DE3228402A1

DE3228402A1 - Orale pharmazeutische mittel mit einer die blutplaettchenaggregation inhibierenden wirkung

Info

Publication number: DE3228402A1
Application number: DE19823228402
Authority: DE
Inventors: Joseph Paul Syracuse N.Y. Buyniski; James Stuart Manlius N.Y. Fleming jun.
Original assignee: Bristol Myers Co
Current assignee: Roberts Pharmaceutical Corp Eatontown Nj Us
Priority date: 1981-07-30
Filing date: 1982-07-29
Publication date: 1983-02-24
Also published as: DE3228402C2; US4357330A; AU8652782A; FR2510406B1; GB2103090B; JPS5826817A; GB2103090A; LU84306A1; JPH0237328B2; AU559161B2; CA1181010A; IE821828L; BE893974A; MY8800110A; IE54277B1; ZA825397B; FR2510406A1

Description

PROF. DR. DR. J. REITSTÖTTER DR. WERNER KINZEBACH DR. JNG. WOLFRAM BUNTE

sr

REITSTÖTTER. KINZEBACH & PARTNER POSTFACH 7βΟ. D-BOOO MÜNCHEN 43 PATENTANWÄLTE ZUGELASSENE VERTRETER BEIM EUROPÄISCHEN PATENTAMT EUROPEAN PATENT ATTORNEYS

VNR 10 45 23

TELEFON: (ΟΒΘ) 2 71 08 63 TELEX: OS21B2OB ISAR D BAUERSTRASSE 22. D-ΘΟΟΟ MÜNCHEN ΛΟ

BETREFF: RE

BRISTOL-MYERS COMPANY

345 Park Avenue,

New York, 10022 U.S.A. München, 30. Juli 1982

UNSERE AKTE: ft/2$ OUR REF: '

Orale pharmazeutische Mittel mit einer die Blutplättchenaggregation inhibierenden Wirkung

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Die Erfindung betrifft pharmazeutische Mittel zur Inhibierung der Blutplättchenaggregation und Verfahren zur Herstellung dieser Mittel.

Es ist bekannt, daß viele nicht-steroide, antiinf1ammatorische Mittel, wie Acetyl salicylsäure (Aspirin), Zomepirac, Ibuprofen, Naproxen, SuIfinpyrazon, Phenylbutazon und Indomethacin die Blutplättchenaggregation hemmen. Man nimmt an, daß der Wirkungsmechanismus dieser Mittel in der Inhibierung des Enzyms Blutplättchencyclooxygenase besteht, was schließlich zur Inhibierung der KoIlagen-induzierten Plättchenaggregation führt. Aspirin und SuIfinpyrazon wurden hinsichtlich der Vermeidung von Schlaganfällen und Herzattacken klinisch untersucht, wobei Aspirin zur Verhütung von vorübergehenden, cerebralen ischämischen Anfällen und Schlaganfällen zugelassen wurde.

Von Anagrelid, das die chemische Bezeichnung 6,7-Dichlor-1,5-dihydroimidazo [2,1-b]chinazolin-2 (3H)-on trägt und die Strukturformel

aufweist, wurde kürzlieh berichtet, daß es eine stark inhibierende Wirkung auf die durch zahlreiche aggregier ■ rend wirkende Mittel induzierte Blutplättchenaggregation

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aufweist. Diese Wirkung wurde in vitro an mit Blutplättchen angereichertem Plasma, ex vivo nach oraler Verabreichung bei Tieren und in vivo nach oraler Verabrei chung an mehreren Tiermodellen beobachtet. Es wurde außerdem gezeigt, daß Anagrelid nach oraler Verabreichung bei Menschen die Aggregation inhibiert (Circulation 62; III-277, 1980). Anagrelid scheint sich in ungewöhnlicher

IO Weise von den nicht-steroiden antiinflammatorischen

Mitteln zu unterscheiden, da es eine "Breitband"-Wirkung entfaltet, d. h. es blockiert nicht nur die kollageninduzierte Freisetzung und kollageninduzierte Aggregation und die zweite Phase der ADP (Adenosindiphosphat)- in duzierten Aggregation, sondern auch die erste Phase der ADP-induzierten Aggregation und die durch Thrombin, Arachidonsäure und dem Antigen-Antikörperkomplex induzierte Aggregation (Thrombosis Research ^J>, 373-388, 1979). Neuere Untersuchungen zeigen, daß die Wirkung des Anagrelids teilweise auf der selektiven Inhibierung der Blutplättchen-niedrig K -cyclisch-AMP-(Adenosinmonophosphat)-Phosphordiesterase beruht (J. Lab. Cl in. Med. 9_5_. (2), 241-257, 1980).

Es ist bekannt, daß gewisse Blutplättchenantiaggrega-

tionsmittel in Kombination eine supra-additive Wechselwirkung aufweisen. Typische Vertreter derartiger supraadditiver Kombinationen sind beschrieben in:

30 1. Platelets and Thrombosis, A. Scriabin und

S. Sherry (Herausgeber), Baltimore, University Park Press, 1974, 247-262 auf Seite 256, worin eine Kombination von Acetyl sal icy!säure und Prostaglandin E. beschrieben ist, die supraadditi ve Wechselwirkung sowohl gegen kollageninduzierte als auch ADP-induzierte Plä'ttchenaggregation aufweist.

