DE3228402C2

DE3228402C2 -

Info

Publication number: DE3228402C2
Application number: DE3228402A
Authority: DE
Inventors: James Stuart Manlius N.Y. Us Fleming Jun.; Joseph Paul Syracuse N.Y. Us Buyniski
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: ROBERTS PHARMACEUTICAL CORP., EATONTOWN, N.J., US
Priority date: 1981-07-30
Filing date: 1982-07-29
Publication date: 1992-01-23
Also published as: US4357330A; AU8652782A; FR2510406B1; GB2103090B; JPS5826817A; GB2103090A; LU84306A1; JPH0237328B2; DE3228402A1; AU559161B2; CA1181010A; IE821828L; BE893974A; MY8800110A; IE54277B1; ZA825397B; FR2510406A1

Description

Die Erfindung betrifft orale/pharmazeutische Mittel zur Inhibierung der Blutplättchenaggregation.

Es ist bekannt, daß viele nicht-steroide, antiinflammatorische Mittel, wie Acetylsalicylsäure (Aspirin), Zomepirac, Ibuprofen, Naproxen, Sulfinpyrazon, Phenylbutazon und Indomethacin die Blutplättchenaggregation hemmen. Man nimmt an, daß der Wirkungsmechanismus dieser Mittel in der Inhibierung des Enzyms Blutplättchencyclooxygenase besteht, was schließlich zur Inhibierung der Kollagen-induzierten Plättchenaggregation führt. Aspirin und Sulfinpyrazon wurden hinsichtlich der Vermeidung von Schlaganfällen und Herzattacken klinisch untersucht, wobei Aspirin zur Verhütung von vorübergehenden, cerebralen ischämischen Anfällen und Schlaganfällen zugelassen wurde.

Über Anagrelid, das die chemische Bezeichnung 6,7-Dichlor- 1,5-dihydroimidazo[2,1-b]chinazolin-2(3H)-on trägt und die Strukturformel

aufweist, wurde kürzlich berichtet, daß es eine stark inhibierende Wirkung auf die durch zahlreiche aggregierend wirkende Mittel induzierte Blutplättchenaggregation aufweist. Diese Wirkung wurde in vitro an mit Blutplättchen angereichertem Plasma, ex vivo nach oraler Verabreichung bei Tieren und in vivo nach oraler Verabreichung an mehreren Tiermodellen beobachtet. Es wurde außerdem gezeigt, daß Anagrelid nach oraler Verabreichung bei Menschen die Aggregation inhibiert (Circulation 62: III-277, 1980). Anagrelid scheint sich in ungewöhnlicher Weise von den nicht-steroiden antiinflammatorischen Mitteln zu unterscheiden, da es eine "Breitband"-Wirkung entfaltet, d. h. es blockiert nicht nur die kollageninduzierte Freisetzung und kollageninduzierte Aggregation und die zweite Phase der ADP (Adenosindiphosphat)-induzierten Aggregation, sondern auch die erste Phase der ADP-induzierten Aggregation und die durch Thrombin, Arachidonsäure und dem Antigen-Antikörperkomplex induzierte Aggregation (Thrombosis Research 15, 373-388, 1979). Neuere Untersuchungen zeigen, daß die Wirkung des Anagrelids teilweise auf der selektiven Inhibierung der Blutplättchen-niedrig K_m-cyclisch-AMP-(Adenosinmonophosphat)- Phosphordiesterase beruht (J. Lab. Clin. Med. 95 (2), 241-257, 1980).

