DE2603122C3 - Verfahren zum Herstellen von Glykoproteinen sowie deren Verwendung - Google Patents

Verfahren zum Herstellen von Glykoproteinen sowie deren Verwendung

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Description

D:« Erfindung betrifft ein Verfahren zum Herstellen von Glykoproteinen aus Proteinen und Kohlenhydraten sowie weiterhin die Verwendung der erfindungsgemäß hergestellten Glykoproteine.
Es ist bekannt, das Glykoproteine in der Natur weitverbreitet vorkommende, biologisch wichtige Substanzen sind, die aus einem Proteinanteil und kovalcnt an funktionell Gruppen der Aminosäuren gebundenen Zuckern bestehen, welche laut Definition keine Nukleinsäuren sein sollen. Die Glykoproteine üben als Transportproteine, Inhibitoren und Komplementfaktoren wichtige biologische Funktionen aus. Beispielsweise läßt sich in der Medizin bei akuten oder chronischen rheumatischen Erkrankungen und bei Hautkrankheiten häufig eine Beteiligung von Glykoproteinen feststellen.
Das Verhältnis von Protein zu Polysaccharid in den Glykoproteinen kann innerhalb weiter Grenzen schwanken. Glykoproteine, in denen das Kohlenhydrat einen verhältnismäßig großen Teil des Gesamtmoleküls bildet (mehr als etwa 10%), werden allgemein als Mucoproteine bezeichnet.
Es wurde ein besonders einfaches Verfahren zur Herstellung von synthetischen Glykoproteinen gefunden, welche bei geeigneter Stabilisierung praktisch unbegrenzt lagerfähig sind. Vollkommen überraschend zeigte sich darüber hinaus, daß die so gewonnenen Glykoproteine die verschiedensten Arzneimittel hinsichtlich ihrer Wirkung ganz erheblich zu potenzieren vermögen und in vielen Fällen darüber hinaus eine Verbreiterung des Wirkungsspektrums herbeiführen.
Gegenstand der Erfindung ist einmal ein Verfahren zum Herstellen von stabilisierten Glykoproteinen, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß man eine wäßrige Aufschlämmung von Hefe auf Monosaccharide und natives Eiweiß als Ausgangsstoffen zur Einwirkung bringt, die dabei entstehenden Glykoproteine von dem Reaktionsmedium abtrennt, die abgetrennten Glykoproteine durch Zugabe von anorganischen Elektrolyten und/oder von Saccharid/Eiweiß-Gemischen stabilisiert, und unter schonenden Bedingungen trocknet.
Es war zwar bereits bekannt, daß sich Aminosäuren und dementsprechend Eiweißmoleküle mit Aldehyden und Acetalen unter Bildung unlöslicher Großmoleküle umsetzen. Es war jedoch überraschend, daß sich unter dem Einfluß von Hefefermenten Monosaccharide direkt
ίο mit Eiweiß zu löslichen Glykoproteinen umsetzen lassen.
Beim erfindungsgemäßen Verfahren kann man vorteilhaft eine wäßrige Aufschlämmung vun Hefe, z. B. saccharomyces cerevisiae oder torula utilis, verwenden.
π Die Umsetzung wird günstigerweise im Neutraibereich, das heißt bei pH-Werten von etwa 6 bis 7.5 und bei Raumtemperatur, das heißt etwa 18 bis 22°C durchgeführt.
Als Ausgangsmaterialien haben sich als Eiweiß-
Ai komponente Milcheiweiß und Gelatine und als Monosaccharidkomponente Lactose und Glucose besonders bewährt
Für die Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens sind, wie experimentell einwandfrei festgestellt wurde, Hefefermente als Katalysatoren erforderlich. Welche der Hefefermente die Glykoproteinbildung aus dem nativen Eiweiß und den Monosacchariden katalysieren, ist noch nicht im einzelnen untersucht worden.
