DE2429647A1 - Verfahren zum faerben von gewebe - Google Patents
Verfahren zum faerben von gewebeInfo
- Publication number
- DE2429647A1 DE2429647A1 DE2429647A DE2429647A DE2429647A1 DE 2429647 A1 DE2429647 A1 DE 2429647A1 DE 2429647 A DE2429647 A DE 2429647A DE 2429647 A DE2429647 A DE 2429647A DE 2429647 A1 DE2429647 A1 DE 2429647A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- solution
- tissue
- haematoxylin
- trichloroacetic acid
- formaldehyde
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 239000004744 fabric Substances 0.000 title claims description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 30
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 28
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Natural products C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N (+)-haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2C[C@]2(O)[C@H]1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-XJKSGUPXSA-N 0.000 claims description 20
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims description 14
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims description 14
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-aminophenyl)-(4-imino-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]aniline;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(=N)C(C)=CC1=C(C=1C=CC(N)=CC=1)C1=CC=C(N)C=C1 AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XGZVUEUWXADBQD-UHFFFAOYSA-L lithium carbonate Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]C([O-])=O XGZVUEUWXADBQD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 4
- 229910052808 lithium carbonate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 229940037003 alum Drugs 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 claims description 2
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 claims 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 claims 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 5
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 5
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- UKWHYYKOEPRTIC-UHFFFAOYSA-N mercury(ii) oxide Chemical compound [Hg]=O UKWHYYKOEPRTIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 3
- HSEYYGFJBLWFGD-UHFFFAOYSA-N 4-methylsulfanyl-2-[(2-methylsulfanylpyridine-3-carbonyl)amino]butanoic acid Chemical compound CSCCC(C(O)=O)NC(=O)C1=CC=CN=C1SC HSEYYGFJBLWFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N picric acid Chemical compound OC1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229940052223 basic fuchsin Drugs 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- AFAIELJLZYUNPW-UHFFFAOYSA-N pararosaniline free base Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C(C=1C=CC(N)=CC=1)=C1C=CC(=N)C=C1 AFAIELJLZYUNPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/0231—Chemically defined matrices, e.g. alginate gels, for immobilising, holding or storing cells, tissue or organs for preservation purposes; Chemically altering or fixing cells, tissue or organs, e.g. by cross-linking, for preservation purposes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N2001/305—Fixative compositions
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Description
DR. WALTER KRAUS DIPLOMCHEMiKER · DR.-ΙΝΘ. ANNEKATE WEISERT DIPL.-ING. FACHRICHTUNG CHEMIE
D-8 MÜNCHEN 19 · FLÜSGENSTRASSE 17 · TELEFON 089/177061
1028 Wt/My
APPLIED BIOSCIENCE, Fairfield, N. J. 07006/USA
Verfahren zum Färben von Gewebe.
Die Erfindung betrifft ein überlegenes und sehr
schnell ablaufendes histologisches Färbungsverfahren, bei
dem gefrorenes Gewebe kurz in eine wäßrige, alkoholische Lösung, die Trichloressigsäure, Zinkchlorid und Formaldehyd
enthält, und dann in eine zweite Lösung, die Haematoxylin enthält, eingetaucht wird. Das Gewebe kann gewünschtenfalls
weiter gegengefärbt werden.
; Die Erfindung betrifft ein histologisches Färbeverfahren
für Gewebeproben, das vor der mikroskopischen Untersuchung durchgeführt wird. Das selektive Färben von Gewebezellen,
um sowohl verschiedene Teile der Zelle zu identifizieren als auch unterschiedeliche Arten der Zelle zu unterscheiden,
ist ein gut bekanntes diagnostisches Verfahren. Geeignete Verfahren ergeben reproduzierbare Ergebnisse, sie
sind jedoch oft zeitraubend und mühevoll. Bei einer typischen kryogenischen Anwendung werden zwei Hauptverfahren angewendet.
