DE2521062A1

DE2521062A1 - 7- eckige klammer auf alpha-carboxy- alpha-(2- oder 3-thienyl)-acetamido eckige klammer zu -3-(1-methyltetrazol-5- ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsaeuren und ihre salze

Info

Publication number: DE2521062A1
Application number: DE19752521062
Authority: DE
Inventors: Pierre Crooij
Original assignee: RIT RECH IND THERAPEUT
Current assignee: RIT RECH IND THERAPEUT
Priority date: 1974-05-22
Filing date: 1975-05-12
Publication date: 1975-12-04
Also published as: SE7504669L; AU8059475A; IL47176A0; IE41622L; ES437182A1; IE41622B1; LU72530A1; DK203575A; FR2271827A1; CA1041087A; GB1457237A; NL7505962A; JPS511489A

Description

RECHERCHE ET INDUSTRIE THERAPEUTIQUES, R.I.T. Genval, Belgien

" 7-/ct-Carboxy-a-(2- oder 3-thienyl)-acetamido/-^-(1 -methyltetrazol-5-ylthioraethyl)-3-cephem~4-carlDonsäuren und ihre Salze "

Priorität: 22. Mai 1974, V.St.A., Nr. 472 263 2. Januar 1975, V.St.A., Nr. 537 987

In der BE-PS 794 844 und in der Südafrikanischen Patentschrift 68/1208 sind a-Carboxy-a-thienylacetamidocephalosporansäuren beschrieben.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, 7-/ä-Carboxy-a-(2- oder 3-thienyl)-acetamido7-3-(1-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäuren und ihre Salze zu schaffen, die sich durch eine hohe antibiotische Aktivität bei in vitro- und invivo - Versiichen gegenüber verschiedenen pathogenen Keimen auszeichnen. Diese Aufgabe wird durch die Erfindung gelöst.

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-z-

Die Erfindung betrifft somit den in den Ansprüchen gekennzeichneten Gegenstand.

Die Verbindungen der Erfindung weisen in der Seitenkette in der 7-Stellung ein asymmetrisches Kohlenstoffatom auf. Somit können die entsprechenden Cephalosporine in der DL-, D- und L-Form existieren. Die Erfindung betrifft sämtliche derartigen Formen.

Als Salze kommen vorzugsweise die Alkalimetallsalze, beispielsweise die Natrium- und Kaliumsalze, die Ammoniumsalze sowie die Salze organischer Amine, wie das Triäthylammoniumsalz, in Frage.

Die 7-Aminocephalosporansäure und ihre Derivate sowie die Verfahren zu ihrer Herstellung sind bekannt. Allgemeine Verfahren zur Herstellung dieser Verbindungen sind in dem Buch von Edwin H. Flynn, Cephalosporins and Penicillins - Chemistry and Biology, Academic Press, New York, 1972, beschrieben. Verfahren zur Herstellung der 7-Amino-3-heterocyclothiomethylverbindungen sind in der US-PS 3 516 997 angegeben.

Die Herstellung der Verfahrensgemäß eingesetzten Verbindungen und das erfindungsgemäße Verfahren sind nachstehend schematisch erläutert:

509849/0974 ^J

— CH₉-COOH >

(a)

CH₂-COCl

(b)

CH₂-COOR

(c)

BuLi/co, Aktivierung

Acylierung

Hydrolyse

Γ4—CH-COOH \/ COOR P

(d)

-JJ C H-CON H

ST COOH

(g)

COOH

R bedeutet einen labilen organischen Rest, wie die Benzyl- oder tert.-Butylgruppe. Das Verfahren zur Herstellung des 2- oder 3-Thienylmalonsäureesters aus der 2- oder 3-Thiophenessigsäure erfolgt in an sich bekannter Weise. Die 2- oder 3-Thiophenessigsäure kann nach dem von P. Cagniant, Bull. Soc. Chim. France, (1949), Seiten 847 bis 853 und CR. Acad. Sei., Paris Ser. C 264 (1), Seiten 112 bis 114 (1967) beschriebenen Verfahren hergestellt werden. Die Carboxyl!erung sowie die Aktivierung" der Carboxylgruppe, beispielsweise durch Herstellung eines gemischten Anhydrids, Säurehalogenids oder eines aktivierten Esters, sind bekannt. Die 3-Thiophenessigsäure läßt sich auch nach dem in der BE-PS 777 570 beschriebenen Verfahren herstellen. Zur Acylierung der 7-Amino-3-(i-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure kann auch ein Kupplungsmittel, wie Dicyclohexylcarbodiimid oder Ν,Ν'-Carbonyldiimidazol, verwendet werden. Die Hydrolyse der Verbindung (f) erfolgt nach bekannten Methoden zur hydrolytischen Abspaltung labiler organischer Reste, wie der tert.-Butyl- oder Benzylgruppe, beispielsweise mittels Trifluoressigsäure bei Temperaturen um 0 C oder mittels α-Chymotrypsin.

