DE2365582A1 - Verfahren zur herstellung von 7-acylamidocephalosporinverbindungen - Google Patents

Description

Verfahren zur Herstellung von 7-Acylamidocephalosporin-

verbindungen

Die Cephalosporine sind wertvolle Antibiotica für die Behandlung von pathogenen Infektionen bei Menschen und Tieren und haben ferner verschiedene technische Anwendungsmöglichkeiten. Diese Produkte können aus Cephalosporinen, wie Cephalosporin C und 7=t-Methoxy-7ß-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-3~carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure hergestellt werden, die ihrerseits aus Fermentationsflüssigkeiten gewonnen werden, weiche durch Züchten geeigneter Stämme von Mikroorganismen erzeugt werden. So kann z.B. Cephalothin aus Cephalosporin C hergestellt werden, indem man die Aminoadipoylseitenkette durch eine 2-Thienylacetylgruppe ersetzt. 7ß-Thienylacetamido-7^oi-~methoxy-3~carbamoyloxymethy l-3-cephem-4 -carbonsäure,

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ein wertvolles Antibioticum, kann aus 7~Aminocephalosporansäure oder 7o£-Methoxy-7ß-(D-5-amino-5-carboxyvaleramido)-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-¹t-carbonsäure nach bekannten Verfahren hergestellt werden. Diese Verfahren zur Herstellung von Cephalosporinen leiden aber an verschiedenen Nachteilen. In erster Linie fallen die Cephalosporine bei der Fermentation in niedriger Ausbeute an, und der Ersatz der Aminoadipoylgruppe erfordert eine Reihe von Verfahrensstufen, die sich technisch schwer durchführen lassen. Es sind auch andere Verfahren zur Herstellung von Cephalosporinen, bei denen man von dem Penicillinkern ausgeht, sowie synthetische Methoden bekannt. Diese Verfahren lassen sich aber ebenfalls in technischem Massstabe schwer durchführen und liefern niedrige Ausbeuten an den gewünschten Produkten. Daher hat man nach anderen Verfahren zur Herstellung von Cephalosporinverbindungen in grosstechnischem Massstabe gesucht.

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, ein neues Verfahren für die. Totalsynthese von Cephalosporinen zur Verfügung zu stellen. Eine weitere Aufgabe der Erfindung ist es, neue Verbindungen zur Verfügung zu stellen, die sich als Zwischenprodukte für die Herstellung von bekannten antibiotischen Cephalosporinverbindungen eignen.

Es wurde gefunden, dass sich 7-Azidocephalosporinverbindungen nach dem folgenden Fliessdiagramm herstellen lassen:

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H₂N

(ORJ

(Λ)

HCIIH

.P

(OR) (ID

Hierin hat B die Bedeutung H, CH₅ oder OCH₅.

Bei dem Verfahren (A) wird der Ausgangsstoff, ein cc-Aminophosphonoessigsäureester (Ί), mit einem Thionoameisensäureester ssu dem entsprechenden Thioformamidoester (II) umgesetzt. Als Ausgangsstoff (I) können "bei dem obigen Verfahren verschiedene Ester verwendet werden. So eignen sich z.B. für dieses Verfahren Phosphonoester, wie z.B. die niederen Dialkylester oder die Diarylester.

Zu repräsentativen Estern, die verwendet werden können, gehö-

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ren diejenigen, bei denen die Reste R gleich oder verschieden eein können und z.B. Methyl, Äthyl, Propyl, Butyl, Pentyl, Phenyl, Benzyl und dergleichen "bedeuten können. Die Carboxylgruppe der Ausgangsphosphonoverbindung kann blockiert oder geschützt sein, vorzugsweise durch eine Gruppe (R₁), die sich zum Schluss abspalten lässt, so dass man die freie Säureform des Cephalosporins erhält, ohne den ß-Lactamring zu zerstören. Pur diesen Zweck geeignete Schutzgruppen sind dem Fachmann bekannt. Beispiele für geeignete Schutzestergrupperi sind Alkohole, Phenole und dergleichen. R₁ ist vorzugsweise eine Alkyl- oder Aralkylgruppe mit 1 bis etwa 20 Kohlenstoffatomen. So kann R₁ eine niedere Alkylgruppe, wie Methyl, Äthyl oder tert.Butyl, eine substituierte Alkylgruppe, wie Phthalimidomethyl, Suecinimidomethyl, Phenacyl, eine substituierte Phenacylgruppe, wie p-Bromphenacyl, eine ß-substituierte Äthylgruppe, wie 2,2,2-£richloräthyl, 2-Methylthioäthyl oder 2-(p-Methylphenyl)-äthyl, eine Alkeny!gruppe, wie 3-Butenyl, Propenyl, Allyl usw., eine Alkoxyalkylgruppe,. wie Methoxymethyl, eine Aryloxyalkylgruppe, wie p-Methoxyphenoxymethyl, eine Aralkyloxyalkylgruppe, wie Benzyloxymethyl, Benzyl oder eine substituierte Benzylgruppe, wie p-Nitrobenzyl, p-Methoxybenzyl, 3,5-Dinitrobenzyl, 2,4,6-Trimethylbenzyl oder 5t5-I>ichlor-4-hydroxybenzyl, Benzhydryl oder eine substituierte Benzhydrylgruppe, wie p-Methoxybenzhydryl und dergleichen, sein. Bevorzugte Schutzgruppen sind Methyl, tert.Butyl, Phenacyl, p-Bromphenacyl, p-Nitrobenzyl, 2,2,2-Trichloräthyl, p-Methoxybenzyl,* Benzhydryl, Methoxymethyl und p-Methoxyphenoxymethyl.

Beispiele für Ausgangsverbindungen (I) sind a-Aminodiäthylphosphonoessigsäureti^ichloräthylester, cc -Aminodiphenyl phosphonoessigsäuretricnloräthylester, a-Aminodimethylphosphonoessigsäurephenylester, a-Aminodiäthylphosphonoessigsäure-pmethoxybenzylester, a-Aminodiphenylphosphonoessigsäurebenzhydrylester, a-Aminodimethylphosphonoessigsäure-tert.butyl-

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ester, α-Aminodipropylphosphonoessigsäure-tert.butylester, cc-Aminodiphenylphosphonoessigsäuremethylester, α-Aminodiäthylphosphonoessigsäurephenacyl- oder -p-bromphenacylester, a-Aminodimethylphosphonoessigsäuremethoxymethylester, a-Aminodimethylphosphonoessigsäure-p-methoxyphenoxymethylester und a-Aminodimethylphosphonoessigsäure-p-nitrobenzylester.

Das Verfahren (A) zur Umwandlung der Verbindung (I) in das entsprechende Thioformamidoderivat (II) wird durchgeführt, indem man den Phosphonoessigsäureester mit einem Thionoameisensäureester, wie einem niederen Alkylester (Alkylgruppe mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen) bei Temperaturen von 0 bis 100° C umsetzt. Die Umsetzung kann z.B» mit Thionoameisensäureäthylester bei 0° C durchgeführt werden. Vorzugsweise führt man die Umsetzung im allgemeinen in inerten lösungsmitteln, wie Benzol, Tetrachlorkohlenstoff, Methylenchlorid oder Hexan, durch. Die Umsetzung kann aber auch in Gegenwart von flüssigem Schwefelwasserstoff bei Raumtemperatur durchgeführt werden. Nach beendeter Umsetzung wird das Lösungsmittel zwecks Gewinnung des gewünschten Produkts abgedampft.

Andere Verfahren zum Thioformylieren des oc-Aminophosphonoessigsäureesters sind die folgenden:

(a) 0-Äthylthioformiat oder Ithylthionoformiat bei 0 bis 30° C in Lösungsmitteln, wie CCl., CH₂Cl₂, HgS oder in Abwesenheit von Lösungsmitteln; ' .

(b) Katriumdithioformiat oder Kaliumdithioformiat bei 0 bis· 30° C in Lösungsmitteln, wie H₂O, H₂0-Äther, H₂0-Äthyl-

. alkohol oder H₂O-Methylalkohol;

(c) H₂S + HCN bei 0 bis 30° C. in Lösungsmitteln, wie Methylalkohol, Äthylalkohol, V/asser, Wasser-Methylalkohol oder Wasser-Äthylalkohol.

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In der Stufe (B) des Verfahrens wird das Thioformamido-Zwischenprodukt (II) mit einem substituierten Aceton der allgemeinen Formel R¹CH₂COCH₂X umgesetzt, in der R¹ Wasserstoff, eine niedere Alkoxygruppe, wie Methoxy, Propoxy usw., einen Aryloxyrest (Phenoxy usw.)» einen Aralkyloxyrest (Benzyloxy usw.), eine nied.Alkoxy-nied.alkoxygruppe, wie Methoxymethoxy, eine heterocyclische Thiogruppe, wie 5-(1-Methyltetrazolyl)-thio und 2-(5-Methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thio, Halogen (Chlor, Brom, Fluor), eine Acyloxygruppe, wie Acetoxy, Isobutyryloxy und dergleichen, einen Carbamoyloxyrest, einen N-substituierten Carbamoyloxyrest, einen N,N-disubstituierten Carbamoyloxyrest, dessen Substituenten Alkylgruppen ("vorzugsweise niedere Alkylgruppen mit 1 bis .6 Kohlenstoffatomen, z.B. Methyl, Äthyl, Propyl, tert.Butyl, Hexyl) sein können, einen halogenierten niederen Alkylrest (z.B.Trichloräthyl . usw.), einen niederen Alkoxyrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen (z.B. Methoxy, Äthoxy, Propoxy usw.), einen araliphatischen Rest (z.B. Benzyl, einen substituierten Benzylrest, wie p-Methoxybenzyl, Phenethyl oder einen substituierten Phenethylrest, wie p-Methoxyphenethyl, p-Aminophenethyl usw.) oder Halogen (Chlor, Brom, Fluor) bedeutet.. Als niedere Alkylgruppen werden hier solche mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen bezeichnet. X ist Halogen (Brom, Fluor, Jod oder Chlor), Mesyloxy, Tosyloxy oder Trifluormethylsulfonyloxy. Die Umsetzung kann bei Temperaturen von 0 bis 50° Q in Gegenwart eines säurebindenden Mittels durchgeführt werden, um die entsprechende S-substituierte Thioformimidatverbindung (III) zu erhalten. Die Umsetzung wird zweckmässig durchgeführt, indem man das Zwischenprodukt II mit dem halogensubstituierten Aceton in Gegenwart von etwa 1 Äquivalent einer anorganischen Base, wie eines Alkalicarbonats, z.B. NaH, Kaliumcarbonat oder von nicht-nukleophilen organischen Basen, wie Diazobicyclononan und Bis-1,8-(dimethylamino)-naphthalin, bei Raumtemperatur umsetzt. Sobald die Umsetzung beendet ist, wird das Produkt durch Filtrieren des Reaktionsgemisches und Eindampfen

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des FiItrats zur Trockne isoliert.

Repräsentative Beispiele von substituierten Acetonen, die in diesem Sinne verwendet werden können, sind Chloraceton, i-Chlor-3-acetoxyaceton, 1-Chlor-3-/2-(5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thio7-2-propanon, 1,3-Dichloraceton, 1-Chlor-3-carbamoyloxyaeeton, 1-ChIOr^-(N-trichloräthylcarbamoyloxy)-aceton, 1-Chlor-3-methoxymethoxypropan-2-on, 1-Chlor-3-(NjN-di-p-methoxybenzylcarbamoyloxy') -aceton, 1-Chlor-3-phenoxyaceton, 1-Chlor-3-(p-methoxybenzyloxy)-aceton, 1-Chlor-3-isobutyryloxy-2^propanon, i-Chlor-3-benzyloxyaeeton, 1-Chlor-3-(p-nitrobenzyloxy)-aceton, i-Brom-3-methoxymethoxyaceton und l-Chlor-3-methoxyaceton. Die substituierten Acetonverbindungen sind bekannte Verbindungen und lassen sich leicht nach bekannten Verfahren herstellen. Zum Beispiel wird 1-Ghlor-3-carbamoyloxyaceton hergestellt, indem man i-Chlor-3-acetoxyaceton in das Dimethylketal überführt, das letztere zu der 3-Hydroxyverbindung hydrolysiert und diese mit Matriumcyanat vaiä Trifluoressigsäure in Methylenchlorid umsetzt. Ein anderes Verfahren zur Herstellung des substituierten Acetons ist die Umwandlung der Säure in das Säurehalogenid, die Umsetzung des Säurehalogenides; zu dem entsprechenden Diazomethylketon und die Umsetzung des letzteren mit Chlorwasserstoff zu dem Chlorinethylketon nach der folgenden Gleichung:

R¹-CH₂-COOH ^ R¹-CH₂-COCl — R'-CH₂COCHN₂ ·

R'-CH₂-COCH₂Cl. " ·

Wenn man die als Zwischenprodukt erhaltene S-substituierte Thioformimidatverbindung (III) mit einer Base, wie einem Alkalicarbonat oder -hydrid, oder einer organischen Lithiumverbindung, wie Phenyllithium, umsetzt, geht sie in die entsprechende Thiazinverbindung (IV) /Stufe G/ über. Die Thiazinverbindung kann aber auch durch Kondensation des Thioformamidoderivats (II) und des substituierten Acetons in Gegenwart von

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mehr als etwa 1 Äquivalent der Base hergestellt werden. So bildet sich das Thiazin nahezu ausschliesslieh, wenn man 2 oder mehr Äquivalente Kaliumcarbonat hei der Kondensat!onsreaktion verwendet. .

In der Stufe D wird, die Thiazinverbindung IT mit einem Azidoacetylreagens in Gegenwart eines säurebindenden Mittels und vorzugsweise in einem Lösungsmittel hei Temperaturen von -78 bis +30° C zu der 7-Azidoverbindung (V) umgesetzt.

Die Azidoacetyl-Reaktionsteilnehmer von besonderem Wert haben die allgemeine Formel .

CH-COX

I ,

in der B Viasserstoff, Methyl oder Methoxy und X Halogen,

oder OSO2CH., bedeutet. Die Umsetzung wird vorzugsweise bei niedrigen Temperaturen, z.B. bei etwa 0 C, in Gegenwart einer ausreichenden Menge einer Base» wie eines tertiären Amins, durchgeführt, die als säurebindendes Mittel dient und ausserdem den Ringschluss zu der als Zwischenprodukt entstehenden Thiazinverbindung katalysiert. So wird die Umsetzung zweckmässig durchgeführt, indem man eine Lösung des Azids in Methylenchlorid zu einer kalten Lösung des Thiazine und eines tertiären Amins, wie Triäthylamin, in dem gleichen Lösungsmittel zusetzt, wobei das Amin in geringem Überschuss über die molare äquivalente Menge vorliegt. Das Reaktionsgemisch wird in der Kälte gerührt, bis die Bildung der gewünschten 7-Azidocephalosporinverbindung vollständig verlaufen ist. Azidoacetylhalogenid und 2-Azido-2-methylacetylhalogenid sind bekannte Verbindungen und können nach bekannten Verfahren hergestellt werden. Die Herstellung von 2-Azido-2-methoxyacetylhalogeniden und Azidoacetylsulfonaten wird nachstehend beschrieben.

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Beispiele für repräsentative Thiazinverbindungen (IV) sind 5-Acetoxymethyl-6H-1 ,3-thiazin-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester, 5-Methyl-6H-1 , 3-■·thiazin-4-carbonsäuremethylester,■ 5-Benzyloxymethyl-6H-1 ,3-thiazin-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthy!ester, 5-Carbamoyloxymethyl-6H-1 ,3-thiazin-4-car- bonsäur'e-p-methoxybenzylester, 5-Isobutyryloxymethyl-6H-1, 3-thiazin-4-carbonsäuremethoxymethylester, 5-(N,N-Di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxyinethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-pmethoxybenzylester, 5-(ii-2,2,2-Trichloräthyl)-carbainoyloxymethyl-6H-1, 3-thiazin-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester und dergleichen. ■

Nach einem anderen Verfahren erhält man die gewünschte 7-Azidoverbindung (V) durch Umsetzung eines Gemisches der Acylver bindung (III) und der cyclischen Thiazinverbindung (IV) oder der acyclischen Verbindung (III) als solcher mit dem Azidoacetyl-Reagens unter den beschriebenen Bedingungen. Meiai die acyclische Verbindung (III) als solche mit dem Azidoacetylhalogenid umgesetzt wird, ist anzunehmen, dass sich ein cyclisches Zwischenprodukt der allgemeinen Formel

bildet, und dass dieses Zwischenprodukt dann unter den Reaktionsbedingungen Ringschluss· zu der gewünschten 7-Azidoverbindung (V) erleidet.

Wenn B ein Wasserstoffatom bedeutet, führt die Umsetzung mit dem Azidoacetyl-Reagens zur Bildung eines Ta-Azidocephalosporins; wenn dagegen B den Methyl- oder Methoxyrest bedeutet,

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"bildet sich bei der Umsetzung mit dem Azidomethoxyacetylhalo- genid "bzw. dem Azidome thylacetylhalogenid eine 7ß-Azidover-"bindung. . . . - ..: :■ ^:-. j'. ... '■'- ■'--■'■.'^: . V;._"':.;.-;. '... /

Wie bereits erwähnt, kann der acyclische Ausgangsstoff für das Ihiazin oder ein Gemisch der acyclischen Verbindung mit Thiazinverbindungen zur Herstellung des 7-Azidocephalosporins verwendet werden. Vorzugsweise setzt man jedoch im allgeraei- . nen das Asidoacetyl-Reagens mit dem Thiazin um, da man unter diesen. Bedingungen die höchsten Ausbeuten an den gewünschten -CephalospprinverMndungen erhält. "... " ' · ■- .·..·".

"·.-.-''·-* '■' ·'.. - - ^: "·''".".' ':■'■'■ · ■'■* ■"■-'■.;.'-^:.';.- -^; '"■·'-" Bei' der oten beschriebenen Reaktionsreihe dient die Phospho- natgruppe als aktivierende Gruppe und wird schliesslich bei.

: der Hei'stellung der als Zwischenprodukt dienenden Thiazinverbindung abgespalten. Als Ausgangsstoff (I)' für die Umsetzung mit dem Tliiorioaiseisensäureester kann man auch andere Ausgangsverbindungen mit aktivierenden Gruppen, v/ie ■ · ■..·■■

..·■ ■ -- " . ";."-. -PR₅, -SR₂J-S-R. oder -SiR₅ ., ' . ' ' . ·.·/· ; •verwenden, worin R einen niederen.Alkylrest (vorzugsweise · Methyl) oder einen Arylrest (z.B. Phenyl xisw.) bedeutet, und . auch diese Gruppsn werden bei der Herstellung der Thiazinver-/ .bindting abgespalten. ..--■'-· .."'. ■ . ·'..·... ··... - -.. ^{: 5} ;·' .

•Nach einer weiteren Ausfuhrungsform der Erfindung wird, wenni ; B ein "V/asserstoffatom ist, die dl_r7o:-Azidoverbindung (V) zu ""^: der entsprechenden neuen ö1-7k-Aminoverbindung (VI) reduziert, -". '.··■··-■'-'■· -.-■·. .':"-'.- . .*·-·. ' ."" " - .-^:. .

η :.

VX

0;982;6/·0..9

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Die Reduktion zur Aminoverbindung erfolgt z.B. zweckmässig mit Wasserstoff in Gegenwart eines Edelmetallkatalysators, wie Platinoxid, Aluminiumamalgam, Zink und Essigsäure oder Kupfer und Thiophenon nach, bekannten Methoden. Die Carboxylschutzgruppe kann leicht nach bekannten Verfahren abgespalten werden, um die 7-Amino-3-CH2R'-3-cephem-4-carbonsäuren zu erhalten. So werden z.B. die Benzhydryl-, tert.Butyl-, p-Methoxy-"benzyl- und p-Methoxyphenoxymethylgruppen mit einer Säure, wie Trifluoressigsäure, abgespalten, und die 2,2,2-Trichloräthylsowie die Phenacylgruppe werden durch Umsetzung mit Zink und Essigsäure abgespalten. Der Ausdruck "Schutzgruppe" oder "Blockierungsgruppe" wird hier im Sinne der USA-Patentschrift 3 697 515 verwendet.

Die neuen 7oc-Azidocephalosporinverbindungen und die (für den Pall B = Wasserstoff) aus ihnen erhaltenen 7cc-Aminocephalos ρ or inverbindungen fallen als Gemische der d- und 1-Enantiomeren an, die nach bekannten Methoden in die optisch aktiven Formen zerlegt werden können. Die neuen dl-7a-Aminoverbindungen oder die Ehantiomeren derselben können nach den nachstehend beschriebenen Verfahren in die entsprechenden neuen dl-7ß-Aroinocephalosporinverbindungen übergeführt werden, und diese 7ß-substituierten Verbindungen können durch Acylieren in neue dl-Cephalosporine mit wertvollen antibiotischen Eigenschaften umgewandelt werden. Andererseits können, wie nachstehend gezeigt wird, die dl-7a-Azidoverbindungen auch in antibiotisch wirksame,. 7-substituierte Cephalosporine, z.B. die 7-Methoxyv er bindung oder die 7-Methylver bindung, übergeführt werden.

Ein Verfahren, nach dem die dl-7a-Azidoverbindungen in antibiotisch wirksame 7-Methoxy- oder 7-Methylcephalosporine übergeführt werden können, ist das folgende:

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♦t

Fliessdiagrainin

COOR,

CHO

VII

COOR,

VIII

K

C=N-

N /J-CH₂R*

IX

COOR,

B H

H₂N.

COOR,

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15 456 - ;.;-;, / ·. fö : ■ ■■ /;., 23 6;5.5 8 2-,

Das Verfahren kann loir ζ als aus drei Hauptverfahr ens stuf en zusammengesetzt beschrieben werden: Die erste Stufe ist die Herstellung des Iminoderivats des 7-Aminocephalosporins. Dieses Iminoderivat wird dann durch den ausgewählten Reaktionsteilriehiner substituiert, der die Gruppe B (CH^ oder OCiLz) liefert. Die Art des jeweiligen Reaktionsteilnehmers richtet sich nach, der Art der Gruppe. B. .Die dritte Stufe ist dann die Regenerierung der Aminogruppe. ' '■'.-■ .-'.

Das. dl—7cc—Azido-Ausgangsaaterial_i v/ird nach bekannten Methoden zu. dem dl—7a-Aminocephalosporin reduziert. Der für die Umsetzung mit der 7oc-Aminoverbindung verwendete Reakti ons teilnehmer YII .ist ein aromatischer Aldehyd," der gegebenenfalls mindestens einen o- oder p-ständigen elektronegativen Substituenten aufweist.. Mit anderen Worten: Mindestens einer der Reste J₁ G und K kann eine Nitro-, Halogen-,. Sulfonyl-, Carboxyl- · äerivatgruppe, wie eine Ester- oder Amidgruppe, eine Cyangruppe und dergleichen sein. Die beiden anderen der Reste J", G und K können entweder einer der- oben genannten elektronegativen Subs ti tu en ten oder Y/asserstoff sein.. Die bevorzugten Beaktionsteilnehreer sind p-Hitrobenaaldehyd (in welchem Falle· 3 die lii tr ogruppe. bedeutet und G' und H Wasserstoff atome sind) "und Benzaldehyd. ■ · ._■·'„."

3)as erfindungsgemässe Yerfahren lässt sich auch mit anderen Car bonylver bin düngen, z.B. Aldehyden und Ketonen, wie Aceton, Hexafluo race ton oder Chloral, durchführen, die beständige Iminoderivate bilden. Auch polycyclisch^ aromatische Aldehyde, d.h.. solche mit- 2 oder 3 kondensierten Ringen, können verwendet werden. " .'..'.■-

Das dl~7cc-Aminocephalosporin VI und der aromatische Aldehyd ' YII v/erden in einem inerten Lösungsmittel in ungefähr äqaiimolekularen Mengen gemischt. Geeignete Lösungsmittel hierfür sind Äthanol, Dioxan, Acetonitril, Dimethylformamid, Tetra-

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. hydrofuran, Dimethylsulfoxid, Benzol, Toluol, Methylenchlorid, Chloroform und dergleichen. Die Reaktion geht leicht bei Temperaturen im Bereich von Raumtemperatur "bis zur Rückflusstemperatur des Lösungsmittels vonstatten. Da die Kondensation eine Gleichgewichtsreaktion ist und da eines der Reaktionsprodukte V/asser ist, wird das Wasser nach bekannten Methoden entfernt, damit es nicht an weiteren Reaktionen teilnehmen.kann. Solche bekannten Methoden sind z.B₀ die azeotrope Destillation, Molekularsiebe, chemische Bindung durch Kaliumcarbonat, Magnesiumsulfat usw. oder die Verwendung von Borsäureestern. Die jeweilige Methode richtet sich nach den Parametern der Reaktion. Durch Abdampfen des Lösungsmittels wird die Umsetzung beendet. Dann wird das Iminoderivat YIII gewonnen und für die nächste Verfahrensstufe verwendet.

In der nächsten Verfahrensstufe erfolgt die Substitution der •Gruppe B an dem dem Iminostickstoffatom benachbarten Kohlenstoffatom. Diese Reaktion erfolgt in Gegenwart eines inerten Lösungsmittels, wie eines der oben genannten Lösungsmittel, und ausserdem in Gegenwart eines Aktivierungsmittels in Form einer organischen oder anorganischen Base.

Als Aktivierungsmittel kann man verschiedene organische oder anorganische Basen verwenden. So eignen sich tertiäre niedere? Alkylamine, wie Triäthylamin, Diisopropyläthylamin, wobei die Alkylgruppen 1 bis 4 Kohlenstoffatome aufweisen und gleich oder verschieden sein können. Auch Pyridin kann verwendet werden. Ebenso kann man Lithiumalkyle und Lithiumaryle, wie Lithiumalkyle mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, z.B. tert.Butyllithium oder Phenyllithium, verwenden. Ebenfalls geeignet sind Natriumhydrid, Lithiumamide, wie Lithiumdiisopropylamid, und Kalium-tert.butylat.

Das Aktivierungsmittel wird zu der Lösung der Verbindung VIII bei einer tiefen Temperatur (-100 bis 0° C und vorzugsweise

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-100 "bis -60° C) in einer inerten Atmosphäre zugesetzt. Die Menge an Aktivierungsmittel soll ausreichen, um eine starke Farbänderung in der Lösung hervorzurufen. Die Farbe ist ein Anzeichen dafür, dass die aktivierte Form der Verbindung VIII vorliegt.

Die aktivierte Verbindung VIII wird nicht isoliert, sondern der nächste Reaktionsteilnehmer wird unmittelbar zum Reaktionsgemisch zugesetzt.

Die Art des Reaktions teilnehmers, der für die Umsetzung mit der aktivierten Verbindung VIII zwecks Einführung der Substituentengruppe B verwendet wird, richtet sich nach der Art der Gruppe B.

Venn B die Methoxygruppe ist, kann man Dimethylperoxid, Methyl-tert.butylperoxid, Methylphenylsulfenat, o-Methyldimethylsulfoxoniummethosulfat oder N-Methoxypyridiniummethosulfat verwenden. Eine andere Me-thode zur Einführung der OCH,-Gruppe ist die Umsetzung der aktivierten Verbindung VIII mit einem Halogenierungsmittel, wie ΪΓ-Bromsuecinimid, und anschliessende Methanolyse. Wenn B die Methylgruppe ist, verwendet man die folgenden Reaktionsteilnehmer: Methylsulfat, Methylchlorid, Methylbromid und Methyljodid.

Sobald' die Verbindung IX hergestellt ist, wird der Iminorest in den Aminorest der Verbindung X übergeführt.

Die Regenerierung der Verbindung X aus der Verbindung IX erfolgt durch Umsetzung der Verbindung IX mit einem Amin in Gegenwart eines sauren Katalysators. Als Amin kann man Anilin, Hydrazin oder Hydrazinderivate, wie Phenylhydrazin, 2,4-Dinitrophenylhydrazin und dergleichen, verwenden. Der saure Katalysator kann eine der üblicherweise verwendeten starken organischen oder anorganischen Säuren sein, wie Salzsäure

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oder p-Toluolsulfonsäure. Eine "bevorzugte Kombination ist die Verwendung von Anilin-hydrochlorid, welches gleichzeitig als Amin und saurer Katalysator wirkt. Eine andere bevorzugte Kombination besteht aus 2,4-Dinitrophenylhydrazin und p-Toluolsulfonsäure. Die Reaktionsbedingungen für die Regenerierung werden so gewählt, dass keine unerwünschte Hydrolyse oder Ringspaltung erfolgt; vorzugsweise arbeitet man in einem niederen Alkanol (mit 1 bis 5 Kohlenstoffatomen), wie Methanol, Äthanol und dergleichen; jedoch kann man auch andere.Lösungsmittel, wie Dimethoxyäthan oder Dimethylformamid, verwenden. Die Umsetzung erfolgt bei Raumtemperatur. Die relativen Mengen von Säure und Amin richten sich nach dem jeweiligen Aldehyd VII und dem verwendeten Amin, da die Regenerierung eine Gleichgewichtsreaktion ist. Die Wahl der richtigen Mengen an Reaktionsteilnehmern ist dem Fachmann geläufig. Die Verbindung IX kann mit PaGIp in Gegenwart von Wasser hydrolysiert werden.

Die bei diesen Umsetzungen hergestellten Verbindungen VIII und IX können zur Herstellung wertvoller antibakterieller Mittel verwendet werden, die gegen gram-positive und auch gegen gramnegative Bakterien wirksam sind. Wenn die Aminogruppe der Verbindung X, wie nachstehend beschrieben, acyliert wird, weisen die Produkte Aktivität gegen gram-negative Mikroorganismen auf.

Ein anderes Verfahren, um die neuen dl-7-Azidoverbindungen in antibiotisch wirksame 7-Methoxycephalosporine überzuführen, ist das folgende: ·

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R S.

COOR₁ 1(VI)

(V)

ν-

COOR,

i J-CH₂R

CH₂R¹

COOR,

(XU)

OCH- H

^!H2^Rt

OR,

XIII

OCH₃

COOH OH

XV XVII

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In den obigen Gleichungen entsprechen die Substituenten den obigen Definitionen. . .

Bei dem oben skizzierten Verfahren wird die neue dl-7-Azidoverbindung Y zu dem 7-Aminocephalosporin VI reduziert. Die 7-Äminoνerbindung wird durch Umsetzung mit Nitrit in den entsprechenden 7-Diäzocephalosporinsäureester übergeführt. Obwohl in dem obigen Pliessdiagramm die 7oc-Aminoverbindung dargestellt ist, kann man in der gleichen Reaktionsfolge auch das 7ß-Cephalosporin verwenden, welches sich durch Epimerisierung der 7a-Aminoverbindung bildet, und zu den antibiotisch wirksamen 7-Methoxycephalosporlnen gelangen. Der 7-Diazocephalosporansäureester XI wird dann mit Bromazid, Ghlorazid oder Jodazid, vorzugsweise in Gegenwart eines tertiären Aminazids, zu dem Zwischenprodukt 7-Halogen-7-azidocephalosporansäureester XII umgesetzt, der durch Reaktion mit einem geeigneten nukleophilen Reaktionsteilnehroer in den gewünschten 7-0CH,-7-Azidocephalosporansäureester XIII umgewandelt wird. Dieses Zwischenprodukt wird in einer Stufe reduziert und acyliert, wobei man den substituierten Cephalosporansäureester XVI erhält, aus dem dann durch Abspaltung der Esterschutzgruppe die Cephalosporansäure oder ein Salz derselben XVII hergestellt wird. Nach einem anderen Verfahren kann man, wie das Fliessdiagramm zeigt, den 7-0CH,-7-Azidocephalosporansäureester XIII zu dem 7-0CH,-7-Aminocephalosporansäureester XIV reduzieren, der dann durch Acylierung in den 7-0CH-z-7-Acylaminocephalosporansäureester XVI übergeführt werden kann. Ein anderes Verfahren besteht darin, die Ester- " gruppe der Verbindung XI¥ abzuspalten, um die freie Säure XV zu erhalten, die dann zu dem gewünschten substituierten Cephalosporin oder einem Salz desselben acyliert werden kann. Die Abspaltung der Schutzgruppe kann leicht nach bekannten Verfahren durchgeführt werden. Zum Beispiel kann man eine Aralkylgruppe, wie die Benzylestergruppe, durch Reduktion abspalten, eine Silylestergruppe kann durch Hydrolyse zur

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freien Säure oder zu einem Salz derselben abgespalten werden, und eine Benzhydrylgruppe lässt sich, leicht durch Umsetzung mit Trifluoressigsäure in Gegenwart von Anisol abspalten. Bei diesem Verfahren kann man auch andere Ester verwenden, deren Estergruppen sich leicht unter Bildung der freien Säure abspalten lassen, wie den Trichloräthylester, den Phthalimidomethylester, den Succinimidomethylester, den p-Methoxybenzylester, den p-Nitrobenzylester, den Phenacylester, den tert.Butylester und dergleichen. Ebenso kann, wie oben erörtert, der 3-ständige Substituent an dem /S₁ -Cephamkern nach bekannten Verfahren'variiert werden, um wertvolle Cephalosporine zu erhalten. ·

Die Diazotierung des 7-Aminoesters erfolgt nach bekannten Verfahren. Zweckmässig wird die Diazotierung in einem wässrigen oder wässrig-organischen Lösungsmittel, z.B. durch Umsetzung mit Natriumnitrat in Gegenwart einer Säure oder durch Umsetzung mit organischen Uitriten, durchgeführt. Geeignete organische Lösungsmittel sind solche, die keine reaktionsfähigen ¥asserstoffatome enthalten. Beispiele für solche Lösungsmittel sind Methylenchlorid, Äther, Benzol, Toluol, Chloroform und dergleichen. Vorzugsweise wird die Umsetzung bei Temperaturen zwischen etwa 0 und 50 C, am bequemsten bei Raumtemperatur, durchgeführt. Die gewünschte Diazoverbindung lässt sich leicht nach bekannten Verfahren isolieren.

