DE2950990C2

DE2950990C2 - 7α-Methoxycephalosporinderivate, Verfahren zu deren Herstellung und Arzneimittel, welche diese enthalten

Info

Publication number: DE2950990C2
Application number: DE2950990A
Authority: DE
Inventors: Shigeharu Inoue; Katsuyoshi Iwamatsu; Katsumi Yokohama Kanagawa Kawaharajo; Shinichi Yokohama Kanagawa Kondo; Keinosuke Miyauchi; Kazuko Mizutani; Shigeo Tokyo Seki; Takashi Kawasaki Kanagawa Tsuruoka; Tadahiro Sagamihara Kanagawa Watanabe; Yujiro Yokohama Kanagawa Yamada
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1978-12-18
Filing date: 1979-12-18
Publication date: 1983-12-22
Also published as: CH643851A5; IL58939A; ES487040A0; ES8101609A1; AU5386979A; YU41900B; IT7951101A0; PT70602A; IL58939A0; AU528886B2; DE2950990A1; FR2444684A1; NL7909104A; YU308679A; GB2040926A; SE7910387L; IT1162424B; FR2444684B1; SE446535B; NL186161B

Description

15

R₁ (1 -Methyl- lH-tetrazol-5-yl)thio-, eine (1-Carboxymethyl-lH-tetrazol-5-yl)thio-, eine (1-Sulfomethyl-lH-tetrazol-5-yl)th;o-, eine [l-(2-SuIfoäthyl)-l H-tetrazol-5-yl]thio-, eine (3-Carboxy-4-methyi-4 H-i,2.4-triazoi-5-yi)thio-,eine (3-CarboxymethyI-4H-l,2,4-triazoI-5-yl)thio-, eine (/t-Metiiyl-S-oxo-o-hydroxy-^-dihydro-1 ,2,4-triazin-3-yl)thio-, eine Pyridinium- oder eine p-Carbamoylpyridiniumgnippe;

R₂ eine Carboxylgruppe oder eine -COOR₅-Gruppe, in welcher Rs eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 C-Atomben bedeutet;

A und B, die gleich oder verschieden ^<An können, eine geradkettige oder verzweigte Alkylengruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen.

2. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise eine Verbindung der Formel II

OCH₃

X-(A)-CONH

OD

worin Ri und A die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben und X ein Halogenatom bedeuten, mit einer Verbindung der Formel (III)

NH₂

CH-(B)-SH (ΠΙ)

R₂

worin R₂ und B die im Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, in einem Lösungsmittel in Gegenwart eines Säurebindungsmittels unter im wesentlichen neutralen Bedingungen bei Raumtemperatur oder darunter während 30 Minuten bis 5

45

Stunden umsetzt.

3. Arzneimittel, enthaltend ein 7-«-Methoxycephalosporin gemäß Anspruch 1 als aktiven Bestandteil neben üblichen Verdünnungsmitteln.

Die Erfindung betrifft die durch Anspruch 1 gtkpnnzeichneten 7«-Methoxycephalosporinderivate, deren pharmazeutisch annehmbaren Salze und ein Verfahren zu deren Herstellung. Die erfindungsgemäßen 7«-Methoxycephalosporinderivate oder deren Salze sind neue Verbindungen und weisen eine hohe antibakterielle Aktivität auf.

Cephalosporinartige Verbindungen mit antibakterieller Aktivität und zahlreiche Derivate davon sind bekannt. Einige dieser Derivate, z. B. Cefaloxin und Cefalotin, werden therapeutisch als ausgezeichnete antibakterielle Mittel verwendet. Nur wenige übliche cephalosporinartige Verbindungen zeigen eine ausreichende antibakterielle Aktivität sowohl gegen gram-positive als auch gegen gram-negative Bakterien.

Aufgabe der Erfindung ist es neue 7&-Methoxycepha- —S

losporinderivate mit hoher antibakterieller Aktivität zu zeigen, die gegenüber einem großen Spektrum patoge ner Bakterien eine hohe antibakterielle Aktivität aufweisen. Der Rest Ri kann folgende Bedeutung haben:

N-

-N

-S N

CH₃

N-

-N

N-

-N

CH₂-COOH

CH₂-SO₃H

N N

c N

CH₂CH₂-SO₃H

N N

Il Κ

Jl C-CH₂-COOH

«j N

oder

-S

CH₁

ίο

N N

Λ,

COOH

CH₃

— Ν V-CONH₂ —Ν >

Eingeschlossen sind auch die pharmazeutisch annehmbaren Salze der Verbindungen der Formel I. Die Verbindungen der allgemeinen Formel I können ein D- oder L-Stereoisomer sein und beide dieser Stereoisome ren sind in die Erfindung eingeschlossen. Im allgemeinen hat die D-Form eine höhere bakterielle Aktivität im Vergleich zur L-Form.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel I weisen eine hohe antibakterielle Aktivität gegenüber einem großen Spektrum patogener Bakterien, auf. Die Affinität der Verbindungen gemäß der Erfindung gegenüber einer Reihe von Bakterien wird in der nachfolgenden Tabelle 1 gezeigt, aus welcher die Wirksamkeit der Verbindungen im Vergleich zu der

