf ähnliche Weise mit Methylamin umgesetzt, wie im Vergleichsbeispiel 1 (2), wobei N- Benzyloxycarbonyl-L-(p-isopropylphenyl)glycin-N-methylamid erhalten wurde.
  • ¹H-NMR (CDCl&sub3;) &delta;: 1.2 (6H, d), 2.75 (3H, d), 5.0 (2H, s), 5.18 (1H, d), 5.4-5.6 (1H, m), 5.9-6.1 (1H), 7.1-7.3 (9H, s).
    • (2) [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-(p-isopropylphenyl)glycin-N-methylamid:
  • Unter Befolgung der gleichen Reaktionsweise wie im Vergleichsbeispiel 1 (3), mit der Ausnahme, dass N-Benzyloxycarbonyl-L-(p-isopropylphenyl)glycin-N-methylamid anstelle von N-Benzyloxycarbonyl-L- phenylglycin-N-methylamid verwendet wurde, wurde [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-(p-isopropylphenyl)glycin-N-methylamid erhalten.
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta;: 0.82 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.87 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.0- 1.2 (1H, m), 1.2 (3H, d, J = 6.9 Hz), 1.35-1.52 (2H, m), 1.97 (1H, dd, J = 6.8 Hz, 14.5 Hz), 2.12 (1H, dd, J = 7.6 Hz, 14.5 Hz), 2.5.7 (3H, d, J = 4.6 Hz), 2.75-2.92 (2H, m), 4.65 (1H, d, J = 11 Hz), 4.69 (1H, d, J = 11 Hz), 5.33 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.13 (2H, d, J = 8.1 Hz), 7.29 (2H, d, J = 8.1 Hz), 7.35 (5H, s), 8.06 (1H, q, J = 4.6 Hz), 8.37 (1H, d, J = 7.8 Hz), 10.96 (1H, s).
    • Vergleichsbeispiel 9 Herstellung von [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid [optisch aktiveac Isomer, in dem in der Formel (IIb) R² für ein Wasserstoffatom, R³ für Methyl und R&sup5; für Methyl steht] (1) [4-Hydroxy-2(R)-isobutyl-3-(RS)-methylsuccinyl]-L-phenylglycin-N- methylamid
  • Zu 11,1 g in 700 ml Ethanol gelöstem [4-Hydroxy-2(R)-isobutyl-3- methylensuccinyl)-L-phenylglycin-N-methylamid, das im Vergleichsbeispiel 3 (4) erhalten worden war, gab man 1,0 g 10%-iges Pd/C und rührte das Gemisch 2 Stunden lang unter einer Wasserstoffatmosphäre. Der Katalysator wurde durch Filtration entfernt, und das Filtrat wurde im Vakuum zur Trockene eingedampft, wobei 11 g [4-Hydroxy-2(R)-isobutyl- 3(RS)-methylsuccinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid (Gemisch zweier Diastereomere, die sich vom chiralen Kohlenstoff in Position 3 ableiten) erhalten wurden. Dieser Feststoff erwies sich in der anschließenden HPLC-Analyse als Gemisch zweier Stereoisomere (Diastereomer "e' " bzw. "f' ") mit einer Retentionszeit von etwa 8,1 Minuten bzw. etwa 9,5 Minuten.
  • HPLC-Bedingungen: Säule: Inertsil Prep-ODS (6 · 250 mm), GL Science, Mobile Phase: 0.1%-ige wässrige TFA/Acetonitril = 6 : 4 Fließgeschwindigkeit: 1 ml/min.
  • Eine geringe Menge des diastereomeren Gemisches wurde für analytische Zwecke mittels HPLC aufgetennt. Die jeweiligen Diastereomere zeigten das folgende Spektrum.
