DE2813286A1

DE2813286A1 - In 3'-stellung oxygenierte derivate von 4'-desoxy-vincaleukoblastin a und b sowie verwandte 1-formylverbindungen

Info

Publication number: DE2813286A1
Application number: DE19782813286
Authority: DE
Inventors: Gloria Crosland Pascal; Gerald Lee Thompson
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1977-03-30
Filing date: 1978-03-28
Publication date: 1978-10-05
Also published as: HU182482B; US4115388A; IE780610L; NL7803253A; CH634849A5; AR224342A1; GB1596235A; BE865406A; IE46692B1; CA1097628A; IL54357A0; JPS53130699A; FR2385724B1; IL54357A; IT1096161B; IT7821726A0; FR2385724A1

Description

In 3'-Stellung oxygenierte Derivate von 4'-Desoxy-vancaleukoblastin "A" und "B" sowie verwandte 1-Formy!verbindungen

Die Erfindung betrifft 3'-Hydroxy- und 3'-Ketoderivate von
4'-Desoxy-vincaleukoblastin (Desoxy-VLB "A"), 4'-Desoxyleurosidin (Desoxy-VLB "B"), 4'-Desoxyvincristin und 4'-Desoxy-1-desmethyl-l-formylleurosidin und verwandte 4-Desacetyl- und C-3-Carboxamid-Derivate, die sich als Antitumormittel bei
Säugetieren eignen, sowie ein Verfahren zu ihrer Herstellung aus Leurosin als Ausgangsmaterial.

Verschiedene natürlich vorkommende, aus Vinca rosea erhältliche Alkaloide haben sich als bei der Behandlung von experimentell erzeugten bösartigen Tumorerkrankungen bei Tieren aktiv erwiesen. Unter diesen Alkaloiden sind zu nennen: Leurosin
(US-PS 3 370 057), Vincaleukoblastin (Vinblastin), das im
folgenden als VLB bezeichnet wird (US-PS 3 097 137)» Leurosidin (Vinrosidin) und Leurocristin (VCR oder Vincristin) (beide in US-PS 3 205 220), Desoxy-VLB "A" und "B", /Tetrahedron Letters,. 783 (1968)_7 (Desacetylleürosinhydrazid ist dort

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ebenfalls erwähnt), 4-Desaeetoxyvinblastin (US-PS 3 954 773; 4-Desacetoxy-3^f-hydroxyvinblastin (US-PS 3 944 554); Leurocolombin (US-PS 3 89O 325), Leuroformin (N-Formylleurosin, siehe BE-PS 811 110) und Vincadiolin (US-PS 3 887 565). Zwei dieser Alkaloide, VLB und Leurocristin, werden gegenwärtig als Arzneimittel für die Behandlung von bösartigen Tumorerkrankungen bei Menschen, insbesondere von Leukämien und verwandten Krankheiten vertrieben.

Die dinieren Indol-Dihydroindol-Alkaloide, die aus Vinca rosea erhältlich sind, können durch die weiter unten angegebene Formel I wiedergegeben werden. Für die Verbindung VLB besitzen die einzelnen Reste in Formel I die folgende Bedeutung: R =

2 "5 4

Acetoxygruppe, R = Methylgruppe, R-^ = Hydroxylgruppe, R = Ethylgruppe, R⁵ und R = Wasserstoff und R = Methoxygruppe; für die Verbindung Vincristin haben die Reste die folgende Be-

1 2 3

deutung: R = Acetoxygruppe, R = Formylgruppe, R = Hydroxylgruppe, R = Ethylgruppe, R⁵ und R = Wasserstoff und R = Methoxygruppe; für Leurosidin besitzen die Reste die folgende Bedeutung: R = Acetoxygruppe, R = Methylgruppe, B^J - Ethylgruppe, R = Hydroxylgruppe, B? und R = Wasserstoff und R = Methoxygruppe; für Desoxy-VLB "A" besitzen die Reste die fol-

1 2 3

gende Bedeutung: R = Acetoxygruppe, R = Methylgruppe, Br, R^ und R = Wasserstoff, R = Ethylgruppe und R = Methoxygruppe; für Desoxy-VLB "B" besitzen die Reste R¹, R², R^, R

und R dieselbe Bedeutung wie für die Verbindung D.esoxy-VLB

3 4

"A", während der Rest R eine Ethylgruppe und der Rest R ein Wasserstoffatom bedeuten; für Leurosin besitzen die Reste die

1 2 "³I

folgende Bedeutung: R = Acetoxygruppe, R = Methylgruppe, R ^

4 5
= Ethylgruppe, R und Br bilden zusammengenommen einen OC-

ß Q

Epoxidring, R = Wasserstoff und R = Methoxygruppe.

Leuroformin hat die gleiche Struktur wie Leurosin mit der Aus-

nähme, daß R eine Formy!gruppe statt einer Methylgruppe bedeutet. Leurocolombin und Vincadiolin sind 2'-Hydroxy-VLB bzw.

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3'-Hydroxy-VLB. 4-Desacetoxy-VLB besitzt die gleiche Struktur wie VLB mit der Abweichung, daß R ein Wasserstoffatom statt eine Acetoxygruppe bedeutet; 3'~Hydroxy-4-desacetoxy-VLB kann auch 4-Desaeetoxy-vincadiolin genannt werden.

Neuss, Gorman, Cone und Huckstep haben Leurosin mit Raneynickel in absolutem Ethanol behandelt und vorwiegend Desoxy-VLB "B" zusammen mit geringen Mengen an Desoxy-VLB "A" erhalten, d.h. durch die Hydrierung wurde der Epoxidsauerstoff aus dem Leurosin entfernt und eine gewisse Racemisierung erzielt. Außerdem wurde von Neuss, Huckstep und Cone irrtümlich berichtet, daß Leurosidin das 3'-Hydroxy-desoxy-VLB "B" (ß-Ethylgruppe an C-4')sei. Es wurde nun von Wenkert, Hagaman, LaI, Gutowski, Miller und Neuss (HeIv. Chim. Acta₃ jjjB, 1560; 1975) gefunden, daß Leurosidin eine 4'-Hydroxyverbindung ist₃ die mit VLB isomer ist ("fet-Hydroxy-ß-ethyl an C-4' statt ß-Hydroxy-§£ethyl wie in VLB)₉ vgl» auch N. Langlais'und P. Potier_s Tetrahedron Letters, 1099 (1976), die Leurosidin durch Teilsynthese hergestellt haben.

Die chemische Modifizierung der Vincaalkaloide ist verhältnis-^ mäßig begrenzt geblieben. Erstens sind die Molekülstrukturen, mit denen man es zu tun hat, äußerst komplex, weshalb chemische Umsetzungen, die nur eine spezifische Punktion des Moleküls betreffen, schwierig zu entwickeln sind. Zweitens xfurden aus Fraktionen von Vinca rosea Alkaloide gewonnen, die die erwünschten chemotherapeutischen Eigenschaften nicht besaßen, und eine Aufklärung ihrer Struktur hat zu dem Schluß geführt, daß diese Verbindungen mit den aktiven Alkaloiden nahe verwandt sind. Somit scheint die neoplastische Aktivität auf ganz spezifische Strukturen beschränkt zu sein, und die Aussichten, stärker aktive Arzneimittel durch Modifizierung dieser Strukturen zu erhalten, sind dementsprechend nur gering. Unter den erfolgreichen Modifikationen der physiologisch aktiven Alkaloide sind die Herstellung von Dihydro-VLB nach US-PS 3 352

-A-

sowie der Ersatz der Acetylgruppe an C-4 (Kohlenstoffatom 4 des VLB-Ringsystems gemäß der unten angegebenen numerierten Struktur) durch höhermolekulare Alkanoylgruppen oder mit nicht verwandten Acylgruppen (US-PS 3 392 173) zu nennen. Mehrere dieser Derivate sind in der Lage, die Lebensdauer von Mäusen zu verlängern, die mit P1534-Leukämie beimpft vrorden sind. Eines der Derivate, in dem die C-4-Acetylgruppe von VLB durch eine Chloracetylgruppe ersetzt ist, erwies sich außerdem als wertvolles Zwischenprodukt bei der Herstellung von strukturmäßig modifizierten VLB-Verbindungen, in denen die C-4-Acetylgruppe durch eine N,N-Dialkylglycylgruppe ersetzt ist (vgl. US-PS 3 387 001). Während der Umsetzungen, die zu den letztgenannten Derivaten führten, wurde eine Zwischenverbindung, nämlich 4-Desaeetyl-VLB hergestellt. Dieses Zwischenprodukt, in dem die C-4-Acylgruppe fehlte und eine Hydroxylgruppe unverestert blieb, wurde als toxisches Material mit geringer chemotherapeutischer ]h-vivo-Aktivität gegenüber dem Pl534-Mäuseleukämie-System bezeichnet (vgl. Hargrove, Lloydia, 2J_₃ 340; 1964).