Kontrollverbindung Cefoxitin ersichtlich wird. Tabelle 1 Mikroorganismen

*MIC) (mcg/ml)**	Verbindung	Verbindung	Verbindung	Cefoxitin
Verbindung	von Bsp. 7	von Bsp. 8	von Bsp. 9
voD Bsp. 1	3,13	6,25	12,5	1,56
6,25	0,20	1,56	1,56	3,13
0,78	0,78	3,13	3,13	50
12,5	25	25	50	50
25	1,56	6,25	6,25	3,13
0,78	3,13	12,5	12,5	6,25
0,39	0,78	12,5	25	3,13
1,56	100	6,25	100	100
50

Staphylococcus aureus 209p Bacillus anthracis Nr. Escherichia coti 255 Citrobacter freundii Klebsieila pneumoniae Proteus morganii Serratia marcescens Nr. Pseudomonas aeruginosa IFO 3080

*) Die Bakterien wurden in Tripticase-Sojabrühe bei 37° C über Nacht vorinkubiert und dan α lOOfach mit der gleichen Brühe unter Ausbildung eines Inokulums verdünnt. Das Nähragar (Difco*) als Medium für die Messung von MIC wurde mit dem entstehenden Inokulum inokuliert und 20 Stunden zur Bestimmung von MIC (minimale Inhibierungskonzentration) bei 37° C inkubiert.

S Zum Nachweis der Überlegenheit der erfindungsgemäßen Verbindungen gegenüber bekannten Cephalosporinl| antibiotika wurden folgende Versuche durchgeführt. Dabei wurden die nachfolgenden Verbindungen A bis I für die d Versuche verwendet:

Verbindung A (erfindungsgemäße Verbindung gemäß Beispiel 1):

OCH₃ „

CH-CH₂-S-CH₂CONH-J

COOH _/i_A_v/-^CH'^S·

⁰ COOH

N N

Il N

Verbindung B (erfindungsgemäße Verbindung gemäß Beispiel 8):

¹J¹¹*² OCH₃

CH—CH₂—CH₂—S—CH₂CONH

III

COOH ' ^M " "CH₂-N

Verbindung C (erfinrtungsgemäße Verbindung gemäß Beispiel 10):

¹^¹*² OCH₃

CH-CH₂-S-CH₂-Ch₂CONH-I- ' ^{x N N}

COOH

CH₂-S-Ji N

^XN^/

COONa ί

CH₃

Verbindung D (erfindungsgemäße Verbindung gemäß Beispie: 12):

OCH₃

NH₂

CH-CH₂-S-CH₂CONH COOCH₂CH₃

COOH

CH₃

Verbindung E (Cefametazol, J. Antibiotics 31 (1978), 1046 bis 1057; J. Antibiotics 31 (1978), 82 bis 9!;):

OCH₃ NC-CH₂-S-CH₂CONH-I- ' ^{v N N}

_N ^₂^ N

⁰ COOH I

CH₃

Verbindung F (Cefoxitin, Verbindung gemäß J. Antibiotics (1978), 1046 bis 1057; J. Antibiotics 31 (1978), 82 bis 91):

OCH₃
I^ JL-CH₂CONH-J {'

J, J-CH₂OCONH₂

COOH

Verbindung G (Verbindung gemäß Beispiel 1 von US-PS 41 26 74S):

OCH₃ HOOc-CH₂CH₂-S-CH₂CONH-I( ^{v N N}

_N J-CH₂S-Ji N

COOH

Verbindung H (Verbindung gemäß Beispiel 2 von US-PS 41 26 745):

OCH₃

F₃C-S-CK₂CONH-J ('

I Il

COOH

CH₃

Verbindung I (HR 756 aus J. Antibiotics 31 (1978), 1170 bis 1174; Cefotaxim gemäß »Selecta 30 (1980). 2818 bis 2822):

N—y-C

1 J Il

Ac^ N

C —CONH-

H₂N

OCH₃

COOH

CH₂OCOCH,

25

(I)MIC-Wert

Diese Werte wurden nach der Methode der Japanischen Chemotherapeutischen Gesellschaft bestimmt. Die Ergebnisse werden in Tabelle 2 gezeigt.

(2) Tierversuch hinsichtlich der Therapie von Infektionen

Die in Tabelle 2 angegebenen Bakterien wurden in einem Herzinfusions-Agar-Medium 20 Stunden bei 37° C vorinkubiert und dann in physiologischer Kochsalzlösung suspendiert. Zu jeder Suspension wurde bis

Tabelle 2

zu einer Konzentration von 2,5% Mucin zugegeben. Jede Suspension wurde intraperitoneal männlichen ddY-SLC-Mäusen (4 Wochen alt, 10 Mäuse pro Gruppe, Gewicht jeweils 20±03 g) injiziert. Unmittelbar nach der Inokulation wurden jeweils die Verbindungen A bis I, gelöst in destilliertem Wasser, subkutan in einer Dosis von 0,2 ml/Maus injiziert, und die Anzahl der nach 7 Tagen überlebenden Mäuse wurde gezählt und die ED50-Werte wurden nach der Lichtfield-Wilcoxon-Methode berechnet. Die Ergebnisse werden in Tabelle 2 gezeigt.

