DE2807847A1 - Bicyclische verbindungen, verfahren zur herstellung und daraus hergestellte arzneimittel - Google Patents

Description

PATENTANWXUTE

PROF. DR. DR. J. REITSTÖTTER

DR.-ING. WOLFRAM BUNTE 28078^7

DR. WERNER KINZEBACH

BAUERSTRASSE 22. D-8OOO MÜNCHEN 4O ■ FERNRUF (O89) 37 65 83 · TELEX S21S2OS ISAR D POSTANSCHRIFT: POSTFACH 78O. D-8OOO MÜNCHEN 43

München, den 23. Februar 1978 M/18 253

BRISTOL-MYERS COMPANY

345/ Park Avenue, New York, N.Y. 10022 U. S. A.

^: Bicyclische Verbindungen, Verfahren zur Herstellung und daraus hergestellte Arzneimittel

809842/0577

Die erfindungsgemäßen Cephalosporine besitzen im allgemeinen die für derartige Verbindungen üblichen Eigenschaften und sind insbesondere brauchbar bei der Behandlung von bakteriellen Infektionen.

Die Cephalosporine sind eine bekannte Gruppe semisynthetischer antibakterieller Mittel, welche ursprünglich beispielsweise durch Acylierung der 7-Aminogruppe des Kerns der 7-Aminocephalosporansäure (7-ACA) und später durch entsprechende Acylierung davon abgeleiteter Ringe, bei denen beispielsweise der Substituent in 3-Stellung modifiziert war, hergestellt wurden. Es gibt verschiedene Veröffentlichungen in der wissenschaftlichen Literatur (z.B. Cephahlosporins and Penicillins - Chemistry and Biology, herausgegeben von Edwin H. Flynn, Academic Press, New York, 1972, insbesondere Seiten 554-569) und in der Patentliteratur, beispielsweise die US-Patentschriften:

3 687 948; 3 741 965; 3 743 644; 3 759 904; 3 759 905; 3 766 175; 3 766 906; 3 769 281; 3 769 801; 3 799 923; 3 812 116; 3 813 388; 3 814 754 und 3 814 755.

Erteilte Patente, betreffend 3-thiolierte Cephalosporine, bei denen der Substituent in 7-Stellung

a) a-Amino-a-phenylacetamido ist, sind die US-PSen 3 734 907, 3 687 948, 3 641 021, 3 741 965, 3 757 015, 3 743 644, die japanische Patentschrift 71/24400 (Farmdoc 46374S), BE-PS 776 222 (Farmdoc 38983T) die GB-PS 1 328 340, welche verschiedene Substituenten am Benzolring umfaßt, BE-PS 772 592 (Farmdoc 19696T ) üS-PS-en 3 687 948, 3 734 907 und 3 757 012 , DT-PS 2 202 274 (Farmdoc 50428T) entsprechend US-PS 3 759 904, NE-PS 7205644 (Farmdoc 76309T; US 3 757 014);

809842/0577

M/18 235 - 6 -

b) ο-/ m- oder p-Aminoäthoxyphenylacetamido ist, sind die NE-PS 72/13968 (Farmdoc 24740U), entsprechend der US-PS 3 759 905;

c) o-Aminomethylphenylacetamido ist, sind die US-PS-en 3 766 176 und 3 766 175 (in welchen auch die ältere Patentliteratur die 7-Phenylacetamidocephalosporansäuren betreffend zusammengefaßt ist);

■ d) N-(Phenylacetimidoyl)-aminoacetamido ist, ist die

US-PS 3 692 779; und

e) a-Amino-a-(1,4-cyclohexadienyl)-acetamido ist, ist die BE-PS 776 222 (Farmdoc 38983T; GB-PS 1 328 340).

Weitere ähnliche Veröffentlichungen sind in US-PS 3 692 ( BE-PS 771 189; Farmdoc 12819T), JA-PS 72/05550 (Farmdoc : 12921T), JA-PS 72/05551 (Farmdoc 12922T), US-PS 3 719 ; ( BE-FS 759 570; Farmdoc 39819S), BE-PS 793 311 (Farmdoc

■ 39702U) und BE-PS 793 191 (Farmdoc 39684U) enthalten.

Veröffentlichungen über 3-thiolierte Cephalosporine, bei denen der Substituent in 7-Steilung 7-Mandelamido (7-a-Hydroxyphenylacetamido) ist, finden sich beispielsweise in US-PS 3 641 021, FR-PS 73.10112, US-PS 3 796 801, GB-PS 1 328 340 (Farmdoc 38983T), US-PS 3 701 775, JA-PS 48-44293 (Farmdoc 55334U) und in Hoover et al. J. Med. Chem. 17(1), 34-41 (1974) und Wick et al. Antimicrobial Ag. Chemo., 1 (3), 221-234 (1972).

In der US-PS 3 819 623 (und beispielsweise ciuch in der GB-PS 1 295 841 und DT-PS 1 953 861) ist speziell 2-Mercapto-1,3,4-thiadiazol-5-essigsäure mit Herstellungsangaben und dessen Umwandlung in 7-(1H-Tetrazol-1-yl-acetamido)-3-(5-carboxymethyl-1,3,4-thiadiazol-2-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure beschrieben, die auch in der DT-OS 2 262 262 offenbart ist.

809842/0577

M/18 235

Die US-PS-en 3 766 175 und 3 898 217 beschreiben Verbindungen der Formel

CH₂NH₂

Il

CH-C-NH-CH CH CH,

O=C — N

C -CH₀-S-R

COOH

worin R die Bedeutungen

1 τ

-CH

oder

-CH.

ν"

besitzt, sowie pharmazeutisch verträgliche Salze davon, bzw. Verbindungen der Formel

worin R für H oder Niedrigalkyl steht; R¹ für H, (Niedrig)alkanoyloxy,

809842/0577

M/18 235 - 8 -

^Oder

steht,

η eine ganze Zahl von 4 bis einschließlich 7 ist,
sowie die pharmazeutisch verträglichen Säureadditionssalze
davon.

Die US-Patentschriften 3 883 520 und 3 931 160 sowie der

Farmdoc Abstract 22850W erwähnen 3-heterocyclische Thio- ! methylcephalosporine, welche eine Anzahl von Substituenten, ι (einschließlich Carboxyl) an den zahlreichen Heterocyclen
aufweisen, diese Hinweise sind jedoch ganz allgemeiner
Natur und enthalten keine physikalischen Konstanten, Ausbeuten, Syntheseverfahren oder dergleichen, und benennen noch
nicht einmal eine Verbindung, welche einen Carboxyl subs ti tuen ten ■ enthält.

Die US-PS 3 928 336 gibt eine Zusammenfassung des älteren
Standes der Technik auf dem Cephalosporin-Gebiet.

Die US-PS-en 3 907 786 und 3 946 000 beschreiben Cephalospo- j rine, welche verschiedene ringverbundene bicyclische Thiole ! enthalten.

Farmdoc-Abstract 18830X beschreibt Verbindungen der Formel

T \

COOH (CH₂)_n-C00H

worin R Acyl oder Wasserstoff bedeutet, R für H oder ! Methoxy steht und η gleich 1 bis 9 ist. |

809842/0577

M/18 235

Die vorliegende Erfindung schafft Verbindungen der Formel I

R¹ -KH-CH-

I c-

-CH

C-OH

!I 0

.N-(CHa)_nCOOH

welche nachstehend oft auch wie folgt angegeben ist

R¹-NH

und worin

η für 1 oder 2 steht, und R Acyl oder Wasserstoff bedeutet,

sowie die Ester und nicht-toxischen, pharmazeutisch verträglichen Salze davon. Die Stereochemie des bicyclischen Kerns entspricht der von Cephalosporin C.

Die Ester der Verbindungen der Formel I umfassen, ohne jedoch darauf beschränkt zu sein, diejenigen, welche die Gruppe

.W

- CH

aufweisen,

8 09842/0577

worin, wenn W Wasserstoff bedeutet,

Z für (Niedrig)alkanoyl, Benzoyl, Naphthoyl, Furoyl, Thenoyl, Nitrobenzoyl, Methylbenzoyl, Zalogenbenzoyl, Phenylbenzoyl, N-Phthalimido, N-Succinimido, N-Saccharino, N-(Niedrig)alkylcarbamoyl, (Niedrig)alkoxy, (Niedrig)-alkylthio, Phenoxy, Carbalkoxy, Carbobenzoxy, Carbamoyl, Benzyloxy, Chlorbenzyloxy, Carbophenoxy, Carbo-tert.-butoxy oder (Niedrig)alkylsulfonyl steht,

und wenn W Carbalkoxy bedeutet, Z Carbalkoxy bedeutet, und wenn W Phenyl bedeutet, Z für Benzoyl oder Cyano steht, oder

worin W und Z zusammengenommen 2-Oxocycloalkyl mit 4 bis einschließlich 8 Kohlenstoffatomen bedeuten. Bevorzugte erfindungsgemäße Verbindungen sind die Pivaloyloxymethyl-, Acetoxymethyl-, Methoxymethyl-, Acetonyl-, Phenacyl-, p-Nitrobenzyl-, ß,ß,ß-Trichloräthyl, 3-Phthalidyl- oder 5-Indanyl-Ester.

Acyl (R ) steht für die Gruppen der Formeln:

CH₀NHR' ^v_ CH₉NHR¹ ^CH₀NHR¹

¹ ' ^' und

CH₂CO- , 11IUh₂CO- ^ >CH₂C0-

worin R für Wasserstoff, Hydroxy oder Methoxy und R¹ für Wasserstoff oder Methyl steht.

Eine bevorzugte Ausführungsform der Erfindung sind die Verbindungen der Fi
deutungen besitzt:

Verbindungen der Formel I, worin R die folgenden Be-

809842/0577

M/18 235

c.

CH₂CO-

und

Weitere erfindungsgemäße bevorzugte Verbindungen sind diejenigen Verbindungen der Formel I, worin R folgende Bedeutungen hat:

CH₂NHOH₃

CH₂CO-

CH₂NHCH₃

\ //■—"CH^CO-

,CH₂NHCH

-CH₂CO-

und

809842/0577

M/18 235

Eine bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung sind die Verbindungen der Formel:

-NH-CH-CH CH

worin R für

^0H₀NHR¹

CH₂CO- oder

CH₂CO-

CH₂NHR"

CH₂CO-

steht, worin

R Wasserstoff, Hydroxy oder Methoxy bedeutet, R' für Wasserstoff oder Methyl steht,

η für 1 oder 2 steht, und M die Reste

	0 -CHOC(CHa)nR,	0 Il	und	0 -CKOC(CH8	N
	t·	Il _ -CHXCOR6 I	4 ist;	R10
	oder-
bedeutet,
Null bis

NR⁴R⁵

-CH-S-C-R⁶ to

809842/0577

M/18 235 - 13 -

R bedeutet Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, Cycloalkyl mit 3 bis 6 Kohlenstoffatomen, Phenyl, Cj-C.-Phenylalkyl, Pyridyl, Thienyl oder Pyrrolyl?

R ° bedeutet Wasserstoff, Methyl oder Äthyl; 2 3

R und R bedeuten jeweils Wasserstoff, Alkyl mit 1 bis 6

Kohlenstoffatomen, Phenyl, Pyridyl oder Thienyl; I 4 5

R und R stehen jeweils für Wasserstoff oder Alkyl mit

1 bis 4 Kohlenstoffatomen; R . steht für Alkyl mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Phenyl, Phenalkyl mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Pyridyl, Thiadiazolyl, Amino oder C₁-C. Alkylamino;

X steht für NH oder Sauerstoff;

und jede Phenylgruppe·ist unsubstituiert oder mit ■ einem oder 2 Substituenten, ausgewählt unter Alkyl mit 1 bis i Kohlenstoffatomen, Alkoxy mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, ! -. -ι

j Hydroxy, Amino, NHR , N(R ) , Nitro, Fluor, Chlor, Brom j oder Carboxy, substituiert,

! sowie die nicht-toxischen, pharmazeutisch verträglichen Salze j davon.

Eine weitere bevorzugte Ausführungsform der Erfindung sind die Verbindungen der Formel

R¹-NH-CH-

I I I I · .

N-(CHa)_nCOOH

809842/0577

M/18 235

_ 14 _

worin R für

CH₂NHR¹

CH₂CO-

oder

CH₈NKR¹ -CH₈CO-

oder

,CH₈NHR CH₂-CO-

steht, worin

R Wasserstoff, Hydroxy oder Methoxy bedeutet;

R' für Wasserstoff oder Methyl steht?

η 1 oder 2 bedeutet und

M ausgewählt ist unter den Gruppen

r^h3

-CH-O-C-R

-CH-C-

-CH-X^-C-OR

worin

R ein Wasserstoffatom, eine Methyl- oder eine Äthylgruppe

bedeutet,

X² für -0-, -NH- steht;
R eine basische Gruppe, wie Alkyl oder Aralkyl, substituiert mit substituiertem oder unsubstituiertem NH_, wie

Alky1-NHCH₃, Ar alkyl-NHCH₃,

Aralkyl-NH_(Q) , -CE-/Q}\ , -

bedeutet,

809842/0577

M/18 235 - 15 -

R steht für eine Alkylgruppe, wie Methyl, Äthyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl, Pentyl oder eine 2-Äthyl-hexyl-Gruppe; eine Cycloalkylgruppe, wie Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl oder Cycloheptyl; eine Arylgruppe, wie Phenyl oder Naphthyl; eine Aralkylgruppe,, wie Benzyl oder Naphthylmethyl; eine heterocyclische Gruppe, worin die Alkyl-, Cycloalkyl-, Aryl-, Aralkyl- und heterocyclischen Gruppen substituiert sein können durch eine oder mehrere Gruppen, ausgewählt unter Aminogruppen, substituierten Aminogruppen, wie Methylamino, Diäthylamino oder Acetamido-Gruppen, den Halogengruppen, wie Fluor, Chlor oder Brom, Nitrogruppen, Alkoxygruppen, wie Methoxy, Äthoxy, Propyloxy, Isopropyloxy, Butoxy oder Isobutoxy;

sowie die nicht-toxischen, pharmazeutisch verträglichen Salze

davon.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist weiterhin ein pharmazeutisches Mittel, das eine antibakteriell wirksame Menge einer Verbindung der Formel enthält,

NH-CH-CH I I

Ψζ

C —Ν C-CHpS

Kr *«w. *& c-

C-OM Π

worin R für

:₂co-

steht, worin

oder

oder

CH₂CO=

CH₂CO-=

809842/0577

M/18 235

R Wasserstoff, Hydroxy oder Methoxy bedeutet;

R¹ für Wasserstoff oder Methyl steht; η die Bedeutungen 1 oder 2 besitzt, und

M Wasserstoff, Pivaloyloxymethyl, Acetoxymethy1, Methoxymethyl, Acetonyl, Phenacyl, p-Nitrobenzyl, ß,ß,ß-Trichloräthyl, 3-Phthalidyl oder 5-Indanyl, und bevorzugt Wasserstoff, bedeutet,

sowie die nicht-toxischen, pharmazeutisch verträglichen Salze davon-

Die erfindungsgemäßen Verbindungen und Arzneimittel werden zur Behandlung bakterieller Infektionen verwendet, wobei man einem infizierten warmblütigen Lebewesen, einschließlich des Menschen, eine wirksame, aber nicht-toxische Dosis von 250 - 1000 mg einer Verbindung der Formel:

-CH-CH
C-N

CH₂

C-CH₂S

C-OM

Il

injiziert,

worin R die folgenden Bedeutungen hat,

oder

CH₂CO-

cH₃CO-

CH₃CO- \

worin

R Wasserstoff, Hydroxy oder Methoxy bedeutet;

R¹ Wasserstoff oder Methyl bedeutet;

809842/0577

, Μ/18 235 - 17 -

η für 1 oder 2 steht, und

M Wasserstoff, Pivaloyloxymethy1, Acetoxymethyl, Methoxymethyl,· Acetonyl, Phenacyl, p-Nitrobenzyl, ß,ß,ß-Trichloräthyl, 3-Phthalidyl oder 5-Indanyl, und bevorzugt Wasserstoff, bedeutet,

oder eines nicht-toxischen, pharmazeutisch verträglichen Salzes davon.

Sie eignen sich insbesondere auch zur Bekämpfung von Shig. dysenteriae Infektionen und B. Anthracis Infektionen.

! Die Erfindung betrifft auch das Verfahren zur Herstellung der antibakteriellen Mittel der Formel

V¹S ^

^NHCH-CH

R^NH-CH-CH CH₂

_nCOOH

COOH

worin η die Bedeutungen 1 oder 2 besitzt und R die oben für Acyl angegebenen Bedeutungen aufweist, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine Verbindung der Formel II

H₀N-CH-CH ' CH₀ ■ 2(1 ι 2

C-CH₂S ;-^J<^_r'iK_v/N-(CH₂ )_ncooH

COOH

II

8098A2/0577

M/18 235 - 18 -

28.Ü7847

worin η für 1, oder zwei steht, oder ein Salz oder einen leicht hydrolysi erbaren Ester oder eine Schiffsche Base, z.B. mit Benzaldehyd oder SaIicylaldehyd, dieser Verbindungen mit einem organischen Monocarbonsäurechlorid oder einem funk- i

j tionellen Äquivalent davon als Acylierungsmittel umsetzt, wo- j bei es sich bei den oben erv/ähnten Salzen, leicht hydrolysier- ' baren Estern oder Schi ff'sehen Basen um solche handeln kann, i wie sie beispielsweise in der US-Patentschrift 3 284 451 und in der britischen Patentschrift 1 229 453 beschrieben sind?

oder es handelt sich um die in der US-Patentschrift 3 249 622 '

' beschriebenen Silylester, die dort für die 7-Aminopenici11 ansäure verwendet worden sind und auch in der britischen Patentschrift 1 073 530 beschrieben sind, insbesondere handelt es sich um die Pivaloyloxymethyl- , Acetoxymethy1 -, Methoxymethyl- , Acetonyl-, Phenacyl-, p-Nitrobenzyl-, ß,ß ,ß-Trichioräthyl-, 3-Phthalidyl - und 5-1ndanylester. :

Zu den oben erwähnten funktione!1 en Äquivalenten gehören die entsprechenden Säureanhydride, die gemischten Anhydride und insbesondere die gemischten Anhydride, die aus stärkeren Säuren, wie den niedrigaliphatischen Honoestern der Kohlensäure oder ; Alkyl- und Arylsulfonsäuren und stärker gehinderten Säuren, ^; wie Diphenyl essigsäure, gebildet worden sind. Außerdem können ; auch Säureazide oder ein aktiver Ester oder Thioester (z.B. mit p-Nitrophenol, 2,4-Dinitrophenol , Thiophenol oder Thioessigsäure) verwendet werden oder die freie Säure selbst kann mit Verbindung II gekoppelt werden, wenn man zuerst die freie

809842/0577

M/18 235 - 19

Säure mit N,N'-Dimethyl chiorformiminiumchlorid umsetzt /vgl. britische Patentschrift 1 008 170 und Novak und Weichet, Experientia XXI₅ 6, 360 (1965)7, oder man benutzt für diesen Zweck Enzyme oder ein N ,N'-Carbonyldiimidazol oder ein N,N¹-Carbonylditriazol /vgl. südafrikanisches Patent 63/26347 oder man benutzt ein Carbodiimid C\ nsbesondere N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid, N ,N'-Diisopropylcarbodiimid oder N-Cyclohexyl-N'-(2-morpholinoäthyl)carbodiimid ; vgl. Sheehan und Hess₉ J.Amer.Chem.Soc., 7J_, 1967 (1955)7, oder man verwendet ein Al kylyl amin-Reagens /"vgl. R.Buijle und H.G.Viehe_s Angew.Chem. International Edition 3_S 582 (1964)7 oder ein Isoxazol iumsalz /"vgl. R.B.Woodward, R.A.Olofson und H.Mayer, 0 .Amer .Chem.Soc . _83, 1010 (1961)7 oder ein Ketenimin /"vgl. C.L.Stevens und M.E.Munk, J . Amer. Chem. Soc . , 8_0, 4065 (1958)7 oder man verwendet Hexachlorcyclotriphosphatriaziη oder Hexabromcyclotriphosphatriaziη (US-PS 3 651 050) oder Di phenylphosphorylazid /DPPA; J.Amer.Chem.Soc. , 9J_, 6203 bis 6205 (1972)7 oder Di- ; äthylphosphoryl cyani d /"DEPC; Tetrahedron Letters No. 18,

Seiten 1595 bis 1598 (1973)7 oder Di phenyl phosphi t /"Tetrahedron Letters No. 49₃ Seiten 5047 bis 5050 (1972)7. Ein weiteres ; Äquivalent des Säurechlorides ist ein entsprechendes Azolid, ! j d.h. ein Amid der entsprechenden Säure_s dessen Amid-Stickstoff i Glied eines quasi aromatischen 5-gliedrigen Ringes ist, j der wenigstens zwei Stickstoffatome enthält_s d„h = Imidazol, : ! Pyrazol , die Triazole, Benzimidazol₉ die j

ι Benzotriazole und ihre substituierten Derivate. . Ein Beispiel für das allgemeine Verfahren zur Herstellung eines Azolides ist die Umsetzung von N ,N ' -Carbonyldiimidazol mit einer Carbonsäure in äquimolaren Anteilen bei Raumtemperatur in Tetrahydrofuran, Chloroform, Dimethylformamid oder einem ähnlichen inerten Lösungsmittel, dabei bildet sich das Carbon- ' säureimidazolid in praktisch quantitativer Ausbeute unter Freisetzung von Kohlendioxyd und einem Mol Imidazol. Dicarbonsäuren, ergeben Diimidazolide. Das Nebenprodukt, Imidazol, fällt aus ;

8098A2/0577

und kann abgetrennt werden und das Imidazolid kann isoliert werden, dies ist jedoch nicht entscheidend. Die Verfahren zur Durchführung dieser Reaktionen zur Herstellung eines Cephalosporins und die für die Isolierung des Cephalosporins verwendeten Methoden sind allgemein bekannt.