Es ist bekannt, daß gewisse Blutplättchenantiaggregationsmittel in Kombination eine supra-additive Wechselwirkung aufweisen. Typische Vertreter derartiger supraadditiver Kombinationen sind beschrieben in:

1. Platelets and Thrombosis, A. Scriabin und S. Sherry (Herausgeber), Baltimore, University Park Press, 1974, 247-262 auf Seite 256, worin eine Kombination von Acetylsalicylsäure und Prostaglandin E₁ beschrieben ist, die supraadditive Wechselwirkung sowohl gegen kollageninduzierte als auch ADP-induzierte Plättchenaggregation aufweist.
2. Fed. Proc. 38 (3), 419 (1979), worin in bezug auf die ADP- oder collageninduzierten Aggregation Kombinationen von Anagrelid und Prostaglandin I₂ und Kombinationen von Anagrelid und Prostaglandin I₂-S (dem 6,9-Thiaanalog des Prostaglandin I₂) supraadditive Wechselwirkung zeigen.
3. Br. J. Exp. Path. 58, 474-477 (1977), worin in bezug auf die ADP-induzierte Aggregation ein in vivo supraadditiver Effekt zwischen Acetylsalicylsäure und dem antithrombotischen Mittel SH 1117 beschrieben ist.
4. J. Lab. Clin. Med. 95 (2), 241-257 (1980), worin beschrieben ist, daß Anagrelid die inhibierende Wirkung des Prostaglandin E₁ auf die Blutplättchenfunktion und das Prostaglandin E₁-induzierte Ansteigen des Grundspiegels von cyclischen 3′,5′-Adenosinmonophosphat (c AMP) potenziert.
5. US-PS 40 80 447, worin die supraadditive Wechselwirkung von Acetylsalicylsäure und Ticlopidin in bezug auf die Blutplättchenantiaggregationswirkung beschrieben ist.
6. US-PS 42 06 214, worin eine Kombination von Diypridamol und Sulfinpyrazon beschrieben ist, die einen supraadditiven antithrombotischen Effekt aufweist.
7. FR-PS 23 90 959 (Farmdoc 14 511 B/08), worin unter anderem die supra-additive Antiaggregationswirkung von Acetylsalicylsäure und Dipyridamol beschrieben ist.
8. Acta Univ. Carol. Med. Monogr. 72, 199-210, worin eine in vitro supra-additive Wechselwirkung mit bestimmten Kombinationen von fünf Arzneimitteln, d. h. Metergolin, Dipyridamol, Acetylsalicylsäure, Nimergolin und 5-Adensylmethionin, beschrieben ist.

Erfindungsgemäß wurde nun gefunden, daß eine Kombination von Anagrelid mit denjenigen nicht-steroiden antiinflammatorischen Mitteln, die die Blutplättchencyclooxygenase inhibieren, eine supraadditive Blutplättchenantiaggregationswirkung aufweist. Aufgrund des supraadditiven Effekts dieser Kombinationen, der sowohl anhand von in vitro- als auch in vivo-Tests gezeigt wurde, sind die erfindungsgemäßen Mittel zur therapeutischen und prophylaktischen Behandlung von Thrombose und anderen in Zusammenhang mit der Blutplättchenaggregation stehenden Schädigungen geeignet.

Fig. 1 stellt eine isobolographischen Analyse dar, die die supra-additiven Antiaggregationswirkungen verschiedener Mischungen von Anagrelid und Acetylsalicylsäure beschreibt.

Fig. 2 stellt eine isobolographische Analyse dar, die die supra-additiven Antiaggregationswirkungen verschiedener Mischungen von Anagrelid und Ibuprofen zeigt.

Fig. 3 stellt eine isobolographische Analyse dar, die die supra-additive Antiaggregationswirkungen verschiedener Mischungen von Anagrelid und Naproxen zeigt.

Fig. 4 stellt eine isobolographische Analyse dar, die die supra-additiven Antiaggregationswirkungen verschiedener Mischungen von Anagrelid und Zomopirac zeigt.

Fig. 5 stellt eine isobolographische Analyse dar, die die supra-additiven Antiaggregationswirkungen verschiedener Mischungen von Anagrelid und Sulfinpyrazon zeigt.

Fig. 6 zeigt die supra-additive Wechselwirkung von Anagrelid und Acetylsalicylsäure bei einer mit einem Biolaser induzierten Thrombose in der Mikrozirkulation der Gehörkammer eines Kaninchens.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein orales pharmazeutisches Mittel zur Inhibierung der Blutplättchenaggregation, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es als Wirkstoffe Anagrelid in Kombination mit einem nicht-steroiden, antiinflammatorischen, die Blutplättchencyclooxygenase inhibierenden Mittel, das ausgewählt ist unter Acetylsalicylsäure, Zomepirac, Ibuprofen, Naproxen, Sulfinpyrazon, Phenylbutazon oder Indomethacin, enthält.

