DE2934110C2

DE2934110C2 -

Info

Publication number: DE2934110C2
Application number: DE2934110A
Authority: DE
Inventors: Martin J. Leonia N.J. Us Lee; Michael J. Park Ridge N.J. Us Malin
Original assignee: Technicon Instruments Corp
Current assignee: Bayer Corp
Priority date: 1978-08-24
Filing date: 1979-08-23
Publication date: 1988-03-03
Also published as: GB2029012A; JPS633260B2; US4250257A; SE7902734L; JPS5531989A; CA1118327A; FR2434395A1; AU518642B2; AU4727279A; FR2434395B1; GB2029012B; IT1122264B; DE2934110A1; SU1501929A3; BE878245A; IT7924560A0; NL7903582A; SE445146B; CH640946A5

Description

Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung und ein Verfahren zur Bestimmung des Hämatokrits in einer Blutprobe.

Bekanntlich kann man Blut unter Verwendung von Gelmaterialien analysieren. Aus der US-PS 39 90 849 ist ein Verfahren zur Auftrennung der festen und flüssigen Phase des Blutes unter Verwendung eines Gelmaterials bekannt. Nach einer derartigen Auftrennung werden dann Analysen von zu bestimmenden Bestandteilen innerhalb der flüssigen Phase des Plasmas innerhalb des Gelmaterials durchgeführt.

In DE-OS 29 27 345 wurde bereits ein Verfahren vorgeschlagen, das es ermöglicht, durch gesteuerte Diffusion genaue Anteile von Plasma und von zu bestimmenden Substanzen oder anderen Reagenzien inner halb des Gelmaterials zu erhalten. Derartige genaue Anteile werden erhalten, ohne daß man die zu untersuchende Probe messen müßte.

Sämtliche derartige Verfahren haben das Ziel gemeinsam, Bestimmungen rasch, einfach und kostengünstig durchzuführen.

Es besteht jedoch eine Schwierigkeit beim Diffundieren genauer Anteile von Blutplasma aus den Gesamtblutproben in das Gelmaterial, wenn man die bereits beschriebenen Verfahren anwendet. Das Eindiffundierenlassen von löslichen Bestand teilen des Plasmas aus Gesamtblutproben in ein Gel oder ein anderes poröses Material geht von der Annahme aus, daß die Geschwindigkeit der Eindiffundierung von löslichen Be standteilen des Plasma für jede Blutprobe gleich ist, so daß für sämtliche Blutproben innerhalb eines derartigen Mediums ein konstanter Anteil erhalten wird. Dies ist je doch nicht immer der Fall. Der Hämatokrit der Blutprobe beeinflußt die Diffusionsgeschwindigkeit von löslichen Bestandteilen des Plasmas, die in ein Gelmaterial eindif fundieren. Wenn man die Diffusionszeit genau steuert, erhält man daher keineswegs für sämtliche Proben einen konstanten Plasmaanteil innerhalb des Gels. Jedoch ist ein derartiger genauer aliquoter Plasmaanteil innerhalb des Gelmaterials erforderlich, im quantitative Analysen der innerhalb der Blutprobe vorliegenden zu analysierenden Bestandteile durch führen zu können.

Aufgabe der Erfindung ist die Schaffung eines verbesserten Verfahrens und einer verbesserten Vorrichtung zur Hämatokrit bestimmung, wobei das Blut vor der Durchführung der Bestim mung nicht mehr in seine Bestandteile aufgetrennt zu werden braucht, ferner Diffusionsmethoden und insbesondere Gel diffusionstechniken anwendbar sind, durch die Einwirkungen des Hämatokrits auf die Erzielung genauer Analysenergebnisse von Blutproben korrigiert werden können und ein Hämatokritkor rekturfaktor für Gesamtblutanalysen unter Anwendung von Diffusionsmethoden zur Erzielung von bestimmten Anteilen des Blutplasmas innerhalb poröser Medien erhalten werden kann.

Gegenstand der Erfindung ist eine Vorrichtung zur Bestimmung des Hämatokrits in einer Blutprobe, gekennzeichnet durch ein poröses Material mit einer vorherbestimmten Oberfläche, auf die eine bestimmte Menge des zu analysierenden Blutes auf bringbar ist, und eine gegenüber der Blutprobe inerte Sub stanz, die innerhalb des Materials in vorherbestimmter Kon zentration vorhanden und über die vorherbestimmte Oberfläche aus dem Material herausdiffundierbar ist, wenn das Blut auf die vorherbestimmte Oberfläche aufgebracht wird. Die Inert substanz ist sowohl gegenüber dem im Plasma Gelösten als auch gegenüber den Blutzellen inert.

Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Bestimmung des Hämatokrits in einer Blutprobe, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man

a) eine Oberfläche eines porösen Materials, das eine Inert substanz enthält, mit einer Blutprobe in Berührung bringt, wobei die Inertsubstanz gegenüber der Blutprobe inert ist;
b) mindestens einen Teil des im Plasma der Blutprobe Gelösten über die Oberfläche in das Material eindiffundieren läßt;
c) mindestens einen Teil der inerten Substanz aus dem Mate rial über die Oberfläche, die mit dem Blut in Berührung steht, hinausdiffundieren läßt und
d) die Konzentration der inerten Substanz, die aus dem Material herausdiffundiert ist, als Maß für den Hämatokrit der Blutprobe bestimmt.

Auf diese Weise ist ein Mittel zur Bestimmung des Hämato krits in Blutproben durch Diffusionsverfahren sowie zur Bestimmung der Wirkung des Hämatokrits auf Blutanalysen geschaffen. Außerdem ist auf diese Weise eine Korrektur für die Hämatokriteinwirkungen geschaffen, die bei der Verwendung von Verfahren zur Durchführung von Bestim mungen unter Verwendung von Diffusionsvorrichtungen auf treten.

Weiter kann so eine zu bestimmende Substanz unmittelbar aus dem Plasma einer Blutprobe bestimmt werden, die in ein Gel oder ein anderes poröses Material eindiffundieren gelassen wurde, indem man zwei Farbumschläge innerhalb des porösen Materials beobachtet:

1. den Farbumschlag, der einer Diffusion von Farbstoff aus dem Material nach außen als Funktion des Hämatokrits der Blutprobe zuzuschreiben ist, und
2. den Farbumschlag, der der Umsetzung eines zu bestim menden Bestandteils im Plasma der Probe mit einem in dem porösen Material vorhandenen Reagenz zuzuschreiben ist.

Bei dem erfindungsgemäßen Verfahren und der erfindungsgemäßen Vorrichtung zum Bestimmen des Hämatokrits ist eine vorherige Trennung der Proben in den zellularen und den Plasmabestandteil nicht erforderlich.

Man kann ein Gel oder ein anderes poröses Material dazu verwenden, um einen genauen Anteil des Plasmas aus einer Gesamtblutprobe durch Diffusionsverfahren zu erhalten. Die Blutprobe wird auf einer bestimmten Oberfläche des Materials aufgebracht, und man läßt das Plasma in das Material über eine bestimmte Zeit hinweg hineindiffundieren. Wenn die Blutprobe lediglich aus Plasma bestünde, würde ein konstanter Anteil des Plasmas nach der bestimmten Zeit inner halb des Materials erhalten werden, wie in der oben erwähnten Offenlegungsschrift beschrieben.