Die Verbindungen der Erfindung sind breitspektrale Antibiotika mit einer minimalen Hemmkonzentration von 0,2 bis >200 ^ig/ml bestimmt nach der Standard-Agarverdünnungsmethode.

In Tabelle I ist die minimale Hemmkonzentration einiger Verbindungen der Erfindung, nämlich DL-7-/ä-Carboxy-a-(2~thienyl)-acetamido7-3-(1-methyltetra2ol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-car-

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bonsäure-dinatriumsalz (RIT 3733) und DL-7-/oc-Carboxy-a-(3-thienyl)-acetamide)/-3-(1-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure-dinatriumsalz (RIT 3838) mit 7-/α-(2-Thienyl )-acetamido/-3-(1-methyltetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (RIT 3734), DL-7-/ä-(3-Thienyl)-acetamidq/-3-(imethyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure (RIT 3839), 7-/a-Carboxy-a-(2-thienyl)-acetamidq/-cephalosporansäure (RIT 3759)» Cefazolin und 6-(α-Carboxy-phenylacetamido)-penicillansäure (Carbenicillin), gegenüber typischen gram-positiven und gram-negativen Keimen verglichen. Aus der Tabelle ist die überraschend hohe Aktivität der Verbindungen der Erfindung gegenüber Serratia marc, und Proteus morganii ersichtlich.

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2B°1062

Tabelle I

Verbindung	RIT 3838	RIT 3733	RIT* 3839	RIT 3734	RIT* 3759	Cefa- zolin	Carbe nicil lin
Staph.. aureus ATCC 653BP	4	<O_f25	(0,25	<O,25	<O,25	<0.25	1
Staph. aureus HH 127	4	■1,6	(0,25	ND	ND	<O;25	1
Staph. aureus SK 23390	16	0_r4	<O_f25	ND	ND	<0_f25	8
E. coli ATCC 10536	0,5	0,5	1	<O_f2 5	2	1	>256
Kleb, pneumo. SK 4200	2	2	2	<O;25	4	0,5	4
Kleb, pneumo. SK 1200	<Ο_;25	0,5	<0,25	ND	ND	(0,25	256
Salmonella RIT 23	2	2	Φ, 25	O₇ 5	4	(0,25	ND
Shigella RIT 26	(0,25	<O_f25	(0,25	<0.25	1	<0,25	1
Pseudo.aeruginosa RIT 15	>256	>256	.>256	>256	>256	>256	256
Serratia marc. RIT 302	16	32	>256	>256	ND	>256	>256
Serratia marc. RIT 303	0,5	1	32	32	ND	256	2
Entero.aerogenes RIT 229	1	3,1	16	ND	ND	64	4
Entero.aerogenes RIT 296	0,5	0,5	ND	ND	ND	128	ND
Entero.cloacae RIT 225	<O_;25	1	32	ND	16	>256	0_r5
Proteus morganii RIT 223	<0.25	0,5	128	ND	ND	256	0,5
Proteus morganii RIT 12	(0,25	(0,25	128	32	8	256	<O,25
Proteus mirabilis RIT 11	<0_T25	0,5	<O,25	1	4	(0,25	<O,25

ND = nicht bestimmt.
*^= aus der BE-PS 760.OB3 bekannt

Albino

Bei subkutaner Injektion an infizierte/Mäuse zeigen die Verbindungen der Erfindung ebenfalls eine signifikante antibiotische Wirkung. Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengefaßt:

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— 7 —

Tabelle II

Verbindung	ED₁	-_n (mg/kg) in	vivo	Proteus mor
	Enterobacter			ganii RIT446
RIT 3838	cloacae RIT272	Serratia marc	Proteus	41
RIT 3733	44	RIT 270	morganii RIT 309	34_ΛΟ8
Cefazolin	77; 9	35,7	40	>120
Carbenicillin	>120	36_;6	54	>120
109	>120	>120
>120	80

Die Verbindungen der Erfindung können oral oder parenteral in üblichen Darreichungsformen verabfolgt werden.

