DE2707831C2 - 1-Nitro-9-Alkylaminoalkylaminoacridine, ihre Salze, Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen und ihre Verwendung - Google Patents

Description

NH- (CH₂)„ — N

R,

(IB

40

worin /7= 2 oder 3 und Ri und R₂ die Methyl- oder Äthylgruppe bedeuten, bekannt.

Diese Verbindungen sind durch identische Substituenten bei N"¹ gekennzeichnet.

Das Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen besteht in der Kondensation des l-Nitro^-chloracridin (Schmelztemperatur 150 bis !5TC)mit Dialkylaminoaikanamin in einem organischen Lösungsmedium, z. B. in Phenol oder Kresol. bei 20 bis 100"C. und dann in der Abtrennung des gewonnenen Produktes aus dem Reaktionsmedium in bekannter Weise, z. B. durch Extraktion.

l-Nitro-9-diaIkylaminoalkylaminoacndine sind auch in »Chemical Abstracts«. Vol. 68. 1968, Referat 39493s beschrieben, wobei auch ein Verfahrer, zur Herstellung der Dimethylaminoverbindung angegeben und auf die sehr starke Antikrebseigenschaften dieser Verbindungen hingewiesen ist.

In der DF.-OS 19 42 185 sind NOxide des 1-Nitro 9-(dialkylaminoalkylamino)-acridins beschrieben. Auch dofl wird die antitümorgene Wirksamkeit herausgestellt

In dem Buch von Weygand-Hilgeiag »Örganisch-chemische Experimentierkunst« 1970, Seile 552 wird über die Einführung von Aminogruppen in die 4-Stellung des Pyridifis in allgemeiner Forrfi berichtet.

O₂N NH- (CH₂),N

⁵⁰

(I)

gekennzeichnet worin R den Methyl-, Äthyl-, Propyl-f

Isopropyl-. Butyl-, Isopentyl, Benzyl- oder Cyclohexyl!

rest bedeutet. j

Km Verfahren /ur Herstellung von n-Nitro-9-alkyll

aminoalkylaminoacridinen und ihrer Salze der allgemein

so nen Formel I

O₂N NH-(CH^N

worin R die obige Bedeutung besitzt, besteht darin, daß man (l-Nitroacridyl^J-pyridiniumchlorid oder 1-Nitro-9-chloracridin bzw. deren Salze mit Phenol mischt und auf 50 bis SO⁰C erwärmt, dann auf Raumtemperatur abkühlt, Alkylaminoalkylamin oder sein Salz zugibt u.i'i ^ dann nochmals das Ganze auf 50 bis 120°C erwärmt, und das so erhaltene Gemisch in eine große Menge eines apolaren organischen oder sich nichl mit Wasser mischenden Lösungsmittels gießt und den abgeschiedenen Niederschlag des l-Nitro-9-aIkylaminoalkylaminoacridinmonohydrochlorides mit Hilfe der Lösung eines alkalischen Hydroxides alkalisiert, mit einem organischen, sich nicht mit Wasser mischenden Lösungsmittel extrahiert kristallisiert und trocknet und eventuell in die Salze anorganischer Säuren, wie Hydrochloride, Hydrobromide. Sulfate, oder in die Salze organischer Säuren, wie Laktate, Citrate, Succinate überführt bzw. den abgeschiedenen Niederschlag des l-Nitro-9-alkylaminoalkylaminoacridinmonohydrochlorides eventuell mit Chlorwasserstoff-Ätherlösung ansäuert und aus dem organischen Lösungsmittel kristallisiert.

Ein anderes Verfahren zur Herstellung von l-Nitro-9-Alkylaminoalkylarchoacridin und seinen Salzen der allapmpinpn Form&i ι"

OjN NH-(CHJ₃N

worin R die obige Bedeutung hat, besteht darin, daß man l-Nitro-9-phenoxyacndin oder sein Salz mit Phenol unter Zugabe von Alkylaminoalkyla .iin oder dessen Salz mischt, dann das Ganze auf 50 bis 120°C erwärmt, dann das so erhaltene Gemisch in ein; große Menge eines organischen, sich nicht mit Wasser mischenden Lösungsmittels gießt und den abgeschiedenen Niederschlag des i-Nitro-9-alkylaminoaIkylaminoacridinmonohydrochlorides mit Hilfe der Lösung eines alkalischen Hydroxides alkalisiert, mit einem organischen, sich nicht mit Wasser mischenden Lösungsmittel extrahiert, trocknet und kristallisiert und eventuell in die Salze anorganischer Säuren, wie Hydrochloride, Hydrobromide. Sulfate, oder in die Salze organischer Säuren, wie Laktate, Citrate, Succinate überführt, bzw. den abgeschiedenen Niederschlag der l-Nitro-9-alkylaminoalkylaminoacridin eventuell mit Chlorwasserstoff-Ätherlösung ansäuert und aus dem organischen Lösungsmittel kristallisiert