Aufgrund der unerwarteten supra-additiven Wechselwirkung weisen die erfindungsgemäßen Mittel äußerst starke Antiaggregationswirkung auf und sind zur prophylaktischen und therapeutischen Behandlung von Thrombose und anderer mit der Blutplättchenaggregation in Zusammenhang stehender Schädigungen geeignet. Dieser supra-additive Effekt erlaubt es andererseits, die zur Erzielung einer bestimmten Antiaggregationswirkung üblicherweise erforderliche Dosierung von Anagrelid beträchtlich zu reduzieren, so daß gleichzeitig Nebenwirkungen, die von hohen Dosen dieses Arzneimittels hervorgerufen werden, verringert werden.

Der supra-additive Effekt von Anagrelid und nicht steroiden antiinflammatorischen Cyclooxygenaseinhibitoren wurde in vitro anhand der Kollagen-induzierten Blutplättchenaggregation bei mit Blutplättchen angereichertem Kaninchenplasma mit Hilfe des von Mustard et al. modifizierten (J. Lab. Clin. Med. 64, 548, 1964) Verfahrens zur Bestimmung der optischen Dichte nach Born (J. Physiol. 162, 67 P, 1962). Darüber hinaus wurde die Kombination von Anagrelid und Acetylsalicylsäure in vivo mit Hilfe einer Versuchsanordnung bewertet, bei der eine intravaskulare Thrombose mit einem Biolaser in der Gehörkammer eines Kaninchens erzeugt wurde (Platchets and Thrombosis, herausgegeben von A. Scriabine und S. Sherry, Baltimore, University Park Press, 1974, Seite 247). Die in der Beschreibung und in den Ansprüchen verwendete Bezeichnung "Anagrelid" umfaßt erfindungsgemäß auch dessen nichttoxische pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze. Geeignete Salze des Anagrelids sind in der US-PS 39 32 407 beschrieben. Dazu zählen beispielsweise Hydrochlorid, Hydrobromid, Hydrojodid, Niedrigalkylsulfate, Niedrigalkyl- und Arylsulfonate, Phosphate, Sulfate, Maleate, Fumarate, Succinate, Tartrate und Citrate. Ein besonders bevorzugtes Säureadditonssalz ist das Anagrelidhydrochlorid.

Die in der Beschreibung und in den Ansprüchen verwendeten Bezeichnungen "Acetylsalicylsäure", "Zomepirac", "Ibuprofen", "Naproxen", "Sulfinpyrazon", "Phenylbutazon" und "Indomethacin" umfassen erfindungsgemäß auch deren pharmazeutisch verträgliche Salze. Jedes der oben erwähnten Mittel kann mit pharmazeutisch verträglichen Basen Salze bilden, die sofern nicht anders angegeben, von obigen Bezeichnung umfaßt werden. Sulfinpyrazon ist die Bezeichnung für 1,2-Diphenyl-4-(2-phenylsulfinylethyl) pyrazolidon-3,5-dion und ist zusammen mit seinen Salzen in der US-PS 27 00 671 beschrieben. Indomethacin ist die Bezeichnung für 1-(4-Chlorbenzoyl)-5-methoxy- 2-methyl-1H-indol-3-essigsäure, die in der US-PS 31 61 654 beschrieben ist. Naproxen ist die Bezeichnung für d-2-(6-Methoxy-2-naphthyl)propionsäure und ist zusammen mit dessen Salzen (einschließlich dem bevorzugten Natriumsalz) in der US-PS 39 04 682 beschrieben. Phenylbutazon ist die Bezeichnung für 4-Butyl-1,2- diphenyl-3,5-pyrazolidindion, das in der US-PS 25 62 830 beschrieben ist. Ibuprofen ist die Bezeichnung für 2-(4-Isobutylphenyl)-propionsäure, die in der US-PS 33 85 886 beschrieben ist. Zomepirac ist die Bezeichnung für 5-(p-Chlorbenzoyl)-1,4-dimethylpyrrol- 2-essigsäure, die zusammen mit ihren Salzen einschließlich dem bevorzugten Natriumsalz) in der US-PS 37 52 826 beschrieben ist.