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2. Fed. Proc. 38^ (3), 419 (1979), worin in Bezug auf die ADP- oder collageninduzierte Aggregation Kombinationen von Anagrelid und Prostaglandin I„ und Kombinationen von Anagrelid und Prostaglandin I₂-S ( dem 6,9-Thiaanalog des Prostaglandin I₂) supraadditive Wechselwirkung zeigen.

3. Br. J.Exp. Path. 5^474-477 (1977), worin in Bezug auf die ADP-induzierte Aggregation ein in vivo supraadditiver Effekt zwischen Acetylsalicylsäure und dem antithrombotischen Mittel SH 1117 beschrieben ist.

4. J. Lab. CI in. Med. 9J5 (2), 241-257 (1980), worin beschrieben ist, daß Anagrelid die inhibierende Wirkung des Prostaglandin E, auf die Blutplättchenfunktion und das Prostaglandin E.-induzierte Ansteigen des Grundspiegels von cyclischen 3¹, 5¹-Adenosinmonophosphat (c AMP) potenziert.

5. ÜS-PS 4 080 447, worin die supraadditive Wechsel wirkung von Acetyl salicylsäure und Ticlopidin in Bezug auf die Blutplättchenantiaggregations-Wirkung beschrieben ist.

6. US-PS 4 206 214, worin eine Kombination von Dipyridamol und SuIfinpyrazon beschrieben ist, die einen supraadditiven antithrombotischen Effekt aufweist.

7. FR-PS 2 390 959 (Farmdoc 14 511 B/08), worin unter anderem die supra-additi ve Antiaggregationswirkung von Acetyl salicylsäure und Dipyridamol beschrieben ist.

M/23 127 -Jg-

8. Acta Univ. Carol. Med. Monogr. 72, 199-210, worin eine in vitro supra-additive Wechselwirkung mit bestimmten Kombinationen von fünf Arzneimitteln, d. h. Metergolin, Dipyridamol , Acetylsalizylsäure, Nimergolin und 5-Adenosylmethionin, beschrieben ist.

Erfindungsgemäß wurde nun gefunden, daß eine Kombination von Anagrelid mit denjenigen nicht-steroiden antiinflammatorischen Mitteln, die die Blutplättchencyclooxygenase inhibieren, eine supraadditive Blutplättchenantiaggregationswirkung aufweist. Aufgrund des supra- additiven Effekts dieser Kombinationen, der sowohl anhand von in vitro- als auch in vivo-Tests gezeigt wurde, sind die erfindungsgemäßen Mittel zur therapeutischen und prophylaktischen Behandlung von Thrombose und anderen in Zusammenhang mit der Blutplättchenaggregation

20 stehenden Schädigungen geeignet.

Figur 1 stellt eine isobolographisehe Analyse dar, die die supra-additiven Antiaggregationswirkungen verschiedener Mischungen von Anagrelid und Acetylsalicyl säure beschreibt.

Figur 2 stellt eine isobolographische Analyse dar, die die supra-additiven Antiaggregationswirkungen verschiedener Mischungen von Anagrelid und Ibuprofen zeigt.

Figur 3 stellt eine isobolographische Analyse dar, die die supra-additiven Antiaggregationswirkungen verschiedener Mischungen von Anagrelid und Naproxen zeigt.

Μ/23 127 -ß-

Figur 4 stellt eine isobolographisehe Analyse dar, die die supra-additiven Antiaggregationswirkungen verschiedener Mischungen von Anagrelid und Zomepirac zeigt.

Figur 5 stellt eine isobolographische Analyse dar, die die supra-additiven Antiaggregationswirkungen verschiedener Mischungen von Anagrelid und SuIfinpyrazon zeigt.

Figur 6 zeigt die supra-additi ve Wechselwirkung von Anagrelid und Acetyl salicylsäure bei einer mit einem Biolaser induzierten Thrombose in der

Mikrozirkulation der Gehörkammer eines Kaninchens.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein orales pharmazeutisches Mittel, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es als Wirkstoff Anagrelid und ein nichtsteroides anti inf 1 animatorisches;, die Blutplättchencyclooxygenase hemmendes Mittel enthält, wobei dieses Mittel eine erhöhte (supra-a'ddi ti ve) inhibierende Wirkung auf die Blutplättchenaggregation aufweist.

Es wurde nun überraschenderweise gefunden, daß die gemeinsame Verabreichung von Anagrelid und einem nicht-steroiden antiinflammatorischen, die Blutplättchencyclooxygenase inhibierenden Mittel bei einem Säugetier, am bevorzugtesten beim Menschen, zu einer starken supra-additiven inhibierenden Wirkung auf die Blutplättchenaggregation führt, wobei der Antiaggregationseffekt der Kombination größer ist als die Summe der mit

³^ jeder Komponente allein zu erzielenden Effekte.