Die geschwulstheilende Wirkung der genannten Gruppe der neuen Derivate des l-Nitro-9-aminacridins, nämlich von l-Nitro-9-monoalkylaminopropylaminoacridinen wurde mehrmals mit Hilfe der nachstehend beschriebenen Prüfungen ermittelt, wobei man in allen Prüfungen eine hohe geschwulsthemmende Aktivität festgestellt hat

I. In viiro-Verfahren
1. Gewebekultur (KB-Linien)

Die Versuche wurden mit Hilfe des durch Eagle H, Foley O.H., Cancer Research 18, 1017 (1958) bearbeiteten end durch Smith G.G., Lummis W.L, Grady ].F_ Cancer Research 19, 843-847 (1959) modifizierten Gewebekulturverfahrens durchgeführt

Die Versuche wurden auf menschlichen Geschwulstzellen der sogenannten KB-Linien, bei Anwendung von Eagle-Nährboden unter Zugabe von 1% Kalbserum durchgeführt

Es wurde in Reagenzgläsern geprüft, wobei diese mit je vier Milliliter Suspension (40 bis 80 Tausend Zellen) geimpft wurden, was 40 bis 80 μg von Zelleneiweiß entspricht Das Kulturwachstum wurde durch Zelleneiweißzuwachs bestimmt. Die Bestimmung wurde photometrisch bei Anwendung von Folin-Cicaltean-Reagens mit Hilfe des Cyama-Verfahrens (Cyama V.J., Eagle H., Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 91,305 (1956)) durchgeführt

Gleichzeitig mit der Impfung der Reagenzgläser mit den Zellen wurde 0,2 mr der Lösung der zu prüfenden Verbindung so zugegeben, daß die Konzentration 100, 10, 1, 0,1, 0,01 und 0,001 μg/ml des Nährbodens beträgt. Die Reagenzgläser wurden bei 37°C inkubiert Nach 72 Stunden wurde der Zelleneiweißzuwachs in den Reagenzgläsern bestimmt, zu welchen das Präparat zugegeben worden war, und in den Kontrollreagenzgläsern.

Jede Konzentration wurde parallel in zwei Proben geprüft. Es wurde auch die Konzentration der Substanz bestimmt, bei welcher die Hemmung de·; Zelbneiweißzuwachses um 50% erreicht wird — die sogenannte ID₅₀.

Den Hemmprozentsatz hat man nach der folgenden Formel errechnet:

% der Inhibition = 100

Endmenge des Zelleneiweißes in der Kontrolle - Endmenge des Zelleneiweißes Endmenge des Zelleneiweißes in der Kontrolle - Anfangsmenge des Zelleneiweißes

In Übereinstimmung mit den allgemein anerkannten Standarden (Leiter J., Abbot B.J., Schapartz S.A., Cancer Research 25/3/2, 522 (1965)) wurden als aktiv diejenigen Verbindungen angenommen, bei welchen die IDw = 1 μg/ml beträgt. Leiter, Abbot und Schapart? sind der Meinung, daß solche Verbindungen ohne Rücksicht auf die Ergebnisse der in vivo-Versuche klinisch geprüft werden sollen.

Die Verbindungen aus der obengenannten Gruppe wurden mit Hilfe dieses Verfahrens mehrmals geprüft.

Die ID₅₀ beträgt entsprechend 0,01 bis 0,001 μ£/πιΙ.

2, Miyämura^Verfahren (Ehrlichkrebszellen)

Dieses Verfahren besteht in der Bestimmung der Hemmung der Aktivität der Dehydrögeriasen, den

Ehrlichkrebszellen (5 - 10⁶ in 1 ml) durch die zu prüfenden Verbindungen, was durch den Durchmesser der Zone des unreduzierten Redoxyfarbstoffes (Resasurin), welche ringsum den Zylinder mit l%iger Lösung der zu prüfenden Verbindung nach 5 Stunden Inkubation bei 37"C entsteht, gemessen wird.