Die Beispiele erläutern die Erfindung. Die R_f-Werte wurden durch DünnschichtChromatographie an SELECTA TLC Plastic Sheets F 1500 LS 254 Kieselgel (K. Schleicher & Schüll) und

die H NMR-Spektren wurden mit einem Perkin Eimer R-12 (60 MIz) bestimmt. Die chemische Verschiebung ist ausgedrückt in ppm . Tetramethylsilan oder Natrium-2,2-dimethyl-2-silapentan-5-sulfonat wurde als innerer Standard (δ = 0,0 ppm) verwendet.

* Beispieli

Eine Lösung von 18,3 g 2-Thiophenacetylchlorid (hergestellt nach der von P. Cagniant, Bull. Soc. Chim. France, 19^9, Seiten 847 bis 853 beschriebenen Verfahren) in 9,25 g tert.-Butanol und 50 ml Diäthyläther wird unter Rückfluß erhitzt und tropfenweise mit einer Lösung von 15,2 ml Dimethylanilin in 25 ml Diäthyläther versetzt. Das Gemisch wird 5 Stunden unter

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β-

Rückfluß erhitzt und sodann filtriert. Das Filtrat wird dreimal mit jeweils 20 ml 1 η Schwefelsäure, einmal mit Wasser, zweimal mit jeweils 20 ml 1 η Natriumbicarbonatlösung und nochmals mit Wasser gewaschen, sodann über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck destilliert. Es wird der 2-Thienylessigsäure-tert.-butylester vom Kp. 87°C/1,2 Torr erhalten.

Beispiel 2

Eine Lösung von 11,8 ml Diisopropylamin in 55 ml Tetrahydrofuran wird unter wasserfreiem Stickstoff als Schutzgas mit 36 ml einer 15prozentigen Lösung von n-Butyllithium in Hexan versetzt. Das Reaktionsgemisch wird bei einer Temperatur von -5 bis -10⁰C gehalten. Sodann wird die Lösung unter wasserfreiem Stickstoff als Schutzgas mit 15 g 2-Thienylessigsäuretert.-butylester versetzt, 15 Minuten bei -10⁰C gerührt und sodann auf festes Kohlendioxid gegossen und 1 Stunde gerührt. Hierauf wird das Lösungsmittel abdestilliert, der Rückstand in 25 ml Wasser gelöst und mit 75 ml Diäthyläther extrahiert. Der Ätherextrakt wird unter vermindertem Druck eingedampft, um nicht umgesetzten 2-Thienylessigsäure-tert.-butylester abzutrennen. Die wäßrige Lösung wird mit 12 η Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,5 eingestellt und zweimal mit jeweils 50 ml Diäthyläther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte werden mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Es hinterbleibt der kristalline 2-Thienylmalonsäure-mono-tert.-butylester. Nim-Spektrum (CCl₄): 9,67 s (1H), 7,30 d (1H) (J 5,0 c./sec), _L 7,05 m (2H), 4,80 s (1H), 1,47 s (9H). _,

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Beispiel 3

Eine auf -5°C abgekühlte Lösung von 3,65 g 2-Thienylmalonsäure-mono-tert.-butylester in 30 ml Tetrahydrofuran wird mit 1,84 g N-Hydroxysuccinimid und 3,75 g Dicyclohexylcarbodiimid versetzt. Das Gemisch wird 4 Stunden bei Temperaturen von -10 bis 5°C gerührt und sodann filtriert. Das Filtrat wird zur Trockene eingedampft und der Rückstand mit 50 ml Tetrahydrofuran und 50 ml Diäthyläther versetzt. Das Gemisch wird filtriert und das Filtrat unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird aus Diisopropyläther umkristallisiert. Man erhält das N-/ä-tert.-Butoxycarbonyl-a-(2-thienyl)-acetoxy/-succinimid vom F. 89 bis 90⁰C.

Beispiel 4

Eine Lösung von 13,02 g 1-Methyl-5-mercapto-1,2,3,4-tetrazol (hergestellt nach dem von R. Stolle et al., J. Prakt. Chem. /2/, Bd. 124 (1930), Seiten 261 bis 279 beschriebenen Verfahren) in 800 ml eines 0,2 molaren Phosphatpuffers vom pH-Wert 6,5 bis 6,6 wird mit 20,4 g 7-Aminocephalosporansäure versetzt. Das Gemisch wird durch Zusatz von 21,5 ml Triäthylamin auf einen pH-Wert von 6,3 bis 6,4 eingestellt, 80 Minuten auf 70⁰C erhitzt, sodann auf 20⁰C abgekühlt, mit 65 ml 2 η Salzsäure auf einen pH-Wert von 3,5 eingestellt und hierauf 15 Minuten gerührt. Die entstandene Fällung wird abfiltriert, mit 200 ml V/asser, 200 ml Methanol und 200 ml Diäthyläther gewaschen und unter vermindertem Druck getrocknet. Das Rohprodukt wird in 300 ml 2 η Salzsäure gelöst, mit Aktivkohle behandelt und filtriert. Das Filtrat wird durch Zusatz von 75 ml konzen-