Oben war die Verwendung von Enzymen für die Kupplung der freien Säure mit einer Verbindung der Formel II erwähnt worden« Zu derartigen Verfahren gehört die Verwendung eines Esters, z,B, des Methylesters, der freien Säure, wobei die Enzyme von verschiedenen Mikroorganismen geliefert werden, z.B. solchen die von T.Takahashi et al., J.Amer.Chem.Soc., 94(11), 4035 bis 4037 (1972) und von T.Nara et al., J.Antibiotics (Japan) 24(5) , 321 bis 323 (1971) und in der US-Patentschrift 3 682 777 beschrieben worden sind.

Für die oben beschriebene Kupplung der organischen Carbonsäure mit einer Verbindung der Formel II (oder einem Salz oder vorzugsweise einem leicht hydrolysierbaren Ester oder einer Schiff'schen Base, z.B. mit Benzaldehyd) verwendet man zv/eckmäßiger- und vorteilhafterweise auch als Kupplungsmittel trimeres Phosphonitri1chlorid (J.Org.Chem., 33(7) , 2979 bis 81, 1968) oder N-Äthoxy-1,2-dihydrochinoliη (EEDQ), wie in J .Amer.Chem.Soc. , 9_0, 823 bis 824 und 1652 bis 1653 (1968) und in US-PS 3 455 929 beschrieben. Die Umsetzung wird vorzugsweise bei 30 bis 35⁰C in Eenzol , Äthanol oder Tetrahydrofuran unter Verwendung von etwa äquimolaren Mengen aller drei Reagentien durchgeführt, anschließend wird auf übliche Weise isoliert und eventuell vorhandene Blockierungsgruppen werden in an sich bekannter Weise entfernt.

Im Rahmen eines weiteren erfindungsgemäßen Verfahrens werden die erfindungsgemäßen Verbindungen hergestellt, indem man die 3-Acetoxygruppe einer 7-Acylaminocephalosporansäure (die

809842/0577

Μ/Ί8 235 - 21 -

man herstellt, indem man eine 7-Aminocephalosporansäure anstelle der S-thiolierten-V-Aminocephalosporansäuren in dem hier oder woanders beschriebenen Acylierungsverfahren verwendet) durch

ein Thiol HSR der Formel:

worin η für 1 oder 2 steht, verdrängt und dann die Schutzgruppe entfernt, falls eine vorhanden ist, z.B. an der Aminomethyl- oder Methylaminomethylgruppe oder an der Carboxylgruppe oder an beiden»

Der Austausch einer derartigen 3-Acetoxygruppe durch eine solche Thiolgruppe kann in Lösung, z.B. in Wasser oder wässrigem Aceton, bei Temperaturen von wenigstens Raumtemperatur, vorzugsweise jedoch bei einer Temperatur im Bereich von etwa 50 bis 100 C, in Anwesenheit einer milden Base, wie Natriumbicarbonat, vorzugsweise in der Nähe des Neutralpunktes, z.B. bei etwa pH 6, durchgeführt werden. Vorzugsweise verwendet man einen Thiol-überschuß. Man isoliert das Reaktionsprodukt durch vorsichtiges Ansäuern der Reaktionsmischung und anschließendes Extrahieren mit einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel. Wie oben bereits erwähnt, ist die Herstellung vieler anderer 7-Acylamidocephalosporansäuren in der wissenschaftlichen und in der Patentliteratur beschrieben, vgl. z.B. die US-Klassen 260 bis 243C

809842/0577

Wenn die organische Carbonsäure eine funktionelle Gruppe, wie eine Amino- oder Methylamino-Gruppe enthält, ist es oft wünschenswert, diese Gruppe zuerst zu blockieren (oder zu schützen), dann die Kupplungsreaktion durchzuführen und schließlich aus der sich ergebenden Verbindung die Schutzgruppe durch eine chemische Reaktion zu entfernen.

Die Erfindung betrifft somit auch ein Verfahren zur Herstellung der antibakteriellen Mittel der Formel

R¹ -NH-CH CH

I ! c

-c

COOH

worin η 1 oder 2 bedeutet und R die oben für Acyl angegebenen Bedeutungen besitzt, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine Verbindung der Formel

,C-CH-O-C-CH₃

COOH

worin R Acyl (einschließlich des Cephalosporins C selbst) bedeutet, mit einer Verbindung der Formel

809842/0577

M/1QT2C O "3

Μ/18 235 - 23 -

•Ν
N-(CK₃)_nCOOH

worin η für 1 oder 2 steht, umsetzt.

Zu den Salzen der erfindungsgemäßen Verbindungen gehören die nicht-toxischen Carbonsäuresalze dieser Verbindungen, z.B. die nicht-toxischen Metallsalze, wie das Natrium-, Kalium-Calcium- und Aluminiumsalz, das Ammoniumsalz und die substituierten Ammoniumsalze, z.B. die Salze nicht-toxischer Amine, wie der Trialkylamine, dazu gehören Triäthylamin, Procain, Dibenzylamin, N-Benzyl-beta-phenäthylamin, 1-Ephenamin, N,N¹-Dibenzyläthylendiamin, Dehydroabietylamin, N,N'-bis-Dehydroabietyläthylendiamin, N-(Niedrig)-alkylpiperidin, z.B. N-Äthylpiperidin, und andere Amine, welche zur Salzbildung mit Benzylpenicillin verwendet worden sind; sowie die nicht-toxischen Säureadditionssalze davon (d.h. die Aminsalze), dazu gehören die Additionssalze mit anorganischen Säuren, wie das Hydrochlorid, Hydrobromid, Hydrojodid, Sulfat, SuIfamat und Phosphat und die Additionssalze mit organischen Säuren,wie das Maleat, Acetat, Citrat, Oxalat, Succinat, Benzoat, Tartrat, Fumarat, Malat, Mandelat, Ascorbat und dergleichen.

Die Erfindung umfaßt auch die Verbindungen (die entweder als Zwischenprodukte oder als Stoffwechsel-?recursoren verwendet werden), deren Aminogruppe blockiert ist durch Substituenten, wie 2-Jodäthoxycarbonyl (GB-PS 1 349 673) , t-Butoxycarbonyl, Carbobenzyloxy, Formyl, o-Nitrophenylsulfenyl, ß,ß,ß-Trichloräthoxycarbonyl, 4-Oxo-2-pentenyl-2, 1-Carbomethoxy=1~propenyl-2- und dergleichen.

809842/0577

M/18 235 - 24 - 280784?!

Derartige Blockierungsgruppen sind insbesondere die Ketone
(speziell Aceton) und Aldehyde (insbesondere Formaldehyd

und Acetaldehyd), wie sie beispielsweise in den üS-PS-en

3 198 804 und 3 347 851 beschrieben sind, und die ß-Ketoester und ß-Diketone beispielsweise gernäß der US-PS 3 325 479 und die

ß-Ketoamide, die in der japanischen Patentschrift 71/24714
(Farmdoc 47,321S) beschrieben sind. :

Die bevorzugten Ester der erfindungsgemäßen Cephalosporine j

sind die Pivaloyloxymethyl-, Acetoxymethyl-, Methoxymethyl-, ! Acetonyl- und Phenacylester. Alle sind brauchbare Zwischenpro- | dukte für die Herstellung des Cepahlosporins mit einer freien ■ Carboxylgruppe. !

Wie oben bereits erwähnt, werden diese fünf Ester der 7-Aminocepahlosporansäure jeweils in an sich bekannter Weise hergestellt. Ein ausgezeichnetes Verfahren ist das der US-Patentschrift 3 284 451, bei dem Natriumcephalothin durch Umsetzung
mit der entsprechenden aktiven Chlor- oder Bromverbindung,
(z.B. Phenacylbromid, Chloraceton, Chlormethyläther, Pivaloyl- _: oxymethylchlorid - auch Chlormethylpivalat genannt - Acetoxymethylchlorid) verestert und dann die Thienylessigsäure-Seiten- ■ kette enzymatisch entfernt, wie in diesem Patent beschrieben, -. oder chemisch entfernt, wie in US-PS 3 575 970 und in Journal ί of Antibiotics XXIV (11), 767 bis 773 (1971) beschrieben. Bei > einem anderen vorteilhaften Verfahren wird das Triäthylaminsalz der 7-Aminocephalosporansäure direkt mit der aktiven
Halogenverbindung umgesetzt, vgl. z.B. britische Patentschrift j 1 229 453. j

Diese Ester der 7-Aminocephalosporansäure werden dann mit ' der nucleophilen Komponente HSR in der gleichen Weise umge- -setzt, wie es hier für die 7-Aminocephalosporansäure selbst
beschrieben ist. Der 3-thiolierte Ester der 7-Aminocephalos-

809842/0577

M/18 235 - 25 -

poransäure wird dann mit der organischen Carbonsäure R'-OH
gekuppelt, wie zuvor beschrieben. Vor oder nach Entfernung
jeglicher Blockierungsgruppe, z.B. an einer Aminogruppe in
der 7-Seitenkette, wird der so erhaltene Cephalosporinester, ι falls er nicht per se verwendet wird, in seine freie Säure, ! einschließlich der Zwitterionenform, überführt, falls gewünscht; auch in ein Salz, indem man die veresternde Gruppe entfernt, : beispielsweise durch wässrige oder enzymatische Hydrolyse (z.B.'

mit Menschen- oder Tierserum) oder auch durch saure oder
alkalische Hyärolyse oder durch Behandlung mit Natriumthio- ; phenolat, wie in der US-PS 3 284 451 und für die Penicilline ] von Sheehan et al. in J. Org. Chem. 29 (7) , 2006 bis 2008
(1964) beschrieben.

Im Rahmen einer anderen alternativen Synthese wird die 3-thiolierte 7-Aminocepahlosporansäure in der hier beschriebenen
Weise hergestellt, dann an der 7-Aminogruppe acyliert und
schließlich verestert, z.B. durch Umsetzung des entsprechenden
Alkohols mit dem Säurechlorid, das z.B. durch Umsetzung des
fertigen Cephalosporins mit Thionylchlorid hergestellt werden
kann*oder man benutzt ein anderes, im wesentlichen saures
Veresterungsverfahren.

Bei der Behandlung bakterieller Infektionen des Menschen wer- ι

den die erfindungsgemäßen Verbindungen parenteral in Mengen j von etwa 5 bis 200 mg/kg/Tag und bevorzugt etwa 5 bis 20 mg/kg/ Tag, in mehreren Dosen, z.B. 3 bis 4-mal pro Tag, verabreicht.
Man verabreicht sie in Dosiseinheiten, die z.B. 125, 250 oder
500 mg Wirkstoff und geeignete physiologisch verträgliche . Träger oder Verdünnungsmittel enthalten« Die Dosiseinheiten liegen in Form von Flüssigpräparaten, wie Lösungen ^! oder Suspensionen, vor=

809842/0577

Die anderen zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendeten Reagentien werden entweder wie im Stand der Technik beschrieben (z.B. in den oben aufgeführten Patenten und Patentveröffentlichungen) oder nach streng analogen Verfahren hergestellt. Der Einfachheit halber und zur besseren Veranschaulichung sind nachstehend einige spezielle Beispiele für solche Syntheseverfahren aufgeführt, beispielsweise die Herstellung von Carbonsäuren mit einer freien Aminogruppe, die durch tert.-Butoxycarbonyl "blockiert" ist.

2-(tert.-Butoxycarbonylaminomethyl)-1,4-cyclohexadienyl-Essigsäure

Eine Lösung von 16,5 g (0,1 Mol) o-Aminomethylphenylessigsäure in 1,5 1 flüssigem Ammoniak (das zuvor mit 50 mg Li behandelt worden war, um eine Spur Feuchtigkeit zu entfernen), verdünnt man langsam mit 500 ml trockenem t-BuOH. Zu der Lösung gibt man in kleinem Mengen 3,4 g (0,5 Tom) Li während einer Zeitdauer von 4 Stunden, rührt die Mischung dann 16 Stunden bei Raumtemperatur und entfernt das flüssige Ammoniak unter einem Abzug und dampft schließlich bei einer Temperatur unterhalb 40 ⁰C zur Trockne ein. Den Rückstand löst man in 500 ml Wasser, chromatographiert die Lösung an einer Säule mit IR-120 (H⁺, 700 ml) Harz und eluiert mit 1 %-iger NH₄OH-Lösung. Die ninhydrinpositiven Fraktionen des Eluats werden vereinigt und zur Trockne eingedampft. Den Rückstand wäscht man mit vier 50 ml Portionen heißem Aceton und kristallisiert aus 500 ml Äthanol-Wasser (1:1) um, wobei man 11,2 g (67 %) farblose Nadeln, o-(2-Aminomethyl-i,4-cyclohexadienyl)-essigsäure erhält. Fp. 183 ⁰C.

IR: ν ^nU^° 1630, 1520, 1380, 1356 cm"¹,

ITlciX

809842/0577

NMR: 6 ^D2° ^{+ K}2^CO3 2,72 (4H, s, H₃C_x ), 3,01 (2H, s, CH₂

3,20 (2H, s, CH₀-N), 5,78 (2H, s, H.

¹ _C =)

Analyse CgH NO2	C	,65	H	,84	N	38
berechnet:	64	,77	7	,06	8,	44
gefunden:	64	8	8,

Verbessertes Verfahren zur Herstellung von α-(2-Aminomethy1- j 1 ,4-cyclohexadienyl)-essigsäure

CH₂NH₂

K₂CO₂H Li, tert. BuOH

NH- - TEA⁰HCl

CH₂CO₂H - LiCl -

Das von Welch, DoIfini und Giarusso in der US-PS 3 72 0 665 (Beispiel 1) verwendete Verfahren zur Herstellung von D-2-Amino-2-(1,4-cyclohexadienyl)-essigsäure wurde angepaßt. Eine Lösung von 830 ml destilliertem flüssigem Ammoniak trocknet man mit 40 mg Lithium unter Argonatmosphäre= Zu der gerührten : Lösung gibt man 11,0 g (0,07 Mol) 2-Aminomethylphenylessig- i säure und 340 ml tert=-Buty!alkohole Während 2 Stunden gibt : man dann insgesamt 1,6 g (0,225 Mol) Lithium zu der heftig

809842/0577

gerührten Lösung, behandelt die graue Mischung dann mit 35 g (0,215 Mol) Triäthylamin (TEA)-Hydrochlorid und rührt über Nacht bei Raumtemperatur 18 Stunden lang. Den tert.-Butylalkohol entfernt man bei 40 (15 mm) wobei man einen weißen Rückstand erhält, den man über Nacht im Vakuum über P^O-trocknet. Man löst den Feststoff in 30 ml 1:1 Methanol-Wasser und gibt die Lösung unter Rühren zu 3,5 1 einer 1:1 Mischung Chloroform-Aceton von 5 C. Dann rührt man die Mischung 20 Minuten und sammelt die Aminosäure, α-(2-Aminomethyl-l,4-cyclohexadienyl)-essigsäure, trocknet sie 16 Stunden im Vakuum über P₂ ⁰S ^und erhält 6,3 g (58 %) weiße Kristalle, Fp. 190 ⁰C, Zers.
mit der Struktur.

₂S
Fp. 190 ⁰C, Zers. Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang

Eine Lösung von 19,31 g (0,135 Mol) tert.-Butoxycarbonylazid in 152 ml Tetrahydrofuran (THF) gibt man zu einer gerührten Lösung von 14,89 g (0,09 Mol) 2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienyl-essigsäure und 7,20 g (0,18 Mol) Natrium- hydroxyd in 281 ml Wasser. Man rührt die Lösung 18 Stunden bei 25 ° und filtriert dann durch Diatomeenerde (Supercel). : Das THF entfernt man bei 40 ° (15 mm), wäscht die verbleibende Lösung mit Äther (2 χ 175 ml) und säuert mit 6 η Chlorwasser- ι stoffsäure (HCl) an. Man rührt die Mischung in einem Eisbad, sammelt den Niederschlag und trocknet 18 Std. im Vakuum bei 25 ° über P₉O₁-, wobei man 17,3 g (72,6 %) 2-(tert.-B.utoxycarbonylaminomethy1)-1,4-cyclohexadienyl-essigsäure als weißes Pulver erhält. Die IR- und NMR-Spektren stehen in Einklang mit der Struktur.

809842/0577

M/18 235 - 29 - 280?847 !

Herstellung von 3-Aminomethyl-2-thiophen-essigsäure

CH₂-NH₂

S CH₂-CO₂H

A) Thiophen-S-carboxaldehyd-dimethyl-acetal (2a)

j Eine Mischung von 322 g (2,9 Mol) Thiophen-3-carboxaldehyd¹',

j 636 g (6 Mol) Trimethoxymethan und 6 g IR-120 Harz (H⁺)

i in 200 ml Methanol erhitzt man 4 Stundem am Rückfluß»

'. Das Harz wird entfernt und das Filtrat unter verringertem

J Druck eingedampft, wobei man ein farbloses öl erhält,

ι das bei verringertem Druck destilliert wird. Die Ausbeute

ί beträgt 423 g (94 %) , Kp. 90-95 ⁰C 13 inmHg.

I IR: ν ^liq 3150, 1045, 1025 cm"¹

ΙΠ3.Χ

NMR: δ 3,21 (6H, s, OCH.,), 5,43 (1H, s, CHCT"⁰" ), (deutlich) ^PP 0-

7,0 - 7,4 (3H, m, Thiophen-H) ' S. Gronowitz, Arkev= kemi. 8, 411 (1955).