In Übereinstimmung mit den allgemein anerkannten Kriterien nehmen wir diejenigen Verbindungen, für welche die Hemmzone mindestens 10 mm beträgt, als aktiv an.

Die erfindungsgemäßen Acridinderivate weisen in dieser Prüfung eine besonders hohe geschwulsthemmende Aktivität auf, welche für die einzelnen Verbindungen von 26 bis 42 mm beträgt.

3. Hemmung aes Keimens von Schaumkrautsamen
(Wachstumtest)

Auf eine Petri-Platte (Durchmesser 80 mm) bringt man möglichst gleichmäßig 20 bis 25 Schaumkrautsamen auf zwei Saugpapierschichten an. Dann gießt man auf die Platten 30 ml Testverbindung der Konzentration 1 mg/ml und auf die Kontrollpiatte — destilliertes Wasser. Die Platten wurden während 24 Stunden bei 20 bis 30⁰C inkubiert, wonach die Länge der Keime gemessen wurde.

Der Hemmeffekt drückt sich in prozentualer Verminderung der Durchschnittslänge der Testkeime im Verhältnis zu der der Kontrollkeime aus.

Das prozentuale Hemmen des Keimens von Schaumkrautsamen beträgt für die erlindungsgemäße Gruppe der Verbindungen entsprechend 86 bis 88%.

II. In vivo-Verfahren

Wachstumshemmen des
Mäuse L'rockersarkom (SA-180)

In den Versuchen hat man etwa dreimonatige Mäuse mit einem Gewicht von ungefähr 25 g eingesetzt. Sie wurden mit einem Geschwulstspan (Sa-180) geimpft und auf folgende Gruppen verteilt: eine Kontrollgruppe — 10 Stück und zwei bis vier »zu heilende« Gruppen (je 7 Stück).

Nach Bestimmung der maximalen tolerierten Dosis wurden die zu prüfenden Verbindungen in entsprechenden Dosen intraperitoneal verabreicht.

Als Bewertungsknterium der geschwulsthemmenden Aktivität der geprüften Verbindungen wurde djr prozentuale Unierschied zwischen den Durchschnittsgewichten der Geschwulste bei Kontrollrnäusen und bei den die Präparate bekommenden Mäusen unter Berücksichtigung der toxischen Auswirkungen, angenommen. Als aktiv wurden diejenigen Verbindungen anerkannt, welche mindestens zweimal das Geschwulstwachstum über 40% aufhielten, ohne daß sie dabei das Sterben der Tiere (nicht mehr als 2 Stück) und Durchschnitisgewichtsverluste mehr als 4 g hervorrufen.

Die Prüfung der einzelnen erfindungsgemäßen Verbindungen wurde mehrmals durchgeführt. /. B. das mit Kod.-Nr. C-846 bezeichnete Präparat, d. h. I Nitro-9-isopropylaminpropylaminacridi dihydrochlond — 24mal. wobei man las folgende Aufhalten cies Wachstums des Croeker-.Sarkoms (Sa-180). in Abhängigkeit von der Dosis festgestellt hat. hei Dosen 0.2 bis 0,4 mg/kg betrug c"r Prozentsatz des Hemmens entsprechend 67 bis 81 %.

Für d-smit Knd.-Nr. C-845 bezeichnete Präparat.d h. TNitro-9-äthylaminpropylaminacridindihydrochIorid hat man folgendes Hemmen des Crocker-Sarkoms (SaIHO) festgestellt: 48%. 49% und 57% bei der Dosis 0,2 mg/kg.

Die Analyse der biologischen Aktivität wurde durch eingenende pharmakologische Untersuchungen unterstützt. Als Ergebnis der 72stündigen Beobachtung wurde LDw des Präparates C-846 für Mäuse und Ratten (mg/kg) festgestellt:

Außerdem wurde die maximale tolerierte Dosis (MTD) für Mäuse und Ratten (mg/kg) festgestellt:

Maus
Ratte

1,85
9,63

p. O.

