DE2655292C2 - Teilchenförmiges Gel aus einem Dextranderivat - Google Patents

Description

worin R' und R", die gleich oder verschieden sind, Wasserstoffatome oder Methylgruppen, und B jine der Gruppen

— C—, -SO₂- oder -C-NH-(CHj)_n-HN-C-

worin η eine ganze Zahl von 1 bis 6 ist, bedeuten, und gegebenenfalls

einer Monovinylverbindung niederen Molekulargewichtes in Gegenwart von Wasser erhalten wurde.

2. Gel gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als Ausgangsmaterial ein Dextranderivat verwendet wurde, dessen Substitutionsgrad der Vinyl- und/oder substituierten Vinylgruppen 0,05 bis 2, vorzugsweise 0,1 bis 1,5 mMol/g Dextranderivat betrug.

3. Gel gemäß Ansprüchen 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß es durch Copolymerisation eines Gemischs von 20 bis 80 Gew.-% Dextranderivat mit einem Gehalt an Vinyl- und/oder substituierten Vinylgruppen, 20 bis 80 Gew.-% Divinylverbindung und 0 bis 40 Gew.-% Monovinylverbindung, berechnet auf das Gesamtgewicht der Reaktionsteilnehmer, erhalten wurde.

4. Verwendung des teilchenförmigen Gels nach den Ansprüchen 1 bis 3 als Trennungsmedium bei der Trennung von Stoffen gemäß ihrer Molekülgröße und/oder elektrischer Ladung mittels Gelchromatographie und/oder Ionenaustauscher.

Die Erfindung betrifft ein teilchenformiges Gel aus einem Dextranderivat und dessen Verwendung bei der Trennung von Stoffen gemäß ihrer Molekülgröße und/oder elektrischen Ladung mittels Gelchromatographie und/oder Ionenaustausch.

Es sind bereits chromatographische Medien auf Grundlage von Dextran bekannt, welche zur Verwendung bei der Gel- und Ionenaustauschchromatographie bestimmt sind (vgl. z. B. US-PS 30 42 667 und 32 08 994). Diese Medien werden hergestellt, indem man Dextran mit Dialkylierungsmitteln, wie Diepoxiden und Epichlorhydrin, vernetzt. Auf diese Weise hergestellte Gele weisen jedoch eine begrenzte Porosität auf, welche eine Abtrennung von Stoffen mit hohem Molekulargewicht unmöglich macht. Die obere Grenze liegt in der Praxis bei Molekulargewichten von 300000 bis 400000. Ein weiterer ernstlicher Nachteil bislang bekannter Dextrangele ist die geringe Starrheit der meisten porösen Gele. Dies macht eine Säulenchromatographie schwierig, insbesondere im Hinblick auf große Säulen, welche in der Industrie verwendet werden, weil die Strömung der Probe durch die Säule in diesem Fall übermäßig gering ist.
Es wurde nun überraschenderweise gefunden, daß die Herstellung von Gelen bestimmter Dextranderivate möglich ist, welche eine beträchtlich erhöhte Porosität im Vergleich zu bislang bekannten Gelen aus Dextranderivaten aufweisen, so daß Stoffe mit Molekulargewichten von mehreren Millionen getrennt werden können. Ferner ist die Starrheit der erfindungsgemäßen Gele viel höher als diejenige von bislang bekannten Gelen aus Dextranderivaten mit einer entsprechenden Porosität, so daß eine gute Strömungsgeschwindigkeit erreicht wird, selbst wenn sie in großen Kolonnen verwendet werden.