Wegen der Anwesenheit der Erythrozyten in der Blutprobe wird jedoch die Diffusion des Plasmas etwas behindert. Da einige der Erythrozyten einen Teil der bestimmten Oberfläche des Materials bedecken, wird die Oberfläche dadurch verringert, so daß der mittlere Diffusionsweg für gelöste Moleküle bis zum Erreichen der Geloberfläche erhöht und die Geschwindigkeit der im Plasma gelösten Bestandteile verringert werden. Der Einfluß auf die Diffusionsgeschwindigkeit der Plasmabestandteile verschiedener Blutproben variiert, weil die Fraktion, die die Blutzellen enthält, ebenfalls zwischen verschiedenen Proben variiert. Wegen der Verän derungen des Hämatokrits in diesen Proben kann daher ein konstanter Anteil des Plasmas nicht erhalten werden.

In Weiterbildung des erfindungsgemäßen Verfahrens wird auch ein Korrekturfaktor für die Hämatokritver änderungen ermittelt, mit dessen Hilfe man den in ein Gelmedium eindiffundierten Plasmaanteil genau bestimmen kann. Dieser Korrekturfaktor kann auf ver schiedene Weise erhalten werden:

a) Zunächst kann der Hämatokrit in einem getrennten Gel be stimmt und danach der Korrekturfaktor für Analysen, die in anderen Gelmaterialien durchgeführt werden, unter Verwendung unterschiedlicher Anteile der Blutprobe berechnet werden, oder
b) die Umsetzung eines in dem Plasma des Blutes vorhandenen zu bestimmenden Anteils mit einem in dem Gelmaterial vor handenen Reagenz kann unmittelbar durch Messung zweier Farb umschläge bestimmt werden:
- 1. des Farbumschlages, der durch die Umsetzung von zu be stimmendem Bestandteil und Reagenz hervorgerufen wird, und
- 2. des Farbumschlages, der durch den Verlust des Materials an Farbstoff als Funktion des Hämatokrits in der Blutprobe hervorgerufen wird, wie weiter unten näher beschrieben wird.

Bei dem Verfahren a) wird die Hämatokrit-Wirkung dadurch be stimmt, daß man in ein getrenntes poröses Material, das keine anderen Reagenzien enthält, einen inerten Indikator einbringt. Dieser inerte Indikator kann ein gefärbtes Molekül, wie beispielsweise Vitamin B₁₂ (Cyano-Cobalamin) sein, das mit der Blutprobe nicht wesentlich reagiert. Bekanntlich diffundieren Substanzen innerhalb des porösen Materials in dem Maße nach außen, wie das Plasma aus der Blutprobe in das Material hineindiffundiert. Die Blutzellen blockieren die Diffusion des sich nach außen bewegenden inerten Farb stoffs in gleicher Weise, wie die löslichen Bestandteile des Plasmas daran gehindert werden, in das Material ein zudringen. Versuche haben gezeigt, daß die Diffusion des Farbstoffs aus dem Gel oder dem anderen porösen Material proportional der Geschwindigkeit ist, mit der die gelösten Bestandteile des Plasmas in das Gel eindiffundieren. Außerdem hat sich gezeigt, daß die Diffusion des Farbstoffs umgekehrt proportional zum Hämatokrit der Blutprobe ist. Auf der Grundlage dieser Versuche kann mit Hilfe des Farb stoffverlustes des Materials ein Korrekturfaktor bestimmt werden. Dieser Korrekturfaktor ermöglicht die Berechnung der Konzentration eines beliebigen teilchenförmigen zu bestimmenden Stoffes, der in dem Plasma anwesend ist. Außerdem hat es sich erwiesen, daß die Bestimmug des Hämatokrits unter Anwendung von Diffusionsverfahren vergleich bar der Hämatokritbestimmung auf der Grundlage von üblichen Zentrifugierverfahren ist.

Es ist äußerst wichtig, daß der Farbstoff, der in dem Gel oder dem anderen porösen Material enthalten ist, nicht mit irgendeinem Teil der Blutprobe reagiert, d. h. weder mit den gelösten Stoffen des Plasmas noch mit den Blutzellen. Dies ist deswegen wichtig, weil jede Umsetzung, Verklumpung oder Koagulation innerhalb der Blutprobe die Diffusionsge schwindigkeit und damit den Korrekturfaktor beeinflussen kann.

Bei dem Verfahren b) werden optische Messungen gleichzeitig zur Bestimmung des Umsetzungsproduktes einer zu bestimmenden Substanz innerhalb des Materials und des Farbstoffverlustes des Materials durchgeführt. Dies erfordert, daß der Farbum schlag, der auf den Verlust des Materials an Farbstoff zu rückgeht, in keiner Weise den Farbumschlag, der zufolge der Umsetzung des zu bestimmenden Bestandteils hervorgerufen wird, stört.

Bei diesem Verfahren wird eine unmittelbare Bestimmung des zu bestimmenden Bestandteils ermöglicht, indem beide Farb umschläge in demselben Material gemessen werden. Die Färbung durch den Farbstoff und die Färbung durch die Umsetzung dürfen über ihre entsprechende Farbumschlaggeschwindigkeit hinaus einander nicht stören.

Die Erfindung wird im folgenden anhand von Zeichnung er läutert, worin

Fig. 1 eine perspektivische Ansicht einer Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung;

Fig. 2 einen Querschnitt der Vorrichtung gemäß Fig. 1 längs der Linie 2-2, wobei ein Tropfen einer Blut probe an seinem Platz angeordnet ist;

Fig. 3 eine perspektivische Ansicht einer weiteren Ausfüh rungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit einer biegsamen Abdeckung über einem Teil der zu füllenden Aushöhlung;

Fig. 4 eine perspektivische Darstellung ähnlich Fig. 3, wobei ein durchsichtiges Band die gesamte Aushöh lung abschließt, die mit einem eine Inertsubstanz enthaltenden porösen Material gefüllt ist;

Fig. 5 eine perspektivische Darstellung ähnliche Fig. 3 und 4, wobei das durchsichtige Band gerade entfernt wird;

Fig. 6 eine perspektivische Darstellung einer weiteren Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung;

Fig. 7 eine perspektivische Darstellung einer weiteren Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit einer Eintauchstab-Anordnung;

Fig. 8 eine schematische Darstellung einer weiteren Aus führungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit einem automatisierten System;

Fig. 9 eine schematische Darstellung einer weiteren Aus führungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung mit einem automatisierten System;

Fig. 10 eine perspektivische Darstellung eines Beispiels für eine Anordnung mit einem kontinuierlichen Band für die automatisierten Systeme gemäß Fig. 8 und 9;

Fig. 11 ein Diagramm zur Diffusion von Vitamin B₁₂ aus Agarose in Blut hinein als Funktion des Hämatokrits (HCT);

Fig. 12 ein Diagramm über die Diffusion von Vitamin B₁₂ aus Agarose, die proportional der Quadratwurzel gemäß den Diffusionsgesetzen erfolgt;

Fig. 13 ein Diagramm zur Korrelation zwischen den Bestim mungen des Hämatokrits durch Diffusion und durch übliche Zentrifugierverfahren und

Fig. 14 ein Diagramm über die Auswirkung des Hämatokrits auf eine Albuminbestimmung darstellen.