27,21
75,04

Maus
Ratte

2,2 +OjI
0,95*0,1

ίο Das Präparat wies keine Auswirkungen auf den Bluipulsdruck und Atmungstätigkeit bei Kaninchen und Katzen nach intraperitonealer Verarbeitung in Dosen bis 10 mg/kg auf. Intravenös eingeführt in Dosen von 2 mg/kg verursachte es eine geringe, kurz dauernde

Hypotonie, mit gleichzeitiger unwillkürlicher Beschleunigung und Vertiefung des Atmens. Nach großen Dosen von mehr als 8 mg/kg hat man parallel die vergänglichen elektrokardiiigraphischen Änderungen, welche in der Störung der Vorhof-Kammer-Leitfähigkeit und der

Intrakanimerleitfähigkeit bestanden, die Verlängerung der PQ-Strecke und Ausbreitung des QRS-Komplexes beobachtet. Die letale Dosis, etwa 15 mg/kg für Kaninchen und Katzen (i.v.) verursacnte eine dauerhafte Hypotonie und Atmungsstörungen einschließlich bis zur Atmungslosigkeit.

In dem in vivo- und in vitro-System wies das Präparat eint, spasmolytische Wirkung auf. Auf dem Modell des isolierten Dünndarms des Meerschweinchens (Konzentration ab 5 χ 10 ⁶) und der Ratte (Konzentration ab 10.-') wurde der Abfall der Muikelspannung und der Schwund der spontanen Penstaltik beobachtet. In vivo wurde eine solche Wirkung auf den Dünndarm des Kaninchens und der Katze und auf das Muskelgewebe der Harnblase nach intravenöser Einführung des Präparates in Dosen über 5 mg/kg festgestellt.

Das Präparat wies keine ausdrückliche und gerichtete Auswirkung auf das zentrale Nervensystem auf In Dosen bis '/io der LDyi übte es bei Mäusen keinen Einfluß auf die Wirkung von Schlafmittel (Luminal. Chloralhydrat) und von Zuckungen hervorrufenden Mittel (Cardiazol. Strychnin) aus. Es beeinflußte auch in diesen Dosen nicht bemerkenswert die spontane und Situationen gezwungene motorische Aktivität der Mäuse.

Langwierige Untersuchungen wurden ^n Ratten und Kaninchen durch eine volle 3-Mon..tenexpwsitionsperiode durchgeführt, bei Einführung von Dosen entsprechend '/no. '/too und 'Λο der LDw· Diese letzte Dosis war die maximale über diese Periode tolerierte Dosis.

Lebertaiigkeitsproben (Alamin aminotransferase.

Aspangin aminotransferase, saure und alkalische Phosphatasc. Thymirlprobe) verwiesen nicht auf das Vorhandensein pathologischer Änderungen. Ausschließlich nach der höchsten Dosis wurde mit

5'., Verlängerung der Beobachtungszeit eine gelinge Steigerung der Aktivität der sauren Phosphatase festgestellt. Die gleichzeitig durchgeführten Nierenproben (Kreatininclearance, Nierenbüschelfiltrierbarkeit) haben keine Abweichungen gezeigt. Man hat arch

keinen Einfluß Jes Präparates auf das periphere Blut festgestellt (Systeme der roten und weißen Blutkörperchen, Thrombozyten, Hämatokrit, Hämoglobin), Und auch keinen Einfluß, auf. das blutbi.idefide Märksyslem. Im dritten Monat unterlag die Biutgerinnungszeit einer

gewissen Verlängerung.

Hyslologisch V/isrde im Bereich des Lymphsyslerns 126,2 ± 24,7 ein Abfall der Zahl der Zeugungszentren und ein Abfall

126/7 ± 17,8 der Zahl der kleineil LvmDhozvten beobachtet. Außer-

25

30

35

40

p, o.

dem begaben sich Entartungsläsionen in dem Bereich des keimepilhels, im Bereich der Hoden, Störungen in der Spermatogenese, Abfall der Zahl der Spermien; außerdem Abschälung des Darmepithels und Drüsengewebeschwund. Außerdem wiesen die inneren Organe keine Mikroskopänderungen auf.

Das Präparat hielt nicht die Fähigkeit der Ratten zur Befruchtung, wie auch der Weibchen zur Schwangerschaft auf, jedoch war die Zahl der Neugeborenen in einem Wurf kleiner; verlangsamt war auch ihre IndWidualentwicklung. Man hat dagegen keine makroskopischen Mißformungen festgestellt.

Das Präparat wies in Konzentrationen von 0,05 bis 1,0% lokal reizende Wirkung auf. Diesen Änderungen beugte die Anwendung als Lösungsmittel des Phosphatpuffers mit pH = 7 vor.