Die erfindungsgemäßen Gele aus Dextranderi vaten sind dadurch gekennzeichnet, daß sie durch freie Radikale-Copolymerisation

a) eines Vinyl- und/oder substituierte Vinylgruppen enthaltenden Dextranderivates mit

b) einer Divinylverbindung der allgemeinen Formel

R'

R"

= C-B-C =

(D

worin R' und R". welche gleich oder verschieden sind, WasserstolTatomc oder Methylgruppen, und B eine

der Gruppen

ο ο ο

Ii Il Il

— C—, -SO₂- oder —C- NH-(CH^-HN-C-

worin η eine ganze Zahl von 1 bis 6 ist, bedeuten, und gegebenenfalls

c) einer Monovinylverbindung niederen Molekulargewichtes in Gegenwart von Wasser erhalten wurde.

Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform des erfindungsgemäßen Gels geht man von einem Dcxtranderivat aus, bei dem der Substitutionsgrad der Vinyl- und/oder substituierten Vinylgruppen 0,05 bis 2, vorzugsweise 0.1 bis 1,5 mMol/g des Dextranderivates beträgt.

Vorzugsweise wird das Copolymerisat durch radikalische Copolymerisation eines Gemischs von 20 bis 80 Gew.-% Dextranderivat mit einem Gehalt an Vinyl- und/oder substituierten Vinylgruppen, 20 bis 80 Gew.-% Divinylverbindung und 0 bis 40 Gew.-% Monovinylverbindung, bezogen auf das Gesamtgewicht der Reaktionsteilnehmer, erhalten.

Diejenigen Dextranderivate, welche als Ausgangsmaterialien für das erfindungsgemäße Gel verwendet werden können, umfassen im Prinzip alle Dextranderivate, welche Gruppen der Formel CHt=CR- enthalten, wobei R ein Wasserstoffatom, eine Methyl- oder Trifluormethylgruppe, ein Fluor-, Chlor- oder Bromatom oder eine Cyangruppe darstellt. Eine bevorzugte Gruppe von Substituenten wird von der Formel

CH₂=CR-(CH₂)_m—A — (D)

umfaßt, in der m 0,1 oder 2 ist, R die zuvor genannte Bedeutung besitzt, und A eine Äther-, Ester- oder Amidbrücke darstellt, oder, wenn m = 0 ist, auch die Gruppe -CO-CH₂- darstellen kann, wobei A die Gruppe der Formel (II) direkt an eine der Hydroxylgruppen des Dextranmoleküls oder aber über eine aliphatische Brücke, welche gegebenenfalls Hydroxylgruppen enthält, bindet, die an eine der Hydroxylgruppen des Dextranmoleküls als Äther oder Ester gebunden ist. Beispiele für derartige Vinyl- oder substituierte Vinylgruppen sind Vinyl-, 1-Methylvinyl-, l-(Trifluormethyl)-vinyl-, 1 -Fluorvinyl-, l-Chlorvinyl-, 1-Bromvinyl-, Cyanvinyl-, Aiiyi-, 2-Fluorallyl-, 2-Chlorallyl-, 2-Bromallyl-, 2-(Trifluormethyl)-ailyI-, 2-Cyandlyl-, Methallyl-, Acryl-, Methacryl-, S-Allyloxy^-hydroxypropyl- und 3-(Acrylamido)-2-hydroxypropylgruppen.

Selbstverständlich kann das Dextranderivat auch andere Substituenten mit oder ohne Ionenaustauschergruppen enthalten, z. B. Hydroxyalkylgruppen mit vorzugsweise 2 bis 5 Kohlenstoffatomen, wie die Hydroxyäthyl-, 2-Hydroxypropyl-, 2,3-Dihydroxypropylgruppe, Epoxyalkylgruppen, z. B. die Epoxypropylgruppe, oder Alkylgruppen mit vorzugsweise 1 bis 5 Kohlenstoffatomen, wie die Methyl- oder Äthylgruppe, Aralkylgruppen wie die Benzylgruppe, Carboxyalkylgruppen, wie die Carboxymethylgruppe, SulfoalkyIgruppen, wie die Sulfoäthyl- oder Sulfopropylgruppe, Aminoalkylgruppen, vorzugsweise Dialkylaminoalkylgruppen, wie die Diäthylaminoäthylgruppe, derartige quaternisierte Gruppen, wie die Triäthylammoniumäthyl- oder Diäthylhydroxypropylammoniumäthylgruppe.