Gemäß Fig. 1 und 2 besitzt ein flacher, rechteckig geformter Träger 11 eine Vertiefung 12, die mit einem Gel oder einem anderen porösen Material 13, wie beispielsweise Agarose gefüllt ist, die eine Inertsubstanz, wie beispiels weise Vitamin B₁₂ enthält. Der Träger 11 kann aus Kunststoff oder Glas bestehen. Abmessungen sind nicht von besonderer Bedeutung, jedoch besitzt die Vertiefung 12 im allgemeinen eine Tiefe von 0,1 bis 2 mm und einen Durchmesser von 5 bis 20 mm. Die Ausführungsform gemäß Fig. 1 und 2 besitzt eine Vertiefung 12 von 1 mm Tiefe und 8 mm Durchmesser. Die Aus nehmung ist im allgemeinen in der Mitte des Trägers 11 an einer Stelle angeordnet, an der das Gel den Lichtstrahl eines geeigneten Photometers oder Spektrophotometers schneidet. Das Gel füllt die Vertiefung 12 vorzugsweise bis zu ihrer Oberfläche, wodurch eine gute Berührung mit der Blutprobe hergestellt wird. Wenn beispielsweise ein Tropfen einer Blutprobe 14 aufgebracht wird, muß dieser Tropfen den Rand des Trägers um die Vertiefung herum überdecken. Das Erfor dernis, daß die Vertiefung zur Gänze mit dem Gel auszufüllen ist, ist nocht wichtiger, wenn das Aufbringen der Probe durch einen weiteren Träger erfolgt. Beispielsweise kann eine Blut probe in einem Kapillargewebe eingeschlossen werden. Ein derar tiges Gewebe wird dann mit der Oberfläche des Gels in Be rührung gebracht. Der Plasmaanteil der Probe diffundiert un mittelbar aus dem mit der Blutprobe beladenen Gewebe in das Gel. Nach einer vorgewählten Zeitdauer kann das Gewebe von der Oberfläche des Gels entfernt werden. Das Plasma, das in einen Teil des Gels eindringt, diffundiert gleich zeitig und in demselben Maße in das Gel, wie die Inertsub stanz aus dem Gel in die Blutprobe diffundiert. Am Ende der vor gewählten Zeitdauer ist die Inertsubstanz aus dem Gel um eine bestimmte Menge ausdiffundiert, die umgekehrt proportio nal zum Hämatokrit der Blutprobe ist.

Dies geht aus den Fig. 11 bzw. 12 hervor. Fig. 12 zeigt, daß die Diffusion der Inertsubstanz (in diesem Falle von Vitamin B₁₂ oder Cyanocobalamin) aus dem aus Agarose bestehenden Gel medium in die Blutprobe dem Einstein′schen Gesetz der Braun′ schen Molekularbewegung folgt (Introduction to Colloid Chemi stry, K.J. Mysels, Interscience (1959) N.N.). Die Diffusion, die durch die Abnahme der Absorption gemessen wird, ist eine lineare Funktion der Quadratwurzel der Zeit.

Fig. 11 erläutert, daß die Diffusion der Inertsubstanz (Vita min B₁₂) aus dem Gelmaterial nach außen eine lineare Funktion des Hämatokrits der Blutprobe ist.

Gemäß den Fig. 3,4 und 5 besitzt ein Träger 15 eine U-förmige Ausnehmung 16 auf einer seiner Oberflächen. Das breite Ende der Ausnehmung 16 ist am Ende des Trägers offen. Die Anordnung gem. dieser Ausführungsform bietet sich für eine Massenherstellung an. Diese wird dadurch bewerkstelligt, daß man die hauptsächliche offene Oberfläche einer Anzahl von gleichen Trägern mit druckempfindlichen Klebbändern 17 verschließt, wobei jedoch der Endabschnitt der Ausnehmung offen bleibt, so daß das Gel 13 in die Aus nehmung eingebracht werden kann. Das Gel wird dann härten gelassen. Danach wird der restliche, lose Abschnitt des Klebebandes 17 um das Ende des Trägers herumgeschlagen, um den restlichen Teil der Ausnehmung 16 zu verschließen. Bei dieser Ausführungsform kann die Vorrichtung als Ein tauchstab benutzt werden, der eine bestimmte Zeitlang die Probe eingetaucht wird. Das Band 17 wird vor der Ver wendung entfernt. Der Eintauchstab wird dann eine bestimmte Zeit lang die ausreicht, um gelöste Bestandteile des Plasmas der Blutprobe in das poröse Material eindiffundieren und gleichzeitig damit Inertsubstanz aus dem Material in die Blutprobe hinausdiffundieren zu lassen, in die flüssige Blutprobe eingetaucht.

Fig. 6 zeigt eine Anordnung, wie sie ähnlich der in den Fig. 3, 4 und 5 dargestellten Anordnung ist. Es werden eine Reihe Ausnehmungen 20 a, 20 b und 20 c angeordnet, so daß eine Anzahl Versuche oder Bestimmungen auf einem einzigen Träger 19 zusätzlich zur Bestimmung der Hämatokrit-Wirkung auf die Blutprobe vorgenommen werden kann. Die Blutprobe wird über alle drei Ausnehmungen 20 a, 20 b und 20 c in über lappender Form aufgebracht. Die Ausnehmung 20 a kann ein Gel mit einem Inertfarbstoff zur Hämatokritbestimmung enthalten, während die Ausnehmungen 20 b und 20 c Gele mit Reagenzien zur Umsetzung mit bestimmten Bestandteilen des Plasmas enthalten können.

Bisher wurden Ausführungsformen beschrieben, die aus einem Substrat mit einer Vertiefung oder mindestens einer Art Ein senkung bestanden. Es kann jedoch nach der erfindungsgemäßen Lehre ein Eintauchstab von Vorteil sein, der aus einer be sonders hergestellten Bandrolle aufgebaut ist. In diesem Zu sammenhang wird auf die Fig. 7 verwiesen. Zur Herstellung dieser Vorrichtung wird einem langgestreckten, durchsichtigen Band auf mindestens einer seiner Oberflächen eine Beschichtung mit einem Gel gegeben. Das Gel wird darauf härten gelassen, obwohl zur besseren Handhabung ein gewisser Grad an Bieg samkeit erwünscht sein kann. Das Gel ist ein solches, wie es vorher beschrieben wurde, d h. es enthält die Inertsubstanz zur Verwendung bei der Bestimmung des Hämatokrits in der Blutprobe.

Das erhaltene Band wird in geeignete Verbundkörperlängen 50 geschnitten, wie in der auseinandergezogenen Darstellung der Fig. 7 gezeigt ist. Das Gel 51 zeigt nach oben, während sich darunter das Bandsubstrat 52 befindet. Das Substrat 52 be sitzt an seiner Unterseite eine Klebebeschichtung. Das Ganze wird auf einem ziemlich starren Kunststoffträger 53 befestigt, der verhältnismäßig länger als die Länge 50 ist. Der überstehende Teil kann aus einem Handgriff 54 bestehen, mit dessen Hilfe man den Eintauchstab in eine flüssige Blut probe eintauchen kann, wie oben beschrieben.