Mikroorganismus

Dosis an zuge	Antibiotikum	ED₅₀	MlC
gebenen Bakterien
Zellen/Maus		(mg/kg)	(ug/ml)
2,7 X 10"	Verbindung A	0,69	0,78
2,7 X 10"	Verbindung B	0,82	0,78
2,7 X 10"	Verbindung D	0,92	1,56
2,7 X 10"	Verbindung E	8,75	0,78
2,7 X 10"	Verbindung F	14,5	3,13
2,7 X 10"	Verbindung H	11,40	1,56
2,7 X 10"	Verbindung I	0,13	0,05
1,025 x 10⁶	Verbindung A	23,0	25
1,025 x 10"	Verbindung E	180	12,5
1,025 X 10⁶	Verbindung F	155	50
1,025 x 10"	Verbindung I	50	1,56
8 x 10^ä	Verbindung C	5,50	1,56
8 X 10⁵	Verbindung D	4,8	1,56
8 X 10⁵	Verbindung E	125,0	1,56
8X10³	Verbindung F	>500	3,13
8X10³	Verbindung I	33,0	0,78
1,5 X 10⁶	Verbindung A	3,13	6,25
1,5 X 10⁶	Verbindung E	70	6,25
1,5 X 10⁶	Verbindung G	148	6,25
1,5 x 10⁶	Verbindung I	>400	3,13

Escherichia coli A-0031

Escherichia coli GN 206

Serratia marcescens No. 1

Serratia sp. GN-626

ίο

Tabelle 2 (Fortsetzung)

Mikroorganismus

Dosis an zugegebenen Bakterien

Zellen/Maus Antibiotikum

ED

(mg/kg)

MIC

(ug/ml)

K'i-bsiella pneumoniae MB-JS42

Klebsiella pneumoniae GN-69 Salmonella enteritidis No. 11 Proteus vulgaris OX 19 Proteus vulgaris GN-76 Proteus morganii 1510

Proteus mirabilis GN-79

Proteus rettgeri J-0096 Proteus inconstans J-0092

1,7 x 10	Verbindung A	3,15	1,56
1,7 X 10⁷	Verbindung C	4,10	1,56 H
1,7 x 10'	Verbindung E	80	1,56 '£
1,7 x 10⁷	Verbindung F	180
1,7 x 10⁷	Verbindung H	150	1,56 rj
1,7 x 10'	Verbindung I	60	0,10 I
2,2 x 10⁷	Verbindung C	3,13	1,56 1
2,2 x 10^?	Verbindung D	-	1,56 1
2.2 x 10⁷	Verbindung E	70	1,56 1
2,2 x 10⁷	Verbindung F	105	3,13 -
2,2 x 10⁷	Verbindung I	5,5	0,78
1 x 10⁴	Verbindung A	16,0	0,78 $
1 x 10⁴	Verbindung C	15,0	1.56 ^
1 x 10⁴	Verbindung E	60	0,78 x
1 x 10⁴	Verbindung F	>500
1 x 10⁴	Verbindung I	21,0	0,025 f)
1,8 x 10⁸	Verbindung A	2,0	0,10 Ij
1,8 x 10⁸	Verbindung D	5,3	0,39 S
1,8 X 10⁸	Verbindung E	42,5	0,39 ;;_;
1,8 x 10⁸	Verbindung F	50	0.78 *'
1.8 x 10"	Verbindung I	36,0	0.05 ξ
2,3 x 10⁷	Verbindung A	1,40	°·³⁹ i
2,3 x 10⁷	Verbindung C	2,30
2,3 x 10⁷	Verbindung E	54	1.56 ^
2,3 x 10⁷	Verbindung F	26	1.5C f
2,3 x 10⁷	Verbindung 1	81	0,39 ';
4,8 x 10⁷	Verbindung A	4,75	°'⁷⁸ β 1.56 &
4,8 x 10'	Verbindung D	8,30	3.3 I
4,8 x 10'	Verbindung E	43	6,25 I
4,8 x 10'	Verbindung F	17,5	6,25 Ϊ
4,8 x 10⁷	Verbindung G	18,0	12.5 I
4,8 x 10⁷	Verbindung I	85,0	0,39 §
2,7 x 10'	Verbindung A	7.0	6,25 I
2,7 X 10'	Verbindung E	>500	6,25 §
2.7 x 10'	Verbindung F	>500	0,20 §
2,7 x 10⁷	Verbindung I	29,0	0,20 1
2,5 x 10'	Verbindung A	2,8	0,20 I
2,5 x 10'	Verbindung E	45,5	0,78 fl
2,5 X 10'	Verbindung F	33,0	0,78 j
2,5 x 10'	Verbindung G	58,5	0,05 1
2,5 x 10'	Verbindung I	3,35	0,20 I
7,3 x 10'	Verbindung A	1,75	0.39 I
7,3 x 10'	Verbindung D	2,65	0,39 I
7,3 x 10'	Verbindung E	50	3,13 I
7,3 X 10'	Verbindung F	16,5	0,10 S
7.3 x 10'	Verbindung I	12,5