Die Herstellung des Halogenazids erfolgt durch Umsetzung der Diazoverbindung mit einem Halogenazid bei Temperaturen zwischen etwa -25 und +50° C, bis die- Bildung der gewünschten Verbindung vollständig erfolgt ist. Vorzugsweise wird die Reaktion in einem geeigneten organischen Lösungsmittel durchgeführt, das sich gegen die Reaktionsteilnehmer indifferent verhält. Als Lösungsmittel können solche verwendet werden, die keine reaktionsfähigen Wasserstoffatome enthalten, wie Z₀B. Methylenchlorid, Chloroform, Benzol, Toluol, Äther und derglei-

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chen oder Gemische solcher Lösungsmittel. Im allgemeinen wird die Umsetzung vorzugsweise in Gegenwart eines zweiten Azids, wie Lithiumazid oder eines tertiären Ammoniumazids, z„B. Triäthylammoniumazid, durchgeführt, da unter diesen Bedingungen die Bildung der unerwünschten 7-Dibromverbindung unterdrückt wird. Das Halogenazid wird in geringem Überschuss über die
stöchiometrisch erforderliche Menge zugesetzt. Die Menge des zweiten Azids ist nicht besonders ausschlaggebend; im allgemeinen ist es zweckmässig,- dieses Azid ebenfalls im Überschuss zu verwenden, um eine möglichst hohe Ausbeute an der gewünschten Halogenazidverbindung unter den günstigsten Bedingungen zu erhalten. Each Beendigung der Bildung des Halogenazids wird
das Produkt gewonnen und kann weiter nach bekannten Verfahren, z.B. durch Chromatographie, gereinigt werden.

Die nächste Stufe des Verfahrens ist der Ersatz des Halogensubstituenten durch eine Methoxygruppe. Zu diesem Zweck, wird das Halogenazid mit einem Stoff umgesetzt, der imstande ist, eine OCH^-Gruppe zu liefern, die das Halogenatom ersetzt.
Diese Reaktion erfolgt vorzugsweise in Gegenwart eines, nichtreaktionsfähigen Lösungsmittels, wie Methylenchlorid,
Chloroform, Benzol, Toluol, Äther, Petroläther und dergleichen; auch in diesem Falle sind Lösungsmittel, die ein aktives Wasserstoffatom enthalten, zweckmässig zu vermeiden. So kann man als nukleophiles Verdrängungsreagens Methanol verwenden, in welchem Falle die Halogengruppe durch Einführung einer
Methoxygruppe verdrängt wird. Die Reaktion wird vorzugsweise in Gegenwart eines Schwermetallkations, wie eines Silbersalzes, durchgeführt.

In der nächsten Stufe des oben beschriebenen Verfahrens wird die 7-Azido-7-0CH^-Verbindung zu der entsprechenden 7-Amino-7-OCH^-Verbindung reduziert. Die Reduktion kann nach verschiedenen Methoden durchgeführt werden; vorzugsweise erfolgt die Reduktion der Azidogruppe zur Aminogruppe jedoch durch kata-

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lytisches Hydrieren an einem Edelinetallkatalysator, wie Platin, Palladium oder Oxiden dieser Metalle. Die Verfahren werden auf "bekannte Art durchgeführt. Andererseits kann man die Reduktion auch in Gegenwart eines geeigneten Acylierungsmittels durchführen, wobei man die gewünschte T-Acylamido-T-OCH^-Verbindung erhält. Die 7-Aminoverbindung kann mit geeigneten Acylierungsinitteln nach bekannten Verfahren zu der gewünschten 7-Acylamidoverbindung umgesetzt werden, wie nachstehend beschrieben.

Nach einer weiteren Ausführungsform der Erfindung können die neuen al—7ß-Aminocephalosporinverbindungen zu den entsprechenden neuen dl^ß-Acylamidoeephalosporinverbindungen acyliert werden, die gegen pathogene gram-negative und gram-positive Bakterien: aktiv sind. Die Acylierung der neuen dl-7a-Aminocephalosporine führt zur Bildung von neuen dl-7a-Acylaiaidoverbindungen, die nach bekannten Methoden in neue, antibiotisch wirksame dl-Tß-Acylamidocephalosporine übergeführt v/erden können. Die neuen dl-T-Acylamidocephalosporine können nach bekannten Verfahren in die entsprechenden d- und 1-Isomeren zerlegt v/erden. Wie bereits erwähnt, können die neuen dl-7a-Azido- oder dl-7cc-Aininocephalosporinverbindungen in die entsprechenden d- oder 1-Isomeren zerlegt werden, die ihrerseits nach bekannten Verfahren in wertvolle Cephalosporine übergeführt werden können. . ·' ; .

Die neuen dl-7cc- oder -7ß-Cephalosporine gemäss der Erfindung haben die allgemeine Formel --.-·-·- .

CCX)H . "

und umfassen auch Salze und Ester der Säuren, wobei R¹ die obige Bedeutung hat und Ac eine Acylgruppe," z.B. eine solche

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Acylgruppe "bedeutet, wie sie sich bei den bekannten Penicillinen und Cephalosporinen findet. Gemass einer bevorzugten Ausführungsform hat die Gruppe Ac die allgemeine Formel

R,—CH-G

s t

in der T Wasserstoff, Halogen, Amino, Guanidin, Phosphono,
Hydroxy, Tetrazolyl, Carboxy, SuIfο oder SuIfamino und R, Wasserstoff, Phenyl, einen substituierten Phenylrest, einen
N-substituierten Acetimidoylaminorest, wie den N-(Phenylacetimidoyl)-aminorest, einen monocyclischen heterocyclischen 5-
oder 6-gliedrigen Ring mit einem oder mehreren Sauerstoff-,
Schwefel- oder Stickstoffatomen im Ring, substituierte Heterocyclen, Phenylthio, Phenyloxys, heterocyclische oder substituierte heterocyclische Thiogruppen, niedere Alkylreste (1 bis 6 Kohlenstoffatome) oder die Cyangruppe bedeutet und die Substituenten der R^-Gruppe Halogen, Carboxymethyl, Guanidino,
Guanidinomethyl, Carboxamidomethyl, Aminomethyl, Nitro, Meth- oxy oder Methyl sein können. Besonders bevorzugt werden Acylgruppen, bei denen X Wasserstoff, Hydroxy, Amino oder Carboxy und R, Phenyl, einen niederen Alkylrest oder einen 5- oder
6-gliedrigen heterocyclischen Ring mit einem oder zwei Schwefel-, Sauerstoff- oder Stickstoff-Heteroatomen bedeutet. Als
bevorzugte Substituenten R, sind erwähnenswert Thiazolyl,
Thienyl, Puryl, N-(Phenylacetimidoyl)-amino und Phenyl.

Es wurde nun gefunden, dass neue dl-7ß~Azido-7-methoxycephalosporinverbindungen und Tß-Azido-T-methylcephalospormverbindungen hergestellt werden können, indem man einen
5-substituierteη 6H-1,J-Thiazin—^-carbonsäureester mit einem
2-Azido-2-methoxyacetyl-halogenid oder einem 2-Azido-2-methylacetylhalogenid nach der folgenden Gleichung umsetzt,

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CII-COX

in der R₁, R' und T die obigen Bedeutungen haben und B eine Methyl- oder Methoxygruppe bedeutet. · ■ '

Geiaäss "einer weiteren Ausführungsform der Erfindung werden die neuen dl-7ß-Azido-7-methoxy- und dl-7ß-Azido-7-methylcephalo~ sporinverbindungen, z.B. mit Wasserstoff in Gegenwart eines Katalysators, vorzugsweise eines Edelmetallkatalysators, wie Platinoxid, zu den entsprechenden dl-7ß-Amino-7-methoxy- bzw. dl-7ß-Amino-7-iDethylcephalosporinverbindungen reduziert. Die racemischen 7ß-Azidoverbindun,gen gemäss der Erfindung können nach bekannten Methoden für die Zerlegung von Racematen in ihre einzelnen Isomeren zerlegt, werden. Ebenso können die durch Acylierung der dl-7ß-Aminoverbindungen erhaltenen dl-Cephalosporinverbindungen optisch zerXegt werden.

Die neuen dl-7ß-Azido-7-methoxycephalosporinverbindungen und dl-^7ß-Azido-7-methyl-cephalosporinverbindungen können in neue racemische 7ß-Acylamido-7-methoxy- bzw. -7-methylcephalosporinverbindungen umgewandelt werden. Zu diesem Zweck wird das Azid der entsprechenden 7ß-Arainoverbindung reduziert und das dabei erhaltene Zwischenprodukt zu dem entsprechenden neuen dl-7ß-Acylamido-7-methoxycephalosporinester bzw. 7ß-Äcylamido-7-methylcephalosporinester acyliert, aus dem dann durch Abspalten der Esterschutzgruppe die freie Säure oder deren Salze erhalten werden. Die neuen racemischen Verbindungen gemäss der Erfindung können also zur Herstellung von racemischen Cephalosporinen, wie 7-Methoxy-7ß-phenylacetamidocephalosporansäure, 7-Methyl-7ß-(2-thienylacetamido)-3-carbamoyloxy-

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Bethyl-3-cephein-4-carbonsäure, 7-Methoxy-7ß-(2-amido)-3-carbamoylo27methyl-3-cephem--4-carbonsäure und deren Salzen, verwendet werden. Diese Produkte sind gegen verschiedene gram-negative und gram-positive Krankheitserreger wirksame Antibiotica. Diese Racemate können auch nach bekannten Verfahren in ihre einzelnen Isomeren zerlegt werden.

Gemäss einer weiteren Ausführungsform der Erfindung können daher die neuen dl^ß-Arainocephalosporinverbindungen zu neuen dl-Cephalosporinverbindungen der allgemeinen Formel

COOII

und Salzen sowie Estern derselben acyliert werden, wobei R¹ die obige Bedeutung hat, B eine Methyl— oder Methoxygruppe und Ac eine Acylgruppe der obigen Definition bedeuten, wie im Falle der bekannten Penicilline und Cephalosporine. DjLe obigen dl-Cephalosporinverbindungen sind gegen gram-negative ■ ■und gram-positive Bakterien aktiv. Die Eacemate gemäss der Erfindung, die etwa die halbe Aktivität des besonders in Betracht kommenden Isomeren aufweisen, können nach bekannten Methoden zerlegt werden,, so dass man das aktive Enantiomere erhält. . \ . .·

Die neuen dl-Cephalosporine gemäss der-Erfindung v/erden durch Acylierung der entsprechenden substituierten neuen dl-7-Aiüinocephalosporansäureverbindungen hergestellt. Diese Ausführungsform der Erfindung kann durch das folgende Reaktionsschema erläutert werden: "

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0RI8SNÄL INSPECTED

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XVIII j

COOR,

XIX

COOM

XX

XXI

worin B ein Wasserst off atom, eine Methoxy- oder KTe thy !gruppe, M ein Wasserstoff atom, ein Metallkation oder ein Amin bedeutet, R¹ und Ac die obigen Bedeutungen haben und R^ eine Schutzgruppe bedeutet. Gemäss dem obigen Reaktionsschema wird der dl-7a- oder -Tß-Aminocephalosporansäureester XYIII zu dem entsprechenden Cephalosporinderivat XIX acyliert, aus dem durch Abspaltung der Schutzgruppe das gewünschte Cephalosporin XXI oder ein Salz desselben hergestellt wird. Man kann aber auch zunächst die Schutzgruppe von dem Aminocephalosporin abspalten, so dass aus diesem die entsprechende Säure oder ein Salz derselben XX entsteht, welches dann zu dem gewünschten Cephalosporin oder einem Salz desselben acyliert wird. ■

Die Acylierung der 7-Aminocephalosporansäureverbindung lässt sich leicht durch Umsetzung mit einem Acylierungsmittel, wie einem Acylhalogenid (Chlorid oder Bromid) oder einem funktionellen Äquivalent desselben, wie einem Säureanhydrid,

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einem gemischten Säureanhydrid mit anderen Carbonsäuren und insbesondere niederen aliphatischen Estern von Carbonsäuren, einer Carbonsäure in Gegenwart eines Carbodiimide, wie 1,3-Dicyclohexylcarbodiimid, einem aktivierten Ester und dergleichen, oder durch enzymatisch^ Acylierung nach für die Herstellung der bekannten Cephalosporine angewandten Acylierungsmethoden durchführen.

Die zu acylierende 7-substituierte 7-Aminocephalosporansäureverbindung kann zweckmässig. eine Verbindung mit einer Esterschutzgruppe, wie der Benzhydryl-, Trichloräthyl-, Trimethylsilyl-, Phenacyl- oder Methoxymethylester, sein, und die Estergruppe wird dann nach bekannten Verfahren unter Bildung "des gewünschten Cephalosporins oder eines Salzes desselben abgespalten. Wenn. z.B. die Schutzgruppe eine Benzhydrylgruppe ist, lässt sich diese leicht durch Umsetzung mit Trifluoressigsäure in Gegenwart von Anisol abspalten. Eine andere Möglichkeit besteht darin, den 7-Aminocephalosporansäureester zunächst nach diesem Verfahren in die freie Säure umzuwandeln und das Salz der freien Säure, wie das Natriumsalz oder ein Aminsalz, nach den gleichen Methoden, die auch zur Umwandlung von 6-Aminopenicillansäure und 7-Aminocephalosporansäure zu den verschiedenen Penicillinen und Cephalosporinen angewandt werden, zu acylieren.

Es ist darauf hinzuweisen, dass der Substituent in der Stellung Nr. 3 des Cephalosporinkeins sich leic't... nach bekannten Methoden in andere Substituenten R' umwandeln oder durch solche ersetzen lässt. Wenn man z.B. die 3-aceuoxymethyl-substituierten Cephalosporansäureester gemäss der Erfindung mit einem geeigneten pLeaktionsteilnehmer oder einer geeigneten Kombination von Reaktionsteilnehmern umsetzt, ist es möglich, die Acetoxygruppe in der Stellung Nr. 3 des Cephalosporinkerns durch verschiedene Substituenten zu ersetzen. Geeignete Reaktionsteilnehmer hierfür sind z_oB. Phosgen und ein sekundäres Amin, Isocyanate, Alkalitoluolsulfinate, Alkaliazide,

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Polyhydroxybenzol, niederes N-Alkylindol, Thioharnstoff, Mercaptane, Phosphorpentachlorid, Thiocyanate, Cycloalkylxanthate, Pyridin, Thiobenzoesäure, N-Alkyl- und Ν,ΪΤ-Dialkylthioharnstoffe oder Alkali-N-alkyl- und -N,N-dialkylthiocarbamate und dergleichen.

Durch Umsetzung mit einer q_uartären Ammoniumverbindung, wie Pyridin, wird z.B. 3-Acetoxycephalosporin in die entsprechende 3-Pyridinomethylverbindung übergeführt. Wenn man andererseits die 3-Acetoxycephalosporine mit Citrus-acetylesterase "behandelt, werden sie in die entsprechenden 3-Hydroxymethylverbindungen umgewandelt, die dann zu anderen 3-Acyloxyme thy !verbindungen einschliesslich Carbamoyloxymethylverbindungen oder Acylthiomethylverbindungen acyliert werden können. In ähnlicher Weise werden andere 3-substituierte Cephalosporinverbindungen nach an sich bekannten T/erfahren hergestellt.

Eine Methode zum Einführen eines N,F-I)i-nied.alkylcarbamoyloxymethylrestes oder eines heterocyclischen Aminocarbonyloxy-Eethylrestes in die Stellung Nr. 3 der erfindungsgemässen Produkte besteht darin, dass man ein 3-Hydroxymethylanaloges und eine 3-Hydroxymethyl-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-cephalosporansäure in Gegenwart einer Base mit Phosgen und einem niederen Dialkylamin behandelt. Auf diese Weise kann man die folgenden Produkte erhalten: Natrium-dl-3-(li,lT-dimethylcarbamoyloxymethyl)-7-methoxy-7-(2-thieny !acetamido )-decephalosporanat und Natrium-dl-3-(pyrrolidinylcarbonyloxymethyl)-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-decephalosporanat.

Die N-monosubstituierten Carbamoyloxymethylcephalosporinprodukte erhält man durch Umsetzung eines 3-Hydroxymethyl-7-amidodecephalosporanats" mit einem geeigneten -Isocyanat. Auf diese Weise erhält man Natrium-dl-3-(N-methylcarbainoyloxymethyl)-7-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-decephalosporanat durch Umsetzung von Natrium-dl-3-hydroxymethyl-7~methoxy-7-(2-thienylacetamido)-decephalosporanat mit Methylisocyanat- in

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Gegenwart von Natriumbicarbonat.

Die iznsubstituierte Carbaraoyloxyraethylverbindung lcann durch Spalten einer N-ioono- oder -disubstituierten Carbamoyloxymethylverbindung, wie einer NjN-Di-p-methoxybenzylcarbaraoyloxynethylverbindung oder einer IT^^^-Trichloräthylcarbanioyloxyme thy !verbindung, gewonnen werden. Eine andere Methode zur Herstellung der Carbamoyloxymethylgruppe in der Stellung Ur-,- 3 besteht darin, dass man das- 3-Hydroxyiaethylanaloge mit Srichloracetylisocyanat oder Chlorsulfonylisocyanat umsetzt und das.Produkt hydrolysiert. \ ;/ '. .. · :. · '■; '- '..■■ -·..··

Nach einer \^reiteren A.usführungsform der Erfindung erhält man den als Ausgangsstoff bei dem oben-beschriebenen Verfahren verwendeten a-Aminophosphonoessigsäureester (I) durch die.

nachstehend dargestellte Reaktionsfolge: . · '. ·" .""

·.- ^CH2^C6^H5 "·■·". ■

XXII

5 2

: XXIII

HClH₀N £> (OR)

^(0R)

(OR)

XXVI

(OR)

C₆H₅CH=N. T(OR)

XXVII

.C^H₁-CII=H 1^(OR)

^CO2^R1

XXVIII

5 O 9 8 2 6/'.Q .9.5 8

15 456 Oq

H_{ierin h}a„_en H _mi R, _aie oSen Bedeuten. . ^{2 3 6 5 5 8 2}

Gemäss dem obigen Reaktionsschema wird zunächst Benzylamin mit Formaldehyd zu 1,3,5-Iribenzyl-s-hexahydrotriazin XXIII umgesetzt. Die letztere Verbindung reagiert mit einem disubstituierten Phosph.it unter Bildung des Phosphonats XXIY. Diese Reaktion erfolgt zweckmässig durch Erhitzen eines Gemisches des di substituiert en Phosphits mit dem Triazin auf 100 C bis zur vollständigen Bildung des gewünschten Zwischenprodukts, welches zweckmassig als Säuresalz, wie als Hydrochlorid, isoliert wird. Durch Reduzieren des' als Zwischenprodukt erhaltenen Säuresalzes des N-Benzylaminomethylphosphonats in Gegenwart von Palladium auf Kohle erhält man das Salz der entsprechenden Aminoverbindung XXY. Dieses Säuresalz wird durch "umsetzung mit Ammoniak in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Chloroform, in das Amin übergeführt. Nach dem Entfernen des Ammoniumsalzniederschlages lässt' sich das gewünschte Produkt leicht durch Abdampfen des Lösungsmittels gewinnen. So erhält "man den Aminome thy lphos phonsäur ees ter XXYI. Es besteht auch die Möglichkeit," das Säuresalz XXY mit wässrigem Dikäliumphosphat zu neutralisieren und das freie Amin XXYI mit einem organischen Lösungsmittel, wie Methylenchlorid, zu extrahieren. ¥enn man das letztgenannte Produkt mit einem Aldehyd, wie Benzaldehyd, umsetzt, erhält man die entsprechende Schiffsche Base XXYII, die durch Reaktion mit einer starken Base, wie einer organischen Lithiumverbindung, z.B₀ Phenyllithium, und anschliessende Umsetzung mit einem Halogenameisensäureester in das- Imin XXVIII übergeführt wird. Wenn man dieses Imin mit 2,4-Dinitrophenylhydrazin in Gegenwart von p-Toluolsulfonsäure-monohydrat oder mit p-Toluolsulfonsäure- · hydrat in Äther behandelt und das entstehende Säuresalz des Amins dann neutralisiert, erhält man den gewünschten a-Aminophosphonoessigsäureester (I).

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^{15 456} ZO

1,3,5-Tribenz7/"l·—s-hexahydrotriazin

Eine lösung von 110 ml (1 Mol) Benzylamin in 100 ml absolutem Äthanol wird unter Rühren schnell mit 75 ml (1 Mol) 37-prozentiger wässriger Formaldehydlösung versetzt. Die Temperatur des Gemisches steigt dabei auf 83° C und sinkt dann wieder. Nach 2-stündigem Rühren wird das Reaktionsgemisch zu 1000 ml Petroläther zugesetzt, zweimal mit je 300 ml Wasser und dann mit 300 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Man erhält ein klares Öl (117,5 g)» das beim Kratzen erstarrt. Durch unkristallisieren des Rohprodukts aus Petroläther erhält man 103,0 g 1,3,5-TrIbenzyl-s-hexahydrotriazin; P. 48-50° C; IR (CCl₄) 1495, 1456, 1362, 1172, 1124, 1020, 924.und 699 cm"¹; KMR (CDCl₅)T 6,62 (s, 6, CH₂), 6,38 (s, 6, CH₂) und 2,78 (s, 15, ArH). ' .

Beispiel 2

If-Benzylaminomethylphosphonsäurediäthylester'

Ein Gemisch aus 57,5 g (0,416 Mol) Phosphorigsäurediäthylester und 49,6 g (0,139 Mol) 1,3,5-Tribenzyl-s-hexahydrotriazin wird 6 Stunden in einem durch ein Trockenrohr gegen das Eindringen von Feuchtigkeit geschützten Kolben auf 100 C erhitzt und dann allmählich übernacht auf Raumtemperatur erkalten gelassen. Durch Chromatographie des Rohprodukts an 2270 g Kieselsäuregel (eingefüllt unter Methylenchlorid) bei Verwendung von 3-proζentigem Methanol in Methylenchlorid zum Eluieren erhält man 63»2 g H-Benzylaminomethylphosphonsäurediäthylester als blassgelbe, bewegliche Flüssigkeit; IR (CCl,) 1244, 1062, 1034, 966 und 698 cm~¹; KMR (CDCl₅) ~c 8,70 (t, 6, J=7Hz, CH₅), 8,33 (^s, 1, HH), 7,08 (d, 2, J=13Hz, CH₂), 6,15 (s, 2, PhCH₂), 5,88 (p, 4, J=THz und J=7Hz, CH₂CH₅), 2,72 (s, 5, ArH). ...

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Beispiel 3 Aminomethylphosphonsäurediäthylester-hydrochlorid

Eine lösung von 30,1 g (0,117 Mol) Jj-Benzylaminomethylphos-. phonsäurediäthylester in 400 ml absolutem Äthanol wird mit 130 ml 0,9-normaler Salzsäure in Äthanol, versetzt und an

6,6 g 10-prozentigem Palladium auf Kohle bei 3,16 kg/cm 19 Stunden hydriert. Das Gemisch wird durch eine Schicht aus Diatomeenerde filtriert, um den Katalysator zu entfernen. ITach dem Eindampfen des Filtrats unter vermindertem Druck erhält man einen klaren Rückstand,- der zuerst in Äthanol und dann in Benzol gelöst wird. Durch Abdampfen im Vakuum gewinnt man 23,2 g Aminomethylphosphonsäurediäthylester-hydrochlorid in Form eines weissen Pulvers. KMR (DMSO-dg)'S' 8,73 (t, 6, J=7Hz, CH₂CH₃), 6,76 (d, 2, J=13,5Hz, CH₂), 5,87 (d von q., 4," J=7Hz und J=8Hz, CH₉) und 1,42'(br s, 3, UH,).

Beispiel 4 .

Aminomethylphosphonsäurediäthylester

4,965 g Aminomethylphosphonsäurediäthyiester-hydrochlorid. in 25 ml Chloroform werden 4 Minuten unter Hindurchleiten von gasförmigem Ammoniak bei 0 C gerührt. Das Ammoniumchlorid wird abfiltriert und das Filtrat kurz über Magnesiumsulfat getrocknet. Durch Abdampfen des Lösungsmittels unter verminderrtem Druck erhält man 4,031 g Aminomethylphosphonsäurediäthylester
966 cm"

als klare Flüssigkeit. IR (CCl₄) 1240;, 1062, 1032 und Γ¹; KMR (CDCl₃)^ 8,67 (t, 6, J=7Hz,.CH₃), 7,03 (d, 2, J=11Hz, CH₂) und 5,86 (p, 4, J= 7Hz und J= 7Hz, CH₂CH₅).

Beispiel N-Benzylidenaminomethyl'phosphonsäurediäthylester

4,03 g (24,1 Millimol) Aminomethylphosphonsäurediäthylester werden unter Zutropfen von 2,50 ml (24,5 Millimol) Benzaldehyd 5 Minuten im Eisbad gerührt. Nach weiterem 15 Minuten langem Rühren bei 0° C wird das Gemisch mit 20 ml absolutem Äthanol

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verdünnt und im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird in 20 ml trockenem Benzol gelöst, und nach dem Eindampfen erhält man 6', 073 g N-Benzylidenaminomethylphosphonsäurediäthylester als blassgelbes öl: IR (CCl₄) 1639, 1250, 1062, 1037 und ■971 cm"¹; KMR (CDCl₅) τ 8,68 (t, 6, J=THz₅ CH₅), 5,93 (d von d, 2, J=17,5Hz und J=IHz, CH₂), 5,85 (d von q., 4, J=8Hz und J=7Hz, CH₂CH₃), 2,65 (m, 3, ArH), 2,29 (m, 2, ArH) und 1,75 (t von d, 1, J=IHz und J=5Hz, =CH).

Beispiel 6

N-Benzyliden-a-aminodiäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester

12,5 ml einer 2,0-molaren Lösung von Phenyllithium in einem Gemisch aus 7 Teilen Benzol und 3 Teilen Äthyläther werden zu einer mit festem Kohlendioxid gekühlten Lösung von 6,073 g (23,8 I'lillimol) N-Benzylidenaminomethylphosphonsäurediäthylester in 130 ml trockenem. Tetrahydrofuran unter Rühren zugesetzt. Nach 30 Minuten langem weiterem Rühren bei -78° C unter Stickstoff wird zu der Lösung im Verlaufe von 25 Minuten eine Lösung von 5,04 g (23,8 Millimol) Chlorameisensäuretrichloräthylester in 25 ml trockenem Tetrahydrofuran zugetropft. Die so erhaltene Lösung wird weitere 2 Stunden bei -78° C gerührt und dann innerhalb 30 Minuten auf 3° C erwärmen gelassen. Nach dem Abdampfen des Lösungsmittels im Vakuum hinterbleibt ein gelber Schaum, der zwischen 150 ml Äthyläther und 50 ml 0,5-molarer Phosphatpufferlösung vom pH-Wert 3 verteilt wird. Die wässrige Phase wird abgetrennt und zweimal mit je 25 ml Äther extrahiert. Die vereinigte Ätherlösung wird mit 100 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Man erhält ein trübes gelbes Öl. Durch Chromato-.graphie des Rohprodukts an 200 g Kieselsäuregel bei Verwendung eines Gemisches aus 9 Teilen Äthylacetat und 1. Teil Aceton zum Eluieren gewinnt man N-Benzyliden-oc-aminodiäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester als blassgelbes Öl.

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Der entsprechende Methylester wird bei Verwendung von Chlorameisensäuremethylester anstelle des Chlorameisensäuretrichloräthylesters in der gleichen Weise als blassgelbes Öl gewonnen. IR (CCl.) 1748, 1638, 1261, 1160, 1057, 1029, 977, 912 und 691 em; KMR (CDCl₃) T 8,68 (t, 6, J=7Hz, CH₂CH₅), 6,22 (s, 3, CH₅), 5,77 Cd von q, 4, J=9Hz und J=7 Hz, CH₂CH₅) 5,25 (d, 1, J=21Hz, CH), 2,56 (m, 3, ArH), 2,16 (m, 2, ArH) und 1,60 (d, 1, J=5Hz,.=CH).

Beispiel 7 ..

q-Aminodiäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester

Ein Gemisch aus 1,875 g (9,47 Millimol) 2,4-Dinitrophenylhydrazin und 1,800 g (9,47 Millimol) p-Toluolsulfonsäure-monohydrat in 200 ml Äthanol wird 45 Minuten "bei Raumtemperatur gerührt. Die orangefarbene Suspension wird mit 3,881 g (9,02 Millimol) if-Benzyliden-a-aminodiäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester in einem kleinen Volumen Chloroform versetzt. Das Gemisch wird 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt, worauf man das Benzaldehyd-2,4-dinitrophenylhydrazon abfiltriert. Das Piltrat wird im Vakuum zu einem orangefarbenen Öl eingedampft, welches in 50 ml Wasser aufgenommen und viermal mit je 25 ml Chloroform gewaschen wird, um das restliche Hydrazon zu entfernen. Die wässrige Phase (pH 2) wird in Eis gekühlt, mit 2-normaler Natronlauge auf einen pil-Wert von 10 eingestellt, mit Kochsalz gesättigt und zweimal mit je 25 ml Methylenchlorid extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum: zu oc-Aminodi- -äthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester eingedampft, der als blassgelbe Flüssigkeit anfällt.

Der in ähnlicher Weise' aus dem entsprechenden Methylester als Ausgangsmaterial hergestellte Methylester zeigt die folgenden Kennwerte: IR (CCl₄) 3400, 1747, 1256, 1164, 1055, 1031 und 969 cm"¹5 KMR (CDOl₅)r 8,67 (t, 6, J=7Hz, CH₂CH₅), 8,17 (br s, 2, EH₀), 6,20 (s, 3, CH^), 6,06 (d, 1, J=20Hz, CH), 5,82

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(d von q., 4, J=8Hz und J= 7Hz, CH₂₅

Beispiel 8

tt-Thioformamido-diäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester

Eine lösung von 2,224 g (6,5 Millimol) cc-Aminodiäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester in 2,5 ml Tetrachlorkohlenstoff wird im Verlaufe von 20 Minuten unter Rühren zu einer eiskalten Lösung von 0,640 g (7,1 Millimol) Thionoameisen-· säureäthylester in 1,0 ml Tetrachlorkohlenstoff zugetropft. Die Lösung wird weitere zwei Stunden "bei 0 C und dann *15 Stunden "bei Raumtemperatur gerührt. Each dem Abdampfen des Lösungsmittels im Vakuum hinterbleibt ein geltes Öl. Durch Chromatographie des Rohprodukts an 50 g Kieselsäuregel unter Verwendung eines Gemisches aus 8 Teilen Äthyläther und 2 Teilen Aceton zum Eluieren erhält man a-Thioformamido-diäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester als Öl.