Weiter kann das Band gemäß Fig. 7 in einer Form verwendet werden, in der es nicht in Einzelteile geschnitten, sondern als Ganzes in einer Vorrichtung zum automatischen Bestimmen des Hämatokrits verwendet wird. Diese Ausführungsform ist in Fig. 10 dargestellt, wo ein Band 60 mit einer Reihe von Gruppen von Gelen gezeigt ist, die die Form von kleinen Strei fen oder Chips 76 aufweisen. Jede Gruppe der Chips umfaßt ein Chip 76 a, das einen inerten Farbstoff für die Hämatokrit bestimmung aufweist, und zwei weitere Chips 76 b und 76 c, die Reagenzien für zwei weitere Bestimmungen von in dem Blutplasma zu bestimmenden Substanzen enthalten. Das Band 60 wird in der Vorrichtung zum automatischen Bestimmen des Hämatokrits, die in Fig. 6 dargestellt ist, verwendet. Betrachtet man diese Figur von rechts nach links, so erkannt man, daß ein Gelband 60 von einer Beschickungsrolle 61 abgewickelt wird und horizontal längs eines mit Pfeilen angedeuteten Weges wandert. Das Band 60 passiert dabei eine Probenauftrag station 62, bei der Blutproben aufgetropft werden. An der Probenauftragstation 62 ist angrenzend an das Band 60 eine Vibrier-Schüttel-Vorrichtung 71 angeordnet, um die Probe zu mischen und eine Sedimentierung von Erythrozyten in der Blutprobe zu verhindern, während die gelösten Bestandteile des Plasmas in die Gele eindiffundieren. Die Bestimmung der Hämatokritwirkung kann nicht genau erfolgen, wenn diese Sedimentierung der Erythrozyten während der Diffusion des gelösten Anteils des Plasmas in die Gele zugelassen wird. Der Weg und die Wanderungsgeschwindigkeit des Bandes sind derart ausgewählt, daß in dem Gel eine hinreichende Diffu sion stattfindet. Bei der Station 63 wird die verbliebene Blutprobe kurz durch bekannte Maßnahmen abgespült. Bei der nächsten Station 64 wird das Band inkubiert, um eine weitere Diffusion für die Gele 76 b und 76 c zu ermöglichen, so daß ihre Reagenzien mit den zu bestimmenden Bestandteilen im Plasma reagieren können, wie in der oben erwähnten deutschen Patentanmeldung beschrieben. Danach wird das Band 60 einer Ablesestation 65 zugeführt, wo die Flächen, auf denen Reaktionen stattgefunden haben, in herkömmlicher Weise optisch ausgewertet werden. Das Band kann danach durch eine Aufnahmerolle 66 aufgewickelt werden. Das Ablesegerät 65 besteht aus zwei Abschnitten 65 a und 65 b, wobei vom Abschnitt 65 a der Farbumschlag in dem Hämatokritgel 76 a optisch gemessen wird. In dem Abschnitt 65 b werden die Farbumschläge in den Gelen 76 b und 76 c optisch gemessen, um die anwesenden zu bestimmenden Substanzen zu bestimmen. Die optische Messung von Abschnitt 65 a wird einem Informationsspeicher oder anderem Gerät 74 zugeführt, um einen Korrekturfaktor für den Hämatokrit zu erhalten. Der Korrekturfaktor wird dem Abschnitt 65 b erneut eingegeben, um einen korrigierten Wert für die in den Gelen 76 b und 76 c bestimmten Substanzen zu erhalten. Die korrigierten Werte für die zu bestimmenden Substanzen werden anschließend mit einem Aufzeichnungsgerät 75 oder einem anderen geeigneten Gerät aufgezeichnet. Das Gel 76 a kann bereits nach der ersten Diffusionszeit auf seinen Farbumschlag hin, der durch die Hinausdiffusion des Farbstoffes aus dem Gelmaterial herbeigeführt wird, ausgewertet werden, jedoch für Auto matisierungszwecke kann es gemeinsam mit den Gelen 76 b und 76 c an der Auswertungsstation 65 abgelesen werden.

Bei der genannten Ausführungsform kann das Substrat des Bandes aus einem von mehreren bekannten transparenten Kunststoffmaterialien bestehen, wie beispielsweise aus Polyethylenterphthalat (Mylar), Polyethylen, Polypropylen, Methylmethacrylat (Lucite) usw. Eine weitere Vorrichtung zur automatischen Bestimmung des Hämatokrits ist schematisch in Fig. 9 dargestellt. Wiederum ist ein Gelband 60 auf einer Rolle 61 aufgewickelt. Bei dieser Ausführungsform wird der Probentropfen nicht unmittelbar auf das Gelband 60 aufgebracht, sondern es wird eine zweite Beschickungs walze 67 verwendet, die ein für wäßrige Flüssigkeiten durchlässiges Gewebe 68 trägt. Das Gewebe 68 kann aus Cellulose, Celluloseacetat, Polyamid (Nylon) oder anderen netzbaren und für lösliche Substanzen durchlässigen Materialien bestehen. Das Gewebe 68 wird von Rolle 67 abgezogen und wandert längs eines Weges, der eine Proben auftragstation 69 quert. Die Probenauftragstation 69 be liefert das Gewebe 68 mit einem Probentropfen. Der Proben tropfen dringt durch das Gewebe 68 zufolge von Diffusion oder Kapillarwirkung hindurch, so daß die Probe das Gel band 60 durch die Unterseite des Gewebes 68 hindurch be netzen kann, wenn es mit dem Gelband bei der Stelle 70 in Berührung tritt. Es wird eine hinreichende Zeit benötigt, um die Diffusion der im Plasma gelösten Anteile der Probe aus dem Band 68 in das Gelband 60 zu bewirken. Nach dem sich das Gewebe 68 und das Band 60 getrennt haben, wird das Gewebe 68 von einer Aufnahmerolle 72 aufgenommen. An dem Band 60 kann an der Stelle 70 ein Vibrations-Schüttel gerät 71 angeordnet sein, um die Sedimentierung von Erythrozyten und damit den oben erwähnten Hämatokriteffekt zu verhindern. Nach der Diffusion des im Plasma Gelösten in das Gel setzt das Band 60 seine Wanderung, wie durch die Pfeile dargestellt, bis zu einem Inkubator 64 fort, wie er bereits im Zusammenhang mit Fig. 8 beschrieben worden ist. Danach wird das Band zu der Meßstation 65 zur Analyse geführt. Die Ableseeinrichtung 65 besteht aus zwei Abschnitten 65 a und 65 b, wovon der Abschnitt 65 a den Farbumschlag in dem Hämatokritgel 76 a optisch mißt, während der Abschnitt 65 b die Farbumschläge in den Gelen 76 b und 76 c zur Bestimmung der vorhandenen zu bestimmenden Substanzen optisch mißt. Die von dem Abschnitt 65 a durchgeführte optische Messung wird einem Informations speicher oder anderem Gerät 74 zugeführt, um einen Häma tokrit-Korrekturfaktor zu erhalten. Der Korrekturfaktor wird erneut in das Ablesegerät 65 b eingespeist, um einen korrigierten Wert für die zu bestimmenden Substanzen in den Gelen 76 b und 76 c zu erhalten. Die berichtigten Werte für die zu bestimmenden Substanzen werden anschließend durch ein Aufzeichnungsgerät 75 oder ein anderes geeignetes Ausgangsgerät aufgezeichnet. Schließlich wird das Band 60 auf die Rolle 66 aufgewickelt.

Die Vorrichtung gemäß der Erfindung eignet sich, wie man sieht, zur Durchführung verschiedener klinisch chemischer Bestimmungen mit Gesamtblutproben. Das Band 60 gemäß Fig. 10 kann aus Polyethylenterphthalat (Mylar), Poly styrol oder anderem transparentem Material bestehen.

Die oben erwähnten Chips 76 gemäß Fig. 10 sind auf dem Band 16 im Abstand voneinander aufgeklebt. Die erste Reihe von Chips 76 a wird dazu verwendet, um den Hämatokriteffekt auf die Blutprobe zu ermitteln, so daß die Bestimmungen der Substanzen in den ersten Gelen 76 b und 76 c korrigiert werden können. Die zweite Reihe von Chips 76 b kann bei spielsweise sämtlich für eine Albuminbestimmung verwendet werden. Die dritte Reihe von Chips 76 c kann beispielsweise in ihrer Gesamtheit für eine Glucosebestimmung verwendet werden. Weitere Chips 76 d, 76 e usw. (nicht dargestellt) können auf dem Band 60 ebenfalls vorgesehen werden, um noch weitere Bestimmungen, wie die von Lactatdehydroge nase usw., durchzuführen.

Die Meßstation 65 ist derart eingerichtet, daß sie die Umsetzungsergebnisse, die in den entsprechenden Chips erhalten werden, hinsichtlich jeder einzelnen Blutprobe in korrelierter Weise analysiert.

Bei dem beschriebenen System ist eine Reihe einzelner Chips 76 dargestellt. Die Chips können aber auch konti nuierlich ausgebildet sein, so daß parallel verlaufende, längliche Streifen verwendet werden können, d. h. einer für jede der ausgewählten Bestimmungen.