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Aufgrund dieser unerwarteten supra-additiven Wechselwirkung weisen die erfindungsgemäßen Mittel äußerst starke Antiaggregationswirkung auf und sind zur prophylaktischen und therapeutischen Behandlung von Thrombose und anderer mit der Blutplättchenaggregation in Zusammenhang stehender Schädigungen geeignet. Dieser supra-additi ve Effekt erlaubt es andererseits, die zur Erzielung einer bestimmten Antiaggregationswirkung üblicherweise erforderliche Dosierung von Anagrelid beträchtlich zu reduzieren, so daß gleichzeitig Nebenwirkungen, die von hohen Dosen dieses Arzneimittels hervorgerufen werden, verringert werden.

Der supra-additive Effekt von Anagrelid und nicht steroiden antiinflammatorischen Cyclooxygenaseinhibitoren wurde in vitro anhand der Kollagen-induzierten Blutplättchenaggregation bei mit Blutplättchen angereichertem Kaninchenplasma mit Hilfe des von Mustard et al. modifizierten (J. Lab. Clin. Med. 64^ 548, 1964) Verfahrens zur Bestimmung der optischen Dichte nach Born (J. Physiol. 162, 67 P, 1962). Darüber hinaus wurde die Kombination von Anagrelid und Acetyl sal icy!- säure in vivo mit Hilfe einer Versuchsanordnung bewertet bei der eine intravaskulare Thrombose mit einem Biolaser in der Gehörkammer eines Kaninchens erzeugt wurde (Platchets and Thrombosis, herausgegeben von A. Scriabine und S. Sherry, Baltimore, University Park Press, 1974, Seite 247).

Die in der Beschreibung und in den Ansprüchen verwendete Bezeichnung "Anagrelid" umfaßt erfindungsgemäß auch dessen nichttoxische pharmazeutisch verträgliche Säureadditionssalze. Geeignete Salze des Anagrelids. sind in der US-PS 3 932 407 beschrieben. Dazu zählen beispielsweise Hydrochlorid, Hydrobromid, Hydrojodid, Niedrigalkylsulfate, Niedrigalkyl- und Arylsulfonate,

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Phosphate, Sulfate, Maleate, Fumarate, Succinate, Tartrate und Citrate. Ein besonders bevorzugtes Säure additionssalζ ist das Anagrelidhydrochlorid.

Die in der Beschreibung und in den Ansprüchen verwendeten Bezeichnungen "Acetyl salicylsäure", "Zomepirac", "Ibuprofen", "Naproxen", "SuIf i.npyrazon", Phenylbutazon" und "Indomethacin" beziehen sich auf bevorzugte nichtsteroide antiinf1ammatorische Cyclooxygenaseinhibi toren und umfassen erfindungsgemäß jedoch auch deren pharmazeutisch verträgliche Salze. Jedes der oben erwähnten Mittel kann mit pharmazeutisch verträglichen Basen Salze bilden, die sofern nicht anders angegeben, von obigen Bezeichnung umfaßt werden. SuIfinpyrazon ist die Bezeichnung für 1,2-Diphenyl-4-(2-phenylsulfinyV ethyl)pyrazolidon-3,5-dion und ist zusammen mit seinen Salzen in der US-PS 2 700 671 beschrieben. Indomethacin ist die Bezeichnung für 1-(4-ChIorbenzoyl)-5-methoxy-2-methyl-1H-indol-3-essigsaure, die in der US-PS 3 161 654 beschrieben ist. Naproxen ist die Bezeichnung für d-2-(6-Methoxy-2-naphthyl)propionsäure und ist zusammen mit dessen Salzen (einschließlich dem bevorzugten Natriumsalz) in der US-PS 3 904 682 beschrieben. Phenylbutazon ist die Bezeichnung für 4-But.yl-1 ,2-diphenyl-3,5-pyrazolidindion, das in der US-PS

2 562 830 beschrieben ist. Ibuprofen ist die Bezeichnung für 2-(4-Isobutylphenyl)-propionsäure, die in der US-PS 3 385 886 beschrieben ist. Zomepirac ist die Bezeichnung für 5-(p-Chlorbenzoyl )-1,4-dimethylpyrrol 2-essigsäure die zusammen mit ihren Salzen einschließ- · lieh dem bevorzugten Natriumsalz) in der US-PS

3 752 826 beschrieben ist. 35

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Erfindungsgemäß werden Anagrelid und das nicht-steroide antiinf1ammatorische Mittel vorzugsweise oral verabreicht. Zur Herstellung fester oraler Dosierungsformen, wie Tabletten, Kapseln oder Pulver, kann jedes der üblichen pharmazeutischen Granulationsmittel, Gleitmittel, Bindemittel, Disintegrationsmittel, Stärken, Zucker oder dergleichen verwendet werden. Zur Herstellu lung flüssiger Präparate, wie Lösungen, Elixiere,