In ähnlicher Weise wird der entsprechende Methylester aus a-Aminodiäthylphosphonoessigsauremethylenter hergestellt: IR (CCl₄) 3195, 1751t 1427, 1295, 1239 und 1031 cm"¹; KMR (CDCl₅)T 8,65 (aufgespalten t, 6, J=7Hz, CH₂CH₅), 6,18 (s, 3, CH₅), 5,80 (aufgespalten p, 4, CH₂CH₅), 3,96 (d von d, 1, J=22Hz und J=8,5HZ, CH), 0,50 (d, 1, J=6Hz, S=CH) und 0,27 (br m_t 1, HH). .

Beispiel 9

2-0xo-propyl-iT-(trichloräthoxycarbonyl-diäthylphosphono-

methyl)-thioforniiinidat

Eine Lösung von 0,470 g (5,08 Millimol) Chlor-2-propanon in 4 ml Aceton wird innerhalb 15 Minuten unter schnellem Rühren zu einem Gemisch aus 1,783 g (4,62 Millimol) ce-Thiof ormamido-diäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester, 0,702 g (5|08 Millimol) Kaliumcarbonat und 6 ml Aceton zugetropft. Nach 15 Stunden langem Rühren bei Raumtemperatur wird das Gemisch mit 30 ml Methylchlorid verdünnt, und die Salze werden

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atftitriert. Das Filtrat liefert nach dem Eindampfen unter vermindertem Druck 2-0xopropyl-l\r-(trichloräthoxycarbonyl-diäthylphosphonomethyl )-thiof ormimidat.

Der entsprechende Methylester wird aus oc-Thioformamido-diäthylphosphonoessigsäuremethylester in analoger Weise hergestellt: IR (CCl₄) 175.1, 1733, 1597, 1263, 1155, 1055, 1028 und 972 cm~¹; KMR (CDCl₅)T 8,67 (t, 6,, J=7Hz, CH₂CH₃), 7,66 (s, 3, COCH₃), 6,20 (s, 3, CH₃), 6,16 (s, 2, CHCH₂), 5,83 (d von q., 4, J=8Hz und J=7Hz, CH₂CH₃), 5,36 (d, 1, J=21 Hz, CH) und 1,59 (d, 1, J=4Hz, =CH).

Beispiel 10 ...

dl-7«-Azido-3-methyl-3-cepheni-4-car'bonsäuretrichloräthylester

Zu einer eiskalten lösung von 1,821 g (4,43 Millimol) 2-0xopropyl-N-(trichloräthoxycarbonyl-diäthylphosphonomethyl )-thioformimidat und 0,496 g (4,9 Millimol) Triäthylamin in 25 ml trockenem Methylenchlorid werden unter Rühren im Verlaufe von 2 Stunden 0,585 g (4,9 Millimol)· AzidoacetylChlorid in 15'ml Methylenchlorid zugetropft. Die Lösung wird noch 1 Stunde hei 0° C unter Stickstoff gerührt, dann dreimal mit je 25 ml Wasser und einmal mit 25 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. -Nach dem Abdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck hinterbleibt ein öl, aus welchem= man durch Chromatographie an 40 g Kieselsäuregel unter Verwendung eines Gemisches aus Äthylacetat und Benzol zum Eluieren dl-7a-Azido~3-methyl-3-cephem,4-carbonsäuretrichloräthylester erhält.

Der entsprechende Methylester wird in analoger Weise aus 2-0xopropyl-N- (me thoxy'carbonyldi äthylphosphonome thyl-thiof ormimidat hergestellt: IR (CCl₄) 2115, 1790, 1735, 1370, 1300, 1241, 1209 und 1125 cm"¹; KMR (CDCl₃)T 7,85 (s, 3, 3-CH₃), 6,75, 6,48 (ABq., 2, J=17Hz, 2-CH₂), 6,08 (s, 3, CO₂CH₃), 5,45 (d, 1, J=2Hz, H₆ oder H₇) und 5,33 (d, 1, H=2Hz, H₅ oder H₇) r

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Massenspektrum m/e 254, 226 und 171.

Beispiel 11 ·

—7g-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäuretrichloräthylester

Ein Gemisch aus 250 mg dl-7a-Azido-3-methyl-3-cephein-4--car~ ponsäuretrichloräthylester, 250 mg Platinoxid'und 15 ml Benzol wird 4 Stunden "bei 2,8 kg/cm 'hydriert. Der Katalysator wird durch Diatomeenerde abfiltriert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgedampft. Man erhält dl-7oc-Amino-3-methyl~3-cephem-4-carbonsäuretrichloräthylester als Öl.

Der entsprechende Methylester wird in analoger Weise aus dl-7a-Azido-3-methyl-3-cephem-4-car'bonsäuremethylester hergestellt. IR (PiIm) 5,69, 5,81, 7,34, 8,09 und 8,94 μ.; KMR (CDCl₅) T 8,12 (m, 2, HH₂), 7,93 (s, 3,.CH₃), 6,86 and 6,56 (AB <i, 2, J=18Hz, CH₂), 6,15 (s, 3, CO₂CH₃), 5,93 (d, 1, H₆ oder H₇) und 5,58 (d, 1, H₇ oder H₆).

Beispiel 12 . . '.

dl-7-DiazO-3-methyl-3-cephem-4-carT3onsäuretrichloräthylester

Ein Gemisch aus 250 mg Natriumnitrit, 200 mg dl-7a-Amino-3-methyl~3-cephem-4-car"bonsäuretrichloräthylester, 15 ml Methy-· lenchlorid und 15 ml eines Gemisches aus Wasser und Eis wird im Scheidetrichter geschüttelt. 225 mg p-Toluolsulfonsäuremonohydrat werden innerhalb 20 Minuten in drei Anteilen zugesetzt. Hierbei wird der Scheidetrichter stark geschüttelt. Die Methylenchloridschicht wird abgetrennt, über natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Man erhält dl-7-Diazo-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäuretrichloräthylester. - -

Der entsprechende Methylester wird in analoger Weise aus 7«-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäuremethylester hergestellt,-

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15 456 χ

Beispiel 15

U-Benz7,rlaininoae1:h.7/lphosphon5äurediät]iylester~h7^drociilorid

Ein Gemisch aus 288 g Phosphorigsäurediäthylester und 24-8,2 g 1,3»5-Tribenzyl-s-hexahydrotriäzin wird 6 Stunden im ölbad bei 100° C gerührt, wobei das Reaktionsgemisch durch ein Trockenrohr gegen den Zutritt von Feuchtigkeit geschützt wird. Man lässt das Reakti ons gemisch ubernacht Raumtemperatur annehmen, löst es dann in Äthyläther, kühlt die lösung im Eisbad und versetzt sie mit 32 g HCl in 100 ml Ither. Der Niederschlag wird abfiltriert und das Filtrat mit 56,7-g HCl in 200 ml Äther versetzt, worauf man die Feststoffe von der Lösung abfiltriert. Das Filtrat wird mit 31,2 g HCl in Äther versetzt, ttnd nach dem Abdampfen des Äthers hinterbleibt ein Öl. Der abfiltrierte feste Stoff wird aus einem Gemisch aus Tetrahydrofuran und Äthyläther umkristallisiert, wobei der Äthyläther zu der Tetrahydrofuranlösung bei Raumtemperatur- zugesetzt wird. Auf diese Weise erhält man von dem ersten festen Filterrückstand 157 g kristallines Produkt und von dem zweiten festen Filterrückstand 191,8 g kristallines Produkt. Die von den beiden Umkristallisationsvorgängen erhaltenen Filtrate werden vereinigt, und aus ihnen erhält man durch Zusatz von weiterem Äther noch 34,8 g Feststoff. Das so erhaltene F-Benzylaminomethylphosphonsäurediäthylester-hydrochlorid ist hygroskopisch. KI-IR (D₂O)-T : 2,4, s (C₆H₅); 5,58, s (C₆H₅CH₂)J 5,68, m (CH₅CH₂O); 6,4, d "(NH-CH₂-P); 8,8, t (CH₅-CH₂O).

Beispiel 14 ' ■ ' '

Aroinomethylphosphons'äurediäthylester-hydrochlorid

Eine Lösung von 148,4 g N-Benzylaminomethylphosphonsäurediäthylester-hydrochlorid in 1500 ml Äthanol wird 6 Stunden in Gegenwart von 6,1 g Palladium auf Holzkohle bei 2,8 kg/cm hydriert. Das Reaktionsgemisch wird durch Diatomeenerde filtriert und das Filtrat eingedampft. Der Rückstand wird mit trockenem Benzol versetzt und dann ubernacht im Vakuum ge-

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trocknet, ντο "bei man 102 g Aminomethylphosphonsäurediäthylester-hydrochlorid erhält. KI-IR (CDCI₃)-T : 2,7 (NH⁺); 5,7, m (CH₅-CH₂O-P); 6,43, d (NH-CH₂-P); 8,61, t (CH₅CH₂-O).

Beispiel 15

N-Benzyliden-aminomethylphosphonsäurediäthylester

Eine Lösung von 15 g Aminomethylphosphonsäurediäthylester- hydrochlorid in 100 ml Chloroform wird im Eisbad gekühlt. Durch die Lösung wird 15 Minuten unter Rühren gasförmiges Ammoniak geleitet. Das Ammoniumchlorid wird abfiltriert und mit Chloroform gewaschen, und die vereinigten Filtrate und Waschflüssigkeiten werden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und .eingedampft. So erhält man 12 g Aminomethylphosphonsäurediäthylester als gelbliche Flüssigkeit.

Das freie Amin wird im Eisbad gekühlt, worauf man im Yerlaufe Ton 10 Minuten 7,8 ml Benzaldehyd zutropft und dann 10 ml absolutes Äthanol zusetzt. Die-Lösung wird 30 Minuten bei 0° C gerührt und dann mit 60 ml Äthanol verdünnt. Das Lösungsmittel wird abgedampft und der Rückstand zweimal mit Benzol getrocknet, worauf die Lösung im Yäkuum eingedampft wird. So erhält man 17,8 g N-Benzyliden-aminomethylphosphonsäurediäthylester als hellgelbe Flüssigkeit. IR μ: 6,07 (C=N), 9,7 (P-O).

Beispiel 16

N-Benzyliden-a-amino-diäthylphosphonoessigsäure-pmethözybenzylester

Ein mit zwei Tropftrichtern, einem Stickstoffeinleitungsrohr und einem Magnetrührer ausgestatteter, 500 ml fassender Dreihal,skolben wird mit einer Lösung von 15,8 g N-Benzylidenaminomethylphosphonsäurediäthylester in trockenem Tetrahydrofuran beschickt. Der Kolben wird in ein Bad aus festem Kohlendioxid und Aceton von -78° C eingesetzt, worauf man im Verlaufe von 10 Minuten 27 ml einer 2,3-molaren Lösung von

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Phenyllithium in einem Gemisch aus 7 Teilen Benzol und 3 Teilen Äther zu tropft. Dann wird die Lösung 15 Minuten gerührt, worauf man im Verlaufe von 45 Minuten 24,8 ml Ghlorameisensäure-p-methoxybenzylester zutropft. Nach 20 Minuten langem Rühren bei -78° C wird das Kühlbad entfernt, und man lässt die Lösung Raumtemperatur annehmen. Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgetrieben und der ölige Rückstand zwischen 600 ml Äthyläther und einem Gemisch aus T60 ml Phosphatpufferlösung vom pH-Wert 3 und 160 ml Wasser verteilt. Die wässrige Phase wird abgetrennt und zweimal mit Äther gewaschen. Die vereinigten Ätherextrakte werden mit Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft, wobei man 30 g rohen N-Benzyliden-a-amino-diäthylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester als gelbe Flüssigkeit erhält. Das so gewonnene Produkt wird in einer Säule an 400 g Kieselsäuregel, welches mit einem Gemisch aus 1 Teil Äthylacetat und 3 Teilen Äther in die Säule eingefüllt ist, chromatographiert. Der Vorlauf beträgt 600 ml. Es werden zunächst zwei Fraktionen zu je 50 ml, dann 26 -Fraktionen zu je 25 ml und dann 50 ml-Praktionen aufgefangen. Die Fraktionen Nr. 29 bis 45 enthalten 6,845 g reines Produkt. IR (CHCl₃) μ: 5,75 (COOMe), 6,10 (C=N), 8-8,3 und 9,5-9,75

(P-O). ■""■■■-

KMR (CDCl₅)Tr : 8,74 (d von t, J= 7Hz, J=2Hz, 6H), 6,23 (s, 3H), 5,83 (d von p, J=7Hz, J=2Hz, 4H), 5,24 (d, J=20Hz, 1H), 4,79 (s, 2H), 2-3,3 (aromatische MuItiplette, 9H), 1,63 (d, J=4,5Hz, 1H). . .... .

Die Phosphatpufferlösung mit dem pH-Wert 3 wird durch Verdünnen von 58 g 85-prozentiger Phosphorsäure mit Wasser auf 500 ml und Zusatz von 50-prozentiger Natronlauge bis zur Erreichung eines pH-Wertes von 3 hergestellt.

Der in diesem Beispiel verwendete Chloraraeisensäure-p-methoxybenzylester wird folgendermassen hergestellt: Zu einer Lösung von 28 ml Phosgen in 200 ml Äthyläther wird im.Verlaufe

■.."■- 39 - .

50 9826/09 5 8

von 1 1/2 Stunden eine Lösung von 27,6 g p-Anisylalkohol in 140 ml Äther zugetropft. Das Gemisch wird im Yakuum auf 80 ml eingeengt. Die so erhaltene Chlorameisensäure-p-methoxybenzylesterlösung hat eine Konzentration von 2_f5 Millimol je ml.

Beispiel 17

. N-Benzyliden-a-amino-diäthylphosphonoessigsäure-p-' methoxybenzylester

Die Reaktion wird unter Stickstoff in einem mit der. Flamme getrockneten, mit Magnetrührer, Stickstoffeinleitungsrohr und Scheidewand ausgestatteten 50 ml-Dreihalsrundkolben durchgeführt. Der Kolben wird mit einer Lösung von 1,0-2 g N-Benzylidenaminomethylphosphonsäurediäthylester in 8 ml Tetrahydrofuran beschickt und in einem Bad aus festem Kohlendioxid und Aceton gekühlt. Nach Zusatz von 2,0 ml einer· 2,0-molaren Lösung von Pheny!lithium in einem Gemisch aus 7 Teilen Benzol und 3 Teilen Äther wird die dunkelrote Lösung 15 Minuten bei -78° G.gerührt. Dann werden im Verlaufe von 15 Minuten 0,80 ml einer 2,5-molaren Lösung von Chlorameisensäure-pmethoxybenzylester in Äther zugetropft, und die Lösung wird noch 15 Minuten bei -78° C gerührt. Der Zusatz von Ehenyllithium und Chlorameisensäure-p-methoxybenzylester-wird noch zweimal wiederholt, wobei die zugesetzte Menge jedesmal halbiert wird. Hach dem letzten Zusatz von Chlorameisensäure-pmethoxybenzylester lässt man das Reaktionsgemisch im Verlaufe einer Stunde Raumtemperatur annehmen. Nach dem Abdampfen der lösungsmittel im Vakuum hinterbleibt ein goldfarbener Schaum, der zwischen 50 ml Äther und 40 ml 0,5-molarer Phosphatpufferlösung (pH 3) verteilt wird. Die wässrige Phase v/ird abgetrennt und mit 25 ml Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherphasen werden mit 25 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zu 1,71 g eines goldfarbenen Öls eingedampft. Durch Chromatographie des.Rohprodukts an 25 g Kieselsäuregel unter Verwendung eines Gemisches aus 9 Teilen Äther und 1 Teil

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Äthylacetat zum Eluieren erhält man die oben genannte Verbindung als gelbes öl in einer Ausbeute von 39 ^*

Beispiel 18

a-Aminodiäthylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester

Eine Lösung von 16,4 g N-Benzyliden-a-amino-diäthylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester in 100 ml Äther wird im Verlaufe von 30 Minuten unter Rühren zu einer Lösung von 8,25 g p-Toluolsulfonsäure-monohydrat in 150 ml Äther zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wird mit 60 ml Cyclohexan versetzt und die Lösungsmittelschicht abdekantiert« Der Rückstand wird mit einem Gemisch aus 2 Teilen Äther und 1 Teil Cyclohexan gewaschen und wieder dekantiert. Das so erhaltene Öl wird in 25 ml 1-molarer Dikaliumphosphatlösung gelöst (bis zum pH-Wert von etwa 7), und diese Lösung wird viermal mit Methylenchlorid extrahiert. Die Methylenchloridlösung wird dann mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft, wobei man 12 g a-Amino-diäthylaminophosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester als orangefarbenes öliges Produkt erhält. IR (rein) μ; 2,95 (HH)-, 5,75 (C=O) und 9,75 (P-O); KMR (CDCl₃) T : 8,73 (t, 6, J=7Hz, CH₂CH₅), 8,12 (s, 2, M₂), 6,18 (s, 3, ArOCH₃), 6,03 (d, 1, J=21Hz, CH), 6,86 (p, 4, J=7Hz, CH₂CH₅), 4,80 (s, 2, ArCH₂), 3,11 (d, 2, J=SHz, ArH) und 2,64 (d, 2, J=8Hz_r ArH).

Beispiel 19

cc-Thiof Qrmaraido-diäthylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester - ■

0,11 g a-Amino-diäthylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester werden in Methylenchlorid gelöst, und die Lösung wird in ein hermetisch verschliessbares, dickwandiges Rohr eingebracht. Das Methylenchlorid wird durch Ausblasen mit Stickstoff abgetrieben. Zu dem Rohr wird 0,1 ml Äthylthlonoformiat zugesetzt, und das Rohr wird unter Hindurchleiten von Stickstoff in ein Bad aus festem Kohlendioxid und Aceton eingesetzt. In das Rohr wird 0,1 ml Schwefelwasserstoff einkondensiert. Dann wird der

" - 41 - "..·■'■

SO 9826/0958

Verschluss auf das Rohr aufgesetzt und das Rohr aus dem Kühlrad herausgenommen. Nach einer halben Stunde wird das Rohr geschüttelt, um den Inhalt zu vermischen, und dann Übernacht stehen gelassen. Das Rohr wird wieder in einem Bad aus festem Kohlendioxid und Aceton gekühlt und der Verschluss abgenommen. Man lässt das Reaktionsgemische langsam Raumtemperatur annehmen und leitet Stickstoff hindurch, um die letzten Spuren Schwefelwasserstoff abzutreiben. Der Rückstand wird in Methylenchlorid gelöst und filtriert. Nach dem Eindampfen der Lösung hinterbleiben 0,166 g roher a-Ihioformamido-diäthylphosphonoessigsäure—p-methoxybenzylester.

Ein grösseres Präparat von 4 g Rohmaterial wird in einer Säule an 60 g Kieselsäuregel chromatographiert und mit Äthylacetat eluiert. Fach einem Vorlauf von 100 ml werden Fraktionen zu je 10 ml aufgefangen. Die Fraktionen Wr. 10 bis 22 enthalten 2,8 g Produkt. IR (CCl₄) μ: 3,14, 5,72, 6,61, 7,00, 8,01 und 9,65; KMR (CDCl₅) r : 8,78 (t, 3, J=7Hz, CH₂CH₃), 8,73 (t, 3, J=THz, CH₂CH₃), 6,20 (s, 3, ArOCH₃), 5,88 (m, 4, CH₂CH₅), 4,81 (s, 2, ArCH₂), 3,96 (d von d, 1, J=8,5 und J=22Hz, CH), 3,11 (d, 2, J=9Hz, ArH), 2,66 (d, 2, J=9Hz, ArH) und 0,55 (d, 1, J=5Hz, HCS).

Beispiel 20 _ ·

2-0xopropyl-H-(p-methoxybenzyloxycarbonyl-diäthylphosphonomethyl)-thioformimidat .

Eine lösung von 58 mg (0,155 Millimol) cc-Thioformamido-diäthylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester in 0,5 ml Aceton wird nacheinander mit 23 mg (0,166 Millimol) Kaliumcarbonat und 13,5 μΐ (0,168 Millimol) Chlor-2~propanon versetzt. Das Gemisch wird 14,5 Stunden in einem mit Kappe verschlossenen Kolben bei Raumtemperatur gerührt, dann mit 2 ml trockenem Methylenchlorid verdünnt und filtriert. Nach dem Eindampfen des Filtrats unter vermindertem Druck hinterbleiben 60 mg 2-0xopropyl-N-(p-methoxybenzyloxycarbonyl-diäthylphosphono-

; - 42 - ' ' 509826/095 8- ' .

methyl)-thioformimidat als öl.

IR (CCl₄) μ: 5,75, 6,20, 6,28, 6,62, 8,00,8,50, 8,68, 9,71 und 10,24. KIiR (CI)Cl₃)Tr _: 8,73 (t, 6, J=THz, CH₂CE₃), 7,73 (s, 3, COCH₃), 6,20 (s, 5, OCH₃ und OCH₂), 5,90 (d von d, 4, J=7Hz und J=7,5Hz, CH₂CH₃), 5,35 (d, 1, J=21Hz, CH), 4,83 (s, 2, CH₂Ar), 3,14 (d, 2, J=9Hz, ArH), 2,66 (d, 2, J=9Hz, ArH) und 1,60 (d, 1, J=4Hz, -N-CH-). '

Beispiel 21 . /

5-Methyl-6H-1, 3-thiazin-4--carbonsäure-p-methoxybenzylester und 5-Methyl-6H-1,3-thiazin~4-car"bonsäuremethylester

5-Methyl~6H-1,3-thiazin-4-carl)onsäure-p-niethoxybenzylester

A. Eine Lösung von 59 mg 2-0xopropyl-lT-(p-methoxybenzyloxy-. carbonyl-diäthylphosphonoraethyl^thioformimidat in 0,5 ml Aceton wird 21 Stunden bei Raumtemperatur unter Stickstoff mit 25 mg gepulvertem Kaliumcarbonat gerührt. Das Gemisch "wird mit Methylenchlorid verdünnt und filtriert. Mach dem Eindampfen des Piltrats im Vakuum;- hinterbleibt ein öl, das in. 4 ml Tetrachlorkohlenstoff gelöst wird. Die Lösung wird zweimal-mit je 2 ml Wasser und dann mit 4 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum ein-_ gedampft. Man erhält 35 mg 5-Methyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester als gelbes Öl. IR (CCl₄) μ: 5,81, 6,20, 6,61, 7,68, 8,03, 8,49, 9,38 und . 9,58. KI-IR (CDCl₃)-ZT : 7,80 (s, 3, CH₃), 6,73 (aufgespalten s,. 2, CH₂), 6,18 (s, 3, OCH₃), 4,73 (s, 2, ArCH₂), 3,10· (d, 2, J=9Hz, ArH). 2,93 (d, 2, J=9Hz, ArH) und 1,72 (s, 1i, -U=CH-).

B. Ein Gemisch aus 188 mg (0,5 Millimol) cc-Thioformamido-diäthylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester, 152 rag (1,1 Millimol) gepulvertem Kaliumcarbonat und 44 μΐ (0,55 Millimol) Chlor-2-propanon in 2,5 ml Aceton wird bei Raumtemperatur unter Stickstoff gerührt. Nach 22-stündigem Rühren wird das Gemisch filtriert, und die Salze werden mit Aceton gewaschen. Das iait den Waschflüssigkeiten vereinigte Piltrat wird im Va-

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kuuE zu einem dunklen Rückstand eingedampft, der dreimal mit je 2 ml Tetrachlorkohlenstoff geschüttelt wird. Die rereinigten Extrakte werden zweimal mit je 2 ml Wasser und dann mit 2 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Man erhält 116 mg 5-Methyl-6H-1,3-thiazin-4~carbonsäure-p-methoxy'benzylester als orangefarbenes öl. ■>

5-Me thy 1-6H-1, 3-thiazin-4.-carbonsäuremethylester

Nach analogen Verfahren wird 5-Methyl-6H-1,3-thiazin-4-car- -·. bonsäureniethylester entweder aus 2-0xopropyl-N-(methoxyearbonyl-diäthylphosphonomethyl)-thioforminiidat oder aus α—Thio- ·.-formamido-diäthylphosphonoessigsäuremethylester hergestellt. ■' IR (CCl₄) μ: 5,81, 6,39, 6,97, 7,66, 8,00 und 9,29. KMR (CDCl₅) V ; 7,70 (s, 3, CH₃), 6,63 (aufgespalten s, 2, "' CH₂), 6,10 (s, 3, CO₂CH₃) und 1,60 (s, 1, -U=CH-).

Beispiel 22 . ^: . ·

dl-7tt~Azido-3-niethyldecephalosporansäure-p-methoxybenzylester

Eine Lösung von 34 mg (0,123 Millimol) 5-Methyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester in 1 ml trockenem Methylenchlorid wird im Eisbad unter Stickstoff gerührt. Nach , Zusatz von 19 μΐ (0,136 Millimol) Triäthylamin zu der Lösung mit Hilfe einer Injektionsspritze tropft man im Verlaufe von 30 Minuten eine Lösung von 12 μΐ (0,136 Millimol) Azidoaeetylchlorid in 1 ml trockenem Methylenchlorid zu. Die so erhaltene Lösung wird weitere 1,5 Stunden bei 0° C gerührt, dann mit 4 ml Methylenchlorid verdünnt, zweimal mit je 2 ml Wasser und einmal mit 4 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zu 42 mg eines gelbbraunen Öls eingedampft. Das Rohprodukt wird durch präparative DünnschichtChromatographie an einer 0,5 mm-Kieselsäuregel-G-P-platte chromatographiert. Nach dem Entwickeln mit 10-prozentiger Ithylacetatlösung in Benzol erhält man ein scharfes, im Ultraviolett sichtbares Band, aus dem 10 mg

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dl^a-Azido^-methyldeeephalosporansäure-p-methoxybenzylester mit Äthyläther extrahiert werden.

IR (CCl₄) μ: 4,74, 5,59, 5,80, 6,20, 6,61, 7,22, 7,34* 7,69,

8,01, 8,12, 8,29, 8,50, 8,91 und 9,59. ' " KMR (CDCl₃) ti : 7,92 (s, 3, CH₃), 6,82, 6,55 (AB q, 2, J=18Hz,

2-CH₂), 6,18 (s, 3, OCH₃), 5,52 (d, 1, J=1,6Hz, 7H oder 6H), '

5,40 (d, 1, J=1,6Hz, 6H oder 7H), 4,76 (s, 2, CH₂Ar), 3,10

(d, 2, J= 9Hz/ ArH) und 2,61 (d, 2, J=9Hz, ArH). :■

Der entsprechende .Methylester wird in ähnlicher ¥eise aus 5-Methyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäuremethylester hergestellt.

Nach dem ohigen Verfahren werden 5-Methoxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester, 5-Methyl-6H-1,3- , thiazin-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester oder 5-Isobutyryloxym ethyl-6H-1,3-thiazin-4-car bonsäuremethoxyme thylester mit Azidoacetylchlorid zu dl-3-Methoxymethyl-7«-azido-3~ cephem—4-carbonsäure-p-methoxybenzylester, dl-3-Methyl-7oc-azido-3-cephem-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester bzw. dl-3-IsobutyryloxyInethyl-7α-azido-3-cepheIIl-4-carbonsäurenlethoxymethylester umgesetzt, '

Beispiel 23"' ' -.'.*>

5-Acetoxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-p-methoxybenzy!ester

Eine Lösung von 114 mg (0,3 Millimol) a-Thioformamido-diäthylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester in 1,5 ml Aceton wird unter Rühren mit 124 mg (0,9 Millimol) gepulvertem Kaliumcarbonat versetzt» Das Gemisch wird 5 Minuten bei Raumtem-. peratur unter Stickstoff gerührt und dann mit einer Lösung von 48 mg (0,32 Millimol) 1-Acetoxy-3-chlor-2-propanon in 0,5 ml Aceton versetzt, liach 3-stündigem Rühren bei Raumtemperatur werden die Salze aus dem Gemisch abfiltriert und mit Aceton gewaschen. Das mit den Wasehflüssigkeiten vereinigte Piltrat wird im Vakuum zu einem dunklen Öl eingedampft-. Der Rückstand

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509826/Ü958-'

wird in 6 ml Tetrachlorkohlenstoff gelöst und die Lösung mit wässriger Phosphatlösung (1 ml 1-molare Dikaliumphosphatlösung + 2 ml Wasser) und sodann zweimal mit je 3 ml Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft, wobei man 106 mg rohen 5-Acetoxymethyl-6H—1,3-thiazin-4-earbonsäure-p-methoxybenzylester als orangefarbenes Öl er-hält. .

IR (CCl₄).μ: 5,71, 5,82 (Schulter), 6,21, 6,61, 7,67, 8,01, 8,17, 8,49 und 9,58. ■ ''

ZMR (CDCl₅) t . 7_t95 (_s> 3, 0COCH₅), 6,63 (s, 2, 5-CH₂), 6,20". (s, 3, OCH₅), 4,86 (s, 2, CH₂), 4,75 (s, 2, CH₂), 3,13 (d, 2,' J=8Hz, ArH), 2,63 (d, J=8Hz, ArH) und 1,65 (s, 1, N=CH-). .

In analoger Weise wird aus a-Thioformämidodiäthylphosphonoessigsäuremethylester 5-Acetoxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbon~ säuremethylester hergestellt.

Beispiel 24 .

dl—7a-Azidocephalosporansäure-p-methoxybenzylester

Eine Lösung von 100 mg (0,3 Millimol) rohem 5-Acetoxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-earbonsäure-p-n]ethoxybenzylester in 3 trockenem Methylenchlorid wird unter Stickstoff im Eisbad " >. gerührt. Each Zusatz von 56 μΐ (0,4 Millimol) Triäthylamin mit Hilfe einer Injektionsspritze wird im Verläufe von 9® Minuten eine Lösung von 35 μΐ (0,4 Millimol) Azidoaeetylchlorid in . 2 ml trockenem Methylenchlorid zugetropft. Die so erhaltene Lösung wird weitere 60 Minuten bei 0 C gerührt, dann mit 5 ml Methylenchlorid verdünnt, zweimal mit je 5 ml Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zu 115 mg eines dunklen Öls eingedampft. Das Öl wird zweimal mit je 5 ml Tetrachlorkohlenstoff geschüttelt und die Tetrachlorkohlenstoff lösung über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zu 110 mg eines gelben Öls eingedampft» Durch Chromatographie des Rohprodukts an 5g Kieselsäuregel, welches unter einer 5-prozentigen Lösung von Äthylacetat in Benzol in die

■ . - 46 • 5 03826/0958

Säule eingefüllt ist, erhält man durch EluiereiL mit 5-prozentiger Äthylacetatlösung in Benzol 13 mg dl-Tcc-Azidocephalo- . sporansäure-p-methoxybenzylester als klares öl. '_

IR (CCl₄) μ: 4,73, 5,58, 5,73, 6,20, 6,61, 7,20, 7,38, 8,15, 8,47, 8,92 und 9,57.

KMR (CDCl₃) V-. 7,97 (s, 3, OCOCH₃), 6,65, 6,42 (AB q, 2, J=18Hz, 2-CH₂), 6,13 (s, 3, OCH₃), 5,45 (d, 1, J=1,8Hz, 7H oder 6H), 5,38 (d, 1, J=1,8Hz, 6H oder 7H), 5,20, 5,00 (AB q, 2, J=13Hz, CH₉OAc), 3,08 (d, 2, J=9Hz, ArH) und 2,60 (d, 2, ■-. ArH).