Linearität in einem chemischen Bestimmungssystem ist ein wichtiges Kriterium für eine zuverlässige Durchführ barkeit. Linearität impliziert eine Reaktionskinetik erster Ordnung, so daß die Konzentration der Testsub stanzen leicht bestimmt werden kann. Bekanntlich ist es zur Erzielung von Linearität erforderlich, in dem Mate rial überschüssiges Reagenz vorliegen zu haben. Dies wird in dem beschriebenen Gelsystem dadurch erreicht, daß man die Bestimmung in einem zweistufigen Verfahren durchführt.

Gewisse zu bestimmende Substanzen können auch durch Messung der Reaktionsgeschwindigkeit von Enzymen, die in dem Gel enthalten sind, bestimmt werden.

Der Betrieb der genannten Systeme zur Bestimmung von zu bestimmenden Substanzen wird im folgenden näher beschrieben. Zwischen der bestimmenden Oberfläche des Gels und der Probe wird für eine kurze Zeitdauer, d. h. eine solche von der Größenordnung von 10 bis 60 s, eine Berührung herge stellt. Danach wird die Probe entfernt. Dadurch wird eine Diffusion der zu bestimmenden Bestandteile der Probe in die Oberflächenregion des Gels ermöglicht. Selbstver ständlich können die Bedingungen im einzelnen leicht be stimmt werden, bei denen die Endringtiefe der Moleküle der zu bestimmenden Substanz im Verhältnis zur Geldicke klein ist. Dieses Verfahren schafft ein Reservoir von zu bestimmender Substanz in der Nähe der äußeren Oberfläche des Gels.

Um die höchste Effektivität zu erzielen muß eine Weiter diffusion der zu bestimmenden Substanz in das Gel nach der Entfernung der Flüssigkeitsprobe von der Gelober fläche stattfinden. Dies erlaubt die Verteilung der ge lösten Bestandteile des Plasmas der Probe durch das Gel hindurch. Die anschließende Diffusion ist einer Vermi schung einer bekannten Verdünnung der Probensubstanz in der vergleichbaren Lösungschemie äquivalent. Die löslichen Bestandteile des Plasmas der Probe werden nunmehr mit gleicher Konzentration an allen Punkten durch das Gel hindurch verteilt, wobei die Konzentration niedriger ist als in der zu untersuchenden ursprünglichen Probe. Durch diese Anordnung eines zweistufigen Diffusionsver fahrens werden die üblichen bekannten Verfahren mit ali quoten Teilen und Verdünnungsverfahren ersetzt. Dieses Verfahren eignet sich auch zur Gewinnung eines bestimmten Teiles sowie zur Verdünnung von störenden Bestandteilen in der Probe, wodurch ihr Einfluß auf die Analyse ver ringert wird. Wegen der Verdünnung der Probe sind weiter niedrigere Reagenzienkonzentrationen erforderlich, um vollständig mit der Probe umgesetzt zu werden. Derartige günstige Bedingungen sind für das Auftreten von Reaktions kinetiken erster Ordnung sowie für Eichkurven, die linear mit der Konzentration der zu bestimmenden Substanz sind, von Vorteil. Jedoch ist die Zeitabhängigkeit der Umsetzung, wie oben erwähnt, nicht linear, weil die Diffusionsstrecke eine Funktion der Quadratwurzel der Zeit ist. Somit er zeugen Irrtümer, die beim Messen der Zeit, während der das Gel einer Flüssigkeitsprobe ausgesetzt ist, auftreten, geringere analytische Fehler, die lediglich der Quadrat wurzel der Zeit proportional sind.

Im vorliegenden Falle wird der Ausdruck Gel für ein Mate rial verwendet, in dem eine polymere Substanz eine Matrix mit einer gegebenen dreidimensionalen Form bildet. Obwohl der Mechanismus eines derartigen Verhaltens nur teilweise aufgeklärt ist, enthalten derartige Materialien verhältnis mäßig große Mengen an Lösungsmittel, das einen integrie renden Bestandteil des Gelmaterials bildet. Die Auswahl einer Matrix ist selbstverständlich variabel und hängt von dem beabsichtigten Verwendungszweck ab. Geeignete Matrixmaterialien für wäßrige Gelmaterialien sind bei spielsweise hydrophile Materialien, wie natürlich vorkom mende Substanzen, wie Gelatine, Gelatinederivate, hydro phile Cellulosederivate, Polysaccharide, wie Dextran, Gummiarabikum, Agarose und dgl., sowie synthetische Sub stanzen, wie wasserlösliche Polyvinylverbindungen, wie Poly(Vinylalkohol) und Poly(Vinylpyrrolidon), Acrylamid polymerisate usw. An die erfindungsgemäßen Zwecke ist jede Analysenmethode anpaßbar. Zwar sind die Vorrichtung und das Verfahren gemäß der Erfindung zur routinemäßig durch geführten Blutchemie, wie der Bestimmung von Glucose, Blutharnstoff, Stickstoff, Harnsäure, Albumin, Kreatinin, Bilirubin, Phosphat, Gesamtprotein, Amylase, Calcium usw., besonders geeignet, doch können zahlreiche andere analy tische Bestimmungen, die periodisch durchgeführt werden, automatisch mit ihnen vorgenommen werden.

Die Vorrichtungen zum automatischen Bestimmen des Häma tokrits gemäß Fig. 8 und 9 sind oben in bezug auf ein Verfahren erörtert worden, bei dem der Hämatokrit unab hängig von den Blutchemie-Bestimmungen bestimmt worden ist, doch ist es auch möglich, daß mit derartigen Vor richtungen der Hämatokrit und die anderen zu bestimmenden Substanzen unter Verwendung desselben Gelmediums bestimmt werden können. Bei einer derartigen Vorrichtung enthalten sämtliche Chips 76 eine inerten Farbstoff zusammen mit den für die bestimmte zu bestimmende Substanz erforderlichen Reagenzien. Nach der Eindiffundierung der im Plasma gelösten Bestandteile aus der Blutprobe in die Gele und der nachfolgenden Inkubation bei der Station 64 mißt die Ablesestation 65 zwei Farbumschläge. Dieses Farbumschläge können mit Hilfe üblicher fotometrischer Mittel abgelesen werden. Der erste der beiden Farbumschläge bezieht sich auf den Austritt der Inertsubstanz aus den Gelen als Funktion der Größe des Hämatokrits in den Blutproben, wie oben im Zusammenhang mit Fig. 11 erläutert wurde. Die Messung dieser Größe kann innerhalb oder außerhalb des Gelmaterials durchgeführt werden, da der Austritt der Inertsubstanz aus dem Material in dem Gel selbst oder in dem Blut, das auf dem Gel vorhanden ist, beobachtet werden kann. Der zweite der beiden Farbumschläge bezieht sich auf die chemische Umsetzung in dem Gel zwischen der zu bestimmenden Substanz und ihrem spezifischem Reagenz. Der zweite Farbumschlag der Reaktion mit dem zu bestim menden Bestandteil ergibt die Menge an zu bestimmendem Bestandteil im Blutplasma ohne Hämatokritkorrekturwert. Die Ablesestation 65 würde den Hämatokrit aus dem ersten Farbumschlag bestimmen und den erhaltenen Wert automa tisch über die Informationsspeichereinrichtung 74 für die Konzentration von zu bestimmender Substanz aus dem zweiten Farbumschlag korrigieren.

Bei einem derartigen Verfahren würde es erforderlich sein, daß der Farbbereich für die Farbstoffauswanderung mit der Farbänderung, die durch die Reaktion zwischen Reagenz und zu bestimmendem Bestandteil nicht stört. Außerdem ist es erforderlich, daß der Inertfarbstoff nicht mit dem Reagenz reagiert, was entweder die Farbablesung oder die Diffusionswirkungen beeinflußt.