Syrupe, Suspensionen usw. kann man Wasser, Glykole, Die, Alkohole und dgl. zusammen mit Farbstoffen, Konservierungsmitteln, Geschmackstoffen und dergleichen verwenden .
15

Das Gewichtsverhältnis von nicht-steroidem, antiinflammatorischem Mittel zu Anagrelid, deren Kombination die supra-additive Wechselwirkung ergibt, kann innerhalb weiter Grenzen variieren. Das genaue, auf eine bestimmte Kombination anzuwendende Verhältnis kann leicht unter Verwendung eines üblichen in vitro-Aggregationsverfahrens (Bestimmung der optischen Dichte), wie nachfolgend beschrieben, ermittelt werden. Für die bevorzugten Kombinationen sind die Gewichtsverhältnisse von antiinflammatorischem Mittel zu einem Gewichtsteil Anagrelid nachfolgend angegeben:

Ca) Ibuprofen

67-3524 Gewichtsteile,

³⁰ vorzugsweise 150-2400 Gewichtsteile

(b) Naproxen

261-831 Gewichtsteile,

vorzugsweise 275 bis 750 Gewichtsteile

(c) Acetyl sal icy!säure

³⁵ 30-2468 Gewichtsteile,

vorzugsweise 150-2400 Gewichtsteile

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-Xf-

10 15

(d) Zomepirac

22-178 Gewichtsteile,
vorzugsweise 25-175 Gewichtsteile

(^e) SuIfinpyrazon
262-3013 Gewichtsteile,
vorzugsweise 400-3000 Gewichtsteile.

Die bevorzugten Einzeldosen an bevorzugten nichtsteroiden antiinflammatorisehen Mitteln und Anagrelid" beim Menschen sind nachfolgend angegeben:

Ariagrelid

Acetyl sal icy! säure

Ibup r_of_e_n SuIfinpyrazon Naproxen Zomepirac

0,025-1 ,0 mg, vorzugsweise 0,1 - 0,5 mg, am bevorzugtesten 0,25 mg

150-600 mg 150-600 mg 100-400 mg 125-375 mg 50-200 mg

Bevorzugte Dosen, d. h. die üblichen aufgrund der antiinflammatorischen Wirkung sich ergebenden Dosen anderer geeigneter antiinf1ammatorischer Komponenten können leicht aus der Literatur ermittelt werden. Die anzuwendende Dosierung von Anagrelid und der antiinflammatorisch wirkenden Komponente variiert selbstverständlich in Abhängigkeit von solchen Faktoren, wie dem zu behandelnden Lebewesen (d.h. Art des Tieres, Alter, Gewicht, allgemeiner Gesundheitszustand), der Schwere der Symptome, der zu behandelnden Erkrankung, (falls vorhanden) der Art der begleitenden Behandlung mit anderen Arzneimitteln, der Häufigkeit der Behandlung usw. Die Dosierungen können vorzugsweise bis zu zweimal pro Tag und am bevorzugtesten einmal pro Tag verabreicht werden.

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Zur Herstellung einer supra-additiν wirkenden Kombi-5 nation wählt man die Menge an nicht-steroidem antiinfl animatorischem Mittel und Anagrelid derart, daß

1. das Gewichtsverhältnis der Kombination innerhalb des oben angegebenen synergistischen Bereiches

IO liegtund

2. die Menge der Bestandteile innerhalb der für das zu behandelnde Lebewesen verträglichen, wirksamen Dosierungsbereiche liegt.

15 Beispielweise beträgt die bevorzugte Dosis Anagrelid beim Menschen ungefähr 0,025 mg bis 1 mg, bevorzugter 0,1 bis 0,5 mg und am bevorzugtesten ungefähr 0,25 mg. Die Dosis an mit Anagrelid zu kombinierender Acetylsalicylsäure wählt man beispielsweise derart, daß

1. das Gewichtsverhält von Acetyl sal icy!säure/Anagrelid ungefähr 30-2468 (vorzugsweise ungefähr 150-2400) beträgt und

2. die Dosierung von Acetylsalicy!säure innerhalb 25 der beim Menschen verträglichen und wirksamen

Grenzen liegt, d. h. 150-600 mg.

Eine geeignete Kombination besteht somit beispielsweise aus 0,25 mg Anagrelid und 150 mg Acetyl salicylsäure. 30 Geeignete Dosen bevorzugter Kombinationen beim Mensch sind nachfolgend angegeben:

Ibuprofen : 0,25 mg Anagrelid

150 mg Ibuprofen

³⁵ Naproxen : 0,25 mg Anagrelid

125 mg Naproxen

/Ho

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Zoniepirac : 0,5 mg Anagrelid

50 mg Zomepirac ⁵ SuIfinpyrazon : 0,25 mg Anagrelid

200 mg SuIfinpyrazon

Aufgrund des supra-additiven Antiaggregationseffekts bei Anwendung von Anagrelid in Kombination mit dem nichtsteroiden antiinflammatorisehen Mittel können die zur Anwendung kommenden Mengen an Anagrelid und/oder antiinflammatorischem Mittel so gewählt sein, daß sie bei ihrer alleinigen Verabreichung eine nur minimale inhibierende Wirkung auf die Blutplättchenaggregation auf-

15 weisen.