B) 2-Formylthiophen-3-carboxaldehyd-dimethylacetal· (3a)

Zu einer gerührten Lösung von 423 g (2,68 Mol) Verbindung 2a in 1 L wasserfreiem Äther gibt man tropfenweise während 1 Stunde eine frisch hergestellte Lösung von 27 Mol n-Butyllithium in Äther, wobei man unter trockenem N₂ leicht am Rückfluß erhitzt. Man erhitzt eine weitere

8Q9842/0577

halbe Stunde am Rückfluß und gibt dann während 0,75 Std. unter heftigem Rühren eine Lösung von 432 g (6MoI) Dimethylformamid (DMF) in 0,8 L wasserfreiem Äther tropfenweise zu der Mischung. Nach vollständiger Zugabe rührt man die Mischung : über Nacht, gießt sie auf 1 kg zerstoßenes Eis, wobei man rührt und läßt die Temperatur auf Raumtemperatur ansteigen. Man trennt die organische Schicht ab, sättigt die wässrige Schicht mit NaCl und extrahiert gründlich mit Äther (2 χ 200 ml) Man vereinigt die Ätherextrakte, trocknet über MgSO. und engt ein. Den Rückstand destilliert man bei verringertem Druck und sammelt das blaßgelbe Öl bei 100 bis 125 °C, 0,7 mmHg. ! Die Ausbeute beträgt 277 g (56 %).

IR: υ ^liq 3110, 1660, 1100 cm"¹.

IU 3.x

NMR: ö 3,40 (6H, s, OCH.J , 5,86 (1H, s, CH ),

(deutlich)^{Ppm J} O-

7,27 (1H, d, J=6 Hz, Thiophen-Hß), 7,81 (1 H, d-d, J=1,5 und 6 Hz, Thiophen_rHa), 10,34 (1H, d, J=1,5 Hz, -CHO).

C) 1-Methylsulfinyl-i-methylthio-2-(3-carboxaldehyd-äthylenacetal-2-thienyl)-äthylen (4b)

Die Herstellung der Verbindung ^b erfolgt gemäß dem Verfahren

4)
von K. Ogura et al. Man gibt 2 ml Triton B (40 %-ige Lösung in Methanol) in 5 ml THF (Tetrahydrofuran) zu einer Lösung

von 2,5 g (20 mMol) Methyl-methylthiomethyl-sulfoxyd und 2-Formyl-3-thiophencarboxaldehyd-äthylen-acetal (3b), erhitzt die Mischung etwa 1 Stunde am Rückfluß und engt bei verringertem Druck ein.

809842/0577

Man löst den Rückstand in 150 ml Benzol und extrahiert j

mit 3 χ 20 ml Wasser, trocknet die organische Schicht über j

MgSO. und dampft bei verringertem Druck zur Trockne ein- j

Der Rückstand wird auf Silicagel (80 g) säulenchromatographiert j

und nacheinander mit 500 ml Benzol und 500 ml Chloro- !

form eluiert. Aus dem Chloroformeluat isoliert man 4,9 g j

(85 %) des Produkts 4b in Form eines blaßgelben Öles» ]

IR: v^J 3110, 1600 cm"¹

NMR: ö^J*³^ 2,42 (3H, s, S-CH,), 2,78 (3H, s, SO-CH-), |

ι PPI" -3 Π— '

j 4,15 (4H, m, CH₂CH₂-), 6,12 (1H, s, CHC₀J '

7,34 (1H, d, J=4,5Hz, Thiophen-Hß), :

7,40 (1H₅ d, J=4,5Hz,, Thiophen-Ha) , !

! 8,28 (1H, s, -CH=). j

[

Das Semicarbazon von Verbindung _4 wird auf übliche Weise
! hergestellt und aus Äthanol-DMF umkristallisiert.

Fp. 212-213 ⁰C. - '

Analyse ^cio^H13^N3°2^S2

C	,58	H	32	N	,85	S	,70
39	,46	4,	24	13	,05	31	,63
39	4,	14	31

berechnet:
gefunden:

2) K. Ogura et al., Bull. Chem. Soc. (Japan), _45_, 2203 ('72)

3) D.W. McDowell et al., J.Org.Chem. J31_, 3592 ('66)

4) K. Ogura et al., Tetrahedron Letters', 1383 (1972).

8098^2/0577

D) 1-Methylsulfiny1-1-methylthio-2-(3-carboxaldehyddimethylacetal-2-thienyl)-äthylen (4a)

Verbindung ^a wird nach dem Verfahren wie für Verbindung 4b beschrieben, hergestellt. 50 ml Triton B (40 %-ige Lösung in Methanol) gibt man zu einer Lösung von 72 g (0,58 Mol) Methyl-methylthiomethylsulfoxyd und 108 g (0,58 Mol) Verbindung _3a in 300 ml THF und erhitzt die Mischung 4 Stunden am Rückfluß. Abtrennung durch Säulenchromatographie mit 400 g Silicagel und Eluieren mit 5 Ltr. Chloroform ergibt 130,5 g (78 %) Verbindung 4a in Form eines blaßgelben Öles.

IR: v^liq 3100, 1580, 1100, 1050 cm"¹ . max

NMR: 6 ^4 2,42 (3H, s, S-CH₃), 2,70 (3H, S, SO-CH₃), 3,34 (6H, s, OCH₃), 5,56 (1H, s, CHC^qI >'

7,20 (1H, d, J=6Hz, Thiophen-Hß), 7,40 (1H, d, J=6Hz, Thiophen-Ha), 8,12 (1H, s, -CH=).

E) Äthyl-3-formyl-2-thienylacetat ⁴⁾(5)

33 g trockener Chlorwasserstoff wird in 500 ml wasserfreiem Äthanol absorbiert. Zu dieser Lösung gibt man 130 g (0,45 Mol) Verbindung jla und erhitzt die Mischung 5 Minuten am Rückfluß. Dann verdünnt man die Reaktionsmischung mit Wasser, dampft bei verringertem Druck ein, extrahiert den Rückstand mit 2 χ 100 ml Benzol, vereinigt die Benzolextrakte, wäscht mit 50 ml Wasser, trocknet über MgSO. und dampft zur Trockne ein. Den öligen Rückstand unterwirft man Säulenchromatographie auf 400 g Silicagel und eluiert mit 5 Ltr. Chloroform.

809842/0577

C	62	H	73	N	,81	S	47
47,	33	3,	47	14	,77	8,	68
47,	3,	14	8,

M/18 235 - 33 -

Man vereinigt die Fraktionen, die das gewünschte Produkt
enthalten und dampft sie ein. Das Rückstandsöl (60 g) ; destilliert man bei verringertem Druck, wobei man 23 g j (23 %) Verbindung 5_ erhält, Kp. 120-126 °C/1 mmHg. J

ι IR: v^liq 3110, 1730, 1670 cm"¹.

NMR: 5^CDC13 1,30 (3H, t, J=6Hz, -CH₉CH,), 4,25 (2H, q, ; ^j pm ^ ο '

J=6Hz, -CH₀CH-.), 4,26 (2H, s, -CH₀CO), ι 7,25 (1Η, d, J=5Hz, Thiophen-Hß), 7,48 (1Η,
d, J=5Hz, Thiophen-Ηα), 10,15 (1H, s, CHO).

Analysiert wurde die Verbindung 5_ als 2,4-Dinitrophenyl- . hydrazon, das aus Chloroform kristallisierte und einen
Schmelzpunkt von 178-179 ⁰C hat. !

IR: ν ^NuJ^o1 1720, 1610, 1570 cm"¹. Analyse C₁₁-H₁-N₄O^S:

berechnet:
gefunden:

Nach dem ähnlichen Verfahren werden 2,2 g (7,6 mMol) des
Äthylenacetals 4h mit 1,1 g trockenem Chlorwasserstoff in
800 ml wasserfreiem Äthanol behandelt, wobei man Substanz
j5 erhält, die durch Säulenchromatographie auf 30 g Silicagel gereinigt wird. Eluieren mit Chloroform ergibt 663 mg
(44 %) Substanz 5_ in Form eines blaßgelben öls„

809842/0577

M/18 235 - 34 - 280784? \

F) Äthyl-S-formyl^-thienylacetat-oxim (6)

1,7 g (16 mMol) Natriumcarbonat gibt man zu einer Lösung von 3,14 g (16 mMol) des Aldehyds 5_ und 2,2 g (32 mMol) Hydroxylaminhydrochlorid in 40 ml 50 %-igem wässrigem Äthanol bei 5 C, wobei man rührt. Man erwärmt die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur und engt sie nach 2,5 Stunden bei verringertem Druck ein, extrahiert den Rückstand mit 3 χ 50 ml Benzol, wäscht die Benzolextrakte mit 10 ml Wasser, trocknet über MgSO. und dampft bei verringertem Druck ein. Abtrennung mittels Säulenchromatographie auf Silicagel (60 g) ergibt 2,7 g (80 %) Substanz j5 in Form eines farblosen öls_a

IR: v^liq 3400, 1730, 1620 cm"¹. max ' '

NMR: 5^Ace^ton-^d ₆ -| ,23 (3H, t, J=7,5Hz, -CH₂CE₃). 4,01

(2H, s, -CH₂CO), 4,14 (2H, q, J=7,5 Hz, -CH₂CH₃), 7,31 (2H, s, Thiophen-H), 8,26 (1H, s, -CH=N), 10,15 (1H, s, NOH, verschwand nach Zugabe von D_0).

G) S-Lactam von 3-Aminomethyl-2-thienylessigsäure (7) Verfahren A: Katalytische Reduktion.

Eine Mischung von 2,65 g (12,4 mMol) des Oxims _6_f 10 % Palladium auf Aktivkohle, 1,4 g (37,2 mMol) trockenem Chlorwasserstoff in 68 ml wasserfreiem. Äthanol hydriert man über Nacht bei Raumtemperatur unter atmosphärischem Druck. Der Katalysator wird zweimal ausgetauscht und die Reaktionsdauer beträgt 3 Tage. Man entfernt den Katalysator und engt das Filtrat bei verringertem Druck ein. Zu dem Rückstand gibt man 10 ml Wasser und wäscht die Mischung mit 2 χ 10 ml Äthylacetat. Die wässrige Schicht

809842/0577

M/18 235 - 35 -

stellt man mit Natriumcarbonat auf pH 9 ein, sättigt mit Natriumchlorid und extrahiert mit 3 χ 20 ml Äthylacetat. Man trocknet die Äthylacetatextrakte über MgSO₄, behandelt sie mit Aktivkohle und dampft bei verringertem Druck ein. Umkristallisation aus Äthylacetat ergibt 417 mg (22 %} farbloser Nadeln der Substanz 1_, welche bei 194 - 195 °C schmelzen.

IR: V 3200, 1650, 1480 cm '.

ITIcIX

'■ NMR: 5^DMS°~^d6 3,53 (2H, t, J=3Hz, -CH₂CO-), 4,36 (2H, d-t, \

\ J =3, 1,5Hz, verändert sich in ein Triplet '<

j bei Zugabe von D₃O, J=3Hz, CH₃N), 6,95 (1H, ;

: d, J=4,5Hz, Thiophen-Hß), 7,45 (1H, d, J=4,5Hz_?

j _ Thiophen-Ηα), 8,0 (1H, m, verschwand bei

: Zugabe von DO, NH).

C	,88	H	61	N	14	S	93
54	,04	4,	45	9,	13	20,	50
55	4,	9,	20,

Analyse C₇H₇NOS

berechnet: gefunden:

Verfahren B: Zn-Staub-Reduktion

Zu einer Lösung von 18,3 g (86 mMol) des Oxims 6^ in 200 ml Essigsäure gibt man portionsweise während 1 Stunde bei 40 - 50 °C unter heftigem Rühren 17g (258 mMol) Zinkstaub. Man rührt die Reaktionsmischung über Nacht bei Raumtemperatur und erhitzt dann 4 Stunden auf 60 C. Der Inhalt wird abfiltriert und das Filtrat bei verringertem Druck eingeengt. Zu dem Rückstandsöl gibt man 100 ml Wasser und wäscht die Mischung mit 2 χ 50 ml Äther. Die wässrige Lösung überschichtet man mit Äthylacetat (100 ml) und stellt sie mit Natrium- _; carbonat auf pH 10 ein. Der Niederschlag wird abfiltriert

8098A2/0577

und das Filtrat wird mit Äthylacetat extrahiert. Die Äthylacetatextrakte wäscht man mit 10 ml Wasser, trocknet
über MgSO. und dampft bei verringertem Druck ein. Man verreibt das Rückstandsöl mit Benzol« ümkristallisation aus
Äthylacetat ergibt 2,7 g (21 %) des Lactams T_, dessen
IR und NMR-Spektren dem bei dem Verfahren A erhaltenen
entsprechen.

H) 3-Aminomethyl-2-thienylessigsäure (8)

Eine Mischung von 2,88 g (18,8 mMol) des Lactams 7. ^und 50 ml
6 η Chlorwasserstoffsäure erhitzt man 3 Stunden am Rück- _; fluß und engt dann die Reaktionsmischung bei verringertem
Druck ein. Zu dem Rückstand gibt man 20 ml Wasser, behandelt j die Mischung mit Aktivkohle und dampft bei verringertem
Druck ein. Verreiben des Rückstandes mit Tetrahydrofuran
ergibt das Aminosäure-hydrochlorid der Substanz J5 (3,72 g,
95 %; Fp. 171-172 ⁰C). .

IR (KBR) cm"¹: 3450, 3000, 1700, 1200;

NMR (D₂O) ppm: 4,80 (2H, s, -CH₂CO), 4,27 (2H, s, CH₂-N),

7,26 (1H, d, J=6Hz, Thiophen-Hß), 7,53 (1H, d, J=6Hz, Thiophen-Ha). ^;

Man löst das Hydrochlorid (3,71 g, 17,9 mMol) in 10 ml
Wasser,chromatographiert auf einer IR-120 Säule (H, 30 ml)
und entwickelt nacheinander mit Wasser, 100 ml und 5n NH₄OH \ (2 1). Das ammoniakalische Eluat wird zur Trockne eingedampft. Den Rückstand kristallisiert man aus wässrigem , Aceton, wobei man 3,0 g (98 %) Substanz %_ erhält,
Fp. 223-225 ⁰C. ;

809842/0577

M/18 235

IR: υ

KBr max

3000, 1620, 1520 cm

-1

NMR: δ

ppm

3,20 (2H, s, -CH₂CO), 4,13 (2H, s, 7,04 (1H, d, J=6Hz, Thiophen-Hß), 7,30 (1Η, d=6Hz, Thiophen-Ηα).

Analyse C_H_gNO₂S

	C	10	H	30	N	18	S	,73
berechnet:	49,	53	5,	22	8,	98	16	,97
gefunden:	48,	5,	7,	18

I) 3-t.-Butoxycarbonylaminomethyl-2-thienylessigsäure (9)

Eine Mischung von 3,1 g (18 mMol) 3-Aminomethyl-2-thienylessigsäure 8^ und 8 g (80 mMol) Triäthylamin in 80 ml 50 %-igem wässrigem Aceton gibt man tropfenweise während 20 Minuten bei 0 ⁰C unter heftigem Rühren zu 5,7 g (40 mMol) t.-Butoxycarbonylazid. Man rührt die Reaktionsmischung über Nacht bei Raumtemperatur und engt bei verringertem Druck zur Trockne ein. Man wäscht das Konzentrat mit 2 χ 20 ml Äther, stellt mit konz. HCl auf pH 2 ein und extrahiert mit 2 χ 50 ml Äthylacetat. Die Äthylacetatexträkte wäscht man mit gesättigtem, wässrigem Natriumchlorid, trocknet über MgSO., behandelt mit Aktivkohle und dampft bei verringertem Druck ein. Den Rückstand verreibt man mit η-Hexan und kristallisiert aus η-Hexan und Benzol, wobei man 4,5 g (92 %) farbloser Nadeln der Substanz 9, die bei 62 bis 63 ⁰C schmelzen, erhält.

IR: ν

Nu j öl max

3350, 1700 cm

-1

809842/0577

M/18 235

NMR: δ ^CDC13 1,43 (9h, s, BOC-H), 3,27 (2H, s,

ppm

4,16 (2H, d, J=6HZ, CH₃-N, ein Singulett wenn OJD zugegeben wird), 5,00 (1H, br, -NH-, verschwindet durch Zugabe von D₂O),6,30 (1H₇ breites s, -COOH, verschwindet, wenn D₃O zugegeben wird), 6,86,(1H, d, J=6Hz, Thiophen-Hß) , 7,06 (1H, d, J=OHz,

Analyse

	C	,89	H	29	N	14	S	,77
berechnet:	52	,30	6,	39	5,	13	11	,72
gefunden:	53	6,	5,	11

Herstellung der 2-N-Methylaminomethyl-4-methoxy-(und 4-hydroxy-) phenyles s igs äuren

HO

CHgCOgH

Ts-Cl

JHgNH-Ts
HgCOgH

CH^I

H,C0

CHgK-Ts CHgCOgH

Na/flüss.iiK, H, CO

-CHgCO₂H

HBr

\y

NH-CK.

CH₂CO₂H

809842/0577

2-N-Tosylaminomethyl-4-hydroxyphenylessigsäure (2)

Zu einer Lösung von 14,56 g (0,08 Mol) 2-Aminomethyl-4-hydroxyphenylessigsäure (V) (US-PS 3 823 141) und 13 g (0,32 Mol) Natriumhydroxyd in 200 ml Wasser gibt man tropfenweise unter Rühren bei 65 - 7 0 ⁰C eine Lösung von 18,5 g (0,097 Mol) p-Toluolsulfonylchlorid in 50 ml trockenem Äther und beläßt die Mischung eine Stunde bei dieser Temperatur. Nachdem die Mischung gekühlt ist, trennt man die wässrige Schicht ab, wäscht mit Äther (2 χ 50 ml), säuert mit 6n HCl an und extrahiert mit 4 00 ml Äthylacetat= Den Extrakt wäscht man mit Wasser und einer gesättigten wässrigen NaCl-Lösung, trocknet mit Na„SO. und behandelt mit 1 g Aktivkohle. Das Filtrat wird zur Trockne eingeengt und der Rückstand wird aus Äthylacetat kristallisiert, wobei man 11,0 g (40,5 %) Substanz 2 erhält, die bei 212 - 215 ⁰C schmilzt.

IR: ν ^KBr 3240, 1700, 1380, 1330, 1150 cm"¹ .

IUaX '

: λ "L^{% K}2^CO3 230 nm (£ : 7 750)

max

NMR: 6 ^DMS°-^d6 2,47 (3H, s, Ar-CH-), 3,60 (2H, s, CH₀CO), ppm ό Z

3,93 (2H, d, J=6,0 Hz, CH₂N), 6,6-8,2 (7H, m_f Phenyl-H).

2-(N-Methyl-N-tosylamino)-methyl-4-methoxypheny!essigsäure (3)

Eine Mischung von 11 g (0,03 3 Mol) Substanz 2_e 10,3 ml (0,17 Mol) Methyljodid und 9,2 g (0,24 Mol) Natriumhydroxyd in 100 ml Wasser erhitzt man in einem versiegelten Rohr unter gelegent= _: lichem Schütteln 45 Minuten auf 80 - 90 ⁰C. Man wäscht die ',

Mischung mit 30 ml Äthylacetat, säuert die wässrige Schicht

09842/0577

M/18 235 - 40 -

mit 6n HCl an und extrahiert mit 3 χ 30 ml Äthylacetat. Die vereinigten Extrakte wäscht man mit 30 ml Wasser und 3 0 ml gesättigter wässriger NaCl-Lösung, behandelt mit 1 g Aktivkohle und trocknet über Na_SO.. Das Filtrat wird zur Trockne eingedampft und der Rückstand aus Benzol kristallisiert, wobei man 8 g (66,5 %) des N,O-Dimethylderivats der Substanz 3_ erhält, das bei 146-150 ⁰C schmilzt.

IR: ν *^Br 1690, 1500, 1340, 1280, 1150 ein"¹.

UV: λ ^Ät0H 229 nm (C: 20500), 278 nm (C: 2400).

IUclX

NMR: ö^DMS°~^d6 2,52 (3H, s, N-CH₃), 2,47 (3H, s, Ar-CH₃),

3,67 (2H, s, CH₂CO), 3,74 (3H, s, OCH₃),

4,10 (2H, s, CH₂N), 6,7 - 7,8 (7H, m, Ar-H), 11,5 (1H, br-s, COOH).