Tabelle 2 (Fortsetzung)

12

Mikroorganismus

Docit an angegebenen Bakterien

Zellen/Mtus Antibiotikum

ED

₅₀

MIC

(μβ/ml)

Yersinia enterocolitica 332 Enterobacter cloacae G-0009 Citrobacter freundii C-0003

Pseudomonas aemginosa IAM-1007

Pseudomonas cepacia M-0527

Clostridium perfringens JAM-3

1,9 X 10' 1,9 x 10*
1,9 x l·«·
1,9 X 10¹ 1,9 X 10¹

9,8 X 10⁴ 9,8 X 10⁴ 9,8 X 10⁴

1,1 x 10⁵ 1,1 X 10⁵ 1,1 X 10^s

8X10⁶ 8X10* 8X10⁶

6,25 X 10⁷ 6,25 x 10⁷ 6,25 X 10⁷ 6,25 X 10⁷ 6,25 X 10⁷

3,23 X 10⁷ 3,23 X 10⁷ 3,23 x 1Ö⁷ 3,23 X 10⁷

Die in Tabelle 2 gezeigten Versuche zeigen, daß die erfindungsgemäßen Cephamycin-Antibiotika (Verbindungen A bis D) MIC-Werte in vitro zeigen, die denen der bekannten Cephamycin-Typ-Antibiotika (Verbindungen E, F, G und H) entsprechen. Die erfindungsgemäßen Antibiotika sind jedoch Oberlegen bei der Behandlung von Infektionen (ED30-Werte in vivo) im Vergleich zu den üblichen Cephamycin-Antibiotika (nämlich Verbindungen E, F, G, H). Die Cephamycin-Antibiotika der Erfindung haben eine 7- bis 35fach höhere Aktivität gegenüber Escherichia coli, eine 22- bis 10Ofach höhere Aktivität gegenüber Genus Serratia, eine 22- bis 57fach höhere Aktivität gegenüber KJebsiella pneumoniae, eine 40- bis 10Ofach höhere Aktivität gegenüber Salmonella enteritidis, eine 8- bis lOfach höhere Aktivität gegenüber Proteus vulgaris, eine 2- bis 5fach höhere Aktivität gegenüber Proteus morganii, eine 70fach höhere Aktivität gegenüber Proteus mirabilis, eine 12- bis 20fach höhere Aktivität gegenüber Proteus rettgeri, eine 14- bis 65fach höhere Aktivität gegenüber Yersinia enterocolitica, eine 6- bis 9fach höhere Aktivität gegenüber Enterobacter cloacae, eine 9fach höhere Aktivität gegenüber Citrobacter freundii, eine 7- bis 2Ofach höhere Aktivität gegenüber Genus Pseudomonas, und eine iöfach höhere Aktivität gegenüber Clostridium perfringens, verglichen mit \ien üblichen Cephamycin-Antibiotika (Verbindungen E, F, G und H).

0,39 0,78 0,78 0,78 039

SO
35
50

25 2,5 50

SO

>100 12,5

12,5 3,13

12,5 6,25

12,5

0,39 0,78 0,20 0,78

Tabelle 2 zeigt auch, daß die erfindungsgemdßen Cephamycin-Antibiotika (Verbindungen A bis D) MIC-Werte in vitro ergeben, die gleich oder nur geringfügig schlechter sind als bei den üblichen Cephalosporin-Antibiotika (Verbindung 1). Mit Ausnahme gegen Escherichia coli weisen die erfindungsgemäßen Antibiotika eine erhöhte Wirksamkeit bei der Behandlung von Infektionen (EDw-Werte in vivo) im Vergleich zu dem bekannten Cephalosporin-Antibioti kum (Verbindung I) auf. Die erfindungsgemäßen Cephamycin-Antibiotika weisen eine 6fach höhere Aktivität gegenüber Genus Serratia, eine 2- bis 20fach höhere Aktivität gegenüber Klebsiella pneumoniae, eine 3,5fach höhere Aktivität gegenüber Salmonella enteritidis, eine 7- bis 16fach höhere Aktivität gegenüber Proteus vulgaris, eine 1Ofach höhere Aktivität gegenüber Proteus morganii, eine 4fach höhere Aktivität gegenüber Proteus mirabilis, eine 5fach höhere Aktivität gegenüber Proteus inconstans, eine 13fach höhere Aktivität gegenüber Yersinia enterocolitica, und eine 15fach höhere Aktivität

gegenüber Clostridium perfringens im Vergleich zur

Verbindung I auf. Gegen Escherichia coli sind die erfindungsgemäßen Cephainycin-Anubiotika in vitro geringfügig schlechter

als die Verbindung I, wobei dieser Unterschied jedoch 'bei den ED50-Werten in vivo nur sehr gering ist

Insbesondere weisen die erfindungsgemäßen Cephamy-

Verbindung A	3.2
Verbindung D	8,5
Verbindung E	700
Verbindung F	125,0
Verbindung I	115,0
Verbindung A	27,5
Verbindung E	180
Verbindung F	140
Verbindung C	9,0
Verbindung E	72,5
Verbindung G	82,4
Verbindung B	50
Verbindung E	>500
Verbindung!	375
Verbindung A	125,0
Verbindung B	23,0
Verbindung E	>500
Verbindung F	>500
Verbindung I	775
Verbindung A	3,1
Verbindung D	6,8
Verbindung E	100
Verbindung I	>100

cin-Antibiotika gegenüber j3-Lactamase bildenden Bakterien, '.vie Escherichia coli GN-206-Stamm, bessere ED»- Werte auf als die Verbindung I.