Erfindungsgemäß werden Anagrelid und das nicht-steroide antiinflammatorische Mittel oral verabreicht. Zur Herstellung fester oraler Dosierungsformen, wie Tabletten, Kapseln oder Pulver, kann jedes der üblichen pharmazeutischen Granulationsmittel, Gleitmittel, Bindemittel, Disintegrationsmittel, Stärken, Zucker oder dergleichen verwendet werden. Zur Herstellung flüssiger Präparate, wie Lösungen, Elixiere, Syrupe, Suspensionen usw. kann man Wasser, Glykole, Öle, Alkohole und dgl. zusammen mit Farbstoffen, Konservierungsmitteln, Geschmackstoffen und dergleichen verwenden.

Das Gewichtsverhältnis von nicht-steroidem, antiinflammatorischem Mittel zu Anagrelid, deren Kombination die supra-additive Wechselwirkung ergibt, kann innerhalb weiter Grenzen variieren. Das genaue, auf eine bestimmte Kombination anzuwendende Verhältnis kann leicht unter Verwendung eines üblichen in vitro-Aggregationsverfahrens (Bestimmung der optischen Dichte), wie nachfolgend beschrieben, ermittelt werden. Für die bevorzugten Kombinationen sind die Gewichtsverhältnisse von antiflammatorischem Mittel zu einem Gewichtsteil Anagrelid nachfolgend angegeben:

(a) Ibuprofen 67-3524 Gewichtsteile,
vorzugsweise 150-2400 Gewichtsteile
(b) Naproxen
261-831 Gewichtsteile,
vorzugsweise 275 bis 750 Gewichtsteile
(c) Acetylsalicylsäure
30-2468 Gewichtsteile,
vorzugsweise 150-2400 Gewichtsteile
(d) Zomepirac
22-178 Gewichtsteile,
vorzugsweise 25-175 Gewichtsteile
(e) Sulfinpyrazon
262-3013 Gewichtsteile,
vorzugsweise 400-3000 Gewichtsteile.

Die bevorzugten Einzeldosen an bevorzugten nicht- steroiden antiinflammatorischen Mitteln und Anagrelid beim Menschen sind nachfolgend angegeben:

Anagrelid\|0,025-1,0 mg
	vorzugsweise 0,1-0,5 mg,
	am bevorzugtesten 0,25 mg
Acetylsalicylsäure	160-200 mg
Ibuprofen	150-600 mg
Sulfinpyrazon	100-400 mg
Naproxen	125-375 mg
Zomepirac	50-200 mg

Bevorzugte Dosen, d. h. die üblichen aufgrund der antiinflammatorischen Wirkung sich ergebenden Dosen anderer geeigneter antiinflammatorischer Komponenten können leicht aus der Literatur ermittelt werden. Die anzuwendende Dosierung von Anagrelid und der antiinflammatorisch wirkenden Komponente variiert selbstverständlich in Abhängigkeit von solchen Faktoren, wie dem zu behandelnden Lebewesen (d. h. Art des Tieres, Alter, Gewicht, allgemeiner Gesundheitszustand), der Schwere der Symptome, der zu behandelnden Erkrankung, (falls vorhanden) der Art der begleitenden Behandlung mit anderen Arzneimitteln, der Häufigkeit der Behandlung usw. Die Dosierungen können vorzugsweise bis zu zweimal pro Tag und am bevorzugtesten einmal pro Tag verabreicht werden.

Zur Herstellung einer supra-additiv wirkenden Kombination wählt man die Menge an nicht-steroidem antiinflammatorischem Mittel und Anagrelid derart, daß

1. das Gewichtsverhältnis der Kombination innerhalb des oben angegebenen synergistischen Bereiches liegt und
2. die Menge der Bestandteile innerhalb der für das zu behandelnde Lebewesen verträglichen, wirksamen Dosierungsbereiche liegen.