Analyse C₁₃H₂₁NO₅S

	C	,49	H	82	N	84	S	,82
berechnet:	59	,48	5,	68	3,	37	8	,22
gefunden:	59	5,	3,	9

2-N-Methylaminomethyl-4-methoxyphenylessigsäure (4a) ■

Zu einer Lösung von 300 ml flüssigem Ammoniak gibt man 9,4 g (#,026 Mol) Substanz _3 ^bei ~⁵⁰ °C ^un^ rührt die Mischung, bis man bei der gleichen Temperatur eine klare Lösung erhält. Zu der Lösung gibt man dann 3,3 g (0,14 Grammatom) Na ' in kleinen Stückchen bei -40 C und rührt die Mischung 2 Stunden. Das Ammoniak wird eingedampft und der Rückstand wird vorsichtig in 100 ml Wasser gelöst. Zu der Lösung gibt man dann 100 ml Amberlite IR-C 50 (Ammonium-Typ) und rührt die Mischung 30 Minuten bei Raumtemperatur. Dann wird das Harz entfernt und das Filtrat wird mit Bariumacetat behandelt bis sich kein weiterer Niederschlag mehr zeigt. Man filtriert den Niederschlag ab, chromatographiert das Filtrat an einer

809842/0577

Säule mit IR-120 Ionenaustauscherharz (H , 100 ml) "indem man mit 5-10 % Ammoniak eluiert. Das Eluat (2 1), das das gewünschte Produkt enthält,, wird unterhalb 50 C zur Trockne eingedampft und der Rückstand wird mit Aceton verrieben, wobei man 4,4 g (81 %) Substanz 4a erhält, Fp. 225-227 °C.

IR: υ ^KBr 1590, 1260, 1035 cm"¹, max

NMR: 6 °2° 2,77 (3H, s, N-CH₃), 3,6 (2H, s, CH 3,87 (3H, s, OCH₃), 4,18 (2H, s, CH 6,8 - 7,4 (3H, m, Phenyl-H).

2-N-Methylaminomethyl-4-hydroxyphenylessigsäure (4b)

' Eine Mischung von 2,9 g (0,014 Mol) Substanz ^a. in 30 ml 48 %-iger Bromwasserstoffsäure erhitzt man 5 Stunden am ! Rückfluß und dampft die Lösung dann zur Trockne ein. Man ! löst den Rückstand in 50 ml Wasser und chromatographiert j die Lösung an einer Säule Amberlite IR-120 (H⁺, 50 ml), wobei man mit 5-10 %-igem Ammoniak eluiert. Man sammelt

! das Eluat in 250 ml Fraktionen. Die Fraktionen, die das Produkt enthalten, werden vereinigt und unterhalb 50 ⁰C zur Trockne eingedampft. Den Rückstand verreibt man mit Aceton, wodurch man 1,3 g (48,5 %) der Substanz tt) erhält, die aus 80 %-igem Äthanol kristallisiert wird. Fp. 218-221 °C.

TCRt —1

^{IR: v} !fC. 2000-3400, 1610, 1540, 1460, 1380, 1270 cm '.

IU α. Χ

UV: λ ^1%K2^CO3 243 nm (<f : 4700), 297 nm (£: 1350).

ppm

2,64 (3H, s, N-CH-,), 3,47 (2H, S, CF

3,94 (2H, s-, N-CH₂), 6,5-7,2 (3H, m, Phenyl-H)

809842/0577

Analyse:

C	53	H	71	N	,17
61,	44	6,	81	7	,20
61,	6,	7

berechnet:
gefunden:

2-N-t.-Butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl-4-methoxyph.enylessigsäure (_5, R = CH₃)

Eine Mischung von 1,05 g (5 mMol) Substanz ^a, 1,43 g (6 mMol) ■ t.-Butyl-4, 6-dimethylpyrimidin-2-ylthiol-carbonat und '. 1,4 ml Triäthylamin in 40 ml 50 %-igem THF rührt man 20 Stunden bei Raumtemperatur. Der größte Teil des THF wird verdampft und die sich ergebenden 20 ml wässriger Lösung wäscht man mit Äther. Die wässrige Schicht säuert man mit 6 η HCl an und extrahiert mit 3x10 ml Äther. Die ätherischen Extrakte wäscht man mit 10 ml Wasser und einer gesättigten, wässrigen NaCl-Lösung (10 ml), behandelt sie mit einer kleinen Menge Aktivkohle und trocknet über Na₃SO₄. Man dampft das Filtrat zur Trockne ein, wobei man 1,0 g (77,5 %) Substanz 5_ (R = CH-.) in Form eines Öles erhält.

CT)Cl

NMR: ^ö- m ¹'^{47 (9H}' ^S' ^B0C~^H)' ²'^{77 (3H}' ^s' N-CH₃), 3,60 (2H, s, CH₂CO), 3,79 (3H, s, 0-CH₃), 4,49 (2H, s, CH₂N), 6,1-7,3 (3H, m, Phenyl-H).

809842/0577

2-N-t.-Butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl-4-hydroxyphenylessigsäure (5^ R = H)

Eine Mischung von 1 g (4,78 mMol) Substanz 4b_, 1,5 g (6,3 mMol) t.-Butyl-4,6-dimethylpyrimidin-2-ylthiol-carbonat und 2,1 ml Triäthylamin in 50 ml 50 %-iger wässriger THF-Lösung rührt man 20 Stunden bei Raumtemperatur und engt die Mischung dann bei verringertem Druck auf 20 ml ein. Man wäscht das Konzentrat mit 10 ml Äther, säuert mit 6n HCl an und extrahiert mit

! 2 χ 100 ml Äthylacetat. Man wäscht die vereinigten Extrakte

' mit 30 ml Wasser und 2 χ 20 ml einer gesättigten NaCl-Lösung,

behandelt mit einer kleinen Menge Aktivkohle und trocknet über wasserfreiem Na₃SO₄. Man dampft das Filtrat zur Trockne ein, wobei man 1,3 g (92 %) Substanz _5 (R = H) in Form eines Öles erhält.

^{IR: v}i=5 3000-3600, 1670, 1260, 1150 cm"¹.

IUaX

„ CDCl,

° ppm ¹'^{44 {9H/ S/ C(CH}3⁾3⁾' ²'^{73 (3H}' ^s' ^N"^CH 3,54 (2H, s, CH₂CO), 4,38 (2H, s, CH₃N),

6,5-7,3 (3H, m, Phenyl-H).

809842/0577

M/18 235

Herstellung von Ortho-N-methylaminomethy!-phenylessigsäure

CH₂CO₂H

^r-SO₂Cl

CH₂COgH

//~^CH3

CH,j

CH₂NSO₂--^ _f/

HBr

oder Na/flüss.· NH₇.

CH

CH₂CO₂H

CH₂N-BOC CH₂CO₂H

BOC

CH₃-C-OCO-

8098^2/0577

ο-(p-Toluolsulfonylaminomethyl)-phenylessigsäure (2)

Zu einer gerührten Lrösung von 7,50 g (37 mMol) o-Amino-methyl-

phenylessigsäurehydrochlorid und 4,74 g (118 mMol) Natrium- j hydroxyd in 100 ml Wasser gibt man 7,64 g (40 mMol) p-Toluol- j sulfonylchlorid in kleinen Mengen bei 60 ⁰C. Dann rührt man die Mischung 1 Stunde bei dieser Temperatur, säuert mit ; Chlorwasserstoffsäure an und extrahiert die Mischung mit 4 χ 50 ml Äthylacetat. Die vereinigten Extrakte wäscht man \ mit Wasser, behandelt sie mit einer kleinen Menge Aktivkohle j und trocknet. Man dampft das Lösungsmittel bei verringertem ■ Druck ein und kristallisiert den Rückstand aus Äthylacetat, wobei man Substanz 2_ in Form farbloser Prismen erhält.

Die Ausbeute beträgt 9,84 g (84 %). Fp. 155-156 °C.

IR: ν ^nuj 3300, 1705, 1335, 1170 cm"¹.

KIcIX

NMR: δ ^DMSOd₆ ^_{38 (3H}^ ^ CK₃), 3,65 (2H, s, CH₂

3,97 (2H, d, J=5 Hz, CH₂N), 7.₇1-8,2 (9H, m, Phenyl H und NH).

Analyse C₁₆H₁₇NO₄S:

berechnet: gefunden:

C	17	H	37	N	39	S	10
60,	11	5,	43	4,	28	10,	72
60,	15	5,	40	4,	30	9,	80
60,	5,	4,	9,

o-(N-p-Toluolsulfonyl-N-methylaminomethyl)-phenylessigsäure (3)

Eine Mischung von 9,0g (28 mMol) Substanz 2, 6,0 g Natriumhydroxyd und 6 ml Methyljodid in 60 ml Wasser erhitzt man in einem verschlossenen Rohr 30 Minuten lang bei 70 C. Nach dem

809842/0577

Abkühlen säuert man die Reaktionsmischung mit Chlorwasserstoffsäure an, wobei sich ein blaßgelber Niederschlag ergibt, der, aus Äthylacetat/n-Hexan kristallisiert,farblose Prismen der Substanz _3 ergibt. Die Ausbeute beträgt 8,5 g (91 %) . Fp. 162-163 °C.

IR: ν ^KBr 2700-2300, 1700, 1600, 1345, 1200, 925 cm"¹.

¹ NMR: δ p2°^+K0H 2,37 (3H, s, CH₃), 2,49 (3H, S, CH₃),

I 3,80 (2H, s, CH₂CO), 4,18 (2H, S, CH₂N),

i 7,0-8,0 (8H, m, Phenyl-H).

! Analyse C H₁₉NO₂:

	C	,24	H	74	N	,20	S	61
berechnet:	61	,31	5,	73	4	,51	9,	63
gefunden:	61	,36	5,	71	4	,29	9,	55
	61	5,	4	9,

N-Me thylaminomethy !phenylessigsäure (_4) Verfahren A (Verwendung von Bromwasserstoffsäure).

Eine Mischung von 28,6 g (0,086 Mol) Substanz _3 ^und 20 g (0,213 Mol) Phenol in 260 ml 48 %-iger Bromwasserstoffsäure erhitzt man 30 Minuten am Rückfluß, kühlt die Mischung dann ab, verdünnt mit dem gleichen Volumen Wasser und wäscht mit 2 χ 50 ml Äthylacetat· Die wässrige Schicht dampft man bei verringertem Druck zur Trockne ein, wobei man ein öl erhält, das an einer Säule mit Amberlite IR-120 (H Form, 200 ml) chromatographiert und mit 5 %-iger Ammoniumhydroxydlösung eluiert wird. Das Eluat (2,5 1) wird gesammelt und bei verringertem Druck zur Trockne eingedampft. Den Rückstand verreibt man mit Aceton und kristallisiert ihn aus Äthanol, wobei man 6,7 g (43,5 %) Substanz. i_ in Form von farblosen Nadeln erhält, die bei 168-170 ⁰C unter Zersetzung schmelzen«

809 8 4 2/0577

Verfahren B (Verwendung von metallischem Natrium in flüssigem j Ammoniak). j

ι Zu einer Mischung von 35 g (0,105 Mol) Substanz J3 in flüssigem _:

Ammoniak (1000 ml) gibt man 13,3 g (0,578 Tom ) Natrium
in kleinen Stückchen während einer Zeitdauer von 2 Stunden

unter heftigem Rühren. Das Ammoniak wird unter Rühren in j einem Wasserbad unter einem gut belüfteten Abzug und schließ- ^; lieh bei verringertem Druck , um es vollständig zu entfernen,
eingedampft. Man löst den Rückstand in 4 00 ml Eiswasser, rührt \ die Lösung mit 400 ml Ionenaustauscherharz IRC-50 (H -Form) | bei Raumtemperatur während 0,5 Stunden, filtriert das Harz
ab und gibt eine 1-molare wässrige Lösung von Bariumacetat
zum Filtrat, bis sich kein Niederschlag mehr bildet (es werden
etwa 50 ml Bariumacetatlösung benötigt). Man filtriert die
Mischung und chromatographiert das Filtrat an einer Säule mit
IR-120 (H⁺-Form, 400 ml) wie bei Verfahren A beschrieben,
wobei man 13,6 g (72 %) Substanz A_ erhält.

o-(N-Methy1-N-t.-butoxycarbonylaminomethyl)-phenylessigsäure (5)

11g (0,048 Mol) t.-Butyl-4,6-dimethylpyrimidin-2-ylthiolcarbonat gibt man auf einmal zu einer Mischung von 7,2 g (0,04 Mol)
Substanz _4 und 6,9 g (0,06 Mol) 1 ,1 , 3 , 3-Tetramethylguanidin
in 50 %-igem wässrigem THF und rührt die Mischung über Nacht
bei Raumtemperatur. Man dampft das THF bei verringertem Druck
ein, säuert die wässrige Lösung mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure auf pH 2 an und extrahiert mit 2 χ 20 ml Äthylacetat.
Die vereinigten Extrakte wäscht man mit Wasser, behandelt sie i mit einer kleinen Menge Aktivkohle und dampft bei verringertem ; Druck ein. Man verreibt den Rückstand mit Hexan und kristalli- i siert aus n-Hexan-Äther um, wobei man 9,2 g (83 %) Substanz j> j in Form von farblosen Prismen erhält. Fp. 96-98 ⁰C. ,

809842/0577

M/18 235

IR: ν ^KBr 1730, 1630, 1430, 1330, 1250 cm"¹.

ItId-X

-_TM_ _ CDC1_ ^{NMR: δ} ppm

1,49 (9H, s, t.Butyl), 2,78 (3H, s, N-CH₃), 3,72 (2H, s, CH₂CO), 4,25 (2H, s, CH₃N), 7,28 (4H, s, Phenyl), 9,83 (1H, s, -COOH)₀

Analyse C₁

berechnet: gefunden:

C	,50	H	58	N	,01
64	,69	7,	66	5	,89
64	7,	4

Herstellung von 3-N-Methylaminomethyl-2-thienylessigsäure

CH=NOH

NaH, CH

Benzol

N-CH,

H
CH^N-CH,

CH₂CO₂H

OH,

:H_gN-B0C
JH₂COOH

809842/0577

M/18 235 - 49 -

3-Aminomethyl-2-thienyl~essigsäure-5- lactam (2) i

140 ml Eisessig gibt man tropfenweise unter Rühren zu einer

Mischung von 41 g (0,19 Mol) 2-Äthoxycarbonyl-methylthiophen- ; 3-carboxaldehyd-oxim (JJ und 65,4 g (1 Mol) Zinkstaub in

Methanol und rührt die Mischung 4 Stunden lang am Rückfluß. ι Man kühlt die Mischung, entfernt die unlöslichen Bestandteile !

durch Abfiltrieren und wäscht mit 3 χ 50 ml Methanol.

Man vereinigt das Filtrat mit den Waschflüssigkeiten und

dampft im Vakuum zur Trockne ein, wobei man den Rückstand ; mit 5 χ 100 ml Methanol extrahiert. Man vereinigt die methano-

lischen Extrakte und dampft sie bei verringertem Druck ein.

Man gibt 50 ml Wasser zu dem Rückstand, stellt die Mischung

mit Na„CO-. auf pH 10 ein und extrahiert mit 3 χ 100 ml

Chloroform. Die vereinigten Chloroformextrakte wäscht man

mit 10 ml Wasser, trocknet über MgSO. und dampft bei verringertem Druck ein. Das Rückstandsöl (30 g) verreibt man mit 150 ml

heißem Benzol. Die farblosen Nadeln werden durch Filtrieren ^;

! gesammelt, und aus Äthylacetat umkristallisiert, wobei man

das Lactam 2^ erhält. Die Ausbeute beträgt 7,7 g (26 %) , ^! Fp. 195-196 °C.

. MeOH
UV: A _mav 232 nm ( £ , 6500).

Analyse C₇H₇NOS:

berechnet: gefunden:

C	88	H	61	N	14	S	,93
54,	04	4,	45	9,	13	20	,50
55,	4,	9,	20

809842/0577

M/18 235

3-N-Methylaminomethy 1-2-thienylessigsäure-6-lactam [3)

Zu einer 50 %-igen Suspension in Paraffin von 1,82 g (38 mMol) Natriumhydrid in 500 ml absolutem Benzol gibt man unter Rühren und unter Stickstoffatmosphäre 4,85 g (32 mMol) des Lactams 2^ und erhitzt die Mischung 2 Stunden am Rückfluß. Dann gibt man bei Raumtemperatur auf einmal 22,7 g (160 mMol) Methyljodid zu und erhitzt die Mischung weitere 2 Stunden am Rückfluß. Man gibt 50 g Eiswasser zu der Mischung und trennt die organische Schicht ab. Die wässrige Schicht extrahiert man nacheinander mit 2 χ 50 ml Benzol und 50 ml Chloroform, vereinigt die Extrakte und trocknet sie auf MgSO.. Das Lösungsmittel wird bei verringertem Druck eingedampft. Zu dem Rückstand gibt man eine heiße Mischung von 100 ml 1:1 Benzol-n-Hexan, wobei man dann die Substanz 2^ in Form von Nadeln erhält. Die Ausbeute beträgt 2,02 g (42 %)„ Man dampft das Filtrat ein und kristallisiert den Rückstand aus Benzol-n-Hexan, wodurch man farblose Plättchen der Substanz J3 erhält. Die Ausbeute beträgt 2,7 g (51 %) . ' Fp. 98-100 ⁰C.

IR: ν

Nujol max

1620 cm

-1

NMR: δ

max

3,15 (3H, s, N-CH₃), 3,72 (2H, t, J=3Hz,

UV: Λ

MeOH max

4,53 (2H, t, J=3Hz, -CH₂-N), 6,87 (1H, d, J=4,5 Hz, Thiophen-Hß), 7,30 (1H, d, J=4,5 Hz, Thiophen-Ha) .

232 nm ( £, 6700) .

Analyse C₀H_nNOS
ö y

	C	46	H	42	N	,38	S	17
berechnet:	57,	56	5,	26	8	,31	19,	13
gefunden:	57,	5,	8	19,

809842/0577

M/18 235 - 51 -

28Q7847

3- (N-Methylaminomethyl) -2-thienylessigsäure (A)

Eine Mischung von 3,5 g (21 mMol) des Lactams 3^ ^unc^ 100 ml 6 η HCl erhitzt man 12 Stunden am Rückfluß, behandelt die Mischung mit Aktivkohle und engt bei verringertem Druck zur Trockne ein. Man löst das Rückstandsöl in 10 ml Wasser und chromatographiert an einer IR-120 (H , 50 ml) Säule eluiert die Säule mit 200 ml Wasser und 3 1'5 η NH₄OH. Man isoliert 3,0 g (77 %) der Aminosäure 4 durch Eindampfen der ammoniakalisehen Eluate und anschließende Kristallisation aus wässrigem Aceton. Fp. 181-182 ⁰C.

IR: ν ^_x 1570, 1360 cm .

NMR: δ °2° 2,21 (3H, s, N-CH₃), 3,80 (2H, s, CH₂CO), 4,20 (2H, s, CH₂-N), 7,19 (1H, d, J=6Hz, Thiophen-Hß), 7,46 (1H, d, J.6Hz, Thiophen-Ha).

^ÜV: A ™i° 237 nm (£ , 7600).
max

Analyse CoH₁₁NO-S

berechnet: gefunden:

3-(N-t.-Butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl)-2-thienylessigsäure (J5)

Zu einer Mischung von 2,7 g (14,6 mMol) 3-N-Methylaminomethyl-2-thienylessigsäure 4_ und 6 g (60 mMol) Triäthylamin in 60 ml 50 %-igem wässrigem Aceton gibt man während 20 Minuten bei 0⁰C tropfenweise 4,2 g (29,2 mMol) t.-Butoxycarbonylazid_f wobei man heftig rührt. Dann rührt man die Mischung über Nacht bei Raumtemperatur und engt bei verringertem Druck ein. Man wäscht das Konzentrat mit 2 χ 20 ml Äther, stellt mit konz. HCl auf pH 2 ein und extrahiert mit 2 χ 50 ml Äthylacetat. Die

809842/0577

C	,87	H	99	N	,56	S	,31
51	,67	5,	50	7	,28	17	,69
51	6,	7	16

Äthylacetatextrakte wäscht man mit einer gesättigten, wässrigen NaCl-Lösung, trocknet über MgSO., behandelt mit Aktivkohle und dampft bei verringertem Druck ein. Man verreibt den Rückstand mit η-Hexan und kristallisiert aus n-Hexan-Benzol, wobei man 3,68 g (88 %) farbloser Nadeln der Substanz J5 erhält, die bei 82-83 °C schmelzen.