Das Gewebe wird schnell gefroren und in Teile geschnitten.
Diese Teile werden fixiert, beispielsweise in Formaldehyd oder Alkohol, mit einer einzelnen Farbe gefärbt, mit einem
Deckglas versehen und untersucht. Diese Präparation ist nicht dauernd und besitzt eine beschränkte Verwendungsdauer von
409883/1261
nur einigen Stunden. Obgleich dies eine mehr oder weniger
schnelle Untersuchung' des Gewebes ermöglicht, besitzt das Verfahren verschiedene Nachteile. Der größte Nachteil ist
der, daß die Proben bei den unterschiedlichen mikroskopischen Präparationen verschieden aussehen, und dadurch wird die
Schwierigkeit einer richtigen Interpretation noch erhöht.
Um eine genauere mikroskopische Analyse und eine permanente Präparation des ursprünglichen Gewebes zu ermöglichen,
verwendet man ein zweites Verfahren. Hier wird ein gefrorenes Gewebe aufgetaut, fixiert, dehydratisiert, mit
organischen Lösungsmitteln durchtränkt, in Paraffin eingebettet und geteilt. Diese Teile werden ihrerseits von Paraffin
befreit, hydratisiert, gefärbt, enthydratisiert und mit einem
Deckglas versehen. Dies ermöglicht eine permanente mikroskopische Präparation des Materials, das ursprünglich mit
dem temporären kryogenischen Verfahren untersucht wurde. Wie angegeben, dauert dieses Verfahren extrem lange, es ist
mühevoll und die Proben sind keine genauen Wiedergaben des' ursprünglichen Gewebes. Zusätzlich zu einer möglichen Beschädigung,
die durch die Eiskristallbildung hervorgerufen wird, wird ein Teil des Gewebes im Verlauf der chemischen und
physikalischen Verarbeitung verloren.
Das Zusammenwirken dieser beiden Verfahren und ihre inhärenten Nachteile können beispielsweise im Falle von vermuteter
Bösartigkeit des Gewebes erläutert werden. Typischerweise wird von dem Patienten im Verlauf der Untersuchungsoperation
eine Gewebeprobe entnommen, und diese wird sofort dem ersten Verfahren unterworfen, damit der Chirurg eine
unmittelbare Entscheidung treffen kann, im Hinblick auf die Art und das Ausmaß des gesamten chirurgischen Eingriffs. Die
Herstellung von permanenten mikroskopischen Proben zur Bestätigung der Diagnose kann so viel v/ie 24 Stunden oder langer
erfordern, und dadurch wird die mikroskopische Unter-
40 9883/1261
suchung von Geweben, die während·eines chirurgischen Eingriffs
entfernt werden., auf die weniger genauen temporären Präparationen begrenzt, da der Patient im Operationssaal
nicht während der langen Zeit verbleiben kann, die für die permanente Präparation erforderlich ist. Weiterhin sind die
Endergebnisse der Gev/ebeuntersuchungen erst nach einigen
Tagen begannt, und dadurch werden die natürlichen Sorgen des
Patienten oder seiner Familie erhöht oder verlängert. Da die .Proben, die für die Diagnose verwendet werden, oft nicht
für die Bewahrung geeignet sind, müssen mühevollen Konservierungsstufen
durchgeführt werden, wenn der medizinische Zustand oder die Politik des Krankenhauses eine Aufbewahrung
der Proben für mehr als einige Tage erfordert.