Das durchschnittliche Molekulargewicht des Dextranderivats kann praktisch unbegrenzt sein. Ein geeignetes Molekulargewicht (Gewichtsmittel), im folgenden abgekürzt als M_n bezeichnet, liegt jedoch bei 3000 bis 10000000, insbesondere bei 70000 bis 5000000.

Das Vinyl- und/oder substituierte Vinylgruppen enthaltende Dextranderivat, welches als Ausgangsmaterial dient, kann wie folgt hergestellt werden:

Dextranallyläther werden hergestellt, indem man eine stark alkalische wäßrige Lösung von Dextran oder des Dextranderivates mit beispielsweise Allylbromid, Allylglycidyläther, Methallylchlorid oder Dichlorpropen umsetzt.

Ester- oder Amidbindungen enthaltende Dextranderivate werden hergestellt, indem man eine wäßrige Lösung von Dextran oder des Dextranderivates (z. B. 3-Amino-2-hydroxypropyldextran), welche ferner z. B. Pyridin oder Triäthylamin enthält, sorgfältig mit Methacrylsäurechlorid oder Acrylsäurechlorid versetzt.

Vinyläther können in analoger Weise zu den Allyläthern umgesetzt werden, indem man z. B. 2-Bromäthylvinyläther oder Chlormethylvinylketon verwendet.

Beispiele für Divinylverbindungen, welche als Ausgangsmaterial eingesetzt werden können, sind N,N'-Methylen-bis-acrylamid, Divinylketon und Divinylsulfon.

Prinzipiell kann die Monovinylverbindung niederen Molekulargewichtes jede beliebige bekannte Verbindung niederen Molekulargewichtes umfassen, welche eine Vinyl- oder substituierte Vinylgruppe, vorzugsweise die Gruppe CH₂=CR-, worin R die zuvor genannte Bedeutung besitzt, enthält, und die in Wasser, Methanol, Äthanol oder einem aprotischen polaren organischen Lösungsmittel löslich ist. Hierbei wird unter »niederem Molekulargewicht« verstanden, daß sie in Frage stehende Verbindung zweckmäßigerweise höchstens 20 Kohlenstoffatome, vorzugsweise höchstens 10 Kohlenstoffatome, enthält. Beispiele für Vinylverbindungen niederen Molekulargewichtes, welche als Ausgangsmaterial für das erfindungsgemäße Gel verwendet werden können, sind Acrylamid, Methacrylamid, N-Hydroxymethylacrylamid, 2-Hydroxyäthylmethacrylat, Vinylacetat, Acrylnitril, Acrylsäure, Ν,Ν-Dimethylaminoäthylmethacrylat, Glycidylmethacrylat und Diacetonacrylamid.

Die Copolymerisation des Vinylderivates von Dextran und der Mono- und Divinylverbindungen niederen Molekulargewichtes wird unter zweckmäßigen Bedingungen durchgeführt, welche von der Polymerisation mit freien Radikalen in Gegenwart von Wasser her bekannt sind. Vorzugsweise wird die Umsetzung in wäßriger Lösung durchgeführt. Als Initiator kann beispielsweise ein Persulfat oder Peroxid verwendet werden. Diese Initiatoren können auch mit Aminoverbindungen, welche die Bildung von Radikalen beschleunigen, kombiniert werden. Beispiele für derartige Beschleuniger sind 3-Dimethylaminopropionitril und Tetramethyl-l,2-diaminoäthan. Ferner kann ein Redoxsystem des Typs H₂O₂-Fe²⁺, S₂OjT-HSO; oder SO5 -ClO," verwendet werden.