Eine der neueren und erfolgreichen chemischen Modifizierungen des dimeren Indol-Dihydroindol-Alkaloids aus Vinca besteht aus dem Ersatz der Esterfunktion an C-3 durch eine Amid- oder Hydrazidfunktion, normalerweise unter gleichzeitigem Verlust der Acetylgruppe an C-4, die jedoch ersetzt werden kann. Amide der Alkaloide VLB, Leurosidin, Vineristin, Desoxy-VLB "A" und "B", Leurocolombin, Vincadiolin, 4-Desacetoxy-VLB und 3^f-Hydroxy-4-desacetoxy-VLB sind in der BE-PS 837 390 beschrieben.

Zwei der obigen Alkaloide, VLB und Vineristin, werden gegenwärtig zur Behandlung von malignen Tumorerkrankungen beim Menschen vertrieben. Von diesen beiden ist das Vineristin das nützlichste und am schlechtesten zugängliche. Vor kurzem ist von Jovanovics et al., US-PS 3 899 493, eine oxidative Methode zur überführung des relativ besser erhältlichen VLB in Vineristin entwickelt worden, bei der mit Chromsäure bei niedrigen Temperaturen (-6O⁰C) oxidiert wird. Es gibt auch noch

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Al.

andere, verhältnismäßig reichlich vorkommende Alkaloide in. der dimeren Indol-Dihydroindol-Fraktion von Vinca, wie Leurosin, und es wäre daher wünschenswert, diese unmittelbar oder mittelbar in Vineristin oder ein Präparat von vergleichbarer onkolytischer Aktivität umzuwandeln.

Bekanntlich kann Leurosin durch Behandeln mit Raneynickel in absolutem Ethanol unter Rückfluß in Desoxy-VLB ⁿB" zusammen mit unterschiedlichen Mengen an Desoxy-VLB "A" überführt werden, vgl. Ueuss, Gorman^ Cone und Huckstep₃ Tetrahedron Letters, 783-7; 1968.

Aufgabe der Erfindung ist daher die Überführung des verhältnismäßig reichlich vorkommenden Alkaloids Leurosin in andere onkoIytisch aktive Strukturen, die bisher noch nicht zugänglich waren.

Gegenstand der Erfindung ist ein dimeres Indol-Dihydroindol der allgemeinen Formel · -

η 4Η R⁴

V-C-O-CH₃

ι ! Ii

IO

CH₃O-

R¹

δ-R

Il 0

worin

R¹ OH oder O-C-CH,;

I! J

R² CH, oder CHO bedeuten,
3 3 4
einer der Reste R und R Wasserstoff und der andere

eine Ethylgruppe bedeuten;

5 6
einer der Reste R und R , exnzeln genommen, Viasserstoff

7 S 6

und der andere die Gruppe OR' oder R und R zusammengenommen Sauerstoff bedeuten, O

7 "

wobei R ein Wasserstoffatom, einer der Reste AIk-NH-C,

0 0
AIk-C oder AIk-S ist;

ti

O -1

R , in dem Falle, wenn R OH oder O-C-CH, bedeutet, OCH,,

NH₂, NH-CH-* , NH-CH₂-CH₂-O-AIk oder NH-CH₂-CH₂-S-AIk bedeutet oder in dem Falle, daß R eine Hydroxylgruppe ist, NH-NH₂, N,, NH-CH₂-CH₂-OH oder NH-CH₂-CH₂-SY bedeutet, wobei Y entweder ein Wasserstoffatom oder eine Bindung bedeutet, die die Schwefelatome in zwei Resten der Formel in denen Y eine Bindung bedeutet, miteinander verbindet; und Alk (C₁-C,)-Alkyl bedeutet;
oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.

Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Äntitumormittel, bestehend aus einem inerten Träger und einer dinieren Indol-Dihydroindol-Verbindung gemäß Formel I oder einem pharmazeutisch annehmbaren Salz davon als aktivem Bestandteil.

Gegenstand der Erfindung sind weiterhin:

ein Verfahren zur Herstellung von 3'6c-Hydroxy-4^f-desoxyleurosidin, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man Leurosin mit Raneynickel in einem Lösungsmittel reduziert;

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ein Verfahren zur Herstellung von 3'-Oxo-4'-desoxyleurosidin_s das dadurch gekennzeichnet ist, daß man 3^1e£-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin mit einem milden Oxidationsmittel in einem Reaktionsgemisch umsetzt;

ein Verfahren zur Herstellung von 3'-Hydroxy-4'-desoxyindol-Dihydroindol-Dimeren der allgemeinen Formel

worin

3 4
einer der Reste R"^ und R Wasserstoff und der andere eine

8
Ethylgruppe bedeutet und R eine der Gruppen OCH, _s NHp₃ NH-CH₃₅ NH-CH₂-CH₂-O-AIk oder NH-CH₃-CH₂-S-AIk bedeutet_s worin Alk (C^C^-Alkyl bedeutet., ■

das dadurch gekennzeichnet ist_s daß man die 3'-0xo-Verbin dung der allgemeinen Formel

12'
13'

14'

5'

CHsO--i

R^c

, Ff

-C-O-CH₃ Ii 0

CH3

θ /h

C-R

I!

III

LHa

3 4 8
worin R , R und R die oben beschriebene Bedeutung besitz-en₃ in einem Reaktionsmittel mit einem Reduktionsmittel umsetzt;

ein Verfahren zur Herstellung von 3'-Oxo-4'-desoxy-VLB_a das dadurch gekennzeichnet ist, daß man 3'-Oxo-4¹-desoxyleurosidin in einem milden basischen Reaktionsgemisch umsetzt;

ein Verfahren zur Herstellung eines V-Desoxyindol-Bihydroindol-Dimeren der allgemeinen Formel

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1 1

» i

¹³T Ιί

14

O-R9

-CHMHa I_n

CH₃O-

»15

16

lh

V⁸X

Ν 7

IV

/^H3

C-CH₃

j.:

einer· der Reste R und R Wasserstoff und der andere

eine Ethy!gruppe, bedeutet,

R⁸ eine der Gruppen OCH₃, NH₂, NH-CH₃₃ NH-CH₂-CH₂-O

oder NH-CH₂-CH₂-S-AIk und

R⁹ AIk-C- oder AIk-S bedeutet, wobei Alk (C.-C^)-Alkyl 0 0

bedeutet,

das dadurch gekennzeichnet ist_s daß man ein 3'-Hydroxy-4¹-desoxy indol-Dihydroindol-Dimeres der allgemeinen Formel

⁷' ⁶'/\ί

? T

f—C-O-CH₃ 1! 0

9 /8^s-

ι Γ":

3 4 8
worin R^, R und R die oben angegebene Bedeutung besitzen^

mit einer Verbindung der allgemeinen Formel R^-R , worin
R¹⁰ 0R⁹ _a OH oder X und X P₅ Cl, Br oder I bedeutet und R⁹ die oben angegebene Bedeutung besitzt, in einem Reaktionsgemisch
umsetzt;

ein Verfahren zur Herstellung von 3¹«t~(N-Alkyl-carbamoyloxy)-4'-desoxyleurosidin, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man
3¹Ot-Hydroxy-4' -desoxyleurosidin mit einem Alkylisocyanat in
Benzol bei 30°C bis 5O⁰C umsetzt;

ein Verfahren zur Herstellung von 4-Desacetyl-3^foc-hydroxy-4'-desoxyleurosidin-C-3-carboxhydrazid, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man 3^ro<-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin mit Hydrazin in einem Reaktionsgemisch umsetzt;

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- yi-

ein "Verfahren zur Herstellung vonp'^-Hydroxy-4'-desoxy-1-desmethyl-1-formylleurosidin, das dadurch gekennzeichnet ist., daß man 3bfr-Hydroxy-4¹-desoxyleurosidin in einem Reaktionsgemisch oxidiert.

Gegenstand der Erfindung ist schließlich ein Verfahren zur Inhibierung eines Tumors _s das dadurch gekennzeichnet ist_s daß man einem tumortragenden Säugetier oder Menschen eine für die Tumorbekämpfung wirksame Dosis eines dimeren Indol-Dihydroindols der allgemeinen Formel I oder ein dieses enthaltendes Arzneimittel verabreicht.

In den obigen Formeln umfaßt der (G^-CS)-Alkyl-Rest eine Methyl Ethyl-, n-Propyl- oder Isopropylgruppe.

Ferner sind bei R² = Methyl, R³ = H und R = Ethyl die Verbin-

t! Λ Il

düngen Derivate von 4'-Desoxy-VLB₅ das auch Desoxy-VLB "A genannt wird \ bei R² = Methyl ₃ R·⁵ - Ethyl und R=H die Verungen von 4'-Desoxyleurosidin, das auch Desoxy-VLB "B"

ρ -z h

genannt wird; bei R = Formyl, R-^ = H und R = Ethyl die Ver-

bindungen Derivate von 4'-Desoxyvincristin und bei R = Formyl_s

R^ = Ethyl und R = frvWbindungen Derivate von 4^!-Desoxy-l-

-1

formylleurosidin. Verbindungen mit R = OH werden als 4-Desacetylderivate bezeichnet. In den Stammalkaloiden selbst ₃ wie beispielsweise 4^f-Desoxy-VLB₃ 4^!-Desoxy-vincristin usw. bedeutet R eine Methoxylgruppe. Wenn in derartigen Verbindungen die Methoxy!gruppe durch eine Amidogruppe ersetzt wird_s d.h. wenn

R beispielsweise NH₂ oder NH-CH, bedeutet_s wird die erhaltene Verbindung als C-3-Carboxamid oder N-Methyl-C-3-carboxamid bezeichnet _s wobei bei jeder dieser Bezeichnungen stillschweigend der Ausdruck "C-3-Descarbomethoxy" mil^gemeint _s jedoch wegen der Kürze nicht mit^angegeben ist. Analog ist unter der Bezeichnung 4'-Desoxy-l-formylleurosidin zu verstehen,, daß die I-Methyl-Gruppe des Laurosidins durch eine Formylgruppe ersetzt worden_s daß aber die Bezeichnung "1-Desmethyl" aus Verexnfachungsgründen weggelassen worden ist.