Beispielsweise beträgt die bevorzugte Dosis Anagrelid beim Menschen ungefähr 0,025 mg bis 1 mg, bevorzugter 0,1 bis 0,5 mg und am bevorzugtesten ungefähr 0,25 mg. Die Dosis an mit Anagrelid zu kombinierender Acetylsalicylsäure wählt man beispielsweise derart, daß

1. das Gewichtsverhältnis von Acetylsalicylsäure/Anagrelid ungefähr 30-2468 (vorzugsweise ungefähr 150-2400) beträgt und
2. die Dosierung von Acetylsalicylsäure innerhalb der beim Menschen verträglichen und wirksamen Grenzen liegt, d. h. 150-600 mg.

Eine geeignete Kombination besteht somit beispielsweise aus 0,25 mg Anagrelid und 150 mg Acetylsalicylsäure. Geeignete Dosen bevorzugter Kombinationen beim Mensch sind nachfolgend angegeben:

Ibuprofen
0,25 mg Anagrelid
	150 mg Ibuprofen
Naproxen	0,25 mg Anagrelid
	125 mg Naproxen
Zomepirac	0,5 mg Anagrelid
	50 mg Zomepirac
Sulfinpyrazon	0,25 mg Anagrelid
	200 mg Sulfinpyrazon

Aufgrund des supra-additiven Antiaggregationseffekts bei Anwendung von Anagrelid in Kombination mit dem nicht- steroiden antiinflammatorischen Mittel können die zur Anwendung kommenden Mengen an Anagrelid und/oder antiinflammatorischem Mittel so gewählt sein, daß sie bei ihrer alleinigen Verabreichung eine nur minimale inhibierende Wirkung auf die Blutplättchenaggregation aufweisen.

Obwohl Anagrelid und die antiinflammatorischen Komponenten erfindungsgemäß getrennt verabreicht werden können, ist es besonders vorteilhaft und einfach, Formulierungen mit Anagrelid und dem antiinflammatorischen Mittel in Form einer Dosiseinheit herzustellen, d. h. in räumlich getrennten Einheiten, die jeweils diejenige, zur Erzielung des gewünschten supra-additiven Effekts berechnete Menge an Anagrelid und antiinflammatorischem Mittel zusammen mit jedem gewünschten pharmazeutischen Träger enthalten. Derartige Dosiseinheiten können in Form von Kapseln, Pillen, Tabletten, Pulver, Packungen, Waffeln, Mengen, die einem Teelöffel voll oder Eßlöffel voll entsprechen, und dergleichen vorliegen.

Die erfindungsgemäßen Mittel können in gleicher Weise wie bekannte Blutplättchenantiaggregationsmittel angewandt werden. So können Anagrelid und das nicht- steroide antiinflammatorische Mittel Vollblut für in vitro-Anwendungen, wie Aufbewahrung von Vollblut in Blutbanken und Verwendung von Vollblut in Herz- Lungenmaschinen, zugesetzt werden. In vivo-Anwendungen umfassen die Verabreichung an Menschen und andere Tiere, wie Mäuse, Ratten, Hunde, Katzen, Pferde usw., um die Bildung von Blutgerinnseln zu verhindern, wie beispielsweise bei der Operationsnachbehandlung (zur Verhinderung postoperativer Thrombose), bei in geriatrischer Behandlung stehenden Patienten zur Verhinderung von vorübergehenden ischämischen Anfällen und bei der Langzeitprophylaxe nach Herzinfarkten und Schlaganfällen.

Nachfolgend werden Tests zur Beurteilung der Blutplättchenantiaggregationswirkung beschrieben.

A. In vitro-Untersuchung

Die bei dieser Untersuchung verwendeten Arzneimittel waren Anagrelidhydrochlorid, Zomepiracnatriumsalz, Naproxen, Acetylsalicylsäure, Ibuprofen und Sulfinpyrazon.