Das erfindungsgemäße Gel kann in Blockform hergestellt und sodann zu Teilchan fein zerkleinert werden, welche in Chromatographiesäulen gepackt werden können. Um eine gute Strömungsgeschwindigkeit durch die' Säulen zu erhalten, wird das Gel vorzugsweise in Perlenforn hergestellt Dies kann unter Anwendung bekannter Perlpolymerisationsverfahren erfolgen. Das Dextranderivat und die Monomeren werden zusammen mit den Initiatoren in Wasser oder in einem Gemisch aus Wasser und einer wassermischbaren Flüssigkeit, vorzugsweise in Wasser und einem Alkohol, gelöst. Die wäßrige Lösung wird sodann in einer mit Wasser nicht mischbaren organischen Flüssigkeit, wie z. B. Toluol, Heptan oder Äthylendichlorid, emulgiert. Zur Erleichterung der Emulgierung und um das richtig;; Phasenverhältnis (d. h. wäßrige Phase in organischer Phase) zu erhalten, wird zweckmäßigerweise ein Mittel zugegeben, welches die Oberflächenspannung erniedrigt. Um ein Koagulieren der Emulsion während der Polymerisation zu verhindern, wird ein feinkörniges Material zugegeben, welches eine Berührung der Wassertröpfchen verhindert. Zu diesem Zweck kann auch ein in der organischen Phase lösliches Polymeres zugegeben werden. Die bei der Perlpolymerisation gebildeten Gelperlen können gereinigt werden, indem man sie in Essigsäure, organischen Lösungsmitteln und Wasser aufschlämmt oder sie damit wäscht.

Die erfindungsgemäßen Gelteilchen besitzen im allgemeinen eine Größe von 1 bis 200, vorzugsweise 5 bis 150 um.

Die erfindungsgemäßen Gele sind sämtlich in Wasser und in anderen herkömmlichen, nicht zersetzenden Lösungsmitteln unlöslich und umfassen strukturell ein dreidimensionales Netzwerk. In Abhängigkeit von ihrer Struktur sind die Gele in den genannten Lösungsmitteln im begrenzten, veränderlichen Ausmaß quellbar.

Nachfolgende Beispiele dienen zur näheren Erläuterung der Erfindung.

Beispiel 1

100 g feinkörniges, mit Stearai beschichtetes Calciumcarbonat und 25 g Dodecylphenoxypoiy-(äthylenoxy)-äthanol wurden mit 1000 ml Toluol vermischt, und das Gemisch wurde auf 50⁰C erwärmt. In einem Gemisch von 375 ml destilliertem Wasser und 125 ml Methanol wurden bei 50°C 40 g Allyldextran (M_n etwa 3 500000; Substitutionsgrad 1,10 mMol Allylgruppen pro g Dextranderivat) und 40 g Ν,Ν'-Methylen-bisacrylamid gelöst. Nach Erhalt einer klaren Lösung wurden 5 g Ammoniumpersulfat zugegeben. Die Wasser-Methanollösung und das Toluolgemisch wurden vereint und 4 Stunden bei 50⁰C in einer Stickstoffatmosphäre gerührt. Hiernach hatten sich unlösliche Gelperlen mit einer Größe von 50 bis 140 -xm gebildet. Das Produkt wurde mit Essigsäure,

Aceton und Wasser gewaschen. Nach dem Absetzen wurde die Ausbeute ermittelt; sie betrug etwa 750 ml. Die Ausschlußgrenze, d. h. die obere Grenze des Molekulargewichtsbereiches, innerhalb dessen eine Trennung nach der Molekülgröße erreicht wird, wurde bei den erhaltenen Produkten derart bestimmt, daß einige Proteine verschiedenen Molekulargewichtes durch ein Bett aus dem Produkt Chromatographien wurden; die ΛΤ,,,-Werte der Proteine wurden nach der Formel

κ - ^v' - ^v«

berechnet, worin V₁. das Volumen des Elutionsmittels, V₁₁ der Raum zwischen den Gelkörnern, V₁ das Bettvolu-

men bedeuten.