Im folgenden wird die Art der Hämatokritkorrektur er örtert.

In Fig. 14 ist eine typische Bestimmung (im vorliegenden Falle von Albumin) für Blutproben mit unterschiedlichem Hämatokrit durchgeführt worden. Die Kurve a zeigt den wahren (korrigierten) Albumingehalt in den Blutproben, während die Kurve b die Wirkung des ansteigenden Häma tokrits auf die Absorption bei 630 nm erläutert. Wie ersichtlich, sinkt die Absorption für die Albuminbestim mung in dem Maße, wie der Hämatokrit in den Blutproben ansteigt. Wie oben angeführt, nimmt man an, daß die Blut zellen die Geloberfläche blockieren und die Diffusion der im Plasma gelösten Bestandteile der Blutprobe in das Gel behindern. Demzufolge werden weniger lösliche Bestand teile des Plasmas und damit weniger Albumin innerhalb des Gels nach einer bestimmten Zeit vorhanden sein. Daher ist die Umsetzung zwischen dem zu bestimmenden Albumin und dem Reagenz zufolge des Hämatokriteffektes schwächer. Diese schwächere Umsetzung resultiert in der beobachteten Abnahme der Absorption.

Aus Daten, die für jede zu bestimmende Substanz gesam melt werden, können die Wirkungen des ansteigenden Häma tokrits in den Blutproben bestimmt werden. Dadurch werden Korrekturfaktoren erhalten, die zu Berichtigung der optischen Ablesungen dienen, damit diese die wahren Werte für die vorhandene Menge an zu bestimmender Substanz wiedergeben, wie für die Albuminbestimmung in Fig. 14 dargestellt.

Fig. 13 zeigt ein Diagramm, das die Hämatokritbestim mungen für verschiedene Blutproben korreliert, die einer seits nach dem Diffusionsverfahren gemäß der Erfindung und andererseits für diese Proben nach üblichen Zentri fugierverfahren durchgeführt wurden. Wie sich aus der Kurve ergibt, sind die Hämatokritwerte, die nach dem Diffusionsverfahren gemäß der Erfindung bestimmt worden sind, denen äquivalent, die von üblichen Zentrifugierverfahren her stammen.

Die Erfindung wird im folgenden an Hand von Beispielen näher erläutert.

Beipiel 1 Herstellung von Vitamin B₁₂ in Agarosegel

In einem 25-ml-Erlenmeyerkolben wurden 0,1 g Agarose und 9,00 ml mit Phosphat gepufferter Salzlösung 5 min in einem kochenden Wasserbad gehalten, um die Agarose zu lösen. Danach ließ man auf 50°C abkühlen und fügte 1,0 ml 1%ige Vitamin B₁₂-Lösung in mit Phosphat gepufferter Salzlösung hinzu. Die Gelstäbe wurden anschließend durch Einbringen von zwei bis drei Tropfen dieser warmen Lösung in die Ver tiefungen und Abdecken der Vertiefungen mit einer Kunst stoffabdeckung hergestellt. Wenn die Gele nicht unmittel bar danach verwendet werden, können sie bei Raumtemperatur in einem feuchten Behälter aufbewart werden. Die rote Farbe der Gele erwies sich als sehr stabil bei mehrmonatiger Aufbewahrung bei Raumtemperatur oder im Kühlschrank.

Die mit Phosphat gepufferte Salzlösung enthielt die folgenden Bestandteile je Liter: 80 ml 0,1 m Dinatriumhydrogen phosphat, 20 ml 0,1 m Kaliumdihydrogenphosphat, 8,5 g Kochsalz und 0,2 g Natriumacid. Der pH-Wert betrug 7,3.

Beispiel 2 Bestimmung des Gelhämatokrits durch Ausdiffundieren von Vitamin B₁₂ aus dem Gelmaterial

Die anfängliche Absorption bei 540 nm wird für jeden Gel stab abgelesen, wobei als Bezugswert eine Blindprobe mit Agarosegel dient. Die Gelstäbe werden anschließend in 1,5 ml Gesamtblut von bekanntem nach der Zentrifugier methode bestimmten Hämatokrit eingetaucht. Die Eintauch dauer beträgt typischerweise 10 min. Die Gelstäbe werden danach aus dem Blut herausgenommen und rasch frei von Blut gespült, indem man sie in zwei Bechergläser mit sauberer, mit Phosphat gepufferter Salzlösung eintaucht. Danach wurde die Absorption bei 540 nm erneut bestimmt. Schließlich wurde die Änderung der Absorption 540 nm Δ A=anfängliche Absorption minus Endabsorption be stimmt. Die experimentellen Ergebnisse wurden mit Δ A bei 540 nm als Ordinate gegen den Zentrifugierhämatokrit als Abszisse aufgetragen. In Fig. 11 sind die Ergebnisse für 49 Gesamtblutproben dargestellt. Jeder Zentrifugier hämatokrit bestand aus dem Mittelwert einer Doppelbe stimmung, die nach der 7-min-Micromethode erfolgt war.

Beispiel 3 Herstellung von Gelen für die Albuminbestimmung

In einem 25-ml-Erlenmeyerkolben wurden 150 g Agarose mit 7,0 mg Succinatpuffer vom pH 4,4 versetzt. Die Agarose wurde durch Eintauchen des Kolbens während etwa 5 min in kochendes Wasser gelöst. Danach wurden 3,0 ml einer 1,5 millimolaren Bromcresol Grün-Lösung zugesetzt und das Ganze vermischt und nicht weiter erhitzt. Daraus wurden Gelstäbe hergestellt, wie für die B₁₂/Agarose- Gele beschrieben.

Der Succinatpuffer wurde wie folgt hergestellt: In 800 ml destilliertem Wasser wurden 8,85 g (75 mM) Bernsteinsäure gelöst und das Ganze durch Zusatz von Natriumhydroxid- Plätzchen auf einen pH-Wert von 4,2 gebracht. Danach wurden 5,0 ml einer 30%igen oberflächenaktiven Lösung (Brÿ-35) und 5,36 g Natriumchlorid zugesetzt und das Ganze auf 1 l aufgefüllt.

Beispiel 4 Bestimmung für Gelalbuminbestimmung

Die anfängliche Absorption jedes Geleintauchstabes wurde bei 630 nm abgelesen. Danach wurde ein Tropfen Blut, Plasma oder Serum genau 30 s lang auf der Oberfläche des Gels ge halten und danach rasch in zwei Waschvorgängen mit sauberem Succinatpuffer abgewaschen. Die Endabsorption wurde nach 20 min bei 630 nm abgelesen. Ein Diagramm, in dem die Absorptionsänderung Δ A bei 630 nm gegen den Hämato krit bei fester Plasmaalbuminkonzentration aufgetragen ist, ist in Fig. 14 dargestellt, die den Hämatokriteffekt erläutert.

Im vorliegenden Falle bezieht sich im allgemeinen der Ausdruck "Inerstsubstanz" auf ein Material, das in einem Lösungsmittel löslich ist und sich gegenüber der Zelle oder der Teilchenfraktion und auch gegenüber den im Lösungsmittel gelösten Substanzen inert verhält. Ins besondere darf sich die Inertsubstanz nicht an gelöste Moleküle, Zellen oder teilchenförmiges Material binden oder mit diesen reagieren. Sie darf weder passiv noch aktiv in der Innere von Zellen oder Teilchen eindringen. Dieser Innenraum bleibt daher ein ausgenommenes Volumen. Außderdem muß dieses Material einen im Hinblick auf die mittlere Porengröße des Gelmaterials genügend niedrigen effektiven molekularen Durchmesser aufweisen, so daß es in diese Materialien und über die Lösungsmittel/Gel-Grenze diffundierbar ist.