^{IR: v} ϋ=ί^θ1 1730, 1640 cm"¹.

IUcIX

C	72	H	71	N	91	S	24
54,	91	6,	85	4,	92	11,	19
54,	6,	4,	11,

NMR: δ ™ 3 1,47 (9H, s, BOC-H), 2,78 (3H, s, N-CH₃), 3,87 (2H, s, CH₉-CO), 4,48 (2H, s, CH₉-N), 6,91 (1H, d, J=6Hz, Thiophen-Hß), 7,20 (1H, d, J=6Hz, Thiophen-Hcx) , 10,63 (1H, s, CO₉H, verschwindet bei Zugabe von D₉O).

Analyse C ₃H.._gNO.S:

berechnet: gefunden:

Die Verwendung einer "En-amin"-Blockierungsgruppe mit einer 7-Seitenkette, welche eine freie Aminogruppe enthält, bevor man einen Ring wie die hierin beschriebene Verbindung der Formel II acyliert, ist aus den US-PS-en 3 223 141, 3 813 390, 3 813 391, 3 823 141 und aus der belgischen Patentschrift 773 773 bekannt.

Natrium-2-[N-(1-carbäthoxypropen-2-yl)-aminomethyl]-1,4-cyclohexadienyl-acetat (_4_)

Zu einer gerührten Lösung von 460 mg (0,02 Grammatom) metallischem Natrium in 100 ml absolutem fitOH gibt man 3,34 g /0,02 Mol) 2-Aminomethyl-1,4-cyclohexadienylessigsäure und 3,1 g (0,024 Mol) Äthylacetoacetat und erhitzt die Mischung unter Rühren 4 Stunden am Rückfluß. Die heiße Reaktionsmischung wird

809842/0577

^M/18235

abfiltriert und das Filtrat wird über Nacht kalt gehalten, wobei man 2,0 g farbloser Nadeln der Substanz j4 erhält, die j bei 264 C schmelzen. 3,3 g zusätzliches Produkt erhält man durch Einengen der Mutterlauge. Die Gesamtausbeute beträgt ! somit 5,3g (88 %).

IR: V ^Nu3^o1 3300, 1635, 1600, 1570, 1300, 1275, 1170, 1090 cm

ItlciX

NMR: ö °2° 1,23 (3H, t, 7Hz, CH₂CH₃), 1,96 und 2,25 (3H, s, C=C-CH-, eis und trans), 2,70 (4H, s, H-C-^*"), 3,04 (2H, s, CH-CO), 3,66 und 3,95 (2H, s, CH-N, eis und trans), 4,07 (2H, q, 7Hz, CH₂CH₃) 4,45 und 4,56 (1H, s, H , eis und trans,)

5,76 (2H,

Analyse C₁

berechnet: gefunden:

C	79	H	,69	N	,64
59,	69	6	,76	4	,75
59,	6	4

2-tert.-Butoxycarbonylaminomethyl-4-hydroxyphenylessigsäure wird beispielsweise gemäß der US-PS 3 823 141 hergestellt.

o-(N-Methylaminomethyl)-phenylessigsäure-ö-lactam

N-CH,

809842/05 77

M/18 235 - 54 -

4,3 g (0,11 Mol) Natriumhydrid (57 %-ig in Paraffin) j wäscht man mit trockenem η-Hexan und suspendiert es in 100 ml ι trockenem Benzol. Zu der Suspension gibt man eine Lösung von

I 14,7 g (0,1 Mol) o-Amino-methylphenylessigsäure-5-lactam j (US-PS 3 796 716) in 200 ml trockenem Benzol oder Xylol, ι wobei man unter Stickstoffatmosphäre rührt. Man erhitzt die j Mischung 1 Stunde am Rückfluß und kühlt dann auf Raumtemperatur.\ Dann gibt man auf einmal 18 ml Methyljodid zu und erhitzt ₍ weitere 1,5 Stunden am Rückfluß. Man kühlt die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur, gießt sie dann in 100 ml Eiswasser, trennt die wässrige Schicht von der organischen Schicht und extrahiert mit 2 χ 50 ml CHCl.,.. Man vereinigt die Extrakte mit der organischen Schicht und trocknet auf MgSO.. Man entfernt das Lösungsmittel und destilliert den öligen Rückstand im Vakuum, wobei man 14,9 g (92 %) o-(N-Methylaminomethyl)-phenylessigsäurer 6-lactam erhält, das bei 130-135 °C/2 mmHg siedet, Fp. 35-37 ⁰C.;

TfRv — 1

IR: ν 3300, 1620, 1490 cm .

ΙΠ 3.x

ΡΠΡ1

NMR: δ jjl 3 3,12 (3H, s) , 3,59 (2H, t, J=1,5 Hz), 4,48 (2H, t, J=1,5 Hz), 7,21 (4H, br-s).

Analyse C₁₀H₁ ^0·

berechnet: gefunden:

C	49	H	84	N	45
72,	78 70	6,	76 81	8,	49 51
72, 72,	6, 6,	8, 8,

809842/0577

o-N-Methylaminomethylpheny!essigsäure

^- NHCH.

CH₂COOH

Eine Mischung von 5,0 g (0,031 Mol) des wie oben hergestellten o-(N-Methylaminomethyl)-phenylessigsäure-ö-lactams und 500 ml konz. Chlorwasserstoffsäure erhitzt man 40 Stunden am Rückfluß, dampft die Mischung bei verringertem Druck ein, löst das Rückstandsöl in 20 ml Wasser und behandelt es mit einer kleinen Menge Aktivkohle. Man wäscht das Filtrat mit 50 ml Benzol und dampft zur Trockne ein. Das Rückstandsöl wird durch Verreiben mit Tetrahydrofuran oder Aceton kristallisiert, wobei man 4,5 g (67 %) farblose Nadeln von o-N-Methylamino-methylphenylessigsäurehydrochlorid erhält.

Analyse C_1nH₁^NO₀

berechnet:
gefunden:

Aus der Benzolschicht wird ein wenig nicht umgesetztes Ausgangsmaterial gewonnen, ebenso wie aus den THF-Waschflüssigkeiten (1,2 g, 24 %, Kp 140-143 °C/2mmHg). '

Eine wässrige Lösung von 5 g o-N-Methylaminomethylphenylessig- \ säurehydrochlorid wird mit 70 ml IR-120 Ionenaustauscherharz (H ), säulenchromatographiert und mit 2 1 3n NH.OH eluiert, wobei man ^: 3,9 g (93 %) o-N-Methylaminomethy!phenylessigsäure in Form ■ von Nadeln erhält. . '

8098A2/Ü577

C	69	H	54	N	49	Cl	,44
55,	65	6,	62	6,	53	16	,36
55,	74	6,	60	6,	53	16
55,	6,	6,

^{M/18 235 56} 28078«?

ϋ?ϊ ¹⁶⁵⁰' 1^4<70 cm"¹ max

Die nachfolgenden Beispiele sollen die Erfindung weiter erläutern, sie jedoch nicht einschränken. Alle Temperaturen sind in C angegeben. 7-Aminocephalosporansäure wird abgekürzt als 7-ACA; -ACA- steht für den Rest der Formel:

NH-CH-CH CH₀ Il I ² CC

COOH

Il

und somit kann 7-ACA als H-ACA-O-C-CH-. bezeichnet werden.

Methylisobutylketon wird mit MIBK bezeichnet. "Skellysolve B" ist eine Petrolätherfrak die im wesentlichen aus η-Hexan besteht.

"Skellysolve B" ist eine Petrolätherfraktion mit Kp. 60-68 ⁰C

LA-1 Harz ist eine Mischung sekundärer Amine, worin jedes sekundäre Amin der Formel

R¹

CH₃(CH₂)₁₀CH₂NHC - R² R³

12' 3 entspricht, worin jeder der Reste R , R und R für einen monovalenten aliphatischen Kohlenwasserstoffrest steht und

12 3

worin R , R und R zusammengenommen 11 bis 14 Kohlenstoff atome enthalten. Diese spezielle Mischung sekundärer Amine, die in den Beispielen manchmal auch mit "Flüssige Amin-Mischung Nr. II" bezeichnet wird, ist eine klare bernsteinfarbene Flüssigkeit mit folgenden physikalischen Eigenschaften:

809842/0577

M/18 235 - 57 -

Viskosität bei 25 °C 70 cps, spezifisches Gewicht bei 20 ⁰C

0,826; Brechungsindex bei 25 ⁰C 1,4554; Destillationsbereich !

bei 10 mm bis zu 170 ⁰C - 0,5 %, 170-220 ⁰C - 3 %, j

220-230 ⁰C - 90 % und oberhalb 230 ⁰C - 6,5 %. !

: IR-120 wird auch Amberlite IR-120 genannt und ist ein starkes ! Kationenaustauscherharz, das Sulfonsäurereste enthält.

. Amberlite IR-120 ist ein im Handel erhältliches Kationenaustauscherharz vom Polystyrol-sulfonsäure-Typ; es ist somit ein am Kern sulfoniertes Polystyrolharz, das mit Divenylbenzol ! vernetzt ist und gemäß dem Verfahren von Kunin, Ion Exchange • Resins, 2. Auflage (1958) John Wiley and Sons, Inc., hergestellt wird. Siehe insbesondere die Seiten 84 und 87.

Amberlite IRC-50 ist ein im Handel erhältliches Kationenaustauscherharz vom Carbonsäuretyp; es ist ein Methacrylsäure/ ; Divinylbenzol-Copolymerisat.

j Dicyclohexylcarbodiimid wird abgekürzt als DCC, Tetrahydrofuran als THF, Dünnschichtchromatographie als TLC, ! p-Toluolsulfonyl als Ts und Methanol als MeOH.

: Bei den Meßwerten ist beim IR-Spektrum nu als υ geschrieben, beim UV-Spektrum ist lambda als Λ geschrieben, bei der molaren Absorption epsilon als (£ ) und bei den NMR-Spektren ist delta als δ und tau als Ύ geschrieben (5= 10-T).

809842/0577

M/18 235 - 58 -

Beschreibung bevorzugter Ausführungsformen

Synthesen (Schemata 1, 2 und 3)

Das Thiol mit der Seitenkette in 3-Stellung, 2-Carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiol (3) wird hergestellt durch N-Äthoxycarbonylmethylierung von 6-Chlor-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]pyridazin-3-on (1) mit Natriumhydrid und Äthylchloracetat in DMF (Dimethylformamid) und anschließende Thiolierung mit Natriumhydrogensulfid (Schema 1). Die Kondensation von 7-ACA (7-Aminocephalosporansäure) mit Substanz 3_ erfolgt durch Erhitzen am Rückfluß in Phosphatpuffer (pH 7) wobei man die 3-substituierte Thio-7-ACA (4) erhält, welche mit einer geeigneten N-BOC-geschützten Aminosäure mittels des aktiven Esterverfahrens unter Verwendung von 2,4-Dinitrophenol(DNP) gekuppelt wird. Die sich ergebenden N-BOC-geschützten Cephalosporine T_ und JJ_ werden mit TFA (Trifluoressigsäure) entblockiert und mit η Natriumhydroxyd in das Mononatriumsalz überführt. (Schemata 2 und 3).

809842/0577

M/18 235

Schema 1

Herstellung von 7-Amino-3- (2-carboxymethyl-2,, 3-dihydro-striazol[A,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-

carbonsäure

NaH/DMF JlCH₂C

-CH_oC00C_oH_c

NaSH

HS

7-ACA ,

N-CH₂COOH

8098A2/0577

M/18 235

Schema 2

- 60 -

Herstellung von 7-[(o-Aminomethylphenyl)-acetamido]-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäuren

N-BOC ,COOH

2^-DI-TP/DCC

R^J

T-BOC

COO-

NO,

NO,

CONH-1 J^

CO₂H 8

TFA

^n^^, -CH₂COOH

8098A2/0577

M/18 235

a:	R1	- H,	R2 =	H	H
b:	R1	= CH	r r2	-	OH
c:	R1	- CH	5,R2	=

8a: B3-S469 3b: B3-S479 8c: EB-S478

8098A2/0577

M/18 235 - 62 -

Schema 3 |

Herstellung von 7-p-Aminomethyl-^-thienyl-acetamido)-3-(2- !

carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]pyridazin~3~on~ j

6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäuren !

R N-BOC

2,4-DNP/DCC

10

N-CH₂COOH

CF₃COOH

N-CH₂COOH

12

a: R = H b: R = C

12a: BB-S483
12b: BB-S472

8098A2/0577

6-Chlor-2,3-dihydro-2-äthoxycarbonylmethyl-s-triazol-[4,3-b]pyridazin-3-on (2)

Zu einer Lösung von 1,00 g, (5,9 mMol) Substanz _1_, 6-Chlor-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]pyridazin-3-on [P. Francavilla und F. Lauria, J. Het. Chem. 8^ 415 (1971)] in 30 ml trockenem DMF gibt man 0,3 g (6,3 mMol) Natriumhydrid (5 0 %-ig in Paraffin) während man rührt, wobei sich gelbe Kristalle bilden. Zu dieser Mischung gibt man 1,4 ml (13 mMol) Äthylchloracetat und erhitzt die Mischung unter Rühren 8 Stunden auf 90 C. Nach dem Abkühlen gießt man die Reaktionsmischung in 50 ml Wasser und extrahiert mit 5 χ 40 ml Toluol. Man vereinigt die organischen Extrakte, trocknet über wasserfreiem Natriumsulfat und dampft bei verringertem Druck ein. Den Rückstand kristallisiert man aus Benzol-n-Hexan, wobei man gelbe Nadeln der Substanz 2^ erhält (1,16 g, 77 %) , Fp. 114-115 °C (Lit. 110 ⁰C).

IR: ν *![£ 1735, 1710 cm"¹

UV:Λ ^Äth0H 231 nm (£ , 26000).

max

cnn
NMR: δ ^<"^WA"^L3 7,58 (1H, d, J=10 Hz, Pyridazin-H) , 6,98 (1H, d,

J=10 Hz, Pyridazin-H), 4,80 (2H, s, -CH₂ 4,27 (2H, q, J=7,5 Hz, CH₂CH₃), 1,29 (3H, t, J=7,5 Hz, CH₂CH₃).

Analyse C₉H₉N₄O₃Cl:

H N Cl berechnet? 42,12 3,53 21,83 13,81 %

C	12
42,	54
41,	46
41,

gefunden: 41,54 3,22 21,51 13,88 %

3,49 21,53 13,99 %

809842/0577

^UV: ^ max^aHC°^3aq* ^{260 nm (}£' ¹⁹⁵⁰°)' ^{313 nm} (£' 7000}

NMR: ö ^DM2°-^d _{6 7/88} (_{1H/ d/ J=lo} Hz, Pyridazin-H),

7,45 (1H, d, J=10 Hz, Pyridazin-H), 4,72

(2H, s, CH₂CO.

Analyse C₇HgN₄O₃S:

C	17	H	67
37,	35 23	2,	26 28
37, 37,	ta, «ta CN CN

N	,77	S	,17
24	,58	14	,32
23	,69	14
23

M/18 235 - 64 - 2807847

2-Carboxymethyl-2,S-dihydro-ö-mercapto-s-triazol[4,3-b]-pyridazin-3-on (3)

Zu einer Lösung von 30 g (0,12 Mol) 6-Chlor-2,3-dihydro-2-äthoxy-carbonylmethyl-s-triazol[4,3-b]pyridazin-3-on (2)
in 900 ml Äthanol gibt man 45,9 g (0,36 Mol) 70 %-ig reines i NaSH-2H₃O und erhitzt die Mischung 0,5 Stunden am Rückfluß. ι Man dampft die Reaktionsmischung bei verringertem Druck ein, ; löst den Rückstand in 200 ml Wasser und gibt konz. HCl zu, um ! den pH auf 2 einzustellen. Der Niederschlag (Substanz 3j j wird durch Filtrieren gesammelt und mit Wasser gewaschen,
die Ausbeute beträgt 18,3 g (69 %) .

IR: ν ^KBr 2900, 2450, 1750, 1660 cm"¹,
max

berechnet:
gefunden:

7-Amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]-pyrida- :

zin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (_4) j

Zu einer Suspension von 8,79 g (32,2 mMol) 7-Aminocephalos- ; poransäure in 0,1 molarem Phosphatpuffer (pH7, 149 ml) gibt
man unter Rühren 8,14 g (97,OmI-IoI) NaHCO₃ und 7,30 g (32,2 mMol) ; des Thiols _3 · ^Man erhitzt die Mischung unter einem Stickstoffstrom 0,5 Std. auf 80 ⁰C, behandelt sie dann mit Aktivkohle ι und stellt den pH mit konz. HCl auf 3 ein. Der sich ergebende

809842/0577

! M/18 235 - 65 -

! Niederschlag wird durch Filtrieren gesammelt und mit Wasser : gewaschen, wobei man 7,59 g (54 %) Substanz _4 erhält.

' IR: ν ^KBr 1800, 1720, 1600, 1540, 1470 cm"¹.

IU 3. X

i UV: Λ ^Puffer<P^{H 7}) 252 nm (£, 19500), 298 nm (£, 8400). !

I * in ο. χ ' ι

: NMR: δ ^D2^O+K2^CO3 7,56 (1H, d, J=9 Hz, Pyridazin-H),

^Ppm 7,05 (1H, d, J=9 Hz, Pyridazin-H), ;

5,45 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,05 (1H, d, 5Hz, ^: 7-H) , 4,43 (1H, d, J=14 Hz, 3-CII₂), 4,04 (1H, d, J=14 Hz, 3-CH₂), 3,88 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 3,45 (IH, d, J=18 Hz, 2-H).

8098A2/0577

M/18 235

2ÖÜ7847

Beispiel 1

Herstellung von BB-S469

CH₂NH₂
CH₂CONH

N-CH₂COOH

8a, BB-S469

2,4-Dinitrophenyl-O-(N-butoxycarbonylaminomethy1)-phenylacetat (6a)

Zu einer Mischung von 13 g (49 mMol) o-(N-Butoxycarbonylaminomethyl)-phenylessigsäure (J5a) und 9,02 g (49 mMol) 2,4-Dinitrophenol in 123 ml trockenem Äthylacetat gibt man 10,1 g (49 mMol) Dicyclohexylcarbodiimid (DCc) unter Wasserkühlung (5-15 ⁰C), rührt die Mischung 30 Minuten bei der gleichen Temperatur und dann 40 Minuten bei Raumtemperatur. Der sich ergebende Niederschlag wird abfiltriert und das Filtrat eingedampft, wobei man 23,9 g des aktiven Esters j5a erhält, der in der folgenden Acylierungsreaktion ohne weitere Reinigung verwendet wird.

IR: ν

KBr
max

1775, 1700, 1600, 1530 cm

809842/0577

M/18 235

7-[ο-(N-Butoxycarbonylaminomethyl)phenylacetamido]-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7a)

Zu einer kalten (0 ⁰C) Mischung von 4,38 g (10 mMol) Substanz

_4,

4,5 ml (30 mMol) (H₅C₂J₃N, 20 ml CH₃CN

und 20 ml Wasser gibt man eine Lösung von 4,79 g 2,4-Dinitrophenyl-o-(N-butoxycarbonylaminomethyl) phenylacetat (6_a) in 20 ml THF. Nachdem man über Nacht bei Raumtemperatur gerührt hat, entfernt man bei verringertem Druck THF und CH-CN aus der Reaktionsmischung, stellt die sich ergebende wässrige Lösung mit verdünnter HCl auf pH 2 ein und extrahiert mit 10 χ 30 ml 'Äthylacetat. Die organischen Extrakte werden über Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Den Rückstand chromatographiert man an einer Silicagel-Kolonne (60 g), eluiert nacheinander mit CHCl₃ und 3 %-iger MeOH-CHCl₃, wobei man 2,40 g (37 %) Substanz 7a erhält. Fp. >161 ⁰C (Zers.).

max

UV: Λ

^{pH 7 Puffer}

IU3.X

¹⁷⁸⁰' ^{1720 cm}~¹· '

252 nm (£, 19800), 298 nm (£ , 8900).