.-■■-■ In der·deutschen Patentschrift (Patentanmeldung
P 24 11 003.0 entsprechend der US-Anmeldung mit der Serial No. 333,732) wird ein neues histologisches Fixiermittel
beschrieben, das eine Lösung aus Trichloressigsäure, Zinkchlorid und Formaldehyd in einem wäßrigen niedrigen
Alkanol enthält. Dieses Fixiermittel verursacht gegenüber den Zellen eine minimale Schädigung, es ist bei der
tatsächlichen Verwendung praktisch und es kann bei einer
Vielzahl von Gewebearten verwendet werden. Es wurde nun gefunden, daß dieses Fixiermittel bei einem überlegenen Verfahren
zur Färbung von Gewebeproben verwendet werden kann. Das gesamte Färbüngsverfahren kann in einigen Minuten beendigt
sein, und die entstehenden, gefärbten Proben sind ausreichend beständig, so daß sie während Monaten ohne besondere
Vorsichtsmaßnahmen aufbewahrt werden können.
Das Gewebe, das gefärbt werden soll, wird schnell nach irgendeinem der gut bekannten Verfahren gefroren. Das
gefrorene Gewebe wird dann mit einem üblichen Mikrotom geschnitten
und die Teile werden dann in eine Fixierlösung,
die eine wäßrige, niedrige alkanolische Lösung von Trichlor-
409883/126 1
essigsaure, Zinkchlorid und Formaldehyd enthält, eingetaucht.
Der Schnitt taut natürlich bei dieser Eintauchung auf, aber er ist in wenigen Sekunden fixiert. Eine typische Eintauchzeit
beträgt 5 Sekunden, -und obgleich diese Zeit ausgedehnt werden kann, erhält man bei längerem Eintauchen keine Vorteile.
Der Schnitt wird anschließend in eine .wäßrige Lösung
aus Haematoxylin eingetaucht. Haematoxylin ist ein gut bekanntes Färbemittel und chemisch ist es 7,11b-Dihydrobenz[b]-indeno[i,2-d]pyran-3,4,6a,9,10(6H)-pentol.
Diese Stufe des Verfahrens kann einstufig oder zweistufig durchgeführt v/erden. Bei einer Ausführungsform wird der Schnitt in die Lösung
aus Haematoxylin eingetaucht, bis die Einfärbung vollständig ist, im allgemeinen 10 bis 30 Sekunden. Bei einer
zweiten Ausführungsform wird die Probe während einer bestimmten Zeit in die erste Haematoxylin-Lösung eingetaucht, entnommen
und mit V/asser gespült und dann in eine zweite Haematoxylin- Lösung eingetaucht. Bei einer bevorzugten zweiten
Ausführungsform wird vor dem Eintauchen der Probe in die
zweite Haematoxylin-LÖsung ein kurzes Eintauchen in eine Lösung aus Lithiumcarbonat durchgeführt, welches als Beschleuniger
wirkt. So kann man beispielsweise den Schnitt, der aus der ersten Fixierlösung entnommen wird, in eine erste
Haematoxylin-Lösung während einer Zeit von ungefähr 15 Sekunden
eintauchen, dann spült man durch Eintauchen in Wasser und taucht kurz in eine Lösung aus Lithiumcarbonat, beispielsweise
während einer Zeit von 4 Sekunden, ein und dann wird erneut in eine Haematoxylin-Lösung während ungefähr
5 Sekunden eingetaucht. Zu diesem Zeitpunkt ist die Probe bzw. der Schnitt fixiert und die Zellkerne sind mit einem
bläulich-purpurfarbenen Ton gefärbt. Die Probe kann dann zur Lagerung gewaschen und getrocknet werden, wobei das
letztere auf bekannte Weise durch stufenweises Eintauchen in progressiv stärker hydrophile organische Medien, beispielsweise
95%iges Äthanol, absolutes Äthanol und Xylol, erfolgt.
409883/1261
Gewünschtenfalls können die Proben gegengefärbt
oder ergänzend gefärbt werden, wobei man irgendwelche der gut bekannten Unterscheidungsfarben verwendet, beispielsweise
Eosin, ein Fuchsin wie Rosanilin, Pararosanilin, .
Magenta II, Magenta III oder saures Fuchsin, Picrinsäure
oder ähnliche Verbindungen.