Ein A',,, -Wert von 0 zeigt an, daß die chromatographierte Substanz aus den Poren des Trennungsmediums völlig ausgeschlossen ist. Die bezüglich der verschiedenen Proteine gemessenen K₁₁, -Werte wurde in ein Diagramm gegen den Logarithmus des Molekulargewichtes aufgetragen. Die Punkte im Diagramm wurden durch eine Gerade verbunden, und die angenäherte Ausschlußgrenze wurde an dem Punkt erhalten, wo die Gerade die Abszisse schnitt. Die Ausschlußgrenze wurde auf diese Weise ^u 290000 ermittelt. Ein Meßwert für die Starrheit der Produkte wurde erhalten, indem man die Flüssigkeitsströmung durch ein Bett aus den Perlen unter definierten Bedingungen maß. Zu diesem Zweck wurden die Perlen in Wasser aufgeschlämmt und in eine Glassäule gepackt, bis ein Bett mit einem Durchmesser von 5 cm und einer Höhe von 10 cm erhalten war. Über dem Bett wurde ein stufenweise ansteigender hydrostatischer Druckabfall angelegt, und die lineare Strömung wurde

so gemessen. Auf diese Weise war es möglich, die Maximalströmung (U_maJ Tür das definierte Bett zu erhalten. (Bei dieser Ausführungsform und den nachfolgenden Ausführungsformen bezieht sich die angegebene Maximalströmung U_max auf Gelperlen mit einem durchschnittlichen Durchmesser von 100 am.) Die Maximalströmung wurde zu 95 ml/cnr/Std. ermittelt. Demgegenüber besitzen im Handel erhältliche Gele aus Dextranderivaten eine Ausschlußgrenze von 200000 bis 300000, eine Maximalströmung von 2 bis 3 ml/cm²/Std. bei einem mittle-

ren Teilchendurchmesser von 100 um.

Das Ausgangsmaterial war Allyldextran, welches seinerseits auf folgende Weise hergestellt wurde: 400 g Dextran mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht (Gewichtsmittel M_n ) von 3 248 000 (Verhältnis von Molekulargewicht Gewichtsmittel zu Molekulargewicht Zahlenmittel MJM_n = 27,75) wurden zusammen mit 3000 ml destilliertem Wasser in einen 5-l-Dreihalsrundkolbcn gebracht. Nach Erhalt einer klaren

Lösung wurden 120 g Natriumhydroxid und 4 g Natriumborhydrid, gelöst in 500 ml destilliertem Wasser, zugegeben. Schließlich wurden 0.4 g Hydrochinon und 200 g Allylbromid zugegeben. Man ließ die Reaktion 4 Stunden bei 60⁰C fortschreiten, wobei die Lösung stark bewegt wurde. Die Umsetzung wurde durch Zugabe von 100 g konzentrierter Essigsäure unterbrochen. Nach Abkühlen des Reaktionsgemisches wurde das Allyldextran mit 99%igem Äthanol ausgefällt. Der Niederschlag wurde in 1,5 I destilliertem Wasser gelöst, wonach das AIIyI-

bi dextran mit Äthanol abermals ausgefällt wurde. Dieses A-'siallen wurde achtmal wiederholt. Der Endniederschlag wurde in 2 I destilliertem Wasser gelöst. Die Lösung wurde filtriert und gefriergetrocknet.

_t _._)j__1L __{ii x}__L _, ■—■ —^β—■—— '

Beispiel 2

Auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise, wobei jedoch das Gemisch aus Wasser und Methanol durch Wasser allein ersetzt wurde, wurden 25 g Dexiranmethaerylat (A/,, = etwa 3 500000; Substitutionsgrad 0.20 mMol/g Dextranderivat), 27,5 g Methacrylamid und 22,5 g Ν,Ν'-Methylen-bisacrylamid umgesetzt. s

Ausbeute: etwa 800 ml;

Ausschlußgrenze: 300000;

Maximalströmung (U_milx): 25 ml/cnr/Std.