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Ungiftige Säuren* die sich zur Herstellung pharmazeutisch annehmbarer Säureadditionsalze aus den Verbindungen gemäß der Erfindung eignen, sind beispielsweise Salze, die sich von anorganischen Säuren ableiten, wie Salzsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure, Schwefelsäure, Bromwasserstoff- oder Jodwasserstoffsäure, salpetriger Säure, phosphorigerSäure und dgl., sowie Salze, die sich von ungiftigen organischen Säuren ableiten, wie beispielsweise von aliphatischen Mono- und Dicarbonsäuren, phenylsubstituxerten Alkan-, Hydroxyalkan- und Alkandicarbonsäuren, aromatischen Säuren, aliphatischen und aromatischen Sulfonsäuren usw. Derartige pharmazeutisch annehmbare Salze sind u.a. die Sulfate, Pyrosulfate, Bisulfate, Sulfite, Bisulfite, Nitrate, Phosphate, Monohydrogenphosphate, Dihydrogenphosphate, Metaphosphate, Pyrophosphate, Chloride, Bromide, Jodide, Acetate, Propionate, Decanoate, Caprylate, Acrylate, Formiate, Isobutyrate, Caprate, Heptanoate, Propiolate, Oxalate, Malonate, Succinate, Suberate, Sebacate, Fumarate, Maleate, Benzoate, Chlorbenzoate, Methylbenzoate, Dinitrobenzoate, Hydroxybenzoate, Methoxybenzoate, Phthalate, Terephthalate, Benzolsulfonate, Toluo!sulfonate, Chlorbenzolsulf onate, Xylolsulfonate, Phenylacetate, Phenylproionate, Phenylbutyrate, Citrate, Lactate, 2-Hydroxybutyrate, Glycolate, Malate, Tartrate, Methansulfonate, Propansulfonate, Naphthalin-1-sulfonate und Naphthalin-2-sulfonate.

Die Verbindungen gemäß der Erfindung werden hergestellt, indem man Leurosin mit W -Raneynickel in absolutem Alkohol nach der Vorschrift von Neuss, Gorman, Cone und Huckstep, Tetrahedron Letters, 783, (1968) behandelt. Dabei wird neben Desoxy-VLB "A" und Desoxy-VLB ¹¹B", die beide von den Autoren gefunden wurden, ein neues Material erhalten, das als ^'«-Hydroxy-ii'-desoxy-VLB "B" oder vorzugsweise als 3'öt-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin bezeichnet wird. Die Reduktion kann auch in Essigester, Tetrahydrofuran, Toluol oder einem anderen geeigneten Lösungsmittel durchgeführt werden. Die Oxidation dieser Verbindung ergibt

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-γί-

3'-Keto-4^t-desoxyleurosidin, ein Schlüssel-Zwischenprodukt. Die Reduktion des 3'"Ketons mit Natriumborhydrid ergibt 3'ß~ Hydroxy-4^!-desoxyleurosidin, den epimeren Alkohol. Das 3'~ Keton kann auch zu einem 4'-Ethylderivat epimerisiert werden, das der 4'-Desoxy-VLB- oder Desoxy-VLB-"A"-Reihe angehört. Die Reduktion dieses epimeren Ketons ergibt sowohl 3^fß-Hydroxy-4^!-desoxy-VLB als auch in geringeren Mengen 3^f<x-Hydroxy-4^rdesoxy-VLB.

Die Acylate gemäß der Erfindung werden aus einer der oben genannten 3'"Hydroxy-Verbindungen nach Standardverfahren hergestellt, d.h. unter Verwendung eines Anhydrids in Gegenwart eines tertiären Amids. Carbamate werden durch Umsetzung des Alkohols mit einem Alkylisocyanat hergestellt. Die C-3-Amide, -Hydrazide und dgl. werden nach dem Verfahren gemäß BE-PS 837 39O hergestellt. Verbindungen die der vincristinreihe oder 1-Pormylleurosidinreihe angehören (Verbindungen gemäß der

2
obigen Formel II, in der R eine CHO-Gruppe ist), werden durch Oxidation der entsprechenden Verbindung aus der VLB- oder Leurosidinreihe, in der R eine Methylgruppe ist, unter Anwendung des Verfahrens gemäß US-PS 3 899 493 mit Chromsäure bei niedrigen Temperaturen hergestellt.

Es ist nicht sofort offensichtlich, warum Neuss, Gorman, Cone und Huckstep Tetrahedron Letters, 783 (I968) bei der Umsetzung von Leurosin mit Raneynickel in wasserfreiem Ethanol kein 3'-Hydroxy-4¹-desoxyleurosidin gefunden haben. Der einzige Unterschied zwischen dem Verfahren gemäß der Erfindung und demjenigen von Neuss et al. besteht, soweit ersichtlich, in der Verwendung von vorhydriertem Raneynickel der Aktivität

ii λ

W anstelle des Raneynickels der Aktivität W , wie es von Neuss et -al-, verwendet wurde. Die Ausbeuten an 3'"Hydroxy— 4'-desoxyleurosidin betrugen 10 bis 20$ bei Verwendung des aktiveren Raneynickels, und diese Menge an der Verbindung ist zu groß, als daß sie während der früheren Umsetzung von Neuss

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et al. bei Verwendung des weniger aktiven Raneynickels hätte übersehen werden können. Es kann daher lediglich angenommen werden, daß das weniger aktive Raneynickel, wenn überhaupt, weitaus geringere Mengen an dem 3'-Hydroxyderivat ergeben hat und daß die Verbindung, wenn sie überhaupt vorhanden war, in einer solchen geringen Menge vorlag, daß sie nicht entdeckt werden konnte.

Die Erfindung wird im folgenden anhand von Beispielen erläutert .

Beispiel 1

3^toc-Hydroxy-4^t-desoxy leurosidin

EinerSuspension aus 10,0 g hochgereinigtem Leurosin in 700 ml 95#igem Ethanol wurde in einem mit Stopfen, mechanischem Rührer und Kühler ausgestatteten 1-1-Dreihalsrundkolben etwa 16 g Raneynickel der Aktivität W zugesetzt, und da& Reaktions gemisch wurde unter Rühren etwa eine Stunde lang auf Rückflußtemperatur erhitzt, wonach DünnschichtChromatographie (unter Verwendung eines Systems aus 1:1:1 Methylenchlorid/Essigest er/Ethanol) anzeigte, daß kein Leurosin übriggeblieben und zwei nur schwach aufgetrennte Produkte mit niedrigem R„-¥ert vorhanden waren. Das Umsetzungsgemisch wurde gekühlt und filtriert. Der Katalysator wurde mit 95#igem Ethanol gewaschen. Das Lösungsmittel wurde aus dem Filtrat durch Eindampfen auf ein Volumen von etwa 150 ml entfernt. Das erhaltene Gemisch wurde durch Erhitzen erneut gelöst. Zusätzliches Ethanol wurde bis zu einem Gesamtvolumen von 300 ml zugesetzt, und die Lösung wurde kristallisieren gelassen. Das kristalline Material bestand vorwiegend aus Desoxy-VLB "B" (4'-Desoxyleurosidin). Die Mutterlauge wurde im Vakuum konzentriert, wobei man 4,5 g eines Rückstandes erhielt, der an 250 g Silicagel (Woelm Aktivität I) wie folgt chromatographiert wurde: Der Rückstand wurde in MethylendiGhloridlösung auf die Säule aufgegeben. Das Chromatogramm wurde mit einem Lösungsmittelgemisch aus

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Diethylether/Toluol/Diethylamin (20:1:1), das von 1,8 auf k5% ansteigende Mengen Methanol enthielt, entwickelt. Die ersten 1,75 1 Eluat wurden verworfen. Die nächsten 100 ml ergaben 468 mg an praktisch reinem 3'0t-Hydroxy-i('-desoxyleurosidin, das mit einer geringen Menge (weniger als 5%) des entsprechenden 6,7-Dihydroderivats verunreinigt war. Die nächsten 200 ml Eluat ergaben 648 mg an sehr, reinem 3'0<-Hydroxy-4 ' -desoxyleurosidin. Die Verbindung besaß die folgenden physikalischen Eigenschaften:

pK :(66i£ DMP) 8,19; 5,17; .