Wie oben angegeben, enthält das Fixiermittel eine Lösung aus Trichloressigsäure, Zinkchlorid und Formaldehyd
in einem wäßrigen niedrigen Alkenol. Das niedrige Alkanol kann irgendeines der gut bekannten Alkohole sein mit 1 bis
4 Kohlenstoffatomen, beispielsweise Methanol, Äthanol, n-Propanol, Isopropanol, n-Butanol und die verschiedenen ■
verzweigten Butanole. Methanol ist sehr zufriedenstellend und im Hinblick auf die Wirtschaftlichkeit und seine
Lösungsmittelkraft bevorzugt. Der wäßrige niedrige Alkohol wird ein Volumenverhältnis von Alkanol zu gesamtem V/asser
von ungefähr 1:1 bis ungefähr 1:3 besitzen. Ein bevorzugtes
Verhältnis beträgt ungefähr 1:1,1 bis ungefähr 1:1,5. In dem
wäßrigen Alkanol ist eine Mischung aus Trichloressigsäure,
Zinkchlorid und Formaldehyd gelöst. Ein Verhältnis'von Zinkchlorid
zu Trichloressigsäure, bezogen auf Gewichtsbasis, beträgt von ungefähr 2:1 bis ungefähr 4:1. Ein Verhältnis
von 3:1 ist besonders zufriedenstellend. Das Verhältnis von Formaldehyd zu Trichloressigsäure beträgt von ungefähr 8:1
bis ungefähr 10:1, ein typisches ,Verhältnis beträgt 9:1.
Eine bevorzugte Endkonzentration beträgt ungefähr
10% Gew./Vol. Trichloressigsäure, Zinkchlorid und Formaldehyd in dem wäßrigen niedrigen Alkanol.
Das Haematoxylin kann in irgendeiner der üblichen Formen
vorliegen. Diese umfassen Harris1 Haematoxylin, Mayer's
Haemalum, Erlich1s Haematoxylin, das Alaun-haematoxylin,
wie es von Lie et al, Mayo Clinic Proceedings, 46, 319 (Mai
1971), beschrieben wird, u.a.
4 09883/1261
Eine besonders nützliche Präparation ist jene, die Haematoxylin, gelbes Quecksilber(II)-oxyd und Aluminiumammoniumsulfat
in wäßrigem Glycerin enthält; dieses Reagens ist im allgemeinen als Alaun-haematoxylin bekannt.
Im folgenden wird die Präparation der verschiedenen Lösungen näher erläutert.
Präparationen
A. Fixierlösung
A. Fixierlösung
400 g Zinkchlorid werden mit 120 g Trichloressigsäure
und 2,64 1 37%igem Formaldehyd (entsprechend 1055 g 100?6igem Formaldehyd) in 7,3 1 95%igem Methanol (entsprechend
7 1 100?6igem Methanol) und 7 1 Wasser vermischt. Es
tritt eine leichte exotherme Umsetzung auf und nachdem die · Lösung Zimmertemperatur wiedererlangt hat, wird sie filtriert
und in Behälter abgefüllt. Diese Lösung, die leicht als Gewebefixiermittel verwendet werden kann, entspricht
einer 9,8%igen Gew./Vol. Lösung von Trichloressigsäure, Zinkchlorid
und Formaldehyd, wobei das Gewichtsverhältnis von Zinkchlorid zu Trichloressigsäure ungefähr 3,33:1 beträgt
und das Gewichtsverhältnis von Formaldehyd zu Trichloressigsäure ungefähr 9:1 beträgt, in wäßrigem Methanol,
wobei das Volumenverhältnis von Alkanol zu gesamtem Wasser (einschließlich des getrennt zugefügten Wassers, welches
in dem 95%igen Methanol enthalten ist, und des Wassers, das in dem 37%igen Formaldehyd enthalten ist) ungefähr 1:1,3
beträgt.