  • Diastereomer "e' "
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta;: 0.8 (3H, J = 6.5 Hz), 0.87 (6H, d, J = 6.6 Hz), 0.9-1.1 (1H, m), 1.3-1.6 (2H, m), 2.2-2.4 (1H, m), 2.57 (3H, d, J = 4.6 Hz), 2.6- 2.8 (1H, m), 5.47 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.2-7.45 (5H, m), 8.12 (1H, d, J = 4.6 Hz), 8.73 (1H, d, J = 8.0 Hz), 12.16 (1H, bs).
  • Diastereomer "f' "
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub5;) &delta;: 0.82 (3H, d, J = 6.5 Hz), 0.86 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.95 (3H, d, J = 7.1 Hz), 1.0-1.15 (1H, m), 1.45-1.6 (2H, m), 2.57 (3H, d, J = 4.6 Hz), 2.5-2.6 (1H, m), 2.7-2.85 (1H, m), 5.39 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.2-7.4 (5H, m), 8.12 (1H, d, J = 4.6 Hz), 8.50 (1H, d, J: = 7.8 Hz), 12.18 (1H, bs).
    • (2) [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid
  • Zu einer Lösung von 11 g der vorstehend unter (1) erhaltenen Verbindung, die in einem Gemisch von 150 ml DMF und 200 ml Methylenchlorid gelöst war, gab man unter Eiskühlung 8,0 g O-Benzylhydroxylaminhydrochlorid, 5,5 g Hydroxybenzotriazol und 5,1 g Triethylamin und dann 7,8 g WSC, und rührte das Gemisch über Nacht bei Raumtemperatur. Der während der Umsetzung ausgefallene Feststoff wurde durch Filtration gesammelt und mit verdünnter Salzsäure und dann mit einer geringen Menge Methanol gewaschen, wobei 7,7 g eines optischen Isomers von [4- (N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl)-L-phenylglycin-N- methylamid erhalten wurden.
  • Obgleich im Reaktionsgemisch zwei Stereoisomere (als Diastereomer "e" bzw. "f" bezeichnet) beobachtet wurden, die in der nachstehenden HPLC- Analyse eine Retentionszeit von 8,2 min bzw. 9,6 min aufweisen, handelt es sich bei der nach dem vorstehenden Verfahren erhaltenen Verbindung um eines davon, nämlich Diastereomer "e".
  • HPLC-Bedingungen: Säule: Inertsil Prep-ODS (6 · 250 mm), CL Science, Mobile Phase: 0,1%-ige wässrige TFA/Acetonitril = 5 : 5 Fließgeschwindigkeit: 1 ml/min
  • Schmelzpunkt: 256-257ºC (Zers.)
  • ¹H-NMR(DMSO-d&sub6;) &delta; : 0.76 (3H, d, J = 2.1 Hz), 0.78 (3H, d, J = 2.5 Hz), 0.84 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.9 (1H, m), 1.3 (2H, m), 2.1 (1H, m), 2.56 (3H, d, J = 4.5 Hz), 2.66 (1H, m), 4.77 (2H, s), 5.46 (1H, d, J = 8.0 Hz), 7.23-7.42 (10H, m), 8.07 (1H, dd, J = 4.6 Hz), 8.74 (1H, d, J = 8.0 Hz), 11.04 (1H, s).
  • Elementaranalyse (für C&sub2;&sub5;H&sub3;&sub3;N&sub3;O&sub4;)
  • Ber.(%) C, 68.31; H, 7.57; N, 9.56
  • Gef. (%) C, 68.08; H, 7.49; N, 9.51.
    • Beispiel 1 Herstellung von [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsucciriyl]-L- phenylglycin-N-methylamid [optisches Isomer, in dem in der Formel (I) R¹ und R² jeweils für ein Wasserstoffatom stehen und R³ für Methyl steht]
  • Zu 7,3 g in 300 ml Methanol gelöstem [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)- isobutylsuccinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid gab man 200 mg 10%-iges Pd/C und unterwarf es der katalytischen Reduktion unter einem Wasserstoffdruck von 3 kg/m². Nach dem Entfernen des Katalysators durch Filtration und dem Einengen im Vakuum wurde der erhaltene Rückstand aus einem Lösungsmittelgemisch aus THF/Methanol umkristallisiert, wobei 4 g der Titelverbindung als farblose Kristalle erhalten wurden (Ausbeute: 71, 8%).