UV-Spektrum: λ^°^Η = 215 (β4,51 x 10⁴), 263, 288, 297 nm;

ITl cLX

IR-Spektrum: v^CHC13 = 3450, 1730, 1230 cm"¹; Rotation: JocJ§⁵ = +7,1° (CH₃OH);
Massenspektogramm: m/e 810, 751, 469, 355, 282, 154;

Magnetisches Protonenresonanzspektrum (100 Megahertz): TMS³"^{3 7j95 (brS}> ^1H> ¹^dOl-N-H), 7,38-7,57 (m, IH, H₁₁,); 7,0-7,2 (m, 3H, H₁₂^ _{±y }} _lV); 6,52 (s, IH₅ H₁₄); 6,09 (s, IH, H₁₇); 5,74-5,95ⁱ(brdd, J = 4, 10, IH, H₇); 5,45 (s, IH, H₄); 5,30, (brd, J = 10_s IH, Hg); 3,79 und 3,80 (2s, 6H, C-24-und -25-Methylgruppen); 3,75 (s, IH, H₂); 3,59 (s, 3H, 0-18'-CO₂CH₃); 2,69 (s, 3H, N-CH₃); 2,65 (s, IH, H₁₉); 2,07 (s, 3H, CH,C0_o); 0,80 und 0,95 (2t, J = 7,3, 6H, C-23rund -21' Methylgruppen.

Das Sulfat des 3^t«t-Hydroxy-4^t -desoxyleurosidins wurde hergestellt, indem man 695 mg der Base in 5 ml wasserfreiem Ethanol löste und 2,38 ml 2$ige Ethanolsulfonsäure (Volumen/Volumen) zusetzte. Es bildete sich eine unmittelbare Ausfällung des Sulfats, das abfiltriert wurde. Der Filterrückstand wurde mit Ethanol gex^aschen, und man erhielt 666 mg eines flockigen

weißen Festkörpers, der aus 3'Cf-Hydroxy-V-desoxyleurosidin bestand.

Beispiel 2

3'-Oxo-4'-desoxyleurosidin

Ein Gemisch aus 494 mg N-Chlorsuceinimid und 10 ml wasserfreiem Toluol wurde mit einem Magnetrührer bei Umgebungstemperatur 5 bis 10 Minuten in einem 25-ml—Dreihalskolben, der mit Stopfen, Serumkappe und Gaseinlaßrohr ausgestattet war, gerührt. Daraufhin wurde das Gemisch auf etwa 0°C gekühlt und mit 3^5 mg Dimethylsulfid versetzt. Dieses neue Gemisch wurde bei etwa 0⁰C.30 Minuten lang gerührt. Danach wurde mit einer Pipette eine Lösung aus SOG mg 3'6C-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin in 2,5 ml MethylendiChlorid zugesetzt. Weitere 1,5 ml Methylendichlorid wurden verwendet, um die Lösung aus der Pipette zu waschen. Dieses Reaktionsgemisch wurde unter Stickstoff 6 Stunden lang bei 0°C gerührt. Danach wurden 375 mg Triethylamin hinzugegeben und das Gemisch bei Umgebungstemperatur etwa 30 Minuten lang gerührt. Danach wurde weiteres Methylendichlorid hinzugegeben und die organische Lösung mit Wasser gewaschen. Die wässrige Phase wurde abgetrennt und noch zweimal mit MethylendiChlorid extrahiert. Die MethylendiChloridphasen wurden vereinigt, getrocknet und im Vacuum zu einem dicken, gelben öl eingedampft. DünnschichtChromatographie ergab kein Material in dem dicken Öl, das dem Ausgangsmaterial entsprochen hätte. Der ölige Rückstand wurde an 20 g Silicagel (Woelm Aktivität I) chromatographiert. Die Verbindung wurde in einem 1:1— Gemisch aus MethylendiChlorid und Essigester mit einem Gehalt von 2% Methanol aufgegeben. Die Eluierung wurde mit demselben Lösungsmittelgemisch durchgeführt, das in 150-ml—Fraktionen von 2 bis 6% ansteigende Methanolmengen enthielt. Die ersten zehn Fraktionen besaßen ein Volumen von 20 ml, die restlichen ein solches von 10 ml. Die Fraktionen l8 bis 25 enthielten nach DünnschichtChromatographie ein einziges Material, das aus 108 mg 3'-Oxo-4'-desoxyleurosidin mit den folgenden physikalischen Eigenschaften bestand:

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- ιγ-

UV-Spektrum: λ^°^Η = 215 (£4,73 x ΙΟ⁴), 265, 287, 296 nm;

IR-Spektrum: ^HCl₃ = 3460, 1735, 1720, 1230 cm"¹; Massenspektogramm: m/e 808, 749, 649, 282, 152;

Magnetisches Protonenresonanzspektrum (100 Megahertz); TMS^{13 8}'^{01 (brSi 1H>
Indol}-N-S)i 7,45-7,63 (™> IH, C(Il*)-H); 7,05-7,25 (m, 3H, C(12'-l4')-H); 6,52 (s, IH, C(l4)-H); 6,12 (s, IH, C(17)-H); 5,75-5,95 (brdd, J = 4 und 10; IH, C(7)-H); 5,45 (s, IH, C(4)-H); 5,29 (brd, IH, C(6)-H); 3,84 und 3₅78 (2s, 6H, C(24, 25)-CH₃); 3,73 (s, IH, C(2)-H); 3,60 (s, 3H, C(l8')-CO₂CH₃); 2,75 (s, 3H, N-CH₃); 2,64 (s, IH, C(19)-H; 2,08 (s, 3H, CH₃CO₂); 0,81 und 0,92, (2t, J = 7,3, 6H, C(21,

Das Sulfat wurde aus einer Lösung der freien Base in Ethanol unter Verwendung von 2$iger ethanolischer Schwefelsäure hergestellt.

Beispiel 3

3'ß-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin

Eine Lösung aus etwa 12 mg Natriumborhydrid in l ml wasserfreiem Ethanolj die mit einem Magnetrührer mehrere Minuten bei Umgebungstemperatur gerührt und anschließend auf etwa -20°C gekühlt worden war, wurde tropfenweise mit einer Lösung aus etwa 15 mg 3'-Oxo-4'-desoxyleurosidin in 1 ml Ethanol versetzt. 15 Minuten nach Beendigung der Zugabe ergab die Dünnschichtchromatographie eine beträchtliche Reduktion der Oxogruppe. Das Rühren wurde weitere 25 Minuten bei etwa -20 C sowie weitere 20 Minuten unter Erwärmen von -20⁰C auf Umgebungstemperatur fortgesetzt. Danach wurde Chloroform zugegeben und die erhaltene organische Phase abgetrennt. Die organische Phase wurdreimal mit Wasser, das dekantiert wurde, gewaschen. Die organische Phase wurde danach getrocknet und das Lösungsmittel

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entfernt, wonach man 19 mg eines- weißen festen Rückstandes erhielt. DünnschichtChromatographie ergab eine etwa 7O#ige Reduktion der eingesetzten 3'-Oxoverbindung.

Die obige Reaktion wurde unter Verwendung von 159 mg der 3^f~ Oxoverbindung in 2,5 ml Ethanol wiederholt. Weitere 1,5 ml wurden verwendet, um restliches Keton in die Lösung zu waschen. Zum Suspendieren des Borhydrids wurden 2 ml Ethanol verwendet. Das Reaktionsgemisch wurde nur bis 0 C gekühlt und bei dieser Temperatur etwa 1,3 Stunden gerührt. Danach zeigte die Dünnschi chtChromatographie, daß die Umsetzung zu 80 bis 90$ vollständig abgelaufen war. Nach weiterem einstündigen Rühren war der Fleck in dem Dünnschichtehromatogramm, . der dem Ausgangsmaterial entsprach, praktisch verschwunden. Das Umsetzungsgemisch wurde danach, wie zuvor beschrieben, aufgearbeitet und der weiße feste Rückstand an Silicagel in einem Lösungsmittelgemisch von Methylendichlorid/Essigester (1:1) mit steigendem Methanolgehalt chromatographiert. Die nach DünnschichtChromatographie das während der obigen Umsetzung gebildete 3'ß-Hydroxy-4¹-desoxyleurosidin enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt, und man erhielt daraus 102,5 mg kristallines Material. Die auf diese Weise hergestellte Verbindung besaß die folgenden physikalischen Eigenschaften:

IR-Spektrum: v^CHC13 = 3460, 1735, 1230 cm"¹; pK_a: (6635 DMF) 8,1; 4,9;

UV-Spektrum: λ^°^Η = 215 (S 4,72 χ 10^), 260, 288, 296 ran;

Iu el X

Massenspektrogramm: m/e 810, 779, 751* 469, 355, 282, 154; Magnetisches Protonenresonanzspektrum (100 Megahertz):

809840/0963

^{9j7l{ (brSi 1Hs} °(3)-0Η); 8,04 (brs, IH, Indol-N-H); 7,42-7,60 Cm, IH₃ C(ll')-H); 7,03-7,23 Cm, 3H, C(12'-l4')-H); 6,59 Cs, IH, C(l4)-H); 6,12 (s, IH, C(17)-H), 5,74-5,96 (brdd, J = 4 und 10, IH₃ C(7)-H); 5,48 Cs, IH, C(4)-H); 5,29 (brd, J = 10, IH₁ CCo)-H); 3,79 und 3,80 (2s, 6H₃ C(24, 25)-CH₃); 3,>4 (s, IH, C(2)-H); 3,60 (s, 3H₃ C(18')-CO₂CH₃), 2,70 Cs₃ 3H, N-CH₃); 2,65 Cs, IH, C(19)-H); 2,09 (s, 3H, CH₃CO₂); 0,81 und 0,96 (2t, J = 7,3, 6H, C(21, 21^f)-CH,).