B. (1) Färbelösung
Zu einer Lösung aus 0,67 g Haematoxylin in 33 ml absolutem Äthanol fügt man 33 ml destilliertes Wasser, 33 ml
Glycerin, 3,3 ml Eisessig und einen Überschuß an Kalium-
409883/126 1
" . _■'■.;■■■■ - 7 -
aluminiumsulfat. Die Mischung wird gut geschüttelt und mehrere Wochen stehengelassen, danach kann sie verwendet
werden. ■
B. (2) Färbelösung
1 g Haematoxylin, 0,5 g gelbes Quecksilber(II)-oxyd
und 12 g;Aluminium-ammoniumsulfat werden mit 140 ml destilliertem
Wasser vermischt. Die Mischung wird 10 Minuten gekocht, gekühlt und mit destilliertem Wasser auf das ursprüngliche
Volumen aufgefüllt. 60 ml Glycerin und 8 ml
Eisessig werden zugegeben und die Mischung wird dann filtriert.
C. Gegenfärbungslösung
Diese kann gekauft werden und umfaßt wäßrige Lösungen
aus Eosin, basischem Fuchsin, Picrinsäure u.a.
Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung, ohne sie zu beschränken.
B eis pi ell
Gefrorene Gewebeproben werden in einem Mikrotom zu einer Dicke von ungefähr 5yu geschnitten. Die einzelnen
Schnitte werden in die Fixierlösung während ungefähr 5 Sekunden und dann in die Färbelösung B(2) während ungefähr
15 Sekunden eingetaucht. Nachdem man in destilliertes Wasser während ungefähr 3 Sekunden eingetaucht hat, wird der Schnitt
in eine gesättigte Lösung aus Lithiumcarbonat während ungefähr
4 Sekunden eingetaucht und dann unmittelbar danach sofort wieder in eine Färbelösung B(2) während ungefähr
5 Sekunden eingetaucht. Der fixierte und gefärbte Schnitt
wird dann 3 Sekunden mit destilliertem Wasser gespült und
nacheinander in 95?£ges Äthanol, absolutes Äthanol, Xylol Nr.1
und Xylol Nr. 2 eingetaucht, wobei jedes Eintauchen ungefähr
2 Sekunden beträgt, und dann wird er mit einem Deckglas bedeckt. 409883/1261
Ein gegengefarbter Schnitt wird entsprechend dem Verfahren von Beispiel 1 erhalten, wobei man die Probe mit
destilliertem Wasser während 3 Sekunden nach ihrer Entfernung aus dem zweiten Eintauchen in die Färbelösung B(2)
spült, sie in 95#iges Äthanol während 2 Sekunden eintaucht und sie dann in eine Standard-Eosinlösung während ungefähr
15 Sekunden eintaucht. Der so differenzierte Schnitt wird dann nacheinander in 95%iges Äthanol, absolutes Äthanol
und Xylol, wie in Beispiel 1 beschrieben, eingetaucht.
4 0 9 8 8 3/1261
Claims (7)
- PatentansprücheVerfahren zum Färben von Gewebe für die mikroskopische Untersuchung, dadurch gekennzeichnet, daß man(a) gefrorenes Gewebe in eine 8 bis 20%ige Gew./Vol. Lösung aus einer Mischung aus Trichloressigsäure, Zinkchlorid und Formaldehyd, worin das Gewichtsverhältnis von Zinkchlorid zu Trichloressigsäure von ungefähr 2:1 bis ungefähr 4:1 beträgt und das Gewichtsverhältnis von. Formaldehyd zu Trichloressigsäure von ungefähr 8:1 bis ungefähr 10:1 beträgt, in einem wäßrigen Alkanol, worin das Volumenverhältnis von Alkanol zu gesamtem Wasser ungefähr 1:1 bis ungefähr 1:3 beträgt, eintaucht, und(b) anschließend das Gewebe mindestens ein Mal in eine wäßrige Lösung eintaucht, die-0,1 bis 2% Haematoxylin enthält.
