DE3340208C2 - - Google Patents

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DE3340208C2
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Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf Peptide und diese enthaltende veterinärmedizinische Zusammensetzungen gemäß den voranstehenden Patentansprüchen.
In dieser Beschreibung sind Symbole und Abkürzungen jene, die üblicherweise in der Peptidchemie verwendet werden (siehe J. Biol. Chem. 1972, 247, 977-983): Boc = tert.Butyloxycarbonyl; Bzl = Benzyl; c = Konzentration;
HOTcp = Trichlorphenol; MeOH = Methanol; Met(O) = Methioninsulfoxid; (4-Cl)Phe = 4-Chlor-L-phenylalanin; (4-NH₂)Phe = 4-Amino-L-phenylalanin; (4-NO₂)Phe = 4-Nitro-L-phenylalanin; Pip = L-Pipecolinsäure; Thz = 4-L-Thiazolidincarbonsäure; TLC = Dünnschichtchromatographie.
Salze von Peptiden gemäß vorliegender Erfindung mit veterinärmedizinisch annehmbaren Säuren oder Basen sind mitumfaßt. Derartige Säureadditionssalze können von einer Reihe von anorganischen und organischen Säuren, wie Schwefel-, Phosphor-, Salz-, Bromwasserstoff-, Jodwasserstoff-, Salpeter-, Sulfamin-, Citronen-, Milch-, Pyruvin-, Oxal-, Malein-, Bernstein-, Wein-, Zimt-, Essig-, Trifluoressig-, Benzoe-, Salicyl-, Glucon-, Ascorbin- und verwandte Säuren, stammen. Derartige Basenadditionssalze können von einer Reihe von anorganischen und organischen Basen, wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Diäthylamin, Triäthylamin und Dicyclohexylamin stammen.
Die Synthese der Peptide gemäß der Erfindung erfolgt gemäß klassichen Lösungsmethoden. Die Synthese besteht im wesentlichen in geeigneten aufeinanderfolgenden Kondensationen von geschützten Aminosäuren oder Peptiden. Die Kondensation wird so durchgeführt, daß die erhaltenen Peptide die gewünschte Sequenz von 4 oder 5 Aminosäureresten aufweisen. Die Aminosäuren und Peptide, die gemäß in der Polypeptidchemie an sich bekannten Verfahren kondensiert werden, weisen ihre Amino- und Carboxylgruppen auf derartige Weise auf, daß sie an der Bildung der Peptidbindung nicht beteiligt sind, d. h. sie sind durch eine geeignete Schutzgruppe blockiert. Die Schutzgruppen können durch Acidolyse, Verseifung oder Hydrogenolyse entfernt werden.
Zum Schützen der Aminogruppen können beispielsweise die folgenden Schutzgruppen verwendet werden: Benzyloxycarbonyl, tert.Butoxycarbonyl, Trityl, Formyl, Trifluoracetyl, o-Nitrophenylsulfenyl, 4-Methoxybenzyloxycarbonyl, 9-Fluorenylmethoxycarbonyl oder 3,5-Dimethoxy-α,α′-dimethylbenzyloxycarbonyl. Zum Schützen der Carboxygruppen können beispielsweise die folgenden Schutzgruppen verwendet werden: Methyl, Äthyl, tert.- Butyl, Benzyl oder p-Nitrobenzyl.
Die Kondensation zwischen einer Aminogruppe eines Moleküls und einer Carboxylgruppe eines anderen Moleküls zur Bildung der Peptidbindung kann durch ein aktiviertes Acylderivat, wie ein gemischtes Anhydrid, ein Azid oder einen aktivierten Ester, oder durch direkte Kondensation zwischen einer freien Aminogruppe und einer freien Carboxylgruppe, in Anwesenheit eines Kondensationsmittels, wie Dicyclohexylcarbodiimie, allein oder zusammen mit einem Razemisierung verhindernden Mittel, wie N-Hydroxysuccinimid oder 1-Hydroxybenzotriazol, durchgeführt werden.