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trierter wäßriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 3,7 eingestellt. Es erfolgt Kristallisation. Das Kristallisationsmedium wird 30 Minuten bei 25⁰C gerührt und sodann unter vermindertem Druck filtriert. Die erhaltene Fällung wird nacheinander mit 200 ml Wasser, 200 ml Methanol und 200 ml Diäthyläther gewaschen und sodann bei 40⁰C über Phosphorpentoxid unter vermindertem Druck getrocknet. Man erhält die 7-Amino-3-(methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure. IL.-Wert: 0,44 (+0,10) im System Acetonitril-Wasser (80/20). NMR-Spektrum (D₂O - Na₂CO₃): 5,48 d (1H) (J 4,7 c./sec), 5,08 d (1H) (J 4,7 c./sec), 4,40 und 4,06 2d (2 χ 1H) (J 13 c./sec), 3,95 s(3H), 3,86 und 3,43 2d (2 χ 1H) (J 18 c./sec ).

Beispiel 5

Ein gekühltes Gemisch von 1,00 g 7-Amino-3-(i-methyltetrazol~ 5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure und 0,84 g Triäthylamin in 30 ml Acetonitril wird mit 1,02 g N-/ä-tert.-Butoxycarbo~ nyl-a-(2-thienyl)-acetoxy/-succinimid versetzt und 1 Stunde bei 25°C gerührt. Hierauf wird das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 100 ml eines Gemisches von Wasser und Äthylacetat (1:1) versetzt. Der pH-Wert der Lösung wird auf 7,0 bis 7,5 eingestellt und die organische Lösung abgetrennt. Sodann werden 50 ml Äthylacetat zugegeben, und das Gemisch wird mit 1 η Salzsäure auf einen pH-Wert von 2 bis 3 eingestellt. Nach der Abtrennung der organischen Phase wird die wäßrige Lösung zweimal mit jeweils 50 ml Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird mit

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2571062 γ π

Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet, mit Aktivkohle behandelt und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird in 5 ml Äthylacetat aufgenommen und in 25 ml Diisopropyläther eingegossen. Man erhält als Fällung die DL-7-/ä-tert.-Butoxycarbonyl-a-(2-thienyl)-acetamido7-3-(1-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure. R_f-Wert = 0,62 (+ 0,10) im System Methylisobutylketon/Methanol/ Ameisensäure (8O/I8/2).

NMR-Spektrum (DMSO-dg): 7,57 m (1H), 7,11 m (2H), 5,75 m (1H),5,18 m (1H + 1H), 4,37 s (2H), 4,01 s (3H), 3,73 m (2H),-1,44 s (9H);

NMR-Spektrum (Aceton-d₆): 7,38 d (1H) (J 5,0 c./sec), 7,04 m (2H), 5,77 q (1H) (J 4,5 c./sec), 5,13 m (1H + 1H), 4,28 s (2H), 3,96 s (3H), 3,76 m (2H), 1,45 s (9H).

Beispiel 6

Ein Gemisch von 0,675 g DL-7-/a-tert.-Butoxycarbonyl-α-(2-thienyl)-acetamidq/-3-(1-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem~4-carbonsäure, 7 ml Trifluoressigsäure und 0,7 ml Thiophenol wird 1 Stunde bei 0⁰C gerührt. Sodann wird der größte Teil des Lösungsmittels unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand in Diäthyläther-gegossen. Die entstandene Fällung wird abfiltriert, in Äthylacetat gelöst und mit Aktivkohle behandelt. Das Gemisch wird filtriert und das Filtrat in Diisopropyläther eingegossen. Man erhält als Fällung die DL-7-/ä-Carboxy-rt~(2-thlenyl)-acetamido/-3-(i-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure.

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R_f-Wert = 0,55 (+. 0,10) im System Methylisobutylketon/Methanol/

Ameisensäure (8O/I8/2) oder 0,29 (+0,10) im System Acetonitril/Wasser (8 : Z).