Die Aufarbeitung des Reaktionsproduktes zur Isolierung der gewonnenen Glykoproteine kann nach den aus der Eiweißchemie an sich bekannten Methoden erfolgen. Vorzugsweise wird das Glykoprotein durch Dialyse von den Begleitstoffen abgetrennt und anschließend unter möglichst schonenden Bedingungen, zum
r> Beispiel durch Zentrifugieren, Lösungsmittelextraktion oder vorzugsweise Lyophilisation (Gefriertrocknung) getrocknet. Die erhaltenen Glykoproteine sind wasserlöslich und lassen sich aus Wasser umlösen. Ihr durchschnittliches Molekulargewicht kann in weiten Grenzen schwanken, liegt jedoch besonders bevorzugt im Bereich von 55 000 bis 65 000.
Die erfindungsgemäß hergestellten reinen Glykoproteine sind nicht stabil, so daß für die Weiterverwendung eine Stabilisierung erforderlich ist. Es wurde gefunden,
Γ) daß zur Stabilisierung sowohl anorganische Elektrolyte als auch Saccharid/Eiweiß-Gemische geeignet sind. Zur ersten Gruppe gehören insbesondere Salze der Metalle der ersten, zweiten und achten Gruppe des Periodensystems, zum Beispiel Chloride, Carbonate und Phosphste des Natriums, Kaliums, Magnesiums, Calciums und Eisens. Zur -weiten Gruppe gehören vorzugsweise Gemische aus Milcheiweiß, Lactose und Traubenzucker, obgleich auch andere Eiweißmaterialien und andere Aldehyd-Zucker verwendbar sind. Gemäß einer besonders bevorzugten Ausführungsform der Erfindung erfolgt die Stabilisierung in der Weise, daß der wäßrigen Glykoproteinlösung die anorganische Salze und eine Eiweiß/Zucker-Aufschlämmung zugefügt werden, worauf anschließend wie oben bereits beschrieben unter
w) schonenden Bedingungen getrocknet wird. Das Eiweiß/Zucker-Gemisch findet in einem großen Gewichtsiiberschuß. bezogen auf das Glykoprotein Anwendung, vorzugsweise in einem Verhältnis von IOJ bis 10* : I. insbesondere von clwa ΙΟ1: I. Das so erhaltene
h-, Glykoprotein ist stabil und für die weitere Verwendung geeignet.
Gegenstand der Erfindung ist ferner die Verwendung der erfindungsgemiiß hergestellten, stabilisierten
Glykoproteine zur Potenzierung von Arzneimitteln. Vollkommen überraschend wurde nämlich gefunden, daß die neuartigen Glykoproteine die Wirkung von Therapeutika, Hormonen und Chemotherapeutika zu steigern und zum Teil auch zu verbreitern vermögen. Zwar kann für diese Beobachtung keine vollständige Erklärung gegeben werden, doch kann angenommen werden, daß es sich um Effekte der Transportverbesserung handelt, da Glykoproteine Bestandteile der Zellmembranen sind. Beispielsweise könnte die ι ο Wirkungssteigerung bei Antibiotika auf einer verstärkten Hemmung spezifischer, bei der Bakterienzellwandsynthese notwendiger Transportpeptidasen beruhen.
Die potenzierende Wirkung wird bereits bei sehr niedrigen Glykoproteinkonzentrationen beobachtet, so daß diese vorzugsweise in einem Verhältnis von 1 Gewichtsteil Glykoprotein auf 102 bis 106 Gewichtsteile, vorzugsweise etwa 104 Gewichtsteile Arzneimittelwirkstoff eingesetzt we.den. Dabei ist die Wirkung gemäß den vorliegenden Beobachtungen dann optima!, wenn das durchschnittliche Molekulargewicht der Glykoproteine im Bereich von etwa 55 000 bis 65 000 liegt.
Wie durch die nachfolgenden Beispiele noch näher erläutert wird, liegen beispielsweise die MHK-Werte von erfindungsgemäßen Glykoprotein/Ampicillin-Kombinationen wesentlich niedriger als die von Ampicillin allein. Darüber hinaus werden Resistenzbildungen nicht beobachtet und das Wirkungsspektrum erstreckt sich überraschenderweise nicht nur auf alle grampositiven und gramnegativen Erreger sondern m auch auf Pilze und Viren, welche gegen Ampicillin allein resistent sind. Ähnlich überraschende Potenzierungseffekte zeigten sich auch bei anderen Antibiotika.