Das Sulfat wurde mit 2$iger ethanolischer Schwefelsäure₃ wie oben angegeben, hergestellt.

Beispiel 4

3'-Oxo-4'-desoxy-VLB

Eine Lösung aus 400 mg 3'-Oxo-4^!-desoxyleurosidin in 10 ml Methanol in einem 50-ml-Rundkolben, der in einem Eisbad auf etwa 0⁰C gekühlt wurde, wurde mit 10 ml Dimethylamin versezt. Der Kolben wurde mit einem Stopfen .verschlossen, und das Umsetzungsgemisch wurde mit einem Magnetrührer 6 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dünnschichtchromatographie unter Verwendung eines Lösungsmittelsystems aus Essigester, Methylendichlorid und Methanol (1:1:1) ergab eine etwa 50$ige Umsetzung. Das Lösungsmittel und das Dimethylamin wurden durch Verdampfen im Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde an 50 g Silicagel (Woelm. Aktivität I0in einem Lösungsmittel aus gleichen Teilen Essigester und Methylenchlorid mit einem Gehalt von 1% Methanol chromatographiert. Als Elutionsmittel wurden 100-ml-Praktionen eines Lösungsmittelsystems aus Essigester/Methylenchlorid (1:1), das aufeinanderfolgend 1, 2, 3, 4_S 5, 7, 10 und 15$ Methanol enthielt, und danach 200 ml desselben Lösungsmittels mit einem Gehalt von 20$ Methanol verwendet. Eluatfraktionen von 15 ml wurden gesammelt. Die Fraktionen 17 bis 34 wurden vereinigt,und man erhielt darausll4 mg eines weißen s kristallinen Rückstandes aus während der obigen Umsetzung

8QSS&Ö/Ö9S3

gebildetem 3'-Oxo-4'-desoxy-VLB. Die Fraktionen 43 bis 60 wurden vereinigt, und man erhielt daraus 168 mg Ausgangsmaterial. Das auf diese Weise hergestellte 3'-Oxo-V-desoxy-VLB besaß die folgenden physikalischen Eigenschaften:

Massenspektrogramm: m/e 8O8₅ ?49, 649, 152; Magnetisches Protonenresonanzspektrum (100 Megahertz):

^TMS³"^{5 8}^ ^(brSs ^1E> ^Indol-^N"^H)i 7₅46-7₃6l (m, IH₃ C(Il' )-H) 7,03-7,23 (m, 3H₃ C(12'-i4')-H); 6₃57 (s, IH, C(HD-H); 6,11 Cs₃ IH, C(17)-H)j 5,75-5,95 (brdd, J = 4 und 1O₅ IH, C(7)-H); 5,46 (s_a IH, C(4)-H); 5,31 (brd_s J = 10, IH, C(6)-H); 3,79 (S₅ 6H_S C(24_a 2S)-CH₃)J 3,74 (s_a IH, C(2)-H); 3,61 (s, 3H₃ G(18^S)-GO₂CH₃);2_S72 (s, 3H_a N-CH₃); 2_S66 (s, IH₅ C(19)-H); 2_s09 (S₃ 3H_a CH₃CO₂); 0,93 und O₂Sl (2t, J = 7,3, 6H, C(21, 21^S)-CH₃).

Eeispiel 5

3'ß-Hydroxy-4 · -elesoxy-VLB und 3'^-Hydroxy-4' -desoxy-VLB

Ein Gemisch aus iOO mg ITatriumborhydrid und 3 ml xvasserfreiem

Ethanol in einem 25-ml-Kolben_s der in einem Eisbad auf O⁰C gekühlt wurde, wurde mit einer Lösung aus 200 mg 3'-0x0-4'-desoxy~VLE in 5^1 wasserfreiem Ethanol tropfenweise versetzt.

Das üEisetsungsgemisch wurde etifa I₃5 Stunden bei 0 C gerührt. Bünnsohi slit Chromatographie unter Verwendung eines Lösungsinittslsystems aus Essigester/Metliylenchlorid/Methanol (1:1:1) ergab die Anwesenheit eines neuen Materials von hohem Rx,-Wert sowie "/on Spuren Ausgangsmafcerial. Danach wurden weitere 50 mg Borhydrid zugesetzt und das Umsetzungsgemisch weitere 1,5 " Stunden gerührt. Danach wurden 8 al wasserfreies Methanol zugesetzt und das Unisetzungsgemisch über Macht bei O⁰C stehengelassen. Das ümsetzungsgemisch wurde daraufhin auf Umgebungstemperatur erwärmt und bei dieser Temperatur etwa 1 Stunde lang gerir.rt. Danach wurde es mit ,je etwa 10 ml Wasser und

809840/0963

Methylenchlorid versetzt. Die Methylenchloridphase wurde abgetrennt, und die wässrige Phase wurde zweimal mit Methylenchlorid extrahiert. Die Methylenchloridphasen wurden vereinigt j einmal mit Wasser gewaschen und anschließend getrocknet. Entfernung des Methylenchlorids im Vakuum ergab I76 mg eines weißen Rückstandes. Der Rückstand wurde an 19 g Silicagel (Woelm Aktivität I) in einem Lösungsmittelsystem aus Methylenchlorid und Essigester (1:1) mit einem Gehalt von 2% Methanol chromatographiert. Das Chromatogramm wurde mit 75~ml-Anteilen demselben Lösungsmittelgemisches entwickelt, das aufeinanderfolgend 2, 3» 4, 5, 7, 10 und 15$ Methanol enthielt. Es wurden Fraktionen von 15 ml Volumen gesammelt. Die Fraktionen 12 bis 27 wurden vereinigt, und man erhielt daraus 116 mg 3'ß-Hydroxy-4'-desoxy-VLB mit den folgenden physikalischen Eigenschaften:

pK : (66* DMF) 7,10; 5,10;

UV-Spektrum: λ^°^Η = 215 (4,32 χ ΙΟ⁴), 260, 288, 296 nm; IR-Spektrum: v^GHC13 = 3450, 1734, I23O cm"¹; Massenspektogramm: m/e 810, 779, 751, 65I, 469, 282, 154;

Magnetisches Protonenresonanzspektrum (100 Megahertz):

^ΤΜίΡ^{3 8}'°^{5 (brs}> ^{1Hj 1}^dOl-N-H); 7,42-7,59 (m, IH, C(Il¹)-H);

7,00-7,24 (m, 3H, C(12'-l4')-H; 6,64 (s, IH, C(l4)-H); 6,12

(s-, IH, C(17)-H); 5,75-5,95 (brdd, J = 4 und 10, IH, C(7)-H);

5,47 (s, IH, C(4)-H); 5,30 (brd, J = 10, IH, C(2)-H); 3,60

(s, 3H, G(18')-CO₂CH₃); 2,70 (s, 3H, N-CH₃); 2,65 (s, IH,

C(19)-H); 2,09 (s, 3H, CH₃CO₂); 0,70-1,00 (m, 6H, C(21, 21')-CH₃).

Die Fraktionen 33 bis 40 wurden vereinigt und nach Eindampfen im Vakuum erhielt man aus ihnen d6 mg 3^tc*-Hydroxy-4'-desoxy-VLB. Die Verbindung besaß die folgenden physikalischen Eigenschaften:

809840/0963

·3ο·

Massenspektogramm: m/e 810, 779, 751, 651, 469, 355, 282, 154;

Magnetisches Protonenresonanzspektrum (100 Megahertz):

^TMS^{13 8}>°^{6 (brs}> ^1H> ¹HdOl-N-H); 7,43"7,59 (m, IH, C(Il¹)-H); 7,08-7,23 (m, 3H, C(12'-l4')-h)56,57 (s, IH, C(l4)-H); 6,10 (s, IH, C(17)-H); 5,75~5,97 (brdd, J = 4 und 10, IH, C(7)-H); 5,47 (s, IH, C(4)-H); 5,31 (brd, J = 10, IH, C(6)-H); 3,81 (s, 6H, C(24, 25)-CH₃); 3,75 (s, IH, C(2)-H); 3,64 (s, 3H, C(18')-CO₂CH₃); 2,73 (s, 3H, N-CH₃); 2,65 (s, IH, C(19)-H); 2,10 (s, 3H, CH₃CO₂); 0,81 und 0,98, (2t, J = 7,3, 6H₉ C(21, 21¹J-CH₃).