Die Kondensation kann in einem Lösungsmittel, wie Dimethylformamid, Pyridin, Acetonitril, Tetrahydrofuran oder N-Methyl-2-pyrrolidon, durchgeführt werden. Die Reaktionstemperatur kann von -30°C bis Umgebungstemperatur betragen. Die Reaktionszeit beträgt im allgemeinen 1 bis 120 h. Das Syntheseschema, die Schutzgruppen und die Kondensationsmittel werden so gewählt, daß die Gefahr von Razemisierung vermieden wird.
Reaktionen zum Entfernen von Schutzgruppen werden gemäß in der Polypeptidchemie an sich bekannten Verfahren durchgeführt. Peptidester werden beispielsweise ausgehend von der durch den geeigneten Alkohol veresterten C-endständigen Aminosäure hergestellt. Peptide können beispielsweise durch Hydrolyse von Peptidestern hergestellt werden. Peptideamide können durch Ammonolyse der entsprechenden Ester oder ausgehend von einer C-endständigen Aminosäure, amidiert durch ein geeignetes Amin, hergestellt werden.
Biologische Wirksamkeit
Die Verbindungen der Erfindung besitzen interessante wachstumsfördernde Aktivität bei Tieren, wie durch ein in vivo- in vitro-Testsystem an der Proteinsynthese von Lebergewebe gezeigt, beschrieben von K. Kämmerer und A. Dey-Hazra in Veterinär-Medizinische Nachrichten, 99-112 (1980), beschrieben. Sie zeigen auch interessante endikrinologische Wirksamkeit, wie Prolaktin und luteinisierende Hormonfreisetzung.
Untersuchung der wachstumsfördernden Wirksamkeit
Die Peptide der vorliegenden Erfindung, beispielsweise H-Phe-Pro-Pro-Trp-Met-NH₂, wurden an Ratten in einer täglichen Dosis von 1 bis 100 mg/kg, subkutan während eines Zeitraumes von 1 bis 4 Wochen verabreicht, getestet. Sie zeigten eine Steigerung von Leberproteinsynthese, bestimmt gemäß der Methode von Kämmerer und Dey-Hazra, und eine Zunahme der Körpermasse am Ende des 4 Wochen dauernden Versuches. Zusätzlich war das Futterumwandlungsverhältnis verbessert.
Versuchsbericht
Die Versuche wurden gemäß der Methode von Kämmerer und Dey-Hazra (Veterinär-Medizinische Nachrichten, 99-112 [1980]) durchgeführt. Dauer der Versuche: 4 Wochen. Die Verbindungen wurden täglich subkutan injiziert.
Die Ergebnise in der Tabelle zeigen, daß die erfindungsgemäßen Peptide eine positive Wirkung bei der Proteinlebersynthese bei Ratten zeigen.
Für veterinärmedizinische Zwecke kann die Verabreichtung der Verbindungen der Erfindung an nahrungsmittelproduzierende Tiere in einem Dosisbereich von 1 bis 100 ng/kg gemäß den üblichen Veterinärmethoden zur Behandlung mit anabolischen oder wachstumsfördernden Mitteln bewirkt werden, nämlich durch subkutane Implantation oder in einer geeigneten stabilisierten durch das Futter gemischten Form.
Demgemäß sieht die Erfindung weiterhin eine veterinärmedizinische Zusammensetzung vor, die eine Verbindung der Erfindung oder ein veterinärmedizinisch annehmbares Salz hiervon in Mischung mit einem veterinärmedizinisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger enthält. Zusätzlich können derartige Zubereitungen eine gerichtete oder verzögerte Freisetzung des aktiven Bestandteiles bewirken.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung. Die Rf-Werte wurden an vorbeschichteten Silikagelplatten 60 F₂₅₄ (Merck®), Schichtdicke 0,22 mm, Länge 20 cm, unter Verwendung der folgenden Entwicklungssysteme bestimmt:
System A: Benzol/Äthylacetat/Essigsäure/Wasser: 100/100/20/10 bezogen auf das Vol. (obere Phase),
System B: Benzol/Äthylacetat/Essigsäure/Wasser: 100/100/40/15 bezogen auf das Vol. (obere Phase),
System C: n-Butanol/Essigsäure/Wasser: 4/1/1 bezogen auf das Vol.,
System D: Chloroform/Methanol/32% Ammoniumhydroxid: 55/45/20 bezogen auf das Vol.