Obwohl Anagrelid und die antiinf1ammatorischen Komponenten erfindungsgemäß getrennt verabreicht werden können, ist es besonders vorteilhaft und einfach, Formulierungen mit Anagrelid und dem antiinflammatorischen Mittel in Form einer Dosiseinheit herzustellen, d. h. in räumlich getrennten Einheiten, die jeweils diejenige, zur Erzielung des gewünschten supra-additiven Effekts berechnete Menge an Anagrelid und antiinflammatorischem Mittel zusammen mit jedem gewünschten pharmazeutischen Träger enthalten. Derartige Dosiseinheiten können in Form von Kapseln, Pil Ten,Tabletten , Pulver, Packungen, Waffeln, Mengen, die einem Teelöffel voll oder EB-

löffel voll entsprechen, und dergleichen vorliegen. 30

Die erfindungsgemäßen Mittel können in gleicher Weise wie bekannte Blutplättchenantiaggregationsmittel angewandt werden. So können Anagrelid und das nichtsteroide antiinflammatorische Mittel Vollblut für in vitro-Anwendungen, wie Aufbewahrung von Vollblut in Blutbanken und Verwendung von Vollblut in Herz-

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Lungenmaschinen, zugesetzt werden. In vivo-Anwendungen umfassen die Verabreichung an Menschen und andere Tiere, wie Mäuse, Ratten, Hunde, Katzen, Pferde usw., um die Bildung von Blutgerinnseln zu verhindern, wie beispielsweise bei der Operationsnachbehandlung (zur Verhinderung postoperativer Thrombose), bei in geriatrischer Behandlung stehenden Patienten zur Verhinderung von vorübergehenden ischämischen Anfällen und bei der Langzeitprophylaxe nach Herzinfarkten und Schlaganfällen,

Nachfolgend werden Tests zur Beurteilung der Blutplättchenantiaggregationswirkung beschrieben. 15

A · iπ νi trο-Untersuchuηg

Die bei dieser Untersuchung verwendeten Arzneimittel waren Anagrelidhydrochlorid , Zomepiracnatriumsalz, Naproxen, Acetylsalicylsäure, Ibuprofen und Sulfinpyrazon.

Die inhibierende Wirkung auf die Blutplättchenaggregation von Anagrelid/Zomepirac-, Anagrelid/Naproxen-, Anagrelid/Acetylsalicylsäure-, Anagrelid/Ibuprofen- und Anagrelid/Sulfinpyrazonkombinationen sowie die inhibierende Wirkung der einzelnen Arzneimittel wurde unter Verwendung der von Mustard et al. (J. Lab. Cl in. Med. 64_, 548-559, 1964) modifizierten herkömmlichen Methode nach Born (J. Physiol. jT6^_f 67P-68P, 1962) zur Bestimmung der optischen Dichte anhand der kollageninduzierten Blutplättchenaggregation bei mit Blutplättchen angereichertem Kaninchenplasma durchgeführt.

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Man stellte mit Blutplättchen angereichertes Plasma aus Kaninchenblut her, indem man das;Blut in Spritzen, die 3,8 % Natriumeitrat (1 ml Citrat/9 ml Blut) enthielten, aufzog und nachfolgend 10 Minuten mit 920 upm (200 χ g) zentrifugierte. Zur Herstellung des mit Blutplättchen angereicherten Plasmas wurden nur mit Silicon behandelte Glasgeräte verwendet. Zur Induzierung der Aggregation bei 0,9 ml Proben von mit Blutplättchen angereichertem Plasma verwendete man Kollagen (0,05 ml einer Lösung von Rinderachi ll.essehnen nach Tyrode, vgl. Evans et al. J. Exp. Med. J_2J3, 877-894, 1968). Die zu untersuchenden Verbindungen oder Träger (0,005 ml) wurden den mit Blutplättchen angereicherte Plasmaproben drei Minuten vor Zugabe des Kollagens unter Verwendung einer Microliterspritze zugegeben Die Inhibierung der Blutplättchenaggregation wurde bestimmt, indem man unter Verwendung eines Payton Aggregometers (Payton Assoc., Inc., Buffalo, N.Y.) den maximalen Unterschied in der optischen Dichte von mit den Arzneimitteln behandelten, mit Blutplättchen angereicherten Plasma-Proben mit den mit den Trägern behandelten, mit Blutplättchen angereicherten Plasmaproben verglich. Bei den in vitro-Untersuchungen wurde Dimethylsulfoxid als Träger verwendet. Der Blutplättchenantiaggregationseffekt wurde mit Hilfe der ECgQ-Werte (diejenige Konzentration an Arzneimittel, die die höchste, induzierte Blutplättchenaggregation um 50 % inhibiert) bestimmt. Die EC₅₀-Werte wurden mit Hilfe von computererstellten Regressionsgleichungen auf der Grundlage der Probitanalyse und dem Verfahren nach Finney (Probit Analysis, Seiten 50-80, 230,268, University Press, Cambridge, England, 3. Ausgabe, 1971) berechnet. Blutplättchenantiaggregationswechselwirkung kann mit Hilfe der

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isobolographischen Methode nach Loewe (Arzneim. Forsch. 9^ 429-456, 1956, modifiziert nach Gessner und Cabana (0. Pharmacol. Exp. Ther. \V±j_ 247-259, 1969), erhalten werden.