Glykoprotein/Dexamethason-Kombiiiationen zeigten die gleiche V/irkung wie die zehnfache Dosis von js Dexamethason allein. Eine ähnliche Wirkungssteigerung wurde bei den Kombinationen Glykoprotein/Norfenefrin und Glykoprotein/Phenylbutazon gegenüber den Wirkstoffen allein beobachtet.
Zur näheren Erläuterung der Erfindung sollen die nachfolgenden Beispiele dienen, auf welche die Erfindung jedoch nicht beschränkt ist.
Beispiel 1
Es wurden 10 g Milcheiweiß, 2 g Lactose und 1 g Hefe in 250 ml Wasser aufgeschlämmt und 24 Stunden lang in einem Dialysator bei 20°C gegen destilliertes Wasser dialysiert. Bereits nach 8 Stunden war Durchgang von Eiweiß mit Hilfe der Ninhydrinreaktion nachweisbar. Nach 24stündiger Dialyse wurde das Dialysat im Vakuum vorsichtig eingeengt und der feste Rückstand wurde aus wenig Wasser umgelöst, worauf die Kristalle in einem Exsikkator getrocknet wurden. Es wurde ein Glykoprotein mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht von 60 000 erhalten.
Zur Stabilisierung wurde jeweils I mg des Glykoproteins zu einer Aufschlämmung von 65 g Eiweiß/Zucker (50% Milcheiweiß, 25% Lactose, 25% Traubenzucker) gegeben, welche ferner Spuren Natrium- und Kaliumchlorid, Calcium- und Eisencarbonat m> sowie Magnesiumphosphat enthielt. Nach gründlicher Durchmischung wurde die Aufschlämmung vorsichtig unter vermindertem Druck bei Raumtemperatur eingeengt, worauf das Konzentrat durch Gefriertrocknung entwässert wurde, in dem so erhaltenen Pulver liegt das hi Glykoprotein in stabilisierter Form vor, so daß dessen potenzierende Wirkung unverändert bleibt.
In einem Konlrollversuch wurden 10 g Milcheiweiß und 2 g Lactose in 250 ml Wasser 24 Stunden lang in einem Dialysator bei 20°C gegen destilliertes Wasser in Abwesenheit von Hefe dialysiert. Auch nach dieser Zeit war kein Eiweiß in dem destillierten Wasser nachzuweisen, während sich die Zuckermenge annähernd gleichmäßig verteilt hatte. In Abwesenheit von Hefe findet somit keine Umsetzung statt.
Beispiel 2
Das Beispiel 1 wurde wiederholt, wobei jedoch 10 g Gelatine im Laufe von drei Stunden unter Rühren bei 20°C in 200 ml destilliertem Wasser aufgequollen und dann mit 3 g Glucose und 2 g Hefe versetzt wurden. Nach 24 Stunden wurde die Mischung bei Zimmertemperatur der Dialyse gegen destilliertes Wasser unterworfen. Bereits nach einer Stunde ließ sich mit Hilfe der Bleiacetatfällungsreaktion der Durchgang von Eiweiß durch die Dialysemembran nachweisen. Das Dialysat wurde wiederum im Vakuum bei 20° C eingeengt, worauf das erhaltene Rohprodukt umgelöst wurde. Das erhaltene Glykoprotein wies ein durchschnittliches Molekulargewicht von etwa 55 000 auf.
Die Stabilisierung des Glykoproteins erfolgte anschließend in der gleichen Weise wie in Beispiel I beschrieben.
Beispiel 3
Das gemäß Beispiel 1 hergestellte stabilisierte Glykoprotein wurde wie folgt mit D-(2-Amino-2-phe-
nylacetamido)-33-dimethyl-7-oxo-4-thia-1 -azabicyclo-[3.2.0]-heptan-2-carbonsäure (Ampicilün) kombiniert, indem 13,75 Teile Ampicillin-Natrium mit 86,25 Gewichtsteilen des Eiweiß/Zucker-Gemisches trocken vermischt wurden, wobei letzteres 0,001375 Gewichtsteile Glykoprotein (Verhältnis Glykoprotein: Ampicillin=! : IO4) enthielt.