Nach dem Verfahren können somit neue Verbindungen gewonnen werden, weiche eine hohe geschwulsthemmende Aktivität aufweisen, was durch die durchgefüiif icn m vitiu- und li'i νιτο-TciiS bestätigt vvufuc.

Die Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen wird durch die nachstehend gegebenen Beispiele erläutert.

B e i s ρ i e I 1

Zu 3.4g des (l-Nitroacridyl^J-pyridiniumchlorides wird 15 g Phenol zugegeben und während 15 Minuten bei 5O⁰C erwärmt. Dann wird abgekühlt. 2,1 g des 3- Isopropylammopropy laminodihydrochlorides zugegeben und erneut während 45 Minuten bei 80°C erwärmt Das ?o erhaltene Gemisch wird abgekühlt. 20 ml Benzol zugegeben und das Ganze langsam in eine konzentrierte 20%ige Lösung von Kaliumhydroxid g>>?. 'en ^ach der Alkaüsiemng wird 3mal mit Benzol e>!'jhn.T· Die gesammelten Benzolextrakte werden mn Hilfe >on wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet und nach dem Abfiltern des Trocknungsmittels mit Chlorwasserstoff-Ätherlösung angesäuert.

Das abgeschiedene, orangenfarbige Öl wird in wasserfreiem Äthylalkohol gelöst, mit aktivierter Kohle -Ό erwärmt und nach AbHIuieren der Kohle trockener Äther zugegeben und kristallisiert Man erhält organgenfarbige Kristalle des l-Nitro-9-isopropylaminopropvlaminoaeridindihvdrochlorides, dessen F (Zers.) etwa 230 Γ beträgt, Ausbeute: 78%. -»5

Analog erhält man das Citrat mit F etwa 300°C, das Tartrat mit F 1 V)' C und andere Salze. Chromatographische Analyse: auf neutralem Aluminiumoxid (Typ E) im System: Benzol: Äthylacetat: Ammoniak (15 .50. I)-Rp =0.60.

Elementaranalyse für dve Formel Ci₉H₂₄N₄O₂Cl₂: errechnet: 55.79% C. 550% H, 13,70% N. gefunden: 55.96% C, 5.66% H, 13,61 N.

Beispiel 2

2öi s i-Nitro-9-chioracridin werden in iOg Phenol gelöst und während 15 Minuten bei 60°C erwärmt Nach der Abkühlung des so erhaltenen Gemisches wird mit 20%!ger wässeriger Kaliumhydroxidlösung behandelt der abgeschiedene Niederschlag filtriert und zweimal aus absolutem Äthylalkohol kristallisiert

Auf diese Weise erhält man 18 g l-Nitro-9-äthylaminopropylaminoacridindihydrochlorid. dessen F (Zers.) etwa 255° C beträgt.

Chromatogranhische Analyse (TLC) auf neutralem Aluminiumoxid (Typ E), im System: Cyclohexan Aceton Ammoniak f37 : 37 : l)-R_F = 0,54.

55

60

65 Elementaranalyse für die Formel

C₁₈H₂₂O₂N₄CI₂ · f/i H₂O:
berechnet: 53,12% C, 5,70% H, 13,77% N,
gefunden: 53,65% C, 5,45% H, 13,73% N.

Beispiel 3

2 g (t-Niiröäcridy!-9)-pyridiniümchIorid mit 10 g Phenol werden während iÖ Minuten bei 80⁰C erwärmt. Nach Abkühlung wird 1,5 g Benzylaminopropylamihdihydrochlorid zügegeben und das Gemisch erneut während einer Stunde bei 100⁰C erwärmt. Nach Abkühlung¹ wird in eine große Menge wässerige Natriumhydroxidlösung gegossen. Der ölige Niederschlag wird mit Äthylacetat extrahiert. Mit der Zugabe der Chlorwasserstoff-Ätherlösung wird das l-Nitro-9-benzylaminopropylaminoacridindihydrochlorid abgeschieden, welches aus dem Gemisch von Methylalkohol und Äther kristallisiert wird. Man erhält 1,25 g (Leistung — 50%) l-Nitro-9-benzylaminopropylaminoacridindt-

Chroinatographische Analyse (TLC) auf neutralem Aluminiumoxid (Typ E) im System: Cyclohexan : Äthylacetat: Ammoniak (37 :37 :1) -R_F = 0,37.