In analoger Weise erhält man dl^a-Azidocephalosporansäure— methylester aus 5-Acetoxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäuremethylester. -

IR .(CCl₄) μ: 4,74, 5,56, 5,72, 6,10, 6,96, 7,23, 8,14, 8,93' und 9,67. - ·

KMR (CDCl₃) T : 7,90 (s, 3, QCOCH₃), 6,58, 6,32 (AB q, 2, J=18Hz, 2-CH₂), 6,04 (s, 3, CO₂CH₃), 5,30 (m, 2, 6H und 7H) xmd 5,13, 4,90 (AB q, 2, J=13Hz,. CH₂OAc).

Beispiel 25 ..'.'■'

N-Benzyliden-a-amino-diäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester ' ■ ■_ .

Eine Lösung von 12,738 g (50 Millimol) N-Benzylidenaminomethylphosphonsäurediäthylester in 250 ml trockenem Tetrahydrofuran wird unter Stickstoff in einem Bad aus festem Kohlendioxid und Aceton gerührt. Mit einer Injektionsspritze werden 25 ml einer 2,0-molaren Lösung von Phenyllithium in einem Gemisch aus 7 Teilen Benzol und 3 Teilen Xthyläther zugesetzt. Die dunkelrote Lösung wird 30 Minuten bei -78° C gerührt, worauf man im Verlaufe von 45 Minuten eine Lösung von 5,30 g (25 Millimol) 2,2,2-TrichloräthoxycarbonylChlorid in 50 ml trockenem Tetrahydrofuran zutropft. Nach weiterem 2-stündigem Rühren des Gemisches bei -78° C wird das Trockeneisbad durch ein Eis-Viasserbad ersetzt und das Gemisch noch

- 47 -

50 9826/09 58 . - ■

1 Stunde gerührt. Nach dem Abdampfen des Lösungsmittels im Vakuum hinterbleibt ein gelter Schaum, der zwischen 250 ml Äthyläther und einem Gemisch aus 50 ml 1-molarer, wässriger Phosphatpufferlösung (pH 3) und 50 ml Wasser verteilt wird. Der wässrige Anteil wird abgetrennt und zweimal mit je 50 ml . Äthyläther extrahiert. Die vereinigten Ätherlösungen werden ': mit 100 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magne- siumsulfat getrocknet und im Vakuum zu 17,1 g eines trüben gelben Öls eingedampft. Das Rohprodukt wird durch Chromatographie an 430 g unter Äthyläther in die Säule eingefülltem ; Kieselsäuregels gereinigt. Durch Eluieren mit Äthyläther erhält man 7,058 g N-Benzyliden-a-amino-diäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester als gelbes Öl.

IR (CCl₄) μ: 5,68, 6,10, 7,90, 8,73, 9,48, 9,70 und 10,22. y KMR (CDCl₃) ⁴V : 8,65 (d von t, 6, J=7Hz und J=O,6Hz, CH₂CH₃), 5,72 (d von q, 4, J=8Hz und J=7Hz, CH₂CH₅), 5,11 (d, 1, J=21Hz, CH),^;5,10 (s, 2, CH₂CCl₃), 2,50 (m, 3, ArH), 2,12 (m, 2, ArH) und 1,56 (d, 1, J=5Hz, -N=CH-).

Beispiel 26 ·

oc-Amino-diäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester

A. a-Amino-diäthylphosphonoessigsäuretriehloräthylester- · . p-toluolsulfonat ' _ -'

Eine Lösung von 5,69 g (13,2 Millimol) N-Benzyliden-oc-aminodiäthylphosphqnoessigsäuretrichloräthylester in 25 ml Äthyläther wird unter schnellem Rühren zu einer Lösung von 2,76 g (14,5 Millinol) p-Toluolsulfonsäure-monohydrat in 75 ml Äthyläther zugesetzt. Es fällt sofort ein weisser Niederschlag aus. Das Gemisch wird 10 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und dann in Eis gekühlt. Das Produkt wird abgesaugt, mit kaltem Äthyläther gewaschen und im Vakuum getrocknet, wobei man 6,03 g a-Amino-diäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylesterp-toluolsulfonat als weisses Pulver erhält.

IR (Ν^οΐ).μ: 5,64, 7,86, 8,37 und 9,81.

KMR (DMSO-dg) T : 8,73 (t, 3, J=7Hz, CH₂CH₃), 8,70 (t, 3,

- 48 509826/0958

J=7Hz, CH₂CH₅), 7,70 (s, 3, ArCH₅), 5,78 (zwei sich überlappenden Quintette, 4. J=7Hz, CH₂CH₅), 4,92.(s. 2. CH₂CCl₅), 4,85 Cd, 1, J=21Hz, CH), 2,87 (d, 2, J=8Hz, ArH) und 2,46 (d, 2, J=8Hz, ArH).

B. g-Amino-diäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester

1,03 g (2 Millimol) oc-Amino-diäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester-p-toluolsulfonat werden zwischen 20 ml Methylenchlorid und einer wässrigen Phosphatlösung, "bestehend aus 4 ml 1-molarer, Dikaliumphosphatlösung und 6 ml Wasser, ver- ·_ teilt. Die wässrige Phase (pH 6,8) wird abgetrennt und mit 10 ml Methylenchlorid extrahiert. Die vereinigte organische Lösung wird mit 10 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, -· über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Man erhält 0,67 g a-Amino-diäthylphosphonoessigsäuretrichloräthylester als blassgelbes Öl.

IR (CCl₄) μ: 5,67, 7,93, 8,65, -9,46, 9,70 und 10,24. KME (CDCl₅) T : 8,65 (aufgespalten t, 6, J= 7Hz, CH₂CH₅), 8,08 (s, 2, KH₂), 5,92 (d, 1, J=22Hz, CH), 5,78 (m, 4, CH₂CH₅) und 5,15 (s, 2, CH₂CCl₅).

Beispiel 27

dl^a-Aroino-cephalosporansäure-p-methoxybenzylester

Ein Geraisch aus 31 mg dl^ce-Azidocephalosporansäure-p-meth- " oxybenzylester, 25 mg Platinoxid und 3 ml Benzol wird 60 Mi-

₂ ..

nuten bei 2,8 kg/cm hydriert. Der Katalysator wird durch Diatomeenerde abfiltriert und das Lösungsmittel im Vakuum abgetrieben. Man erhält 19 mg dl^oc-Amino-cephalosporansäurep-methoxybenzylester als blassgelbes Öl.

IR (CHCl₅) 2,94, 5,62, 5,75, 6,20, 6,6t, 7,16, 7,37, 8,02, 8,48, 8,94, 9,62 und 10,92 μ; KMR (CDCl₅) τ 8,18 (br s, 2, NH₂, 7,96 (.s, 3,'O=CCH₅), 6,70 und 6,46 (ABq, 2, J=19Hz, 2-CH₂), 6,18 (s, 3, ArOCH₅), 5,87 (d, 1, J=2Hz, H₆ oder H₇), 5,5^ (d, 1, J=2Hz, H-. oder H₆), 5,30 und 5,03 (ABq, 2, J=13Kz, CH₂OAc), 4,75 (aufgespalten s, 2, ArCH₂), 3,11 (d, 2, J=9Hz, ArH) und 2,61 (d, 2, J=9Hz, ArH).

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Beispiel 28

Wenn man anstelle des in Beispiel 9 verwendeten Chlor-2-propanons andere Halogenacetone verwendet, erhält man die entsprechenden S-substituierten Thioformimidate.

Beispiele für substituierte Halogenacetone, die bei dem Ver-' fahren, gemäss der Erfindung verwendet werden können, um die ·" entsprechenden Thioformimidate der allgemeinen Formel

N P(OAt)₀

zu erhalten, sind die folgenden:

R'-CH₂COCH₂X. , worin X Chlor bedeutet und

N-C-O, H₇CO- , N-C-O-

R¹ β N-C-O, H₇CO- ,

CH

³^N-C-O- , Cl- ,

QI₃-O-CH₂-O- , 3^

Weitere Beispiele sind:

CH-CO- , ³^CH-CO- , (CII-O/Γ*\ -CH₀) .,NCO- ,

- 50 -

5 0 9 8 2 6/0958

N-H N-N

• I!-S- , it UL-S- , /'

Beispiel 29

2-Azido-2-methoxyacetylchlorid.

Ein Gemisch aus 13,86 g (0,1 Mol) 2-Chlor-2-raethoxyessigsäuxe,-methylester, 8,46 g (0,13 Mol) gepulvertem Natriumazid und 80 ml trockenem Dimethoxy'äthan wird 39 Stunden unter Rühren · auf Rückflusstemperatur erhitzt. Nach dem Kühlen auf Raumtemperatur werden die Salze von dem Gemisch abfiltriert und mit' trockenem Äther gewaschen. Nach· dem Abdampfen der lösungsmit- ' tel unter dem Druck der Wasserstrahlpumpe hinterbleibt eine gelbe Flüssigkeit, aus der man durch Destillation 10,5 g 2-Azido-2-methoxyessigsäuremethylester als wasserweisse Flüssigkeit erhält (Kp 75-77° C bei 17 mm Hg).

Zu einer Lösung von 10,40 g (72 Millimol) 2-Azido-2-methoxyessigsäuremethylester in 8,5 ml Methanol werden innerhalb Ϊ5 Minuten unter Rühren 30 ml 2,5-normale wässrige Natronlauge zugetropft. Bei dem Zusatz erwärmt und trübt sich das Ge- ' misch. Das Methanol wird unter vermindertem Druck abgetrieben und der wässrige Rückstand mit konzentrierter Schwefelsäure bis zum pH-Wert 1 angesäuert und mit Äther extrahiert. Die vereinigten Ätherextrakte werden über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft, wobei 8,82 g 2-Azido-2~ methoxyessigsäure als klare Flüssigkeit hinterbleiben.

Eine Lösung von 4,2 g 2-Azido-2-methoxyessigsäure in 10 ml Thionylchlorid wird 20 Minuten in einem 80° C: heissen Ölbad erhitzt. Nach dem Kühlen auf Raumtemperatur wird das Gemisch im Vakuum eingedampft, um das überschüssige Thionylchlorid abzutreiben, und der Rückstand destilliert. Man erhält 2,26 g

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2-Azido-2-methoxyacetylchlorid als wasserweisse Flüssigkeit (Kp 64-66° C bei 27 mm Hg). · _ ..- .

Beispiel 30 ' .

Azidoacetyl-trifluormethylsulfonat

(1) 4,65 g Silberoxid werden in 20 ml Acetonitril suspendiert, und das Gemisch wird auf 0° .C gekühlt. Zu weiteren 20 ml auf 0° C gekühlten Acetonitrils werden 6,64 g Trifluormethylsulfonsäure zugetropft, und diese Lösung wird im Verlaufe von 15 Minuten zu der Suspendion des Silberoxids in dem Acetonitril zugesetzt. Nach weiteren 30 Minuten wird der ge- ^: ringe Überschuss an Silberoxid abfiltriert. Das Piltrat wird unter vermindertem Druck eingedampft und der Rückstand in 20 ml Benzol aufgenommen und unter vermindertem Druck einge- ' dampft. Beim Anlegen eines Vakuums kristallisiert der Rückstand und wird unter Vakuum zu Silbertrifluormethylsulfonat getrocknet.

(2) Eine Lösung von 0,149-g Silbertrifluormethylsulfonat in 5 ml Methylenchlorid wird auf 0° C gekühlt. Nach Zusatz von 0,059 g Azidoacetylchlorid wird das Gemisch 2 Minuten gerührt. Dabei fällt schnell Silberchlorid aus. Das das Azidoacetyltrifluormethylsulfonat enthaltende Rea-ktionsgemisch wird auf · -78° C gekühlt und bis zur Verwendung auf dieser Temperatur gehalten. .

Beispiel 31 Azidoacet7/'lPethansulf onat

(1) AzidoessigsäureisQ-pro-penylester

5,35 g (0,05 Mol) Aaidoessigsäure und 1,82 g (5,7 Milliraol) Quecksilber(II)-acetat werden zu 50 ml Methylenchlorid zugesetzt, die 0,1 ml Bortrifluorid-ätherat enthalten. Durch das Gemisch wird 3 Stunden langsam Propin geleitet, welches zuvor

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liter ein Linde-Molekularsieb 4A geleitet worden ist. Nach Zusatz von 0,5 g Natriumbicarbonat wird das Gemisch durch eine kurze Florisilsäule filtriert. Das Filtrat wird im Vakuum eingedampft und der Rückstand durch Vakuumdestillation gereinigt. Man erhält Azidoessigsäureisopropenylester.

(2) Azidoacetylmethansulfonat

1,41 g (0,01 Mol) Azidoessigsäureisopropenylester und 0,96 g (0,01 Mol) wasserfreie Methansulf ons äure in 15 ml Methylenchlorid werden 3 Stunden bei Raumtemperatur stehen gelassen. Nach dem Abdampfen des Lösungsmittels im Vakuum erhält man Azidoacetylmethansulfonat. - .

Beispiel 31 A , ·
dl-Ta-Azidodeacetoxycephalosporansäure-p-methoxybenzylester

0,028 g 5-Methyl-4-(p-raethoxybenzyloxycarbonyl)-6H-1,3-thiazin werden in 1 ml Methylenchlorid gelöst, und die Lösung wird auf 0° C gekühlt. Nach Zusatz von 0,016 ml Triäthylamin •tropft man zu dem Gemisch im Verlaufe von 30 Minuten 1 ml der Lösung von Azidoacetyltrifluormethylsulfonat zu. Das Reaktionsgemisch wird 5 Minuten gerührt, dann mit Methylenchlorid verdünnt, einmal mit Pufferlösung (pH 7) gewaschen, getrocknet und zu einem Rückstand eingedampft, der durch präparative Dünnschichtchromatographie gereinigt wird. Man erhält dl-Tcc-Azidodeacetoxycephalosporansäure-p-methoxybenzylester.

bei dem obigen Verfahren Azidoacetylmethansulfonat anstelle des Azidoacetyltrifluormethylsulfonats verwendet wird, erhält man dl-yot-Azidodeacetoxycephalosporansäure-p-methoxybenzylester.

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Beispiel 52

dl^ß-Azido-y-methoxycephalosporansäure-p-roethoxybenzylester und dl^a-Azido-^-methoxycephalosporansäure-p-methoxybenzylester .__

Zu einer Lösung von 241 mg (0,72 Millimol) 5-Acetoxymethyl-6H.-1,3-thiazin-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester in 5 ml trockenem Methylenchlorid wird in einem Schuss eine Lösung von 110 μΐ(0,79 Millimol) Triäthylaniin in 1 ml Methylenchlorid zugesetzt. Das Gemisch wird unter Kühlen im Eisbad unter Stickstoff gerührt, wobei im. Verlaufe von 50 Minuten eine Lösung von 119 mg (0,8 Millimol) 2-Azido-2-methoxyacetylchlorid in 3 ml trockenem Methylenchlorid zugetropft wird. Nach wei- terem 1-stündigem Rühren bei 0° C und 2-stündigem Rühren bei Raumtemperatur wird das Reaktionsgemisch mit 10 ml Methylenchlorid verdünnt, zweimal mit je 5 ml Wasser und einmal mit 10 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zu einem gelben Öl eingedampft. Durch Chromatographie des Rohprodukts an 9,0 g Kieselsäuregel unter Verwendung von 10-prozentiger Äthylacetatlösung in Benzol zum Eluieren erhält man dl-7ß-Azido-7-methoxycephalosporansäure-p-methoxybenzylester und dl-7a-Azldo-7-methoxycephalosporansäure-p-methoxybenzylester.

Nach einem analogen Verfahren erhält man aus 5-Methyl-6H-1, 3-thiazin-4-carbonsäuremethylester dl-7ß-Azido-7-methoxy-3-methyldecephalosporansäuremethylester und dl-7a-Azido-7-methoxy-3-methyldecephalosporansäur.emethylester in einem Verhältnis von 3:1.

IR (CGl₄) 7ß-Azido-Isomeres 4,73, 5,60, 5,78, 6,97, 7,30, 8,05, 8,79 und 9,42 μ; KMR (CDCl₃) 7ß-Azido-Isomeres V 7,80 (s, 3, CH₃),.6,76 (s, 2, CH₂), 6,33 (s, 3, OCH₃), 6,13 (s, 3, CO₂CH₃) und 5,12 (b, 1,' 6H). Ausser den Signalen bei T 7,80, 6,76 und 6,13 zeigt das KMR-Spektrum des 7oc-Azido-Isomeren-Absorptionen bei T 6,30 (OCH₃) und 5,20 (6H).

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Beispiel

Nach dem Verfahren des Beispiels 32 werden S-Methoxymethyl-öH-1,3-thiazin-4-earbonsäure-p-methoxybenzylester, 5-Methyl-6H-1,3~thiazin-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester oder 5-Iso-■butyryloxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäuremethoxymethylester mit 2-Azido-2-methoxyacetylchlorid zu dl-3-Methoxymethyl-7ß-azido-7a_rmethoxy-3-cephem-4-car'bonsäure-p-methoxy-■ benzylester, dl-3-Methyl-7ß-azido-7a-methoxy-3-cephem:-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester bzw. dl-3-Isobutyryloxymethyl^ß-azido^oc-methoxy^-cephem^-carbonsäuremethoxymethylester umgesetzt. . .

Beispiel 34 · '

dl-7ß-Azido-7-methoxycephalosporans:äure

250 mg dl-7ß-Azido-7-methoxycephalosporansäure-p-methoxybenzylester werden mit 1,0 ml Anisol und 5,0' ml Trifluoressigsäure unter Kühlen im Eisbad versetzt. Das Gemisch wird 1 Minute auf 0° C gehalten, worauf man die Trifluoressigsäure im Vakuum abtreibt". Der Rückstand wird in verdünnter wässriger Natriumbicarbonatlösung aufgenommen und zweimal mit Äthyläther extrahiert,. Der wässrige Teil wird mit Äthylacetat überschichtet und mit 6-normaler Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,5 angesäuert. Die Äthylacetatschicht wird abgetrennt,. mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft. Man erhält dl-7ß-Azido-7-methoxycephalosporansäure.

Beispiel 35

dl-7ß-Aroino-7-methoxycephalosporansäure

Ein Gemisch aus 190 mg dl-7ß-Azido-7-methoxycephalo.sporansäure, 20 ml Dioxan und 200 mg Platinoxid wird 2 Stunden bei

2,8 kg/cm hydriert. Dann wird der Katalysator durch Diatomeenerde abfiltriert und mit Wasser gewaschen. Das Piltrat und die Waschflüssigkeiten werden im Vakuum zur Trockne eingedampft, wobei man dl-7ß-Amino-7~methoxycephalosporansäure erhält.

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Beispiel 36

a-Thioformamido-diäthylphosphonoessigsäure^^^-trichloräthylester .

6,85 g a-Amino-diäthylphosphonoessigsäure-^^^-trichloräthylester und 6 ml Äthylthionoformiat werden in ein hermetisch verschliessbares, dickwandiges Rohr eingegeben. Das Rohr wird mit Stickstoff gespült und in einem festen Kohlendioxidbad gekühlt. Dann werden in das Rohr 6 ml Schwefelwasserstoff einkondensiert. Das Rohr wird .verschlossen, geschüttelt, um den Inhalt zu mischen, und übernacht bei Raum-' temperatur gehalten. Dann wird das Rohr wieder im Trockeneisbad gekühlt und der Verschluss abgenommen. Man legt ein Siedesteinchen in die Lösung und lässt die Lösung langsam Raumtemperatur annehmen. Die letzten Schwefelwasserstoffspuren werden mit einem Stickstoffstrom abgetrieben. Der Rückstand wird in Chloroform aufgenommen, filtriert und im Vakuum zu einem Öl eingedampft. Dieses Öl ergibt beim Chromatographieren an Kieselsäuregel a-Thioformaroido-diäthylphosphonoessigsäure-2,2,2-trichloräthylester.

Beispiel 37

5-Methoxyfflethyloxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-2, 2,2-trichloräthylester "

Eine Lösung von 3,87 g a-Thioformamido-diäthylphosphönoesslgsaure-2,2,2-trichloräthylester in 50 ml Aceton wird mit 4|15 g gepulvertem Kaliumcarbonat und 1,60 g 1-Chlor-3-methoxymethyloxypropan-2-on versetzt. Das Gemisch wird 4; Stunden bei Raumtemperatur unter Stickstoff gerührt und dann filtriert. Räch dem Eindampfen des Mltrats hinterbleibt ein Rückstand, der in Methylenchlorid gelöst wird. Die Lösung wird mit verdünnter wässriger Dikaliumphosphatlösung und Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und zur Trockne eingedampft. Man erhält 5-Methoxymethyloxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester.

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Das obige Thiazinderivat erhält man auch nach einem zweistufigen Verfahren. So entsteht durch Umsetzung von a-Thioforiaamidodiäthylphosphonoessigsäure-2,2,2-trichloräthylester mit i-Chlor^-methoxymethyloxypropan^-on in Gegenwart von 1 Äquivalent Kaliumcarbonat 3-Methoxymethyloxy-2-oxopropyl-N-(2,2,2-trichloräthyloxycarbohyl-diäthylphosphonomethyl )-thiof ormimidat. Diese Verbindung wird unter Verwendung von Kalium- /. carbonat in Aceton zu dem Thiazinderivat cyclisiert. Pur den , Ringschluss kann man auch Natriumhydrid in Dimethoxyäthan verwenden. -

Beispiel 38

1-Chlor-3-methoxymethyloxypropan-2-on wird nach dem folgenden Verfahren aus Hethylglykolat hergestellt ■

Stufe 1: Methoxymethyloxyessigsäuremethylester

Eine Lösung von 18,02 g Methylglykolat und 20,24 g Triäthylamin in 100 ml wasserfreiem Methylenchlorid wird im Verlaufe von 40 Minuten unter Rühren zu einer eiskalten Lösung von 17,7 g Chlorine thyl-methyläther in 200 ml Methylenchlorid zugetropft. Man lässt das Gemisch übernacht in einem durch ein Trockenrohr gegen Feuchtigkeit geschützten Kolben stehen, wäscht es dann mit Wasser, mit 5-prozentiger wässriger Natriumbicarbonatlösung, wieder mit Wasser und mit Kochsalzlösung, trocknet über Natriumsulfat, filtriert und engt unter vermindertem Druck ein. Durch Destillation des Rückstandes gewinnt man Methoxymethyloxyessigsäuremethylester.

Stufe 2: Methoxr/roethyloxyacetylchlorid

.I95O6 g Methoxymethyloxyessigsäuremethylester in 20 ml Methanol werden im Verlaufe von 30 Minuten mit 57 ml 2,5-n.ormaler wässriger Natronlauge versetzt. Das Methanol wird unter vermindertem Druck abgedampft und der wässrige Rückstand gefriergetrocknet. Man erhält Natriummethoxymethyloxyacetat. Das Natriumsalz wird in 250 ml Benzol dispergiert und die Dispersion mit 1 ml Pyridin versetzt. Unter Kühlen im Eis bad werden 30 ml

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Oxalsäurechlorid zugesetzt. Das Gemisch wird in der Kälte gerührt, bis die Gasentwicklung aufhört, und dann noch 5 Minuten "bei Raumtemperatur gerührt. Dann wird das Gemisch filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft, um das überschüssige Oxalsäurechlorid und Benzol abzutreiben. Durch Destillation des Rückstandes erhält man Methoxymethyloxyacetylchlorid. *

Stufe 3: 1-»Chlor-3-niethoxyinethyloxypropan-2-on

Eine lösung von 13,86 g Methoxymethyloxyacetylchlorid in. 50 ml wasserfreiem Äther wird unter Rühren zu einer eiskalten Lösung von 4,2 g Diazomethan und 10,1 g Triäthylamin in 200 ml Äther zugetropft. Das Gemisch wird weitere 5 Stunden in der Kälte gehalten und dann durch eine Schicht Magnesiumsulfat filtriert. Das ätherische Filtrat des Diazoketons wird im Eisbad gekühlt. Durch die Lösung wird wasserfreier Chlorwasserstoff· geleitet, bis die Stickstoffentwicklung aufhört. Die Lösung

wird mit eiskaltem Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingeengt. Durch Destillation des Rückstandes unter vermindertem Druck erhält man 1-Chlor-3-methoxymethyloxypropan-2-on.

Beispiel 39

dl-7a-Azido-3-methox;piethylox;piethyl-3-cephem-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester

Eine lösung von 4,33 g 5-Methoxymethyloxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsaure-2,2,2-trichloräthylester und 1,38 g Triäthylamin in 100 ml wasserfreiem Methylenchlorid wird bei 0° C unter Stickstoff gerührt. Dann tropft man im Verlaufe von 2 Stunden eine Lösung von 1,63 g Azidoacetylchl'orid in 50 ml Methylenchlorid zu. BTach weiterem 1-stündigem Rühren in der Kälte wird das Reaktionsgemisch mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und zu einem Öl eingedampft. Dieses Material ergibt bei der Chromatographie an Kieselsäuregel dl-7a-Azido-3-methoxymethyl-

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oxyinethyl-3-cepheiD-4-car'bonsäure-2,2,2-trich.lorätliylester.

Beispiel 40

dl-7a-Amino-3-methoxyme thyloxyme thyl^-cephem^-carbonsäure-2,2., 2- tri chloräthylester ; __'

1,63 g dl^a-Azido^-methoxymethyloxymethyl^-cephem-^-car-"bonsäure-2,2,2-trichloräthylester .werden in 80 ml Benzol mit 0,8 g Platinoxid 1 Stunde bei 2,8 kg/cm hydriert. Das Gemisch wird filtriert und eingedampft, wobei dl-7a-Amino-3-'methoxymethyloxymethyl-"3-cephem~4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester als öl hinter bleibt..

Beispiel 411 -

dl^a-Benzylidenamino^-methoxymethyloxymethyl^-eephem^- carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester

Ein Gemisch aus 1,18 g dl-7a-Amino-3-methoxymethyloxymethyl-3—cephem-4-carbonsäure-2.,2,2-trichloräthylester, 0,37 g Benz-» aldehyd und 7,50 g Magnesiumsulfat in 75 ml Methylenchlorid · wird 96 Stunden bei Baumtemperatur gerührt. Dann wird das Gemisch filtriert und das Piltrat im Vakuum zu einem Öl eingedampft. Dieses Material wird mit fünf Anteilen Petroläther verrührt, mit Benzol verdünnt und eingedampft, wobei man dl-^a-Benzylidenamino^HaethoxymethyloxyTnethyl^-cephem^-- carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester erhält.

Beispiel 42

äl^ß-Benzylidenaroino^-methoxymethyloxymethyl^-cephem^- carbonsäure-2, 2, 2-trichloräthylester

Durch eine Lösung von 494 mg dl-7α-Benzylidenamino-3-methoxymethyloxymethyl~3-eephem-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester in 15 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wird unter Kühlen in einem Bad aus festem Kohlendioxid und Aceton Stickstoff hindurchgeleitet. Zur Erzeugung des Anions werden 435 μΐ einer 2,3-molaren lösung von Phenyllithium in einem Gemisch

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aus 7 Teilen Benzol und 3 Teilen Äther zugesetzt. Dann tropft "'man im Verlaufe von 10 Minuten 19 ml Dimethylformamid zu. Zu 'dem Reaktionsgemisch wird eine Lösung von 0,18 ml Wasser und 0,14 ml Essigsäure in 10 ml Tetrahydrofuran zugesetzt. Nach' dem Erwärmen auf Raumtemperatur wird das Reaktionsgemisch mit Benzol verdünnt und sechsmal mit Wasser gewaschen. Die zweite Waschflüssigkeit wird mit Phosphatpufferlösung auf einen < pH-Wert von 3 angesäuert und die fünfte Waschlösung mit Phos-r phatpufferlösung "bis zu einem pH-Wert von 9 alkalisch gemacht. Die Benzollösung wird mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft, wo "bei ein Gemisch aus dl^a-Benzylidenamino^-methoxymethyloxyTBethyl^-cephem^- carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester und dl-7ß-Benzylidenamino-3-methoxymethyloxymethyl-3-cephem-4-carl3onsäure-2,2,2-trichloräthylester hinterbleibt.

Beispiel 43

dl^ß-Amino^-methoxymethyloxymethyl^-cephem^-carbonsäure-2, 2,2-trichloräthylester ~ - ··

172 mg 2,4-Dinitrophenylhydrazin werden unter Rühren zu einer Lösung von 166 mg p-Toluolsulfonsäure-monohydrat in 25 ml absolutem Äthanol zugesetzt. Nach 4-5 Minuten langem Rühren bei Raumtemperatur wird das Reaktionsgemisch mit einer Lösung eines Gemisches der 7a- und 7ß-Isomeren von dl-7-Benzylidenaniino-3-methoxymethyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäur.e-2,2, 2-trichloräthylester (430 mg) in 3 ml Chloroform versetzt. Das Gemisch wird 10 Minuten bei Raumtemperatur gerührt, dann filtriert und das Filtrat im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird mit 2 ml 1-molarer Dikaliumphosphatlösung und 15 ml Wasser versetzt und dreimal mit je' 20 ml Äther extrahiert. .Die Ätherlösung wird mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft. Man erhält ein Gemisch aus dl-7cc-Amino-3-me thoxymethyloxymethyl^r-cephem^-carbo-nsäure^ ,2,2-trichloräthylester und dl-7ß-Amino-3-methoxymethyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester.

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50 98 26/Ü95B

Beispiel 44

dl-7a-(D-a-Azidophenylacetamido)-3-methox;yTBethyloxymethyl-3-cephein-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester und dl-7ß-(D-oc-Azidophenylacetainido^^-raethoxymethyloxjyTiiethyl^-cephem-'icarbonsäure-2,2, 2-trichloräthylester - '

Eine eiskalte Lösung von 325 mg dl-7~Amino-3--niethoxymethyloxyiaethyl-3-ceph.em-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester (Ge-' misch aus dem 7a- und dem 7ß-Isomeren) in 10 ml wasserfreiem Methylenchlorid wird nacheinander mit 0,3 ml Pyridin und 157 mg D-a-Azidophenylacetylchlorid versetzt. Nach 15 Minuten langem Rühren bei.0° C wird das Reaktionsgemisch mit weiterem Methylenchlorid verdünnt und mit Wasser, 1-prozentiger wässriger Phosphorsäure, 5-prozentiger wässriger ITatriumbicarbonatlösung und wieder mit Wasser gewaschen. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft. Durch Chromatographie des Rückstandes an Kieselsäuregel erhält man dl-7ß-(D-oc-Azidophenylacetamido )-3-methoxymethyloxymethyl-3-cephem-4-car bonsäur e~_v 2,2,2-trichioräthylester und. das entsprechende 7oe-Isomere..

Beispiel 45 ·

dl-7ß-[D-a-Azidophenylacetamido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4— carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester

120 mg dl-7ß-(D-a-Azidophenylacetamido)-3-methoxymethyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester werden in 4 ml Dioxan gelöst. Die Lösung wird mit 1 ml Wasser verdünnt und mit einem kleinen Tropfen 1-normaler Perchlorsäure versetzt. ETach 2-stündigem Stehenlassen bei Raumtemperatur wird das Reaktionsgeaisch mit Äthylacetat verdünnt und mit Wasser gewaschen, welches einen.Phosphatpuffer vom pH-Wert 9 enthält. Die organische Phase wird abgetrennt, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft. Man erhält äl_7ß_(D-a-Azidophenylacetamido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester.

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.Beispiel 46

dJ.-7ß-(D-a-Aminophenylacetamido)-3-(N-2,2,2-trichloräthyl)~ carbamoyloxymethyl-3-cephein-4-car "bonsäur e-2,2,2-trichloräthylester ; . __

Eine Lösung von. 100 mg dl-7ß-(D-a-Aminophenylacetamido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-car'bonsäure-2,2,2-trichloräthylester in 0,2 ml v;ass erfrei em Pyridin wird mit 27 μΐ 2,2,2-Trichlor- .' äthylisocyanat versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 1 Stunde bei Raumtemperatur in einem mit einem Stopfen verschlossenen ■ Kolben gehalten und dann- im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird in 10 ml· Äthylacetat gelöst und die lösung zweimal mit je 2 ml 0,5-molarer Phosphatpufferlösung (pH 2) und zweimal mit je 4 ml Wasser gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zu einem Schaum eingedampft. Durch Chromatogra-. phie dieses Materials an Kieselsäuregel erhält man dl-7ß-(D-a-Aminophenylacetamido)-3-(N-2,2,2-trichloräthyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-2, 2, 2-trichloräthylester.·.