NMR-Spektrum (Aceton-dg): 8,44 d (1H) (J 8,5 c./sec), 7,47 d

(1H) (J 5,0 c./sec), 7,14 m (2H) (J 5,0 c./sec), 5,87 dd (1H) (J 8,5 & 4,7 c./sec), 5,19 d+s (1H + 1H) (J 4,7 c./sec), 4,44 s (2H), 4,00 s (3H), 3,78 m (2H).

NMR-Spektrum (DMS0-d₆): 9,41 d (1H) (J 8,5 c./sec), 7,54 d

(1H) (J 5,0 c./sec), 7,10 m (2H) (J 5,0 c./sec), 5,76 dd (1H) (J 8,5 & 4,7 c./sec), 5,16 d+s (1H + 1H) (J 4,7 c./sec), 4,35 s (2H), 3,99 s (3H), 3,72 (2H).

Das Natriumsalz wird durch Auflösen der Säure in 100 ml Äthylacetat, Zusatz von 5 ml Wasser und tropfenweiser Zugabe einer 1 η wäßrigen NatriumMcarbonatlösung bis zum pH 4,4 und Gefriertrocknen der Lösung hergestellt.

Beispiel 7

Ein Gemisch von 22,5 g 2-ThiophenacetylChlorid (hergestellt nach dem von P. Cagniant, Bull. Soc Chim. France, 1949, Seiten 847 bis 853 beschriebenen Verfahren), 50 ml Diäthyläther und 16 ml Benzylalkohol wird 18 Stunden gelinde unter Rückfluß erhitzt. Danach wird das Reaktionsgemisch unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand in 100 ml Diäthyläther aufgenommen. Die Ätherlösung wird einmal mit 50 ml einer 8,5prozentigen wäßrigen NatriumMcarbonatlösung und zweimal mit 25 ml. Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft und schließ-

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lieh destilliert. Es wird der Z-Thienylessigsäurebenzylester erhalten.

R_f-Wert = 0,59 (+ 0,10) im System Benzol/Aceton (8/2). • NMR-Spektrum (CCl₄): 7,32 s (5H), 7,18 m (1H), 6,93 m (2H), 5,12 s (2H), 3,70 s (2H).

Bei s ρ i e 1 8

Eine auf -10°C abgekühlte Lqsung von 7,7 ml Diisopropylamin in 35 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wird tropfenweise und unter wasserfreiem Stickstoff als Schutzgas mit 25,6 ml einer 15prozentigen Lösung von n-Butyllithium (3,9 g) in Hexan versetzt. Die Temperatur wird unter -10⁰C gehalten. Bei dieser Temperatur werden sodann tropfenweise und innerhalb 30 Minuten 11,6 g 2-Thienylessigsäurebenzylester zugegeben. Das Gemisch wird auf festes Kohlendioxid gegossen. Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 25 ml Wasser und 75 ml Diäthyläther behandelt. Die Ätherlösung, die nicht-umgesetzten 2-Thienylessigsäurebenzylester enthält, wird abgetrennt und zur Trockene eingedampft. Die wäßrige Lösung wird mit 12 η Salzsäure auf einen pH-Wert von 2 eingestellt und zweimal mit jeweils 50 ml Diäthyläther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte werden mit Wasser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Im Rückstand verbleibt der 2-Thienylmalonsäure-monobenzylester.

R_f-Wert = 0,30 (+. 0,10)* im System Benzol/Aceton (8/2). NMR-Spektrum (CCl₄-CDCl₃ l/l): 7,30 s (5H), 7,20-6,80 m (3H), 6,82 s (1H), 5,19 s (2H), 4,92 s (1H).

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2 B ? ■> O 6 2

^Γ -14- T

Beispiel 9

Eine auf -5⁰C abgekühlte Lösung von 2,5 g 2-Thienylmalonsäure-monobenzylester in 100 ml Tetrahydrofuran wird mit 1,15 g N-Hydroxysuccinimid und 2,06 g Dicyclohexylcarbodiimid versetzt. Das Gemisch wird 15 Minuten bei einer Temperatur von 0 bis -5°C und sodann 135 Minuten bei 20⁰C gerührt und hierauf filtriert. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft. Das erhaltene rohe N-/ä-Benzyloxycarbonyl-a-(2-thienyl) acetoxyy-succinimid wird in 50 ml Acetonitril gelöst, und diese Lösung wird rasch zu einem Gemisch von 3,3 g DL-7-Amino-3-(1-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure in 50 ml Acetonitril und 2,8 ml Triäthylainin gegeben. Das Gemisch wird 1 Stunde gerührt. Sodann wird das Lösungsmittel abdestilliert, der Rückstand in Wasser aufgenommen, die wäßrige Lösung mit 12 η Salzsäure auf einen pH-Wert von 1,0 angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird über Natriumsulfat getrocknet, zur Trockene eingedampft und der Rückstand in Aceton aufgenommen.■Die Acetonlösung wird mit Aktivkohle entfärbt und über Kieselgel filtriert. Das Filtrat wird eingedampft, nochmals in 100 ml Äthylacetat aufgenommen und filtriert. Nach dem Eindampfen unter vermindertem Druck wird die Lösung in Diisopropyläther eingegossen. Es fällt die DL-7-./ä-Benzyloxycarbonyl~a- (2-thienyl) -acetamido/-3- (1 -methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure aus. R_f-Wert = 0,79 (+ 0,10) im System Acetonitril/Methanol/Wasser (6/3/1).