Elementaranalyse für die Formel C₂jH₂₄N₄O₂CI₂:
berechnet: 57,86% C, 5,49% H. 11,74% N.
gefunden: 57.72% C, 5,26% H. 11,60% N.

Beispiel 4

2 g (l-Nitroacridyl-9}-pyridiniumchlorid und etwa 10g Phenol werden während 10 Minuten bei 80°C erwärmt. Dann wird abgekühlt, 1,3 g Isopentylaminopropylamindihydrochlorid zugegeben und während 1,5 Stunden bei 100°C erwärmt Abgeschieden wird wie im Beispiel 3 und man erhält 1,25 g l-Nitro-9-isopentylamihopropylaminoacridindihydrochlorid (Ausbeute 50%), dessen F (Zers.) 180° C beträgt

Chromatographische Analyse auf neutralem Aluminiumoxid (Typ E) im System: Cyclohexan : Äthylacetat : Ammoniak(37 : 37 :1)-Rf = 0,50.

Elementaranalyse für die Formel
C₂₁H₂₈N₄O₂Cl₂ ■ H₂O:

berechnet: 55,15% C, 6,61% H, 12,25% N.

gefunden: 55,53% C. 6,67% H. 12,23% N.

Beispiel 5

3,4 g (l-Nitroacridy!-9)-pyridiniumchlorides und 15 g Phenol werden während 10 Minuten bei 80⁰C erwärmt Nach Abkühlung wird 1,15 g Propylaminopropylamm zugegeben und während 1,5 Stunden bei 100⁰C erwärmt Weiter geht es wie im Beispiel 3 beschrieben und man erhält 1,8 g l-Nitfo-9-prOpyIaminopropyIaminocridindihydrochlorid dessen F (Zers.) 234° C beträgt Chromatographische Analyse auf neutralem Aluminiumoxid (Typ E) im System: Benzol: Methylalkohol (10: 1)-Rf=0.4.

Elementaranalyse für die Formel CIgH₂₄N₄O₂CI₂:
errechnet: 55,47% C, 5,88% H, 13,62% N,
gefunden: 55,48% C, 5,87% H, 13,51% N.

Beispiel 6

3.4 g (0.01 Mol) Pyridiniumderivat des 1-Nitroacridins und etwa 15 g Phenol werden während 15 Minuten bei 80°C erwärmt Dann wird abgekühlt 1,6 g Methylami-

230 265/203

nopropylamindihydrochlofid zugegeben und während 0,5 Stünden bei 8O⁰G erwärmt. Abgeschieden wird wie Im Beispiel I, und man erhält dunkelgelbes l-Nitfö-9-rnethyiaminopropylaminoacridindihydrochiorid dessen F (Zers.) etwa 255° G beträgt.

C'iSörhälögfäphische Analyse auf neutralem Aluminiumoxid (Typ E) im System: n-Heptän !Aceton !Ammoniak (35 ί 35 :1)- Rf=0,27.

Elementaranalyse für die Formel C17H20N4O2CI2: berechnet: 52,68% C, 5,29% H. 14,38% N. gefunden: 52,35% C. 5,35% H 14,63% N.

Beispiel 7

3,4 g (l-Nitroacridyl-9)-pyridiniumchlorid werden in iOg Phenol gelöst und während 25 Minuten bei 80°C erwärmt. Nach Abkühlung werden 2,1 g 3-Butylaminopropylaminhydrochlorid zugegeben und erneut während einer Stunde bei 80°C erwärmt. Es wird abgekühlt, Äther zugegeben und das Ganze in die abgekühlte wässerige Nalriumhydroxidlösung gegossen. Es wird mit Äther extrahiert und nach vorheriger Trocknung der Ätherextrakte mit Chlorwasserstoff-Ätherlösung angesäuert.

Der abgeschiedene hygroskopische Niederschlag wird mehrmals aus dem Gemisch von absolutem Äthylalkohol und Äther kristallisiert. Es wird l-Nitro-9-butylaminopropylaminoacridindihydrochlorid mit einer Lei-tung von 62% erhalten dessen F (Zers.) 215° C beträgt

Dünnschichtchromatographische Analyse auf neutralem Aluminiumoxid (Typ E) im System: Benzol: Äthylacetat :Ammoniak(15 : 59 :1) -R_F = 0,86.

beiden Präparate auf Mäüsebindegewebegeschwulst SA-180 in Prozent der Wachstumshemmung in verschiedenen Versuchssefien.