(3) Anaerobe Bakterien, wie Bacteroides fragilis, verursachen schwerwiegende Infektionen. Cefoxitin (Verbindung F) ist bisher das wirksamste Antibiotikum gegenüber solchen anaeroben Bakterien. Die erfin-

14

dungsgemäßen Cephamycin-Antibiotika weisen gegenüber solchen anaeroben Bakterien eine erheblich bessere Wirkung auf als Cefoxitin (d. h. Verbindung F). Verbindung I ist gegenüber anaeroben Bakterien überhaupt nicht wirksam. Dies wird in der nachfolgenden Tabelle 3 zeigt.

Tabelle 3

Chemotherapeutische Wirkung der Verbindung A im Vergleich zu den Verbindungen F und I bei subkutanen Abszessen bei Mäusen, die mit Bacteroides fragilis C-I*) infiziert worden sind

Kontrolle (kein Antibiotikum)

Antibiotikum Verbindung A	Verbindung F	Verbindung I
MIC (ug/ml) 1.56	6,25	50
Dosis (mg/Maus/Tag 10 1	x 3) 10 1	10 1

Anzahl der Mäuse mit einem Vio ⁶Ao ⁸Ao ⁹Ao ⁹Ao ¹⁰Ao ^lo/io

Abszeß

Größe des Abszesses in mm
(Durchschnitt)

Gewinnung von Pathogenen ⁵Ao ⁶Ao ⁹Ao ⁹Ao ¹⁰Ao ¹⁰Ao ¹⁰Ao

aus den infizierten Stellen

1,2X1,6 1,7X2,2 6,0X6,8 5,2X6,7 6,6x7,4 5,5X7,3 6,0X7,4

*) Jeweils 10 ddY weibliche Mäuse (Alter 5 Wochen) wurden in die Höhle eines Abszesses mit 10* CFU (Kolonie formenden Einheiten) Bacteroides fragilis C-I inokuliert. Das Antibiotikum wurde dreimal alle 24 Stunden subkutan injiziert, und die Wirksamkeit wurde eine Woche nach der Inokulierung festgestellt.

Ergebnis

Die erfindungsgemäßen Cephamycin-Antibiotika weisen M IC-Werte in vitro auf, die denen der bekannten Cephamycin-Antibiotika gemäß US-PS 41 26 745 oder Journal Antibiotics 31, 1978, S. 1046 bis 1057, bzw. 31, 1978, S. 82 bis 91, bzw. 31,1978, S. 1170 bis 1174, ähnlich sind, jedoch weisen in vivo ED50- Werte auf, die besser sind als bei den bekannten Cephamycin-Antibiotika.

Uie erfindungsgemäßen Cephamycin-Antibiotika weisen MIC-Werte in vitro auf, die ähnlich oder etwas schlechter sind als die des bekannten Cephalosporin-Antibiotikums gemäß J. Antibiotics, 31,1978, S. 1170 bis 1174 (d. h. Verbindung I, die kein Antibiotikum vom Cephamycin-Typ ist, weil sie keine 7-«-Methoxygruppe trägt). Mit Ausnahme von Escherichia coli sind die erfindungsgemäßen Cephamycin-Antibiotika aber in vivo besser als die Cephalosporin-Verbindung I. Obwohl die erfindungsgemäßen Cephamycin-Antibiotika gegenüber Escherichia coli M IC-Werte in vitro und ED50-Werte in vivo ergeben, die otwas schlechter oder schlechter als das bekannte Cephalosporin-Antibiotika (Verbindung I) ergeben, ist der Unterschied bei den ED50-Werten in vivo nur gering.

Hinsichtlich der Wirksamkeit gegenüber /J-Lactamase produzierenden Bakterien, wie Escherichia coli GN-206-Stamm, sind die erfindungsgemäßen Cephamycin-Antibiotika hinsichtlich der ED₅₀- Werte der bekannten Verbindung I überlegen.

Weiterhin sind die erfindungsgemäßen Cephamycin-Antibiotika wirksamer gegenüber durch anaerobe Bakterien, wie Bacteroide fragilis verursachten Infektionen als Cefoxitin (d. h. der Verbindung F). Gegenüber einem solchen anaeroben Bakterium ist aucli die bekannte Cephalosporin-Verbindung I nicht wirksam.

Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) haben LD50-Werte von etwa 6 bis 8 g/kg bei intravenöser Verabreichung bei Mäusen und sind im wesentlichen nicht-toxisch.