NMR-Spektrum (DMSO-dg): 9,44 d (1H) (J 7,2 c./sec), 7,60-7,45 m (1H), 7,34 s (5H), 7,06 m (2H), 5,67 q (1H) (J 7,2 und

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4,7 c./sec), 5,40 - 5,00 ra+s (2 χ 1H + 2H), 4,31 m (2H), 3,94 s (3H), 3,64 m (2H).

Beispiel 10

100 mg DL-7-/ä-Benzyloxycarbonyl-oi:- (2-thienyl) -acetamidq/-3-(i-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-cart)onsäure und 20 mg α-Chymotrypsin werden in 20 ml eines Phosphatpuffers (0,2 molar; pH 7,0) gelöst und 75 Minuten auf 37⁰C erwärmt. Danach wird das Gemisch mit 10 η Salzsäure auf einen pH-Wert \ von 2,0 eingestellt und mit Äthylacetat extrahiert. Der Äthylacetatextrakt wird über Natriumsulfat getrocknet. Der größte Teil des Lösungsmittels wird sodann abdestilliert und der' Rückstand in 100 ml Diisopropyläther gegossen. Es fällt die DL-7-Zä-Carboxy-a-(2-thienyl)-acetamido/-3-(1-methyltetrazol-5-ylthiornethyl)~3-cephem-4-carbonsäure aus, die die gleichen Eigenschaften hat, wie das-Produkt von Beispiel 6.

Das Natriumsalz wird durch Auflösen der Säure in Äthylacetat, Zugabe einer Natrium-2-äthylhexanoatlösung und langsame Zugabe von Äther bis zur Ausfällung des Natriumsalzes hergestellt.

Beispiel 11

Eine Lösung von 9,25 g (0,058 Mol) 3-Thiophenacetylchlorid in 7,5 ml tert.-Butanol und 30 ml Diäthyläther wird unter Rückfluß erwärmt und tropfenweise mit einer Lösung von 8,5 ml Dirnethylanilin in 20 ml Diäthyläther versetzt. Das Gemisch wird 5 Stunden unter Rückfluß erhitzt und danach filtriert. Das Filtrat wird nacheinander zweimal mit 20 ml Wasser, ein-

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2 5 ? Ί Ο 6 2

mal mit 20 ml 1 η Salzsäure, einmal mit 20 ml Wasser, zweimal mit 20 ml 1 η v/äßriger Natriumbicarbonatlösung und zweimal mit 20 ml Wasser gewaschen, sodann über Calciumchlorid getrocknet und unter vermindertem Druck destilliert. Es wird der 3-Thienylessigsäure-tert.-butylester vom Kp. 107 bis 120°C/ 8 Torr erhalten.

R_f-Wert = 0,65 (+ 0,10) in Chloroform. NMR-Spektrum (CDCl₃): 7,15 m (3H), 3,51 s (2H), 1,44 s (9H).

Beispiel 12

Eine Lösung von 7 ml Diisopropylamin in 50 ml Tetrahydrofuran wird unter wasserfreiem Stickstoff als Schutzgas bei einer Temperatur von -10 bis -15⁰C rasch mit 65'ml einer 5prozentigen Lösung von n-Butyllithium in Hexan versetzt. Nach 15minütigem Stehen wird das Gemisch mit einer Lösung von 8,5 g 3-Thienylessigsäure-tert.-butylester in 21 ml Tetrahydrofuran versetzt. Nach 5 Minuten wird das Reaktionsgemisch auf festes Kohlendioxid gegossen und 1 Sturide gerührt. Das Lösungsmittel wird verdampft, der Rückstand in 100 ml Wasser aufgenommen und zweimal mit 100 ml Diäthyläther extrahiert. Der Ätherextrakt wird zweimal mit 20 ml Wasser gewaschen. Die vereinigten wäßrigen Lösungen v/erden mit 12 η Salzsäure auf einen pH-Wert von 2 eingestellt und nacheinander einmal mit 90 ml Diäthyläther, einmal mit 45 ml Diäthyläther und zweimal mit· 25 ml Diäthyläther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte werden zweimal mit 20 ml Wasser gewaschen, über Calciumchlorid getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Es hinterbleibt der kristalline 3-Thienylmalonsäure-niono-tert.-butylester. . _!