- 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Lösung (a) eine 9 bis 11?£ige Gew./Vol. Lösung aus einer Mischung aus Trichloressigsäure, Zinkchlorid ,und Formaldehyd ,worin das Gewichtsverhältnis von Zinkchlorid zu Trichloressigsäure von ungefähr 3:1 bis ungefähr 3,5:1 und das Gewichtsverhältnis von Formaldehyd zu Trichloressigsäure von ungefähr 8:1 bis ungefähr 10:1 beträgt, in wäßrigem Methanol verwendet, worin das Volumenverhältnis von Methanol zu gesamtem Wasser ungefähr 1:1,1 bis ungefähr 1:1,5 beträgt.
- 3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Haematoxylin mit Alaun komplex gebunden ist.
- 4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß mindestens einem Eintauchen des Gewebes in die Lösung aus Haematoxylin ein Eintauchen des Gewebes in eine Lösung aus Lithiumcarbonat vorangeht.\ 4 09883/1261
- 5· Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Gewebe mindestens ein Mal nach dem Eintauchen in
die Lösung aus Haematoxylin gegengefärbt wird. - 6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß man als Gegenfarbe Eosin verwendet.
- 7. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß man als Gegenfarbe : Fuchsin verwendet.-4098 83/1261
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US37327673A | 1973-06-25 | 1973-06-25 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE2429647A1 true DE2429647A1 (de) | 1975-01-16 |
Family
ID=23471724
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE2429647A Pending DE2429647A1 (de) | 1973-06-25 | 1974-06-20 | Verfahren zum faerben von gewebe |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5049026A (de) |
| AU (1) | AU7049174A (de) |
| BE (1) | BE816786R (de) |
| BR (1) | BR7405213D0 (de) |
| CA (1) | CA1037366A (de) |
| DD (1) | DD112519A5 (de) |
| DE (1) | DE2429647A1 (de) |
| DK (1) | DK338574A (de) |
| ES (1) | ES427568A1 (de) |
| FI (1) | FI193074A (de) |
| FR (1) | FR2234558B2 (de) |
| HU (1) | HU168582B (de) |
| NL (1) | NL7408556A (de) |
| NO (1) | NO742274L (de) |
| SE (1) | SE7407899L (de) |
| ZA (1) | ZA743995B (de) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH068818B2 (ja) * | 1987-11-27 | 1994-02-02 | サクラ精機株式会社 | 生体組織検査用固定液 |
| EP1605244A1 (de) * | 2004-06-09 | 2005-12-14 | Boon, Mathilde Elisabeth | Fixierungszusammensetzung |
| CN110823666A (zh) * | 2019-11-27 | 2020-02-21 | 李雄 | 苏木素在制备减少病理常规切片染色后褪色的染色剂中的应用 |
-
1974
- 1974-06-14 SE SE7407899A patent/SE7407899L/ not_active Application Discontinuation
- 1974-06-20 DE DE2429647A patent/DE2429647A1/de active Pending
- 1974-06-21 ZA ZA00743995A patent/ZA743995B/xx unknown
- 1974-06-21 CA CA203,034A patent/CA1037366A/en not_active Expired
- 1974-06-21 NO NO742274A patent/NO742274L/no unknown
- 1974-06-22 ES ES427568A patent/ES427568A1/es not_active Expired
- 1974-06-24 HU HUAI236A patent/HU168582B/hu unknown
- 1974-06-24 BE BE145822A patent/BE816786R/xx active
- 1974-06-24 DD DD179409A patent/DD112519A5/xx unknown
- 1974-06-24 DK DK338574A patent/DK338574A/da unknown
- 1974-06-24 FI FI1930/74A patent/FI193074A/fi unknown
- 1974-06-25 BR BR5213/74A patent/BR7405213D0/pt unknown
- 1974-06-25 JP JP49072710A patent/JPS5049026A/ja active Pending
- 1974-06-25 FR FR7422137A patent/FR2234558B2/fr not_active Expired