Die neuen 7a-Methoxycephalosporinderivate können in üblicher Weise zu Arzneimitleln verarbeitet werden und sind dann für eine parenterale oder orale Verabreichung oder für injizierbare ZuDereitungen geeignet.

Die erfindungsgemäßen 7a-Methoxycephalosporinderivate der Formel I können hergestellt werden, indem man in an sich bekannter Weise eine Verbindung der allgemeinen Formel II

OCH₃

X-(A)-CONH

CH₂R₁

COOH

worin R₁ und A die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben und X ein Halogenatom bedeuten, mit einer Verbindung der Formel (III)

NH₂
j
CH-(B)-SH

(ΠΙ)

worin R2 und B die im Anspruch 1 angegebene Bedeutung haben, in einem Lösungsmittel in Gegenwart

eines Säurebindungsmittels unter im wesentlichen neutralen Bedingungen bei Raumtemperatur oder darunter während 30 Minuten bis 5 Stunden umsetzt

Geeignete Lösungsmittel sind beispielsweise Wasser, Methanol oder wäßriges Aceton und geeignete Säurebindungsmittel and beispielsweise Alkalihydrogencarbonat,Trialkylamin und Pyridin.

Beispiel 1

7^Bromoaretainfcio-7«-rnethoxY-cephalosporinsäure (425 mg) wurdeif m 10 ml Wasser suspendiert, die Suspension wurde auf einen pH von 7,0 unter Bildung einer wäßrigen Lösung der Säure eingestellt und dazu wurden 200 mg D-Cysteinhydrochlorid gegeben und die Lösung wurde auf einen pH von 7,0 eingestellt und dann 2 Stunden bei Raumtemperatur umgesetzt Nach Beendigung der Umsetzung wurde die Mischung mit der 30fachen Wassennenge verdünnt, durch eine Säule, die mit 500 ml eines hochporösen Harzes beschickt war, geleitet, mit Wasser gewaschen und mit 10%igem wäßrigem Aceton ehiiert Die das Endeprodukt enthaltenden Fraktionen wurden konzentriert und gefriergetrocknet, wobei man 270 mg 70-(2-Aniino-2- carboxy)-äthylthicacetanudo-7a-methoxycephalosporinsäure erhielt 210 mg des Produktes wurden mit S-Mercapto-l-methyl-lH-tetrazol umgesetzt und säulenchromatografisch gereinigt, wobei man 120 mg des Endproduktes, 7/?-(2D-2-Amino-2-carboxy)-äthylthio acetamido-7«-methoxy-3-(l -methyl 1 H-tetrazol-5-yI)-thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure erhielt.

Rf-Wert bei der Dünnschichtchromatografie über Kieselgel: 0,41 (n-Butanol/Essigsäure/Wasser = 2:1:1).

Beispiel 2

7ß-Bromoacetamido-7«-methoxy-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure (9,2 g) wurden in 100 ml Wasser suspendiert und dazu wurde eine gesättigte wäßrige Natriumbicarbonatlösung gegeben und die Suspension wurde unter Kühlung auf pH 7,2 eingestellt, wobei man eine wäßrige Lösung der Säure erhielt. Zu der Lösung wurden 4,63 g D-Cystein-hydrochlorid unter Kühlung gegeben und anschließend wurde 30 bis 40 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und dabei der pH auf ein Niveau zwishen 7,1 und 7,2 gehalten. Das Reaktionsgemisch wurde durch eine mit 800 ml hochporösem Harz gefüllte Säule (5 χ 70 cm) geschickt und mit Wasser eluiert Aus den mit Wasser eluierten Fraktionen wurden 5,25 g des Natriumsalzes von7/f-(2D-2-Amino-2-carboxy)-äthylthioacetamido-7«·

methoxy-3-( 1 -methyl- ί H-tetrazol-5-yl)- thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure erhalten. Die Säule wurde mit 5°/oigem wäßrigem Aceton gewaschen, wobei man weitere 1,45 g des Endproduktes erhielt

Beispiel 3

Eine Mischung aus 230 mg 7/?-(2D-2-Amino-2-carboxy)-äthylthioacetamido-7a-methoxycephalosporinsäure und 65 mg 5-Mercapto-lH-tetrazol-l-methansulfonsäure wurde in 10 ml Wasser gelöst und dazu wurde wäßriges Natriumbicarbonat gegeben unter Einstellung eines pH-Wertes von 7,1. Dann wurde die Umsetzung 20 Stunden bei 65° C durchgeführt Nach der Umsetzung wurde das Reaktionsgtmisch mit 1 η Chlorwasserstoffsäure behandelt und der pH auf 1,9 eingestellt und dann wurde zweimal mit 10 ml Äthylacetat gewaschen und nochmals mit 1 η Chlorwasserstoffsäure behandelt und Einstellung eines pH-Wertes von 1,0 und dann wurde durch eine mit einem hochporösen Harz gepackte Säule (2 χ 50 cm) cfaromatografiert und mit Wasser und 5%igem wäßrigem Aceton eluiert Die auf die Ninhydrinreaktion positiven Fraktionen wurden vereint und mit Natriumbicarbonat unter Einstellung eines pH-Wertes von 7,0 behandelt Das Eluat wurde konzentriert, durch eine mit vemetztem Dextrangel gefüllte Säule geschickt mit Wasser gewaschen und mit 50%igem Methanol eluiert Die das Endrodukt entha tenden Fraktionen wurden konzentriert und gefrierge trocknet, wobei man 50 mg des Natriumsalzes von 7^-(2D-2-Amino-2-carboxy)-äthylthioacetamido-7amethoxy-3-(l-sulfomethyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure erhielt