  • Schmelzpunkt: 169-170ºC
  • [&alpha;]D = +97,4º (c = 0,2; MeOH)
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 0.81 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.87 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.0- 1.15 (1H, m), 1.45-1.6 (2H, m), 1.97 (1H, dd, J = 7.4, 14.4 Hz), 2.13 (1H, dd, J = 6.6, 14.4 Hz), 2.55 (3H, d, J = 4.5 Hz), 2.8-2.95 (1H, m), 5.38 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.2-7.4 (5H, m), 8.13 (1H, q, J = 4.5 Hz), 8.45 (1H, d, J = 7.8 Hz), 8.72 (1H, s), 10.36 (1H, s).
  • IR (KBr) cm&supmin;¹ : 3296, 1644, 1538.
  • Elementaranalyse (für C&sub1;&sub7;H&sub2;&sub5;N&sub3;O&sub4;)
  • Ber. (%) C, 60.88; H, 7.51; N, 12.53
  • Gef. (%) C, 60.78; H, 7.63; N, 12.36.
    • Beispiel 2 Herstellung von [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-(p- hydroxyphenyl)glycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (I) R¹ für ein Wasserstoffatom, R² für Hydroxy und R³ für Methyl steht]
  • Zu 0,54 g in 20 ml Methanol gelöstem [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)- isobutylsuccinyl]-L-(p-hydroxyphenyl)glycin-N-methylamid, das im Vergleichsbeispiel 2 erhalten wurde, gab man 50 mg 10%-iges Pd/C, und die katalytische Reduktion erfolgte unter Wasserstoffnormaldruck. Nach dem Entfernen des Katalysators und Einengen im Vakuum wurde der erhaltene Rückstand durch fraktionierte HPLC gereinigt, wobei 240 mg der Titelverbindung als farblose Kristalle erhalten wurden (Ausbeute: 55,8%).
  • Schmelzpunkt: 187-188ºC
  • [&alpha;]D = +116,60 (c = 0,2; MeOH)
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta;: 0.80 (3H, d, J = 6.3 Hz). 0.86 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.0- 1.15 (1H, m), 1.35-1.6 (2H, m), 1.95 (1H, dd, J = 7.5, 14.4 Hz), 2.11 (1H, dd, J = 6.8, 14.4 Hz), 2.55 (3H, d, J = 4.5 Hz), 2.8-2.95 (1H, m), 5.22 (1H, d, J = 7.7 Hz), 6.69 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.16 (2H, d, J = 8.5 Hz), 7.98 (1H, q, J = 4.5 Hz), 8.29 (1H, d, J = 7.7 Hz), 8.72 (1H, s), 9.37 (1H, s), 10.34 (1H, s).
  • IR (KBr) cm&supmin;¹ : 3304, 3072, 1642, 1552, 1518, 1442.
  • Elementaranalyse (für C&sub1;&sub7;H&sub2;&sub5;N&sub3;O&sub5;)
  • Ber.(%) C, 58.11; H, 7.17; N, 11.96
  • Gef. (%) C, 57.88; H, 7.15; N, 11.93
    • Beispiel 3 Herstellung von [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-(morpholinomethyl)succinyl)-L-phenylglycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (I) R¹ für Morpholinomethyl, R² für ein Wasserstoffatom und R³ für Methyl steht] (Diastereomer "a"))
  • 1,5 g Diastereomer "a' " von [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3- (morpholinomethyl)succinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid wurden in 20 ml Methanol und 20 ml THF gelöst und der katalytischen Reduktion unter Wasserstoffatmosphäre unterworfen. Nach dem Entfernen des Katalysators durch Filtration wurde das Filtrat im Vakuum eingedampft, wobei ein festes Material erhalten wurde. Diese wurde aus Methanol/Ether umkristallisiert, wobei 1,06 g [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3- (morpholinomethyl)succinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid als einzelnes optisch aktives Isomer (als Diastereomer "a" bezeichnet) erhalten wurden (Ausbeute: 85,8%).