Tabelle I

Elementaranalyse für die
berechnet: 55,60% C, 5,94% H, 12,97% N. gefunden: 55,43% C, 5,98% H, 12,70% N.

Beispiel 8

1,7 g (l-Nitroacridyl^-pyridiniumchlorid und 10 g Phenol werden während 10 Minuten bei 80°C erwärmt. Nach Abkühlung wird das so erhaltene Gemisch in Äther gelöst und langsam in die abgekühlte Kaliumhydroxidlösung gegossen. Nach Alkalisierung wird mehrmals mit Äther extrahiert Der Ätherextrakt wird nach Trocknung bis auf halbes Volumen destilliert, abgekühlt und das erhaltene l-Nitro-9-cyclohexylaminopropyI-aminoacridin aus dem Gemisch trockenes Benzol und Äther kristallisiert

F(Zers.)etwal50°C

Chromatographische Analyse (TLC) auf neutralem Aluminiumoxid (Typ E) im System: Benzol :MethyIalkohol(10:l)-R_F=03-

Elementaranalyse für die Formel C22H23N4O2CI2 · H₂O: berechnet: 5629% C, 6,44% H, 1134% N, gefunden: 56,15% C, 633% H, 11,70% N.

Die nachfolgenden Tabellen geben einen Vergleich zwischen dem Präparat C-846 gemäß der Erfindung

(l-Nitro^-Isopropylarninopropylaminoacridindihydrochlorid) und dem bekannten Präparat LEDAKRIN

(l-Nitro^S-dimethylammopropylaminoacridindihydrochlorid) wieder.

Tabelle Ϊ zeigt die antitumora'.en Wirkungen der Ledakrin

Dosis,
,"g/kg

% der
Hemmung

C-846

Dosis,
μΕ/kg

% der
Hemmung

26
43
31
33
47

0.2

0,3 0,4

43 47 39

0,6

67
j/
44
81
64
78

JJ

52
84
55

92
91

Bei den Vergleichsuntersuchungen ist zu berücksichtigen, daß bei antitumoralen Versuchen die Verbindungen

in der Regel einen niedrigen therapeutischen Index und eine hohe Toxizität aufweisen. Deshalb werden bei den biologischen Tests Dosen von einem solchen Wert angewandt, die dem Wert der hypotoxischen Dosen gleich sind und die selbstverständlich für verschiedene

Verbindungen verschieden sind. Aus diesem Grunde ist

es unmöglich, bei Screening-Versuchen jeweils die

gleichen Dosen zu verwenden, was aber in der Fachwelt bekannt ist.

Außerdem ist der therapeutische Effekt nicht nur

4ö aufgrund des Prozentsatzes der Geschwulsthemmung, sondern auch aufgrund der allgemeinen Toxiziiät zu beurteilen. Diese Beurteilung umfaßt die Gewichtsabnahme bei den behandelten Tieren und die Anzahl der verwendeten Tiere im Vergleich mit den Kontrolltieren sowie mikroskopische Histopathologieuntersuchungen. Die Analyse dieser mehrfach nachgeprüften Ergebnisse entscheidet dann, ob die untersuchte Verbindung zu vorklinischen und dann zu klinischen Versuchen weitergeleitet wird.

. Die pharmakologischen Untersuchungen der Verbindungen, die Gegenstand der Erfindung sind, insbesondere des Präparats C-846, sind positiv ausgefallen. Es wurde nachgewiesen, daß diese Verbindungen weniger toxisch als das angewandte Mittel LEDAKRIN sind, wobei sie eine ähnliche antitumorale Wirksamkeit beibehalten oder eine Verbesserung derselben ergeben haben.

Die nachfolgende Tabelle II enthält die Zahlenangaben über die biologische Aktivität und die Toxizität der beiden Verbindungen als Vergleich. Die Verbindungen gemäß der Erfindung weisen eine höhere biologische Aktivität und eine niedrigere Toxizität und damit eine höhere Toleranz als bei anderen bekannten Präparaten dieses Typs auf.