Beispiel 4

Das Verfahren von Beispiel 1 wurde wiederholt, mit der Ausnahme, daß 7/?-Bromoacetamido-7«-methoxycephalosporinsäure (1,42 g) in 60 ml Wasser gelöst 2ö wurden und daß anstelle vor D-Cystein 640 mg L-Cystein verwendet wurden. Man erhielt 240 mg des Natriumsalzes von 7ß-(2L-2-Amino-2-carboxy)-äthyl-

thioacetamido-7Ä-methoxy-3-(l -methyl-1 H-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure.

Beispiel 5

Das Verfahren von Beispiel 1 wurde wiederholt mit der Ausnahme, daß 0,71 g 7/)-Bromoacetamido-7<x-methoxycephalosporinsäure in 30 ml Wasser gelöst wurden und daß anstelle von D-Cystein 320 mg D,L-Cystein verwendet wurden. Man erhielt 130 mg des Natriumsalzes von 7ß-(2D,L-2-Amino-2-carboxy)-äthylthioacetamido-7«-methoxy-3-(l-methyl-lH-tetrazoI-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure.

Beispiel 6

Das Natriumsalz (200 mg) von 70-(2D-2-Amino-2-carboxy)-äthylthioacetamido-7(x-methoxy-3-(l-methyllH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure,

*o das gemäß Beispiel 2 erhalten worden war, wurde in 2 ml Wasser gelöst und die Lösung wurde unter Einstellung des pH-Wertes auf 2,5 bis 2,6 mit 1 η Chlorwasserstoffsäure behandelt und dann durch eine mit 100 ml eines hochporösen Harz gefüllte Säule

4S geschickt Es wurde mit Wasser gewaschen und mit 20%igem Aceton eluiert wobei man 184 mg der freien Säure erhielt 140 mg der Säure wurden in 5 ml Wasser gelöst und zu der Lösung wurde eine Lösung aus 40 mg L-Lysin in 03 ml Wasser gegeben und die Mischung (pH

so 7,05) wurde gefriergetrocknet, wobei man 180 mg eines L-Lysinsalzes von 70-(2D-2-Amino-2-carboxy)-athylthioacetamido-7«-methoxy-3-(l -methyl-1 H-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure erhielt

Beispiel 7

70-Bromoacetamido-7«-methoxy-3-( 1 -methyl-1 H-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure (960 mg) wurden in 20 ml Wasser suspendiert und unter Einstellung des pH-Wertes auf 7,0 wurde Natriumhy drogencarbonat zugegeben, wobei sich eine wäßrige Lösung der Säure bildete. D-Homocystein (300 mg) wurde zu der Lösung gegeben und die Umsetzung wurde bei Raumtemperatur während 14 Stunden unter Aufrechterhaltung eines pH-Wertes zwischen 7 und 7,5 durchgeführt. Nach der Umsetzung wurde die Reaktionsmischung auf einen pH zwischen 5,5 und 6,0 eingestellt, auf ein kleines Volumen konzentriert und durch eine Säule (2 χ 68 cm), die mit 150 ml eines

hochporösen Harzes gefüllt war, geschickt und mit Wasser eluiert Die das Endprodukt enthaltenden Fraktionen wurden vereint, konzentriert und gefriergetrocknet, wobei man 390 mg Natrium-7/H3D-3-amino-S-carboxyJ-propylthioacetamido^oc-meth-oxy-S-

(methyl-1 H-tetrazol-5-yI)-thiomethyI-3-cephem-4-carboxylat erhielt

Rf-Wert bei der Dünnschichtchromatografie Ober Kieselgel: 0,39 (n-Butanol/Essigsäure/Wasser -2:1:1).

Beispiel 8

wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur unter Aufrechterhaltung des pH-Wertes von 7,0 bis *iJ5 durchgeführt Nach der Umsetzung wurde das Reaktionsgemisch auf einen pH von 6,0 eingestellt, auf ein kleines Volumen konzentriert und in gleicher Weise wie in Beispiel 7 behandelt wobei man 230 mg Natrium-7/?-[2-(2D-2-amino-2-carboxy)-äthylthiopropionamido]-7«-methoxy-3-(1-methyl-l H-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat erhielt

ίο Rf-Wert bei der Dünnschichtchromatografie über Kieselgel: 0,4 (n-Butanol/Essigsäure/Wasser — 2:1:1).