NMR: δ

^DMS0+D ₂°

Analyse C₀,

berechnet: gefunden:

7,67 (1H, d, J=9,0 Hz, Pyridazin-H), 7,10 (4H, s, Phenyl-H) , 7,05 (1H, d, J=9,0 Hz', Pyridazin-H), 5,66 (1H, d, J=4,5 HZ, 7-H), ι 5,07 (IH, d, J=4,5 Hz, 6-H), 4,71 (2H, s, N-CH₂-CO), 4,4-4,0 (4H, m, 3-CH₂ und CH₃-N), '. 3,8-3,5 (4H, m, 2-H und' CH₂CO), 1,42 (9H, s, j t.-Butyl-H) .

C	62	H	,20	N	46	S	,46 %
49,	97 95	5	,79 ,62	14,	00 84	9	,37 % ,32 %
49, 49,	4 4	14, 13,	cn cn

8098Ά2/0577

M/18 235 - 68 -

BB-S469; 7-[(ο-(Aminomethylphenyl)acetamido]-3-(2-carboxyniGthy1-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio~ methyl)-3-cephem-4-carbonsäure (8a)

3,4 ml Trifluoressigsäure gibt man bei 0 C zu 2,33 g Substanz 7a und rührt die sich ergebende Mischung 15 Minuten bei Raumtemperatur. Dann gibt man 100 ml trockenen Äther zu, sammelt den Niederschlag durch Filtrieren und wäscht mit 2 χ 50 ml trockenem Äther. Man löst den Feststoff in einer Mischung von 100 ml CH₁CN und 14 ml Wasser, stellt den pH der Lösung mit i konz. NH^OH auf 4 bis 5 ein, wobei sich ein Niederschlag ergibt, der durch Filtrieren gesammelt und mit 2 χ 50 ml CH₃CN gewaschen wird, wobei man 1,75 g (82 %) Substanz J3a in Form des Ammoniumsalzes erhält. Fp. >160°C (Zers.).

IR: ν ^KBr 1765, 1710, 1640, 1590 cm"¹, in 3.x

UV: Λ ^{pH 7 Puffer} 252 nm (£, 23900), 298 nm (£ , 10900).

* IUclX ι

Analyse C--H„~N	.7O7S2-NH4 +-H C	2O:	H	96	N	08	S	,35 %
berechnet:	46,	51	3,	15 19	18,	60 48	10	,89 % ,41 %
gefunden:	46, 46,	52 26	4, 4,	17, 17,	10 10

Herstellung des Mono-natriumsalzes von Verbindung BB-S469

Zu einer Suspension von 1,58 g Substanz ^a in 30 ml einer 50 %-igen Aceton-Wasser-Mischung gibt man eine 10 %-ige Lösung, um den pH auf 7,7 einzustellen. Dann gibt man weiteres Aceton zu, sammelt den Niederschlag durch Filtrieren und wäscht mit Aceton, wobei man 1_?38 g ( 87%) des Mono-natriumsalzes von Substanz J5a erhält, Fp. ^170 ⁰C (Zers.)_u

809 8O/0S77

M/18 235

280

j IRs ν 1765, 1710, 1640, 1600, 1540, 1485 cm '.

ITIgIX

■ UV: Λ ^ρ" ^{7 Puffer} 252 nm (£ , 20600), 298 nm (£ , 9200).

ι IUaX

! NMR: Ö ^D2^O+K2^CO

^Ppm

Ill

2 3 7,52 (1H, d, J=9Hz, Pyridazin-H)„

7,27 (4H, s, Phenyl-H), 7,03 (IH, d, J=9 Hz Pyridazin-H), 5,62 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H) , 5,07 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H).

Analyse

ι berechnet: ! gefunden:

C	,79	H	,07	N	,23	S	96
44	,44 ,95	4	,68 ,90	15	,50 ,67	9,	38 45
44 44	3 3	16 16	10, 10,

Beispiel 2

Herstellung von Verbindung BB-S472

⁰¹

CH₂NHCH₃

COOH

CO₂H 12b , BB-S472

7-(3N-t.-Butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl-2-thienylacetamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (11 b)

Eine Mischung von 513 mg (1,8 mMol) der BOC-geschützten Amino säure (10b), 400 mg (2,16 mMol) 2,4-Dinitrophenol und

809842/0577

M/18 235 - 70 -

445 mg (2,16 mMol) DCC in 5 ml THF rührt man 12 Stunden bei Raumtemperatur. Man entfernt den ausgefällten Harnstoff und gibt das Filtrat zu einer Mischung von 800 mg (1,8 mMol) Substanz 4_, 7-Amino-3~ (2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazol-[4,3-b]-pyridazin^-on-ö-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure und 0,76 ml (5,4 mMol) Triäthylamin in 5 ml Wasser, wobei man bei 0 C rührt. Man rührt so lange, bis durch Dünnschichtchromatographie nachgewiesen werden kann (Silicagel-Platte, Rf 0,95, Lösungsmittelsystem CiICl₃IMeOH =3 : 1), daß kein aktiver Ester mehr vorhanden ist. Man verdünnt die Reaktionsmischung mit 20 ml Wasser, beschichtet mit Äthylacetat (50 ml) und stellt den pH mit konz. HCl bei 5 ⁰C auf 2 ein. Man trennt die organische Schicht ab und extrahiert die wässrige Schicht mit 3 χ 50 ml Äthylacetat, vereinigt die Äthylacetatextrakte, wäscht mit gesättigter wässriger NaCl, trocknet über MgSO. und engt bei verringertem Druck ein. Die 1,9 g Rückstandsöl chromatographiert man an 40 g Silicagel„ Man eluiert die Kolonne nacheinander mit CHCl-, (400 ml) , 3 %-iger MeOH-CHCl₃ (100 ml) und 10 %iger MeOH-CHCl₃ während man die Dünnschichtchromatographie durchführt (Silicagel Platte, Lösungsmittelsystem MeOHrCHCl₃=I:2, ermittelt mit J~). Aus dem CHCl,, Eluat gewinnt man eine Mischung von 2,4-DNP und der BOC-geschützten Aminosäure 9_ und aus 3 % MeOH-CHCl₃ Eluat 50 mg Substanz JK Das gewünschte Produkt (11b) (Rf 0,4, Lösungsmittelsystem CHCIt:MeOH = 3:1) erhält man durch Eindampfen des Eluats mit 10 % MeOH-CHCl₃. Die Ausbeute beträgt 490 mg (39 %. Fp. 215-220 °cl

IR: υ ^KBr 3400, 1780, 1720, 1680, 1550 cm"¹.

ITl 3. X

UV: Λ tüJ^{1 Puffer} 245 nm ( <f, 23000), 260 nm ( £ , 18000)

Iu clX

300 nm ( £ , 7900).

NMR: δ ^ 6 1,42 (9H, s, BOC-H), 2,75 (3H, s, .N-CH₃),

3,80 (4H, br-s, 2-H und S-I-L^ ^ CO) , 4,35 (4H,

80984 2/0577

M/18 235

br-s,

und 3-CH₀), 4,72 (2H₇ s, BOC-N-'

CH₂), 5,10 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,70 (1H₇ d-d,,

J= 4,5 und 10,5 Hz, verändert sich in ein Dublett

J= 4,5 bei Zugabe von D₃O, 7-H), 6,85 (1H₇ d,

J= 4,5 Hz, Thiophen Hß), 7,19 (1H₇ d, J=9 Hz,Pyri-

dazin H), 7,34 (1H₇ d, J=4,5 Thiophen Ha)₇

7,72 (TH₇ d, J=9 Hz, Pyridazin-H), 9,11 (1H₇ d, ,

J=10,5 Hz, verschwindet bei Zugabe von D₂ ⁰, NH). j

Analyse C,

berechnet: gefunden:

C	,46	H	,60	N	,55	S	29
46	,67	4	,71	13	,79	13,	81
46	4	12	12,

BB-S472; 7- (3-Methylaminomethyl-2-thienylacetamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (12b)

0,4 ml Trifluoressigsäure gibt man bei 0 ⁰C zu 400 mg (0,57 mMol) Substanz 11b und rührt die Mischung 15 Minuten bei Raumtemperatur. Dann gibt man zu der Reaktionsmischung 10 ml wasserfreien Äther, wodurch ein Niederschlag ausfällt, der durch Filtrieren gesammelt, mit 2 χ 10 ml wasserfreim Äther gewaschen und in 10 ml Acetonitril suspendiert wird. Man stellt die Suspension mit konz. NH.OH auf pH 4 ein und rührt 10 Minuten. Der Feststoff wird durch Filtrieren gesammelt, mit 2x5 ml Acetonitril gewaschen und 7 Stunden bei 60 C/1 mm Hg getrocknet, wobei man 310 mg (90 %) Substanz 12b erhält, die bei 188-191 °C unter Zersetzung schmilzt.

■80 9 842/1)57

M/18 235

: υ ™Ζ 3400, 1770, 1720, 1680, 1550 cm ¹ .

ulclX

UV: λ

^Puffer

max

245 nm ( £ , 22400), 260 nm ( ξ_, 18700) 300 nm (£ , 8600).

Analyse ^C23^H23^N7°7^S3'^3H2^O:

berechnet: gefunden:

C	87	H	43
41,	03	4,	59
42,	3,

N S 14,86 14,58 % 14,79 14,35 %

Herstellung des Mono-natriumsalzes von BB-S472

Zu einer Suspension von 230 mg (0,38 mMol) Substanz 12b in 0,5 ml entionisiertem Wasser gibt man 1n NaOH, um den pH auf \ 8,9 einzustellen. Dann gibt man 15 ml Aceton zu der Lösung, sammelt den Niederschlag durch Filtrieren, wäscht mit 2 χ 5 ml Aceton und trocknet bei 60 C/1 mmHg während 7 Stunden, wobei man 170 mg (71 %) des Mono-natriumsalzes von BB-S472 erhält, Fp. >210 ⁰C (Zers.)

IR: ν ^KBr 3400, 1765, 1710, 1680, 1600 cm"¹.

Hl 3. X

^Puffer

245 nm ( £ , 21800) , 260 nm ( £ , 18500) , 300 nm (£, 7800).

NMR: δ ^D2° 2,72 (3H, s, N-CH₃), 3,45 (1H, d, J=18 Hz, 2H),

ppm

3,75 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 3,95 (2H, s,

.A

CH₀CO),

4,18 (4H, m,

^CH2^N und 3-CH₂), 4,57 (2H, s,

N-CH₂), 5,00 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,53 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 6,97 (1H, d, J=9 Hz, Pyridazin-H), 7,03 (1H, d, J=4,5 Hz, Thiophen-Hß), 7,34 (1H, d,

809842/0577

M/18 235

Analyse C₂₃H₂₂N₇O₇S₃Na-1

berechnet:
gefunden:

(1H	, d,	J=9	Hz4,	Pyridazin-H)„	S	11 %
C		H		N	40 15,	91 %
43,	40	3	,64	15,	18 13,
43,	26	4	,08	14,

Beispiel

ι Herstellung von BB-S478

HO

CH₂NH-CH, CH₂CONH

8c_,

N-CH₂COOH

7- [2- (N-t.-Butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl)-4-hydroxyphenylacetamido]-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazol-] [4,5-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem4-carbonsäure (7c)

Eine Mischung von 708 mg (2,4 mMol) 2-N-t.-Butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl-4-hydroxyphenylessigsäure (5_c) , 478 mg (2,6 mMol) 2,4-Dinitrophenol und 536 mg (2,6 mMol) DCC in 20 ml trockenem Tetrahydrofuran rührt man 2 Stunden bei Raumtemperatur, Der ausgefällte Harnstoff wird durch Filtrieren gesammelt. Das Filtrat wird einer Lösung von 876 mg (2mMol) 7-Amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazol[4,5-b]pyridazin-3-on-6~ ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (4J in 20 ml Wasser, ; das 0,84 ml (6 mMol) Triäthylamin enthält, zugesetzt und die

809842/0B77

M/18 235

Mischung wird 18 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nachdem man sie auf 20 ml eingeengt hat, wäscht man die wässrige Lösung mit Äther, säuert mit 6n HCl an und extrahiert mit 200 ml Äthylacetat. Der Extrakt wird abfiltriert um unlösliche Bestandteile zu entfernen, mit Wasser und einer gesättigten wässrigen NaCl-Lösung gewaschen und getrocknet. Man dampft die Lösung zur Trockne ein und der ölige Rückstand wird an Silicagel (Wakogel C-200, 25 g) chromatographiert und mit Chloroform und 3 % Chloroform-Methanol eluiert. Die Fraktionen, die das gewünschte Produkt enthalten(gemessen mittels Dünnschichtchromatographie; Rf 0,3; Lösungsmittelsystem CHCl_.:MeOH = 2:1) werden gesammelt und zur Trockne eingedampft. Der ölige Rückstand wird mit Äther-n-Hexan verrieben, wobei man 63 0 mg (44 %) Produkt 2£ erhält, das bei 200-210 C schmilzt (langsame Zersetzung),

KBr

1780, 1720, 1660, 1400, 1240, 1150 cm"¹ max

IR: ν

UV: λ P" ^{7 Puffer} max

_nm

_f 13000) , 300 nm (£ , 5400) .

_MMD c DMSO-d,-NMR: ο 6 ppm

1,39 (911, s, C-CH₃), 2,73 (3H, s, N-CH₃), 3,3-3,9 (4H, m, CH₂CO und 2-H), 4,35 (4H, m, CH₂N und 3-H), 4,48 (2H, s, NCH₂CO), 5,03 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,61 (1H, d-d, 8 und 4,5 Hz, 7-H), 6,4-7,2 (3H, m, Phenyl-H), 6,98 (1H, d, 10 Hz, Pyridazin-H), 7,61 (1H, d, 10 Hz, Pyridazin-H), 8,87 (1H, d, 8 Hz, NH).

Analyse C,

berechnet: gefunden:

50,34
50,98

HNS 4,65 13,70 8,96

5,36 11,88 7,60

8098 4 2/0577

M/18 235 - 75

BB-S478; 7- ^-N-Methylaminomethyl^-hydroxyphenylacetamido) - j 3- (2-N-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazol[4,5-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (8c)

Eine Mischung von 570 mg (0,8 mMol) Substanz 2£ ^un& 1/5 ml ι Trifluoressigsäure rührt man 3 0 Minuten bei 10 ⁰C, verdünnt die!

Mischung mit 50 ml Äther, um das Trifluoracetat von Substanz j ι ;

_8c abzutrennen, das durch Filtrieren gesammelt und dann in einer Mischung von 10 ml Acetonitril und 5 ml Wasser gelöst und anschließend abfiltriert wurde. Das Filtrat wird mit konz. Ammoniumhydroxyd auf pH 6 eingestellt und die Mischung wird mit 100 ml Acetonitril verdünnt. Der sich ergebende Niederschlag wird durch Filtrieren gesammelt, mit Acetonitril gewaschen und im Vakuum über P₉O^ getrocknet, wobei man 370 mg (75 %) Substanz 8c: erhält, die bei 215 - 220 ⁰C unter Zersetzung schmilzt.

IR: ν ^KBr 1770, 1710, 1600, 1380, 1350 cm"¹.

ITl 3.x

UV: Λ ^{PH 7 Puffer} 252 nm (£ , 19000), 300 nm ( £, 9100).

NMR: δ ^D2^O+K2^CO3 2,75 (3H, s, N-CH₃), 2,9 - 3,3 (4H, m,

^D2^O+K2^CO3 275 (3H s N-CH₃

^Ppm CH₂CO und 2-H), 4,0-4,3 (4H, m, CH₃N und 3-H), 4,57 (2H, S, NCH₂CO), 4,81 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,53 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H), 6,6-7,5 (5H, m, Phenyl-H und Pyridazin-H)

Analyse C₂

berechnet: gefunden:

C	45	H	,58	1	N	,84	S	,71	%
45,	69	4	,21	1	4	,03	9	,46	%
45,	4		5	9

809B42/ÜB77

M/18 235

Herstellung des Mononatriumsalzes von Verbindung BB-S478

Zu einer Suspension von 3 08 mg (0,5 mMol) Substanz ^£ in 2 ml Wasser gibt man 0,3 bis 0,4 ml In NaOH und rührt die Mischung bei Raumtemperatur; der pH der sich ergebenden Lösung ist 9,2. Dann gibt man langsam 20 ml Aceton zu der Lösung, sammelt den sich ergebenden Niederschlag durch Filtrieren, wäscht mit 10 ml Aceton und trocknet im Vakuum

über

' ^{wot)ei man 290}

Mononatriumsalzes

von BB-S478 erhält, das bei 230 - 235 ⁰C unter Zersetzung schmilzt.

IR: ν 1770, 1700, 1600, 1390, 1350 cm '.

rriiX

UV: λ ^{pH 7 Puffer} 250 nm ( £, 18000), 300 nm ( £ , 8400)

IHcIX

Analyse C₂

berechnet: gefunden:

5/2H	20:	H	28	N	36	S	,39
C		4,	14	14,	51	-9	,34
43	,98	4,		13,		9
43	,96

Beispiel

Herstellung von Verbindung BB-S479

8b, BB-SiJ-79

809842/0577

M/18 235 - 77 -

j 7-[ο-(N-Butoxycarbonyl-N-methylaminomethy1)-phenylacetamido]-

j 3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]pyridazinj 3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (7b)

; Zu einer kalten Mischung (0 ⁰C) von 5,4 g (12 mMol) Substanz j 4, 5,5 ml (H₁-C₉) ,N , 25 ml CH..CN und 25 ml Wasser j gibt man eine Lösung von 2,4-Dinitrophenyl-o-(N-butoxy-

carbonyl-N-methylaminomethyl)phenylacetat (6b) in THF I

[hergestellt aus 3,48. g (13,5 mMol) o-(N-Butoxycarbonyl-N-methy laminomethyl) -phenylessigsäure, 2,49 g (13,5 mMol) 2,4-Dinitrophenol und 2,7 9 g (13,5 mMol) DCC in 37 ml trockenem THF]. Man rührt die Mischung über Nacht bei Raumtemperatur, entfernt THF und CH^CN aus der Mischung indem man bei verringertem Druck eindampft, wäscht die sich ergebende wässrige Lösung mit 3 χ 30 ml Äther, stellt den pH mit verdünnter HCl auf 2-3 ein und extrahiert mit 4 χ 30 ml Äthylacetat. Man vereinigt die organischen Extrakte, trocknet über Natriumsulfat und dampft ein. Den Rückstand chromatographiert man an einer Kolonne von 100 g SiO₂. Nach Waschen mit CHCl., eluiert man die Kolonne mit 3 % MeOH in CHCl-> wobei man eine gewünschte Fraktion erhält, welche die Substanz 7Jb enthält. Die Ausbeute beträgt 3,8 g (45 %), Fp. >200°C (Zers.).

IR: ν ™Ξ ¹⁷⁸⁰' ¹⁷²⁰' ¹⁶⁸⁰ cm"¹

IU clX

: λ ^{pH 7 Puffer} 250 nm (<f, 18800), 297 nm ( £ , 8400), ms χ

ms. χ

UV

NMR: δ pp_m ^0+D2° 7,62 (1H, d, J=10,5 Hz, Pyridazin-H), :

7,14 (4H, s, Phenyl-H), 6,98 (1H, d, J=10,5 Hz, Pyridazin-H), 5,61 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,03 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H),

4,67 (2H, s, N-CH₂), 4,42 (2H, s, CH₃-N), \

4,4-4,0 (2H, m, 3-CH₂), 3,8-3,4 (4H, m, 2-H '

und CH„-CO), 2,72 (3H, s, N-CH-), 1,38 (9H, j

2 3 j

s_r BOC-H). :

809842/0577

M/18 235

Analyse C₃₀H₃₃N₇O₉S₃

berechnet: gefunden:

C	,38	H	14	N	,16	S	,61 %
48	,25	5,	52	13	,93	8	,68 %
48	,23	4,	46	12	,86	8
48	4,	12

BB-S479; 7-[o-(Methylaminomethy1)phenylacetamido]-3-(2-carboxy-1 methyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio- j methyl)-3-cephem-4-carbonsäure (8b)

7 ml Trifluoressigsäure gibt man zu 3,8 g (5,5 mMol) t-BOC-Derivat von Substanz Tb_ bei O ⁰C und rührt die Mischung 20 Minuten bei Raumtemperatur. DAnn gibt man zu der Mischung 100 ml trockenen Äther, sammelt den sich ergebenden Niederschlag durch Filtrieren und wäscht mit 3 χ 100 ml trockenem Äther. Man löst den Niederschlag in einer Mischung von 120 ml CH₃CN und 18 ml Wasser und stellt den pH der Lösung auf 5-6 mit konz. NH₄OH ein, wobei man einen öligen Niederschlag erhält, der mit CH-CN verrieben wird, wodurch sich ein Feststoff ergibt. Das Produkt frb wird durch Filtrieren gesammelt, mit CH..CN gewaschen und getrocknet. Die Ausbeute beträgt 2,55 g (77 %).

IR: ν

max

1770, 1710, 1600, 1550 cm

_ 1

Herstellung des Mononatrium-salzes von Verbindung BB-S47 9

Zu einer Lösung von 2,54 g (4,3 mMol) BB-S479 (8b) in 25 ml Wasser gibt man unter Kühlen etwa 3 ml In NaOH (pH der Lösung war 10). Man gibt eine größereMenge Aceton zu der Lösung, sammelt den Niederschlag durch Filtrieren und wäscht mit Aceton, wobei man 1,94 g (84 %) des Mononatriumsalzes von Verbindung BB-S479 erhält, Fp. >200 ⁰C (Zers.).

809842/0577

M/18 235

IR: ν ^KBr 1770, 1710, 1600, 1550 cm"¹.

ill 3. X

^UV: λ £L^{7 Puffer} 250 run (£, 19400), 297 nm ( £, 8700).

Analyse C₃₅H₂₄N₇O₇S₂Na-1/2 H₃O

berechnet: gefunden:

C	,61	H	,00	1	N	,55	S	,17 %
47	,43 ,43	4	,67 ,68	1 1	5	,97 ,70	10	,25 % ,84 %
47 47	4 4		5 5	9 9

Beispiel

Herstellung von BB-S483

-CH₂CONH

12a,

N-CH₂COOH

7-(3-N-t.-Butoxycarbonylaminomethyl-2-thienylacetamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (11a)

Eine Mischung von 410 mg (1,56 mMol) der BOC-geschützten Aminosäure j), 313 mg (1,7 mMol) 2,4-Dinitrophenol und 353 mg (1,7 mMol) DCC in 5 ml THF rührt man 12 Stunden bei Raumtemperatur, entfernt den ausgefällten Harnstoff und gibt das Filtrat zu einer Mischung von 683 mg (1,56 mMol) 7-Amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure {4) und 0,62 ml (4,68 mMol) Triäthylamin in 5 ml Wasser bei 0 ⁰C wobei man rührt. Man rührt bei Raumtemperatur weiter, bis sich

809842/0577

M/18 235 - 80 - 280784?

mittels Dünnschichtchromatographie nachweisen läßt, daß der aktive Esterverschwunden ist (Silicagel Platte? Rf 0₇95; Lösungsmittelsystem CHCl-:MeOH = 3:1). Man verdünnt die Reaktionsmischung mit 20 ml Wasser, beschichtet mit 50 ml Äthylacetat und stellt den pH mit konz. HCl bei 5 ⁰C auf pH 2 ein. Man trennt die organische Schicht ab und extrahiert die wässrige Schicht mit 3 χ 50 ml Äthylacetat, vereinigt die Äthylacetatfraktionen, wäscht mit gesättiger wässriger NaCl, trocknet über MgSO. und engt bei verringertem Druck ein. Das Rückstandsöl (1,8 g) wird an Silicagel (40 g) chromatographiert. Man eluiert die Kolonne nacheinander mit 400 ml CHCl₃ und 500 ml 3 %-iger MeOH-CHCl₃. Das Eluat wird durch Dünnschichtchromatographie überwacht (Silicagelplatte, Lösungsmittelsystem CHCl₃ZMeOH = 2:1, mit J_ als Indikator). Das gewünschte Produkt 11a (Rf 0,2) erhält man durch Eindampfen der MeOH-CHCl₃ Eluate. Die Ausbeute beträgt 450 mg (42 %), Fp. 155-160 ⁰C.

IR: ν ^KBr 3300, 1775, 1720, 1680 cm"¹.

^UV: ^ max ^PUffer 245 nm ( <f , 23900), 260 nm ( S , 19200),

300 nm (£ , 8700).

NMR: δ ^DM^°"^d6 1,39 (9H, s, BOC-H), 3,76 (4H, br-s, 2-H und

S^ ~CH₂CO) , 4,05 (2H, d, J=6 Hz, verändert sich in ein Singulett nach Zugabe von D„O, BOCNH-CH-), 4,20 (2H, m, 3-CH₃), 4,69. (2H, s, N-CH₂CO₂), > 5,06 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H) , 5,62 (1H, -d-d, ;

J=4,5 und 9 Hz, verändert sich in ein Dublett |

J = 4,5 Hz durch Zugabe von D₃O, 7-HJ, 6,83 (1H, d, J=4,5 Hz, Thiophen-Hß), 7,00 (1H, m, verschwindet nach Zugabe von D„O, NHBOC), 7,04 (1H, d, J=9 Hz, Pyridazin-H) , 7,12 (1H, d,' J=4,5 Hz, Thiophen-Ha), 7,65 (1H, d, J=9 Hz, Pyridazin-H), 8,97 (1H, d, J=9 Hz, verschwindet bei Zugabe von D₃O, 7-NH). ■ '

809842/0577

M/18 235	C	88	- 81 -	23	N	17	2807847
Analyse C0-H00N-O-S0: ζ/ ^y / y j	46,	42		37	14,	49
	46,	H		13,	S
berechnet:		4,			13,90 %
gefunden:		4,		13,61 %

BB-S 483; 7-(3-Aminomethyl-2-thienylacetamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (12 a)

Man gibt 0,4 ml Trifluoressigsäure zu 410 mg (0,59 mMol) Substanz 11a bei 0 ⁰C und rührt die Substanz 15 Minuten bei Raumtemperatur. Zu der Reaktionsmischung gibt man dann 10 ml wasserfreien Äther, wodurch sich ein Niederschlag abtrennt, der durch Filtrieren gesammelt, mit 2 χ 10 ml wasserfreiem Äther gewaschen und in 10 ml Acetonitril suspendiert wird. Man stellt die Suspension mit NH.OH auf pH 4 ein und rührt 10 Minuten. Der Niederschlag wird durch Filtrieren gesammelt, mit 2 χ 5 ml Acetonitril gewaschen und bei 60 ⁰C/1 mmHg 7 Stunden getrocknet, wobei man 310 mg (88 %) Substanz 12a erhält, die oberhalb 200 ⁰C schmilzt (langsame Zersetzung)„

IR: ν ^KBr 3400, 3150, 1760, 1700, 1680, 1600 cm"¹.

IUcLX

UV: λ ^p^^{7 Puffer} 245 nm ( £ , 17100), 260 nm ( £ , 14100) ,

300 nm ( £, 6500) .

Analyse C₂₂H₂₁N₇O₇S-SH₂O: *

berechnet: gefunden:

C	90	H	21	N	17	S	89
40,	39	4,	62	15,	87	14,	35
40,	3,	15,	14,

809842/0577

Herstellung des Mononatriumsalzes von Substanz BB-S483

Zu einer Suspension von 280 mg (0,47 mMol) Substanz 12a in 0,5 ml entionisiertem Wasser gibt man 1n NaOH, um den pH auf 9,5 einzustellen und sammelt das unlösliche Material durch Filtrieren. Dann gibt man 15 ml Aceton zu dem Filtrat, um den Niederschlag abzutrennen, der durch Filtrieren gesammelt, mit 2 χ 5 ml Aceton gewaschen und während 7 Stunden bei 70 ⁰C/1 mmHg getrocknet wird, wobei man 220 mg (76 %) des Mononatriumsalzes von Verbindung 12a erhält. Fp.>210 ⁰C (langsame Zersetzung).

IR: ν ^KBr 3400, 3250, 1760, 1710, 1650, 1600, 1550 cm"¹, in 3.x

UV: λ ^{pH7 ruj}-ⁱ-^tiJ- 245 nm ( £ , 19900) , 260 nm ( £ , 16400) ,

300 nm ( £, 5900).

NMR: δ ^D2° 3,60 (2H, m, 2-H), 3,91 (2H, s, CH₂CO), 4,12

^Ppm (2H, s, CH₂-NH₂), 4,20 (2H, m, 3-CH₃), 4,55 (2H, s, N-CH₂CO), 4,95 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,50 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 6,94 (1H, d, J=9 Hz, Pyridazin-H), 6,99 (1H, d, J=4,5 Hz, Thiophen-Hß), 7,28 (1H, d, J=4,5 Hz, Thiophen-Ha), 7,32 (1H, d, J=9 Hz, Pyridazin-H).

Analyse C₂₂H₂₀N₇O₇S₃Na-1/2CH₃COCH₃:

berechnet: gefunden:

C	,92	H	61	N	26	S	97
43	,48	3,	56	15,	28	14,	91
43	4,	15,	13,

809842/0577

Löslichkeit

Alle Mononatriumsalze dieser Serie hatten eine Löslichkeit in Wasser von mehr als 10 %.

Neurotoxizität

Es wurde eine vorläufige neurotoxikologische Untersuchung durchgeführt, indem man einer Gruppe von 2 Kaninchen intravenös tOO mg/kg der Testverbindung verabreichte. Die Ergebnisse, die mit BB-S469 und BB-S479 erhalten wurden, zeigen, daß die Verbindungen vermutlich sehr geringes neurotoxisches Potential haben.

In vitro Aktivität (Tabelle I)

Es wurden die MIC-Werte für 51 gram-positive und 96 gramnegative Bakterien mittels Reihenverdünnung unter Verwendung von Mueller-Hinton Agar bestimmt. Die 147 Testorganismen wurden in 16 Gruppen aufgeteilt, entsprechend der Art und der Antibiotikaresistenz, wobei 5 Gruppen für gram-positive und 11 für gram-negative Bakterien gebildet wurden. Tabelle I zeigt die Aktivität in vitro, ausgedrückt als geometrisches Mittel der MIC-Werte. Die Substanzen BB-S472 und BB-S479 zeigten eine bessere Gesamt-Aktivität als ihre nicht N-methylierten Analoga, BB-S483 und BB-S469. Substanz BB-S479 war bei einigen Arten gram-negativer Bakterien der Substanz BB-S472 überlegen. Im Vergleich mit Cefamandol war die Substanz BB-S47 9 gegenüber den meisten Testorganismen aktiver, mit Ausnahme von Providencia species und Staphylococci,

809842/0577

Tabelle In vitro Aktivität gegen 147 Test-Organismen

Geometrisches Mittel, der MIC-Werte* (γ/ml)

Test Organismen

_S. aureus (sensitiv ) S:. aureus (penicil-

linase+)
S. aureus ·

(Methicillin-R)

§.· pyogenes

E). pneumoniae

E. coil (sensitiv )

E. coil

(Penicillinase +) Enterobacter

(sensitiv■)
Enterobacter

(Cephalosporinase +)

Proteus Proteus
Proteus

indole-) indole + ) indole +,

cephalosporinase Providencia sp
Klebsiella sp.
S. marcescens

¹ Verschiedene (SaI-monella, Shigella, Citrobacter)

Anz. der

Stämme

13 15

10

9 13

7 3

7 6

14

5 5

12 16

BB-S469 Beisp.

30 0.05 0.03

11 1.0

11 4.2

0.9 130

BB-S472
Beisp. 2

0.4
0.9

58

0.05
0.05

0.2

15
1.3

3.2 0.3 0.3

8.3 4.8 0.8
200

0.4

BB-S478
Beisp. 3

0.4
1.0

50
0.04
0.03
0.2

10

0.8

2.6
0.4
0.3

' 7.3
4.8
0.6

40

0.3

BB-S479 Beisp. 4

0.3 0.9

35
0.04 0.04 0.2

2.6 0.5

2.1

0.5 0.2

4.8 4.2 0.6 35

0.4

BB-3483 Beisp.

O.3 1.1

48

0.08 0.04 0.3

21

1.3

5-2 0.7 0.4

17 2.1 1.1

81

0.9

Cefaraandole

0.1 0.4

2.4 0.04 0.2 0.3

5.7 1.0

ο'.β

0.5

3.6 0.7 2.4

0.3

* * Mueller-Hinton Agar (Inokulumgröße: 10 -Verdünnung) MIC cut-off: 200 γ/ml

** BL-S786 ist Natrium-7- (2-aminatiethylphenylacetamido) -3- (1 -carbojjymethyltetrazol-S-ylthiomethyl) cephem-4-carboxylat

-3-

M/18 235

Beispiel

] Ersetzt man in dem Verfahren gemäß Beipiel 3 die dabei ver- ! wendete 2-N-t-Butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl-4-hydroxy~ j phenylessigsäure durch eine äquimolare Gewichtsmenge
j 2-N-t.-Butoxycarbonylaminomethyl-4-hydroxyphenylessigsäure, : bzw. 2-N-t.-Butoxycarbonylaminomethyl-4-methoxy-phenylessig-I säure, bzw. 2-N-t.-Butoxycarbonyl-N-methyl-aminomethyl-4-

methoxyphenylessigsäure, so erhält man die Verbindungen

der Formeln:

CHoCONH-CH-CH CH * Il I

CHoCONH-CH-CH ² I I

C-N

N-CH₂COOH

und

bzw.

CH, 0

CH₂NHCH₃

CH₂CONH-CH-CH CH.

*· Il ■

C-N C-CH₀S

0 C^

C-OH

II"

N N-CH₂COOH

8098A2/0577

M/18 235

Beispiel

Herstellung von Substanz BB-S493

NH-BOC COOH

NH-BOC COIiIH

CONH

N-CH₂CO₂H

8098A 2 /0577

■ 7-[(2-N-t.-Butoxycarbonylaminomethy1-1,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(2-N-carboxymethyl-s-triazol[4,5-b]pyridazin- ; 3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (2)

Eine Mischung von 640 mg (2,4 mMol) 2-N-t.Butoxycarbonylaminomethyl-1 ,4-cyclohexadienyl-essigsäure (Vj , 422 mg (2,4 mMol) ^; 2,4-Dinitrophenol und 494 mg (2,4 mMol) DCC in 10 ml trockenem THF rührt man 1,5 Stunden bei Raumtemperatur. Der ausgefällte Harnstoff wird durch Filtrieren gesammelt, dann gibt man das Filtrat auf einmal zu einer Lösung von 7-Amino-3-(2-N-carboxymethyl-s-triazol[4,5-b]-pyridazin-3-on-6-ylthio-ι

! methyl)-3-cephem-4-carbonsäure in 10 ml Wasser, das 0,56 ml (4 mMol) Triäthylamin enthält und rührt die Mischung 3 Stunden bei Raumtemperatur. Dann engt man die Reaktionsmischung bei verringertem Druck auf 10 ml ein, wäscht mit 3 χ 10 ml Äther, ; säuert mit 6n Chlorwasserstoffsäure an und extrahiert mit 5x10 ml Äthylacetat. Die vereinigten Extrakte werden mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und über wasserfreier Na„SO getrocknet. Man dampft das Lösungsmittel bei verringertem Druck ein und chromatographiert den Rückstand an Silica-Gel (Wako-gel C 200, 30 g), wobei man mit Chloroform-Methanol ! (0-50 %) eluiert. Man sammelt die Fraktionen, die das ge- ^: wünschte Produkt enthalten, entfernt das Lösungsmittel und '■ ' verreibt den Rückstand mit Äther-n-Hexan, wobei man 410 mg (30 %) des Produkts 2^ erhält. Fp. 110 ⁰C (Zers.).

IR: ν ^KBr 1780, 1730, 1610, 1530, 1250, 1160 cm"¹.

ItI 3.x

UV: Λ ^{pH7 Puffer} 252 nm ( £ , 19000), 300 mn (£, 8600, sh) . |

ΓΠ.3.Χ

Analyse C-gHo^N-OgS«·2H-O:

berechnet: gefunden:

C	12	H	15	N	,54	S	,86
48,	07	5,	64	13	,70	8	,39
48,	4,	12	8

809842/0577

BB-S493; 7-[(2-Aminomethyl-i,4-cyclohexadienyl)-acetamido]-3-(2-N-carboxymethyl-s-triazolo[4,5-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl) -3-cephem-4-carbonsäure (_3)

Man behandelt 350 mg (0,51 mMol) des N-BOC-geschützten Cephalosporins _2 während 3 0 Minuten bei Raumtemperatur mit 1 ml Trifluoressigsäure. Man gibt 50 ml Äther zu der Mischung, wodurch man das TFA-SaIz von Verbindung 3_ erhält, das durch Filtrieren gesammelt und dann in einer Mischung von 5 ml Acetonitril und 2 ml Wasser gelöst wird. Man behandelt die Lösung mit einer kleinen Menge Aktivkohle, stellt den pH mit konz. Ammoniumhydroxyd auf pH 6 ein, sammelt den Niederschlag, wäscht mit 5 ml Acetonitril und trocknet im Vakuum, wobei man 235 mg (78 %) Verbindung _3 erhält. Fp. 220-230 ⁰C (Zers.)„

IR: ν ^KBr 1770, 1740, 1710, 1650, 1600, 1550 cm"¹.

TQ clX

UV: Λ ^{pH7 puffer} 252 nm (£, 20000), 300 nm (£, 9000, sh) .

iricix

Analyse C„.H_OE.N_O_S„ ·Η,0

berechnet: gefunden:

C	,60	H	49	N	,19	S	59
47	,77	4,	06	16	,49	10,	64
47	4,	16	10,

809842/0577

M/18 235

Antibakterielle Aktivität in vitro von Substanz BB-S493 im Vergleich zu BB-S47 9 und Cefamandol (bestimmt nach dem Steer Agar-Verdünnungsverfahren auf Mueller-Hinton Agarplatten)

Organismen

S. aureus Smith A9537

S. aureus A9^97

S. aureus BX-I633 A9606

St. faecalis A9536

E. coli NIHJ

E. coli ATCC 8739

E. coli Juhl AI5II9

E. coli BX-I373

E. coli AI58IO

E. coli A960O

E. coli A15W

Kl. pneumoniae A9678

Kl. pneumoniae A9977

Kl. pneumoniae A1513O

Kl. pneumoniae A9Ö67

Pr. vulgaris A9^3ö

Pr. vulgaris A9699

Pr. mirabilis A9554

Pr. mirabilis A99OO

Pr. morganii A9553

Pr. morganii A2003I

Pr. rettgeri AI5167

Ps. aeruginosa ^993O

Ps. aeruginosa A9843 Shig. dysenteriae

Shig. flexneri A968U

Shig. sonnei A9516

Serr. marcescens A20019

Enterob. cloacae A9656

Sal. enteritidis A9531

Sal. typhosa A9^U98

B. anthracis A95O4

MIC (- γ -/ml

33-3^93 B3-S^79 Gefaiaandole

0Λ
0.2
0.4
100

0,
0,

0.2
0.4
0.2
0.1
6.3

0.4
0.2
0.2
0.2

0Λ

6.3
0.2
0.2
>100
0.4
0.1

>100
>100
0.05

25

O.O5
100

0.1
0.1
0.0125

0.4
0.1
0.4
100

0.05

O.O5

0.1

0.2

0.1

O.O5

3.1

0.4
0.1
0.1
0:1

0.1

0.8

0.
0.