  • Schmelzpunkt: 216-217ºC (Zers.)
  • [&alpha;] D = +85,1 (c = 0,2, MeOH)
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta;: 0.78 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.83 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.85- 0.97 (1H, m), 1.35-1.46 (2H, m), 1.72 (1H, dd, J = 3, 11.8 Hz), 1.90-1.92 (2H, m), 2.15-2.35 (3H, m), 2.56 (3H, d, J = 4.6 Hz), 2.5-2.57 (2H, m), 3.4-3.45 (4H, m), 5.47 (1H, d, J = 8 Hz), 7.2-7.45 (5H, m), 8.10 (1H, d, J = 4.6 Hz), 8.66 (1H, d, J = 8 Hz), 8.77 (1H, d, J = 1.7 Hz), 10.36 (1H, d, J = 1.7 Hz).
  • IR (KBr) cm&supmin;¹. 3312, 1646, 1566.
  • Elementaranalyse (für C&sub2;&sub2;H&sub3;&sub4;N&sub4;O&sub5;·H&sub2;O)
  • Ber. (%) C, 58.39; H, 8.02; N, 12.38
  • Gef. (%) C, 58.43; H, 7.98; N, 12.39
    • Beispiel 4 Herstellung von [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3- (morpholinomethyl)succinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid-hydrochlorid [Hydrochlorid eines optisch aktiven Isomers (Diastereomer "a") in dem in der Formel (I) R¹ für Morpholinomethyl, R² für ein Wasserstoffatom und R³ für Methyl steht]
  • Zu 0,2 g in 5 ml Methanol gelöstem [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl- 3-(morpholinomethyl)succinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid (Diastereomer "a"), das in Beispiel 3 erhalten worden war, gab man unter Eiskühlung 1 ml 4 N HCl/Dioxan-Lösung und engte das Gemisch im Vakuum ein, wobei 0,2 g des in der Überschrift angegebenen Hydrochlorids als farblose Kristalle erhalten wurden (Ausbeute: 92%).
  • Schmelzpunkt: 150-160ºC (Zers.)
  • [&alpha;]D = +88.4º (c = 0.2, MeOH)
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 0.81 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.85 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.95- 1.1 (1H, m), 1.4-1.55 (2H, m), 2.57 (3H, d, J = 4.6 Hz), 2.6-3.2 (7H, m), 3.5-3.9 (5H, m), 5.43 (1H, d, J = 7.7 Hz), 7.2-7.5 (5H, m), 8.20 (1H, q, J = 4.6 Hz), 8.92 (1H, d, J = 7.7 Hz), 10.37 (1H, s), 10.84 (1H, s).
  • IR (KBr) cm&supmin;¹ : 3270, 1648, 1530.
  • Elementaranalyse (für C&sub2;&sub2;H&sub3;&sub4;NO&sub5;·H&sub2;O·HCl)
  • Ber. (%) C, 54.04; H, 7.63; N, 11.46
  • Gef. (%) C, 53.76; H, 7.44; N, 11.34
    • Beispiel 5 Herstellung von [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methyl-succinyl]- L-phenylglycin-N-methylamid [optisches Isomer, in dem in der Formel (I) R¹ und R³ beide für Methyl stehen und R² für ein Wasserstoffatom steht (Diastereomer "c")]
  • Zu 125 mg der im Vergleichsbeispiel 4 erhaltenen Kristalle von [4-(N- Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylensuccinyl]-L-phenylglycin-N- methylamid, die in 5 ml Methanol gelöst worden waren, gab man 50 mg 10 %-iges Pd/C und unterwarf dieses einer katalytischen Reduktion. Nach Entfernen des Katalysators und Einengen im Vakuum erhielt man (4-(N- Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl]-L-phenylglycin-N- methylamid als Gemisch zweier Stereoisomere (das Herstellungsverhältnis betrug 3 : 1, als Diastereomere "c" bzw. "d" bezeichnet). Dessen Reinigung durch fraktionierte HPLC unter den folgenden. Bedingungen lieferte 32 mg des Diastereomers "c" (Ausbeute: 36%).