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25"Ί062

R_f-Wert = 0,60 (+ 0,10) in Chloroform.

NMR-Spektrum (CDCl₃): 10,31 s (1H), 7,29 m (3H), 4,71 s (1H), 1,45 s (9H).

Beispiel 13

Eine auf -15⁰C abgekühlte Lösung von 7,9 g (32 mM) 3-Thienylmalonsäure-mono-tert.-butylester in 100 ml Tetrahydrofuran wird mit 4,2 g N-Hydroxysucciiiimid und 8,3 g Dicyclohexylcarbodiimid versetzt, 3 Stunden bei -15°C gerührt und sodann filtriert. Das Filtrat wird zur Trockene eingedampft und der Rückstand zweimal mit 75 ml Tetrahydrofuran behandelt, um den Dicyclohexylharnstoff abzutrennen. Die Lösung wird zur Trockene eingedampft und der ölige Rückstand mit 70 ml Diisopropyläther digeriert. Die Kristalle werden abfiltriert, zweimal mit 15 ml Diisopropyläther gewaschen und unter vermindertem Druck getrocknet. Es hinterbleibt das N-/ä-tert.-Butoxycarbonyl-a-(3-thienyl)-acetoxy_7-succinimid vom F. 97 bis 98⁰C. R_f-Wert - 0,77 (+ 0,10) im System Chloroform/Acetonitril/V/asser/Ameisensäure (35/58/5/2).

NMR-Spektrum (CDCl₃): 7,33 m (3H), 4,96 s (1H), 2,80 s (4H), 1,50 s (9H).

Beispiel 14

Eine Lösung von 13,02 g 1-Methyl~5-mercapto-1,2,3,4-tetrazol (hergestellt nach dem von R. Stolle et al., J. Prakt. Chem. /2/, Bd. 124 (1930), Seiten 261 bis 279 beschriebenen Verfahren in 800 ml einer 0,2 molaren Phosphatpufferlösung vom pH-Wert 6,5 bis 6,6 wird mit 20,4 g 7-Aminocephalosporansäure

L- ■ ^J

c η λ ο 7 α / η ο τ /

25Ή062

versetzt. Das Gemisch wird durch Zusatz von· 21,5 ml Triäthylarain auf einen pH-Wert von 6,3 bis 6,4 eingestellt, 80 Minuten auf 7O⁰C erhitzt, rasch auf 20⁰C abgekühlt, durch Zusatz von 65 ml 2 η Salzsäure auf einen pH-Wert von 3,5 eingestellt und sodann 15 Minuten gerührt. Die entstandene Fällung wird abfiltriert, nacheinander mit 200 ml Wasser, 200 ml Methanol und 200 ml Diäthyläther gewaschen und unter vermindertem Druck getrocknet. Das Rohprodukt wird in 300 ml 2 η Salzsäure gelöst, mit Aktivkohle behandelt und filtriert. Das Filtrat wird mit 45 ml konzentrierter wäßriger Ammoniaklösung auf einen pH-Wert von 3,7 eingestellt. Es erfolgt Kristallisation. Das Kristallisationsmedium wird 30 Minuten bei 25⁰C gerührt und sodann unter vermindertem Druck filtriert. Die Fällung wird nacheinander mit 200 ml Wasser, 200 ml Methanol und 200 ml Diäthyläther gewaschen und bei 40°C über Phosphorpentoxid und unter vermindertem Druck getrocknet. Man erhält die 7-Amino-3-(1-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)~3~cephem-4-carbonsäure. R~-Wert = 0,44 (+ 0,10) im System Acetonitril/Wasser (80/20). NMR-Spektrum (D_£0 - Na₂CO₃): 5,48 d (1H) (J 4,7 c./sec), ) 5,08 d (1H) (J 4,7 c./sec), 4,40 und 4,06 2d (2 χ 1H) (J 13 c./sec), 3,95 s (3H), 3,86 und 3,43 2 d (2 χ 1H) (J 18 c./sec.).