In den nachfolgenden Vergleichsversuchen wurde das erfindungsgemäße Kombinationspräpa-at mit handelsüblichem Ampicillinnatrium vergleichen.
A. Bestimmung der
bakteriziden Wirksamkeit in vitro
Die bakterizide Wirkung wurde im Zylindertest mit Nährboden aus Agarfolie (PA) und beimpfter Agarfolie (PCA) nach 18stündiger Bebrütung bei J7°C geprüft. Der Testagar wurde hergestellt, indem Petrischalen mit einem Durchmesser von 10 cm mit 14 ml Grundagar (PA) gefüllt wurden. Nachdem der Boden fest geworden war, wurde er mit 4 ml beimpftem Agar (PCA) überschichtet. Der beimpfte Agar war vor Eingabe in die Petrischalen mit 0,1 ml einer unverdünnten Vorkultur der Testbakterien, die 18 Stunden lang bei 37°C gezüchtet worden waren, bei 40°C vermischt worden.
Nach einer Einwirkungszeit von 20 Minuten wurden sechs Stahlzylinder (Außendurchmesser 8 mm, Innendurchmesser 6 mm, Größe 10 mm) in die verfestigten Agarmassen eingedrückt. Je drei der zylindrischen Vertiefungen wurden mit der Vergleichssubstanz und der Testsubstanz in destilliertem Wasser gefüllt. Notwendig werdende Verdünnungen wurden mit Phosphatpuffer pH 7 vorgenommen. Die Diffusion wurde 18 Stunden lang bei 37°C durchgeführt. Anschließend wurde der Diffusionsbereich ermittelt und im Vergleich zu Standardproben die Empfindlichkeit an Hand des Hemmhofes errcichnct. Die gefundenen Werte sind in der folgenden Tabelle zusammengefaßt. Es handelt sich jeweils um Durchschnittswerte aus drei Einzelmessungen.
Tabelle 1
Bakterizide Wirksamkeit (MHK in yWirkstofT/ml)
Bakterienstamm Testsubstanz
Ampicillin Ampicillin/Glykoprotein
Staphylocaur. ATCC 11522 Staphyloc.aur. NCTC 6571 Staphylocaur. ATCC 6538 P (Penicillinasebildner) Streptpyogenes ATCC 8668 Streptfaecalis ATCC 8043 StrepUaecalis ATCC 10541 Streptfaecalis ATCC 19433 StrepLpneumon. ATCC 6301 StrepLpneumon. ATCC 6302 H. influencae ATCC 19418 Ps.aeruginosa NCTC 10662 Escherichia coli NCTC 10418
Die Zahlenwerte zeigen deutlich die um mindestens gegenüber unterschiedlichen Bakterienstämmen. Dabei
zwei Zehnerpotenzen verbesserte bakterizide Wirk- sind nicht nur die niedrigeren MHK-Werte für die
samkeit des mit dem erfindungsgemäß hergestellten erfindungsgemäße Kombination auffallend, sondern
Glykoprotein potenzierten Ampicillins gegenüber besonders überraschend ist die Wirksamkeit auch Ampicillin allein. Das Glykoprotein zeigt allein keine ?o gegenüber solchen Stämmen, welche Penicillinase
bakterizide Wirksamkeit. bilden und gegen welche Ampicillin allcinn vollkommen
Die nachfolgende Tabelle 2 zeigt die MHK-Werte wirkungslos ist.
0,06 0,001
0,06 0,001
resistant 0,001
0,03 0,0005
2,0 0,015
1,0 0,015
2,0 0,015
0,06 0,0005
0,06 0,0005
0,25 0,004
240 0,04
8 0,013
Tabelle 2
Bakterizide MHK-Werte in y/ml
Λ ~ Ampicillinnutrium. Λ+ G » Ampicillinniitrium + Glykoprotein (Verhältnis ΙΟ4:1).