  • HPLC-Bedingungen: Säule: Inertsil Prep-ODS (20,0 · 250 mm), GL Science,
  • Mobile Phase: 0,1%-ige wässrige TFA/Acetonitril = 7 : 3.
  • Fließgeschwindigkeit: 10 ml/min.
  • Retentionszeit: Diastereomer "c" etwa 9 min
  • Diastereomer "d" etwa 11 min
  • (Physikalische Eigenschaften von Diastereomer "c")
  • Schmelzpunkt: 224-226ºC
  • [&alpha;]D = +129.6º (c = 0.1, MeOH)
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta;: 0.78 (3H, d, J = 6.8 Hz), 0.79 (3H, d,. J = 6.3 Hz), 0.85 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.9-0.95 (1H, m), 1.35-1.5 (2H, m), 2.10 (1H, m), 2.57 (3H, d, J = 4.6 Hz), 2.6-2.7 (1H, m), 5.47 (1H, d, J = 8 Hz), 7.2-7.4 (5H, m), 8.07 (1H, d, J = 4.6 Hz), 8.72 (1H, d, J = 8 Hz), 10.42 (1H, s).
  • Elementaranalyse (für C&sub1;&sub8;H&sub2;&sub7;N&sub3;O&sub4;·1/4 H&sub2;O)
  • Ber. (%) C, 61.08; H, 7.97; N, 11.87
  • Gef. (%) C, 61.06; H, 7.92; N, 11.87
    • Beispiel 6 Herstellung von [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3- (methylaminomethyl)succinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid [optisches Isomer, in dem in der Formel (I) R¹ für Methylaminomethyl, R² für ein Wasserstoffatom und R³ für Methyl steht]
  • 110 mg des optischen Isomers von [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl- 3-(N-benzyl-N-methylamino)methylsuccinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid, das im Vergleichsbeispiel 5 erhalten worden war, wurden in Methanol auf ähnliche Weise wie in Beispiel 5 beschrieben der katalytischen Reduktion unterworfen, wobei 50 mg eines optisch aktiven Isomers von [4- (N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-(N-methylaminomethyl)succinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid erhalten wurden.
  • Schmelzpunkt: 177-180ºC
  • [&alpha;]D = +93.4º (c = 0.1, MeOH)
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 0.79 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.84 (3H, d, J = 6.4 Hz), 0.9- 0.98 (1H, m), 1.35-1.5 (2H, m), 2.08 (3H, s), 2.1-2.3 (2H, m), 2.57 (3H, d, J = 4.5 Hz), 2.6-2.7 (1H, m), 5.46 (1H, d, J = 8 Hz), 7.2-7.4 (5H, m), 8.12 (1H, d, J = 4.5 Hz), 8.69 (1H, d, J = 8.1 Hz).
    • Beispiel 7 Herstellung von [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-ethylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (I) R¹ und R² beide für ein Wasserstoffatom stehen und R³ für Ethyl steht]
  • 150 mg [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-phenylglycin-N- ethylamid, das im Vergleichsbeispiel 6 erhalten worden war, wurde auf ähnliche Weise wie Beispiel 1 einer katalytischen Reduktion unterworfen, wobei 54 mg [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-ethylamid als kristallines Pulver erhalten wurden.