11

Tabelle Il Vergleichsangaben

12

l-Nitro-9-isopropyIaminopropylaminoacridindihydrochlorid

Lsdakrin

l-Nilro-9-(3-dimethylaminopfopylaminoacridindihydrochlorid)

LD50 bei Mäusen intravenös oral

LD₅₀ bei Ratten intravenös oral

ιιτη/n.. ..„-»-x„i:„u« r\„..:^iu^:

ITl X ist ιτιαΛ. ruuiugiiviit/ Liiwiji'OS!

intravenös oral

MTD bei Ratten intravenös oral

ED₅₀/Linien KB und HELA von menschlichen Tumoren 2,2 -fc 1 mg/kg 126,0 ±24,7 mg/kg

0,95 + 0,1 mg/kg 126J ± 17,8 mg/kg

1,85 mg/kg
27,00 mg/kg

0,63 rhg/kg
75,04 tng/kg

0,001 /ml

1,01 ± 0,15 mg/kg 34,05 ±11,3 mg/kg

0,725+ 0,08 mg/kg 25,75 ± 7,1 mg/kg

0,70 mg/kg 18,0 mg/kg

0,52 mg/kg 8,0 mg/kg

0,001 /ml

Claims (3)

Patentansprüche:

1. l-Nitm-El-alkylaminoalkylaminoacridine der allgemeinen Formel 1

O₂N NH-(CHj)₃N

Butyl-, Isopentyl-, Benzyl- oder Cyclohexylrest bedeutet und ihre Salze mit anorganischen und organischen Säuren.

2. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man (l-Nitroacridyl-9)-pyridiniumchlorid oder das 1-Nitro-9-chloracridin bzw. dessen Salze in bekannter Weise mit dem entsprechenden Alkylaminoalkylamin umsetzt

3. Verwendung der Verbindungen nach Anspruch

1 zur Bekämpfung von Krebs.

In »Journal of Chemical Society«, 1927, Seite 1168 wird die Spaltung eines Diaryläthers mittels Piperidin ebenfalls in allgemeiner Form beschrieben.

Die Anwendung dieser allgemeinen Verfahrenshinweise ist auch bei der Herstellung der Verbindungen, die Gegenstand der Erfindung sind, anwendbar. Jedoch werden beim Verfahren die erforderlichen Ausgangsstoffe angegeben.

In »Chemical Abstracts«, Vol. 71,1959. Referat 37302s wird über in viiro-Untersuchungen der cytotoxischen (I) Eigenschaften von 9-Aminonitroacridinderivaten berichtet. Gegenüber 2-Nitroacridinen und 3-Nitro-acridinen sind die 1-Nitro-acridine am wirksamsten bezüglich

worin R den Methyl-, Äthyl-, Propyl-, Isopropyl-, der Hemmung des Wachstums menschlicher Tumore in

Kulturen, wobei herausgestellt ist, daß die biologische Aktivität nicht nur von der Position der Nitrogruppe abhängig ist, sondern daß es auch erforderlich ist, daß in 9-Stellung des Acridins eine Dialkylaminoalkylamino-Kette vorhanden ist

Eine solche Verbindung ist das LED/· K RIN, die ein

l-Nitro-g-p-dimethylaminopropylaminoJ-acridin · 2HCl · H₂O darstellt Diese Verbindung ist hinsichtlich ihrer Herstellung und ihrer biologischen! Aktivitäten in der Zeitschrift »Materia Medica Poiona«! 8 (1976), Seiten 237 bis 349 beschrieben.

Die Verbindungen, die Gegenstand der Erfindun sind, enthalten am endständigen N-Atom nur eine! Alkylgruppe und unterscheiden sich somit wesentlich! von den diesbezüglich bekannten Verbindungen. Am!. Schluß der vorliegenden Beschreibung ist ein Vergleich! zwischen einem Vertreter der Verbindungen, di Gegenstand der Erfindung sind, nämlich von l-Nitro-9 isopropylaminopropylaminoacridindihydrochlorid mi LEDAKRIN enthalten. |

Ein weiterer Nachteil der bekannten Verbindungen! ist ihre Unbeständigkeit, besonders in wässerigen! Lösungen, in welchen sie leicht zu l-Nitroacridona hydrolisieren, das unlöslich im Wasser ist, was diej längere Lagerung dieser Verbindungen unmöglich! macht. 1

Diese Verbindungen weisen daneben eine bemer|| kenswerte Lichtempfindlichkeit auf. d.h. sie werderg inaktiviert. |

1 -Nitro-g-alkylaminoalkylaminoacridine und ihre Sal| ze sind durch die allgemeine Formel I |

Die Erfindung betrifft den Gegenstand der Ansprüehe.

Bisher sind aus der GB 10 93 847 l-Nitro-9-dialkyI-aminoalkyiaminoacridine der allgemeinen Formel II