Beispiel 15

Ein Gemisch von 9,5 g 7-Amino-3-(i-methyltetrazol-5-ylthiornethyl)~3-cephem-4-carbonsäure und 8,1 g Triäthylamin in 120 ml Wasser wird rasch mit 11,4 g N-/öc-tert.-Butoxycarbonyl-a-(3~ thienyl)-acetoxy./-succinimid versetzt. Das Gemisch wird 30 Mi-

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2 5 ° 1 O 6 2

nuten bei 30°C gerührt und sodann filtriert. Das Filtrat wird unter vermindertem Druck eingedampft, der Rückstand in 80 ml destilliertem Wasser aufgenommen und mit 80 ml Äthylacetat versetzt. Die wäßrige Lösung wird mit 0,1 η Salzsäure auf einen pH-Wert von 2 eingestellt und dreimal mit jeweils 40 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Äthylacetatextrakte werden über Natriumsulfat getrocknet, mit Aktivkohle entfärbt und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird in 20 ml Äthylacetat aufgenommen und mit 250 ml Diisopropyläthor versetzt. Das Rohprodukt wird in 300 ml Äthylacetat gelöst, 30 Minuten gerührt und sodann filtriert. Das Filtrat wird mit 5 g Aktivkohle entfärbt, über Dicalite S.H. filtriert und das Filtrat zum größten Teil eingedampft. Der Rückstand wird mit 400 ml Diisopropyläther versetzt. Es wird eine Fällung der DL-7-/ä-tert. -Butoxycarbonyl-oc- (3~thienyl)-acetamido/-3-(1-methyltetrazol-5-ylthiomethyl-3~cephem-4-carbonsäure erhalten.

R_f-Wert = 0,695 (+ 0,10) im System Chloroform/Acetonitril/ Wasser/Ameisensäure (35/58/5/2).

NMR-Spektrum (DMSO):' 9,20-dd (1H), 7,34 m (3H), 5,68 m (1H), 5,10 dd (1H), 4,89 s (1H), 4,31 m (2H), 3,95 s (3H), 3,68 m (2H), 1,41 s (9H).

Beispiel 16

Ein Gemisch von 4 g (7,25 mM) DL-7-/ä-tert.-Butoxycarbonyl-a-(3-thienyl)-acetamidoV^r-3-(1-methyl tetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure, 25 ml Trifluoressigsäure und 2,5 ml Thiophonol wird 70 Minuten bei O⁰C gerührt. Sodann wird der

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größte Teil des Lösungsmittels unter vermindertem Druck abdestilliert und der Rückstand mit 300 ml Diisopropyläther versetzt. Das Rohprodukt wird in 350 ml Äthylacetat gelöst und die Lösung filtriert. Der größte Teil des Filtrats wird unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand mit 300 ml Diisopropyläther versetzt. Nach dem Filtrieren und Trocknen wird das Produkt in 300 ml Äthylacetat gelöst und sodann mit 50 ml Wasser extrahiert und mit 0,1 η Natriumbicarbonatlösung auf einen pH-Wert von 5,7 eingestellt. Die wäßrige Lösung wird gefriergetrocknet. Man erhält das Dinatriümsalz der DL-7-/ä-Carboxy-a-(3-thienyl)-acetamido7-3-(1-methyltetrazol-■ 5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäure.

R_f-Wert = 0,52 (+ 0,10) im System Chloroform/Acetonitril/Wasser/Ameisensäure (35/58/5/2).

NMR-Spektrum (D₂O): 7,35 m (3H), 5,69 d (1H), 5,10 dd (1H), 4,21 m (2H), 4,05 s (3H), 3,59 m (2H).

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Claims

Patentansprüche

7-/ä-Carboxy-a-(2- oder 3-thienyl)-acetamido7-3-(1-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carbonsäuren der allgemeinen Formel

4 —CH-CONH

Ti

S COOH

COOH

und ihre Salze.
2. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise 7-Amino-3-(1-methyltetrazol-5-ylthiomethyl)-3-cephem~4-carbon säure mit einem aktivierten Derivat des 2- oder 3-Thienylmalonsäure-mono-tert.-butylesters oder -monobenzylesters umsetzt, die entstandene Verbindung hydrolysiert und gegebenenfalls mit einer Base in ein Salz überführt.
3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß man als aktiviertes Derivat das N-^a-tert.-Butoxycarbonyl- oder -benzyloxycarbonyl-ct-/!- oder 3-thienyl/-acetoxyJ-suecinimid einsetzt.
4. Arzneimittel, bestehend aus mindestens einer Verbindung gemäß Anspruch 1 und üblichen Trägerstoffen und/oder Verdünnungsmitteln und/oder Hilfsstoffen.

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