Die Verwendung verschiedener inerter Farbstoffe wurde für die Hämatokritbestimmung vorgeschlagen. Einer dieser Farbstoffe ist Vitamin B₁₂ (Cyanocobalamin), das eine gute Wahl darstellt, weil es leicht in reiner Form er hältlich ist und sich sehr wenig an Plasmaproteine bindet. Menschliches Plasma enthält ungefähr 100 ng/ml an Vita min B₁₂ bindbare Proteine, die Transcobalamine genannt werden (Literatur: Allen, R.H. und Majerus, P.W.: Journal of Bioligical Chemistry 23 (10); 7695, (1972). Außerdem besitzt Vitamin B₁₂ einen Spektralbereich, der sich leicht mit fotometrischen Methoden beobachten läßt. Inerte Farb stoffe, die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren zur Be stimmung des Hämatokrits einsetzbar sind, müssen insbe sondere die folgenden Erfordernisse erfüllen:

(a) Sie müssen wasserlöslich sein;
(b) sie müssen eine geringstmögliche elektrische Ladung aufweisen, und
(c) sie müssen, wenn optisch gemessen wird, eine große molare Absorptionsfähigkeit im sichtbaren Bereich, vor zugsweise bei einer Wellenlänge besitzen, die unterschieden werden kann.

Vitamin B₁₂ erfüllt die obigen Anforderungen. Es ist ein großes Molekül (Molekulargewicht 1355), das lediglich eine negative Ladung im Nukleotid besitzt. Die dreifache positive Ladung am Kobaltatom ist durch die Bindung des Kobaltatoms an sechs Leganden stark delokalisiert. Die Abwesenheit hochgeladener Gruppen ist erforderlich, so daß das Molekül nicht an Albumin und andere Proteine ge bunden wird. Die Tatsache, daß es ein großes Molekül ist, ist außerdem von Vorteil, weil dadurch Bindungen zufolge sterischer Hinderung unterbleiben. Unter elektrischer Neutralität ist ein geringstmögliches Vorhandensein ionischer Gruppen zu verstehen, wie beispielsweise CO₂-; NH₃+; NR₂H+; NRH₂+; SO₃-; usw., die herkömmlicher weise dazu verwendet werden, um bei polyaromatischen Farbstoffen Wasserlöslichkeit herzustellen.

Die Löslichkeit des Vitamin B₁₂-Moleküls wird durch Poly hydroxylierung mit eine Anzahl von Hydroxylgruppen und Etherbrücken erzielt. Die Amidogruppen

sind
ebenfalls polar. Die Löslichkeit des Moleküls wird jedoch hauptsächlich von dem Nucleotid abgeleitet.

Claims

1. Vorrichtung zum Bestimmen des Hämatokrits in einer Blutprobe, gekennzeichnet durch ein poröses Material (13, 51, 76) mit einer vorher bestimmten Oberfläche, auf die eine bestimmte Menge des zu analysierenden Blutes aufbringbar ist, und eine gegen über der Blutprobe inerte Substanz, die innerhalb des Materials in vorherbestimmter Konzentration vorhanden und über die vorherbestimmte Oberfläche aus dem Material herausdiffundierbar ist, wenn das Blut auf die vorher bestimmte Oberfläche aufgebracht wird.

2. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Material ein Gel ist.

3. Vorrichtung gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Gel ein Hydrocolloid ist.

4. Vorrichtung gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Gel durchsichtig ist.

5. Vorrichtung gemäß Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Gel aus Gelatine, einem Gelatinederivat, einem hydrophilen Cellulosederivat, einem Polysaccharid, Gummi arabikum, Agarose, einer wasserlöslichen Polyvinylverbin dung oder einem Acrylamidpolymerisat besteht.

6. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichent, daß die inerte Substanz eine gefärbte Indikatorsubstanz ist, die optisch nachweisbar ist.

7. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Inertsubstanz polyhydroxyliert ist.

8. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Inertsubstanz ein Glycosid ist.

9. Vorrichtung gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Inertsubstanz Vitamin B₁₂ (Cyanocobalamin) ist.

10. Vorrichtung gemäß Anspruch 1 zur zusätzlichen Bestimmung einer Substanz in der Blutprobe, dadurch gekennzeichnet, daß das poröse Material außerdem ein Reagenz zur Umsetzung mit dieser Substanz enthält.

11. Verfahren zum Bestimmen des Hämatokrits in einer Blutprobe, dadurch gekennzeichnet, daß man

(a) eine Oberfläche eines porösen Materials, das eine Inertsubstanz enthält, mit einer Blutprobe in Be rührung bringt, wobei die Inertsubstanz gegenüber der Blutprobe inert ist;
(b) mindestens einen Teil des im Plasma der Blut probe Gelösten über die Oberfläche in das Material ein diffundieren läßt;
(c) mindesten einen Teil der inerten Substanz aus dem Material über die Oberfläche, die mit dem Blut in Berührung steht, herausdiffundiern läßt und
(d) die Konzentration der inerten Substanz, die aus dem Material herausdiffundiert ist, als Maß für den Hämatokrit der Blutprobe bestimmt.

12. Vorrichtung gemäß Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man außerdem

(e) eine Anzahl poröser Materialien auf einem ge meinsamen Träger vorsieht;
(f) jedes der porösen Materialien mit je einer Blut probe in Berührung bringt und
(g) die Konzentration an der inerten Substanz, die aus jeden der porösen Materialien herausdiffundiert ist, als Maß für den Hämatokrit der entsprechenden Blutprobe, mit der es in Berührung stand, bestimmt.

13. Vorrichtung gemäß Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man die Diffundierschritte (b) und (c) auf eine bestimmte Zeitdauer beschränkt.

14. Verfahren gemäß Anspruch 12 zur zusätzlichen Bestimmung einer Substanz in der Blutprobe, dadurch gekennzeichnet, daß das Material ein Reagenz zur Umsetzung mit dieser Substanz in den gelösten Anteil des Plasmas enthält und daß man außerdem

(e) die Umsetzung des Reagenzes mit der zu bestim menden Substanz mißt.

15. Verfahren gemäß Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man außerdem

(e) die Menge an Inertsubstanz mißt, die in dem Material nach der Diffusion als Maß für den Hämatokrit der Blutprobe verbleibt.

16. Verfahren gemäß Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß man außerdem

(f) den Meßschritt (e) durch einen Faktor korrigiert, der von dem Hämatokrit der Blutprobe abhängt.

17. Verfahren gemäß Anspruch 14, dadurch gekennzeichnet, daß man die Diffusion der Inertsubstanz eine erste Färbung und die Umsetzung des Reagenzes mit der zu bestimmenden Substanz eine zweite Färbung erzeugen läßt, die ein Maß für den Hämatokrit der Blutprobe bzw. die Menge an zu be stimmender Substanz in der Blutprobe darstellen, und daß man weiter

(f) den Hämatokrit und die Konzentration des zu be stimmenden Bestandteils der Blutprobe aus der ersten und zweiten Färbung bestimmt.

18. Verfahren gemäß Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man außerdem

(e) die Oberfläche des Materials zur Entfernung von auf dieser Oberfläche nach Durchführung des Diffusions schrittes (b) verbleibener Anteile der Blutprobe wäscht.

19. Verfahren gemäß Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Diffundierschritt (b) anwendet, bei dem man

(f) die Blutprobe auf einen Träger aufbringt und
(g) den Träger mit dem Material in Berührung bringt, um die Diffusion der gelösten Bestandteile des Plasmas der Blutprobe in das Material zu bewirken.