Die inhibierende Wirkung auf die Blutplättchenaggregation von Anagrelid/Zomepirac-, Anagrelid/Naproxen-, Anagrelid/Acetylsalicylsäure-, Anagrelid/Ibuprofen- und Anagrelid/Sulfinpyrazonkombinationen sowie die inhibierende Wirkung der einzelnen Arzneimittel wurde unter Verwendung der von Mustard et al. (J. Lab. Clin. Med. 64, 548-559, 1964) modifizierten herkömmlichen Methode nach Born (J. Physiol. 162, 67P-68P, 1962) zur Bestimmung der optischen Dichte anhand der kollageninduzierten Blutplättchenaggregation bei mit Blutplättchen angereichertem Kaninchenplasma durchgeführt.

Man stellte mit Blutplättchen angereichertes Plasma aus Kaninchenblut her, indem man das Blut in Spritzen, die 3,8% Natriumcitrat (1 ml Citrat/9 ml Blut) enthielten, aufzogen und nachfolgend 10 Minuten mit 920 upm (200×g) zentrifugierte. Zur Herstellung des mit Blutplättchen angereicherten Plasmas wurden nur mit Silicon behandelte Glasgeräte verwendet. Zur Induzierung der Aggregation bei 0,9 ml Proben von mit Blutplättchen angereichertem Plasma verwendete man Kollagen (0,05 ml einer Lösung von Rinderachillessehnen nach Tyrode, vgl. Evans et al. J. Exp. Med. 128, 877-894, 1968). Die zu untersuchenden Verbindungen oder Träger (0,005 ml) wurden den mit Blutplättchen angereicherte Plasmaproben drei Minuten vor Zugabe des Kollagens unter Verwendung einer Microliterspritze zugegeben. Die Inhibierung der Blutplättchenaggregation wurde bestimmt, indem man unter Verwendung eines Payton Aggregometers (Payton Assoc., Inc., Buffalo, N. Y.) den maximalen Unterschied in der optischen Dichte von mit den Arzneimitteln behandelten, mit Blutplättchen angereicherten Plasma-Proben mit den mit den Trägern behandelten, mit Blutplättchen angereicherten Plasmaproben verglich. Bei den in vitro-Untersuchungen wurde Dimethylsulfoxid als Träger verwendet. Der Blutplättchenantiaggregationseffekt wurde mit Hilfe der EC₅₀-Werte (diejenige Konzentration an Arzneimittel, die die höchste, induzierte Blutplättchenaggregation um 50% inhibiert) bestimmt. Die EC₅₀- Werte wurden mit Hilfe von computererstellten Regressionsgleichungen auf der Grundlage der Probitanalyse und dem Verfahren nach Finney (Probit Analysis, Seiten 50-80, 230, 268, University Press, Cambridge, England, 3. Ausgabe, 1971) berechnet. Blutplättchenantiaggregationswechselwirkung kann mit Hilfe der isobolographischen Methode nach Loewe (Arzneim. Forsch. 9, 429-456, 1956, modifiziert nach Gessner und Cabana (J. Pharmacol. Exp. Ther. 174, 247-259, 1969), erhalten werden.

Mehrere, jeweils konstante Mengen Anagrelid wurden mit jedem der antiinflammatorischen Mittel kombiniert und die Kombination dann zur Erstellung einer Dosis-Wirkungskurve hinsichtlich ihrer Wirkung auf die induzierte Blutplättchenaggregation untersucht. Die EC₅₀-Werte für jede Kombination wurden dann bestimmt und das Komponentenverhältnis für jeden EC₅₀-Wert wurde berechnet. Unter Anwendung der isobolographischen Analyse nach Loewe kann somit bestimmt werden, ob sich die beobachteten EC₅₀- Werte signifikant von den auf die Wirkung der einzelnen Arzneimittel zurückzuführenden, erwarteten Werten unterscheiden und ob diese Wechselwirkung eine supra-additive, infra-additive oder additive Wirkung bedeutet.