  • Schmelzpunkt: 185-190ºC
  • [&alpha;]D = +71º (c = 0.5, MeOH)
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 0.82 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.87 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.98 (3H, t, J = 7.2 Hz), 1.04-1.16 (1H, m), 1.38-1.55 (2H, m), 1.97 (1H, dd, J = 7.5 Hz, 14.4 Hz), 2.13 (1H, dd, J = 6.9 Hz, 14.4 Hz), 2.83.-2.95 (1H, m), 3.02-3.12 (2H, m), 5.39 (1H, d, J = 8 Hz), 7.22-7.42 (5H, m), 8.14 (1H, t, J = 5.4 Hz), 8.43 (1H, d, J = 8 Hz), 8.70 (1H, bs), 10.35 (1H, s).
  • Elementaranalyse (für C&sub1;&sub8;H&sub2;&sub7;N&sub3;O&sub4;)
  • Ber. (%) C, 61.87; H, 7.79; N, 12.03
  • Gef. (%) C, 61.98; H, 7.85; N, 11.98.
    • Beispiel 8
  • Herstellung von [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl-L-(p- fluorphenyl)glycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (I) R¹ für ein Wasserstoffatom, R² für ein Fluoratom und R³ für Methyl steht]
  • 320 mg [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-(p- fluorphenyl)glycin-N-methylamid, das im Vergleichsbeispiel 7 erhalten worden war, wurde auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1 einer katalytischen Reduktion unterworfen, wobei 155 mg [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)- isobutylsuccinyl]-L-(p-fluorphenyl)glycin-N-methylamid als kristallines Pulver erhalten wurden.
  • Schmelzpunkt: 170-172ºC
  • [&alpha;]D = +78º (c = 0.1, MeOH)
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta;: 0.81 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.85 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.0- 1.1 (1H, m), 1.40-1.52 (2H, m), 1.96 (1H, dd, J = 7.3 Hz, 14.4 Hz), 2.12 (1H, dd, J = 7.0 Hz, 14.4 Hz), 2.6 (3H, d, J = 4.6 Hz), 2.8-2.9 (1H, m), 5.36 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.14 (2H, dd, J = 8.9, 8.9 Hz), 7.4-7.45 (2H, m), 8.13 (1H, d, J = 4.6 Hz), 8.45 (1H, d, J = 7.8 Hz), 10.34 (1H, s).
  • IR (KBr) cm&supmin;¹ : 3288, 2962, 1641, 1543, 1511.
  • Elementaranalyse (für C&sub1;&sub7;H&sub2;&sub4;FN&sub3;O&sub4;)
  • Ber. (%) C, 57.78; H, 6.85; N, 11.89
  • Gef. (%) C, 57.83; H, 6.96; N, 11.84.
    • Beispiel 9 Herstellung von [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L-(p- isopropylphenyl)glycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (I) R¹ für ein Wasserstoffatom, R² für Isopropyl und R³ für Methyl steht]
  • 300 mg [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutylsuccinyl]-L- (p- isopropylphenyl)glycin-N-methylamid, das im Vergleichsbeispiel 8 erhalten worden war, wurde auf ähnliche Weise wie in Beispiel 1 einer katalytischen Reduktion unterworfen, wobei 180 mg (4-(N-Hydroxyamino)- 2(R)-isobutylsuccinyl]-L-(p-isopropylphenyl)glycin-N-methylamid als kristallines Pulver erhalten wurden.
  • Schmelzpunkt: 219-222ºC
  • [&alpha;]D = +95.3º (c = 0.1, MeOH)
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta;: 0.80 (3H, d, J = 6.3 Hz), 0.85 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.0- 1.08 (1H, m), 1.2 (6H, d, J = 6.9 Hz), 1.47-1.52 (2H, m), 1.95 (1H, dd, J = 7.5 Hz, 14.4 Hz), 2.15 (1H, dd, J = 6.9 Hz, 14.4 Hz), 2.60 (2H, d, J = 4.6 Hz), 2.80-2.92 (2H, m), 5.3 (1H, d, J = 7.8 Hz), 7.2 (2H, d, J = 8.2 Hz), 7.3 (2H, d, J = 8.2 Hz), 8.05 (1H, d, J = 4.6 Hz), 8.4 (1H, d, J = 7.8 Hz), 8.7 (1H, d, J = 1.6 Hz), 10.34 (1H, d, J = 1,6 Hz).