TLC-Analysen wurden nicht unter Standardbedingungen durchgeführt. Die Rf-Werte können sich daher ändern, insbesondere bei unterschiedlichen Temperaturen. Schmelzpunkte wurden in offenen Kapillargefäßen mit einer Tottoli-Apparatur bestimmt und sind nicht korrigiert.
Die meisten der Derivate werden weich und zersetzen sich vor dem Schmelzen. Lösungsmittel für Kristallisation, Fällung oder Mahlen sind in Klammern angegeben. Hochspannungs-Papierelektrophorese wird mit einer Pherograph-Original-Frankfurt Type 64-Apparatur auf Schleicher- und Schüll-Papier Nr. 2317 bei pH 1,2 (Ameisensäure/Essigsäure/Wasser: 123/100/777) bei 1600 V (40 V/cm) und bei pH 5,8 (Pyridin/Essigsäure/Wasser: 450/50/4500) bei 1400 V (32,5 V/cm) durchgeführt. Die Produkte wurden durch ihre Mobilitäten bei pH 1,2 in bezug auf Glu (E1,2) und bei pH 6,8 in bezug auf His oder Glu (E5,8) entsprechend der Migrationsrichtung charakterisiert.
Beispiel 1 Herstellung von Pyr-Pro-Trp-Met-NH₂ (IV) Stufe 1: Boc-Trp-Met-NH₂ (I)
Zu einer Lösung von 3,043 g (10 mMol) Boc-Trp-OH in 30 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wurden nacheinander 1,12 ml (10 mMol) N-Methylmorpholin und 0,99 ml (10 mMol) Äthylchlorformiat bei einer Temperatur von -12°C zugesetzt. Nach Rühren während 2 min wurde eine kalte Lösung von 1,482 g (10 mMol) H-Met-NH₂ (F. Chillemi, Gazz. Chim. Ital., 1963, 93, 1079) in 30 ml Dimethylformamid zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 1 h bei -12°C und 2 h bei 0 bis 15°C gerührt, von Salzen abfiltriert und im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Äthylacetat gelöst und mehrere Male aufeinanderfolgend mit Natriumchlorid gesättigten Lösungen von 1M Citronensäure, 1M Natriumbicarbonat und Wasser gewaschen. Die organische Schicht wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt.
4,041 g (93% Ausbeute) Verbindung (I) wurden aus Äthylacetat erhalten, Fp. 143°C, [α] = -12,3° (c=1 in MeOH); RfA 0,61; RfB 0,84.
Stufe 2: HCl.H-Trp.Met.NH₂ (II)
3,911 g (9 mMol) Boc-Trp-Met-NH₂ (I) wurden bei Raumtemperatur in 40 ml Ameisensäure gelöst. Nach vollständiger Entfernung von Boc (TLC-Überwachung) wurde das Lösungsmittel im Vakuum bei 30°C abgedampft. Der Rückstand wurde in Methanol, gekühlt auf 0°C, gelöst und 3,6 ml (10,8 mMol) 3M Lösung von Chlorwasserstoff in wasserfreiem Tetrahydrofuran wurden zugesetzt. Die Lösungsmittel wurden im Vakuum entfernt und 3 g (90% Ausbeute) Verbindung (II) wurden aus MeOH/AcOÄt erhalten, Fp. 114°C (Zers.); [α] = +20,4° (c=1 in MeOH); RfC 0,62; E1,2 0,82.
Stufe 3: Pyr-Pro-OH (III)
3,604 g (10 mMol) Z-Pyr-Pro-OH (R. de Castiglione et al., Gazz. Chim. Ital. 1964, 94, 875), gelöst in 30 ml einer Mischung von Methanol und Dimethylformamid (1/1), wurden bei Raumtemperatur und Atmosphärendruck in Anwesenheit von 1,2 g 10%-Masse Palladium auf Kohle hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert und die Lösung im Vakuum eingeengt. Es wurden 2,149 g (95% Ausbeute) Verbindung (III) aus Diäthyläther erhalten, Fp. 168°C; [α] = -105,1° (c=1 in MeOH); RfC 0,21, RfD 0,62; E5,8 0,98.