Das 2,2,2-Trichloräthylisocyanat wird folgendermassen herge- ■ stellt: 15,0 g 2,2, 2-Trichloräthylamin in 75 ml wasserfreiem Benzol werden zu 435 ml einer 12,5-prozentigen Lösung von Phosgen in Benzol zugetropft. Die so erhaltene Suspension wird übernacht auf 70° C erhitzt, wobei sich eine Lösung bildet, die dann 2 Stunden auf Rückflusstemperatur erhitzt wird. Nach dem Abdestillieren von 300 ml Benzol wird der Rest der Lösung unter vermindertem Druck eingedampft, um das überschüssige Phosgen und Lösungsmittel abzutreiben. Durch Destillation des Rückstandes erhält man 10,2 g 2,2,2-Trichloräthylisocyanat als klare Flüssigkeit; Kp 63-65° C bei 28 mm Hg.

Beispiel 47 . ' · . . ■ '

dl-7ß-(D-a-Aminophenylacetamido)-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Lösung von 119 mg dl-7ß-(D-a-Azidophenylacetamido)-3-(li-•2,2,2-trichloräthyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäu-

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•re-2,2,2-trichloräthylester in 2,0 ml 88-prozentiger Ameisensäure wird innerhalb von 10 Minuten anteilweise mit 600 mg Zinkstaub versetzt. Das Gemisch wird weitere 20 Minuten gerührt und der Zinkstaub abfiltriert und mit 20 ml kaltem V/asser'gewaschen. Das mit den Waschflüssigkeiten vereinigte FiI-trat wird bei 0° C mit Schwefelwasserstoff gesättigt und durch ein Filterhilfsmittel filtriert, welches mit Wasser nachgewa-· sehen wird. Das Flltrat wird dreimal mit ge 10 ml Äthylacetat gewaschen und das gelöste Äthylacetat sodann_ im Hochvakuum abgetrieben. Durch Gefriertrocknen erhält man dl-7ß~(D~a-Aminophenylacetamido)-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure in Form eines Pulvers. . ■

Beispiel 48 '

dl-7ß-Benzylidenamino~7-methoxy-3-methoxymethyloxymethyl-3-cephero-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester

0,494 g dl^oc-Benzylidenamino^-methoxymethyloxymethyl^- cephem-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester werden in 12 ml v/asserfreiem Tetrahydrofuran unter Stickstoff gelöst. Zu derauf -78° C gekühlten Lösung werden im Verlaufe von 0,5 Minuten 0,52 ml einer 2,3-molaren lösung von Phenyllithium in einem Gemisch aus 7 Teilen Benzol und 3 Teilen Äther zugetropft. Nachdem man das Gemisch 1 Minute gerührt hat, setzt man eine Lösung von 0,214 g N-Bromsuccinimid in 8 ml Tetrahydrofuran zu. Das Reaktionsgemisch wird 2 Minuten bei -78° G gerührt, worauf man es Raumtemperatur annehmen lässt. Das Lösungsmittel wird unter vermindertem Druck abgetrieben, bis ein Volumen von 5 ml erreicht ist. Der Rückstand wird in 50 ml Methylenchlorid aufgenommen und zweimal mit Phosphatpufferlösung (pH 7) gewaschen. Die organische Phase wird getrocknet, auf 10 ml eingeengt"und sofort, wie nachstehend beschrieben, verwendet.

Eine Suspension von 0,464 g Silberoxid in 20 ml Methanol wird •unter Rühren im Verlaufe von 10 Minuten mit der obigen Methy-

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15 456 ^T

lenchloridlösung der bromierten Schiff sehen Base versetzt. Das Reaktionsgemisch wird weitere 45 Minuten gerührt. Dann werden die Silbersalze abfiltriert, und das Piltrat wird im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird in Methylenchlorid gelöst, zweimal mit Phosphatpufferlösung (pH 7) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu einem Harz eingeengt. Dieses Harz ergibt durch Chromatographie an Kieselsäuregel dl-Tß-Benzylidenamino-T-methoxy-^-methoxy- · " methyloxymethyl^-cephem^-carbonsäure^^^-trichloräthylester.

Beispiel 49 i

dl-3-Methoxymethyloxymethyl-7-methoxy-7ß-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester

Eine Lösung von 0,304 g dl-7ß-Benzylidenamino-7-methoxy-3-Eiethoxymethyloxymethyl~3-cepheiD-4-carbonsäure-2, 2, 2-trichloräthylester in 12 ml Tetrahydrofuran wird mit 2 ml Wasser und 0,052 g Palladiumchlorid versetzt. Das Gemisch wird 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach dem Abdampfen des Lösungs-~ mittels unter vermindertem Druck hinterbleibt ein Rückstand, der mit drei Anteilen Petroläther verrührt, in Methylenchlorid aufgenommen und mit Magnesiumsulfat getrocknet wird. Die Lösung wird filtriert und zu einem Öl eingedampft. Dieses Material wird in 8 ml Methylenchlorid aufgenommen, auf 0° C gekühlt und zuerst mit 0,30 ml Pyridin und sodann mit 0,086 ml 2-Thienylacetylchlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wird ' 15 Minuten bei 0° C: gerührt, worauf man es in den nächsten 15 Minuten sich anwärmen lässt. Dann wird das Reaktionsgemisch mit Methylenchlorid verdünnt, mit Phosphatpufferlösung (pH 2) und Wasser gewaschen, mit Magnesiumsulfat -getrocknet und im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird durch Chromatographie an Kieselsäuregel gereinigt. Man erhält dl-3»Methoxymethyloxy~ methyl-7-methoxy-7ß-(2-thienylacetamido)-3~cephem-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthy!ester.

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15 456 ΦΓ

Beispiel 50

-Tß- (2- thieny !acetamido )-3-cephem-4~carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester

Eine Lösung von 0,28 g dl^-Methoxymethyloxymethyl^-methoxy-7ß-( 2-thienylacetamidoi-J-cepheiD-^-carbonsäure^, 2,2-trichloräthylester in 8 ml Dioxan wird mit 2 ml Wasser verdünnt und mit 0,05 ml einer 1-normalen PerChlorsäurelösung versetzt. Die Lösung wird 2 Stunden auf Raumtemperatur gehalten, dann mit Äthylacetat verdünnt und mit Wasser, welches, einen Phosphatpuffer enthält (pH 9)» gewaschen. Der organische Teil wird abgetrennt, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Yakuum zu dl-3-Hydroxymethyl-7-methoxy-7ßⁱ-(2-thienylacetamido)-5-eephem-4-carbonsäure~2,2,2-trichloräthylester eingedampft.

Beispiel 51

dl-3-Carbaaoyloxymethyl-7-methoxy-7ß-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester

0,087 g Trichloracetylisocyanat werden zu einer Lösung von 0,217 g dl-3-Hydroxymethyl-7-methoxy-7ß-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester in 2,5 ml Aceton zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wird Übernacht in einem mit Stopfen verschlossenen Kolben stehen gelassen. Dann wird das Lösungsmittel unter Yakuum abgetrieben und durch 2 ml Methanol ersetzt» Hach Zusatz von 0,004 g Natriumcarbonat zu der Hethano!lösung wird das Gemisch 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wird mit Äthylacetat verdünnt, mit Wasser gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum eingedampft. Durch Chromatographie des Rückstandes an Kieselsäuregel erhält man dl-3-Carbamoy!oxymethylene thoxy-7ß-( 2- thienylac et amido )-3-cephem-4-carbonsäur e-2, 2, 2-•fcrichloräthylester.

- 65 -· 50 98 26/095 8

.Beispiel 52

dl~3-Carbamoyloxyinethyl-7-methoxy-7ß-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure

0,112 g dl-3-Carbamoyloxyinethyl-7-inethoxy-7ß-(2-thienylacetamido)-3-eephem-4-carbonsäure-2,2,2-trichloräthylester werden in 4 ml 90-prozentiger Essigsäure gelöst, und die Lösung wird unter Rühren mit 0,30 g Zinkstaub versetzt» Das Reaktionsgemisch wird 15 Minuten bei Raumtemperatur gerührt, dann filtriert und das abfiltrierte Zink mit Äthylacetat gewaschen. Das Filtrat wird im Vakuum zu einem festen Rückstand eingedampft, der zwischen kalter verdünnter wässriger Natriumbicarbonatlösung und Äthylacetat verteilt wird. Der wässrige Teil wird abgetrennt, mit verdünnter Salzsäure bis zu einem pH-Wert von 2 angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden getrocknet und im Vakuum eingedampft. Man erhält dl-3-Carbamoyloxymethyl-7-meth~ oxy-7ß-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure.

Die freie Säure wird in V/asser gelöst, welches eine äquivap lente Menge ITatriunbicarbonat enthält. Durch Gefriertrocknen der Lösung erhält man Natriura-dl^-earbamoyloxymethyl^-meth-· oxy-7ß-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carboxylat.

Beispiel 53

'3-</2-(5-Methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thio7-2-oxopropyl-Ii-(p- ' methoxybensyloxycarbonyl-diäthylphosphonomethylj-thioformimidat . . ·

Eine Lösung von 1,876 g a-Thioformaraid-diäthylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester in 30 ml Aceton wird zuerst mit 0,725 g Kaliumcarbonat und dann mit 1,158 g'1-Chlor-3-<£2-(5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thioJ7~2-propanon versetzt. Das Gemisch wird 14,5 Stunden bei Raumtemperatur unter Stickstoff gerührt. Dann wird das Gemisch filtriert und das PiI-trat unter vermindertem Druck eingedampft. Man erhält 3-/2~-(5-Methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thio7-2-oxopropyl-N-(p-

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methoxybenzyloxycarbonyl-diathylphosphonomethyl)—thioformimidat.

Venn man in dem obigen Beispiel 3 Äquivalente Kaliumcarbonat verwendet, bestellt das isolierte Produkt vorwiegend aus 5-^2~-( 5-Kethyl-1,3,4-thiadiazolyl )-thiomethyl7-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester.

Das 1-Chlor-3-^"-(5-metliyl-1 ,3,4-thiadiazolyl )-thio7-2-proppanon wird folgendermassen hergestellt;

Stufe 1 /2~-(5-Methyl-1,3, 4-thiadiazolyl )-thio7-essigsäure- methylester

13,21 g 2-Mercapto-5-methyl-1,3,4-thiadiazol werden zu einer Suspension von 4,22 g einer 57-pro'zentigen Dispersion von Natriumhydrid in Mineralöl (die dreimal mit Hexan gewaschen worden ist) in 200 ml Dimethoxyä.than zugesetzt. Das Gemisch wird bei Raumtemperatur gerührt, bis die Wasserstoff entwicklung aufgehört hat. Dann tropft man im Verläufe von 30 Minuten 10,85 g Chloressigsäuremethylester zu. Das Reaktionsgemisch wird 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und 0,5 Stunden auf Rückflusstemperatür erhitzt. Nach dem Kühlen wird das Gemisch mit einem grossen Überschuss von Wasser verdünnt und das Produkt mit Äther extrahiert. Die Ätherlösung wird mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu /2~(5-Methy1-1,3,4-thiadiazolyl ^thio/^-essigsäuremethylester eingedampft.

Stufe 2 /2"-(5-Methyl-1 , 3,4-thiadiazolyl )-thio7~essigsäure

Ein Gemisch aus 10,20 g [2.-(5-Methyl-1 ,3,4-thiadiazolyl)-thio7-essigsäuremethylester, 300 ml Methanol und 50 ml 1-normaler wässriger Natronlauge wird 18 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dann wird das Gemisch im Vakuum zur Trockne eingedampft und der Rückstand in 200 ml V/asser aufgenommen und filtriert. Das wässrige Piltrat wird mit 100 ml Äthylacetat überschichtet und mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH-

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Vert von 3 angesäuert. Die organische Phase wird abgetrennt, mit Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zu /jL-(5-Methy1-1,3,4-thiadiazolyl)-thio/-essigsäure eingedampft»

Stufe 3 ^-(5-Methyl-i,3,4-thiadiazolyl)-thio7-acetylchlorid

4,25 ml- Oxalsäurechlorid und 0,4 ml Dimethylformamid werden · unter Rühren im Eisbad zu einer kalten Suspension τοη 4,76 g /?-(5-Methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thio7-essigsäure in 100 ml trockenem Benzol zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wird 1 Stunde bei 5 C und dann 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt, mit eiskalter gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Takuum eingedampft. Der Rückstand wird mit trockenem Benzol, verdünnt und wieder eingedampft, wobei man ^-(5-Methyl-1_f3,4-thiadiazolyl)-thio7-acetylchlorid erhält.

Stufe 4 1-Chlor--3-<£2-(5-methyl~1,3,4-thiadiazolyl)-thio7-2-propanon

5,3 g des in der vorhergehenden Verfahrensstufe erhaltenen Säurechlorids werden in 100 ml Äther gelöst, und die Lösung wird im Verlaufe von 30 Minuten unter Rühren zu einer eiskalten Lösung von 1,1 g Diazomethan und 2,53 g Triethylamin in 50 ml Äther zugesetzt. Das Gemisch wird 6 Stunden bei 0° C gerührt ο Das Triäthylamin-hydrochlorid wird abfiltriert und mit Äther gewaschen¹. Das mit den Waschflüssigkeiten vereinigte Filtrat wird im Eisbad gekühlt, worauf man 5 Minuten wasserfreien Chlorwasserstoff einleitet. Dann wird die Lösung mit kaltem Wasser, mit 5-prozentiger wässriger Natriumbicarbonat« lösung und mit Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zu 1-Chlor-3-^2-(5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thio7-2-propanon eingedampft.

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Beispiel 54-

5_/2_(5_Methyl-1 ,3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl7-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester

Eine Suspension von 0,25 g einer 50-prozentigen Dispersion von Natriumhydrid in Mineralöl, die dreimal mit Hexan gewaschen worden ist, in 10 ml wasserfreiem Dimethoxyäthan wird zu einer Lösung von 2,75 g 3-/2"-(5-Methyl-1 ,-3,4-thiadiazolyl)-'thi_io7'~2-oxopropyl-IT-(p-methoxy"benzyloxycarbonyl-diäth.ylphosphonomethyl)-thioformimidat in 30 ml Dimethdxyäthan zugesetzt. Nach 5 Minuten langem Rühren wird das Reaktionsgemisch mit Benzol verdünnt und mit Wasser gewaschen. Die organische Phase wird mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft,· wobei 5-</2"-(5-Methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl7~6H-1 , 3-thiazin-4~carbonsäure-p-methoxybenzylester hinterbleibt.

Beispiel 55 . · ·

dl-7a-Azido-3-/2~-C5-njethyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thioraethyl7-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzyleste.r

.0,61 g Iriäthylamin in 5 ml Methylenchlorid werden zu einer Lösung von 1,63 g 5-^-(5-Methy 1-1, 3, 4-thiadiazolyl )-thio~ methyl7-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester in 40 ml trockenem Methylenchlorid zugesetzt. Die Lösung wird unter Stickstoff gerührt, im Eisbad gekühlt und im Verlaufe von 2 Stunden tropfenweise mit einer Lösung von 0,72 g Azidoacetylchlorid in 20 ml Methylenchlorid versetzt. Nach dem Erwärmen auf Raumtemperatur.wird das Reaktionsgemisch viermal mit Wasser gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Yakuum zu einem dunklen Öl eingedampft. Dieses Material wird durch Chromatographie an Kieselsäuregel gereinigt, und man erhält dl-7a-Azido-3-/2-(5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl7-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester.

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ΊΟ

Beispiel 56

dl-7oc-Amino-3-/2~-( 5-methyl-1, 3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl/^r-3-eephem-4-carb~onsäure-p-methoxybenzylester

Eine Lösung von 0,78 g dl-7a-Azido-3-/2-(5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl7^r-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybensyl- ester in 40 ml Benzol wird 1 Stunde in Gegenwart von 0,50 g

2
Platinoxid bei 2,8 kg/cm hydriert. Das Gemisch wird im Vakuum zu einem schwarzen Harz eingedampft. Dieses Harz wird in Äthylacetat gelöst und die Lösung durch eine Schicht aus glei-" • chen Teilen Kieselsäuregel und einem Filterhilfsmittel - "Super CeI" - filtriert und der Filterrückstand mit weiterem Äthylacetat gewaschen. Das mit den .Waschflüssigkeiten vereinigte Filtrat wird im Vakuum eingedampft, und man erhält dl-7a-Amino-3-/2"-(5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl7-3-cephem-4-carbonΞäure-p-methoxybenzylester. ·

Beispiel 57

dl-7a-Benzylidenamino-3-_i/2~-(5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl7-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybensylester

Ein Gemisch aus 0,557 g dl-7a-Amino-3-/2"-(5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl/^r-3--cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester, 0,181 g p-Nitrobenzaldehyd, 25 ml Methylenchlorid und 2,50 g Magnesiumsulfat wird 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dann wird das Gemisch filtriert und das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird zweimal mit .-Benzol verdünnt und eingedampft, und man erhält dl-7a-Benzylidenamino^-^-^-methyl-i ,3,4-thiadiazolyl)-thioHethyl7^r-3-eephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester.

Beispiel 58

dl-7ß-3enzylidenamino-3-_</?-(5-methyl-1,3,4-thiadiasolyl)-thiomethyl/^r-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester

Eine Lösung von 0,688 g dl-7a~Benzylidenamino-3--_</2~-(5-methyl-1,3,4-thiadia2;olyl)-thion]ethyl7'-3-cephem-4-carbonsäure-p-

- 70 50 98 26/095 8

methoxybenzylester in 10" ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wird unter Stickstoff auf -78° C gekühlt. Dann werden schnell unter Rühren 0,50 ml einer 2,3-molaren Lösung von Phenyllithium in Benzol und Äther zugesetzt. Hierauf tropft man im Terlaufe von 5 Minuten 12,5 ml Dimethylformamid zu. Man rührt noch 1 Minute "bei -78° C und versetzt das Reaktionsgemisch dann mit einer Lösung von 0,21 ml Wasser und 0,16 ml Sssigsäure in 5 ml Tetrahydrofuran. Man läss.t das Gemisch Raumtemperatur annehmen, verdünnt es mit Benzol und wäscht es_ sechsmal mit Was-¹ ser. Die zweite Waschflüssigkeit wird mit Phosphatpufferlösung. (pH 3) und die fünfte Waschflüssigkeit mit Phosphatpufferlösung (pH 9) versetzt. Nach dem Trocknen über Magnesiumsulfat wird die Benzollösung im Vakuum eingedampft, und man erhält ein Gemisch aus dl-7a-Benzylidenamino-3-/2~-(5-methyl-1,3,4- .· thiadiazolyl)-thiomethyl7-3—c ephem-4-car "bonsäur e-p-methoxybenzylester und dl-7ß-Benzylidenamino-3-_//2~-(5-methyl-1,3, 4-thiadiazolyl)-thiomethyl/^r-3-cephem-4-carbonsäure~P'-methoxybenzylester.

Beispiel 59

dl-7ß-Amino-3-/2~-(5-methyl-1 , 3,4-thiadiazol■yl)-thiomethy]J7-·3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester

0,633 g dl-7-Benzylidenamino-3-^2"-(5-methyl-1, 3,4 lyl)-thiomethy2J7-3-cephem-4-carbonsäure~p-methoxybenzylester (ein Gemisch aus dem 7 α - und dem 7ß-Isomeren) in 5 ml Chloroform werden zu einem Gemisch von 0,202 g p-Toluolsulfonsäurermonohydrat und 0,210 g 2,4-Dinitrophenylhydrazin in 30 ml Äthanol (dieses Gemisch ist vorher 45 Minuten gerührt worden) zugesetzt. Nach 30 Minuten langem Rühren bei Raumtemperatur wird das Gemisch filtriert und das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit 15 ml Wasser versetzt, die 2 ml einer 1-molaren Dikaliumphosphatlösung enthalten, und dreimal mit je 10 ml Äther extrahiert. Die Ätherextrakte werden mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft. Das hinterbleibende Öl ist ein Gemisch

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aus dl-Tcc-Ainino-^-/?-( 5-methyl-1,3,4~thiadiazolyl)-thiomethyl7-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester und dl-7ß-Amino-3-/2"-( 5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl )-thiomethyl7-3-cephem-4-ear-■bonsäure-p-methoxybenzylester. "

Beispiel 60 .

dl-7«-/T-(1H )-tetrazolylacetamid^-3-/2"-( 5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl )-thioinethyl7-3-cepheni-4-ca2?lionsäure-p-metlioxyl3enzylester und ä.l-7Q-/J-X1H)-tetrazolylacetamido7-3-Z2*-_(5-methyl-113»4-thiadiazolyl)-thiomethy^-3-cephem-4-carbonsäure-proethoxyTpenzylester · ■-

Eine Lösung von 0,46 g dl-7-Amino-3-^-(5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl )-thioinethyl/⁷'-3-cepheni-4-carbonsäure-p-inethoxybenzyleeter (Gemisch aus dem, 7α- und dem 7ß-Isomeren) in 8 ml trok-' kenem Methylenchlorid wird im Eisbad unter Stickstoff gekühlt. Dann setzt man schnell nacheinander 0,45 ml Pyridin und 0,145 g 1-(1H)-Tetrazolylacetylehlorid zu. Das Reaktionsgemisch wird 15 Minuten bei 0 C gerührt, dann mit Benzol "verdünnt und fünfmal mit Wasser gewaschen. Die erste und die zweite Waschflüssigkeit werden mit Pafferlösung bis zu einem pH-Wert von 2 angesäuert, und die vierte Waschflüssigkeit wird mit Pufferlösung bis zu einem pH-Wert von 9 alkalisch gemacht. Die Benzollösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu einem Öl eingedampft. Dieses Material wird durch Chromatographie an Kieselsäuregel in dl-7oc- /T-( 1-H )-Tetrazolylacetamido7-3-^-( 5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl )-thiomethyl/^r-3-cephem-4-carbonsäure-p-niethoxybenzylester und dl-7ß-/T-(iH)-Tetrazolylacetamido7-3-/5-.(5-methyl-1,3_;4-thiadiazolyl)-thiomethyl/^r-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester zerlegt. .

Beispiel 61'

dl-7ß-/T-(1H)-Tetrazolylacetamido7-3-/2~-(5-methyl-1,3,4-thiadiazolyl) -thiomethyl/^-cephem^^carbonsaure

2,5 ml eiskalte Trifluoressigsäure werden zu einem kalten Ge-

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misch aus 0,5 ml Anisol und 0,106 mg dl-7ß-/T-(iH)-Tetrazolyl-

-1, 3,4-thiadiazolyl)-thioroethyl7--3- -

cephem-^-carbonsäure-p-methoxybenzylester zugesetzt. Die Lösung wird 5 Minuten auf 0° C gehalten und dann bei 0 C im Vakuum eingedampft, um die überschüssige Trifluoressigsäure abzutreiben. Der ölige Rückstand wird mit Toluol verdünnt und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der halbfeste Rückstand wird mit verdünnter wässriger'Natriumbicarbonatlösung aufgenommen und mit Methylenchlorid extrahiert. Die wässrige Phase ■ wird auf einen pH-Wert von 2,5 angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Nach dem Abdampfen des Äthylacetats und Trocknen über Magnesiumsulfat erhält man dl-7ß-/T-( 1H)-Tetrazolylacet~ amid_o/^r-3-/2'-(5-methyl-1, 3>4-thiadiazolyl)-thiomethyl7-3-cephem-4-carbonsäure. Diese Säure wird in einem geringen Überschuss wässriger Natriumbicarbonatlösung gelöst. Beim Verdünnen der Lösung mit Äthanol fällt Natrium-dl-7ß-/T-(iH)-tetrazolylacetamido7-3-/2"-(5-methyl-1 ,3,4-thiadiazolyl)-thiomethyl7-3-cephem-4-carboxylat aus.

Beispiel 62 N-Benzylarainomethylphosphonsäuredibutylester-hydrochlorid

Ein Gemisch aus 59>6 g 1,3,5-Tribenzyl-s-hexahydrotriazin und 97,1 g Phosphorigsäuredibutylester wird 6 Stunden unter Rühren auf 100° C erhitzt. Nach dem -Kühlen auf Raumtemperatur wird das Reaktionsgemisch mit 1000 ml Äthyläther verdünnt. Die lösung wird im Eisbad gekühlt und mit wasserfreiem Chlorwasserstoff versetzt, bis kein weiterer Niederschlag ausfällt< > Das Rohprodukt wird gesammelt, mit Äther gewaschen und umkristallisiert. Man erhält N-Benzylaminomethylphosphonsäuredibutylester-hydrochlorid.

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Beispiel 63

Aminoroethylphosphonsäuredibutylester-hydrochlorid -

Ein Gemisch aus 122,4 g .Ν-Benzylaminomethylphosphonsäuredibutylester-hydrochlorid und 5»0 g 10-prozentigem Palladium auf gepulverter Holzkohle in 1000 ml Äthanol wird 2 Stunden "bei 2,8 kg/cm hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und das Piltrat unter vermindertem Druck zu Aminomethylphosphonsäuredibutylester-hydrochlorid eingedampft.

Beispiel 64 Aminoraethylphosphonsäuredibutylester

Eine Lösung von 88,4 g Aminomethylphosphorrsäuredibutylesterhydrochlorid in 400 ml Wasser wird mit 183,0 g Dikaliumphosphat und 800 ml Wasser versetzt. Das Gemisch wird gerührt, bis es klar geworden ist, und dann viermal mit Methylenchlorid extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei Aminomethylphosphonsäuredibutylester als Rückstand hinterbleibt. ■ .

Beispiel 65 N-Benzylidenaminoiaethylphosphonsäuredibutylester

Ein Ge'misch aus 69,7 g Aminomethylphosphonsäuredibutylester und 33,0 g Benzaldehyd in 600 ml Benzol wird 3 Stunden mit 150 g Magnesiumsulfat gerührt. Das Gemisch wird .filtriert, und die Salze werden mit Benzol gewaschen. Nach dem Eindampfen des Piltrats im Vakuum hinterbleibt N-Benzylidenaminomethylphosphonsäuredibutylester.

Beispiel 66 . .

N-Benzyliden-oc-aminodibutylphosphonoessigsäure-p-bromphenacyl-

31,1 g N-Benzylidenaminomethylphosphonsäuredibutylester werden

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in 500 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran gelöst, und die Lösung wird unter Stickstoff auf -78° C gekühlt. Im "Verlaufe von 5 Minuten werden 46 ml einer 2,2-molaren Lösung τοη Butyl- lithium in Hexan zugesetzt. Die Lösung wird weitere 30 Minuten "bei. -78° C gerührt, worauf man im Verlaufe von 45 Minuten eine Lösung von 13,9 g Chlorameisensäure-p-bromphenacylester in 100 ml Tetrahydrafuran zutropft. Das Reaktionsgemisch wird weitere 2 Stunden bei.-78° C gerührt, worauf man es im Verlaufe von 30 Minuten sich allmählich auf 3° β erwärmen lässt. Hach dem Abdampfen des Lösungsmittels im Vakuum hinterbleibt ein Harz, welches zwischen 500 ml Äther und 100 ml 0,5-mola- , rer Phosphatpufferlösung (pH 3) verteilt wird. Die Ätherphase wird abgetrennt, mit Wasser und mit gesättigter Kochsalzlö- . sung gewa&chen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu einem Öl eingedampft. Die chromatographische Reinigung dieses Materials an Kieselsäuregel liefert H-Benzylidena-arainodibutylphosphonoessigsäure-p-bromphenacylester.

Der in dem obigen Beispiel verwendete Chlorameisensäure-pbromphenaeylester wird folgendermassen hergestellt: Eine Lösung von 21,4 g p-Bromphenacylalkohol und 10,1 g Triäthylamin in 50 ml wasserfreiem Benzol wird im Verlaufe von 30 Minuten unter Rühren zu 170 ml einer im Eisbad gekühlten 12,5-prozentigen Lösung von Phosgen in Benzol zugetropft. Der Kolben wird mit einem Stopfen verschlossen und das Reaktionsgemisch Übernacht bei Raumtemperatur stehen gelassen.· Das Triäthylaminhydrochlorid wird abfiltriert und das Filtrat im Vakuum eingeengt, um überschüssiges Phosgen und Lösungsmittel abzutreiben. Each Zusatz von frischem Benzol dampft man im Vakuum ein. Dies wird mehrmals wiederholt, um die letzten Spuren Phosgen abzutreiben. Nach dem letzten Abdampfen erhält man rohen Chlorameisensäure-p-bromphenacylester.

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Beispiel 67

pt-AKinodibutylphosphonoessigsäure-p-brorophenacylester

Eine lösung von 15» 4 g iT-Benzyliden-cc-aminodibutylphosphonoessigsäure-p-bromphenacylester in 100 ml Athyläther wird im Verlaufe von 25 Minuten unter Rühren zu. einer Lösung von 5»4 g p-Toluolsulfonsäure-monohydrat in 150 ml Äthyläther zugetropft· Dabei fällt sofort ein Niederschlag aus. Fach Zusatz von 100 ml Cyclohexan werden die Lösungsmittel abgetrennt. Der Rückstand wird mit einem Gemisch aus 2 Eeilen Äthyläther und 1 leil Cyclohexan gewaschen und wieder dekantiert. Der niederschlag wird mit 60 ml 1-molarer Dikaliumphosphatlösung und Wasser verdünnt und mit Methylenchlorid extrahiert. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Yakuum zu oc-Aminodibutylphosphonoessigsäure-p-bromphenacylester eingedampft.

Beispiel 68

g-^hioforsiaiHidodibutylphosphonoessigsäure-p-bromphenaogFlester

Eine Lösung von 12,56 g a-Aminodibutylphosphonoessigsäure-pbromphenacylester in 15 ml tetrachlorkohlenstoff wird unter Rühren zu einer eiskalten Lösung von 2_r64 g Ehionoaiaeisensäureäthylester in 5 ml Tetrachlorkohlenstoff zügetropft. Das Kühlbad wird entfernt und die Lösung Übernacht in einem mit Stopfen verschlossenen Kolben stehen gelassen. Lösungsmittel und überschüssiges Reagens werden unter vermindertem Druck .abgetrieben· Durch Chromatographie des öligen Rückstandes an Kieselsäuregel erhält man «-ThioformaBidodibutylphosphono- .' essigsäure-p-bromphenacylester.

Beispiel 69 -

5-Isobutyryloxymethyl-6H-1,3~thiazin-4-carbonsaure-pbromphenacylester

Eine Lösung von 6,10 g a-Thioformamidodibutylphosphonoessigsäure-p-broisphenacylester in 50 ml Aceton wird mit 4,98 g ge-

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pulvertem Kaliumcarbonat versetzt. Das Gemisch wird unter Stickstoff gerührt, wobei im Verlaufe von 10 Minuten eine Lösung von 2,32 g 1-Chlor-3-isobutyryloxy-2-propanon in 10 ml Aceton zugetropft v/ird. Das Reaktionsgemisch wird noch 3 Stunden bei·Raumtemperatur gerührt und dann filtriert. Beim Eindampfen de's Filtrats unter vermindertem Druck hinterbleibt ein dunkles öl, das zweimal mit je 50 ml Tetrachlorkohlenstoff extrahiert v/ird. Die vereinigten Extrakte werden mit 0,5-molarer Dikaliumphosphatlösung, V/asser und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zu 5-Isobutyryloxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-earbonsäure-p-bromphenacylester eingedampft.