Nr. Art ties Stammes Zahl von TestsubsUin/ ti
Stummen ?i
1 Proteus mirabilis a \
2 kein PenicilliniisobiUlner 50 Λ Η Ci
j Proteus mirabilis b A 5)
4 Penieilliniisebiklner 50 Λ Ki
S Escheriehia Λ
6 coli 50 A Ki
7 Stuphyl.uur.il Λ
it kein Penicilliniisebiklner 50 Λ + Ci
9 Suiphyl.uur.b Λ 53
IO Pcnicillinascbildncr 50 Λ + Ci
Ii Strcpt. A
12 pyogenes 50 Λ Ki
13 Aerobiicter Λ 50
Ϊ4 iierogcs 50 Λ + G
15 Pseudomonas Λ 50
16 aeruginosa 50 A + G
17 Sulmonella Λ
i"8 enteritid 50 Λ+ Ci
κ-. — — ρ ρ σ ρ ρ
■£*jONjjOO·' ■£-'■-« Nj
ρ ρ ρ ρ p
OOQQ QO
— ο 25 ο ο ς?
1^i Nj —· OO
1111
I I 18 2 18
I 8 3 1 14 8
2 4 4 4
11 2
6 12 28
8 12 24
11
2 2
I I
1 1
8 8
2 2 40
2 2 40
11 17 19
1 2 43 1 111
1 2 4 18 24
1 1 2 H) 36
7 9
9 10 II 13 7 22
3 15
B. Fungizide Wirksamkeit
Die Ml IK Werte für die fungizide Wirksamkeit des Kombinationspräparates wurden nach der Vorschrift der American Soc. of Clinical Microbiology. Manual of Clinical Microbiology, 2. Auflage (Washington D. C). bes ' nmi. Die in der nachfolgenden Tabelle 3 zusammengestellten MHK-Wertc sind deshalb besonders überraschend, weil Ampicillin selbst keine praktisch verwertbare fungizide Wirksamkeit aufv. e ist.
Tabelle 3
Teslstamri
Aspergillus fumigatum
Aspergillus flavus
Biastomyces dermatitidis
Candida albicans
Candida guillermondii
Candida pseudotropicalis
Candida stellatoides
Coccidioides immitis
Cryptococcus neoformans
Epidermophyton floccosum
Geotricurn candidum
Histoplasma capsulatum
Hi .oplasma duboisii
Microsporum audouinii
Microsporum fulvum
Microsporum gypseum
Microsporum persicolor
Nocardia asteroides
Rhodotorula glutinis
Rhodotorula rubra
Sporotrichum schenkii
Torulopsis glabata
Tnpjtnncic mntnlrvr.pcii
Trichophyton tonsurans
Trichomonas vaginalis
Trichosporum cutaneum
Tabelle 4
MIIK in y/nil 0.05-0,1 ö. i -Ü.3
0.05-0.1
0,05-0,1 0,05-0,1 0,1 -0,3 0.1 -0.3
0.05-0.1
0.05-0,1
0.1 -0.4 0,1 -0,4 0.05-0,1 0.05-0,3
0.1 -0,4 0,1 -0,3 0,05-0,3
C. Viriizide Wirksamkeit
Das erfindungsgemäße Ampicillin/Glykoprotcin-Konibinationspräparat wurde klinisch bei folgenden Virusinfektionen getestet:
IO Fälle von Influenza A Virus
10 Fälle von Influenza B Virus
3 Fälle von Parainfliienza-Virus.Typ I (HA 2)
") Fälle son Parainfliicn/a-Virus.Typ 2(Greer)
5 Fälle von Parainfluenza-Viriis.Typ 3(1 IA I)
10 Fälle von Respirator! syncytical Virus(l.ong)
10 ['alle von Adenovirus
Die Untersuchungen wurden mn Hilfe des Komplement-Fixationstests (Mikromelhode gemäß J. 1.. Sever, |. Immunol. 88. 320- 329 [I %2]) durchgeführt. Die Sera
u/pnn pinp
vierfache positive Reaktion bei einer Verdünnung von mindestens I : 4 gefunden wurde.