Die Fig. 1 bis 5 stellen isobolographische Analysen der in vitro-Wirkungen mehrerer Arzneimittelkombinationen auf die Kollagen-induzierte Blutplättchenaggregation dar. Der EC-₅₀-Wert für die alleinige Anwendung des nicht- steroiden anti-inflammatorischen Cyclooxygenase-Inhibitors ist an der Ordinate aufgetragen, während der EC₅₀- Wert für die alleinige Anwendung von Anagrelid an der Abszisse aufgetragen ist. Die Verbindung dieser Punkte ergibt dann die Isobollinie. Bei additiver Wechselwirkung zweier Verbindungen sollten theoretisch alle Werte für diejenigen Kombinationen, die eine 50%ige Wirkung ergeben, auf der Isobollinie liegen. Die beiden gestrichelten Linien zu beiden Seiten der Isobollinie bedeuten die 95% Vertrauensgrenzen. Bei supra-additiver Wechselwirkung zweier Verbindungen sollten die Punkte links der Isobollinie liegen. Wenn sich andererseits zwei Verbindungen antagonisieren, sollten die Punkte rechts der Isobollinie liegen. Für die Kombination Anagrelid und Acetylsalicylsäure ist ersichtlich, daß sich eine beträchtliche supra-additive Wechselwirkung ergibt, wobei die Werte der drei Kombinationen eindeutig links der Isobollinie liegen. Für die anderen untersuchten Arzneimittelkombinationen konnte in gleicher Weise supra- additive Wechselwirkung gezeigt werden, wobei jedoch das Ausmaß dieser Wechselwirkung nicht so beträchtlich war, wie die bei der Anagrelid/Acetylsalicylsäurekombination beobachtete.

Ein Vergleich der beobachteten und erwarteten EC₅₀-Werte ist in der nachfolgenden Tabelle I zusammengestellt.

Tabelle I

Vergleich der erwarteten und beobachteten Antiaggregation EC₅₀-Werte

B. In vivo-Untersuchung

Die Kombination Anagrelid (in Form des Hydrochlorids) und Acetylsalicylsäure wurde in vivo mit Hilfe einer Versuchsanordnung bewertet bei der eine intravaskulare Thrombose mit einem Biolaser in der Gehörkammer eines Kaninchens erzeugt wurde (J. Pharmacol. Exp. Ther. 194, 435, 1975)

Die Arzneimittelwirkungen auf die Bildung und die weiteren Veränderungen induzierter, intravasculärer Blutplättchenthromben wurde an nicht-anästesierten "half-lop"-Kaninchen mit Hilfe chronisch implantierter, transparenter Ohrkammern des von Sanders et al. in Brit. J. Exp. Path. 35, 331, 1954 beschriebenen Typs direkt mikroskopisch untersucht. Die Kammer wurde so modifiziert, daß sie keine entfernbare Nadel mehr aufwies. Die Kaninchen wurden in ruhige Rückenlage gebracht. Zur Fokussierung eines einzelnen Rubin-Laserpulses (TRG-Modell 512 Biolaser) Hadron INc., Westbury, N. Y.) in das Lumen eines Gefäßes mit einem Durchmesser von 10 bis 30 µm verwendete man ein Mikroskop (Leitz Ortholux, Ernst Leitz GmbH, Wetzlar, Deutschland). Die auf diese Weise erhaltene Mikroverbrennung verursachte die Bildung eines kleinen Thrombus, der aus Blutplättchen bestand, die sich um einen Kern einer oder zweier beschädigter roter Blutzellen angehäuft hatten. Die Flächen der Thromben wurden aus dem Produkt zweier senkrecht aufeinanderstehenden Messungen (Länge und Durchmesser) unter Verwendung eines Micrometer-Okulars bestimmt. Die aus 10 Versuchen ermittelte Thrombusfläche (µm²) wurde als Kontrollwert verwendet. Anschließend wurden die zu untersuchenden Verbindungen in den gewünschten Dosen oral verabreicht. Zwei Stunden später induzierte man erneut Thromben mit Hilfe des Laserstrahls.

Die so erhaltenen Ergebnisse wurden mit den Kontrollwerten in bezug auf die Thrombusfläche und mit Hilfe des "t"-Tests verglichen.