Das in diesem Beispiel verwendete 1-Chlor-3-isobutyryloxy-2-propanon wird folgendermaßen hergestellt: Eine lösung von 9,4 g Lithiumisobutyrat in 25 ml H exam ethyl phosphor säure tr iamid wird mit 12,7 g 1,3-Dichlorpropanon versetzt. Das Gemisch wird 3 Stunden auf Raumtemperatur gehalten, dann mit 200 ml Benzol verdünnt und sechsmal mit Wasser gewaschen. Die organische Lösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft. Durch Va-. kuumdestillation des Rückstandes erhält man 1-Chlor-3-isobutyryloxy-2-propanon.

Beispiel 70

dl-7a-Azido-3-isobutyryloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-pbrosphenacylester

1,83 g Triäthylamin werden zu einer Lösung von 5 »35 g 5-Iso-. butyryloxymethyl-oH-1,3-thiazin-4~carbonsäure-p-bromphenacylester in 100 ml wasserfreiem Methylenchlorid zugesetzt. Die Lösung wird im Eisbad gekühlt und unter Stickstoff gerührt. Dann werden zu der Lösung im Verlaufe von 2 Stunden 2,15 g Azidoacetylchlorid in 50 ml Methylenchlorid zügetropft„ Das Reaktionsgemisch wird mehrmals mit V/asser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck zu

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einem dunklen Öl eingedampft. Dieses Material liefert "bei der Reinigung durch Chromatographie an Kieselsäuregel dl~7oc-Azido-3-isobutyryloxymethyl-3-cephem-3-carbonsäure~p-bromphenacylester.

Beispiel 71 ' .

dl-7a-AiQino-3-isobutyryloxymetliyl-3-cephem-4-carbonsäurep-bromphenacylester

Ein Gemisch aus 0,62 g dl-7a-Azido-3-isobutyryloxyn)ethyl--3-cephem-4-carbonsäure-p-bromphenacylester, 0,25 g Platinoxid und 30 ml Benzol wird 30 Minuten unter einem Wasserstoffdruck von 2,8 kg/cm geschüttelt. Das.Benzol wird im Vakuum abdestilliert und der Rückstand in Äthylacetat aufgenommen. Dieses Gemisch wird durch eine Filterschicht aus gleichen Teilen Kieselsäuregel und Filterhilfsmittel ("Super CeI") " filtriert, um den Katalysator zu entfernen. Durch Eindampfen des Filtrats unter vermindertem Druck erhält man dl-7oc~-Amino-3-isobutyryloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-bromphenacyl·- ester.

Beispiel- 72

dl-3-Isobutyryloxymethyl-7oc~(p-nitrobenzylidenamino)-3-cephem-4-carconsäure-p-bromphenacylester

Ein Gemisch aus 0,50 g dl^a-Amino^-isobutyryloxymethyl^- eephem-4-carbonsäure-p-bromphenacylester, 0,15 g p-Nitrobenzaldehyd und 2,50 g Magnesiumsulfat in 25 ml Methylenchlorid wird 16 Stunden bei Raumtemperatur in einem mit Stopfen verschlossenen Kolben gerührt. Dann wird das Gemisch filtriert und das Filtrat unter vermindertem Druck eingedampft. Der •Rückstand wird in Benzol aufgenommen und das Lösungsmittel im Vakuum abgetrieben. Nach Wiederholung dieses Vorganges erhält man dl-3-Isobutyryloxymethyl-7cc-(p-nitrobenzylidenamino)-3-eephein-4-earbonsäure-p-bromphenacylester.

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Beispiel 73

dl-3-Isobutyryloxymethyl-7ß-(p-nitrobenzylidenamino)-3-eepheEi-4-carbinsäure-p-bromphenacylester

0,60 g dl-3-Iso.hutyryloxymethyl-7a-(p-nitrobenzylidenamino)-3-cephem-4-carbonsäure-p-bromphenacylester werden in 15 mi wasserfreiem Tetrahydrofuran gelöst, und die Lösung wird unter Stickstoff auf -78° C gekühlt. Dann setzt man zwecks Bildung des Anions 1 Äquivalent Phenyllithium in Form von 0,41 ml einer 2,3-molaren Phenyllithiumlösung in einem Gemisch aus 7 Teilen Benzol und 3 Teilen Äther zu. Sodann _Λ tropft man im Verlaufe von 5 Minuten 2Ö> ml Dimethylformamid zu. Man rührt das Gemisch 1 Minute bei -78° C und setzt dann eine Lösung von 0,17 ml Wasser und 0,14 ml Essigsäure in 10 ml Tetrahydrofuran zu. Man lässt das Reaktionsgemisch Raumtemperatur annehmen, setzt 250 ml Benzol zu und wäscht die Lösung sechsmal mit Wasser. Die zweite Waschflüssigkeit wird, mit Phosphatpufferlösung auf einen pH-Wert von 2 angesäuert, und die fünfte Waschflüssigkeit -wird mit Pufferlösung auf einen pH-Wert von 8 alkalisch gemacht. Die Benzollösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei ein Gemisch aus dl-3-Isobutyryloxymethyl-7a-(p-nitrobenzylidenamino)-3-cephem-4-carbonsäure-p-bromphenacylester und dl-3-Isobutyryloxymethyl-7ß-(p-nitrobensylidenamino )-3-cephem-4-carbonsäure-p-bromphenaeylester hinterbleibt.

Beispiel 74

dl-7ß-Aniino-3-isobutyryloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäurep-bromphenacylester

524 mg dl-3-Isobutyryloxymethyl-7-(p-nitrobenzylidenamino)-3-' cephem-4-carbonsäure-p-bromphenacylester (Gemisch aus dem 7a- und dem 7ß-Isomeren) werden in 3 ml Chloroform gelöst, und die Lösung wird zu einer Lösung von 2,4-Dinitrophenylhydrazin-p-toluolsulfonat in Äthanol zugesetzt (die zuvor aus 164 mg 2,4-Dinitrophenylhydrazin und 158. mg p-Toluölsulfon-

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säure-monohydrat in 30 ml Äthanol, nut er 45 Minuten langem Sühren hergestellt worden ist). Das Gemisch, wird 30 Hinuten gerührt, dann filtriert -und eingedampft. Der Rückstand wird mit ■wässriger Phosphatpufferlösung (pH 9»2) versetzt und dreimal mit Äther extrahiert. Die Ätherextrakte werden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Yakuum eingedampft. Man erhält dl^a-Amino^-isobutyryloxymethyl^-eepheiB^-carbonsäure-p-bromphenacylester und dl-7ß-Amino~3-isobutjrjloxymethyl-3-cephem-4~carbonsäure-p-bromphenaeylester.

Beispiel 75

dl—7a— C 2-Furylacetaniido )—3—isobutyr yloxymethyl—3-©epheB—4— carbonsäure—p-bromplienacylester und dl—7ß— ( 2-Furylacetainido }— 3-isobutJryloxJEϊetllyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-'brollpllenacylester

200 mg eines Gemisches aus dl-7a-&ntino—3-isobutyryloxymethyl— 3ⁱ-cephem-4-carbonsäure-p-broiBphenacylester und dl-7ß-Amino-3-isobutyryloxyIaethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-'broI^Iphenacylester werden in 4 ml wasserfreiem Methylenchlorid gelöst. DdLe Lösung wird im Bisbad gekühlt, mit 0,2 ml Pyridin und 58 mg 2-!B¹UTyIaCetylchlorid versetzt und 15 Minuten, in der Kälte gerührt. Dann setzt man 30 ml Benzol zu und wäscht die Lösung mit wässriger Phosphatpufferlösung (pH 2), Wasser, wässriger Phosphatpufferlösung (pH 9), wieder mit Wasser und mit gesättigter Kochsalsiδsung. Die Benzolphase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Brück zu einem Öl eingedampft. Durch Chromatographie des Rohprodukts an Kieselsäuregel erhält man dl-7oc—(2—Eurylacetamido}—3-isobutyryloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-bromphenacylester -und dl-7ß-(2-Furylacetamido)-3-isobutyryloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-bromphenacylester. . " .

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Beispiel 76

dl~7ß-(2-Furylacetamido)-3-isobutyryloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Lösung von 78 mg dl-7ß~(2-Furylacetamido)-3-isobutyryloxymethyl^-cephem^-carbonsäure-p-bromphenacylester in 2 ml 90-prozentiger wässriger Essigsäure wird 10 Minuten bei Raumtemperatur mit 390 mg Zinkpulver gerührt. Das Zink wird abfiltriert und mit Äthylacetat gewaschen. Filtrat und Waschflüssigkeiten werden im Vakuum zu einem Harz eingedampft, das in Wasser, welches 110 mg Natriumbicarbonat enthält, aufgenommen wird. Die wässrige Lösung wird mit Methylenchlorid extrahiert, auf einen pH-Wert von 2,5 angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Die Äthylacetatlösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft, wobei man dl-7ß-( 2-]?urylacetamido )-3-isobutyryloxymethyl-3-cephem~4-carbonsäure erhält. ■

45 mg dieser Säure werden in 4 ml 0,03-molarer wässriger Natriumbicarbonatlösung gelöst, und die Lösung wird gefriergetrocknet. Man erhält ITatrium-dl-7ß-(2-I¹urylacetamido)-3-iso-"butyryloxymethyl-3-cephem~4-carbonsäure.

Beispiel 77 ,

N-Benzylaminomethylphosphonsäurediphenylester-hydrochlorid .

Ein Gemisch aus 119,2 g 1,3,5-Tribenzyl-s-hexahydrotriazin und 234,2 g Phosphorigsäurediphenylester wird 6 Stunden unter Rühren in einem durch ein Trockenrohr gegen den Zutritt von Feuchtigkeit geschützten Kolben auf 100° C erhitzt. Man lässt däs Gemisch alimählich Übernacht Raumtemperatur annehmen und löst es dann in 2,5 1 Äthyläther. Die Lösung wird im Eisbad gekühlt, und man leitet wasserfreien Chlorwasserstoff durch, bis kein weiterer Niederschlag ausfällt. Der Niederschlag wird abfiltriert und umkristallisiert. Man erhält reines N-Benzylaminomethylphosphonsäurediphenylester-hydrochlorid..

- 81 - '

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Beispiel 78

Aminoroethylphosphonsäurediphenylester-hydrochlorid

Ein Gemisch aus 185,0 g IT-Benzylaminomethylphosphonsäurediphenylester-hydrochlorid, 7,0 g 10-prozentigem Palladium auf

2 Kohle und 1500 ml Äthanol wird bei 2,8 kg/cm hydriert, bis kein weiterer Wasserstoff aufgenommen wird. Der Katalysator wird durch eine Schicht von Filterhilfsmittel abfiltriert und das Filtrat unter vermindertem Druck eingedampft. Man· erhält Aminomethylphosphonsäurediphenylester-hydrochlorid.

Beispiel 79

Aminomethylphosphonsäurediphenylester

Eine Lösung von 134-_t8 g Aminomethylphosphonsäurediphenylester-hydrochlorid.in 500 ml Wasser wird mit 235,5 g Dikaliumphosphat und 1000 ml Wass-er versetzt. Das Gemisch wird gerührt, bis es klar geworden ist, und dann viermal mit Methylenchloridextrahiert. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu Aminoiaethylphosphonsäurediphenylester eingedampft.

Beispiel 80-

N-Benzylidenaminomethylphosphonsäurediphenylester ,

Eine Lösung von 102,8 g Aminom.ethylphosphonsäurediphenylester und 4-1,6 g Benzaldehyd in 1000 ml Benzol wird unter einer Vorlage nach Dean und Stark auf Rückflusstemperatur erhitzt, bis sich kein Wasser mehr abscheidet. Dann wird die Lösung unter vermindertem Druck zu N-Benzylidenamonimethylphosphonsäurediphenylester eingedampft.

Beispiel 81

N-Benzyliden-a-aminodiphenylphosphonoessigsäure-p-nitrobenzyl-

ester - ^

45 ml einer 2,3-molaren Lösung von Phenyllithium in einem Ge-

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misch, aus 7 Teilen Benzol und 3 Teilen Äther werden unter Rühren zu einer mit festem Kohlendioxid gekühlten Lösung von 35,1 g N-Benzylidenaminoraethylphosphonsäurediphenylester in 500 ml v^asserfreiem Tetrahydrofuran zugesetzt. Nach 15 Minuten langem Rühren unter Stickstoff bei -78° C tropft man zu der Lösung im Verlaufe einer Stunde eine Lösung von 10,8 g Chlorameisensäure-p-nitrobenzylester in 100 ml Tetrahydrofuran zu. Die so erhaltene Lösung wird weitere 2 Stunden bei -78 C gerührt, worauf man sie sich im Verlaufe von 30 Minuten auf 5° C erwärmen lässt. Nach dem Abdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck hinterbleibt ein Rückstand, der zwischen 500 ml Äthyläther und 200 ml 0,5-molarer Phosphatpufferlösung (pH 3) verteilt wird. Die wässrige Phase wird abgetrennt und zweimal mit je 100 ml Äthyläther extrahiert. Die vereinigten Ätherlösungen werden mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingeengt. Durch Chromatographie des Rückstandes an Kieselsäuregel erhält man N-Benzyliden-a-aminodiphenylphosphonoessigsäure-p-nitrobenzylester sowie Ausgangsmaterial.

Beispiel. 82

cc-Aminodi phenyl phosphonoessigsäure-p-nitrobenzylester

Eine Lösung von 16,43 g N-Benzyliden-a-aminodiphenylphosphonoessigsäure-p-nitrobenzylester in 100 ml Äthyläther wird im . Verlaufe von 30 Minuten unter Rühren zu einer Lösung von 6,48 g p-Toluolsulfonsäure-monohydrat in 150 ml Äthyläther zugetropft. Nach Zusatz von 100 ml Cyclohexan werden die Lösungsmittel von dem Niederschlag abdekantiert. Der Mieder- - schlag wird mit einem Gemisch aus 2 Teilen Äthyläther und 1 Teil Cyclohexan gewaschen, welches wiederum abdekantiert wird. Dann wird der Niederschlag mit 60 ml 1-molarer wässriger Dikaliumphosphatlösung versetzt und viermal mit Methylenchlorid extrahiert. Die Methylenchloridlösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft. Man erhält oc-Aniinodiphenylphosphonoessigsäure-p-nitrobenzylester.

- 83 509826/0958

Beispiel 85

a-Thioforraarnidodiphenvlphosphonoessigsäure-p-nltrobenzylester

Ein Gemisch aus 5,0 g ct-Aminodiphenylphosphonoessigsäure-pnitrobenzylester, 5 ml Ihionoameisensäureäthylester und 5 ml Schwefelwasserstoff wird in einem dickwandigen verschlossenen Rohr ubernacht bei Raumtemperatur stehen gelassen. Dann wird das Rohr in festem Kohlendioxid gekühlt und der Verschluss abgenommen. Nach dem Einlegen eines Siedesteinchens lässt man die Lösung langsam Raumtemperatur annehmen.'Um die letzten Spuren Schwefelwasserstoff abzutreiben, wird Stickstoff hindurchgeleitet. Der Rückstand wird in Methylenchlorid gelöst, filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft. Durch Chromatographie des Rückstandes an Kieselsäuregel erhält man a-Thioformamidodiphenylphosphonoessigsäure-p-nitrobenzylester. ,

Be i s ρ i e 1 84 .

5-Methoxymethyl-6H-1 ^-thiazin-./J.-carbonsaure-p-nitrobenzylester

Ein Gemisch aus 2,4-3 g a-Thioformamidodiphenylphosphonoessigsäure-p-nitrobenzylester, 2,07 g gepulvertem wasserfreiem Kaliumcarbonat, 0,67 g 1-Chlor-3-methoxy-2-propanon und 25 ml Aceton wird 16 Stunden bei Raumtemperatur unter Stickstoff gerührt. Das Gemisch wird filtriert und das Piltrat unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird in Methylenchlorid gelöst, zweimal mit Wasser und dann mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu rohem 5-Methoxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester eingedampft.

Das Thiazinderivat kann auch, wie nachstehend beschrieben, in zwei Stufen gewonnen werden.

- 84 50 9826/09 5 8

Beispiel 85

3~Methoxy-2-oxopropyl-lT-(p-nitrobenzyloxycarbonyldiphenylphosphonomethyl)-thioforiniraidat

Ein Gemisch aus 2,45 g a-Thioformamidodiphenylphosphonoessigsäure-p-nitro"benzylester, 0,73 g gepulvertem Kaliumcarbonat, 0,63 g 1-Ch.lor-3-methoxy~2-propanon und 25 ml Aceton wird 16 Stunden bei Raumtemperatur in einem mit Kappe verschlossenen Kolben gerührt. Dann wird das Gemisch filtriert und das Piltrat im Vakuum zu 3-Methoxy-2-oxopropyl-li-(p-nitrobenzyloxycarbonyldiphenylphosphonomethyl)-thioformimidat eingedampft. -.'.-.

Beispiel 86 -· '

5-Methoxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester

Eine Suspension von 0,23.g einer 57-prozentigen Dispersion von Natriumhydrid in Mineralöl, die dreimal mit Hexan gewaschen worden ist, in 15 ml wasserfreiem Dimethoxyäthan wird zu einer Lösung von 2,81 g 3-Methoxy-2-oxopropyl-H-(p-nitrobenzyloxycarbonyldiphenylphosphonomethyl)-thioformimidat in 70 ml des gleichen Lösungsmittels zugesetzt. Das Gemisch wird 5 Minuten gerührt, schnell zu Benzol zugesetzt und mit Wasser gewaschen. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Yakuum zu 5-Methoxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester eingedampft.

Das bei den obigen Kondensationen verwendete i-Ghlor-3-methoxy-2-propanon wird folgendermassen hergestellt: Eine Lösung von 10,85 g Methoxyacetylchlorid in 25 ml wasserfreiem Äthyläther wird innerhalb 30 Minuten unter Rühren zu einer im Eis-Salzbad gekühlten Lösung von 4,2 g Diazomethan und 10,1 g Triethylamin in 200 ml wasserfreiem Äther zugetropft. Das Gemisch wird weitere 3 Stunden in der Kälte gerührt und dann durch eine Schicht von Magnesiumsulfat filtriert. Das Ätherfiltrat des rohen Diazoketons wird im Eisbad gekühlt, worauf

- 85 509826/0958

£6

man 10 Minuten einen Strom von wasserfreiem Chlorwasserstoff hindurchleitet. Dann wird das Gemisch mit eiskaltem Wasser und eiskalter 5-prozentiger wässriger Natriumbicarbonatlösung gewaschen, über.Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft. Durch Destillation des Rückstandes unter vermindertem Druck gewinn^ man i-Öhlor-^-methoxy-^-propanon.

Beispiel 87 .

dl^a-Azido^-methoxymethyl^-cephem^-car "bonsäur e-p-nitrobenzylester

Eine Lösung von 2,35 g ii-Methoxymethyl-öH-is,3-thiazin-4— carbonsäure~p-nitrobenzylester in 40 ml wasserfreiem Methylenchlorid wird unter Stickstoff bei 0° C gerührt. Dann setzt man zunächst in einem Schuss eine Lösung von 0,81 g Triäthylamin in 10 ml Methylenehlorid zu und tropft dann im Verlaufe von 60 Minuten eine Lösung von 0,96 g Azidoacetylclilorid in 30 ml Methylenchlorid zu. Nach weiterem 60 Minuten langem Rühren bei 0 G wird die Lösung mit Wasser und Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Yakuum zu einem dunklen Öl eingedampft. Das Rohprodukt wird an Kieselsäuregel chromatographiert. Man erhält dl-^oc-Azido-S-methoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester.

Beispiel 88 . _f

dl-Ta-Amino^-methoxymethyl^-cephem^-earbonsäure-p-nitrobenzylester ' .

2,0 g frisch hergestelltes Aluminiumamalgam werden zu einer eiskalten Lösung von 1,09 g dl-7cc~Azido-3-methoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester in 20 ml 96-prozentigem wässrigem Tetrahydrofuran zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wird 8 Minuten stark gerührt, dann mit Magnesiumsulfat versetzt und mit Hilfe von 100 ml Äthylacetat filtriert. Das Piltrat wird zweimal mit Wasser und dann mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Yakuum eingedampft. Man erhält dl-7a-Aiaino-

- 86 . 509 82 6/0958

3-Inethoxylnethyl-3--cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester.

Beispiel 89 ■

dl-O-Methoxymethyl-7α-(p-nitrobenzylidenamino )-3-cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester

Ein Gemisch aus 0,96 g dl-7α-Amino-3-methoxymethyl-3■■■cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester, 0,38 g p-Fitrobenzaldehyd, 6,0 g Magnesiumsulfat und 60 ml Methylenchlorid wird 15 Minuten bei Raumtemperatur in einem mit Kappe verschlossenen Kolben gerührt. Dann wird das Gemisch filtriert und das Pil trat unter vermindertem Druck eingedampft. Das als Rückstand hinterbleibende Harz wird dreimal in Benzol gelöst und das Lösungsmittel abgedampft. So erhält man dl-3-Methoxymethyl~7oc-( p-nitrobenzylidenamino )-3-cephem-4-carbonsäure-p-nitroben- = zylester.

Beispiel 90

al-3-Methoxymethyl-7ß- (p-nitrobenzylidenamino)-3-cephem-4-earbonsäure-p-nitrobenzylester

Eine Lösung von 1,23 g dl-3-Methoxymethyl-7a-(p-nitrobenzylidenamino)-3-cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester in 35 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wird unter Stickstoff in einem Bad aus festem Kohlendioxid und Aceton gekühlt. Dann setzt man schnell unter Rühren 1,05 ml einer 2,3-molaren Lösung von Phenyllithium in einem Gemisch aus 7 Teilen Benzol und 3 Teilen Äther zu, wobei¹ die Lösung eine tintenblaue Farbe annimmt. Hierauf tropf t "man im Verlaufe von 10 Minuten 45 ml Dimethylformamid zu dem Reaktionsgemisch zu. Man rührt noch 1 Minute bei -78° C und versetzt das Reaktionsgemisch dann mit einer Lösung von 0,43 ml Wasser und 0,35 ml Essigsäure in 10 ml Tetrahydrofuran. Man lässt das Reaktionsgemisch Raumtemperatur annehmen, verdünnt es mit 500 ml Benzol und wäscht fünfmal mit Wasser. Das zweite Waschwasser wird dabei mit einem Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von 3 angesäuert und das vierte Vraschwasser mit einem Phosphat puff er mit einem pH-

- 87 -

509 826/0958

Wert von 9 alkalisch gemacht. Die Benzollösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu einem Gemisch aus dl-3-Methoxymethyl-7a-(p-nitro'benzylidenamino)-3-cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester und dl-3-Methoxymethyl-7ß-(p-nitrobenzylidenamino)-3-cephem-4-car'bonsäure-pnitrobenzylester eingedampft. ..-·

Beispiel 91 · . ·

al-7ß-Amino-3-methoxymethyl-3-cephem-4-car'bonsäure-p-nitrobenzylester . _____

Ein Gemisch aus 0,482 g 2,4-Dinitropheny!hydrazin und 0,434 g p-Toluolsulfonsäure-monohydrat in· 65 ml Äthanol wird 45 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und dann mit einer Lösung von 1,166 g 3~Methoxymethyl-7-(p-nitrobenzylidenamino)-3-cephem-4-carbonsäure~p-nitrobenzylester (Gemisch aus dem 7a- und dem 7ß-Isomeren) in 5 ml Chloroform versetzt. Nach 30 Minuten langem Rühren bei Raumtemperatur- wird das Reaktionsgemisch filtriert und das Piltrat unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird mit 30 ml Wasser und 4»6 ml 1-molarer Dikaliumphosphatlösung versetzt und mit Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingedampft. So erhält man ein Gemisch aus dl-7cc-Amino-3~methoxymethyl-3~cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester und dl-7ß-Amino-3-methoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester.

Beispiel 92

dl-3-Methoxyroethyl-7a-(D-a-azidophenylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester und dl-3-Methoxymethyl-7ß~ (D-a-azidophenylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester ·

Eine Lösung von O₉76 g dl-7~Amino-3-methoxymethyl-3~cepheni-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester (Gemisch aus dem 7a- und dem 7ß-Isomeren) in 20 ml Methylenchlorid wird bei 0° C mit 0,40 g D-a-AzidophenylacetylChlorid und 0,8 ml Pyridin ver-

- 8.8 -

. · * 50982 67 0958'

setzt. Nach 15 Minuten langem Rühren bei 0° G wird das Gemisch mit kaltem Wasser, mit 1-prozentiger wässriger Phosphorsäure, 5-prozentiger wässriger Natriumbicarbonatlösung und wieder mit Wasser gewaschen. Dann wird die Lösung über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum· zu einem Öl eingedampft. Durch Chromatographieren dieses Öls an Kieselsäuregel erhält man dl-3-Methoxyraethyl-7a-(D-a-azidophenylacetamido )-3-cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester und dl-3-Methoxymethyl-7ß-(D-a-azidophenylacetamido)-3-cephem-4--carbonsäure-p-nitrobenzylester.

Beispiel 93

dl-7ß-(D-a-Aminophenylacetamido)-3-methoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure

Ein Gemisch aus 0,27 g dl-7ß-(D-oc-Azidophenylacetamido)-3-methoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-nitrobenzylester, 0,30 g 10-prozentigem Palladium auf Kohle und 15 ml Essigsäure wird 1 Stunde bei 2,8 kg/cm hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und mit 60 ml Wasser gewaschen. Das Piltrat wird dreimal mit Äthylacetat gewaschen, das Äthylacetat im Hochvakuum abgetrieben und der Rückstand gefriergetrocknet-. Man erhält dl-7ß-(D-a-Aminophenylacetamido)-3-methoxyraethyl-3-cephem-4-carbonsäure.

Beispiel 94

N-Benzylarainomethylphosphonsäuredimethylester-hydrochlorid

Ein Gemisch aus 55,Og Phosphorigsäuredimethylester und 59»6 g 1,3»5-Tribenzyl-s-hexahydrotriazin wird 6 Stunden unter Rühren auf 100° C erhitzt. Zum Schutz gegen Feuchtigkeit dient dabei ein Trockenrohr. Man lässt das Reaktionsgemisch übernaeht Raumtemperatur annehmen, löst es in Äther, kühlt es im Eisbad und versetzt es mit wasserfreiem Chlorwasserstoff. Der Niederschlag von N-Benzylaminomethylphosphonsäuredimethylester-hydrochlorid wird abfiltriert, mit Äther gewaschen und getrocknet.

- 89 - . 509826/0958

Beispiel 95 Aminomethylphosphonsäuredimethylester-hydrochlorid

Eine Lösung von 80,0 g N-Benzylaroinomethylphosphonsäuredimethylester-hydrochlorid in 800 ml Methanol wird mit 4,0 g 10-prozentigem Palladium auf gepulverter Holzkohle bei 2,8 kg/cm hydriert. Der Katalysator wird durch eine Schicht Filterhilfsmittel abfiltriert. Nach dem Eindampfen des Methanolfiltrats hinterbleibt ein klarer Rückstand, der in Benzol aufgenommen wird. Durch Abtreiben des Benzols im Vakuum erhält man kristallines Aminomethylphosphonsäuredimethylester-hydrochlorid. · .

Beispiel 96 Aroinoraethylphosphonsäuredimethylester

17,6 g Aminomethylphosphonsäuredimethylester-hydrochlorid werden in 100 ml Chloroform bei 0° C gerührt. Durch das Gemisch wird 5 Minuten gasförmiges Ammoniak geleitet. Das Ammoniumchlorid wird abfiltriert und mit etwas Chloroform gewaschen. Das mit den 7/aschflüssigkeiten vereinigte Filtrat wird kurz über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu Aminomethylphosphonsäuredimethylester eingedampft.

Beispiel 97 . _y

.U-Benzylidenaminomethylphosphonsäuredimethylester

10,6 g Benzaldehyd werden unter Rühren zu 13» 9 g eiskaltem Aminomethylphosphonsäuredimethylester zugetropft. Das Gemisch wird mit 200 ml Benzol verdünnt und mit 20 g Magnesiumsulfat versetzt. Nach 50 Minuten langem Rühren bei Raumtemperatur wird das Gemisch filtriert, und die Salze werden mit Benzol gewaschen. Beim Eindampfen des Filtrats unter vermindertem Druck hinterbleibt ET-Benzylidenaminomethylphosphonsäuredimethylester. . .

- 90 509826/0 958

Beispiel 98 . .

IT-Benzyliden-a-aminodimethylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester

22,72 g I\^T-Benzylidenaminomethylphosphonsäuredimethylester werden unter. Stickstoff in 500 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran gelöst. Die Lösung wird auf -78° C gekühlt und unter Rühren mit 45 ml einer 2,3-molaren Lösung von Phenyllithium in einem Gemisch aus.Benzol und Äther versetzte Die Lösung wird weitere 15 Minuten "bei -78° C gerührt, worauf man innerhalb 45 Minuten eine Lösung von 10,03 g Chlorameisensäure-pmethoxybenzylester in 100 ml Tetrahydrofuran zutropft. Nach 2-stündigem Rühren bei -78° C lässt man das Reaktionsgemisch sich innerhalb 30 Minuten auf 0 ,G erwärmen. Das Lösungsmittel vri.rd im Vakuum abgetrieben und der Rückstand zwischen 500 ml Äther und 100 ml 0,5-molarer Phosphatpufferlösung (pH 3) verteilt. Die Ätherphase wird mit Wasser und mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum- zur-Trockne eingedampft. Durch Chromatographie des Rückstandes an Kieselsäuregel erhält man N-Benzyliden-a-aminodimethylphosphonoessigsäure-pmethoxybenzylester. -

Beispiel 99

cc-Aminodiraethylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester

Eine Lösung von 9»78 g N-Benzyliden-oc-aminodimethylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester in 50 ml Äther wird im Verlaufe von 20 Minuten unter Rühren zu einer Lösung von 4,76 g p-Toluolsulfonsäure-monohydrat in 150 ml Äther zugesetzt. Nach Zusatz von 100 ml Cyclohexan werden die Lösungsmittel abdekantiert. Der Rückstand wird mit einem Gemisch aus 2 Teilen Äther und 1 Teil Cyclohexan gewaschen, das wiederum abdekantiert wird. Der Rückstand wird dann zwischen Methylenchlorid und 50 ml 1-molarer Dikaliumphosphatlösung verteilt, Die organische Phase wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen,

- 91 50982 6/0958

getrocknet und im Vakuum zu a-Aminodimethylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester eingedampft.

Beispiel 100

a-Thioformamidodimethylphosphonoessigsäure~p-methoxybenzylester

0,75 g Schwefelwasserstoff werden in-eine im Eisbad gekühlte Lösung von 6,06 g a-Aminodimethylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester in 5 ml wasserfreiem Methanol eingeleitet. Nach Zusatz von 0,53 g Cyanwasserstoff wird das Eisbad entfernt. Nach dem Stehenlassen Übernacht wird das Reaktionsgemisch zu 50 ml V/asser zugesetzt und dreimal mit je 20 ml Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und zur Trockne eingedampft. Durch Chromatographie des Rückstandes an Kieselsäuregel erhält man a-Thioformamidodimethylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester.

Beispiel 101

5-(N,N-D.i-p-methoxybenzyl)-carbamöyloxymethyl-6H-1,3-thiazin-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester

Ein Gemisch aus 3»04 g a-Thioformamidodimethylphosphonoessigsäure-p-methoxybenzylester, 50 ml Aceton, 3,62 g 1-Chlor~3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxy-2-propanon und 3,64 g gepulvertem Kaliumcarbonat wird 5 Stunden bei Raumtemperatur in einem durch Stopfen verschlossenen Kolben gerührt. Das Gemisch wird filtriert und das Piltrat im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird in 200 ml Tetrachlorkohlenstoff aufgenommen und die Lösung zweimal mit Phosphatpufferlösung (30 ml 1-molara Dikaliumphosphatlösung + 70 ml V/asser) und mit 100 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und filtriert. Durch Eindampfen des PiI-trats erhält man den rohen 5-(N,N-Di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-6H-1,3-thiazin~4~earbonsäure-p-methoxybenzylester als goldfarbenes Öl:

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. 509826/0958

IR (CCl₄) 5,87, 6,22, 6,63, 6,85, 7,68, 8,02, 8,51, 8,96 und 9,60 μ; KMR (CDCl₃) Z 6,82 (s, 2, SCH₂), 6,20 (s, 9, OCH₃), 5,65 (bra, 4, KCH₂), 4,74 (a, 4, OCH₂), 3,3-2,5 (m, 12, ArH) und 1,63 (s, 1, CH=U).