Stufe 4: Pyr-Pro-Trp-Met-NH₂ (IV)
Zu einer Lösung von 1,584 g (7 mMol) Pyr-Pro-OH (III), gelöst in 20 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran, wurden aufeinanderfolgend 0,79 ml (7 mMol) N-Methylmorpholin und 0,69 ml (7 mMol) Äthylchlorformiat bei -12°C zugegeben. Nach Rühren während 2 min wurde eine kalte Lösung von 2,596 g (7 mMol) HCl.H-Trp-Met-NH₂ (II) und 0,79 ml (7 mMol) N-Methylmorpholin in 20 ml Dimethylformamid zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 1 h bei -12°C und 2 h bei 0 bis 15°C gerührt, dann von Salzen abfiltriert und im Vakuum eingedampft. Das Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie auf Silikagel (Merck®) 0,040-0,063 mm, wobei mit Chloroform/Methanol/Wasser 87/31/1, bezogen auf das Vol., eluiert wurde, gereinigt. Es wurden 2,545 g (67% Ausbeute) Verbindung (IV) aus Diisopropyläther erhalten, Fp. 207-209°C; [α] = -95,3° (c=1 in MeOH); RfC 0,43; Aminosäureverhältnis: Glu 1,00; Pro 0,98; Met 1,00.
Beispiel 2 Herstellung von HCl.H-Phe-Pro-Pro-Trp-Met-NH₂ (IX) Stufe 1: Boc-Phe-Pro-OH (V)
151 g (10 mMol) Prolin wurden in 10 ml Wasser suspendiert und 10 ml 1n NaOH wurden zugegeben. Die erhaltene Lösung wurde mit Dimethylformamid verdünnt und die Lösungsmittel wurden im Vakuum abgedampft; Dimethylformamid wurde zugesetzt und wieder im Vakuum eingedampft. Eine Lösung von 4,447 g (10 mMol) Boc-Phe-OTcp (E. Sandrin und R. A. Boissonnas, Helv. Chim. Acta, 1963, 46, 1637) in 50 ml Dimethylformamid wurde zugesetzt und die Reaktionsmischung bei Raumtemperatur über Nacht gerührt. Nach Entfernen des Lösungsmittels durch Abdampfen im Vakuum wurde das Rohprodukt auf übliche Weise in die entsprechende freie Säure überführt und durch Säulenchromatographie auf Silikagel (Merck®) 0,040-0,063 mm, wobei mit Chloroform/Methanol 9 : 1, bezogen auf das Vol., eluiert wurde, gereinigt. Es wurden 3,252 g Verbindung (V) (90% Ausbeute) als Schaum durch Eindampfen aus Petroläther erhalten, RfA 0,67.
Stufe 2: Boc-Pro-Trp-Met-NH₂ (VI)
Ausgehend von 1,722 g (8 mMol) Boc-Pro-OH und 2,967 g (8 mMol) HCl.H-Trp-Met-NH₂ (II) unter Anwendung der in Stufe 1 von Beispiel 1 beschriebenen Arbeitsweise wurden 3,838 g (90% Ausbeute) Verbindung (VI) aus Isopropylalkohol erhalten; [α] = -70,2° (c=1 in MeOH); RfA 0,38; RfB 0,73.
Stufe 3: HCl.H-Pro-Trp-Met-NH₂ (VII)
Ausgehend von 3,722 g (7 mMol) Boc-Pro-Trp-Met-NH₂ (VI) unter Anwendung der in Stufe 2 von Beispiel 1 beschriebenen Arbeitsweise wurden 2,621 g (80% Ausbeute) Verbindung (VII) aus abs. Äthylalkohol erhalten; [α] = -23,0° (c=1 in MeOH); RfC 0,41; E1,2 0,76.