Mehrere, jeweils konstante Mengen Anagrelid wurden mit jedem der antiinflammatorischen Mittel kombiniert und die Kombination dann zur Erstellung einer Dosis-Wirkungskurve hinsichtlich ihrer Wirkung auf die induzierte Blutplättchenaggregation untersucht. Die ECg_Q-Werte für jede Kombination wurden dann bestimmt und das Komponentenverhältnis für jeden EC_5Q-Wert wurde berechnet. Unter Anwendung der isobolographischen Analyse nach Loewe kann somit bestimmt werden, ob sich die beobachteten EC^q-Werte signifikant von den auf die Wirkung der einzelnen Arzneimittel zurückzuführenden, erwarteten Werten unterscheiden und ob diese Wechselwirkung eine supra-additive, infra-additive oder additive Wirkung bedeutet.

Die Figuren 1 bis 5 stellen isobolographische Analysen der in vitro-Wirkungen mehrerer Arzneimittel kombinationen auf die KoIlagen-induzierte Blutplättchenaggregation dar.

Der EC_5Q-Wert für die alleinige Anwendung des nicht-

steroiden anti-inflammatorischen Cyclooxygenase-Inhibitors ist an der Ordinate aufgetragen, während der EC₅Q-Wert für die alleinige Anwendung von Anagrelid an der Abszisse aufgetragen ist. Die Verbindung dieser Punkte ergibt dann die Isobollinie. Bei additiver Wechselwirkung zweier Verbindungen sollten theoretisch alle Werte für diejenigen Kombinationen, die eine 50%ige Wirkung ergeben, auf der Isobollinie liegen. Die beiden gestrichelten Linien zu beiden Seiten der Isobollinie bedeuten die 95 % Vertrauensgrenzen. Bei supra-additiver

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Wechselwirkung zweier Verbindungen sollten die Punkte links der Isobollinie liegen. Wenn sich andererseits zwei Verbindungen antagonisieren, sollten die Punkte rechts der Isobollinie liegen. Für die Kombination Anagrelid und Acetyl salicylsäure ist ersichtlich, daß sich eine beträchtliche supra-additi ve Wechselwirkung ergibt, wobei die Werte der drei Kombinationen eindeutig links der Isobollinie liegen. Für die anderen untersuchten Arzneimittel kombinationen konnte in gleicher Weise supraadditive Wechselwirkung gezeigt werden, wobei jedoch das Ausmaß dieser Wechselwirkung nicht so beträchtlich war, wie die bei der Anagrelid/Acetylsalicylsäurekombi-

¹⁵ nation beobachtete.

Ein Vergleich der beobachteten und erwarteten ECrn-Werte ist in der nachfolgenden Tabelle I zusammengestellt.

ω ο

to σι

Cn

TABELLE I Vergleich der erwarteten und beobachteten Antiaggregation ECr₀ -Werte

Verbindungen

Anagrelid

Acetyl salicylsäure

Anagrelid (0,03)¹ + Acetyl salicylsäure

Anagrelid (0.015)¹ + Acetyl salicylsäure

Anagrelid (0,0025)¹+ Acetyl salicylsäure

SuIfinpyrazon

Anagrelid (0,05)' + SuIfinpyrazon

Anagrelid (0,03)¹ + SuIfinpyrazon

Anagrelid (0.015)¹+ SuIfinpyrazon

ro co

ro

In vitro ECgQ-Werte + 95 % Vertrauensgrenzen

erwartet

beobachtet 0,08 (0,07-0,10) 13,8 (12,5-15,3)

0,89 (0,71-1,09)* 3,17 (2,58-3,79)* 6,17 (5,31-7,11)* 8,6 (7,1-10,7)

11.2 (9,8-13,0)

13.3 (12,0-14,9)

70,3 (56,5-87,3)

13.1 (7,1-20,0)*

26,6 (21,2-33,0)*

45.2 (36,0-56,6)*

26,0 (16-43)

(32,5-61) 61,5 (48,5-78,5)

Gewichts Verhältnis

1:30*

1:211*

1:2468*

1:262*

1:887* 1:3013*

fs) OO

to

TABELLE I (Fortsetzung) 64,9(50,8-82,1)

68 (54,5-85)

cn

1:25,960

Ibuprofen

Anagrelid (0,03)¹+ Ibuprofen

Anagrelid (0,015)'+ Ibuprofen ^

IbSprofen ⁽⁰'°°^{25) +}

11,45(9,61-13,66) --

2,00 (1,64-2,41)* 7,1 (5,5-9,5)