Das 1-Chlor-3-(li,IT-di-p-ineth.oxy'benzyl)-carlDaiDoyloxy-2-propanon wird folgendermassen hergestellt:

Stufe 1. (!^,N-Di-p-methoxybenzyl^carbamoyloxyessigsäuremethylester

Eine Lösung von 6,15 g Methylglykolat und 9,6 ml Triäthylamin in 35 ml trockenem Benzol wird innerhalb 30 Minuten unter Rühren zu 57 g einer eiskalten 12,5-prozentigen lösung von Phosgen in Benzol zugetropft. Nach dem Erwärmen auf Raumtemperatur im Verlaufe von 30 Minuten wird das überschüssige .Phosgen durch Hindurchleiten von Stickstoff abgetrieben. Das Gemisch wird wieder im Eisbad gekühlt, worauf man im Verlaufe von 45 Minuten unter Rühren eine lösung von 17,58 g Di-proethoxybenzylamin und 9,6 ml Triäthylamin in 70 ml trockenem Benzol zutropft. Dann wird das Kühlbad entfernt und das Gemisch übernacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Triathylaminhydrochlorid wird abfiltriert und mit Benzol gewaschen. Das Filtrat wird mit V/asser, mit 0,5-molarer Phosphatpufferlösung (pH 2), wieder mit Wasser und mit gesättigter Kochsalz-_v lösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu einem halbfesten Stoff eingedampft. Durch Umkristallisieren des Rohprodukts aus Methanol erhält man (N,N-Di-p-methoxybenzyl )-carbamoyloxyessigsäuremethylester als weisses Pulver; P. 66-67° C.

IR (CHCl₃) 5,67, 5,87, 6,22, 6,66, 6,87, 6,99, 8,90 und 9,72 μ; KMR-(CDCl₅)T 6,20 (s, 9,OCH₃), 5,63 (s, 4, NCH₂), 5,28 (s, 2, OCH₂) und 3,17, 2,82 (dd, 8, J=9Hz, ArH).

. - 93 -

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Stufe 2. (l\F,iT-Di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxyessigsäure

Ein Gemisch aus 12,66 g (li,lT-Di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxyessigsäuremethylester, 300 ml Methanol.und 38 ml 1-normaler wässriger Natronlauge wird 20 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wird im Vakuum abgetrieben. Der Rückstand wird in 300 ml Y/asser aufgenommen und das unlösliche Material abfiltriert. Das wässrige. Piltrat wird mit 200 ml ■ Äthylaeetat überschichtet und mit konzentrierter Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,5 angesäuert. Die wässrige Phase wird abgetrennt und mit weiterem Äthylacetat extrahierte Die vereinigten organischen Extrakte werden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft. Man erhält (N,N-Di-p~methoxybenzyl)-carbamoyloxyessigsäure als weisses Pulver; F. 122-123° C

IR (CHCl₅) 5,74 (Sch),5,87, 6,19, 6,61, 6,82, 8,83 und 9,64 μ; KME (CDCl₃) Ύ 6,20 (s, 6, OCH₅), 5,60 (s, 4, UCH₂), 5,20 (s, 2, OCH₂), 3,12, 2,77 (dd, 8, J=9Hz, ArH) und 0,07 (s, 1, OH). *. *

St^-Ufe 3. (^,N-Di-p-methoxybenzyl^carbamoyloxyacetylchlorid

Eine Suspension von 9»5 g (N,N-Di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxyessigsäure in 300 ml wasserfreiem Benzol wird unter Rühren im Eisbad gekühlt. Dann setzt man 4,47 ml Oxalsäurechlorid und 0,45 ml Dimethylformamid zu und rührt das Gemisch 1 Stunde bei 5° C und dann 1 Stunde bei Raumtemperatur„ Die Lösung wird mit eiskalter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu (ϊΓ,Ν-Di-p-mefchoxybenzyl)-carbamoyloxyacetylchlorid eingedampft, welches als klares Öl anfällt. ·

IR (rein) 5,53, 5,85, 6„2O, 6,62, 6,85,. 6,97, 8,02, 8,51, 8,87 und 9,67 μ; KMR" (CDCl₃) τ 6,19 (s, 6, OCH₃), 5,62 (s, 4, NCH₂), 4,98 (s, 2, OCH₂) und 3,10, 2,80 (dd, 8, J=9Hz, ArH). - - - - - ■ '

- 94 509826/0 958

Stufe 4. 1-ChIOr^-(N,N-di-p~methoxybenzyl)-carbamoyloxy-2-propanon

Eine Lösung von 10,4 g (N,N~Di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxyacetylchlorid in 125 ml wasserfreiem Äther wird im Verlaufe von 45 Minuten unter Rühren zu einer eiskalten Lösung von ■3,7 ml Triäthylamin und überschüssigem Diazomethan (aus 15 g, N-Methyl-N-nitrosoharnstoff) in 15.0 ml Äther zugetropft. Das Gemisch wird eine weitere Stunde in der Kälte gerührt, worauf man das überschüssige Diazomethan durch Hindurchleiten von Stickstoff.austreibt. Das Gemisch wird filtriert und das Filtrat im Vakuum eingedampft, wobei man 1-Diazo-3-(N,N-di-pmethoxybenzyl)-carbamoyloxy-2-propanon als gelbes Öl erhält. IR (rein) 4,72, 5,86, 6,04, 6,62, 6,83, 7,32, 8,0, 8,50, 8,91 und 9,64 μ; KMR (CDCl₃)T 6,20 (s, 6, OCH₃), 5,60 (s, 4, NCH₂), 5,30 (s, 2, OCH₂), 4,80 (s, 1, CHN₂) und 3,12, 2,78 (dd, 8, J=9Hz, ArH). .. "

In eine Lösung des obigen Diazoketons in 300 ml Äther wird unter Kühlen im Eisbad 5 Minuten wasserfreier Chlorwasserstoff eingeleitet. Das Gemisch wird mit kaltem Wasser, mit kalter 5-prozentiger wässriger Natriumbicarbonatlösung und mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen. Nach dem Abdampfen des Äthers und Trocknen über Magnesiumsulfat erhält man einen weissen festen Stoff. Durch Umkristallisieren aus einem Ge-* miseh aus Äther und Petroläther erhält man 1-Chlor-3-(N,N-dip-methoxybenzyl)-carbamoyloxy-2-propanon in .Form, von weisslichen Flocken; F. 78-80° C. . ■

IR (CHCl₃) 5,73, 5,88, 6,20, 6,63, 6,83 und 9,64 μ; .KMR (CDCl₃)T 6,20 (s, 6, OCH₃), 5,87 (s, 2, CH₂Cl), 5,62 (s, 4, NCH₂), 5,03 (s, 2, OCH₂) und 3,13, 2,80 (dd, 8, J=9Hz, ArH). - - -■ ·- - ■

Beispiel 102 -

äl-7oc-Azido-3-(N_,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester

Eine Lösung von 6,5 g 5-(N,N-Di-p-methoxybenzyl)~carbaraoyloxy-

- 95 5098Z6/095 8

methyl-6H-1 ^-thiazin^-carbonsäure-p-methoxybenzylester in 110 ml wasserfreiem Methylenchlorid wird unter Kühlen im Eis-"bad unter Stickstoff gerührt. Man setzt zunächst in einem Schuss 1,95 ml Triäthylamin zu und tropft dann im Verlaufe von 90 Minuten eine Lösung von 1,22 ml Azidoacetylchlorid in 85 ml Methylenchlorid zu. Die dunkle Lösung wird viermal mit je 100 ml Wasser gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu einem dunklen Öl eingedampft. Dieses Material wird an Kieselsäuregel chromatographiert. Durch Eluieren der Produkte mit 5-prozentigem Äthylacetat in Benzol erhält man dl-7a-Azido-3-(N,N-di-p-methoxy'benzyl)-carTDamoyloxymethyl-3-cephem~4-carbonsäure-p-methoxybenzylester in Form eines Harzes. . · .

,IR (CHCl₃) 4,73, 5,60, 5,81, 5,91, 6,20, 6,64, 6,85, 7,68, 8,02, 8,05, 8,94 und 9,64 μ;

KMR (CDCl₃)T6,94, 6,58 (dd, 2, J=18Hz, SCH₂), 6,20 (s, 9, OCH₃), 5,67 (br s; 4, NCH₂), 5,47 (m, 2, H6 und H7), 5,17, 4,85 (dd, 2, J=13Hz, NCO₂CH₂), 4,77 (m, 2, OCH₂Ar) und 3,3-2,5 (m, 12, ArH). " ■ - f- " .

Beispiel 103 . .

dl-7a-Amino-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl~3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester

Ein Gemisch aus 3,00 g dl-7a-Azido-3-(N,N-di-p-methoxybenziyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure~p-methoxybenzylester, 1,50 g Platinoxid und 150 ml Benzol wird 3 Stunden bei 2,8 kg/

ρ
cm hydriert. Das G-emisch wird dann im Vakuum zu einem schwarzen Öl eingedampft. Dieses Material wird in Äthylacetat, aufgenommen und durch eine Schicht aus gleichen Teilen Filterhilfsmittel und Kieselsäuregel G filtriert. Das Filtrat wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu al-7a-Amino-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3~ cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester eingedampft. IR (CHCl₃) 2,94, 5,62, 5,79, 5,81, 6,20, 6,62, 8,03, 8,51,. 8,97 und' 9,66 μ.

- 96 -

■ ■ " ·' -50 9 8 26/0958

Beispiel 104

äl-7a-(p-2iitrobenzylidenamino)-3-(lT,N-di--p-methoxybenzyr)-carbamoyloxymethyl-5-cepliein-4-carbonsäure-p-inethöxybenzyiester - ■

Ein Gemisch aus 2,35 g dl-7a-Amino-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxyinethyl--3-cephein-4-carbonsäure-p-niethoxybenzylester, 0,56 g p-Nitrobenzaldehyd, 10,0 g Magnesiumsulfat · und 100 ml Methylenchlorid wird 15 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dann wird das Gemisch filtriert und das Filtrat im Vakuum zu einem.Harz eingedampft. Das Harz wird in Benzol gelöst und das Lösungsmittel abgedampft, wobei man dl-7a-(p-Nitrobenzylidenaminoi-^-C^N-di-p-methoxybenzylJ-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p~methoxybenzylester erhält.

Beispiel 105

dl-7ß-(p-Nitrobenzylidenamino)-3-(F,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxyraethyl-3-cephem-4-c ar bonsäur e-p-methoxybenzylester

Eine Lösung von 0,77 g dl-7a-(p-Nitrobenzylidenamino)~3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester in 15 ml wasserfreiem Tetrahydrofuran wird unter Stickstoff auf -78° C gekühlt. Unter" schnellem Rühren werden 0,44 ml einer 2,3-molaren Lösung von Phenyllithium in einem Gemisch aus 7 Teilen Benzol und 3 Teilen Äther zugesetzt. Dann tropft man im Verlaufe von 5 Minuten 19 ml Dimethylformamid zu, rührt das Reaktionsgemisch' 1 Minute bei -78° C und versetzt es mit einer Lösung von 0,18 ml Wasser und 0,14 ml Essigsäure in 10 ml Tetrahydrofuran. Man lässt das Gemisch Raumtemperatur annehmen, setzt 250 ml Benzol zu und wäscht die Lösung sechsmal mit je 100 ml Wasser. Dabei wird das .zweite Waschwasser mit Phosphatpufferlösung mit einem pH-Wert von 3 angesäuert, während das fünfte Waschwasser mit Phosphatpufferlösung mit einem pH-Wert von 9 alkalisch gemacht wird. Die Benzollösung wird mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und .im Vakuum zu "einem Gemisch aus dl-7ot-(p-Nitrobenzylidenamino)-3-(H,N-di-p-methoxybenzyl)-

- 97 509826/0 958

carbamoyloxymethyl^-cephem^-carbonsaure-p-methoxybenzylester und dl-7ß-(p-Nitrobenzylidenamino)-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbarnoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-inethoxybenzylester eingedampft.

Beispiel -106

dl-7ß-Ainino-3-(l^;r,N-di-p-methoxybenzyl)-carbainoyloxymethyl-3--cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester

Ein Gemisch aus 0,169 g p-Toluolsulfonsäure-monohydrat und 0,1-75 g 2,4-Dinitrophenylhydrazin in 25 ml Äthanol wird 45 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Nach Zusatz einer Lösung von 0,675 g dl-7-(P-ETitrobenzylidenamino)-3-(N,N-di-pmethöxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-c"ephem-4-carbonsäure~pmethoxybenzylester (Gemisch aus dem 7«- und dem 7ß-Isomeren) in 5 ml Chloroform wird das Gemisch 30 Minuten bei !Raumtemperatur gerührt. Dann wird das Gemisch filtriert und das Piltrat im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird mit 2 ml einer 1-molaren Dikaliumphosphatlösung und 13 ml Wasser versetzt und dreimal mit je 20 ml Äther extrahiert. Die Ätherextrakte v/erden mit Yfasser und gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über 'Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu einem Gemisch aus dl-7a-Amino-3-(K'jN-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester und dl-7ß-Amino-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester eingedampft,

Beispiel 107

dl-7a-(2-Thienylacetamido)-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl~3-cephem-4~carbonsäure-p-methoxybenzylester und dl-7ß-(2-Thienylacetaraido)-3~(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxyaethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester

Eine eiskalte Lösung von 0,538 g dl-7-Amino-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester (Gemisch aus dem 7a- und dem 7ß-,Isomeren) in · 10 ml wasserfreiem Methylenchlorid wird unter Rühren mit 0,30 ml Pyridin und. 0,11 ml 2-Thienylacetylchlorid versetzt.

- 98 -509826/ Q958

Mach 15 Minuten langem Rühren bei 0° C wird das Reaktionsgemisch mit 50 ml Benzol verdünnt. Die Benzollösung.wird mit kalter 1-prozentiger wässriger Phosphorsäure, kalter 5-prozentiger wässriger ITatriurabicarbonatlösung und mit Wasser gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet und filtriert» Nach dem 'Abdampfen des Lösungsmittels im Vakuum hinterbleibt ein öliger Rückstand. Dieses Material ergibt beim Reinigen durch Chromatographie an Kieselsäuregel dl-7a-(2-Thienylacetamido)-3-(lT,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester und dl-7ß-(2-Thienylacetamido)-3-(li,lT-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-r3-cephem-4--Carbonsäure-p-methoxybenzylester.

Beispiel 108

dl-7ß-(2-Thienylacetamido)-3-carbamoyloxymethyl~3-cephem~4-carbonsäure

0,254 g dl-7ß-(2-Thienylacetamido)-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-earbamoyloxymethyl^-eephem^-carbonsäure-p-methoxybenzylester werden in 2,5 ml Anisol aufgenommen und mit 12,5 ml Trifluoressigsäure versetzt. Die Lösung wird 30 Minuten auf Raumtemperatur gehalten und dann im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in wässriger Natriumbicarbonatlösung aufgenommen und mit Methylenchlorid extrahiert. Die wässrige Phase wird auf einen pH-Wert von 2,5 angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Durch Abdampfen des A'thylacetats erhält man nach dem Trocknen über Magnesiumsulfat· dl-7ß-(2-Thienylacetamido )-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure.

Beispiel 109

dl^-Azido^-brom^-CNjN-di-p-methoxybenzylJ-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester -

Eine Lösung von 0,634 g dl-7-Amino-3-(N,li-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p--methoxybenzyl~ ester in 25 ml Methylenchlorid wird mit 25 ml Wasser und

50 9 8 26/095 8

0,138 g Natriumnitrit versetzt. Das Gemisch wird bei 0° C unter Stickstoff gerührt. Nach Zusatz von 0,75 ml 2-normaler Schwefelsäure wird das Gemisch 45 Minuten bei 0° C gerührt. Die Methylenchloridschicht wird abgetrennt, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Yakuum auf 5 ml eingeengt. Diese Lösung wird unter Stickstoff auf -20° C gekühlt und mit 5 ml einer 0,3-normalen Lösung von Triäthylammoniumazid in Methylenchlorid und 5 ml einer 0,3-normalen Lösung von Brom- \ azid in Methylenchlorid versetzt. Die Lösung wird 10 Minuten bei -20° C gerührt, worauf man sie sich auf 0° C erwärmen lässt. Nach Zusatz von wässriger Dikaliumphosphatlösung werden die Schichten getrennt. Die Methylenchloridschicht wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft. Durch Chromatographie des Rückstandes an Kieselsäuregel erhält man dl-7-Azido-7-brom-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester.

Beispiel 110

dl-7ß-Azido-7-methoxy-3-(N,N-di-p~methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl~3~cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester

Eine Lösung von 0,44 g dl-7-Azido-7-brom-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methpxybenzylester in 20 ml wasserfreiem Methanol wird mit 0,05 ml Pyridin und 0,12 g Silbertetrafluorborat versetzt. Das Gemisch wird 2,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in 10 ml Methylen-' Chlorid aufgenommen und filtriert. Das Piltrat wird mit 5-prozentiger wässriger Natriumbicarbonatlösung und mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu dl-7ß-Azido~7-methoxy-3-(.N,N~di-pmethoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-pmethoxybenzylester eingedampft.

- 100 -

09826/0958

Beispiel 111 . .

dl^ß-Amino^-methoxy^-CNjN-di-p-methoxybenzylJ-carbamoyloxy-Inethyl-3-cephem-4--carbonsäure-p-π^ethoxybenzylester

Ein Gemisch aus 0,40 g dl-7ß-Azido-7-methoxy-3-(N,N-di-pinethoxybenzyl)-car'bainoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-pmethoxybenzylester und 0,40 g Platinoxid in 40 ml Dioxan wird 1 Stunde bei 2,8 kg/cm hydriert. Dann setzt man weitere 0,40 g Katalysator zu und hydriert noch 2 weitere Stunden. Das Dioxan wird im Yakuum abgetrieben. Der Rückstand wird in Äthylacetat aufgenommen und das Gemisch durch eine Schicht von Kieselsäuregel filtriert. Das Piltrat wird im Vakuum zu dl-7ß-Amino-7-methoxy-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl~3-cephem-4-carbonsäure-p.~methoxybenzylester eingedampft. '

Beispiel 112

dl-7a-Methoxy-7-(2-thienalacetamido)-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbaraoyloxymethyl-3-oephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester ■

0,33 g dl-7ß-Amino-7-methoxy-3-(N,N-di-p-methoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzyiester werden in 4 ml wasserfreiem Methylenchlorid gelöst,· und die Lösung wird unter Stickstoff auf 0° C gekühlt. Man setzt zunächst 0,20 ml Pyridin und dann eine Lösung von 0,08 g 2-Thienylaeetylchlorid in 2 ml Methylenchlorid zu. Nach 15 Minuten langem Rühren bei 0° C wird das Reaktionsgemisch mit 40 ml Benzol verdünnt. Die Lösung wird mit verdünnter wässri- · ger Phosphorsäure, 5-proζentiger wässriger Hatriumbicarbonatlösung und V/asser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Yakuum zu einem Öl eingedampft.JDurch Reinigen dieses Materials durch Säulenchromatographie an Kieselsäuregel erhält man dl-7a-Methoxy-7-(2-thienylacetamido)-3-(N,N-di-pmethoxybenzyl)-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure~pmethoxybenzylester. - ' '

- 101 -

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Beispiel 113

dl^a-Methoxy^-^-thienylacetamidoJ^-carbamoyloxymethyl^- eephem-4-carbonsäure

0,30 g dl-7a-Metlioxy-7-(2-thienylacetamido)-3-(N,li-di-pmethoxybenzyl)-earbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-pmethoxybenzylester werden in einem Gemisch aus 3|0 ml Anisol und 15*0 ml.Trifluoressigsäure gelöst. Die lösung wird 30 Minuten auf Raumtemperatur gehalten und dann im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in 10 ml Wasser aufgenommen, die 0,35 g Natrium"bicarbonat enthalten, und die Lör sung mit Methylenchlorid extrahiert. Die wässrige Phase wird mit Äthylacetat übersehichtet und der pH-Wert mit 6-normaler Salzsäure auf 2,5 eingestellt. Die Äthylacetatschicht wird abgetrennt, mit Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zu dl-7a-Methoxy-7-(2-thienylacetamindo)-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure eingedampft.

Beispiel 114

dl^-Azido^-brora^-acetoxymethyl^-cephem^-carbonsäure-pmethoxybenzylester

0,79 g dl^-Amino^-acetoxvmethyl^-cephem^-carbonsäure-pmethoxybenzylester (ein Gemisch aus dem 7a- und dem 7ß-Isomeren) werden in 50 ml Methylenchlorid gelöst und mit 50 ml Wasser und 0,28 g Natriumnitrat versetzt. Das Gemisch wird unter Kühlung im Eisbad unter Stickstoff gerührt. Nach Zusatz γοη 1,5 ml 2-normaler Schwefelsäure wird das Gemisch 50 Minuten in der Kälte gerührt. Die Methylenchloridschicht wird abgetrennt, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum auf 10 ml eingeengt. Diese Lösung des rohen dl-7-Diazo-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylesters wird unter Stickstoff auf -20° 0 gekühlt, in einem Schuss mit 10 ml einer 0,3-normalen Lösung von Triäthylaramoniumazid in Methylenchlorid und sofort danach im Verlaufe von 1 bis 2 Mini ten mit 10 ml einer 0,3-norrnalen Lösung von Broinazid in

- 102 -

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Methylenehlorid versetzt. Das Gemisch wird 5 Minuten "bei -15⁰C gerührt, worauf man es sich auf. 0° G erwärmen lässt. Nach Zusatz von wässriger Dikaliumphosphatlösung werden die Schichten getrennt. Die Methylenchloridschicht wird mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampfte Durch Chromatographie des Rückstandes an Kieselsäuregel erhält man· dl-Y-Azido-T-'brom-^-acetoxamethyl^-eephem-^-Tcar'bonsäure-pmethoxybenzylester.

Beispiel 113 . '

dl—7ß-Azido-7-niethoxy-3-ac et oxyme thy l-3-cephem-4-car "bonsäur ep-raethoxybenzylester .

0,08.ml Pyridin und 0,195 g Silbertetrafluorborat werden zu einer Lösung von 0,497 g dl-7-Azido-7-brom-3-aeetoxymethyl-3-cephem-4-earbonsäure-p-methoxybenzylester in 35 ml wasserfreiem Methanol zugesetzt. Das Gemisch wird 2,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann im Vakuum zur Srockne eingedampft. Der Rückstand wird in 20 ml Me-thylenchlorid aufgenommen und filtriert. Das Piltrat wird mit 10 ml 5-prozentiger wässriger Katriurabicarbonatlösung und mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum: eingedampft. Durch Kristallisation des Rückstandes erhält man dl-7ß-Azido-7-methoxy-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester.

Beispiel 116

dl-7ß-Amino-7-methoxy-3-ac et oxyme thyl-3-eephem-4-carbonsäurep-methoxybenzylester '

0,20 g dl-7ß-Azido-7-methoxy-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester werden in 20 ml Dioxan 1 Stunde mit 0,20 g Platinoxid und dann 2 weitere Stunden unter Zusatz: von weiteren 0,20 g Platinoxid hydriert. Das Dioxan wird dann in Vakuum abgetrieben. Der Rückstand wird in Äthylacetat aufgenommen und durch eine Schicht aus gleichen-Gewichtsteilen

- 103 -

'50 9826/095 8

Kieselsäuregel G und einem"Filterhilfsmittel filtriert. Nach dem Abtreiben des Äthylacetats im Vakuum erhält man dl-7ß-. Amino^-methoxy^-acetoxymethyl^-cephem^-carbonsäure-pmethoxybenzylester.

Beispiel 117

dl~7a-Methoxy-7-(2-thienylacetamido)-3-acetoxymethyl-3-cephera-4-~carbonsäure-p-methoxybenzylester

Eine Lösung von 0,12 g dl-7ß-Amino-7-methoxy-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester in 4 ml Methylenchlorid wird im Eisbad gekühlt und unter Stickstoff gerührt. Nach Zusatz von 0,12 ml.Pyridin und 0,035 ml 2-Thienylacetylchlorid wird das Reaktionsgemisch 15 Minuten bei 0° C gerührt' und dann mit Benzol verdünnt. Die Lösung wird mit 1-prozentiger wässriger Phosphorsäure, 5-prozentiger wässriger Natriumbicarbonatlösung und Wasser gewaschen, mit Magnesiumsulfat getrocknet und filtriert. Nach dem Abdampfen des Lösungsmittels im Vakuum hinterbleibt dl-7oc-Meth.oxy~7-(2~thienylacetamido)~3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester.

Beispiel 118

dl-7a-Methoxy-7-(p~nitrobenzylidenamino)-3-acetoxymethyl-3-cephem~4-carbonsäure-p-methoxybenzylester

1,05 g dl-7a-(p-Nitrobenzylidenamino)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester werden in 25 ml .wasserfreiem Tetrahydrofuran unter Stickstoff gelöst» Die Lösung wird auf -78° C gekühlt und unter Rühren im Verlaufe' von 1 Minute mit 0,87 ml einer 2,3-molaren Lösung von Phenyllithium in einem Gemisch aus Benzol und Äther versetzt. Man rührt noch 1 Minute bei -78° C und versetzt die Lösung dann mit 0,366 g N-Bromsuccinimid in 10' ml Tetrahydrofuran. Das Reaktionsgemisch wird 2 Minuten auf -78° C gehalten, worauf man es Raumtemperatur annehmen lässt. Das Lösungsmittel wird

~ 104 -

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15 456 tV^

im Vakuum abgetrieben, bis ein Volumen von 10 ml erreicht ist. Der Rückstand wird mit 100 ml Methylenchlorid verdünnt und die Lösung zweimal mit Phosphatpufferlösung (pH 7) gewaschen. Die organische Phase wird mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum auf 20 ml eingeengt. Diese Lösung der bromierten Schiff sehen Base wird innerhalb 20 Minuten unter Rühren zu einer Suspension von 0,93 g Silberoxid in 40 ml wasserfreiem Methanol zugetropft. Das Gemisch wird weitere 60 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Dann werden die Silbersalze abfiltriert, und das Filtrat wird zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in Methylenchlorid aufgenommen und die lösung zweimal mit Phosphatpufferlösung (pH 7) gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft. Durch Chromatographie des Rückstandes an Kieselsäuregel erhält man dl-7a-Hethoxy-7-(p-nitrobenzylidenami2io)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester.

Beispiel 119

dl-7a-Methoxy-7-(2-thienylacetamido)~3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester

Eine Lösung von 0,67 g dl-7a-Methoxy-7~(p-nitrobenzylidenamino)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäuz^xe-p-methoxybenzylester in 25 ml Tetrahydrofuran wird mit 4 ml Wasser verdünnt .und mit 0,11 g Palladiumchlorid versetzt. Das Gemisch wird 4 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in 50 ml Methylenchlorid aufgenommen und die Lösung mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum auf 15 ml eingeengt. Diese Lösung wird auf 0° G gekühlt und dann mit 0,70 ml Pyridin und 0,23 g 2-Thienylacetylchlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 15 Minuten bei 0° C' gerührt, worauf man es sich innerhalb der nächsten 15 Minuten anwärmen lässt. Das Reaktionsgemisch wird mit Methylenchlorid verdünnt, dann mit Phosphatpufferlösung (pH 2) und mit Phosphatpufferlösung (pH 7) gewaschen. Die organische Phase wird mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft. Durch Chromatogra-

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* .509826/0958

15 456 '06

phie des Rückstandes an Kieselsäuregel erhält man dl-7oc-Methoxy-7-(2-thienylacetamido)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester,, ."

B e i s. ρ i e 1 120

Natrium-dl-7cc-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylat

0,4-1 g dl-7a-Methoxy-7-(2-thienylacetamido)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester werden 5 Minuten "bei 0° C "mit 0,6 ml Anisol und 3,0 ml Tri fluor essigsäure behandelt. Dann wird die Trifluoressigsäure im Vakuum bei 0° C und das Anisol bei 30° C abgetrieben. Man setzt weiteres Anisol zu und dampft dieses wieder ab. Der Rückstand wird in 5 ml Wasser aufgenommen, die 0,07/ g Natriumbicarbonat enthalten, und durch Gefriertrocknen in ein Pulver übergeführt. Das Pulver wird mit Äther gewaschen und liefert dann beim Trocknen Natriuin-dl-7a-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylat. . . -

Beispiel· 121

Kalium-dl-7a-methoxy-7-(2-thienalacetamido)-3-hydroxyinethyl-3-cephem-4-carboxylat

0,31 g Natrium-dl-7a-methoxy-7-(2-thienylacetamido)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carboxylat \verden in 8,5 ml Citrusacetylesterase gelöst. Die lösung wird in einem 30° C warmen Wasserbad gerührt, wobei man den pH-Wert durch Zusatz von ' 1-normaler natronlauge auf 6,6 hält. Mach 1 Stunde werden weitere 1,5 ml Enzymlösung zugesetzt. Der pH-Wert wird auf 6,6 gehalten, bis er etwa 0,5 Stunden konstant bleibt. Nach dem Kühlen auf Raumtemperatur wird die Lösung mit 3,0 g Natriumchlorid versetzt, mit 10 ml Äthylacetat überschichtet und mit 6-normaler Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,1 angesäuert. Die Äthylacetatschicht wird abgetrennt und mit Wasser gewaschen. Dann wird die organische Phase mit 25 ml Wasser un-

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terschichtet und der pH-Wert mit 6-normaler Kalilauge auf 5,6 eingestellt. Die wässrige Phase wird abgetrennt und gefriergetrocknet. Durch Umkristallisieren des Rückstandes aus einem Gemisch aus Methanol und Isopropanol erhält man Zalium-dl-7a~ metlioxy-7-(2-thienyläeetamido)~3~hydroxymethyl-3-ceph.em-4-carboxylat.

Beispiel 12g

dl-7a-Methoxy-7-( 2-thienylacetamido )-3-carbamoyloxymethyl-5-cephem-4-car "bonsäure

0,15 ml Chlorsulfonylisocyanat werden zu einer eiskalten Suspension von 0,20 g Kalium~dl,7a-methoxy-7-(2-thienylacetramido)-3-hydroxymethyl-3-cephem-4-carboxylat in 5 ml Acetonitril zugesetzt. Das Gemisch wird 90 Minuten in der Kälte gerührt. Nach dem Abdampfen des Lösungsmittels hinterbleibt ein Rückstand, der in 10 ml Äthylacetat und 10 ml Wasser aufgenommen wird. Der pH-Wert der wässrigen Schicht wird mit 2,5-normaler Salzsäure auf 1,6 eingestellt und das Gemisch bei Raumtemperatur 2,5 Stunden gerührt. Dann wird der pH-Wert mit wässriger Trikaliumphosphatlösung auf 8 eingestellt und die wässrige Phase abgetrennt, mit Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,5 angesäuert und mit Äthylacetat extrahiert. Die Äthylacetatlösung wird nach dem Trocknen über Natriumsulfat im Vakuum eingedampft, und man erhält dl-7oc-Methoxy~7-(2~thienyl~ acetamido)-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure.

Beispiel 123

dl-7ß-Azido-7-methyl-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-car.bonsäurep-roethoxybenzylester und· dl^a-Azido^-methyl^-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester

Eine Lösung von 0,67 g S-Acetoxymethyl-öH-i,3-thiazin-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester und 0,30 g Triäthylamin in 15 ml wasserfreiem Methylenchlorid wird unter Stickstoff auf 0° C gekühlt. Dann tropft man im Verlaufe von 2 Stunden unter

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15 456

2 3 β 5 5 82 40?