Es ist bekannt, daß Acetylsalicylsäure eine dosisabhängige Inhibierung der Biolaser-induzierten, intravasulären Thrombose ergibt (Thrombosis Research 15, 373, 1979). Die Acetylsalicylsäure ist jedoch bei obigem Testmodell über einen weiten Bereich oraler Dosen (30-150 mg/kg) unwirksam. Wenn man Anagrelid unterhalb der Schwellendosis (beispielsweise 0,5 mg/kg po) mit verschiedenen Mengen Acetylsalicylsäure kombiniert, beobachtet man signifikante Inhibierung experimentell herbeigeführter Thrombose. Die in Fig. 6 dargestellten Ergebnisse zeigen, daß bei Kombination von Acetylsalicylsäure und Anagrelid im Verhältnis von 300 : 1 signifikante Thromboseinhibierung bei zwei verschiedenen Kombinationen, d. h. Acetylsalicylsäure 100 mg/kg po+Anagrelid 0,33 mg/kg po und Acetylsalicylsäure 150 mg/kg po+Anagrelid 0,5 mg/kg po, zu beobachten ist.

Claims

1. Orales pharmazeutisches Mittel zur Inhibierung der Blutplättchenaggregation, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoffe Anagrelid in Kombination mit einem nicht-steroiden, antiinflammatorischen, die Blutplättchencyclooxagenase inhibierenden Mittel, das ausgewählt ist unter Acetylsalicylsäure, Zomepirac, Ibuprofen, Naproxen, Sulfinpyrazon, Phenylbutazon oder Indomethacin, enthält.

2. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es Anagrelid und Acetylsalicylsäure enthält, wobei das Gewichtsverhältnis von Acetylsalicylsäure zu Anagrelid 30 : 1 bis 2468 : 1 beträgt.

3. Mittel nach Anspruch 2 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es 0,025 bis 1 mg Anagrelid und 150 bis 600 mg Acetylsalicylsäure enthält.

4. Mittel nach Anspruch 3 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff eine Kombination aus 0,25 mg Anagrelid und 150 mg Acetylsalicylsäure enthält.

5. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es Anagrelid und Zomepirac enthält, wobei das Gewichtsverhältnis von Zomepirac zu Anagrelid 22 : 1 bis 178 : 1 beträgt.

6. Mittel nach Anspruch 5 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es 0,025 bis 1 mg Anagrelid und 50 bis 200 mg Zomepirac enthält.

7. Mittel nach Anspruch 6 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff eine Kombination aus 0,5 mg Anagrelid und 50 mg Zomepirac enthält.

8. Mittels nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es Anagrelid und Naproxen enthält, wobei das Gewichtsverhältnis von Naproxen zu Anagrelid 261 : 1 bis 831 : 1 beträgt.

9. Mittel nach Anspruch 8 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es 0,025 bis 1 mg Anagrelid und 125 bis 375 mg Naproxen enthält.

10. Mittel nach Anspruch 9 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff eine Kombination aus 0,25 mg Anagrelid und 125 mg Naproxen enthält.

11. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es Anagrelid und Ibuprofen enthält, wobei das Gewichtsverhältnis von Ibuprofen zu Anagrelid 67 : 1 bis 3524 : 1 beträgt.

12. Mittel nach Anspruch 11 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es 0,025 bis 1 mg Anagrelid und 150 bis 600 mg Ibuprofen enthält.

13. Mittel nach Anspruch 12 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff eine Kombination aus 0,25 mg Anagrelid und 150 mg Ibuprofen enthält.

14. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es Anagrelid und Sulfinpyrazon enthält, wobei das Gewichtsverhältnis von Sulfinpyrazon zu Anagrelid 262 : 1 bis 3013 : 1 beträgt.

15. Mittel nach Anspruch 14 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es 0,025 bis 1 mg Anagrelid und 100 bis 400 mg Sulfinpyrazon enthält.

16. Mittel nach Anspruch 15 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff eine Kombination aus 0,25 mg Anagrelid und 200 mg Sulfinpyrazon enthält.