7,64 (6,30-9,25)* 9,3 (7,65-11,60)

8,81 (7,11-10,9)* 11,1 (9,3-13,35)

1:67*

1:509* 1:3524*

Zomepirac

Zomepirac ⁽°'°¹⁵⁾¹

zCmlpirac ⁽°'°¹⁾

ί ^(0ί0025)

3,26 (2,52-4,27)

°'⁶⁶ (0,50-0,85)* 2,05 (1,40-3,0)

1.51 (1,19-1,92)* 2,65 (1,98-3,65)

¹'⁷⁷ (1 ,45-2,16)* 2,85 (2,15-3,85)

3,15 (2,39-4,17) 3,15 (2,38-4,18)

1:22*

1:101*

1:178* 1:1260

Cu

bo

to

TABELLE I (Fortsetzung) Naproxen 27,1 (19,4-38,6) --

Anagrelid (0.03)¹ +
Naproxen

proxen

^(0>015)

7,84 (5,55-10,84)* 16,5 (11,0-26,7) ⁺ 12,47 (9,02-17,06)* 21,7 (15,2-32,6)

^{d (0}'^0025)1+

¹⁷'⁸ (15,0-21,1) 21,3 (15,3-29,8)

23,5 (16,7-34,5) 26,0 (19,8-37,5)

1:261* 1:831* 1:1782 1:8512

OJ

*) Signifikante supra-additive Wechselwirkung - der beobachtete ECcg-Wert der betreffenden Kombination liegt unterhalb der 95 % Vertrauensgrenzen des erwarteten Wertes

' Konstante Menge an Anagrelid (pg/ml), die in Kombination verwendet wurde

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^· Lu v'vo-Uritersuchung

Die Kombination Anagrelid (in Form des Hydrochlorids) und Acetyl salicyl säure wurde in vivo mit Hilfe einer Versuchsanordnung bewertet bei der eine intravaskulare Thrombose mit einem Biolaser in der Gehörkammer eines Kaninchens erzeugt wurde (J. Pharmacol. Exp. Ther. _194j_ 435, 1975)

Die ArzneimittelWirkungen auf die Bildung und die weiteren Veränderungen induzierter, intravasculärer Blutplättchenthromben wurde an nicht-anästhesierten

"half-lop" - Kaninchen mit Hilfe chronisch implantierter, transparenter Ohrkammern des von Sanders et al. in Brit. J. Exp . Path. 3Jj^ 331, 1954 beschriebenen Typs direkt mikroskopisch untersucht. Die Kammer wurde so modifiziert, daß sie keine entfernbare Nadel mehr aufwies. Die Kaninchen wurden in ruhige Rückenlage gebracht. Zur Fokussierung eines einzelnen Rubin-Laserpulses (TRG-Modell 512 Biolaser) Hadron INc, Westbury, N.Y.) in das Lumen eines Gefäßes mit einem Durchmesser von 10 bis 30 pm verwendete man ein Mikroskop (Leitz OrthoTux, Ernst Leitz GmbH, Wetzlar, Deutschland). Die auf diese Weise erhaltene Mikroverbrennung verursachte die Bildung eines kleinen Thrombus, der aus Blutplättchen bestand, die sich um einen Kern einer oder zweier beschädigter roter Blutzellen angehäuft hatten. Die Flächen der Thromben wurden aus dem

³^ Produkt zweier senkrecht aufeinanderstehenden Messungen (Länge und Durchmesser) unter Verwendung eines Micrometer-Okul ars bestimmt. Die aus 10 Versuchen ermittelte Thrombusfläche (pm ) wurde als Kontrollwert verwendet. Anschließend wurden die zu untersuchenden Verbindungen in den gewünschten Dosen oral verabreicht. Zwei Stunden später induzierte man erneut Thromben mit Hilfe des Laserstrahls.

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Die so erhaltenen Ergebnisse wurden mit den Kontrollwerten in Bezug auf die Thrombusfläche und mit Hilfe des "t"-Tests verglichen.

Es ist bekannt, da3 Acetyl salicylsäure eine dosisabhängige Inhibierung der Biolaser-induzierten, intravasulären Thrombose ergibt (Thrombosis Research JJj_,_ 373, 1979).

Die Acetyl salicylsäure ist jedoch bei obigem Testmodell über einen weiten Bereich oraler Dosen (30-150 mg/kg) unwirksam. Wenn man Anagrelid unterhalb der Schwellendosis (beispielsweise 0,5 mg/kg po) mit verschiedenen Mengen Acetyl salicylsäure kombiniert, beobachtet man signifikante Inhibierung experimentell herbeigeführter Thrombose. Die in Figur 6 dargestellten Ergebnisse zeigen, daß bei Kombination von Acetyl salicylsäure und Anagrelid im Verhältnis von 300:1 signifikante Thromboseinhibierung bei zwei verschiedenen Kombinationen, d. h. Acetylsalicylsäure 100 mg/kg po + Anagrelid 0,33 mg/kg po und Acetyl salicylsäure 150 mg/kg po + Anagrelid 0,5 mg/kg po, zu beobachten ist.