Stufe 4: Boc-Phe-Pro-Pro-Trp-Met-NH₂ (VIII)
Eine Lösung von 2,340 g (5 mMol) HCl.H-Pro-Trp-Met-NH₂ (VII) in 20 ml Dimethylformamid wurde auf 0°C gekühlt und 0,56 ml N-Methylmorpholin, gefolgt von 1,812 g Boc-Phe-Pro-OH (V), 0,676 g (5 mMol) 1-Hydroxybenzotriazol und 1,135 g (5,5 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid, wurden zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 3 h bei Raumtemperatur gerührt, dann filtriert und im Vakuum eingedampft. Das Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie auf Silikagel (Merck®) 0,040-0,063 mm, wobei mit Äthylacetat/Methanol/Wasser 70/30/2, bezogen auf das Vol., eluiert wurde, gereinigt. Es wurden 1,940 g (50% Ausbeute) Verbindung (VIII) aus Äthylacetat/Diäthyläther erhalten, RfA 0,15; RfB 0,60.
Stufe 5: HCl.H-Phe-Pro-Pro-Trp-Met-NH₂ (IX)
Ausgehend von 1,552 g (2 mMol) Boc-Phe-Pro-Pro-Trp-Met-NH₂ (VIII) unter Anwendung der in Stufe 2 von Beispiel 1 beschriebenen Arbeitsweise wurden 1,282 g Rohprodukt erhalten. Das Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie auf Silikagel (Merck®) 0,040-0,063 mm, wobei mit Chloroform/Methanol 82/18, bezogen auf das Vol., eluiert wurde, gereinigt. 0,705 g Verbindung (IX) (50% Gesamtausbeute) wurden aus Methanol/Diäthyläther erhalten, Fp. 205-215°C (Zers.); [α] = -79,8° (c=1 in MeOH); RfC 0,39; E1,2 0,61. Aminosäureverhältnis: Pro 1,99; Met 1,00; Phe 1,00.
Beispiel 3 Herstellung von Pyr-Pro-Trp-Val-OMe (XII) Stufe 1: Boc-Trp-Val-OMe (X)
Zu einer Lösung von 12,17 g (40 mMol) Boc-Trp-OH in 100 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wurden aufeinanderfolgend 4,5 ml (40 mMol) N-Methylmorpholin und 3,96 ml (40 mMol) Äthylchlorformiat bei einer Temperatur von -12°C zugesetzt. Nach Rühren während 2 min wurde eine kalte Lösung von 6,70 g (40 mMol) HCl.H-Val-OMe (E. L. Smith et al., J. Biol. Chem. 199, 801, 1952) und 4,5 ml (40 mMol) N-Methylmorpholin in 50 ml Dimethylformamid zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 1 h bei -12°C und 2 h bei 0 bis 15°C gerührt, von Salzen abfiltriert und im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wurde in Äthylacetat gelöst und mehrere Male aufeinanderfolgend mit mit Natriumchlorid gesättigten Lösungen von 1M Citronensäure, 1M Natriumbicarbonat und Wasser gewaschen. Die organische Schicht wurde über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Es wurden 14,1 g (84,4% Ausbeute) Verbindung (X) aus Isopropylalkohol/Diisopropyläther erhalten. RfA 0,81; RfB 0,87.
Stufe 2: HCl.H-Trp-Val-OMe (XI)
12,52 g (30 mMol) Boc-Trp-Val-OMe (X) wurden in 15 ml Ameisensäure bei Raumtemperatur gelöst. Nach vollständiger Entfernung von Boc (TLC-Überwachung) wurde das Lösungsmittel im Vakuum bei 30°C abgedampft. Der Rückstand wurde in auf 0°C gekühltem Methanol gelöst und 11 ml (33 mMol) 3M Lösung von Chlorwasserstoff in wasserfreiem Tetrahydrofuran wurden zugegeben. Lösungsmittel wurden im Vakuum entfernt und es wurden 9,55 g (90% Ausbeute) Verbindung (II) aus Isopropylalkohol/ Diisopropyläther erhalten. RfC 0,69, E1,2 0,89 Glu.