70-Bromoacetamido-7a-methoxy-3-(p-carbamoylpyridinium)-methyl-3-cephem-4-carbonsäure (1,45 g) wurden in 30 ml Wasser gelöst und dazu wurden 450 mg DL-Homocystein gegeben und die Umsetzung wurde bei Raumtemperatur während 2 Stunden durchgeführt, wobei der pH-Wert der Lösung auf 7,0 gehalten wurde. Nach der Umsetzung wurde das Verfahren gemäß Beispiel 7 wiederholt, wobei man 600 mg 7/?-{3DL-3-amino-3-carboxy)-propylthioacetamido-7«-methoxy-3-(p-carbamoylpyridiniumJ-methyl-S-cephenM-carbonsäure erhielt

Rf-Wert bei der Dünnschichtchromatografie über Kieselgel: 0,25 (n-Butanol/Essigsäure/Wasser -2:1:1).

Beispiel 9

70-Bromoacetamido-7a-methoxy-3-(l -methyl-1 H-tetrazol-5-yl)-thiomethyI-3-cephem-4-carbonsäure (1,25 g) wurden in 20 ml Wasser suspendiert und dazu wurde unter Ausbildung einer Lösung der Säure Natriumhydrogencarbonat gegeben. Dann wurden 530 mg D-Penicillamin-hydrochlorid hinzugegeben und die Umsetzung wurde 1,5 Stunden bei 10⁰C durchgeführt wobei der pH der Reaktionsmischung zwischen 7,0 und 7,5 gehalten wurde. Nach der Umsetzung wurde das Reaktionsgemisch in gleicher Weise wie in Beispiel 7 behandelt wobei man 680 mg Natrium-7/?-(2D-2-ami-

no-2-carboxy-l,l-dimethyl)-äthylthioacetamido-7amethoxy-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carboxylat erhielt

Rf-Wert bei der Dünnschichtchromatografie über Kieselgel: 0,45 (n-Butanol/Essigsäure/Wasser =- 2:1:1). «

Beispiel 10

7/?-2-Bromopropionamido-7a-methoxy-3-( 1 -methyllH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-carbonsäure (500 mg) wurden in 10 ml Wasser suspendiert und dazu so wurde Natriumhydrogencarbonat gegeben und der pH der Suspension auf 7,0 eingestellt, wobei sich eine wäßrige Lösung der Säure bildete. Dazu wurden 210 mg D-Cyslein-hydrochlorid gegeben und die Reaktion

Beispiel 11

7/?-Bromopropionamido-7a-methoxy-3-{ 1 -methyl-

lH-terazoi-5-yl)-thiomethyl-3-cephem-4-£i-_Jrbonsäure

(980 mg) wurden in 20 ml Wasser suspendiert und dazu

wurde unter Einstellung eines pH-Wertes von 7,0

Natriumhydrogencarbonat gegeben, wobei sich eine

wäßrige Lösung der Säure bildete. Dazu wurden 325 mg

D-Homocystein gegeben und die Umsetzung wurde 2 Stunden unter Aufrechterhaltung des pH-Wertes der Reaktionsmischung zwischen 7,0 und 7,5 durchgeführt Das Reaktionsgemisch wurde in gleicher Weise wie in Beispiel 7 behandelt wobei man 410 mg Natrium-7/ί-

(3D-3-amino-3-carboxy)-propylthiopropionamido-7«-

methoxy-3-(l-methyI-lH-tetrazol-5-yl)-thiomethyl-3-

cephem-4-carboxylat erhielt

Rf-Wert bei der Dünnschichtchromatografie über Kieselgel: 0,43 (n-Butanol/Essigsäure/Wasser -2:1:1).

Beispiel 12

70-Bromoacetamido-7Ä-methoxy-3-{l-methyI-lH-tetrazol-S-ylJ-thiomethyl-S-cephem^-carbonsäure (480 mg) wurden in 15 ml Wasser suspendiert und dazu wurden unter Einstellung eines pH-Wertes von 7,0 Natriumbicarbonat gegeben, wobei sich eine wäßrige Lösung der Säure bildete. D-Cysteinäthylester-hydrochlorid (170 mg) wurden zu der Lösung gegeben, die auf einen pH von 7,0 eingestellt wurde und die Umsetzung wurde 2 Stunden bei 5° C durchgeführt Das Reaktionsgemisch wurde auf einen pH von 6,0 eingestellt und dann durch eine mit 70 ml Amberlite* XAD-2 gepackte Säule geschickt mit Wasser gewaschen und mit 50%igem wäßrigem Aceton eluiert Die das Endprodukt enthaltenden Fraktionen wurden konzentriert und gefriergetrocknet wobei man 45$ mg eines weißen Pulvers von 7/?-2D-2-Amino-2-äthoxycarbonyl)-äthyl-

thioacetamido-7«-methoxy-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl)-thioraethyl-3-cephem-3-carbonsäure erhielt Das Pulver ergab einen einzigen Fleck bei einem Rf-Wert von 0,6 bei der Dünnschichtchromatografie über Kieselgel (Aceton/Methanol -2:1).

Claims

Patentansprüche: 1. T-a-Methoxycephalosporinderivate der allgemeinen Formel (I)

CH-(B)-S-(A)-CONH R₂

COOH

sowie pharmazeutisch annehmbare Salze, worin bedeuten: