FI60869B - Foerfarande foer framstaellning av nya terapeutiskt anvaendbara cefalosporiner - Google Patents

Description

......... Γ., .... KUULUTUSJULKAISU Λ n o (L Q

Wfc [B] <”>UTLAOGNINeSSIllUFT 60869 C (45) Patentti myönnetty 13 04 1002 latent oeddelat ^ ** ^ (51) Kv.lk?/lnt.CI.3 C 07 D 501/36 SUOM |_F I N LAN D (21) P»t*nttlh»k«mu« — P»tentM*öknlni 772860 (22) Hakemitpllvi — Ameknlnpdaf 28.09-77 ^ ^ (23) Alkupllvi—Glltlf hetsdag 28.09.77 (41) Tullut |ulklMk«l — Bllvlt offantlig 06.10.78

Patentti- ja rekisterihallitus .... ...._______. . .....

_ ' (44) Nihtlvlkslpanon ja kuuLJulkaltun pvm. —

Patent- och registerstyrelsen ' Anaökan utlagd och utl.«krlftan publkarad 31.12.8l (32)(33)(31) Pyydetty etuoikeus — Bagird prloritet 05.0l+. 77 USA (US) 781+885 (71) Bristol-ltyers Company, 3^*5 Park Avenue, New York, N.Y. 10022, USA(US) (72) Takayuki Naito, Kawasaki, Jun Okumura, Yokohama, Hajime Kamachi, Chiba, Seiji Iimura, Tokyo, Hideaki Hoshi, Chiba, Masahisa Oka, Yokohama,

Japani-Japan(JP) (7I+) Oy Kolster Ab (5I+) Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kefalosporiinien valmistamiseksi - Förfarande för framställning av nya terapeutiskt använd-bara cefalosporiner

Keksintö koskee menetelmää uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan c 1 ^ \ R-NH-CH—CH CH0

Il I 2 c —N ^>6—ch ε I | |

// (CH2)nCOOH I

COOH " 0 mukaisten kefalosporiinien ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, jossa kaavassa n on 1 tai 2 ja on /CH2NHR' CH NHR 1

/------^ ^ \ .CH2NHR' _ CH2NHR

R - ( _Vch2“- tai f j tai (i LC„2C0.

jossa R on vety tai hydroksi ja R1 on vety tai metyyli.

2 60869 Nämä uudet yhdisteet ovat erityisen käyttökelpoisia bakteeri-infektioiden hoidossa.

Kaavan I mukaisia kefalosporiineja ja niiden suoloja voidaan valmistaa siten, että saatetaan yhdiste, joka kaava on NH^CH-CjH CH2 ? n C — N /C-CH-O-C-CH, / \C '2 3 0' »

COOH

tai sen suola reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on

HS-L n. n-ich2) cooh tII

0 jossa n on 1 tai 2, ja käsitellään saatua yhdistettä asylointi-aineella, jonka kaava on

R1 - X IV

jossa X on halogeeni tai sen funktionaalinen ekvivalentti ja R merkitsee samaa kuin edellä, ja haluttaessa muutetaan saatu kaavan I mukainen happo farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

Kefalosporiinit ovat hyvin tunnettuja puolisynteettisiä bak-teerinvastaisia aineita, jotka on alunperin valmistettu esimerkiksi asyloimalla 7-aminokefalosporaanihapon (7-ACA) 7-aminoryhmä ja myöhemmin asyloimalla vastaavasti sen johdannainen, kuten muuttamalla sen substituentti 3-asemassa. Kefalosporiineja on laajasti kuvattu kirjallisuudessa (esim. Cephalosporins and Penicillins - Chemistry and Biology, toimittanut Edwin H. Flynn, Academic Press, New York, 1972, ja erityisesti sivut 554-569) ja patenttikirjallisuudessa, esimerkiksi US-patenteissa 3 687 948; 3 741 965; 3 743 644; 3 759 904; 3 759 905; 3 766 175; 3 766 906; 3 769 281; 3 769 801; 3 799 923; 3 812 116; 3 813 388; 3 814 754 ja 3 814 755.

Kirjallisuudesta tunnetaan myös 3-tioloituja kefalosporiineja joissa 7-substituenttina on 3 60869 a) (X-amino-<X-fenyyliasetamido, US 3 641 021 ; US 3 734 907; US 3 687 948; US 3 741 965; US 3 757 015; US 3 743 644, JA 71/24400 (Farmdoc 46374S), BE 776 222 (Farmdoc 38983%; GB 1 328 340, joka koskee erilaisia substituentteja bentseeni renkaassa), BE 772 592 (Farmdoc 19696T; US 3 687 948; 3 734 907 ja 3 757 012), DE 2 202 274 (Farmdoc 50428T) vastaten US 3 759 904, NL 7205644 (Farmdoc 76309T; US 3 757 014) ; ja b) o-, m- tai p-aminoetoksifenyyliasetamido, esim. NL 72/13968 (Farmdoc 24740U) vastaten US 3 759 905 ja c) o-aminometyylifenyyliasetamido esim. US 3 766 176 ja 3 766 175 (jotka tarkastelevat myös vanhempaa patenttikirjallisuut-ta, joka koskee substituoituja 7-fenyyliasetamidokefalosporiinihap-poja), d) N-(fenyyliasetimidoyyli)aminoasetamido, esim. US 3 692 779; ja e) X-amino-X(1,4-sykloheksadienyyli)asetamido, esim. BE 776 222 (Farmdoc 38983%; GB 1 328 340) .

Muita vastaavia katsauksia on patenteissa US 3 692 779 (BE 771 189; Farmdoc 12819T), JA 72/05550 (Farmdoc 12921T), Japani 72/05551 (Farmdoc 12922T), US 3 719 673 (BE 759 570;

Farmdoc 39819S), BE 7/93 311 (Farmdoc 39702U) ja BE 793 191 (Farmdoc 39684U).

Lisäksi tunnetaan 3-tioloituja kefalosporiineja, joissa 7-substituentti on 7-mandelamino (7-X-hydroksifenyyliasetamido), US 3 641 021, FR 74 10112, US 3 796 801, GB 1 328 340 (Farmdoc 38983T), US 3 701 775, JA 48-44293 (Farmdoc 55334U) ja Hoover et ai., J. Med. Chem. 17(1), 34-41 (1974) ja Wick et ai., Antimicrobial Ag.

Chemo., 1(3), 221-234 (1972).

US-patenttijulkaisussa 3 819 623 (ja esimerkiksi myös patenttijulkaisuissa GB 1 295 841 ja DE 1 953 861) käsitellään erityisesti 2-merkapto-1,3,4-tiadiatsoli-5-etikkahapon valmistamista ja sen muuttamista 7-(lH-tetratsoli-1-yyliasetamido)-3-(5-karboksimetyyli-1,3,4-tiadiatsoli-2-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihapoksi, jota käsittelee myös DE hakemusjulkaisu 2 262 262.

US patenttijulkaisut 3 766 175 ja 3 898 217 koskevat yhdisteitä, joiden kaava on 4 60869 CH_NH_ I Δ Δ M ° /s \ / Λ- CH0-C-NH-CH-CH CH2

\ // 2 'I I

\-< 0= C-^C-CH2-S-R

COOH

jossa R on T—»-.«s j—s ΓΊ NXN^N - tal tj ^

H

ja niiden farmaseuttisesti hyväKsyttäviä suoloja, ja yhdisteitä, joiden kaava on

R ° S

(CH2) n C-C-NH--^ ^ ^—^1 or-N\ xJ—Ch2r1 CH9NH9 co2h jossa R on -H tai alempi alkyyli R^· on -H, (alempi)alkanoyylioksi, tai ryhmä -jr\ p- pii

^, "S-\cP“CH3 tai "S

S I

ch3 ja n on kokonaisluku 4-7, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloj a.

US patenttijulkaisut 3 883 520 ja 3 931 160 ja Farmdoc Abstract 22850W viittaavat 3-heterorengas-metyylikefalosporiineihin, jotka sisältävät erilaisia substituentteja (mukaanlukien karboksyylin) erilaisissa heterorenkaissa, mutta nämä viittaukset ovat täysin yleisiä luonteeltaan, eivätkä sisällä fysikaalisia vakioita, saantoja, synteesimenetelmiä tai sen kaltaisia, eivätkä edes nimeä yhtään sellaista yhdistettä, joka sisältäisi karboksyyli-substituentin.

60869 US patentissa 3 928 336 on kuvattu vanhempaa kefalosporiini-tutkimusta.

US patenttijulkaisut 3 907 786 ja 3 946 000 käsittelevät kefalosporiineja, jotka sisältävät erilaisia kondensoituja rengas-bisyklisiä tioleja.

Farmdoc:in lyhennelmä 18830X käsittää yhdisteen, jolla on kaava R3

S

R1NH -4 - ' N N

i II " /i-N CH2-S-li j

O N

I I

COOH '

(CH2)n-COOH

i 3 jossa R = asyyli tai H, R = H tai metoksi ja n = 1-9.

Läheistä kemiallista rakennetta olevia yhdisteitä on lisäksi kuvattu FI patenttihakemuksissa 2560/74, 752 434 ja 761 035.

Sopivia kaavan I mukaisten yhdisteiden suoloja ovat myrkyttömät karbonihapposuolat, mukaanlukien myrkyttömät metallisuolat kuten natrium-, kalium-, kalsium- ja alumiini-, ammoniumsuolan ja substi-tuoidut ammoniumsuolat, esim. sellaiset myrkyttömät amiinit kuten trialkyyliamiinit mukaanlukien trietyyliamiinin, prokaiinin, di-bentsyyliamiinin, N-bentsyyli-betafenetyyliamiinin, 1-efenamiinin, N,N1-dibentsyylietyleenidiamiinin, dehydroabietyyliamiinin, N,N'-bis-dehydroabietyylietyleenidiamiinin, N-(alempi)-alkyylipiperi-diinin, esim. N-etyylipiperidiinin, ja muut amiinit, joita on käytetty muodostamaan suoloja bentsyylipenisilliinin kanssa; ja niiden myrkyttömät happoadditiosuolat (so., amiinisuolat) mukaanlukien mi-neraalihappoadditiosuolat, kuten hydrokloridi, hydrobromidi, hydro-jodidi, sulfaatti, sulfamaatti ja fosfaatti ja orgaaniset happoadditiosuolat kuten melaatti, asetaatti, sitraatti, oksalaatti, sukki-naatti, bentsoaatti, tartraatti, fumaraatti, malaatti, mandelaatti, askorbaatti ja sen kaltaiset.

Kaavan I mukaisten kefalosporiinien valmistamiseksi käytetyt lähtöaineet voidaan syntetisoida tunnetuin menetelmin esimerkiksi edellä mainituissa patenteissa ja julkaisuissa kuvatulla tavalla.

Uusien yhdisteiden bakteerinvastaiset ominaisuudet ilmenevät taulukoista 1-4.

6 60869

Nefromyrkyllisyys

Alustava nefromyrkyllisyys-tutkimus suoritettiin antamalla testiyhdistettä kahden kaniinin ryhmälle 100 mg/kg suonensisäisesti BB-S469:llä ja BB-S479:llä saadut tulokset osoittivat, että niillä saattaa olla hiukan nefromyrkyllistä vaikutusta.

Aktiivisuus in vitro MIC:t määrättiin sarjalaimennus-menetelmällä käyttäen Mueller-Hinton agaria 51 gram-positiivista ja 96 gram-negatiivista bakteeria vastaan. 147 testiorganismia luokiteltiin 16 ryhmään lajien ja anti-bioottivastustuskykytyyppien perusteella, 5 ryhmää gram-positiivi-sille bakteereille ja 11 ryhmää gram-negatiivisille bakteereille. Aktiivisuus in vitro on esitetty MIC:n geometrisen keskiarvon avulla. BB-S472 ja BB-S479 olivat kokonaisuudessa aktiivisempia kuin niiden ei-N-metyloidut analogit, BB-S483 ja BB-S469 vastaavasti. BB-S479 oli edullisempi kuin BB-S472 joihinkin gram-negatiivisiin bakteereihin. Verrattaessa kefamandoliin BB-S479 oli aktiivisempi useimpien testiorganismien suhteen, paitsi Providencia-lajien ja Staphylo-coccien suhteen.

7 60869 n

* I

ίο ^ r? oo >ι co no in ο 'ί n n r- σι Γ' «y oo r-

I «h «h *► ·» » 4-J

ub <— ro OOOOO <J^ <— r- o o cn <- o o o 0}

PQ ^ CN 00 S

- - —--------- -H

4J

1 -H

Eri <ί ^ -H

(3 o «— ^ ^ o m n r- o Mdin o t~- ν' n >i

K ^ ^ K V K *. ^ ^ ^ ^ ^ ^ ·» ^*J

me o o oo o o o n t— -noo n o cn n· o i 2 TO ________n_______ n

,_* -H

in n

n · oo n* Q

00 B n»— oon n cn r" Ν' t-t— ct> co -H — — ^ ^ s ^ *- *· — 4-1 cow o r— ooooo «— r— n o o n i- r- o to

^10) N (N i— 00 H

| * _________________ s

• *H

Oi σι T1 O ΰ r- · Ν' Pn H S n· g ησι oocNioini—incNcocNio n· >i 4J — en -R «i «i » 4-1

-H | CO O O in O O O CN O (NOO s· s o m o <U

p> * ffl CL) n n E

.5 g --—----—---------------- I

to Q oo n 44

2 > r- · M

4-> h Ν’ E ’S’ n TO

2 TO CO -R 'S’ O O O CN 00 VO Ν’ n n oo uo n 4«

V* -H ICO -. *, s - - — - - - - ·- I

CR y (Q Q) O r- OOOO O O (NOO Γ'' N* O O O i- TO en ® n i— n· “ > <u l ^ S ___________________ _________- -· n

^ I

• C cn cn es

x- δ r~ · in n Q

C 'S’ E «s' o o o cn ncsnnnoooo n< T)

O -R co-R *·· ·.*,*. - ' ' ' ' ·* ' - -H

y t-ι ien o o ooooo in i— noo oof oo o E

y 4-1 ¢) m m r- o co 0 1! CQ w cn 4-1 1 I -------------- f 3i l s a.- I -a

· LO CQ C <—I

^ cn o o co o r-* o lo (n σ> oj >1 co *H ·* v *. ·» s “ ^ v ^ »> «· » 6¾1

IW O T— OOOO i“ r- ^J*00 <— tJ< O O O *H C

cq oj η T- τ-η TOTO

a ~ *-

-- ------------------------ "S’ I—I

:co o >i §| ^ s 'S’ n m ο σ n r~ n vo n* m m cm id oo ^ ^ i*ä - ·η “ ^ I 4-1 ^ 4-1 M Q _ (0

I TO E E cO

r-H T T .— I ίθ·3^ rH Λ . - + iH *· O U Ui :<0 -H « -Η ·Η «— + + CO (0 C (N -P 3 3w I till -H MH Q fl o 2 -H C :m (0 TO -Η -Η -H CO · rH +3 ·· e J5 RR -R 2 2 gHHH to μ. a>~.

0)3.—- ή Φ2 q qQQQTOEo.wcntjiTH 3¾ c q •η λ Si+ i—i ίβΉ -hr H-R'a'a'aR κρο2 g ή m J 3 r-ι (D SQqce-RTOSrSfSxjcp ιΓ i a ή oqcx! ι-c -P Jjq-h-R-Rr-h q ®w I q^jidn·

•g Λ »«8 8·---&8^8S J

1 SSlsl^Ssss-Sal^gggsl^gd^l 50¾

8 ssassfca88S8i8^aasi^ii88iB

Φ 4JOi-P(UOOOH-iOX) is C4J

« ww cn endww iS^iS^&Ä^lxäÖcnäBco * * 8 60869

Taulukko 2 BB-S493:n bakteerinvastainen aktiivisuus in vitro verrattuna BB-S479:ään ja kefamandoliin (määritetty Steerin agar laimennus-menetelmällä Mueller-Hinton Agar-levyllä) MIC (rocg/ml)

Organismi BB-S493 BB-S479 Kefamandoli S. aureus Smith A9537 0,4 0,4 0,1 S. aureus A9497 0,2 0,1 0,05 S. aureus BX-1633 A9606 0,4 0,4 0,2

St. faecalis A9536 100 100 50 E. coli NIHJ 0,1 0,05 0,025 E. coli ATCC 8739 0,2 0,05 0,05 E. coli Juhl A15119 0,2 0,1 0,4 E. coli BX-1373 0,4 0,2 0,4 E. coli A15810 0,2 0,1 0,2 E. coli A9660 0,1 0,05 0,1 E. coli A15147 6,3 3,1 3,1

Kl. pneumoniae A9678 0,4 0,4 1,6

Kl. pneumoniae A9977 0,2 0,1 0,4

Kl. pneumoniae A15130 0,2 0,1 0,4

Kl. pneumoniae A9867 0,2 0,1 0,8

Pr. vulgaris A9436 0,4 0,1 0,2

Pr. vulgaris A9699 6,3 0,8 25

Pr. mirabilis A9554 0,2 0,1 0,8

Pr. mirabilis A9900 0,2 0,1 0,8

Pr. morganii A9553 >100 >100 >100

Pr. morganii A20031 0,4 0,1 0,8

Pr. rettgeri A15167 0,1 0,1 0,1

Ps. aeruginosa A9930 >100 >100 >100

Ps. aeruginosa A9843 >100 >100 >100

Shig. dysenteriae 0,05 0,025 0,2

Shig. flexneri A9684 25 12,5 3,1

Shig. sonnei A9516 0,05 0,025 0,05

Serr. marcescens A20019 100 25 50

Enterob. cloacae A9656 6,3 1,6 3,1

Sal. enteritidis A9531 0,1 0,05 0,1

Sal. typhosa A9498 0,1 0,05 0,1 B. anthracis A9504 0,0125 0,025 0,2 9 60869 co ro m tr vo oo m co σι 00 ininm^vo^in^On r-~ *··*·»»>«.»»* CO ooooooooo

l-Q

PQ

•H I—I 0 T) C oo tr m (0 (ΡΓ'-ιΟΟΟΟΟσιΓ'ΟΟΓνΙΟΟ e ..........

ifl oooooo<—i-rsjo M-l — ω • « λ; CO 00 cp en r* - (N <n •h co M i o o •h m

H ^ PQ

K CT> “ λ; \ oo O E oo tr uo > Cp tr oo i— •h £ cd > — I o o

PQ

e o Cd

•H LO

Q

CO Λ σι 3 — I" 3 tr co cn en m cn CO Cd ^ r- CN T-T-T- •h i - - - ' ' ^ > cd o o o o o o •h m Ή

P

Λί 00 < oo oo o o • cd oo i o o m

O PQ

M

M

3 CN

r-c Γ CN CP

3 tr i- T- ro cd -

En I o O

PQ PQ

CP

co (Tv co σ\ oc tr in tr t— r- (N CN T— (N r

Cd ·**.*.· ^ ^

1 o o o o o o o PQ

PQ

A

-U

H

e ή

Cd XJ

d •H CO »3 e d

CO Q) -H

Ή M i—I

Cd o ns co υ

CP

u o cd | wi 10 60869 BB-S525:n bakteerinvastainen aktiivisuus in vitro verrattuna BB-S 479:ään ja kefamandollin (määritetty Steerin agar-laimennusmenetel-mällä Mueller-Hinton agar-levyllä) MIC (mcg/ml

Organismi BB-S525 BB-S479 Kefamandoli S. aureus Smith 0,4 0,4 0,2 S. aureus 0,2 0,2 0,05 S. aureus BX-1633 0,8 0,8 0,2

St. Faecalis >100 >100 100 E. coli NIHJ 0,2 0,1 0,1 E. coli ATCC 87-39 6,3 3,1 6,3 E. coli Juhl 0,4 0,2 0,4 E. coli BX-1373 0,4 0,2 0,2 E. coli 0,2 0,1 0,1 E. coli 0,2 0,05 0,05 E. coli 6,3 3,1 1,6

Kl. pneumoniae 1,6 0,8 3,1

Kl. pneumoniae 0,2 0,1 0,2

Kl. pneumoniae 0,2 0,2 0,8

Kl. pneumoniae 0,2 0,2 0,8

Pr. vulgaris 0,2 0,2 0,2

Pr. vulgaris 3,1 0,8 50

Pr. mirabilis 0,4 0,1 0,4

Pr. mirabilis 0,2 0,1 0,2

Pr. morganii >100 >100 3,1

Pr. morganii 0,2 0,2 0,8

Pr. rettgeri 0,8 0,8 0,1

Ps. aeruginosa >100 >100 >100

Ps. aeruginosa >100 >100 >100

Shig. dysenteriae 0,1 0,1 0,1

Shig. flexneri 12,5 12,5 3,1

Shig. sonnei 0,1 0,1 0,2

Serr. marcescens 25 12,5 50

Enterob. cloacae 3,1 3,1 1,6

Sal. enteritidis 0,2 0,1 0,1

Sal. typhosa 0,2 0,1 0,1 B. anthracis 0,2 0,2 0,05 11 60869

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä. Kaikki lämpötilat jovat Celsiusasteissa. 7-aminokefalosporaanihappo lyhennetään 7-ACA; -ACA- on aine, jonka rakenne on -NH-CH CH CH, i T 12 / -Vc ^C-CH2- COOH 5 ja siten 7-ACA voi olla merkittynä H-ACA-O-C-CH^.

Metyyli-isobutyyliketonia merkitään MIBK. "Skellysolve B" on petro-leumeetterifraktio, kp. 60-68°C, sisältäen pääasiassa n-heksaania.

LA-1 hartsi on sekundaaristen amiinien seos, jossa kullakin amiinilla on kaava R1 l 2

CH3(CH2)10CH2NHC - RZ

i3 12 3 jossa kukin R , R ja R on monovalenttinen alifaattinen hiilivety- 12 3 radikaali ja jossa R , R ja R sisältävät kokonaisuudessaan 11-14 hiiliatomia. Tämä erityinen sekundaaristen amiinien seos, johon viitataan näissä esimerkeissä termillä "Liquid Amine Mixture No. II", on kirkas meripihkaneste, jolla on seuraavat fysikaaliset ominaisuudet: viskositeetti 25°C:ssa 70 cpd., ominaispaino 20°C:ssa 0,826; taiteindeksi 25°C:ssa 1,4554; tislausalue 10 mm:ssä, 170°C:seen asti - 0,5 %, 170-220°C. - 3 %, 220-230°C. - 90 % ja yli 230°C. - 6,5 %.

lR-12Q:aa nimitetään myös Amberlite IR-120:ksi ja se on vahva ioninvaihtohartsi, joka sisältää sulfonihapporadikaaleja. Amberlite IR-120 on kaupallisesti saatavissa oleva polystyreenisulfonihappo-tyyppiä oleva kationinvaihtohartsi; se on siten sulfonoitu polysty-reenihartsi, joka on ristikyteytynyt divinyylibentseenin kanssa, ja jota saadaan menetelmällä, joka on esitetty julkaisussa Kunin, Ion Exchange Resing, 2nd. toimitettu (1958), John Wiley and Sons, Inc. Katso esimerkiksi erityisesti sivuja 84 ja 87.

Amberlite IRC-50 on kaupallisesti saatava kationinvaihtohartsi, joka on karboksyyli-tyyppiä; se on metakryylihapon ja divinyylibentseenin kopolymeeri.

60869

Disykloheksyylikarbodi-imidi lyhennetään DCC, tetrahydro-furaani THF, ohutkerroskromatografia TLC, p-tolueenisulfonyyli Ts ja metanoli MeOH.

Annettaessa seuraavia instrumenttiarvoja, infrapunainen nu kirjoitetaan , ultravioletti lambda kirjoitetaan 7\ , molaarinen absorboituvuus epsilon (£), ydinmagneettinen resonanssi (nmr) delta £> ja tau T (6 = 10- T) .

Lähtöaineiden valmistus

Esimerkki I

6-kloori-2, 3-dihydro-s-triatsolo//4,3-b7pyridatsiini-3-onia /P. Francavilla ja F. lauria, J. Het. Chem., 8, 415 (19717 (1, 1,00 g, 5,9 mmoolia) kuivassa DMFsssa (30 ml), lisättiin natrium-hydridiä (50 % parafiinissa, 0,3 g, 6,3 mmoolia) samalla sekoittaen, jolloin muodostui keltaisia kiteitä. Seokseen lisättiin etyylikloori-asetaattia (1,4 ml, 13 mmoolia) ja seosta kuumennettiin 90°C:ssa 8 tuntia samalla sekoittaen. Jäähdyttämisen jälkeen reaktioseos kaadettiin veteen (50 ml) ja uutettiin tolueenilla (5 x 40 ml). Orgaaniset uutteet yhdistettiin, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaa-tilla ja haihdutettiin alennetussa paineessa. Jäännös kiteytettin bentseeni-n-heksaanilla, jolloin saatiin keltaisia neulasia, 6-kloori- 2,3-dihydro-2-etoksikarbonyylimetyyli-s-triatsolo/4,3-b7pyridatsiini-3-onia (1,16 g, 77 %), sp. 114-115°C (kirj. 110°C).

lr: ν'“Js. 1735’ 1710 c“"1 uv: ^ maks. 231 nm ( £'26000> nmr.^CDCl^ 7^53 J=10 Hz, pyridatsiini-H) , 6,98 ppm (1H, d, J=10 Hz, pyridatsiini-H), 4,80 (2H, s, -CH2CO), 4,27 (2H, q, J=7,5 Hz, CH2CH3), 1,29 (3H, t, J=7,5 Hz, CH2CH3).

Anal, laskettu yhdisteelle CgHgN^03Cl: C, 42,12; H, 3,53; N, 21,83; Cl, 13,81. Löydetty: C, 41,54, 41,46; H, 3,22, 3,49; N, 21,51, 21,53; Cl, 13,88, 13,99.

Esimerkki II

Liuokseen, jossa oli 6-kloori-2,3-dihydro-2-etoksikarbonyyli-metyyli-s-triatsoloT.4,3-b7pyridatsiini-3-onia (2, 30 g, 0,12 moolia) etanolissa (900 ml) lisättiin NaSH.2H20:a (70 % puhdasta, 45,9 g, O, 36 moolia) ja seosta paluujäähdytettiin 0,5 tuntia. Reaktioseos 13 60869 haihdutettiin alennetussa paineessa. Jäännös liuotettiin veteen (200 ml) ja liuoksen pH säädettiin arvoon 2 lisäämällä väkevää HC1:ää. Saostuma, 2-karboksimetyyli-2,3-dihydro-6-merkapto-s-tri- atsolo^4,3-b7pyridatsiini-3-oni, kerättiin talteen suodattamalla ja pestiin vedellä. Saanto 18,3 g. (69 %).

ir: \/KBr 2900, 2450, 1750, 1660 cm"1 maks.

1%NaHCO,aq uv: ^ maks 260 nm 1950°)' 313 nm (£/7000) DMSO-dg nmr:<S 7,88 (1H, d, J=10 Hz, pyridatsiini-H) , 7,45 (1H, d, J=10 Hz, pyridatsiini-H), 4,72 (2H, s, CH2CO).

Anal, laskettu yhdisteelle C^H^N^O^S: C, 37,17; H, 2,67; N, 24,77; S, 14,17. Löydetty: C, 37,35, 37,23; H, 2,26, 2,28; N, 23,58, 23,69; S, 14,32.

Esimerkki III

7-aminokefalosporaanihapon suspensioon (8,79 g, 32,2 mmoolia) O, 1 M fosfaatti puskurissa (pH 7, 149 ml) lisättiin NaHCO^ia (8,14 g, 97,0 mmoolia) ja esimerkissä II saatua tiolia (7,30 g, 32,2 moolia) samalla sekoittaen. Seosta lämmitettiin 80°C:ssa 0,5 tuntia ^-virrassa. Seosta käsiteltiin aktiivihiilellä ja pH sovitettiin arvoon 3 väkevällä HClrllä. Saatu saostuma kerättiin suodattamalla ja pesiin vedellä, jolloin saatiin 7,59 g (54 %) 7-amino- 3- (2-karboksimetyyli-2,3-dihydro-s-triatsolo£4,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappoa.

ir: \?KBr 1800, 1720, 1600, 1540, 1470 cm-1 maks. puskuri uv:?) maks (pH 7) 252 nm (£, 19500), 298 nm ( £ , 8400) - D20+K2C03 nmr:£ 7,56 (1H, d, J=9 Hz, pyridatsiini-H), 7.05 (1H, d, 2-H Hz, pyridatsiini-H), 5,45 (1H, d, J=5 Hz), 6-H), 5.05 (1H, d, 5 Hz, 7-H) , 4,43 (1H, d, J=14 Hz, 3-CH2) , 4,04 (1H, d, J=14 Hz, 3-CH2), 3,88 (1H, d, J=18 Hz, 2-H), 3,45 (1H, d, J=18 Hz, 2-H) .

Esimerkki IV

Liuokseen, jossa on 6-kloori-2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3-b7~ pyridatsiini-3-onia /P. Francabilla ja F. Lauria, J. Het. Chem. 8, 415 (1971£7 (17 g, 0,1 moolia) kuivassa DMFtssä (300 ml) lisättiin 14 60869 kalium-tert.-butoksidia (0,5 g, 4,5 mmoolia) samalla sekoittaen. Akrylonitriiliä (6,6 g, 0,12 moolia) kuivassa DMFtssä (10 ml) lisättiin seokseen. Seosta sekoitettiin 100-110°C:ssa 24 tuntia, jonka jälkeen kaadettiin veteen (700 ml) ja uutettiin etyyliasetaatilla (5 x 400 ml). Orgaaniset uutteet yhdistettiin, kuivattiin Na2S04:llä ja haihdutettiin. Jäännös kiteytettiin etyyliasetaatista, jolloin saatiin 6-kloori-2-(2-syanoetyyli)-2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3-b/-pyridatsiini-3-onin vaalean keltaisia neulasia (2,5 g, 11 %).

Sp. 166-168°C.

ir:KBr 2230, 1720, 1550, 1500 cm"1 maks.

uv:^ dioksaani 373 nm ( £ f 2000) maks.

nmr:5DMS0_d6 3,03 (2H, 5, J=6,0 Hz, CH2), 4,21 (2H, t, ppm J=6,0 Hz, CH2) , 7,23 (1H, d, J=10,0 Hz, pyridatsiini-H) , 7,93 (1H, d, J=10,0 Hz, pyridatsiini-H)

Anal, laskettu yhdisteelle CgH^N^OCl: C, 42,97; h, 2,70; N, 31,32; Cl, 15,86. Löydetty: C, 42,73, 2,56; H, 2,57, 2,50; N, 31,36, 31,68; Cl, 15,96, 15,81.

Esimerkki V

Liuosta, jossa on 6-kloori-2-(2-syanoetyyli)-2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3-b7pyridatsiini-3-onia (724 mg) 6N-HCl:ssä (15 ml) paluujäähdytettiin 6 tuntia. Reaktioseos uutettiin etyyliasetaatilla (10 x 20 ml). Yhdistetyt uutteet pestiin kyllästetyllä vesipitoisella natriumkloridilla (50 ml), kuivattiin Na2S04:llä ja haihdutettiin, jolloin saatiin vaalean keltaista, kiinteää 2-(2-karboksietyyli)-6-kloori-2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3-fe7pyridatsiini-3-onia (567 mg, 72 %). Sp. >170°C (sublimoituminen).

ir: V"KBr 3400-2400, 1730, 1710, 1540 cm-1 maks.

uv: ~/\ dioksaani 377 nm ( £ , ^oo) maks.

D20+NaHC03 nmr:£ 2,70 (2H, t, J = 7,0 Hz, CH2) , 4,24 ppm (2H, t, J= 7,0 Hz, CH2), 7,17 (1H, d, J=10,0 Hz, pyridatsiini-H), 7,70 (1H, d, J=10,0 Hz, pyridatsiini-H).

15 60869

Anal- laskettu yhdisteelle CgH^N^OgCl: C, 39,60; H, 2,91; N, 23,09; Cl, 14,61. Löydetty: C, 39,62, 39,48; H, 2,97, 2,67; N, 23,05, 22,70; Cl, 93, 14,12.

Esimerkki VI

Seosta, jossa on 2-(2-karboksietyyli)-6-kloori-2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3-h7pyridatsiini-3-onia (567 mg, 2,34 mmoolia) ja 70 % natriumhydrosulfididihydraattia (924 mg, 7,02 mmoolia) vedessä (10 ml) sekoitettiin huoneen lämpötilassa kaksi tuntia. Reaktioseos säädettiin vastaavasti pH arvoon 1 väkevällä HClsllä, pH arvoon 10 NaOH:lla ja sen jälkeen pH arvoon 1 väkevällä HClrllä. Saatu 2-(2-karboksi-etyyli)-2,3-dihydro-6-merkapto-s-triatsolo/4,3-h7pyridatsiini-3-oni saostuma kerättiin suodattamalla ja pestiin vedellä. Saanto: 418 mg (74 %). Sp. 174-176°C.

/ KBr 1 ir: V maks 3600“2600, 2440, 1730, 1720 (sh) cm'1 uv: 7) pH 7 Puskuri 262 nm ( £ , 17000), 318 nm ( £ ,600) maks.

nmr:^ DMS0_d6 2,73 (2H, t, J=7,0 Hz, CH2), 4,07 (2H, t, J=7,0 Hz, CH2??m7,30 (1H, d, J=10,0 Hz, pyridatsiini-H), 7,74 (1H, d, J=10,0 Hz, pyridatsiini-H).

Anal, laskettu yhdisteelle C8H8N4°3S: C, 40,00; H, 3,36; N, 23,32; S, 13,35. Löydetty: C, 39,08, 39,06; H, 3,12, 3,20; N, 22,65, 22,70; S, 14,23, 14,29.

Esimerkki VII

Seosta, jossa on 7-ACA:aa (405 mg, 1,49 mmoolia), tioli-2-(2-karboksietyyli) -2, 3-dihydro-6-merkapto-s-triatsolo7.4,3-b7pyrid-atsiini-3-onia (357 mg, 1,49 mmoolia) ja NaHCO^a (375 mg, 4,47 moolia) 0,1 M fosfaatti-puskurissa (pH 7, 8 ml), sekoitettiin 80°C:ssa 30 minuuttia. Reaktioseos jäähdytettiin ja suodatettiin liukenemattomien aineiden poistamiseksi. Suodos säädettiin pH arvoon 1-2 väkevällä HCl:llä. Saatu 7-amino-3-i/2-(2-karboksietyyli)-2,3-dihydro-s-triatsolo/_4,3-b7pyr idatsiini-3-oni-6-yy lit iometyy 117-3-kefem-4-karboksyylihapposasotuma kerättiin suodattamalla ja pestiin vedellä. Saanto: 519 mg (77 %).

16 60869 KBr ir: \^maks 3600-2200, 1800, 1725, 1620, 1550, 1480 cm UV: ^ maks PUSkUri 253 nm ( £ ,20000), 298 nm (f ,10000) D-O+K-CO- nmr: S 2,20 (2H, t, J=7,0 Hz, CH2), 3,40 (1H, d, J= 17,5 Hz, 3,85 (1H, d, J=17,5 Hz, 2-H) , 4,00-4,50 (4H, m, 3-CH2 ja N-CH2-), 5,01 (1H, d, J=4,0 Hz, 6-H), 5,40 (1H, d, J=4,0 Hz, 7-H), 6,94 (1H, d, J=10,0 Hz, pyridatsiini-H), 7,44 {1H, d, J=10,0 Hz, pyridatsiini-H).

Anal, laskettu yhdisteelle C.j gH.j gNgOgS2.3/lH20: C, 40,09, H, 3,99; N, 17,52; S, 13,37. Löydetty: C, 40,06, 40,12; H, 3,33, 3,34; N, 16,96, 16,98; S, 13,87, 13,98.

7-ACA viittaa 7-aminokefalosporaanihappoon ja DMF dimetyyli-formamidiin.

Esimerkki 1 1-/0-(aminometyyli)fenyyliasetamidq7-3-(2-karboksimetyyli- 2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3-b/pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo (BB-S469) CH2NH2 , -CH.CCK.-,

\^-CH2"S^/N\Jj-CH2COOH

C02H o a) o-(N-butoksikarbonyyliaminometyyli)-fenyylietikkahapon (13g., 40 mmoolia) ja 2,4-dinitrofenolin (9,02 g, 49 mmoolia) seokseen kuivassa etyyliasetaatissa (123 ml) lisättiin disykloheksyyli-karbodi-imidiä (DCC) (10,1 g, 49 mmoolia) jäähdyttäen vedellä (5-15°C), ja seosta sekoitettiin 30 minuuttia samassa lämpötilassa ja sen jälkeen 40 minuuttia huoneen lämpötilassa. Saatu saostuma suodatettiin ja suodon haihdutettiin, jolloin saatiin 23,9 g aktiivista 2,4-dinitrofenyyli-o-(N-butoksikarbonyyliaminometyyli)fenyyli-asetaattia, jota käytettiin seuraavassa asylointireaktiossa ilman lisäpuhdistamista.

ir: VKBf 1775, 1700, 1600, 1530 cm-1 ’ maks. ' ' ' 60869 b) Kylmään seokseen (0°C), jossa oli esimerkissä III saatua (4,38 g, 10 mmoolia), Et^Nrää (4,5 ml, 30 mmoolia), CHjCNrää (20 ml) ja vettä (20 ml), lisättiin liuosta, jossa oli 2,4-dinitrofenyyli-o-(N-butoksikarbonyyliaminometyyli)fenyyliasetaattia (4,79 g) THF:ssä (tetrahydrofuraanissa) (20 ml). Sen jälkeen, kun seosta oli sekoitettu huoneen lämpötilassa yli yön, THF ja CH^CN poistettiin reaktioseoksesta alennetussa paineessa ja jäljelle jääneen vesipitoisen liuoksen pH säädettiin arvoon 2 laimealla HClrllä ja uutettiin etyyliasetaatilla (10 x 30 ml). Orgaaniset uutteet kuivattiin natriumsulfaatilla ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoitiin sili-kageelikolonnilla (60 g) ja eluoitiin CHCl-^lla ja 3 % MeOH-CHCl^:11a vastaavasti, jolloin saatiin 2,40 g. (37 %) 7-/o-(N-butoksikarbon-yyliaminometyyli)fenyyliasetamido7-3-(2-karboksimetyyli-2,3-dihydro-s-triatsolo/_4,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli) -3-kefem-4-karbonihappoa, sp. >161°C. (haj.).

ir: Ϋ KBr 1780, 1720 cm"1 maks.

uv: Λ PH 7 puskuri 252 nm ( £1 ,19800) 298 nm ( ,8900) maks.

dmso+d2o nmr:/S 7,67 (1H, d, J=9,0 Hz, pyridatsiini-H) , ppm 7,10 (4H, s, fenyyli-H), 7,05 (1H, d, J=9,0 Hz, pyridatsiini-H), 5,66 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5-07 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H) , 4,71 (2H, s, N-CH2-CO), 4,4-4,0 (4H, m, 3-CH2 & CHj-N), 3,8-3,5 (4H, m, 2-H & CH2CO), 1,42 (9H, s, t-butyyli-H).

Anal, laskettu yhdisteelle C^H^^N^OyS2.2H20: C, 49,62, H, 5,20; N, 14,46; S, 9,46. Löydetty: C, 49,97, 49,95; H, 4,79, 4,62; N, 14,00, 13,84; S, 9,37, 9,32.

c) Trifluorietikkahappoa (3,4 ml) lisättiin kohdassa b) saatuun yhdisteeseen (2,33 g) 0°C:ssa ja seosta sekoitettiin 15 minuuttia huoneen lämpötilassa. Seokseen lisättiin kuivaa eetteriä (100 ml) ja saostuma kerättiin suodattamalla ja pestiin kuivalla eetterillä (2 x 50 ml). Kiinteä aine liuotettiin CH^CN^ (100 ml) ja veden (14 ml) seokseen ja liuoksen pH säädettiin arvoon 4-5 väkevällä NH4OH:lla, jolloin saatiin saostuma, joka kerättiin suodattamalla ja pestiin CH2CN:lla (2 x 50 ml), jolloin saatiin 1,75 g (82 %) 7~7p-(aminometyyli)fenyyliasetamido/-3-(2-karboksimetyyli-2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitometyyli)-3-kefem-4-karbonihappoa (BB-S469) ammoniumsuolana. Sp. >160°C. (haj.).

18 60869 ir: Y KBr 1765, 1710, 1640, 1590cm-1 maks.

uv: pH 7 Puskuri 252 nm ( £1 , 23900) 298 nm ( £ , 10900) maks .

Anal, laskettu yhdisteelle C24H22N707S2.NH^,h20: C, 46,51; H, 3,96; N, 18,08; S, 10,35. Löydetty: C, 46,52, 46,26; H, 4,15, 4,19; N, 17,60, 17,48; S, 10,89, 1041.

d) Suspensioon, jossa on kohdassa c) saatua yhdistettä (1,58 g) 50 % asetonivedessä (30 ml), lisättiin 10 % liuosta pH:n säätämiseksi arvoon 7,7. Asetonia lisättiin ja saostuma kerättiin suodattamalla ja pestiin asetonilla, jolloin saatiin 1,38 g (87 %) yhdisteen BB-S469 mononatriumsuolaa, sp. Z170°C (haj.).

.KBr - ir: V maks 1765, 1710, 1640, 1600, 1540, 1485 cm 1 pH 7 puskuri uv: ?\ , 252 nm ( £_ , 20600), 298 nm ( £ ,9200) max. s · d2o+k_co, nmr:£> 7,52 (1H, d, J=9 Hz, pyridatsiini-H) , ppm 7,27 (4H, s, fenyyli-H), 7,03 (1H, d, J=9 Hz, pyridatsiini-H), 5,62 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H) , 5,07 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H)

Anal, laskettu yhdisteelle C24H22N707S2Na.2H20: C, 44,79; H, 4,07; N, 15,23; S, 9,96. Löydetty: C, 44,44, 44,95; H, 3,68, 3,90; N, 16,50, 16,67; S, 10,38, 1045.

Esimerkki 2 7- (3-metyyliaminometyyli-2-tienyyliasetamido)-3-(2-karboksi-metyyli-2,3-dihydro-s-triatsolo£4,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitio-metyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo (BB-S472) --------—CH-NHCH,

! I Q

' y—CH„C0NH \ ^ 2 Ί-----f

Qsy-2“S ^N/ Nv^Jl-CH2COOH

C02H o a) Seosta, jossa on (3-N-t-butoksikarbonyyli-N-metyyliamino-metyyli-2-tienyyli)etikkahappoa 513 mg, 1,8 mmoolia), 2,4-dinitro-fenolia (400 mg, 2,16 mmoolia) ja DCC:tä (445 mg, 2,16 mmoolia) THF:ssä (5 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 12 tuntia. Saostunut urea poistettiin ja suodos lisättiin seokseen, jossa oli 7-amino- 19 60869 3-(2-karboksimetyyli-2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karbonihappoa (800 mg, 1,8 mmoolia) ja trietyyliamiinia (0,76 ml, 5,4 mmoolia) vedessä (5 ml), 0°C:ssa samalla sekoittaen. Sekoittamista jatkettiin, kunnes aktiivinen esteri oli hävinnyt tlc:ssä (silikageelilevy; Rf 0,95; liuotinsysteemi, CHCl3:MeOH = 3:1). Reaktioseos laimennettiin vedellä (20 ml), kerrostettiin AcOEtrllä (50 ml) ja pH säädettiin arvoon 2 väkevällä HClrllä 5°C:ssa. Orgaaninen kerros eroitettiin ja vesipitoinen kerros uutettiin AcOEt:llä (3 x 50 ml). AcOEt-uutteet yhdistettiin, pestiin kyllästetyllä vesipitoisella NaCl:llä, kuivattiin MgSO^:llä ja väke-vöitiin alennetussa paineessa. Jäljelle jäänyt öljy (1,9 g) kromato-grafoitiin silikageelillä (40 g). Kolonni eluoitiin vastaavasti CHCl3:lla (400 ml), 3 % MeOH-CHCl3:11a (100 ml) ja 10 % MeOH-CHCl3:lla samalla todeten tlc:llä (silikageelilevy, liuotinsysteemi MeOH: CHC13 = 1 : 2 , todettu J2:lla). CHCl-j-eluaatista otettiin talteen seos, jossa oli 2,4-DNP:tä ja lähtöaineena käyt3ttyä aminohappoa ja 3 % MeOH-CHCl-eluaattia. Haluttu tuote, 7-(3-N-t-butoksikarbonyyli-N-metyyliaminometyyli-2-tienyyliasetamido)-3-(2-karboksimetyyli-2,3-dihydro-s-triatsolo74,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karbonihappo. (Rs 0,4, liuotinsysteemi CHC13:MeOH=3:1) saatiin haihduttamalla eluaattia 10 % MeOH-CHCl3:n kanssa. Saanto 490 mg (39 %). Sp. 215-220°C.

KBr _1 ir: ^ maks 3400' 1780' 1720' 1680' 1550 crtl pH 7 puskuri uv: Λ maks 245 nm ( c , 23000) 260 nm ( £. , 18000) DMSO-d, 300 nnt ^ ^ ' 790°) nmr: £ 6 1,42 (9H, s, BOC-H), 2,75 (3H, s, N-CH3), ppm H pj 3,80 (4H, br-s, 2-H & S II CO), 4,35 (H, br-s,

SJ

& 3-CH2), 4,72 (2H, s, BOC-N-CH2), 5,10 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,70 (1H, d-d, J=4,5 & 10,5 Hz, muuttuu ubletiksi J=4,5 lisäämällä D20:ta, 7-H:ta), 6,85 (1H, d, J=4,5 Hz, tiofeeni H) 7,19 (1H, d, J=9 Hz, pyridatsiini H), 7,34 (1H, d, J=4,5 tiofeeni H), 7,72 (1H, d, J=9 Hz, pyridatsiini-H), 9,11 (1H, d, J=10,5 Hz, häviää lisäämällä D20:ta, NH).

20 60869

Anal, laskettu yhdisteelle C2gH-j .jN^O^S^ . H2O: C, 46,46; H, 4,60; N, 13,55; S, 13,29. Löydetty: C, 46,67; H, 4,71; N, 12,79; S, 12,81.

b) Trifluorietikkahappoa (0,4 ml) lisättiin kohdassa a) saatuun yhdisteeseen (400 mg, 0,57 mmoolia) 0°C:ssa ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 15 minuuttia. Reaktioseokseen lisättiin vedetöntä eetteriä (10 ml) saostuman eroittamiseksi, joka kerättiin suodattamalla, pestiin vedettömällä eetterillä (2 x 10 ml) ja sus-pensoitiin asetonitriilissä (10 ml). Suspension pH säädettiin arvoon 4 väkevällä NH^OH:lla ja sekoitettiin 10 minuuttia. Kiinteä aine kerättiin suodattamalla, pestiin asetonitriilillä (2x5 ml) ja kuivattiin 60°C:ssa/1 mm Hg:ssä 7 tuntia, jolloin saatiin 310 mg (90 %) 7-(3-metyyliaminometyyli-2-tienyyliasetamido)-3-(2-karboksimetyyli- 2,3-dihydro-s-triatsolo^4,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karbonihappo (BB-S472), 188-191°C:ssa (haj.).

/ KBr _1 ir: V ,, 3400, 1770, 1720, 1680, 1550 cm ITlclK. S · pH 7 puskuri uv: /\ . 245 nm ( £1 , 22400), 26 nm ( £' ,18700), maK s · 300 nm ( £ ,8600).

Anal, laskettu yhdisteelle ^23Η23Ν707^3.3H2O: C, 41,87; H, 4,43; N, 14,86; S, 14,58. Löydetty: C, 42,03; H, 3,59; N, 14,79; S, 14,35.

c) Suspensioon, jossa oli kohdassa b) saatua yhdistettä (230 mg, 0,38 mmoolia) 0,5 ml:ssa deionisoitua vettä, lisättiin N NaOH:ta pH:n säätämiseksi arvoon 8,9. Asetonia (15 ml) lisättiin liuokseen. Saostuma kerättiin suodattamalla, pestiin asetonilla 2x5 ml) ja kuivattiin 60°C:ssa/l mm Hg:ssä 7 tuntia, jolloin saatiin 170 mg (71 %) BB-S472:n mononatriumsuolaa, sp. >210°C (haj.).

KBir ir: V" maks 3400' 1765» 1710, 1680, 1600 cm-1 pH 7 puskuri uv: ?| . 245 nm ( c , 12800), 260 nm ( t ,18500), ^Q3' 300 nm ( £. , 7800) .

nmr: S 2 2,72 (3H, s, N-CH,), 3,45(1H, d, J=18 Hz, 2-H), ppm 3 h 3,75 (1H, d, J = 18 Hz, 2-H), 3,95 (2H, s, S ^ ^CH2CO) , 4,18 (4H, m, ^ -CH2N & 3-CH2), 4,57 (2H, s, N-CH2), 5,00 Γ

S

21 60 8 6 9 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,53 (1H, d, J=4,5 Hz, 7-H), 6,97 (1H, d, J=9 Hz, pyridatsiini-H), 7,03 (1H, d, J=4,5 Hz, tiofeeni-H p) , 7,34 (1H, d, J=4,5 Hz, tiofeeni-H oi.) , 7,48 (1H, d, j = 9 Hz, pyridatsiini-H) .

Anal, laskettu yhdisteelle C23H22N7°7S3Na*^/2H2O: C, 43,40; H, 3,64; N, 15,40; S, 15,11. Löydetty: C, 43,26; H, 4,08; N, 14,18; S, 13,91.

Esimerkki 3 7-(2-N-metyyliaminometyyli-4-hydroksifenyyliasetamido)-3-(2-karboksimetyyli-2,3-dihydro-s-triatsolo£4,3-b/pyridatsiini-3-oni- 6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo (BB-S478) HO _ 2NH-CH 3 ^ J_CH2CC«h γ'* \

N^*-CH2-S ^ N-CH2CO°H

O T Π C02H 0 a) Seosta, jossa on 2-N-t-butoksikarbonyyli-N-metyyliamino-metyyli-4-hydroksifenyylietikkahappoa, (708 mg, 2,4 mmoolia), 2,4-dinitrofenolia (478 mg, 2,6 mmoolia) ja DCC:tä (536 mg, 2,6 mmoolia) kuivassa THF:ssä (20 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Saostunut urea poistettiin suodattamalla. Suodos lisättiin liuokseen, jossa oli 7-amino-3-(2-karboksimetyyli)-2,3-dihydro-s-tri-atsolo/4,5-b7pyridatsiini-3-oni~6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboni-happoa (876 mg, 2 mmoolia) 20 ml:ssa vettä, joka sisältää trietyyli-amiinia (0,84 ml, 6 mmoolia) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 18 tuntia. Sen jälkeen kun vesipitoinen liuos oli väkevöity 20 ml:aan, se pestiin eetterillä, tehtiin happameksi 6N HCl:llä ja uutettiin 200 ml :11a etyyliasetaattia. Uute suodatettiin liukenemattomien aineiden poistamiseksi, pestiin vedellä ja kyllästetyllä vesipitoisella NaCl liuoksella ja kuivattiin. Liuos haihdutettiin kuiviin ja öljypitoinen jäännös kromatografoitiin silikageelillä (Wago-geeli C-200, 25 g) eluoiden kloroformilla ja 3 %:lla kloroformi-metanolilla. Fraktiot, jotka sisälsivät haluttua tuotetta (todettu tlc:llä;

Rf 0,3; liuotinsysteemi CHCl^:MeOH=2:1) otettiin talteen ja haihdutettiin kuiviin, öljypitoinen jäännös hierottiin jauheeksi eetteri-n-heksaanin kanssa, jolloin saatiin 630 mg (44 %) 7-/2-(N-t-butoksi-karbonyyli-N-metyyliaminometyyli)-4-hydroksifenyyliasetamido/-3-(2-karboksimetyyli-2,3-dihydro-s-triatsolo/_4,5-b/pyridatsiini-3-oni- 6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karbonihappoa, joka sulaa 200-2.10oc. ssa 22 608 6 9 (haj. hitaasti).

KBr ir:\/maks 1780, 1720, 1660, 1400, 1240, 1150 cm-1 pH 7 puskuri UV:^ maks. 252 nm ( £ , 13000), 300 nm ( f ,5400) cDMSO-dfi nmr: o ö 1,39 (9H, s, C-CH.,) , 2,73 (3H, s, N-CH-.) ppm 3,3-3,9 (4H, m, CH2C0 & 2-H), 4,35 (4H, m, CH2N & 3-H), 4,48 (2H, s, NCH2C0), 5,03 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H) 5,61 (1H, d-d, 8 & 4,5 Hz, 7-H), 6,4-7,2 (3H, m, fenyyli-H), 6,98 (1H, d, 10 Hz, pyridat-siini-H), 7,61 (1H, d, 10 Hz, pyridatsiini-H), 8,87 (1H, d, 8 Hz, NH) .

Anal, laskettu yhdisteelle H30H33N7®10^2: C' ^0,34; H 4,65; N, 13,70; S, 8,96. Löydetty C, 50,98; H, 5,36; N, 11,88; S, 7,60.

b) Seosta, jossa on kohdassa a) saatua yhdistettä (570 mg, O, 7 mmoolia) ja trifluorietikkahappoa (1,5 ml) sekoitettiin 10°C;ssa 30 minuuttia ja seos laimennettiin eetterillä (50 ml) yhdisteen BB-S478 trifluoriasetaatin eroittamiseksi, joka kerättiin suodattamalla, sen jälkeen liuotettiin seokseen, jossa oli 10 ml asetonit-riiliä ja 5 ml vettä ja sen jälkeen suodatettiin. Suodos säädettiin pH-arvoon 6 väkevällä ammoniumhydroksidilla ja sen jälkeen liuos laimennettiin asetonitriilillä (100 ml). Saatu saostuma kerättiin suodattamalla, pestiin setonitriilillä ja kuivattiin tyhjössä P20^:llä, jolloin saatiin 370 mg (75 %) 7-(2-N-metyyliaminometyyli- 4-hydroksifenyyliasetamido)-3-(2-N-karboksimetyyli-2,3-dihydro-s-triatsolo£4,5-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-kar-bonihappoa (BB-S478), joka sulaa 215-220°C;ssa (haj.).

KBx ir; Vmaks 1770, 1710, 1600, 1380, 1350 cm"1 pH 7 puskuri uv: 7) , 252 nm ( £ ,19000) 300 nm ( £ ,9100) nidK S · d2o+k2co,

nmr: 6 2,75 (3H, s, N-CH,), 2,9-3,3 (4H, m, CH^CO

ppm j * & 2-H), 4,0-4,3 (4H, m, CH2N & 3-H), 4,57 (2H, s, NCH2CO), 4,81 (1H, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,53 (1H, d, 4,5 Hz, 7-H), 6,6-7,5 (5H, m, fenyyli-H & pyridatsiini-H).

23 60869

Anal, laskettu yhdisteelle C25H25N7°8S2.5/2H2Q: C, 45,45; H, 4,58; N, 14,84; S, 9,71. Löydetty: C, 45,69; H, 4,21; N, 15,03; S, 9,46.

c) Kohdassa b) saadun yhdisteen suspensioon (308 mg, 0,5 mmoolia) vedessä (2 ml) lisättiin 0,3-0,4 ml N NaOH:ta ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa; saadun liuoksen pH oli 9,2. Asetonia (20 ml) lisättiin hitaasti liuokseen. Saatu saostuma kerättiin suodattamalla, pestiin asetonilla (10 ml) ja kuivattiin tyhjössä P2<0g: llä, jolloin saatiin 290 mg (91 %) BB-S478:n mononatriumsuolaa, joka sulaa 230-235°C:ssa (haj.).

rKBr ir: V maks 1770, 1700' 1600,1390, 1350 cm pH 7 puskuri uv: ^ maks 250 nm ( ^ f 18000) 300 nm ( £.,8400)

Anal, laskettu yhdisteelle C^H^NyOgS^a.5/2H20: C, 43,98; H, 4,28; N, 14,36; S, 9,39. Löydetty: C, 43,96; H, 4,14; N, 13,51; S, 9,34.

Esimerkki 4 7-/0-(metyyliaminometyyli)fenyyliasetamidq7-3-(2-karboksi-metyyli-2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitio-metyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo (BB-S479) ^ CH2NH-CH3 L:. ^J— n

C02-si^NXN^ A-CH2COOH

co2h a) Kylmään (0°C) seokseen, jossa oli esimerkissä III saatua yhdistettä (5,4 g, 12 mmoolia), EtgN:ää (5,5 ml), CHgCN:ää (25 ml) ja vettä (25 ml) lisättiin liuosta, jossa oli 2,4-dinitrofenyyli-o-(n-butoksikarbonyyli-N-metyyliaminometyyli)fenyyliasetaattia THF:ssä /valmistettu o-(N-butoksikarbonyyli-N-metyyliaminometyyli)-fenyyli-etikkahaposta (3,48 g, 13,5 mmoolia) 2,4-dinitrofenolista (2,49 g, 13,5 mmoolia) ja DCC:stä (2,79 g, 13,5 mmoolia) kuivassa THF:ssä (37 ml)J. Seosta sekoitettiin lämpötilassa yli yön. THF ja CH^CN poistettiin reaktioseoksesta haihduttamalla alennetussa paineessa ja saatu vesipitoinen liuos pestiin eetterillä (3 x 30 ml), pH säädettiin arvoon 2-3 laimealla HCl:llä ja uutettiin etyyliasetaatilla 24 60869 (4 x 30 ml). Orgaaniset uutteet yhdistettiin, kuivattiin natriumsul-faatilla ja haihdutettiin. Jäännös kromatografoitiin Si02 (100 g) kolonnilla. CHCl^illa pesemisen jälkeen kolonni eluoitiin 3 %

MeOH:lla CHCl^ssa, jolloin saatiin haluttu fraktio, joka sisältää l-[o-(N-butoksikarbonyyli-N-metyyliaminometyyli)fenyyliasetamido/-3-(2-karboksimetyyli-2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karbonihappoa. Saanto 3,8 g (45 %) sp. >200°C (haj.).

KBr .

ir: V maks 1780, 1720, 1680 cm pH 7 puskuri uv: ^ 250 nm ( k. , 18800) 297 nm ( £ , 8400) dmso+d2o nmr: <3 m 7,62 (1H, d, J=10,5 Hz, pyridatsiini-H) , 7,14 (4H, s, fenyyli-H), 6,98 (1H, d, J=10,5 Hz, pyridatsiini-H), 5,61 (1H, d, J = 4,5 Hz, 7-H), 5,03 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 4,67 (2H, s, N-CH2), 4,42 (2H, s, CH2~N), 4,4-4,0 (2H, m, 3-CH2), 3,8-3,4 (4H, m, 2-H & CH2-CO), 2,72 (3H, s, NäCH^), 1,38 (9H, s, BOC-H).

Anal, laskettu yhdisteelle C2QH23N^OgS2.5/2H2O: C, 48,38; H, 5,14; N, 13,16; S, 8,61. Löydetty: C, 48,25, 48,23; H, 4,52, 4,46; N, 12,93, 12,86; S, 8,68.

b) Trifluorietikkahappoa (7 ml) lisättiin kohdassa a) saatuun yhdisteeseen (3,8 g, 5,5 mmoolia) 0°C:ssa ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 minuuttia. Kuivaa eetteriä (100 ml) lisättiin seokseen. Saatu saostuma kerättiin suodattamalla ja pestiin kuivalla eetterillä (3 x 100 ml). Saostuma liuotettiin CH2CN:n (120 ml) ja veden (18 ml) seokseen ja liuos säädettiin pH-arvoon 5-6 väkevällä NH4OH:lla, jolloin saatiin öljypitoinen saostuma, joka hierottiin jauheeksi CH^CNin kanssa, jolloin saatiin kiinteää ainetta. Tuote, 7-7.0- (metyyliaminometyyli) fenyyliasetamidc>7-3- (2-karboksimetyyli- 2,3-dihydro-s-triatsolo74,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)- 3-kefem-4-karbonihappo (BB-S479),kerättiin suodattamalla, pestiin CH-jCN:llä ja kuivattiin. Saanto 2,55 g (77 %) .

ir: V maks 1770, 1710, 1600, 1550 cm 1 25 60869 c) Yhdisteen BB-S479 (2,54 g, 4,3 mmoolia) liuokseen vedessä (25 ml) lisättiin n NaOH (noin 3 ml) samalla jäähdyttäen (liuoksen pH oli 10). Liuokseen lisättiin paljon asetonia ja saostuma otettiin talteen suodattamalla ja pestiin asetonilla, jolloin saatiin 1,94 g (84 %) BB-S479:n mononatriumsuolaa sp. >200°C (haj.).

K3r ir:^maks 1770' 1710' 1600, 1550 cm"1 pH 7 puskuri UV: ^ maks 250 nm ( /1940°) 297 nm ( ^ ,8700)

Anal, laskettu yhdisteelle C25H24N7°7S2Na*1/2^0: C, 47,61; H, 4,00; N, 15,55; S, 10,17. Löydetty C, 47,43, 47,43; H, 4,68; N, 15,97, 15,70; S, 9,25, 9,84.

Esimerkki 5 7-(3-aminometyyli-2-tienyyliasetamido)-3-(2-karboksimetyyli- 2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksyylihappo (BB-S483) ........ J—CH2NH2

i— N J-CH -S —>v N-CH-COOH

N g"

co2H

a) Seosta, jossa on (3-N-t-butoksikarbonyyliaminometyyli-2-tienyyli)etikkahappoa (410 mg, 1,56 mmoolia), 2,4-dinitrofenolia (313 mg, 1,7 mmoolia) ja DCC:tä (353 mg, 1,7 mmoolia) THF:ssä (5 ml), sekoitettiin huoneen lämpötilassa 12 tuntia. Saostunut urea poistettiin ja suodos lisättiin seokseen, jossa oli 7-amino-3-(2-kar-boksimetyyli-2,3-dihydro-s-triatsolo£4,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yyli-tiometyyli)-3-kefem-4-karbonihappoa (683 mg, 1,56 mmoolia) ja tri-etyyliamiinia (0,62 ml, 4,68 mmoolia) vedessä (5 ml) 0°C:ssa samalla sekoittaen. Sekoittamista jatkettiin huoneen lämpötilassa kunnes aktiivi esteri hävisi tlc:ssä (silikageelilevy; Rf 0,95; liuotin-systeemi CHCI3:MeOH=3:1). Reaktioseos laimennettiin vedellä (20 ml) kerrostettiin AcOErllä (50 ml) ja pH sovitettiin arvoon 2 väkevällä HClrllä 5°C:ssa. Orgaaninen kerros eroitettiin ja vesipitoinen kerros uutettiin AcOEtillä (3 x 50 ml). AcOEt (etyyliasetaatti)-uutteet yhdistettiin, pestiin kyllästetyllä vesipitoisella NaCl:llä, kuivattiin MgSO^rllä ja väkevöitiin alennetussa paineessa. Jäljelle 26 60869 jäänyt öljy (1,8 g) kromatografoitiin silikageelillä (40 g). Kolon-ni eluoitiin vastaavasti CHCl3:lla (400 ml) ja 3 % MeOH-CHCl3:11a (500 ml). Eluaatti todettiin tlc:llä (silikageelilevy, liuotinsys-teemi CHC13:MeOH=2:1, todettu I2:lla). Haluttu tuote, 7-(3-N-t-butoksikarbonyyliaminometyyli-2-tienyyliasetamido)-3-(2-karboksime-tyyli-2,3-dihydro-s-triatsolO/M ,3-b7~pyridatsiini-3-oni-6-yylitio-metyyli)-3-kefem-4-karbonihappo, (Rf 0,2) saatiin haihduttamalla MeOH-CHCl3 eluaattia. Saanto 450 mg (42 %), joka sulaa 155-160°C:ssa.

V, KBr -1 ir: ^ maks 3300' 1775, 1720, 1680 cm pH 7 puskuri uv: ^ maks 245 nItl ( ' 23900) 260 nm ( 6. , 19200) 300 nm ( £ ,8700) .

c DMSO-dg nmr:o 1,39 (9H, s, BOC-H), 3,76 (4H, br-s, il ppm 2- H & s' CH2CO), 4,05 (2H, d, J=6 Hz, muuttuu singletiksi lisäämällä D20:ta, BOCNH-CH2:ta), 4,20 (2H, m, 3-CH), 4,69 (2H, s, N-CH2C02), 5,06 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H) , 5,62 (1H, d-d, J=4,5 & Hz, muuttuu dubletiksi J=4,5 Hz lisäämällä D20:ta, 7-H:ta), 6,83 (1H, d, J-4,5 Hz, tiofeeni-H fb) , 7,00 (1H, m, häviää lisäämällä D20:ta, NHB0C:ta), 7,04 (1H, d, J=9 Hz, pyridatsiini-H), 7,12 (1H, d, J = 4,5 Hz, tiofeeni-H rk), 7,65 (1H, d, J=9 Hz, pyridatsiini-H), 8,97 (1H, d, J=9 Hz, häviää lisäämällä D20:ta, 7-NH).

Anal, laskettu yhdisteelle C27H29N7°9S3: C, 46,88; H, 4,23; N, 14,17; S, 13,90. Löydetty: C, 46,42; H, 4,37; N, 13,49; S, 13,61.

b) Trifluorietikkahappoa (0,4 ml) lisättiin kohdassa a) saatuun yhdisteeseen (410 mg, 0,59 mmoolia) 0°C:ssa ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 15 minuuttia. Reaktioseokseen lisättiin vedetöntä eetteriä (10 ml) saostuman eroittamiseksi, joka otettiin talteen suodattamalla, pestiin vedettömällä eetterillä (2 x 10 ml) ja suspensoitiin asetonitriilillä (10 ml). Suspension pH säädettiin arvoon 4 väkevällä NH^OHtlla ja sekoitettiin 10 minuuttia. Saostuma otettiin talteen suodattamalla, pestiin asetonitriilillä (2x5 ml) ja kuivattiin 60°C:ssa/1 mm Hg:ssä 7 tuntia, jolloin saatiin 310 mg (88 %), 7-(3-aminometyyli-2-tienyyliasetamido)-3-(2-karboksimetyyli- 2,3-dihydro-s-triatsolo£4,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)- 3- kefem-4-karbonihappoa (BB-S483, joka sulaa yli 200°C:ssa (haj. hitaasti) .

27 60869 1 KBr ir: V maks 3400, 3150, 1760, 1700, 1680, 1600 cm .·>. pH 7 puskuri UV: maks 245 nm ( '1710°) 260 nm < £ ,14100) 300 nm ( £ ,6500).

Anal, laskettu yhdisteelle C22H21N7°7S3C/ 40,90; H, 4,21; N, 15,17; S, 14,89. Löydetty: C, 40,39; H, 3,62; N, 15,87; S, 14,35.

c) Suspensioon, jossa on kohdassa b) saatua yhdistettä (280 mg, 0,48 mmoolia) 0,5 mlsssa deionisoitua vettä, lisättiin N NaOH:ta pH:n säätämiseksi arvoon 9,5 ja liukenematon aine otettiin talteen suodattamalla. Suodokseen lisättiin asetonia (15 ml) saostuman eroittamiseksi, joka otettiin talteen suodattamalla, pestiin asetonilla (2x5 ml) ja kuivattiin 70°C:ssa/1 mm Hg:ssä 7 tuntia, jolloin saatiin 220 mg (76 %) yhdisteen BB-S483 mononatriumsuolaa.

Sp. 210°C (hidas hajoaminen).

KBr ir: V maks 3400, 3250, 1760, 1710, 1650, 1600, 1550 cm'1 pH 7 puskuri uv: Λ v 245 nm ( £ ,19900) 260 nm ( £,16400) 300 nm ( e ,6900) D90 nmr^pp^ 3,60 (2H, m, 2-H) , 3,91 (2H, s, CH2CO) , 4,12 (2H, s, CH2-NH2), 4,20 (2H, m, 3-CH2), 4,55 (2H, s, N-CH2CO), 4,95 (1H, d, J=4,5 Hz, 6-H), 5,50 (1H, d, J=4,5 Hz 7-H), 6,94 (1H, d, J=9 Hz, pyridatsiini-H), 6,99 (1H, d, J=4,5 Hz, tiofeeni-H p), 7,28 (1H, d, J=4,5 Hz, tiofeeni-H,^.), 7,32 (1H, d, J=9 Hz, pyridatsiini-H).

Anal, laskettu yhdisteelle C22H20N7°7S3Na*1/2CH3COCH3: C, 43,92; H, 3,61; N, 15,26; S, 14,97. Löydetty: C, 43,48; H, 4,56; N, 15,28; S, 13,91.

Esimerkki 6 ~!~L(2-aminometyyli-1,4-sykloheksadienyyli) asetamidq/-3- (2-karboksimetyyli-s-triatsoloZ.4,3-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitimetyyli) -3-kefem-4-karboksyylihappo (BB-S493) po 60869

I ^NH-BOC

{ '.L COOH---> |j . v'^ 'Nh-boc

,,CONH-p-f/SN

^-N^J-CH2S-Wn> ^-CH2C02H

co2h if Y' ^NH2 ^Y\/'C0NH~r~C I ί^Ύ»! 0^-Ν-γ^^Η28-'^ΝχΝ-^ N-CH2C02H C02H 0 a) Seosta, jossa on 2-N-t-butoksikarbonyyliaminometyyli-1,4-sykloheksadienyylietikkahappoa (640 mg, 2,4 mmoolia), 2,4-dinitro-fenolia (422 mg, 2,4 mmoolia) ja DCC:tä (49 mg, 2,4 moolia) 10 mlrssa kuivaa THF:ää, sekoitettiin 1,5 tuntia huoneen lämpötilassa. Saostunut urea poistettiin suodattamalla. Suodos lisättiin yhdessä erässä liuokseen, jossa oli 7-amino-3-(2-N-karboksimetyyli-s-triatsoloZ4,5-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboksihappoa 10 mlrssa vettä, joka sisälsi trietyyliamiinia (0,56 ml, 4 mmoolia) ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 tuntia. Reaktioseos väke-vöitiin 10 mlraan alennetussa paineessa, pestiin eetterillä (3x10 ml), tehtiin happameksi 6N kloorivetyhapolla ja uutettiin etyyliasetaatilla (5 x 10 ml). Yhdistetyt uutteet pestiin kyllästetyllä saliiniliu- 29 60869 oksella ja kuivattiin vedettömällä Na2SO^:llä. Liuotin haihdutettiin ja jäännös kromatografoitiin silikageelillä (Wako-gel C-200, 30 g) eluoiden kloroformi-metanolilla (0-50 %). Fraktiot, jotka sisälsivät haluttua tuotetta otettiin talteen. Liuotin poistettiin ja jäännös hierottiin jauheeksi eetteri-n-heksaanin kanssa, jolloin saatiin 410 mg (30 %) 7-/_(2-N-t-butoksikarbonyyliaminometyyli-1,4-sykloheksa-dienyyli)asetamido/-3-(2-N-karboksimetyyli-s-triatsolo^4,5-b/pyri-datsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karbonihappoa. Sp. 110°C (haj.).

KBr , irs Y maks 1780, 1730, 1610, 1530, 1250, 1160 cm Λ Buff (pH 7) uv: A , 252 nm ( , 19000) 300 nm ( C ,8600, sh) .

maks.

Anal, laskettu yhdisteelle C29H33N7°9S2-2H20: C' 48'12'· H, 5,15; N, 13,54; S, 8,86. Löydetty: C, 48,07; H, 4,64; N, 12,70; S, 8,39.

b) Kohdassa a) saatua N-BOC-suojattua kefalosporiinia (350 mg, 0,51 mmoolia) käsiteltiin trifluorietikkahapolla (TFA:11a) (1 ml) 30 minuutin ajan huoneen lämpötilassa. Seokseen lisättiin eetteriä (50 ml), jolloin saatiin yhdisteen 3 TFA-suolaa, joka otettiin talteen suodattamalla ja sen jälkeen liuotettiin asetonitriilin (5 ml) ja veden (2 ml) seokseen. Liuosta käsiteltiin pienellä määrällä aktiivihiiltä ja säädettiin pH arvoon 6 väkevällä ammoniumhydroksi-dilla. Saostuma otettiin talteen, pestiin asetonitriilillä (5 ml) ja kuivattiin tyhjössä, jolloin saatiin 235 mg (78 %) 7-/.(2-aminometyyli-1 ,4-sykloheksadienyyli)asetamidq7-3-(2-N-karboksimetyyli-s-tri-atsolo/4,5-b7pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli)-3-kefem-4-karboni-happoa (BB-S493). Sp. 220-230°C (hajoaa).

KBr ir: V maks 1770, 1740, 1710, 1650, 1600, 1550 cm"1 ^ Buff (pH 7) uv: A maks 252 nm ( £ ,20000) 300 nm ( ,9000, sh) .

Anal, laskettu yhdisteelle C24H25N7°7S2.HjO: C, 47,60; H, 4,49; N, 16,19; S, 10,59. Löydetty: C, 47,77; H, 4,06; N, 16,49; S, 10,64.

30 60869

Esimerkki 7 7-/o- (N-metyyliaminometyyli) fenyyliasetamido/-3-/2- (2-kar-boksimetyyli) -2,3-dihydro-s-triatsolo/_4,3-b/pyridatsiini-3-oni-6-yylitiometyyli7-3-kefem-4-karboksyylihappo (BB-S525) a) Seokseen, jossa 7-amino-3-/.2-(2-karboksietyyli)-2,3-dihydro-s-triatsolo74,3-_b7pyridatsin-3-oni-6-yylitiometyyli/-3-kefem-4-karbonihappoa (452 mg, 1 mmoolia) ja trietyyliamiinia (0,46 ml, 3,3 mmoolia) 50 % vesipitoisessa asetonitriilissä (4 ml), lisättiin 2,4-dinitrofenyyli-o-(N-t-butoksikarbonyyli-N-metyyliamino-metyyli)fenyyliasetaatin THF-liuosta (3 ml), joka oli valmistettu o-(n-t-butoksikarbonyyli-N-metyyliaminometyyli)fenyylietikkahaposta (283 mg, 1,1 mmoolia), 2,4-dinitrofenolista (202 mg, 1,1 mmoolia) ja DCC:stä (227 mg, 1,1 moolia). Seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa yli yön ja väkevöitiin alennetussa paineessa orgaanisten liuottimien poistamiseksi. Vesipitoinen väkevöite pestiin eetterillä (3 x 20 ml), tehtiin happameksi väkevällä HCl:llä pH-arvoon 1-2 ja uutettiin etyyliasetaatilla (5 x 20 ml). Yhdistetyt uutteet kuivattiin vedettömällä Na^O^tllä ja haihdutettiin kuiviin. Jäännös kro-matografoitiin silikageelikolonnilla (Wako-gel C-200, 10 g) eluoiden seoksella MeOH-CHCl3 (MeOH: 0-3 %). Yhdistetyt eluaatit, jotka sisälsivät haluttua tuotetta, haihdutettiin, jolloin saatiin 359 mg (50 %) 7-lp-(N-butoksikarbonyyli-N-metyyliaminometyyli)fenyyliaset-amido7-3-/_2- (2-karboksietyyli) -2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3-b7pyri-datsin-3-oni-6-yylitiometyyli7-3-kefem-4-karbonihappoa. Sp. >150°C (haj.).

r KBr ir: N maks 3600-2400, 1780, 1720, 1680, 1550, 1490 cm 1 pH 7 puskuri UV! ^ maks 254 nm ( £-,19800) 298 nm ( E ,9400) 0 DMSO-dg nmr:<^> m 1,37 (9H, s, t-Bu-H) , 2,70 (3H, s, N-CH,), ppm j 2,70 (2H, t, J=7,0 Hz, -CH2~), 3,2 - 4,5 (10H, m), 5,01 (1H, d, J=5 Hz, 6-H), 5,60 (1H, d-d, J=5 & 8 Hz, 8 Hz side häviää lisäämällä D20:ta, 7-H), 6,93 (1H, d, J=10 Hz, pyridatsiini-H), 7,58 (1H,d, J=10 Hz, pyridatsiini-H).

Anal, laskettu yhdisteelle . 5/2H20: C, 49,08; H, 5,31; N, 12,92; S, 8,45. Löydetty; C, 49,32; 49,36; H, 4,70, 4,63; N, 12,52, 12,53; S, 8,44, 8,43.

31 60869 b) Seoksen, jossa oli trifluorietikkahappoa (1 ml) ja kohdassa a) valmistettua BOC-suojattua kefalosporiinia (302 mg, 0,42 mmoolia), annettiin seistä huoneen lämpötilassa 15 minuuttia ja sen jälkeen laimennettiin eetterillä (10 ml). Saatu saostuma otettiin talteen suodattamalla ja pestiin kuivalla eetterillä (2 x 10 ml), jolloin saatiin 263 mg kiinteää ainetta, joka liuotettiin veden (6 ml) ja asetonitriilin (3 ml) seokseen. Sekoitetun seoksen pH säädettiin arvoon 4 1 N-NaOH:lla (0,36 ml) ja laimennettiin asetonitriilillä (100 ml), jolloin saatiin saostuma (187 mg), joka suspensoitiin veteen (4 ml) ja pH säädettiin arvoon 9 natriumhydroksidilla (1 N, 0,3 ml). Liuosta käsiteltiin pienellä määrällä aktiivihiiltä ja pakaste-kuivattiin, jolloin saatiin 7-/2-(N-metyyliaminometyyli) f enyyliasetamidg7-3-/_2- (2-karboksietyyli) 2,3-dihydro-s-triatsolo/4,3/-pyridatsin-3-oni-6-yylitiometyyli7-3-kefem-4-karbonihapon (BB-S525) mononatriumsuolaa. Saanto 106 mg (39 %). Sp. >180°C (haj.).

rKhr -1 ir: Y makg 3600 - 2400, 1770, 1710, 1600, 1490, 1400 cm pH 7 puskuri uv: ^ maks 253 nm ( ^ '19800> 298 nm ( £ /880°) r °2° nmr:o 2,70 (2H, m, -CH0-), 2,75 (3H, s, NäCH.), ppm z, 3 4,4-3,4 (10H, m), 4,92 (1H, d, J=4,0 Hz, 6-H), 5,55 (1H, d, J=4,0

Hz, 7-H) , 6,93 (1H, d, J=9,5 Hz, pyridatsiini-H), 7,28 (4H, s, pH-Η) , 7,40 (1H, d, J=9,5 Hz, pyridatsiini-H).

Anal, laskettu yhdisteelle C26H26N7°7S2 · Na . 3H2O: C, 4 5,28; H, 4,68; N, 14,22; S, 9,30. Löydetty: C, 45,34, 44,84; H, 4,01, 3,85; N, 14,14, 14,08; S, 9,76.

Edellä esitetyissä esimerkeissä valmistetut mononatriumsuolat liukenevat kaikki yli 10 %:sesti veteen.

Claims (4)

1. 32 6 0 8 6 9
2. 1. Menetelmä uusien terapeuttisesti käyttökelpoisten kaavan I mukaisten kefalosporiinien ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi S R1-NH-CH-ciT ^CH0 II]2 II / — V " CH2S-(CH2> nC00H τ ^C-OH 0 II o jossa n on 1 tai 2 ja r’ on CH2NHR' CHjNBR' ____ch2nhr' R-<^_y-CH2C0- tai l^jL-CH2co- tai l^sj-CH2c;o- joissa R on vety tai hydroksi ja R' on vety tai metyyli, tunnet-t u siitä, että saatetaan yhdiste, jonka kaava on / S \ NH~-CH—CH CH_ o Min 11 .C-N „ ^C-CH-O-C-CH-, // \C M 2 3 O j COOH tai sen suola reagoimaan yhdisteen kanssa, jonka kaava on ^N=tN I I TTT HS -Sn /«γ^- (CH 2) nCOOH O jossa n on 1 tai 2, ja käsitellään saatua yhdistettä asylointi-aineella, jonka kaava on R1 - X IV 60869 , Λ jossa X on halogeeni tai sen funktionaalinen ekvivalentti ja R merkitsee samaa kuin edellä, ja haluttaessa muutetaan saatu kaavan I mukainen happo farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolaksi.
3. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnet- t u siitä, että valmistetaan kaavan I mukainen yhdiste, jossa R on CH„NHCH. CH2CO- 34 60869
4. 1. Förfarande för framställning av nya terapeutiskt använd-bara cefalosporiner med formeln I och farmaceutiskt godtagbara salter därav, r1—«h-ch-ciT "fcH2 __M /C_N\ -.......^%N ,CH2» nC00H j C-OH O h väri n är 1 eller 2 och är ^^^ch2nhr' ^\ch2nhr' ____ch2nhr- R_\^-CH2CO-eller |l^jL_CH2C0- eller l!^s Jl CH2CO- väri R är väte eller hydroxi och R' är väte eller metyl, känne-t e c k n a t därav, att man omsätter en förening med formeln NH2-CH-CjH 0 e —c<^c-ch2o-c-ch3 0 | I ii COOH eller ett sait därav med en förening med formeln hs_L n ii - (CH?) COOH \/ Δ n n m o väri n är 1 eller 2, och behandlar den erhällna föreningen med ett acyleringsmedel med formeln R1 - X IV