  • IR (KBr) cm&supmin;¹ : 3298, 2962, 1662, 1639, 1608, 1572.
  • Elementaranalyse (für C&sub2;&sub0;H&sub3;&sub1;N&sub3;O&sub4;)
  • Ber. (%) C, 63.64; H, 8.28; N, 11.13
  • Gef. (%) C, 63.47; H, 8.30; N, 11.13
    • Beispiel 10 Herstellung von [4-(Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl)-L- phenylglycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer, in dem in der Formel (I) R&sup5; und R³ beide für Methyl stehen und R² für ein Wasserstoffatom steht (Diastereomer "c")]
  • 7,7 g [4-(N-Benzyloxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid (Diastereomer "e"), das im Vergleichsbeispiel 9 erhalten worden war, wurden in 500 ml DMF suspendiert. Hierzu gab man 0,7 g 10%-iges Pd/C und rührte das Gemisch 4 Stunden lang unter einer Wasserstoffatmosphäre. Nach dem Entfernen des Katalysators durch Filtration und Einengen im Vakuum, wurde der Rückstand aus Methanol umkristallisiert, wobei 5,2 g der Titelverbindung erhalten wurden.
  • Bei der HPLC-Analyse wurde diese Verbindung mit der gleichen Retentionszeit eluiert, wie das Diastereomer "c", das in Beispiel 5 hergestellt worden ist, und ihr ¹H-NMR-Spektrum war mit dem des Diastereomeren "c" identisch.
  • Schmelzpunkt: 217-219ºC
  • [&alpha;]D = +136º (c = 0.1, MeOH)
  • Elementaranalyse (für C&sub1;&sub8;H&sub2;&sub7;N&sub3;O&sub4;)
  • Ber. (%) C, 61.87; H, 7.79; N, 12.03
  • Gef. (%) C, 61.70; H, 7.79; N, 11.97
    • Beispiel 11 Herstellung des Natriumsalzes von [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3- methyl-succinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid [optisch aktives Isomer (Diastereomer "c") in dem in der Formel (I) R¹ und R³ beide für Methyl stehen und R² für ein Wasserstoffatom steht]
  • Zu 101 mg in 20 ml Methanol gelöstem optisch aktiven Isomeren (Diastereomer "c") von [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl]-L- phenylglycin-N-methylamid gab man unter Eiskühlung 2,9 ml 1/10 N wässrige Natriumhydroxidlösung und rührte das Gemisch 5 min lang. Die erhaltene Lösung wurde im Vakuum zur Trockene eingedampft, wobei 107 mg [4-(N-Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl]-L-phenylglycin-N- methylamid-Natriumsalz erhalten wurden.
  • ¹H-NMR (DMSO-d&sub6;) &delta; : 0.75 (3H, d, J = 6.6 Hz), 0.77 (3H, d, J = 5.4 Hz), 0.82 (3H, d, J = 6.3 Hz), 1.0 (1H, m), 1.4 (2H, m), 2.0 (1H, m), 2.4-.2.6 (1H, m), 2.56 (3H, d, J = 4 Hz), 5.42 (1H, d, J = 7.9 Hz), 7.2-7.4 (5H, m), 8.02 (1H, d, J = 4.3 Hz), 9.52 (1H, d, J = 7.6 Hz).