Die Behandlung erfolgte mit Tabletten, welche jeweils 55 mg Ampicillin-trihydrat und 5.5-)'-Glykoprotcin in stabilisierter Form enthielten. Es wurden am ernten und zweiten Tag viermal täglich zwei Tabletten, sowie am dritten bis siebten Tag viermal täglich eine Tablette verabfolgt. 40 der behandelten Fälle waren nach vier Tagen, die übrigen 15 Falle nach sieben Tagen vollständig symptomfrei.
Beispiel 4
Es wurde die potenzierende Wirkung von erfindungsgemäß hergestelltem Glykoprotein auf Dexamethason untersucht. Als Testsubstanzen fanden Dexamethason allein sowie Dexamethason in Kombination mit dem Glykoprotein (Gewichtsverhältnis 104 : I) Verwendung.
In klinischen Versuchen wurden 10 Patienten, welche an primärer chronischer Polyarthritis litten, im Rahmen einer Vergleichsuntersuchung behandelt, wobei zur Bestimmung der Wirksamkeit der Behandlungen der BSG- und ASLO-Titer herangezogen wurden.
Die erhaltenen Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 4 zusammengefaßt. Es zeigt sich überraschend, daß mit Hilfe des Kombinationspräparates gemäß Erfindung etwa die gleiche Wirkung erreicht wird, wie bei lOfach höherer Dosierung von Dexamethason allein.
Patient
Geschlecht Alter
Vor der Behandlung
BSG nach
1 Std. 2 Std.
ALSO i.E.
Nach 5 Tagen Behandlung mit 3 X täglich 0,5 mg Dexam. peroral
BSG nach ALSO i.E.
1 Std. 2 Std.
9. 10. Durchschnitt
6 6
6 9 $ $ $
9
35
38
39
36
40
37
38
40
39
38
65 60 70 52 65 60 50 50 45 50 56,7
90 100
90 100
800
900
800
1000
800
1000
900
800
1000
900 890
25 30 200
20 35 100
20 40 200
25 45 300
30 50 200
25 42 300
20 38 200
24 36 300
22 34 200
24 38 200
23,5 38,8 220
Tabelle 4 (Fortsetzung)
Patient Geschlecht Alter Nach 14 Tagen ohne nach 2 SUl. Behandlung Nach 5Tagen Behandlung mit i X täglich 2 Std. ALSO i.F-.
(Plazebos) 100 0,05mg Dexam.+ Glykoprotein (104: I) 35
90 peroral 30 100
BSG 90 ALSO i.K. BSCi nach 38 200
I Std. 88 1 Std. 41 200
1. <s 35 70 98 900 20 43 200
2. ό 38 60 92 900 20 40 300
3. 6 39 70 102 800 22 36 200
4. C? 36 60 92 900 24 39 200
5. c5 40 72 101 1000 31 35 iüü
6. ? 37 58 98 1000 24 41 100
7. 9 38 54 95,1 800 21 37,8 100
8. 9 40 48 900 26 170
9. 9 39 51 1000 24
10. 9 38 49 900 25
Durchschnitt 59,2 910 23,7
Beispiel 5
Es wurde die potenzierende Wirkung von erfindungsgemäß hergestelltem Glykoprotein auf Phenylbutazon untersucht. Die gleichen Patienten wie in Beispiel 4
Tabelle 5
wurden behandelt. Die in der folgenden Tabelle 5 zusammengestellten Ergebnisse des Reihenversuchs zeigen eine unerwartete Wirkungssteigcrung durch das Glykoprotein, welche es ermöglicht, die Dosis auf 1/10 zu reduzieren.
Patienl : Geschlecht Alter Vor der Behandlung 92 Nach 8 Tagen Be
handlung mit 3Xtäg-
lich 1,0g Phenyl
butazon oral		 62 Nach 14Tagen ohne
Behandlung
(Plazebos)		 nach
2 Std.		 Nach 8 Tagen Be
handlung mit 3 X
täglich 0,1g Phe
nylbutazon+Gly
koprotein (104: 1)
peroral		 2 Std.