Beispiel 6
3^!oC-Acetoxy-4'-desoxyleurosidin

Etwa 100 rag 3^!o(-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin und 30,4 mg p-Dimethylaminopyridin wurden in 2 ml Methylendichlorid gelöst. Danach wurden 0,94 ml Essigsäureanhydrid hinzugegeben und das Umsetzungsgemisch bei Umgebungstemperatur etwa 2 Stunden lang gerührt. Das Umsetzungsgemisch wurde danach mit Methylendichlorid verdünnt. Danach wurde Wasser hinzugegeben. Die organische Phase wurde abgetrennt und zweimal mit wässrigem Natriumbicarbonat gewaschen. Die wässrige Phase wurde basisch gemacht und danach die alkalische Phase zweimal mit Methylendichlorid extrahiert. Sämtliche Methylendichloridphasen und -extrakte wurden vereinigt und getrocknet. Verdampfung des Lösungsmittels ergab 104 mg eines Rückstandes aus 3*3C-Acetoxy-4'-desoxyleurosidin. Der Rückstand wurde durch Chromatographie an 10 g Silicagel (Woelm Aktivität I) chromatographiert, wobei als Elutionsmittel ein Lösungsmittelgemisch aus Essigester/Methylenchlorid (1:1) in 50-ml-Anteilen verwendet wurde, das von 2 bis 20$ allmählich ansteigende Mengen Methanol enthielt. Die gesammelten Fraktionen besaßen ein Volumen van⁵'10 ml. Fraktionen 19 bis 32 wurden vereinigt,

809840/0963

und man erhielt aus ihnen 54 mg gereinigtes 3'et-Acetoxy-4'-desoxyleurosidin. Die Verbindung wies sowohl ein Massenspektrum als auch ein magnetisches Kernresonanzspektrum auf _s das mit der vorgeschlagenen Struktur in Übereinstimmung war. In ähnlicher Weise wurden 3'ß-Acetoxy-4'-desoxyleurosidin und 3'ß-Acetoxy-4'-desoxy-VLB hergestellt. Massenspektren und magnetische Kernresonanzspektren waren mit den vorgeschlagenen Strukturen in Übereinstimmung.

Beispiel 7

3'12-Mesyloxy-4^S -desoxy leurosidin

Sine Lösung von etwa 200 mg 3 '©2,-Hydroxy-4' -desoxyleurosidin in 4 ml Pyridin₃ die auf etwa 0 C abgekühlt worden war_s wurde unter Rühren tropfenweise aus einer Mikrospritze mit O₅106 ml (157 mg) Mesylchlorid (Methansulfonylchlorid) versetzt. Nach beendeter Zugabe wurde das Ums et zungs gemisch eine xfeitere Stunde gerührt und danach durch Zusatz von Eis abgeschreckt. Danach wurden Methylendichlorid und Wasser zugesetzt. Die Methylendichloridphase wurde abgetrennt und zweimal mit Wasser gewaschen. Die Lösungsmittel wurden im Vakuum entfernt. Danach wurde Benzol zugesetzt und das Lösungsmittel wiederum im Vakuum entfernt. Dünnschi cht Chromatographie unter Verxfendung eines Lösungsmittelsystems aus Benzol/Chloroform/Methanol (2:2:1) ergab kein zurückgebliebenes Ausgangsmaterial_s jedoch zwei Produkte. Der auf diese Weise erhaltene Rückstand wurde chromatographisch an Silicagel (Woelm Aktivität I) gereinigt. Das schneller laufende Material wurde in mehreren Fraktionen gesammelt ₉ die vereinigt wurden. Entfernung des Lösungsmittels und überführung des Rückstandes in das entsprechende Sulfat ergab 53s4 mg 3'KrMesyloxy-4'-desoxyleurosidinsulfato

Beispiel 8

■ '34-

Eine Lösung aus 90 mg 3^tot~Hydroxy-4'-desoxy leurosidin in 0,5 ml Benzol wurde tropfenweise unter Rühren mit 0,10 ml Methylisocyanat versetzt. Das Umsetzungsgemisch wurde allmählich auf etwa 40⁰C erhitzt. Danach wurde es etwa 2,5 Stunden bei dieser Temperatur gehalten und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Der Verlauf der Umsetzung wurde durch DünnschichtChromatographie verfolgt. Weitere 0,05 ml Methylisocyanat wurden hinzugegeben und das Umsetzungsgemisch erneut etwa 2 Stunden auf etwa 40°C erhitzt. Danach wurde es zur Trocken?eingedampft, und man erhielt 57,3 mg eines Rückstandes aus Ausgangsmaterial und 3'0t-(Methyl-carbamoyloxy)-4·-desoxyleurosidin. Der Rückstand wurde an Silicagel (Woelm Aktivität I) in Benzol/Chloroform (1:1) mit ansteigenden Mengen Methanols ehromatographiert. Die das Produkt enthaltenden Fraktionen erwiesen sich durch DünnschichtChromatographie als vom Ausgangsmaterial verschieden; sie wurden vereinigt und eingedampf t₃ und man erhielt 48 mg der Verbindung 3¹^C-(N-Me thy 1-carbainoyioxy}-4'-desoxy leurosiäin. Erneute Chromatographie des Produktes an Silicagel in einem Lösungsmittelsbestehend aus Ether, Diethylamin und Toluol (20;1:1) mit von 0,5 bis 15$ ansteigenden Mengen Methanols ergab ein gereinigtes Produkt. Das Sulfat wurde unter Verwendung von 2$iger ethanolischer Schwefelsäure hergestellt.

Beispiel 9

4-Des aoety 1-3 ^!CC~ hydroxy- H '-desoxy leurosiäin-C-3"* carbox— hydrasid

Eine Lösung aus 300 mg 3'^-Hydroxy-4'-desoxyleuroszdin in 9 ml wasserfreiem Methanol wurde mit β ml 97£iss5i Hydrazin versetzt und das Reaictionsgefäß Hiit Stickstoff gespült und mit Stickstoff gegenüber der Atmosphäre abgeschlossen. Das ümsetzungsgemiseii wurde über das Wochenende auf etwa 65 G erhitzt. Eindampfen des Produktes zur- Trockene und zweimalige Extraktion des Rückst"·' ides mit Ethanol führten zu einer restlosen Ent-

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fernung des überschüssigen Hydrazins. DünnschichtChromatographie ergab ein Material, das zwei Flecken lieferte. Die Verbindung wurde durch Chromatographie an Silicagel (Woelm Aktivität I) unter Verwendung eines Lösungsmittelgemisches aus Benzol und Chloroform (2:1) mit einem Gehalt von 1% Triethylamin und ansteigenden Mengen Methanol gereinigt. Die Fraktionen, die gemäß Dünnschi cht Chromatographie das 4-Desacetyl-3'Ot,-hydroxy~ 4'-desoxyleurosidin-C-3-carboxhydrazid enthielten, wurden vereinigt. Massenspektographisehe Daten sowie das NMR- und IR-Spektrum stimmten mit der vorgeschlagenen Struktur überein. Das Hydrazid wurde nach dem Verfahren gemäß BE-PS 837 390 in das Azid überführt und das Azid mit Methylamin zu 4-Desacetyl-3'at-hydroxy-4'-desoxyleurosidin-C-3-N-methyl-carboxamid umgesetzt.

In analoger Weise wurden das N-Ethyl-, N-Propyl-, N-(ß-Hydroxyethyl)-, N-(ß-Methoxyethyl)-, Bis [_N-(ß-sulfido-ethyl)J-, N-(ß-Mercaptoethyl)-. N-(ß-MethyImercaptoethyl)-amid sowie analoge Amide der folgenden Verbindungen hergestellt:4-Desacety1-3'«-hydroxy-4'-desoxyleurosidin, 4-Desacety1-3'ß-hydroxy-4'-desoxyleurosidin, 4-Desacetyl-3'oc-hydroxy-4¹-desoxy-l-formylleurosidin, 4-Desacetyl-3'eC-hydroxy-4^l-desoxy-VLB, 4-Desacetyl-3'jS-hydroxy~4'-desoxy-VLB, 4-Desacetyl-3^foc-hydroxy-4'-desoxyvincristin, 4-Desacetyl-3'ß-hydroxy-4'-desoxyvincristin sowie die Acylate und Mesylate usw. davon sowie 4-Desacetyl-3'-keto-4'-desoxyleurosidin, 4-Desacetyl-3'-oxo-4'-desoxy-VLB, 4-Desacetyl-3'oxo-4'-desoxy-l-formylleurosidin und 4-Desacetyl-3'oxo-4'-desoxyvincristin.

Das primäre Amid jeder der oben genannten Verbindungen kann auf zwei verschiedenen Wegen hergestellt werden; entweder kann das Azid mit Ammoniak umgesetzt oder das Hydrazid selbst kann mit Raneynickel nach Ainsworth, ÜS-PS 2 756 235 hydriert werden.