10

Das Ausgangsmaterial Dextranmethacrylat wurde wie folgt hergestellt:

200 g Dextran mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht A/„ = 3 248000 (AZ₁₁ IM₁, = 27,75) wurden in 1800 ml destilliertem Wasser aufgelöst, und die Lösung wurde in einen 5-l-Dreihalsrundkolben gebracht, der mit einem Rührer versehen war. Sodann wurden 480 ml Pyridin und 0,15 g Hydrochinon zugegeben. Während 1 Stunde wurden nun 308 ml Methacrylsäurechlorid tropfenweise zugegeben. Während der Zugabe von Meth- 15 ' ■

acrylsäurechlorid wurde der Kolben auf eine konstante Temperatur von 2O⁰C gekühlt. Man ließ die Umsetzung unter Rühren weitere 4 Stunden fortschreiten. Das Dextranmethacrylat wurde mit 99%igem Äthanol ausgefällt. Der Niederschlag wurde in 1,5 I destilliertem Wasser gelöst, wonach das Dextranmethacrylat mit Äthanol abermals ausgefällt wurde. Das Ausfällen wurde achtmal wiederholt. Der Endniederschlag wurde in 2 1 destilliertem Wasser aufgelöst; die Lösung wurde filtriert und gefriergetrocknet. 20

Beispiel 3

Auf die in Beispiel 2 beschriebene Weise wurden 25 g Allyldextran (mit demselben Molekulargewicht und Substitutionsgrad wie in Beispiel 1) mit 27,5 g Acrylamid und 22.5 g Ν,Ν'-Methylen-bisacrylamid copolymer!- :s siert.

Ausbeute: 800 ml; ■

Ausschlußgrenze: 330000;

Maximalströmung (£/,„„): 26 ml/cnr/Std. 10 ,1

Beispiel 4

Auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise wurden 34 g Allyldextran (A/„ = etwa 70000; Substituiionsgrad: ϊ·,

1,14 mMol/g Dextranderivat) mit 47,5 g Ν,Ν'-Methylen-bisacrylamid copolymerisiert. 35 v:

Ausbeute: 750 ml;

Ausschlußgrenze: 5000000; ^

Maximalströmung (U₁₁₁₁₁,): 130 ml/cnr/Std.

40

Das Ausgangsmaterial war ein Allyldextran, welches analog zum Allyldextran des Beispiels 1 hergestellt worden war, wobei von einem Dextran mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht M_n von 70000 ausgegangen wurde.

Beispiel 5 45

Nach dem Verfahren des Beispiels 1 wurden 34 g Allyldextran (A/,, - etwa 500000: Substitutionsgrad: 1,20 mMol/g Dextranderivat) mit 47.5 g Ν,Ν'-Methylen-bisacrylamid copolymerisiert.

Ausbeute: 750 ml; 50

Ausschlußgrenze: 280000;

Maximalströmung (i/„„J: 100 ml/cnr/Std. :_;

Das als Ausgangsmaterial verwendete Dextran wurde in einer Weise hergestellt, welche analog zur Herstellungsweise des Allyldextrans gemäß Beispiel 1 war, wobei man von einem Dextran mit einem durchschnittü- 55 % chen Molekulargewicht von 500000 ausging. f

Beispiel 6 |

Auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise wurden 34 g 3-Allyloxy-2-hydroxy-propyldextran (A/,, = etwa ω if

2 000000; Substitutionsgrad: 0,50 mMol/g Dextranderivat) mit 47,5 g Ν,Ν'-Methylen-bisacrylamid copolymeri- j|

siert. |!