    • Beispiel 12 Es werden wie folgt Tabletten erhalten, die 100 mg/Tablette [4- (Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3-methylsuccinyl]-L-phenylglycin-N- methylamid (Verbindung aus Beispiel 5) enthalten. [Zusammensetzung]
  • Bestandteile Menge
  • Wirkstoff
  • (Verbindung aus Beispiel 5) 100 Gew.-Teile
  • Maisstärke 46 Gew.-Teile
  • Mikrokristalline Cellulose 98 Gew.-Teile
  • Hydroxypropylcellulose 2 Gew.-Teile
  • Magnesiumstearat 4 Gew.-Teile
    • [Vorgehensweise]
  • Der Wirkstoff, die Maisstärke und die mikrokristalline Cellulose werden vermischt. Zu diesem Gemisch gibt man die in 50 Gew.-Teilen Wasser gelöste Hydroxypropylcellulose, worauf ausreichend geknetet wird. Die Paste wird dann zum Granulieren durch ein Sieb gestrichen, getrocknet, mit Magnesiumstearat gemischt und zu Tabletten von je 250 mg geformt.
    • Beispiel 13 Herstellung von Granalien
  • Granalien mit einem Gehalt von 200 mg [4-(Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl- 3-methylsuccinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid (Verbindung aus Beispiel 5) werden wie folgt erhalten.
    • [Zusammensetzung]
  • Bestandteile Menge
  • Wirkstoff
  • (Verbindung aus Beispiel 5) 200 Gew.-Teile
  • Lactose 185 Gew.-Teile
  • Maisstärke 109 Gew.-Teile
  • Hydroxypropylcellulose 6 Gew.-Teile
    • [Vorgehensweise]
  • Der Wirkstoff, Lactose und Maisstärke werden gemischt und hierzu wird die in 120 Gew.-Teilen Wasser gelöste Hydroxypropylcellulose gegeben, worauf ausreichend geknetet wurde. Die Paste wird zum Granulieren durch ein 20-mesh-Sieb gestrichen, getrocknet und klassiert, um Granalien zu erhalten.
    • Beispiel 14 Herstellung von Kapseln
  • Kapseln mit einem Gehalt von 100 mg [4-(Hydroxyamino)-2(R)-isobutyl-3- methylsuccinyl]-L-phenylglycin-N-methylamid (Verbindung aus Beispiel 5) pro Kapsel werden wie folgt erhalten:
    • [Zusammensetzung]
  • Bestandteile Menge
  • Wirkstoff
  • (Verbindung aus Beispiel 5) 100 Gew.-Teile
  • Lactose 35 Gew.-Teile
  • Maisstärke 60 Gew.-Teile
  • Magnesiumstearat 5 Gew.-Teile
    • [Vorgehensweise]
  • Die vorstehenden Bestandteile werden miteinander vermischt, und jeweils 200 mg des gemischten Pulvers werden unter Erhalt von Kapseln eingekapselt.

Claims (4)

1. Acylphenylglycinderivat der Formel (I)
worin R¹ für ein Wasserstoffatom, Methyl, Methylaminomethyl oder Morpholinomethyl steht; R² für ein Wasserstoffatom, Hydroxy, ein Fluoratom oder geradkettiges oder verzweigtes C&sub1;-C&sub4;-Alkyl steht; und R³ für geradkettiges oder verzweigtes C&sub1;-C&sub4;-Alkyl steht oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
2. Acylphenylglycinderivat oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon nach Anspruch 1, worin R¹ und R³ beide für Methyl stehen und R² für ein Wasserstoffatom steht.
3. Mittel zur Prophylaxe und Behandlung von durch erhöhte Collagenaseaktivität verursachten Erkrankungen, wobei das Mittel als aktiven Wirkstoff das Acylphenylglycinderivat oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon nach Anspruch 1 oder 2 umfaßt.
4. Mittel nach Anspruch 3, wobei die durch erhöhte Collagenaseaktivität verursachten Erkrankungen Gelenkerkrankungen oder durch Knochenresorption bedingte Erkrankungen sind.
DE69414396T 1993-08-09 1994-08-03 Acylphenylglycin-derivat und dieses als aktivbestandteil enthaltendes vorbeugungs -und heilmittel gegen durch erhöhte collagenaseaktivität verursachte krankheiten Expired - Fee Related DE69414396T2 (de)

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