- 1974-06-25 NL NL7408556A patent/NL7408556A/xx unknown
- 1974-06-25 AU AU70491/74A patent/AU7049174A/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BE816786R (fr) | 1974-12-24 |
| DK338574A (de) | 1975-02-24 |
| ZA743995B (en) | 1975-06-25 |
| FR2234558A2 (de) | 1975-01-17 |
| NL7408556A (de) | 1974-12-30 |
| CA1037366A (en) | 1978-08-29 |
| AU7049174A (en) | 1976-01-08 |
| SE7407899L (de) | 1974-12-27 |
| JPS5049026A (de) | 1975-05-01 |
| BR7405213D0 (pt) | 1975-01-28 |
| NO742274L (de) | 1975-01-20 |
| FI193074A (de) | 1974-12-26 |
| HU168582B (de) | 1976-06-28 |
| ES427568A1 (es) | 1976-07-16 |
| DD112519A5 (de) | 1975-04-12 |
| FR2234558B2 (de) | 1977-02-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0026420B1 (de) | Verfahren und Einbettungssystem zur Einbettung von Gewebsproben | |
| EP0493386B1 (de) | Verfahren und vorrichtung zur ermittlung von chemischen zuständen von lebendem, tierischem oder menschlichem gewebe unter verwendung von magnetischer resonanz | |
| DE3026185C2 (de) | Zusammensetzung, geeignet zur Untersuchung biologischer Gewebe oder Flüssigkeiten und Verfahren zu deren Anwendung | |
| DE3109252A1 (de) | Verfahren und zusammensetzung zur bestimmung einzelner leukozyten durch metachromatische farbstoffdifferentialabsorption | |
| DE2725961A1 (de) | Reagens fuer untersuchung auf protein und verfahren zur untersuchung auf protein | |
| Cowdry | The relations of mitochondria and other cytoplasmic constituents in spinal ganglion cells of the pigeon... | |
| EP2823282B1 (de) | Formalinfreie fixierungsmittel für histologische färbungen von gewebeproben | |
| US3997656A (en) | Tissue staining method and composition | |
| DE2951783A1 (de) | Mittel zum eichen von geraeten zum messen der haematologischen werte von vollstaendigen blutproben und verfahren zu seiner herstellung | |
| DE1767931C3 (de) | Diagnostisches Mittel und Verfahren zum Nachweis von Urobilinogen-Körpern | |
| DE19928820A1 (de) | Fixiermittel für Zellen und Gewebe von Lebewesen | |
| DE2429647A1 (de) | Verfahren zum faerben von gewebe | |
| DE2521402B2 (de) | Diagnostisches mittel zum nachweis von urobilinogen | |
| DE1673004A1 (de) | Teststreifen zur Harnstoffbestimmung | |
| DE2424955C3 (de) | Verfahren zum Herstellen eines mikroskopischen Objektträgers | |
| Bell | The staining of fats in epithelium and muscle fibers | |
| DE2651060C3 (de) | Differential-diagnostische Spermauntersuchung | |
| Beneš | Detection of lipids in the plant meristematic cell with the aid of Sudan black staining | |
| DE1598739B2 (de) | Mittel zur bestimmung der cholinesteraseaktivitaet im serum | |
| Meigs | Microscopic studies of living smooth muscle | |
| Macallum | The termination of nerves in the liver | |
| DE3043984A1 (de) | Verfahren zur bestimmung der zusammensetzung binaerer fluessigkeitsgemische | |
| EP0459371A1 (de) | Verfahren und Mittel zur Bestimmung der bakteriologischen und zytologischen Beschaffenheit von Rohmilch | |
| DE2206697C3 (de) | Verfahren und Schnellreagenz zum Nachweis von Morphin und Morphinderivaten | |
| SU1091058A1 (ru) | Способ окраски кровеносных сосудов внутренних органов на гистологическом препарате |