BSG nach
1 Std. 2 Std.		 81 BSG nach
I Std. 2 Std.		 60 BSG ι
1 Std.		 90 BSG nach
1 Std.		 54
1. $ 35 72 88 38 50 70 84 34 50
2. C? 38 59 90 40 60 60 92 30 48
3. cT 39 68 95 38 45 65 92 36 50
4. C? 36 55 92 35 62 58 98 32 45
5. $ 40 62 101 38 58 60 100 34 52
6. 9 37 61 92 30 62 64 102 28 52
7. ? 38 56 92 28 60 58 98 30 48
8. ? 40 54 98 32 60 58 100 30 52
9. 9 39 48 92,1 28 57,9 50 102 26 54
10. 9 38 50 25 54 95,8 28 50,5
Durchschnitt 58,5 33,2 59,7 30,8
Beispiel 6
Es wurde die potenzierende Wirkung des erfindungsgemäß hergestellten Glykoproteins auf Norfenefrin klinisch untersucht, wobei 10 Patienten behandelt wurden, welche an Hypotonie litten. Die Wirkung der Testsubstanzen wurde durch Bestimmung des systol:- schen und des diastolischen Blutdrucks jeweils zur Mittagszeit ermittelt Am 1. bis 7. Tag erfolgte keine Behandlung, vom 8. bis 14. Tag wurden täglich einmal 3,0 mg Norfenefrin verabreicht, vom 15. bis 21. Tag
wurde die Behandlung wiederum unterbrochen (Verabreichung von Piazebos) und vom 22. bis 28. Tag wurden einmal täglich 03 mg Norfenefrin in Kombination mit Glykoprotein (Gewichtsverhältnis 104 :1) gegeben. Die Medikation erfolgte jeweils um 9.00 Uhr früh, also drei Stunden vor Bestimmung des Blutdruckes.
Die in der nachfolgenden Tabelle 6 zusammengefaßten Ergebnisse der Versuchsreihe zeigen, daß das Kombinationspräparat bei zehnfach niedrigerer Dosierung bezüglich des Norfenefrins etwa die gleiche Blutdruckerhöhung gibt.
13
Tabelle 6
Patient Geschlecht Alter
Blutdruck svslolisch/diastülisch am
7. Tag 14. Tag 21. Tag 28. Tag
C?
2. 3. 4. 5. 6. 7.
9 τ
10. ?
Durchschnitt
19 90/60 120/70 80/50 134/80
18 90/60 125/75 80/55 130/80
19 90/60 125/80 80/50 130/80
19 85/50 125/80 80/50 135/80
19 80/40 125/80 80/45 135/80
18 85/45 130/80 90/50 135/80
18 90/50 130/80 85/45 135/80
19 90/55 130/70 80/50 140/80
IO
1 •		 8V^O 130/80 90/50 135/80
19 85/50 120/70 85/50 135/80
87,0/52,0 126,0/76,5 83,0/49,5 134,4/80,0

Claims (5)

Patentansprüche:
1. Verfahren zum Herstellen von stabilisierten Glykoproteinen, dadurch gekennzeichnet, daß man eine wäßrige Aufschlämmung von Hefe auf Monosaccharide und natives Eiweiß als Ausgangsstoffen zur Einwirkung bringt die dabei entstehenden Glykoproteine von dem Reaktionsmedium abtrennt, die abgetrennten Glykoproteine durch Zugabe von anorganischen Elektrolyten und/oder von Saccharid/Eiweiß-Gemischen stabilisiert, und unter schonenden Bedingungen trocknet
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Monosaccharid Lactose oder Glucose verwendet.
3. Verfahren nach Anspruch 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, daß man als Eiweiß Milcheiweiß oder Gelatine verwendet
4. Verfahren nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man die Glykoproteine durch Dialyse abtrennt
5. Verwendung der nach Anspruch 1 bis 4 hergestellten stabilisierten Glykoproteine zur Herstellung von Arzneimitteln mit Potenzierung der Wirkstoffe, wobei man auf 1 Gewichtsteil Glykoprotein ΙΟ2 bis 106 Gewichtsteile Arzneimittelwirkstoff einsetzt.
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