Stufe 3: Pyr-Pro-Trp-Val-OMe (XII)
Zu einer Lösung von 5,66 g (25 mMol) Pyr-Pro-OH (III) in 60 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wurden aufeinanderfolgend 2,81 ml (25 mMol) N-Methylmorpholin und 2,48 ml (25 mMol) Äthylchlorformiat bei einer Temperatur von -12°C zugesetzt. Nach Rühren während 2 min wurde eine kalte Lösung von 8,85 g (25 mMol) HCl.H-Trp-Val-OMe (XI) und 2,81 ml (25 mMol) N- Methylmorpholin in 60 ml Dimethylformamid zugesetzt. Die Reaktionsmischung wurde 1 h bei -12°C und 2 h bei 0 bis 15°C gerührt, dann von Salzen abfiltriert und im Vakuum eingedampft. Das Rohprodukt wurde durch Säulenchromatographie auf Silikagel (Merck®) 0,040-0,063 mm, wobei mit Methylendichlorid/Methanol/ Wasser 92/8/1, bezogen auf das Vol., eluiert wurde, gereinigt. Es wurden 8,37 g (63,7% Ausbeute) Verbindung (XII) aus Isopropylalkohol/ Diisopropyläther erhalten, Fp. 120°C, [α] = -76,3° (c=1 in MeOH); RfB 0,21; RfC 0,56; Aminosäureverhältnis: Glu 1,00; Pro 0,98; Val 1,00.
Beispiel 4 Herstellung von Pyr-Pro-Trp-Val-OH (XIII)
2,63 g (5 mMol) Pyr-Pro-Trp-Val-OMe (XII), hergestellt gemäß Beispiel 3, Stufe 3, wurden in 15 ml Methanol gelöst und mit 7,5 ml 1n Natriumhydroxid bei Raumtemperatur verseift. Die Reaktion war innerhalb von 4 h beendet. Die Lösung wurde mit 40 ml Wasser verdünnt und im Vakuum auf das halbe Volumen eingeengt, wieder mit 40 ml Wasser verdünnt, auf 0°C gekühlt, mit 5n Salzsäure auf pH 2 angesäuert und schließlich mit Äthylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit mit Natriumchlorid gesättigten Lösungen bis zur Neutralität gewaschen, über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und das Lösungsmittel im Vakuum entfernt. Es wurden 2,1 g (82% Ausbeute) Verbindung (XIII) aus Isopropylalkohol/Diisopropyläther erhalten, [α] = -47,6° (c=1 in MeOH); RfB 0,11; RfC 0,48; E5,8 0,43 Glu. Aminosäureverhältnis: Glu 1,00; Pro 0,99; Val. 1,00.
Beim Arbeiten wie in den vorhergehenden Beispielen wurden die folgenden weiteren Peptide synthetisiert:
XV) H-Phe-Pro-Pro-Trp-Leu-NH₂.HCl; RfC 0,43; E1,2 0,61;
XVI) Pyr-Ala-Trp-Met-OH; RfC 0,57;
XVII) Pyr-Pro-Trp-Met-OH; RfC 0,42;
XVIII) H-Tyr-Pro-Trp-Leu-NH₂.HCl; Fp. 160-170°C (Zers.) Methanol/Diäthyläther); E1,2 0,63;
XIX) H-Phe-Pro-Trp-Ile-NH₂.HCl; Fp. 125-130°C (Zers.) (Diäthyläther); E1,2 0,60.

Claims (2)

1. Peptide der Formel
Pyr-Pro-Trp-Met-NH₂;
Pyr-Pro-Trp-Val-OMe;
H-Phe-Pro-Pro-Trp-Leu-NH₂;
Pyr-Pro-Trp-Met-OH;
H-Phe-Pro-Trp-Ile-NH₂;
H-Phe-Pro-Pro-Trp-Met-NH₂;
Pyr-Pro-Trp-Val-OH;
Pyr-Ala-Trp-Met-PH;
H-Tyr-Pro-Trp-Leu-NH₂
oder ein veterinärmedizinisch annehmbares Salz davon.
2. Veterinärmedizinische Zusammensetzungen, enthaltend eine Verbindung nach Anspruch 1, gemeinsam mit einem veterinärmedizinisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger.
DE19833340208 1982-11-10 1983-11-07 Neue biologisch aktive peptide, verfahren zu deren herstellung und veterinaerpraeparate, welche diese enthalten Granted DE3340208A1 (de)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
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