20. Verfahren gemäß Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, daß man als Träger ein poröses Material verwendet und daß man im Aufbringschritt (f) das poröse Material mit der Blutprobe imprägniert.

21. Verfahren gemäß Anspruch 11, wobei man ein transpa rentes Material und eine farbige Inertsubstanz verwendet, dadurch gekennzeichnet, daß man weiter

(d) den Hämatokrit der Blutprobe dadurch bestimmt, daß man die Farbtiefe der Inertsubstanz in dem Material bestimmt.

22. Verfahren gemäß Anspruch 11, wobei man ein Material mit einem Gehalt an einem Enzym zur Umsetzung mit einem zu bestimmenden Stoff aus der Blutprobe verwendet, dadurch gekennzeichnet, daß man weiter

(d) die Umsetzungsgeschwindigkeit des Enzyms be stimmt.

23. Verfahren gemäß Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man im Kontaktierungsschritt (a) die Blutprobe derart aufbringt, daß sie eine vorherbestimmte Oberfläche des Materials überlappt.

24. Verfahren gemäß Anspruch 23, dadurch gekennzeichnet, daß man die vorherbestimmte Oberfläche in ebener Form vorsieht.

25. Verfahren gemäß Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, daß man in der Kontaktierungsstufe (a) die Blutprobe auf der Oberfläche des Materials schüttelt.

26. Vorrichtung gemäß einem der Ansprüche 1, 3 bis 5 und 7 bis 9, enthaltend eine Gelmasse (13, 51, 76) mit einer vorherbestimmten Oberfläche, die der Blutprobe ausgesetzt ist und durch die bei dem Kontakt mit der Blutprobe während einer bestimmten Zeitdauer ein Teil der im Plasma gelösten Bestandteile aus der Blutprobe in die Gelmasse diffundierbar ist; eine in der Gelmasse enthaltene inerte Substanz und einen Träger (11, 15, 19, 53, 60) zur Unterstützung der Gelmasse und Begrenzung der vorherbestimmten Ober fläche.

27. Vorrichtung gemäß Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet, daß der Träger ein starres Substrat (53) umfaßt, das die Gelmasse (51) an einem Ende und an dem anderen Ende einen Handgriff (54) trägt sowie einen Klebeteil (52) zur Befe stigung der Gelmasse an dem einen Ende des Substrates (53) aufweist, und daß ein Ende des Substrates (53) als Eintauch stab in die Blutprobe eintauchbar ist.

28. Vorrichtung gemäß Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet, daß der Träger (11, 15, 19) eine längliche Substratober fläche umfaßt, an deren einem Ende eine Vertiefung (12, 16, 20) zur Aufnahme der Gelmasse (13) vorgesehen ist.

29. Vorrichtung gemäß Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet, daß die Gelmasse (13, 51, 76) außerdem ein Reagenz zur Umsetzung mit einer zu bestimmenden Substanz der Blutprobe enthält.

30. Vorrichtung gemäß Anspruch 29, dadurch gekennzeichnet, daß das Substrat ein langgestrecktes, biegsames Gewebe (60) ist und die Gelmasse (76) mindestens einen Streifen umfaßt, der von dem Gewebe gehaltert ist und eine gegebene Menge eines Reagenzes enthält, mit dem der zu analysierende Bestandteil umsetzbar ist.

31. Vorrichtung gemäß Anspruch 29, dadurch gekennzeichnet, daß das Substrat ein langgestrecktes, biegsames Gewebe (60) ist und die Gelmasse (76) mindestens zwei getrennte Streifen (76 a, 76 b) umfaßt, die von dem Gewebe gehaltert sind und die gegebene Mengen unterschiedlicher Reagenzien enthalten, mit denen verschiedene zu bestimmende Bestand teile umsetzbar sind.

32. Vorrichtung gemäß Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet, daß sie weiter einen Träger (68) und Mittel zum Bewegen von Teilen des Trägers in überlappende Berührung mit der Gelmasse (76) enthält, wobei der Träger die Blutprobe haltert und mindestens einen Teil der im Plasma gelösten Bestandteile der Blutprobe von dem Träger in die Gelmasse diffundierbar ist.

33. Vorrichtung gemäß Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet, daß der Träger (11, 15, 19, 53, 60) aus Polyethylenter phthalat, Polyethylen, Polypropylen oder Methylmethacrylat besteht.

34. Vorrichtung gemäß Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet, daß der Träger (11, 15, 19, 53, 60) aus durchsichtigem Material besteht.

35. Vorrichtung gemäß Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet, daß die Inertsubstanz in demselben Maße aus der Gelmasse (13, 51, 76) diffuniert, wie die im Plasma gelösten Be standteile in der Gelmasse eindiffundieren.

36. Vorrichtung zum automatischen Bestimmen des Häma tokrits von aufeinanderfolgenden Blutproben gemäß Anspruch 1, gekennzeichnet durch ein kontinuierliches Substrat (60), das eine Anzahl poröser Materialien (76) trägt, wobei mindestens ausgewählte Vertreter dieser Materialien (76) eine bezüglich der Blutproben inerte Substanz enthalten, die eine bekannte Konzentration aufweist und aus den Materialien hinausdiffundierbar ist, ferner eine Proben aufbringstation (62, 69) zum selektiven Aufbringen von Blutproben auf die Materialien während einer bestimmten Zeitdauer sowie eine Meßstation (65) zur Bestimmung der Menge der Inertsubstanz, die aus den Materialien hinausdiffundiert ist, als Maß für den Hämatokrit der entsprechenden Blutprobe.

37. Vorrichtung gemäß Anspruch 36, dadurch gekennzeichnet, daß die Probenaufgabestation (62, 69) Mittel zum Aufbringen der Blutprobe in Tropfenform auf die porösen Materialien (76) umfaßt.

38. Vorrichtung gemäß Anspruch 36, dadurch gekennzeichnet, daß die Probenaufbringstation (69) Mittel zur Aufbringung der Blutproben in Form aufeinanderfolgender Tropfen auf ein bewegbares Gewebe (68) sowie Mittel zur Vorwärtsbewe gung des Gewebes (68) und zum Inberührungbringen des Gewebes mit den ausgewählten porösen Materialien (76), die auf dem kontinuierlichen Substrat (60) gehaltert sind, enthält.

39. Vorrichtung gemäß Anspruch 36, worin ein Teil der im Plasma gelösten Substanzen der Blutprobe während einer bestimmten Zeit in die porösen Materialien (76) diffun diert wird, dadurch gekennzeichnet, daß es weiter Mittel (63) zur Entfernung nichtdiffundierter Anteile der Probe von den porösen Materialien nach dieser Zeitdauer enthält.

40. Vorrichtung gemäß Anspruch 36, dadurch gekennzeichnet, daß jedes der porösen Materialien (76) eine Anzahl von Gelkörpern (76 a, b, c) enthält, die eine gegebene Menge an Reagenz zur Umsetzung mit unterschiedlichen zu bestim menden Substanzen in der Probe enthalten, und daß die Meßstation (65) Mittel zum Messen der Umsetzung in jedem der reagenzhaltigen Gelkörper in korrelierter Weise ent hält.

41. Vorrichtung gemäß Anspruch 36, dadurch gekennzeichnet, daß die Menge an Reagenz in jedem Gelkörper (76 a, b, c) im Überschuß über die Menge an den unterschiedlichen zu bestimmenden Substanzen, die in den Gelkörper während der bestimmten Zeitdauer eindiffundieren, vorhanden ist.

42. Vorrichtung gemäß Anspruch 36, dadurch gekennzeichnet, daß die Probenaufbringstation (62, 69) außerdem eine Schütteleinrichtung (71) zum Schütteln der Blutproben aufweist.