Ausbeute: 700 ml; . |

Ausschlußgrenze: 210000; ^ 65 |

Maximalströmung (£/_mu,): 90 ml/cnr/Std. f_f

Der als Ausgangsmaterial verwendete Dextranderivat wurde auf eine Weibe hergestellt, welche mit der Her- S

stellungsweise des Beispiels 1 für das Allyldextran analog war, wobei jedoch Allylbromid durch eine gleiche Gewichtsmenge Allylglycidyläther, urd das Dextran durch ein solches ersetzt wurden, welches ein durchschnittliches Molekulargewicht von 2000000 aufwies.

Beispiel 7

Nach dem Verfahren des Beispiels I, wobei jedoch anstelle vor· Toluol n-Heptan verwendet wurde, wurden 34 g Methallyldextran (M_n = etwa 3 500000; Substitutionsgrad: 0,64 mMol/g Dextranderivat) mit 47,5 g N,N'-Methylen-bisacrylamid copolymerisiert.

Ausbeute: 750 ml;

Ausschlußgrenze.· 4000000;

Maximalströmung (i/,„,„): 150 ml/cnr/Std.

IS Beispiel 8

Auf die in Beispiel 1 beschriebene Weise wurden 42,5 g 2-Chlor-ailyldextran (M_n = etwa 3000; Substitutionsgrad: 0,61 mMol/g Dextranderivat) mit 47,5 g N,N'-Methylen-bisacrylamid copolymerisiert.

:o Ausbeute: 750 ml;

Ausschlußgrenze: annähernd 20000000;

Maximalströmung (U₁₁₁₁,,): 400 ml/cnr/Std.

Das als Ausgangsmaterial verwendete 2-Chlor-allyldextran wurde nach dem Herstellungsverfahren des Beispiels 1 für Allyldextran hergestellt, wobei jedoch das Allylbromid durch eine gleiche Anzahl Mole an 2,3-Dichlorpropen ersetzt wurde.

Beispiel 9

Nach dem Verfahren des Beispiels 1 wurden 42,5 g Allyldextran (Λ/,, - etwa 70000; Substitutionsgrad: 1,14 mMol/g Dextranderivat) mit 12,5 g Divinylsulfon und 47,5 g Ν,Ν'-Methylen-bisacrylamid copolymerisiert.

Ausbeute: 800 ml;

Au-schlußgrenze: 450000;

.15 Maximalströmung (U₁₁₁₁₁J: 160 mi/cnr/Std.

Beispiel 10

Nach dem Verfahren des Beispiels ί wurden 30 g Allyldextran (M₁, = etwa 2000000; Substitutionsgrad: .4 mMol/g Dextranderivat) mit 20 ml Acrylsäure und 47,5 g Ν,Ν'-Methyien-bisacrylamid copolymerisiert. Der erhaltene schwach saure Kationenaustauscher hatte eine Gesamtkapazität von 0,24 Milliäquivalenten/ml abgesetztes Gel.

Ausbeute: 750 ml;

Maximalströmung (U₁₁₁₁,,): 515 ml/cnr/Std.

Die Perlen wurden in eine Chromatographiesäule gepackt und mit 0,05 m Natriumphosphatpuffer vom pH-Wert 6,0 ausgeglichen. Auf den Kopf des Betts wurde ein künstliches Gemisch von a-Chymotrypsinogen, Cytochrom c und Lysozym gebracht. Zur Eiution dieser 3 Proteine wurde ein kontinuierlicher Salzgradient angewandt. Die Proteine wurden gemäß ihrer Ladung fraktioniert und verließen die Kolonne in der Reihenfolge a-Chymotrypsinogen, Cytochrom c und Lysozym.

Claims (1)

Patentansprüche:

1. Teilchenformiges Gel aus einem Dexiranderivat, dadurchgekennzeichnet, daß es durch radikalische Copolymerisation

a) eines Vinyl- und/oder substituierte Vinylgruppen enthaltenden Dextranderivates mit

b) einer Divinylv crbindung der allgemeinen Formel

R' R"

:=c—β—c=

0)