809340/0963

Beispiel 10

3'OC-Hydroxy-4¹-desoxy-1-desme thy l-l-forrnylleurosidin

Eine Lösung von 203 mg 3'<x-Hydroxy-4^f-desoxyleurosidin in Aceton wurde mit etwa 0,12 ml wässriger 2,2m-Schwefeisäure, die durch Verdünnen von 2,5 ml 18m-Schwefelsäure mit 19,9 ml Wasser herge-. stellt worden war, versetzt. Die Lösung wurde auf etwa -50⁰C gekühlt und mit einer weiteren Lösung aus 225 mg Chromtrioxid in 2,5 nil Essigsäure und 0,25 ml Wasser unter Rühren mit einem Magnetrührer während 5 Minuten tropfenweise versetzt. Man erhielt ein dunkles, offensichtlich homogenes Reaktionsgemisch. Das Umsetzungsgemisch wurde weitere 20 Minuten bei -50⁰C gerührt und anschließend sorgfältig auf -65⁰C gekühlt, und bei dieser Temperatur wurden 5 ml lU η wässriges Ammonium-hydroxid zugesetzt. Das erhaltene Gemisch wurde in 125 ml Eiswasser gegossen. Danach wurde die erhaltene wässrige Phase dreimal mit Chloroform extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt, mit verdünnter wässriger Natriumbisulfitlösung gewaschen und getrocknet. Eindampfen der organischen Lösung im Vakuum ergab 190 mg eines grünlichen Peststoffs. Bei. der DünnschichtChromatographie fehlte nicht nur der Fleck, der für den Ausgangsalkohol zu erwarten war, sondern es trat ein neuer Hauptfleck auf. Der grünliche Rückstand wurde deshalb an 20 g Siliciumdioxid chromatographiert. Das Chromatogramm wurde mit 30-ml—Anteilen eines Lösungsmittelgemisches aus Benzol und Chloroform im Verhältnis 2:1, das aufeinanderfolgend 6, 9, 13,5a 20, 30 und 45#Methanol enthielt, entwickelt. Die gesammelten Fraktionen besaßen ein Volumen von je 10 ml. Die Fraktionen 14 bis 22 wurden vereinigt und ergaben nach Verdampfen des Lösungsmittels I3I mg eines hellgrünen Feststoffs, der aus dem bei der Umsetzung gebildeten 3'öt-Hydroxy-4'-desoxy-1-desmethyl-l-formylleurosidin bestand. Die Verbindung erwies sich nach DünnschichtChromatographie als einheitlich (ein Fleck) und besaß die folgenden physikalischen Eigenschaften:

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-2T-

IR-Spektrum (in Chloroform): 3480, 17^6, I692 und 1220 cm % UV-Spektrum: ^^?^H = 215 (£ = 3,75 x 10⁴), 222, 256, 298 nm;

Iu ο. Χ

NMR: 5£5S¹3 8_S79 (CHO)₃ 8₃O3 (Indol-NH); kein Signal für

TMS

NCH₃.

Die Verbindung wurde mit 2$iger (Volumen/Volumen) ethanolischer Schwefelsäure in das entsprechende Sulfat umgewandelt.

Während der Herstellung der Hydrazidderivate der in 3'-Stellung oxygenierten Derivate von 4'-Desoxyleurosidin.und 4'-Desoxy-VLB sowie der entsprechenden 1-Formy!verbindungen führt die oben angegebene Reaktionsfolge Hydrazin-Azid-Amid normalerweise zur Bildung eines 4-Desacetylderivats, weil die ursprünglich an C-4 vorhandene Acetylgruppe xfährend einer oder mehrerer dieser Umsetzungen hydrolysiert wird. Die meisten dieser 4-Desacety!amide können mit einem aliphatischen Anhydrid oder SäureChlorid nach der Vorschrift der US-PS 3 392 173 zu dem entsprechenden C-4<=Acylat rückacyliert v/erden»

Beispiel 11 Herstellung von Salzen

Andere Salze, einschließlich derer mit anorganischen Anionen_s wie beispielsweise Chlorid, Bromid₃ Phosphat₉ Nitrat und dgl*,, sowie solcher mit organischen Anionen₃ wie Acetat₃ Chloracetat₉ Trichloracetatj Benzoat_s Alkyl- oder Arylsulfonat und dglo_S werden aus den Verbindungen gemäß der Erfindung nach einem Verfahren hergestellt j, das dem in Beispiel 1 für die Herstellung des Sulfats angegebenen analog ist₉ indem man die entsprechende Säure in einem geeigneten Verdünnungsmittel anstelle der 2#igen ethanolischen Schwefelsäure des Beispiels 1 einsetzte

Die Verbindungen gemäß der Erfindung besitzen gegenüber transplantierten Tumoren in Mäusen eine Aktivität in vivo und

führen zu einer Hemmung der zweiten Kernteilungsphase (Metaphasenhemmung) in Ovarienzellen des Chinesischen Hamsters, die nach einem Verfahren, das demjenigen von Siminoff, Applied Microbiology £, 66-72 (196I) nachgebildet wurde, in einer Gewebekultur gehalten wurden.

Zum Nachweis der Aktivität der Arzneimittel gemäß der Erfindung gegenüber transplantierten Tumoren in Mäusen wurde das Arzneimittel normalerweise auf intraperitonealem Wege in einer bestimmten Dosis 3 bis 10 Tage nach der Beimpfung mit dem Tumor verabreicht.

In der folgenden Tabelle I sind die Ergebnisse verschiedener Versuche zusammengefaßt, bei denen Mäuse mit transplantierten Tumoren erfolgreich mit einer Verbindung gemäß der Erfindung behandelt wurden. In der Tabelle sind in Spalte 1 die Namen der Verbindungen, in Spalte 2 die Abkürzungen der Bezeichnungen der transplantierten Tumoren, in Spalte 3 die Dosen und die Anzahl der Tage,während derer die Dosis verabfolgt wurde, in Spalte 4 der Bewertungstag nach jeder Verabfolgung und in Spalte 5 die prozentuale Inhibierung des Tumorwachstums bzw. die prozentuale Verlängerung der Überlebenszeit angegeben. (GLS ist eine Abkürzung für das Gardner-Lymphosarcom, WA-256 ASCITES ist die Äscitesform des Walkerrattenkarzinoms 256, B-16 und P-388 sind Melanom- bzw. Leukämiestämme.)

Bei dex⁵ Verwendung der neuen Verbindungen gemäß der Erfindung als Antitumormittel in Säugetieren wird zweckmäßigerweise die parenterale Verabreichungsweise gewählt. Bei der parenteralen Verabreichung xriLrd die intravenöse Verabfolgung bevorzugt, wenngleich bei kleineren Säugetieren., wie Mäusen, auch die intraperitoneale Verabfolgung angewandt werden kann. Bei der parenteralen Verabreichung werden isotonische Lösungen verwendet, die 1 bis 10 mg/ml eines Salzes der Alkaloidbase gemäß Formel I enthalten. Die Verbindungen werden in einer Menge von

309840/0963

.37-

0,01 bis 15 mg/kg und vorzugsweise von 0,1 bis 1 mg/kg Körpergewicht des Säugetieres ein- oder zweimal in der Woche oder alle zwei Wochen verabfolgt, was sowohl von der Aktivität als auch der Toxizität des Arzneimittels abhängt. Eine alternative Methode zur Erzielung einer therapeutischen Dosis bezieht sich auf die Körperoberfläche, wobei eine Dosis im Bereich von 0,1 bis 10 mg/m Säugetierkörperoberfläche alle 7 oder lh Tage angewandt wird.

Tabelle I

Verbindung

Dosis
Tumor mg/kg χ Tage Tag % Inhibierung bzw. Verlängerung der Überlebensdauer

3'tt-Hydroxy-4'-desoxy

1-desmethyl-l-formyl-

leurosidin-sulfat

GLS

'OC-Mesy loxy-4' -desoxy
leurosidin-sulfat

3'eC-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin-C-4-earboxhydrazid

- GLS

GLS

χ 10

β χ 10

x 10

1,5 x 10

1,8 χ 19

3,0 χ 10

1,5 x 10

0,75 x 10

χ 10

x 10

1,5 x 10

100

84

94 100

93

59

toxisch toxisch

67

49 36

15 16

100

85

94 100 100

87

37

33

OO K) OO CD

Tabelle I (Fortsetzung)

Verbindung

Dosis Tumor mg/kg χ Tage Tag % Inhibierung bzw.

Verlängerung der Überlebensdauer

3^v«&-Hydroxy-4'-desoxy- B-l6 leurosidin-sulfat

9x3

	WA-256 ASCITES	1	6 3 ,5	X X	10 10 10
	P-388	7 3,	75	X	10 10
3'-Oxo-4'-desoxy- leurosidin-sulfat	P-388	7	,5	10

toxisch ⁺

102 79

38

von 5 unbegrenzt überlebende (4 out of 5 indefinite survivors)

Claims

Pat ent ans ρ r ü c h e

.1* Dimeres Indol-Dihydroxndol der allgemeinen Formel

5'

- R³

"7/ 6' "

'/ M

Ψ ⁴ "

R⁵

V-C-O-CHa ¹⁴' I J H

H jO

I 1

7%

CHsO-

-OH

6-r⁸ Il

worin -■".."