>100
0,

0.1

>100
>100

0.025

12.5

0.025

1.0
0.05
0.05
0.025

0.1

0.05

0.2

50

0.025 0.05

0.4 0.4 0.2 0.1

3.1

1.6 0.4 0.4 0.8

0.2

25 _o

0,8 0.8 >100
0.8 0.1

>100
>100
0.2

3.1

0.05 50 3.1

0.1 0.1 0.2

809842/0577

Aktivität von Substanz BB-S479 und verwandter Verbindungen in vivo (bei Mäusen, se) °°

	Organism en BB-S469	EB-S472 BB-3478	(PD50	(mg /kg )	Cefamandole	-	235
	S. aureus Smith 0.19	0.12 O.O8	BB-S479	BB-S483 BB-3493	O.93	BL-S786
	0.16		O.16	O.34 0.29	O.74	0.53
	O.29		0.12		0.6	0.55
	0.2		0.2		0.8	0.94
					0.8	0.46
OO O						0.6
CD OO	E. CoIj1 Juhl O.I9	O.I9 O.O8			O.95
-P-	0.24		O.I9	0.15 0.27	1.7	0.43	I
to	O.I5		O.I5		1.8	0.55	O
O Cn			0.12		2.2	0.46	I
-J	_-·				0.8	0.39

M/18 235

Zusätzliche Ausgangsmaterialien

6-Chlor-2-(2-cyanoäthy1)-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]-pyridazin-3-on

Zu einer Lösung von 6-Chlor-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]-pyridazin-3-on [P. Francabiila and F. Lauria, J. Het. Chenu £, 415 (1971)] (17 g, 0,1 Mol) in 300 ml trockenem DMF gibt man unter Rühren 0,5 g (4,5 mMol) Kalium tert.-butylat. Dann gibt man 6,6 g (0,12 Mol) Acrylonitril in 10 ml trockenem DMF zu der Mischung, rührt die Mischung 24 Stunden bei 100-110 C, gießt sie in 700 ml Wasser und extrahiert mit 5 χ 400 ml Äthylacetat. Die organischen Extrakte werden vereinigt, über Na„SO. getrocknet und eingedampft. Den Rückstand kristallisiert man aus Äthylacetat, wobei man hellgelbe Nadeln von 6-Chlor-2-(2-cyanoäthyl)-2,3-dihydro-striazol [4,3-b]-pyridazin-3-on erhält, (2,5 g, 11 %)« Fp. 166-168 ⁰C.

IR: ν

UV:

NMR: δ

KBr max

Dioxan max

DMSO-d

-1

ppm

2230, 1720, 1550, 1500 cm

373 ran (f, 2000) .

3,03 (2H, t, J=6,0 Hz, CH»), 4,21 (2H, t, •J=6,0 Hz, CH„), 7,23 (1H, d, J=10,0 Hz, Pyridazin-H), 7,93 (1H, d, J=10,0 Hz, Pyridazin-H)„

Analyse C_oH_N_c0Cl:

ODD

berechnet: gefunden:

C	97	H	,70	N	,32	Cl	86
42,	73 56	2	,57 ,50	31	,36 ,68	15,	96 81
42, 42,	CM CM	31 31	15, 15,

809842/0577

2-(2-Carboxyäthyl)-6-chlor-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]-pyridazin-3-on

Eine Lösung von 724 mg 6-Chlor-2-(2-cyanoäthyl)-2,3-dihydro-s triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on in 15 ml 6n HCl erhitzt man 6 Stunden am Rückfluß und extrahiert die Reaktionsmischung dann mit 10 χ 20 ml Äthylacetat. Man wäscht die vereinigten Extrakte mit gesättigtem wässrigem Natriumchlorid (50 ml), trocknet über Na₃SO₄ und dampft ein, wobei man 567 mg (72 %) eines hellgelben Feststoffs erhält, 2-(2-Carboxyäthyl)-6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on. Fp. >170 ⁰C (Sublimation).

IR: ν ^KBr 3400-2400, 1730, 1710, 1540 cm~¹. UV: Λ °^^Xan 377 nm (£ , 1500).

Analyse CgH7N4O3Cl	C	,60	H	91	N	09
berechnet:	39	,62 ,48	2,	97 67	23,	05 70
gefunden:	39 39	2, 2,	23, 22,

NMR: δ ^D2^O+Na^^CO3 2,70 (2H, t, J=7,0 Hz, CH₂), 4,24 (2H, t,

J=7,0 Hz, CH₂), 7,17 (1H, d, J=10/0 Hz, Pyridazin-H), 7,70 (1H, d, J=10,0 Hz, Pyridazin-H).

Cl 14,61 %

13,93 % 14,12 %

2-(2-Carboxyäthyl)-2,S-dihydro-ö-mercapto-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on

Man rührt eine Mischung von 567 mg (2,34 mMol) 2-(2-Carboxyäthyl) -6-chlor-2,3-dihydro-s-triazol[4,3-b]pyridazin-3-on und 924 mg (7,02 mMol) 70 %-iges Natriumhydrosulfiddihydrat in 10 ml Wasser 2 Stunden bei Raumtemperatur. Man stellt den

809842/0577

pH-Wert der Reaktionsmischung zuerst mit konz. HCl auf 1, dann mit NaOH auf 10 und dann mit konz. HCl wieder auf 1 ein. Der sich ergebende Niederschlag von 2-(2-Carboxyäthyl)-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on wird durch Filtrieren gesammelt und mit Wasser gewaschen. Die Ausbeute beträgt 418 mg (74 %) . Fp. 174-176 ⁰C.

IR: ν ^KBr 3600-2600, 2440, 1730, 1720(sh) cm"¹.

IUo.X

UV: Λ ^PJ ^{7 Puffer} 262 nm ( £ 17000), 318 nm ( £ 6600).

Iu. a. X

NMR: δ ^ 6 2,73 (2H, t, J=7,0 Hz, CH₂), 4,o7 (2H, t,

J=7,0 Hz, CH₂), 7,30 (1H, d, J=10,0 Hz, Pyridazin-H), 7,74 (1H, d, J=10,0 Hz, Pyridazin-H).

Analyse CgHgN₄O₃S:

berechnet: gefunden:

C	00	H	36	N	,32	S	35
40,	08 06	3,	12 20	23	,65 ,70	13,	23 29
39, 39,	U) U)	22 22	14, 14,

^: 7-Amino-3-[2-(2-carboxyäthyl)-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure i

Man rührt eine Mischung von 405 mg (1,49 mMol) 7-ACA, 357 mg (1,49 mMol) des Thiols 2-(2-Carboxyäthyl)-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on und 375 mg (4,47 mMol) NaHCO₃ in 0,1 m Phosphatpuffer (pH 7, 8 ml) 30 Minuten bei 80 ⁰C, kühlt die Reaktionsmischung und filtriert ab, um unlösliche Bestandteile zu entfernen. Man stellt das Filtrat mit konz. HCl auf pH 1-2 ein, sammelt den sich ergebenden Nieder- ; schlag, 7-Amino-3-[2-(2-carboxyäthyl)-2,3-dihydro-s-triazol-

ί [4_/3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure, j I

j durch Filtrieren und wäscht mit Wasser. Die Ausbeute beträgt ;

^!— 519 mg (77 %) . - —- '

809842/0577

M/18 235

KRr -1

I IR: v ™" 3600-2200, 1800, 1725, 1620, 1550, 1480 cm .

^UV: λ

^Puffer

lHclX

NMR: δ ^D2^O+K2^CO3 ^Ppm

Analyse C₁

berechnet: gefunden:

253 nm ( £, 20000), 298 nm ( P 10000).

2,20 (2H, t, J=7,0 Hz, CH₃), 3,40 (1H, d, J=17,5 Hz, 2-H), 3,85 (1H, d, J=17,5 Hz, 2-H), 4,00-4,50 (4H, m, 3-CH„ und N-CH₀-) 5,01 (1H, d, J=4,0 Hz, 6-H), 5,40 (1H, d, J=4,0 Hz, 7-H), 6,94 (1H, d, J=10,0 Hz, Pyridazin-H), 7,44 (1H, d,J=10,0 Hz, Pyridazin-H).

C	09	H	99	N	52	S	,37	%
40,	06 12	3,	33 34	17,	96 98	13	,87 ,98	% %
40, 40,	3, 3,	16, 16,	13 13

7-ACA steht für 7-Aminocepahlosporansäure und DMF für Dimethylformamid.

Beispiel

7-[o-(N-Butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl)phenylacetamido]-3-[2-(2-carboxyäthyl)-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure

Zu einer Mischung von 452 mg (1 mMol) 7-Amino-3-[2-(2-carboxyäthyl) -2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure und 0,46 ml (3,3 mMol) Triäthylamin in 4 ml 50 %-igem wässrigem Acetonitril gibt man 3 ml einer THF-Lösung von 2,4-Dinitrophenyl o-(N-t.-butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl)-phenylacetat, hergestellt aus 283 mg (1,1 mMol) o-(N-t.-Butoxycarbonyl-N-methylaminomethyl)-phenylessigsäure, 202 mg (1,1 mMol) 2,4-Dinitrophenol und

809842/0577

M/18 235

227 mg (1,1 mMol) DCC. Man rührt die Mischung über Nacht bei Raumtemperatur und engt bei verringertem Druck ein, um die organischen Lösungsmittel zu entfernen. Das wässrige Konzentrat wäscht man dann mit 3 χ 20 ml Äther, säuert mit konz. HCl auf pH 1 - 2 an und extrahiert mit 5 χ 20 ml Äthylacetat. Man trocknet die vereinigten Extrakte mit wasserfreier Na„SO- und dampft zur Trockne ein. Der Rückstand wird an einer Silicagel-Kolonne (Wakogel, C-200, 10 g) chromatographiert, wobei man mit einer Mischung von MeOH-CHCl, eluiert (MeOH Anteil 0 bis 3 %). Man dampft die vereinigten Eluate, welche das gewünschte Produkt enthalten ein, wobei man 359 mg (50 %) der Titelverbindung erhält Fp. >150 ⁰C (Zers.).

IR: ν

^KBr

3600-2400, 1780, 1720, 1680, 1550, 1490 cm

"¹

UV: λ ^{ΡΙΠ Puffer} 253 nm (

UtclX

19800), 298 nm (£ 9400).

NMR: δ

1,37 (9H, s, t-Bu-H), 2,70 (3H, S, N-CH₃), 2,70 (2H, t, J=7,0 Hz, -CH₂~), 3,2-4,5 (10 H,m), 5,01 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,60 (1H, d-d, J=5 und 8 Hz, die 8 Hz Bindung verschwindet bei Zugabe von D₃O, 7-H), 6,93 (1H, d, J=10 Hz, Pyridazin-H). 7,58 (1H, d, J=10 Hz, Pyridazin-H)

Analyse C₃₁H₃₅N₇O₉S₃

berechnet: gefunden:

C	,08	H	,31	N	92	S	,45 % :
49	,32 ,36	5	,70 ,63	12,	52 53	8	,44 % ,43 % I
49 49	4 4	12, 12,	OO 00

8098A2/0577

M/18 235 - 96 -

BB-S 525; 7-[ο-(N-Methylaminomethyl)-phenylacetamido]-3-[2-(2-carboxyäthyl)-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Mischung von 1 ml Trifluoressigsäure und 302 mg (0,42mMol) des wie oben beschrieben hergestellten BOC-geschützten Cephalosporins läßt man 15 Minuten bei Raumtemperatur stehen und verdünnt dann mit 10 ml Äther. Der sich ergebende Niederschlag wird durch Filtrieren gesammelt und mit 2 χ 10 ml trockenem Äther gewaschen, wobei man 263 mg eines Feststoffs erhält, der in einer Mischung von 6 ml Wasser und 3 ml Acetonitril gelöst wird. Man stellt die gerührte Lösung mit 0,36 ml 1n NaOH auf : pH 4 ein und verdünnt mit 100 ml Acetontril wodurch man 187 mg ; des Niederschlags erhält, der in 4 ml Wasser suspendiert und mit 0,3 ml 1n Natriumhydroxyd auf pH 9 eingestellt wird. Man j behandelt die Lösung mit einer kleinen Menge Aktivkohle und gefriertrocknet sie, wobei man das Mononatriumsalz der Substanz BB-S525 erhält. Die Ausbeute beträgt 106 mg (39 %). Fp. >180 ⁰C, (Zers.)

IR: v ^KBr 3600 - 2400, 1770, 1710, 1600, 1490, 1400 cm"¹.

ΓΐΙαΧ

^UV: * max ^PUffer 253 nm ( £ 19800), 298 nm (£ 8800).

NMR: δ ^D2° 2,70 (2H, m, -CH₃-), 2,75 (3H, s, N-CH₃), 4,4- ' ^max 3,4 (10H, m), 4,92 (1H, d, J=4,0 Hz, 6-H), 5,55

(1H, d, J=4,0 Hz, 7-H), 6,93 (1H, d, J=9,5Hz, ^; Pyridazin-H), 7,28 (4H, s, Ph-H), 7,40 (1H, d, J=9,5 Hz, Pyridazin-H).

Analyse C_O/rH_o,N_0-,S„'Na'3H_0: Zo Zo I 1 Z Z

berechnet: gefunden:

C	28	H	,68	N	,22	S	,30
45,	34 84	4	,01 ,85	14	,14 ,08	9	,76
45, 44,	4 3	14 14	9

809842/0577

M/18 235

Antibakterielle Aktivität der Substanz BB-S525 in vitro im Vergleich zu BB-S 479 und Cefamandol (bestimmt mittels Steer Agar Verdünnungsverfahren auf Mueller-HintonAgarplatten)

mc ( ir /mi)

Organism en

S. aureus Sraith S. aureus S. aureus BX-1633 St. faecalis

E. coli HIHJ

E. coli ATCC 8739

E. coli Juhl

E. coli BX-1373

E. coli

E. coli

E. coli ■

Kl. pneumoniae Kl. pneuoioniae Kl. pneumoniae Kl. pneumoniae

Pr. vulgaris Pr. vulgaris Pr. tnirabilis Pr. mirabilis Pr. morganii Pr. morganii Pr. rettgeri

Ps. aeruginosa Ps . aeruginoso. Shig. dysenteriae Shig. fle;cneri Shig. sonnei Serr. marcescens Enterob. cloacae Sal. enteritidis Sal. typhosa E. anthracis

3B-S 525	BB-S	1Γ7Ο	Jl	Cefamandole
OA	C.	2	0.2
0.2	0.	3	0.05
Co	0 O		0.2
>100	>100	1	100
0.2	0.	1	0.1
6.3	3 ·	2	β.3
OA	0.	*->	0.4
OA	0.	1	0.2
0.2	0.	05	0.1
0.2	C .	1	0.C5
6.3	3.	8	1.6
1.5	π	1	3.1
0.2	0.	r· C.	0..2
0.2	0.	P	0.8
0.2	0.	2	CO
0.2	C.	O	0.2
3.1	0.	Ί	50°
0 --	0.	1	GA
0 .2	r		0.2
> ICG	>100	2	3.1
0.2	0.	3	0.3
A Q	0.		0.1
>100	>100		>100
>100	>IC0	1	>1CO
C . I		5	0.1
12.5	12.	, 1	Z· .1
0.1	0.	• 5	0.2
25	12.	,1	50
3.1	3,		1.6
0.2	O,	.1	0.1
C.2		2	0.1
0.2	C,	ο.ος

809842/0577

M/18 235

Beispiel 9

Ersetzt man in dem Verfahren gemäß Beispiel 8 die dabei
verwendete 2-N-t-butoxycarbonyl-N-methylaminomethy1-4-hydroxy-phenylessigsäure durch eine äquimolare Gewichtsmenge 2-N-t-Butoxycarbonylaminomethy1-4-hydroxyphenylessigsäure bzw. 2-N-t-Butoxycarbonylaminomethyl-4-methoxy-phenylessigsäure und 2-N-t.-Butoxycarbonyl-N-methyl-aminomethyl-4-methoxyphenylessigsäure, so erhält man entsprechend die Verbindungen der folgenden Formeln:

CH₉CONH-CH-CH *· 11

C-N /

OUCONH-CH-CH ² I I

C-N // 0

Γ ,

jj^ff^^IT-Ci^ CH₂COOH

und

bzw.

CH₂NKCH₃

CH₂CONH-CH-CH CH

ir ι

'N-CH₂CH₂COOH

8098A2/0577

Claims (1)

1. M/18 253

   Patentansprüche

   γ. Verbindungen der Formel I:

   R-NH-CH-CH CH. C-N ^C-

   C-

   Il " 0

   worin η für 1 oder 2 steht und

   R die Bedeutungen

   CH₂NHR¹
   CHaCO-

   .rap ι

   oder

   CH₂CO-

   oder ^

   CH₂NHR'

   -CH₂CO-

   besitzt, worin

   R für Wasserstoff, Hydroxy oder Methoxy steht; R¹ Wasserstoff oder Methyl bedeutet; und

   2
   R für Wasserstoff oder eine herkömmliche, pharmazeutisch verträgliche leicht hydrolysierbare, Ester-bildende Gruppe steht;

   sowie die nicht-toxischen, pharmazeutisch verträglichen Salze davon.

   8 0 3 8 L? , η 5 7 7 ^{OR!G1NAL !WSPECTED}

   M/18 235 - -%--

   2. Die Pivaloyloxymethyl-, Acetoxymethyl-, Methoxymethyl-, Acetonyl-, Phenacyl-, p-Nitrobenzyl-, ß,ß,ß-Trichloräthyl-, 3-Phthalidyl- oder 5-Indanylester der Verbindungen gemäß Anspruch 1.

   3. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen gemäß den

   Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß man j eine Verbindung der Formel

   Y-M-CH CH CHp 0

   Il I Il

   C N_{x y} C-CH₂O-C-CH₃

   // ^XC'

   ο I

   COOH

   worin

   Y für Wasserstoff steht oder die oben für R angegebenen Bedeutungen besitzt,

   oder ein Salz oder einen leicht hydrolysierbaren Ester davon mit einer Verbindung der Formel

   worin

   η die Bedeutungen 1 oder 2 besitzt und Y für Wasserstoff steht,

   umsetzt und die sich ergebende Verbindung mit einem

   8 0 U 8 /* V / 0 5 7 7

   M/18 235

   Acylierungsmittel der Formel

   R¹ -X

   worxn

   X für ein Halogenid oder ein funktionelles Äquivalent

   davon steht und R die oben angegebenen Bedeutungen besitzt,

   umsetzt, und gewünschtenfalls die sich ergebende freie Säure, das Salz oder den leicht hydrolysierbaren Ester einer Verbindung der Formel I in den entsprechenden Ester oder das nicht-toxische, pharmazeutisch verträgliche Salz davon überführt, und gewünschtenfalls ein sich ergebendes Salz oder einen leicht hydrolysierbaren Ester einer Verbindung der Formel I in die entsprechende freie Säure der Formel I überführt.

   Verfahren gemäß Anspruch 3„ dadurch gekennzeichnet, daß eine sich ergebende freie Säure der Formel I in einen Ester, ausgewählt unter den Pivaloyloxymethyl-, Acetoxymethyl-, Methoxymethyl-, Acetonyl-,. Phenacyl-, p-Nitrobenzyl-, ß,ß,ß-Trichloräthyl-, 3-Phthalidyl- oder 5-Indanyloxy-Estern, überführt wird.

   5. Pharmazeutisches Mittel, das mindestens eine Verbindung gemäß den Ansprüchen 1 und 2 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger und/oder Zusätze enthält.

   8 0 H H U Ί I O h 7 7