Claims

PatentansprUche

1. Orales pharmazeutisches Mittel zur Inhibierung der Blutplättchenaggregation dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoffe eine die Blutplättchenaggregation wirksam inhibierende Menge Anagrelid in Kombination mit einer die Wirkung potenzierenden

Menge eines nicht-steroiden , antiinflammatorischen,

die Blutplättchencyclooxygenase inhibierenden

Mittels enthält.

2. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß

das nicht-steroide, antiinflammatorische Mittel 20

ausgewählt ist unter Acetylsalicy!säure, Zomepirac, Ibuprofen, Naproxen, SuIfinpyrazon, Phenylbutazon und Indomethacin.

3. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das nicht-steroide, antiinflammatorische Mittel ausgewählt ist unter Acetylsalizylsäure, Zomepirac, Ibuprofen, Naproxen und SuIfinpyrazon.

4. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es im wesentlichen Anagrelid und Acetylsalicylsäure enthält, wobei das Gewichtsverhältnis von Acetylsalicylsäure zu Anagrelid ungefähr 30:1 bis ungefähr 2468:1 beträgt.

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5. Mittel nach Anspruch 4 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es ungefähr 0,025 bis 1 mg Anagrelid und ungefähr 150 bis 600 mg Acetyl salicylsäure enthält.

6. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es im wesentlichen Anagrelid und Zomepirac enthält, wobei das Gewichtsverhältnis von Zomepirac zu Anagrelid ungefähr 22:1 bis 178:1 beträgt.

7. Mittel nach Anspruch 6 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es ungefähr 0,025 bis 1 mg Anagrelid und ungefähr 50 bis 200 mg Zomepirac enthält.

8. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es im wesentlichen Anagrelid und Naproxen enthält, wobei das Gewichtsverhältnis von Naproxen zu Anagrelid ungefähr 261:1 bis 831:1 beträgt.

9. Mittel nach Anspruch 8 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es ungefähr 0,025 bis 1 mg Anagrelid und ungefähr 125 bis 375 mg Naproxen enthält.

10. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es im wesentlichen Anagrelid und Ibuprofen enthält, wobei das Gewichtsverhältnis von Ibuprofen zu Anagrelid ungefähr 67:1 bis ungefähr 3524:1 beträgt.

11. Mittel nach Anspruch 10 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es ungefähr 0,025 bis 1 mg Anagrelid und ungefähr 150 bis 600 mg Ibuprofen enthält.

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12. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß es im wesentlichen Anagrelid und SuIfinpyrazon enthält, wobei das Gewichtsverhältnis von Sulfinpyrazon zu Anagrelid ungefähr 262:1 bis ungefähr 3013:1 beträgt.

13. Mittel nach Anspruch 12 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es ungefähr 0,025 bis 1 mg Anagrelid und ungefähr 100 bis 400 mg SuIfinpyrazon enthält.

14. Mittel nach einem der Ansprüche 1 bis 13, dadurch gekennzeichnet, daß es zusätzlich einen pharmazeutisch verträglichen Träger enthält.

15. Mittel nach Anspruch 5 in Form einer.Dosiseinheit dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff eine

20 Kombination aus 0,25 mg Anagrelid und 150 mg Acetyl sal icy!säure enthält.

16. Mittel nach Anspruch 11 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff eine

25 Kombination aus 0,25 mg Anagrelid und 150 mg Ibuprofen enthält.

17. Mittel nach Anspruch 13 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff eine

³⁰ Kombination aus 0,25 mg Anagrelid und 200 mg SuIfinpyrazon enthält.

18. Mittel nach Anspruch 7 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff eine Kombination aus 0,5 mg Anagrelid und 50 mg Zomepirac enthält.

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19. Mittel nach Anspruch 9 in Form einer Dosiseinheit, dadurch gekennzeichnet, daß es als Wirkstoff eine Kombination aus 0,25 mg Anagrelid und 125 mg Naproxen enthält.

20. Verfahren zur Herstellung eines Mittels nach einem der Ansprüche 1 bis 19, dadurch gekennzeichnet, daß man eine die Blutplättchenaggregation wirksam inhibierende Menge Anagrelid mit einer die Wirkung potenzierenden Menge eines nicht-steroiden, antiinflammatorischen, die Blutplättchencyclooxygenase inhibierenden Mittels kombiniert.

21. Verfahren nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß man das Anagrelid und das nicht-steroide antiinf1ammatorisehe Mittel zusätzlich mit einem pharmazeutischen, zur oralen Verabreichung verträglichen

20 Träger kombiniert.

22. Verfahren nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß man das Mittel zur oralen Verabreichung

al's Dosiseinheit formuliert. 25

23. Verwendung von Anagrelid in Kombination mit einer die Wirkung potenzierenden Menge eines nicht-steroiden, antiinflammatorischen, die Blutplattchencyclooxygenase inhibierenden Mittels bei der Inhibierung der Biutplättchenaggregation gemäß Ansprüchen 1 bis 19.