ι
R eine der Gruppen OH oder O-C-CH, bedeutet ₃

2 " " - " ""■■.."■-R eine der Gruppen CH-, oder CHO bedeutet,

einer der.Reste R und R Wasserstoff und der andere eine C_OH_[--Gruppe bedeutet,

einer der Reste R und R , einzeln genommen, Wasser-

7 stoff und der andere eine OR'-Gruppe bedeutet oder

S fi
■R- und R zusammengenommen Sauerstoff bedeuten,

wobei R Wasserstoff oder eine der Gruppen AIk-NH-C,

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- 35 -

ο ο

It ti

AIk-C oder AIk-S bedeutet, tt O

ρ ■ -ι

R in dem PaIIe₃ wenn R eine Hydroxylgruppe oder

eine O-C-CH^-Gruppe ist, eine der Gruppen OCH-,, NH₀, tt -> jd

NH-CH₃, NH-CH₂-CH₂-O-AIk oder NH-CH₂-CH₂S-AIk bedeutet oder in dem Falle, wenn R" eine Hydroxylgruppe ist, eine der Gruppen NH-NH₂, N₃, NH-CH₂-CH₂-OH oder NH-CH₂-CH₂-SY bedeutet, worin Y entweder ein Wasserstoffatom oder eine Bindung ist, die die Schwefelatome in zwei Resten der Formel I, worin Y eine Bindung ist, miteinander verbindet, und Alk eine (C.-C-.)-Gruppe bedeutet, oder ein pharmazeutisch annehmbares Salz davon.
2. 3'cC-Hydrcxy-4'-desoxyleurosidin.
3. 3'o£.-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin-sulfat.
4. 3'-Oxo-4*-desoxyleurosin.
5. 3'ß-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin.
6. S'-Oxo-V-desoxy-yLB.
7. S'ß-Hydroxy-^'-desoxy-VLB.
8. 3'«-Hydroxy-V-desoxy-VLB.
9. 3'ötf-Acetoxy-il·*-desoxyleurosidin.
10. 3'oC-Mesyloxy-V-desoxyleurosidin.
11. 3^Tot-(N-Methyl-carbamoyloly)-4^l-desoxyleurosidin.
12. 4-Desacetyl-3 'ct~hydroxy-4'-desoxyleurosidin-C-3-carboxhydrazid.
13. 3' -Hydroxy-4'-desoxy-l-desmethyl-l-formyl-leurosidin.

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14. Gegen Tumoren wirksames Arzneimittel, bestehend aus einem inerten Träger und einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 13 oder deren pharmazeutisch annehmbaren Salz als aktivem Bestandteil.
15. Verfahren zur Herstellung von 3'0C-Hydroxy-4' -desoxyleurosi din, dadurch gekennzeichnet, daß man Leurosin mit Raneynickel in einem Lösungsmittel reduziert.
16. Verfahren gemäß Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, daß man Leurosin mit W-4-Raneynickel in einem niedrig^molekularen Alkanol bei Rückflußtemperatur reduziert.
17. Verfahren zur Herstellung von 3'-Oxo-4¹ -desoxyleurosidin., dadurch gekennzeichnet₃ daß man 3'ös-Kydroxy-4'-desoxyleurosidin mit einem milden Oxidationsmittel in einem Reaktionsgemisch umsetzt.
18. Verfahren gemäß Anspruch 17 _s dadurch gekennzeichnet_s daß man 3'ot-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin mit N-Chlorsuccinimid und Dimethylsulfid in einem Gemisch aus Toluol und Methylenchlorid bei 0 bis 25°C umsetzt.
19. Verfahren zur Herstellung eines 3'-Hydroxy-4'-desoxyindoldihydroindol-Dimeren der allgemeinen Formel

H Γ '_s""Ü wh3 II

! η

CHs

13

V V-OH

ι :

CH₃

II O

einer der Reste R-* und R ' Wasserstoff und der andere

eine CpHj--Gruppe unö. R eine der Gruppen OCH, _s NH₂, KH-CH₃₉ HH-GH₂-CH₂-O-AIk oder WH-CH₂-CH₃-S-AIk bedeutet, wobei Alk eine (C^-C,)-Alkyl-ßruppe bedeutet,

dadurch gekennzeichnet,, daß man die 3'-0xoverbindung der

allgemeinen Formel s' ₃

⁶V \T -

/ >l R⁴

«■ « "t'X

«•Ζ v-?^s' V

V⁶Nr \~0-0-CH₃ Formula III

Il

0.11 A 6> CH3

A As > -0-C-CH₃

;_0H

³ . C-R³

worin

R , R und R die oben angegebene Bedeutung besitzen, mit einem Reduktionsmittel in einem Reaktionsmedium umsetzt.
20. Verfahren gemäß Anspruch 19» dadurch gekennzeichnet, daß man als Reduktionsmittel Natriumborhydrid verwendet.
21. Verfahren gemäß Anspruch 19» dadurch gekennzeichnet, daß man 3'-Oxo-4'-desoxyleurosidin mit Natriumborhydrid in Ethanol bei -20° bis 0⁰C zu V ß-Hydr-oxy-4 '-desoxy leurosidin umsetzt.
22. Verfahren gemäß Anspruch 19, dadurch gekennzeichnet, daß man 3'-Oxo-4'-desoxy-VLB mit Natriumborhydrid in Ethanol bei -20° bis 0°C zu 3'ß-Hydroxy-4'-desoxy-VLB umsetzt.
23. Verfahren gemäß Anspruch 19» dadurch gekennzeichnet, daß man 3'-Oxo-4'-desoxy-VLB mit Natriumborhydrid in Ethanol bei -20° bis 0⁰C zu 3' ^C-Hy dr oxy-4' -desoxy-VLB umsetzt.
24. Verfahren zur Herstellung von 3'-0xo-4'-desoxy-VLB, dadurch gekennzeichnet, daß man 3'-Oxo-4'-desoxyleurosidin in einem milden basischen Reaktionsgemisch umsetzt.
25. Verfahren gemäß Anspruch 24, dadurch gekennzeichnet, daß man 3'-Oxo-4'-desoxyleurosidin mit Dimethylamin in Ethanol bei 0° bis 25°C zu 3 *-0xo-4'-desoxy-VLB umsetzt.
26. Verfahren zur Herstellung eines 4'-Desoxyindol-dihydroindol-

LXmeren der allgemeinen Formel

₇' s'/V³

l/ 4>u R⁴

-O-R9

1S'« 13^J

/ V--G-O-CH3 IV

! Il

η ; 0

13

CH3O—*^^D A Mz y 0-C-CH3

N N-OH "

•

I ·

CHs ^__Rs

Il 0

■z if

einer der Reste R^ und R Wasserstoff und der andere eine C₂H₅-Gruppe,

R⁸ eine der Gruppen OCH₃₁ NH₃₅ NH-CH₃₉ NH-CH₂CH₂-O-AIk oder NH-CH₂-CH₂-S-AIk und

Q H

R eine der Gruppen AIk-C- oder AIk-S bedeuten.

Il II

0

wobei Alk eine (CrC-^-Alkyl-Gruppe bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß man ein 3'-Hydro.xy-4^T-desoxyindol-dihydroindol-Dimeres der allgemeinen Formel

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CHsO-

R₅ R und R die oben angegebene Bedeutung besitzen_s

9 10 mit einer Verbindung der allgemeinen Formel R-R ₉ worm

10 9

R eine der Gruppen OR^₉ OH oder X bedeutet _s wobei X P₃ Cl₂ Br oder I bedeutet_s in einem Reaktionsgemisch umsetzt«
27« Verfahren gemäß Anspruch 26, dadurch gekennzeichnet _s daß man 3'©-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin mit Acetanhydrid in einem Reaktionsgemiseh aus p-Dimethylaminopyridin und Methylendichlorid bei Umgebungstemperatur zu 3'e?-Acetoxy-4'-desoxyleurosidin umsetzt.
28« Verfahren gemäß Anspruch' 26_s dadurch gekennzeichnet_s daß man 3'e?-Hydroxy-4' -desoxyleurosidin mit Mesylchlorid in Pyridin bei 0⁰C zu 3^!62=Mesyloxy-4' -desoxyleurosidin umsetzt=
29„ Verfahren zur Herstellung von 3'^-(N-Alkyl-carbamoyloxy)-4^s-desoxyleurosidin₃ dadurch gekennzeichnet ₃ daß man

• ö ·

3'(X-Hydroxy-ip-desoxyleurosidin mit einem Alkylisocyanat in Benzol bei 30° bis 50⁰C umsetzt.
30. Verfahren gemäß Anspruch 29, dadurch gekennzeichnet, daß man 3^TK-Hydroxy-4'-desoxyleurosidxn mit Methylisocyanat in Benzol bei 40⁰C zu 3'«f-(N-Methyl-carbamoyloxy)-4^f-

desoxyleurosidxn umsetzt.
31. Verfahren zur Herstellung von 4-Desacetyl-3¹O?-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin-C-3-carboxhydrazid, dadurch gekennzeichnet, daß man 3'#-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin mit Hydrazin in einem Reaktbnsgemisch umsetzt.
32. Verfahren gemäß Anspruch 31» dadurch gekennzeichnet, daß man 3^tö<-Hydroxy-4'-desoxyleurosidin in wasserfreiem Methanol mit Hydrazin bei 65 C zu 4-Desacetyl-3^!(*-hydroxy-4'-desoxyleurosidin-C-3-carboxhydrazid umsetzt.
33· Verfahren zur Herstellung von3'0t-Hydroxy-4'-desoxy-l-desmethyl-1-formylleurosidin, dadurch gekennzeichnet, daß man 3'oc-Hydroxy-4'-desoxyleurosidxn in einem Reaktionsgemisch oxidiert.
34. Verfahren gemäß Anspruch 33, dadurch gekennzeichnet, daß man 3'oC-Hydroxy-4'-desoxyleurosidxn in Aceton mit Chromdioxid in wässriger Essigsäure bei -50° bis -65⁰C zu 3'(X-Hydroxy-4' -desoxy-1-desmethyl-l-formylleurosidin umsetzt.
35. Verwendung einer Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 13 zur Herstellung eines Antitumormittels.

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