Rühren eine Lösung von 0,40 g 2-Azidopropionylchlorid in 10 ml wasserfreiem Methylenchlorid zu. Die so erhaltene Lösung wird eine weitere Stunde bei 0 C. und dann 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Fach Zusatz von 25 ml Methylenchlorid wird die Lösung viermal mit je 25 ml Wasser und dann mit 25 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen. Fach dem Trocknen über Magnesiumsulfat erhält man durch Abdampfen des Lösungsmittels ein dunkles ÖX. Dieses liefert bei der Reinigung durch Säulenchromatographie an Kieselsäuregel dl-7ß-Azido~7-methyl-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester und

p-methoxybenzylester.

Beispiel 124

dl~7ß-(2-Thienylacetämido)-7-methyl-3-acetoxymethyl-3~cepheni-4- carbonsäure ■

Eine Lösung von 0,050 g dl-7ß»Azido-7-methyl-3-acetoxymethyl-3~cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester in 5 ml Benzol wird 2 Stunden mit 0,050 g Platinoxid bei 2,8 kg/cm² hydriert. Der Katalysator wird durch eine Schicht Filterhilfsmittel abfiltriert und mit weiterem Benzol gewaschen. Das Filtrat wird im Vakuum zu dl-7ß-Amino~7-methyl-3-acetoxyrnethyl«3~ cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester eingedampft.

80 mg dieses Produkts in 3 ml Methylenchlorid werden mit 0,1 ml Pyridin und 27 mg 2-Thienylacetylchlorid versetzt. Nach 5 Minuten langem Stehenlassen bei 25° C setzt man 25 ml Benzol zu und wäscht die Lösung mit wässriger Phosphatpufferlösung (pH 2), Wasser und wässriger Phosphatpufferlösung (pH 8). Nach dem Trocknen mit Magnesiumsulfat, Filtrieren und Abdampfen des Lösungsmittels wird das Produkt durch Chromatographie an 5 g Kieselsäuregel und Eluieren mit einem G-emisch aus 4 Teilen Chloroform und 1 Teil A'thylacetat gereinigt. Man erhält dl-7ß-(2-Thienylacetamido)-7-methyl-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenaylester.

- 108 50982 6/0958

15 456

Dieser Ester wird im Verlaufe von 4 Minuten bei 0° C mit 0,1 ml Anisol und 0,5 ml Trifluoressigsäure versetzt. Die Trifluoressigsäure wird bei O 0 unter einem Druck von 0,1 mm Hg abgetrieben, und das Anisol wird bei 30° C unter einem Druck von 0,1 mm Hg abgetrieben. Dann setzt man 1 ml Anisol zu und dampft dieses nochmals im Vakuum ab, um die vollständige Entfernung der Trifluoressigsäure zu gewährleisten. Der Rückstand wird mit 1 ml Wasser, welches 13 mg Natriumbicarbonat enthält, versetzt, zweimal mit Methylenchlorid gewaschen.und gefriergetrocknet. Man erhält dl-7ß-(2-!rhienylacetamido)-7-methyl-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure.

Beispiel 125 Na"trium-dl-7«-methyl-7ß-(2-thienylacetamido)-cephalosporanat

A. dl-7a-i-Iethyl-7ß-aminocephalosporansäure-p-methoxybene;ylester

303 Jng des nach dem nachstehend beschriebenen Verfahren hergestellten dl-7a-Methyl-7ß-(p-nitrobenzylidenamino)-cephalosporansäure-p-methoxybenzylesters werden 1/2 Stunde mit 109 rag 2,4-Dinitropheny!hydrazin und 106 mg p-Toluolsulfonsäure-hydrat in 10 ml Äthanol behandelt. Das Gemisch wird filtriert und der feste Rückstand mehrmals mit Äthanol gewaschen. Das FiItrat wird im Vakuum, eingedampft, mit wässriger Pufferlösung (pH 8) versetzt und zweimal mit Äther extrahiert. Die Ätherlösung wird mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert, eingedampft und der Rückstand an 10 g Kieselsäuregel unter Eluieren mit einem Gemisch .aus 4 Teilen Chloroform und 1 Teil Äthylacetat chromatographiert. So erhält man dl^a-Methyl^ß-aminoce.phalosporansäure-p-methoxybenzylester.

- 109 -

5-09826/0958

15 456

B· dl-7a-Me thyl-7 ß-(2-thi enylac etamido)-e ephalo sporans äurep-methoxybenzylester

72 mg dl^a-Methyl^ß-aminocephalosporansäure-p-methoxybenzylester in 3 ml Methylenchlorid werden mit 0,1 ml Pyridin und 27 mg 2-Thienylac.etylchlorid versetzt. Fach 5 Minuten langem Stehenlassen "bei 25° C setzt man 25 ml Benzol zu und wäscht die Lösung mit wässriger Phosphatpufferlösung (pH 2), Wasser und wässriger Phosphatpufferlösung (pH 8). Nach dem Trocknen mit Magnesiumsulfat, Filtrieren und Abdampfen des Lösungsmittels erhält man 89 mg Produkt. Dieses wird durch Chromatographie an 5 g Kieselsäuregel und Eluieren mit einem Gemisch aus 4 Teilen Chloroform und 1 Teil Äthylacetat gereinigt. Man erhält dl-7a-Methyl-7ß-(2;-thienylacetamido)-cephalosporansäurep-methoxybenzylester.

C. Fatrium-dl-7a-methyl-7ß-(2~thienylacetamido)-cephalosporanat

73 mg dl^a-Methyl^ß-^-thienylacetamidoJ-cephalosporansäure-p-methoxybenzylester werden'4 Minuten bei 0° C mit 0,1 ml Anisol und 0,5 ral Trifluoressigsäure behandelt. Die Txifluoressigsäure wird bei 0° C und 0,1· mm Hg abgetrieben, und das Anisol wird bei 30° C, und 0,1 mm Hg abgetrieben. Nach Zusatz von 1 ml Anisol wird dieses nochmals abgedampft, um die vollständige Entfernung der Trifluoressigsäure zu gewährleisten. Der Rückstand wird mit 1 ml V/asser, welches 13 mg Natriumbicarbonat enthält, versetzt, zweimal mit Methylenchlorid gewaschen und gefriergetrocknet. Man erhält Natrium-dl-7ocmethyl-7ß-(2-thienyIacetamido)-cephalosporanat.

Der als Ausgangsstoff verwendete dl-7oc-Methyl-7ß-(p~nitro-■benzylidenamino)-cephalosporansäure-p-methoxybenzylester wird folgendermassen hergestellt:

Durch Erhitzen eines Gemisches von 196 mg dl-7a-Aminocephalosporansäure-p-methoxybenzylester und 75 mg 4-Nitrobenzaldehyd

. - 110 -

" 509826/0958

15 456 M

unter Stickstoff in 15 ml Benzol und azeotropes !^destillieren des Wassers wird dl-7cc-(p-Nitrobenzylidenamino)~cephalosporansäure-p-methoxybenzylester hergestellt. Das Produkt wird durch Eindampfen der Lösung unter vermindertem Druck gewonnen»

Das so erhaltene Produkt wird in 8 ml Tetrahydrofuran gelöst und bei -78° C unter Stickstoff mit 0,218 ml einer 2,3-molaren Lösung von Phenyllithium in Tetrahydrofuran versetzt. Die'so erhaltene Lösung des 7-Lithium-7-(p-nitrobenzylidenamino)--cephalosporansäure-p-methoxybenzylesters wird bei -78° C unter Stickstoff mit einer Lösung von 0,4 ml Methyljodid in 10 ml -Dimethylformamid versetzt. Nach 5 Minuten langem Rühren bei -78° C lässt man das Reaktionsgemisch innerhalb 1/2 Stunde Raumtemperatur annehmen. Dann setzt man 100 ml Benzol zu und wäscht die Lösung sechsmal mit V/asser. Dabei wird das zweite Waschwasser mit Phosphatpuffer mit einem pH-Wert von 2 angesäuert und das fünfte Waschwasser mit Phosphatpuffer mit- einem pH-Wert von 8 versetzt. - Die Benzollösung wird mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum; eingedampft,. wobei dl-7a-Methyl-7ß-(p-nitrobenzylidenamino)-cephalosporansäure-p-methoxybenzylester hinterbleibt.

Nach den Verfahren der obigen Beispiele wird ein Thioformamidoester mit einem substituierten Aceton zu der entsprechenden Thioformimidatverbindung kondensiert, die durch Umsetzung mit einem Azidoacetylhalogenid in die dl-7-Azido-3-eephemverbindung übergeführt wird, welche ihrerseits zu der dl-7-Aroinoverbindung reduziert wird. Die letztere wird dann ' zu dem 7-Acylamidocephalosporin acyliert. Dieses Verfahren ist in dem folgenden Pliessdiagramm dargestellt:

-111 -

509826/0958

/Hl

HCHN P (OR)

COOR,

II XXIX

XXX

■h,cAA ο

Il T

N P(OR) COC

iOOR,

III

R¹

NH,

O'

COOR,

H Ac-N.

COOH

XVIII XXI

- 112 -

509826/0958

15 456

Wenn man andere Thioformamidoester (II) mit verschiedenen substituierten Chloracetonen XXIX kondensiert und das erhaltene Produkt mit einem Azidoacetylhalogenid reagieren lässt, erhält man in ähnlicher Weise andere neue Cephemverbindungen (V).

Die folgende Tabelle erläutert in Verbindung mit dem obigen Fliessdiagramm die Herstellung anderer Produkte, die im wesentlichen nach den obigen Beispielen erfolgen kann:

Verbindung II

Verbindungen Verbin- XXX und V, dung XXIX XVIII,.XXI

Verbindungen V, XVIII, XXI

R	Rl	-OCOCH3	B	R1	Rl
C2H5	-CH2CCl3	-OCONH2	-H	-OCOCH3	-CH2CCl3
CH3	-CH(CgH5J2	-OCK3	-H	-OCONH2	-CH(CgH5
C6H5	-CH2CCl3	-OCOCH3	-H	-OCH3	—CK «j COX,
C2H5	-CH2OCH3	-H		-OCOCH3	-CH2OCH3
C3H7	-CH2CCl3	-OCOCHCH, CH3	-H	-H	-CH2CCl3
HC4H9	-CII(CgH5J2	-Cl	-H	-OCOCHCH, Au «5 CH3	-CH(CgH5
C2H5	-CH2CCl3	-OCH2OCH3	••Ti	-Cl	-CH2CCl3
C2H5	-CH2CCl3	-H	-OCH2OCH3	-CH2CCl3

-OCONHCH₂CCI₃ -H

-OCONHCH₂CCI₃ -CH₂

3 .

- 113 -

15 456

Verbindung II
R R₁

Verbindungen

Verbin- XXX und V, Verbindungen dung XXIX XVIII, XXI V, XVIII, XXI

R'

R¹

■^C2^H5

-CH.

-CH.

)CH.

-OCON(CH₂J₂

-CH.

-C₂H₅ -CH₂

-H -S-

ι- κ

-C₂H₅ -CH₂CCl₃

-OCON(CH₀J

-OCON

-^C2^H5
-CH₀

-^C6^H5

-^C2^H5
-C₃H₇

■^nC4^H9

-^C2^H5

-CH₂CCl₃

-OCOCH

-CH(C₆H₅J₂ -OCONH₂ -CH₃

-CH₂CCl₃
-CH₂OCH₃
-CH₂CCl₃
-CH(C₆H₅J₂

-CH₂CCl₃

-OCH₃

-OCOCH₃

-H

-OCOCHCH. CH₃ '

-Cl

-OCOCH.
-OCONH.
-OCH₃
-OCOCH.

-CIU -H

-OCOCHCH.
CH₃ *

-Cl

-CH₂CCl₃

-CH(C₆H₅J₂

-CH₂CCl₃

-CH₂OCH₃

-CH₃CCl₃

-CH(C₆H₅J₂

-CH^CCl₀

5 09826/0958

15

Verbindung II

Verbindung XXIX

Verbindungen XXX und Y, XVIII, XXI

Verbindungen V, XVIII, XXI

R¹

B ■ R¹

■^C2^H5

-CH₂CCl₃ -OCH₂OCH₃

-CH₃ -OCH₂OCH₃

-OCONHCH₂CCI₃ -CH₃ -OCONHCh₂CCI₃

-CH₂CCl₃ -CH₀ ·

-CH- -C₂H₅

■^C2^H5

-CH.

>CH.

-CH₂CCl₃

-CH

-CH

-OCONiCH₂)

-CH.

-OCON(CH₂)₂

-OCON{CH ₂)₂ -CH ₃ -OCON(CH

)CH.

—CH»

*^C2^H5

-CH

-CH₃ -S-

-N

C2H5	-CH2CCl3	-OCOCH3	-OCH3	-OCOCH3	-CH2CCl3
CH3	-CFT ff* IT } 6 5 2	-OCONH2	-OCH3	-OCONH2	-CH(C6H5
C6H5	-CH2CCl3	-OCH3	-OCH3	-OCH3	-CH2CCl3
C2H5	-CH3OCH3	-OCOCH3	-OCH3	•-OCOCH3	• -CH2OCH3

- 115 -

509826/095 8-

15 456

Verbindung II

Verbindung XXIX

Verbindungen XXX und V, XVIII, XXI

Verbindungen V, XVIII, XXI

R¹

R'

C3H7	-CH2CCl3	-H	-OCH3	-H	-CH2CCl	3
HC4H9	-CH(C6H5J2	-OCOCHCH- CH3	-OCH3	-OCO9HCH- CH3 3	-CH(C6H	5» 2
C2H5	-CH2CCl3	-Cl	-OCH3	-Cl	-CH2CCl	3
C2H5	-CH2CCl3	-OCH2OCH	-OCH3	-OCH2OCH3	-CH2CCl	3

-OCONHCH₂CCI₃ -

-OCONHCH₂CCI₃

-CH.

-^C2^H5

-CH.

>CH.

iCH.

-CH₂CCl₃

-OCON (CH₂)

-OCON(CH₂J₂

-OCH.

-OCH.

-OCH.

-OCON(CH₂J₂

-OCON(CH₂J₂

-OCON(CH₂J₂

-CH.

)CIL

-CH₂CCl₃

-C₂H₅

-CH

OCH- -S-.—--Ν

-CH

- 116 -

509826/0958

Wenn ein AzidoacetylChlorid zur Umsetzung mit dem Thiazin verwendet wird, eignen sich die erfindungsgemäss hergestellten dl-7a-Azido-3-CH2R'-3-cephem-4-carbonsäureester als Zwischenprodukte für die Herstellung von 7-substituierten Cephalosporinverbindungen. So können diese Ester zu den entsprechenden neuen dl-7a-Aminoverbindungen reduziert werden, die dann in die entsprechenden dl-7-Diazoverbindungen umgewandelt v/erden können. Vorzugsweise erfolgt jedoch die Umwandlung zu der dl-7-Diaζoverbindung auf dem Wege über das neue dl-7ß-Aminocephalosporin. Die 7-Diazoverbindungen können nach den in der belgischen Patentschrift 768 528 beschriebenen Verfahren in die 7a-substituierten Cephalosporinverbindungen übergeführt werden. Zum Beispiel kann man die -dl-7-Diazoverbindung in dl-7a-Methoxy-7ß-( 2-thienylacetamido )-3-methyl-3-cephem-4-carbonsäure, dl-7a~Methoxy-7ß-(2-furylacetamido)-3-acetoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure, d'l-7a-Methoxy-7ß-(2-thienylacetamido)-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure, dl-7a-Methoxy-7ß-benzylamido-3-chlormethyl-3-cephem~4--carbonsäure und dl-7a-Methoxy-7ß-(2-phenoxyacetamido)-3-methoxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure überführen. Diese neuen Cephalosporinverbindungen und besonders ihre Salze, wie die Alkali- und Aminsalze, sind wertvolle Antibiotika, die gegen verschiedene gram-positive und gram-negative Krankheitserreger aktiv sind. Die dl-Cephalosporinverbindungen können nach bekannten Verfahren, z.B. durch Umsetzung mit einer optisch aktiven Base, Trennung der so erhaltenen Diastereomeren und Rückumwandlung der Diastereomeren in die freie Säure oder ein Salz derselben, in ihre optischen Enantiomeren zerlegt werden.

Es können auch die dl-7a-Amino-3-CH2R'-3-cephem-4-carbonsäureverbindungen in ihre op.tischen Isomeren zerlegt werden, z.B. durch Umsetzung mit einer optisch aktiven Säure, Trennung der Diastereomeren und Rückumwandlung der getrennten Diastereomeren in die d- und-l-7a-Amino-3-CH2R'-3-cephem-4-carbonsäure. Diese enantiomeren Formen können dann, wie oben erwähnt, nach

- 117 -

" ■ . 509826/0958

456 '^rro

bekannten Verfahren in Cephalosporine übergeführt werden.

Die dl-7a-An}inoverMndungen können nach den Verfahren der USA-Patentanmeldung Serial No. 267 858 vom 30. Juni 1972 in die entsprechenden dl-7ß-Aminoverbindungen umgewandelt werden t In diesem Sinne lässt sich dl-7a-Arninocephalosporansäurep-methoxybenzylester folgendermassen in die entsprechende 7ß-Aminoverbindung überführen: ■ ' ·

Ein Gemisch aus 134 mg (0,34 Millimol) dl-7a-Aminocephalosporansäure-p-methoxybenzylester, 47 mg (0,31 Millimol) p-Nitrobenzaldehyd, 800 mg (Magnesiumsulfat und 8 ml Methylenchlorid wird 13 Stunden "bei Raumtemperatur in einem mit.Kappe verschlossenen Kolben gerührt. Das Gemisch wird filtriert und das Filtrat unter vermindertem Druck zu einem gelben Harz eingedampft. Das Rohprodukt wird dreimal in Benzol gelöst und das Benzol im Vakuum abgedampft. So erhält man 163 mg dl-3-Acetoxymethyl-7cc-(p-nitrobenzylidenamino)-3-cephem-4-carbon·- säure-p-methöxybenzylester als gelben festen Stoff: . IR (CHCl₃) 5,61, 5,76, 6,10, 6,21, 6,59, 7,41, 8,04 und 9,64 μ; KMR (CDCl₅)T 7,95 (s, 3, CH₃CO)., 6,67, 6,28 (dd, 2, J=18Hz, 2-CH₂), 6,18 (s, 3, ArOCH₃), 5,22, 4,93 (dd, 2, J=13Hz CH₂OAc), 5,08 (d, 1, J=2Hz, H6). 4,72 (d, 1, J=2Hz, H7), 4,66 (s, 2, ArCH₂), 3,10, 2,60 (dd, 4, J=9Hz, MeOArH), 2,05, '1,68 (dd, 4, J=9Hz, O₂NArH) und 1,41 (s, 1, -CH=N-).

Eine Lösung von 163 mg (0,31 Millimol) dl-3-Aceroxymethyl-7a-(p-nitrobenzylidenamino)-3-cepheni-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester in 4,8 ml trockenem Tetrahydrofuran wird unter Hindurchleiten von Stickstoff in einem Bad aus festem Kohlendioxid und Aceton gekühlt. Man setzt schnell mit einer Injektionsspritze 135 μΐ einer 2,3-molaren Lösung von Phenyllithium in einem Gemisch aus 7 Teilen Benzol und 3 Teilen Äther zu, wobei sich eine tintenblaue Lösung bildet. Dann tropft man im Verlaufe von 4 Minuten 6 ml Dimethylformamid zu, rührt noch 1 Minute bei -78° C und versetzt das Reak-

- 118 ' 509826/0 958

tionsgemisch mit einer lösung von 56 μΐ (3,1 Millimol) Wasser und 44 μΐ (0,77 Millimol) Essigsäure in '4,8 ml Tetrahydrofuran. Man lässt das Gemisch Raumtemperatur annehmen, verdünnt es dann mit 100 ml Benzol und -wäscht es sechsmal mit je 40 ml Wasser. Dabei wird das zweite Waschwasser mit 1 ml 1-molarer Phosphatpufferlösung mit einem pH-Wert von 3 angesäuert, während das fünfte Waschwasser mit 1 ml einer 1-molaren Phosphatpufferlösung mit einem pH-Wert von 9 alkalisch.gemacht wird. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft. Man erhält 149 mg eines Gemisches aus 3 Teilen dl-3-Acetoxymethyl-7a-(p-nitrobenzylidenamino)-3-cephem-4-carbonsäure-pmethoxybenzylester und 2 Teilen dl-3-Acetoxymethyl-7ß-(p-nitrobenzylidenamino)-3-cephem-4-carbonsäure~p-methoxybenzylester als orangefarbenes Öl. Das 7ß-Isomere zeigt im KMR-Spektrum charakteristische Banden bei 4,58 (d von d, J=2Hz und J-5HZ, H7) und 1,33 (d, J=2Hz, -CH=N-).

55i 5 mg (0,28 Millimol) 2,4-Dinitrophenylhydrazin werden unter Rühren zu einer Lösung von 53,3 mg (0,28 Millimol) p-Toluolsulfonsäure-raonohydrat in 8 ml Äthanol zugesetzt. Das Gemisch wird 45 Minuten bei Raumtemperatur geführt und dann mit '147 mg (0,28 Millimol) des Gemisches aus 3 Teilen dl-3-Acetoxymethyl~ 7a-(p-nitrobenzylidenamino )-3-c ephem-4-carbonsäur e-p-methoxybenzylester und 2 Teilen dl-3-Acetoxymethyl~7ß-(p-nitrobenzylidenamino )-3-cephem-4-carbonsäure—p-methoxybenzylester in 1 ml Chloroform versetzt. Nach 30 Minuten langem Rühren bei Raumtemperatur wird das Reaktionsgemisch filtriert und das Piltrat im Vakuum eingedampft. Der Rückstand wird mit 0,6 ml 1-molarer Dikaliumphosphatlösung und 4 ml Wasser verdünnt und dreimal mit je 10 ml Äther extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden mit 1:0 ml Wasser und 15 ml gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum zu 101 mg eines Gemisches aus 3 Teilen dl-3-Acetoxymethyl-7a-amino-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylei3ter

- 119 -

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und 2 Teilen dl-3-Acetoxymethyl-7ß-amino-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester eingedampft, das als orangefarbenes öl anfällt.

Das so erhaltene Gemisch aus der 7a- und der 7ß~Verbindung wird acyliert, und die acylierten Produkte werden getrennt, worauf man die Schutzgruppe abspaltet und, wie in den folgenden Beispielen beschrieben, antibiotische Cephalosporine gewinnt. · ■

Beispiel 126

dl-3-Acetoxymethyl-7cc-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester und dl-3-Acetoxyrnethyl-7ß-(2-thienylacetamido)-3-cephen)-4-carbonsäure-p-methoxybensylester

101 mg (0,26 Millimol) eines Gemisches aus 3 Teilen dl-3-Acetoxymethyl^a-amino^-cephem^-carbonsäure-p-methoxybenzylester und 2 Teilen dl-3-Acetoxymethyl-7ß-amino~3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester werden in 2 ml trockenem Methylenchlorid gelöst, und die Lösung wird im Eisbad -unter Stickstoff gekühlt. Man setzt zunächst 100 μΐ Pyridin und dann eine Lösung von 42 mg (0,26 Millimol) ThienylacetylChlorid in 1 ml Methylenchlorid zu. Das Reaktionsgemisch wird 15 Minuten bei 0 C gerührt und dann mit 20- ml Benzol verdünnt. Die Benzollösung wird zweimal mit Phosphatpufferlösung (pH 2), dann mit V/asser, mit Phosphatpufferlösung (pH 9), wieder mit Wasser und mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zu 121 mg eines orangefarbenen Öls eingedampft. . .

Das Rohprodukt wird durch Säulenchromatographie an 10,0 g Kieselsäuregel (in die Säule eingefüllt unter ί5-prozentigem Äthylacetat in Benzol) gereinigt. Die Produkte werden mit 15-prozentigem A'thylacetat in Benzol eluiert, wobei 100 Fraktionen zu je-2 ml aufgefangen werden. Die Fraktionen Nr. 38 bis 47 liefern 16 mg dl-3-Acetoxymethyl-7ß~(2-thienylaeet-

- 120 509826/0958

amido)-3-cephem-4--earbonsäure-p-methoxybenzylester als blassgelben festen Stoff:

UV (AtOH) 229 und 226 πμ; IR-(CHCl₅) 5,60, 5,77, 5,93, 6,63, 8,04 und 9,63 μ; KI-IR (CDCl₅)-ρ 7,98 (s, 3, CH₃CO), 6,77, 6,43 (dd, 2, J=18Hz, 2-CH₂), 6,22 (s, 3, ArOCH₃), 6,18 (s, 2, ArCH₂), 5,25, 4,86 (dd, 2, J=13Hz, CH₂OAc), 5,10 (d, 1, J=4,5Hz, H6), 4,80 (s, 2, ArCH₂), 4,20 (d von d, 1, J=4,5Hz und J=9Hz) und 3,22-2,55 (m, 8, ArII und NH). Die Fraktionen Nr. 61 bis 90 v/erden vereinigt und liefern 31 mg dl-3-Acetoxymethyl-7a-(2-th.ienylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure-pmethoxybenzylester als gelbes Öl.

Beispiel .127

dl-3-Acetoxymethyl-7ß-(2-thienylacetamido)-3-cepbem-4-carbonsäure und das Natriumsalz derselben

Eine Suspension von 13,8 mg (0,027 Millimol) dl-3-Aeetoxymethyl-7ß-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4-carbonsäure-p-methoxybenzylester in 70 μΐ Anisol wird im Eisbad gekühlt. Nach Zusatz von 350 μΐ eiskalter Trifluoressigsäure wird das Gemisch umgeschwenkt, um es homogen zu machen. Die so erhaltene lösung wird 5 Minuten auf 0 C gehalten und dann im Vakuum bei 0 C eingedampft, um die überschüssige Trifluoressigsäure abzutreiben. Den öligen Rückstand· lässt man im Vakuum Raumtemperatur annehmen, verdünnt ihn dann mit 0,5 ml Anisol und dampft bei 35° C im Vakuum ein. Der so erhaltene halbfeste Stoff wird in 5 ml Wasser, die 23 mg (0,27 Millimol) Natriumbicarbonat enthalten, aufgenommen,und die lösung dreimal mit je 2 ml Methylenchlorid extrahiert. Die wässrige Phase (pH 8,65) wird mit 1-molarer Phosphatpufferlösung (pH 2) auf einen pH-Wert von 2,6 angesäuert und viermal mit je 3 ml Äthylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte werden über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum 'eingedampft. Man erhält 10,1 mg dl-3-Acetoxymethyl-7ß-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4~carbonsäure als weissen festen Stoff:'

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IR (rein) 2,8-4,5, 5,60, 5,76, 5,91, 6,50, 7,23, 8,10 und 9,63 μ; KMR (Me₂CO-CL₆) Z 7,96 (s, 3, CH₃CO), 6,58, 6,20 (dd, 2, J=19Hz, 2-CH₂), 6,08 (s, 2, ArCH₂), 5,20, 4,83 (dd, 2, J=13Hz, CH₂OAc), 4,86 (d, 1, J=4,5Hz, H6), 4,13 (d.vond, 1, .J=4,5Hz und J-9Hz, H7), 2,85 (m, 3, ArH) und 1,96 (d, 1, J=9Hz, NH). ' ·

0,026 Millimol der obigen freien Säure werden in 0,94 ml 0,03-molarer wässriger Nätriumbicarbonatlösung gelöst, und die lösung v/ird gefriergetrocknet. So erhält man 11,1 mg Natrium-dl-3-acetoxymethyl-7ß-(2-thienylacetamido)-3-cephem-4- · carboxylat als weisses Pulver: UY (HgO) 237 und 265 ΐημ.

Nach den oben beschriebenen Verfahren werden auch andere neue 7a-Aminocephalosporinverbindungen der allgemeinen Formel

^H2^!V/,,₍₍

H H

VI . .

in der R¹ und R₁ die obigen Bedeutungen haben, In die entsprechenden 7ß-Acylaraidoverbindungen der allgemeinen Formel

- 122 -

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in der Ac die obige Bedeutung hat, sowie Salze und Ester derselben übergeführt.

Pharmazeutisch unbedenkliche Salze, die nach bekannten Verfahren aus den Verbindungen gemäss der Erfindung hergestellt werden können, sind z.B. (a) Salze mit anorganischen Basen, wie Alkalisalze, z.B. Natrium- und Kaliumsalze, Erdalkalisalze, z.B. Calciumsalze» und Salze mit organischen Basen, z.B. Procain- und Dibenzyläthylendiaminsalze, und (b): Säureadditionssalze, z.B. Additionssalze mit Salzsäure, Bromwasserstoff säure, Schwefelsäure, Salpetersäure, Phosphorsäure, p-Toluolsulfonsäure und Methansulfonsäure.

Ausser in Form von Salzen können die neuen Cephalosporine gemäss der Erfindung auch in Form von Estern, wie den oben beschriebenen, dargereicht v/erden. Von besonderem Interesse sind labile Ester, wie der Acetoxymethylester, der Trimethylacetoxyester und dergleichen.

Die neuen Cephalosporine sind wertvolle Antibiotica, die gegen verschiedene gram-positive und gram-negative Bakterien aktiv sind und daher in der Humanmedizin sowie in der Veterinärmedizin Anwendung finden. Die Verbindungen gemäss der Erfindung können deshalb als antibakterielle Mittel zur Behandlung von Infektionen verwendet werden, die durch gram-positive oder gram-negative Bakterien verursacht werden, z.B. als Mittel gegen Staphylococcus aureus (resistent gegen Penicillin), Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,. Salmonella typhosa, Pseudomonas und Bacterium proteus.

Die antibakteriellen Cephalosporine gemäss der Erfindung können ferner als Zusätze zu Viehfutter, zur Konservierung von Nahrungsmitteln und als- Desinfektionsmittel verwendet werden. So können sie z.B. in wässrigen Formulierungen in Konzentrationen von 0,1 bis 100 Teilen Antibioticum je Million Teile

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15 456 Λίψ

Lösung angewandt werden, um das Wachstum schädlicher Bakterien auf medizinischen und zahnmedizinischen Ausrüstungen zu zerstören und zu hemmen, sowie auch als Bactericide für technische Anwendungszwecke, z.B. in Anstrichfarben auf wässriger Basis sowie in dem Siebwasser von Papierfabriken, um das Wachstum schädlicher Bakterien zu unterdrücken.

Die Produkte gemäss der Erfindung können für sich allein oder in Kombination als Wirkstoff in den verschiedensten pharmazeutischen Präparaten verwendet werden. Die Antibiotica und ihre entsprechenden Salze können in Form von Kapseln oder als Tabletten, Pulver oder flüssige Lösungen oder als Suspensionen oder Elixiere dargereicht werden. Sie,können oral, intravenös oder intramuskulär appliziert werden.

Für die Veterinärmedizin können die Verbindungen als Präparate für die Injektion in die Brustdrüsen entweder in langzeitig wirksamer Form oder für die schnelle Freigabe formuliert werden. .

Die Dosierung richtet sich weitgehend nach dem Zustand und dem Gewicht der zu behandelnden Menschen oder Tiere, der Art und Häufigkeit der Darreichung, wobei für allgemeine Infektionen die parenterale Applikation und für Darminfektionen die orale Darreichung bevorzugt wird. Im allgemeinen besteht eine tägliche orale Dosis aus etwa 15 bis 600 mg Wirkstoff je kg Körpergewicht in einer oder«mehreren Applikationen pro Tag. Eine bevorzugte tägliche Dosis für erwachsene Patienten liegt im Bereich von etv/a 80 bis 120 mg Wirkstoff je kg Körpergewicht. Die bevorzugte tägliche Dosis der Verbindungen gemäss der Erfindung liegt im Bereich von etwa 80 bis 120 rag Wirkstoff je kg Körpergewicht.

Die Mittel können in mehreren Einheitsdosisformen, z.B. in festen oder flüssigen, oral darzureichenden Dosisformen ap-

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pliziert werden. Die Mittel können je Einheitsdosis, gleich ob sie flüssig oder fest sind, 0,1 bis 99 fo Wirkstoff enthalten und enthalten vorzugsweise 10-bis 60 fi Wirkstoff. Im allgemeinen enthalten die Mittel etwa 15 bis 1500 mg Wirkstoff, bezogen auf das Gesamtgewicht des Mittels; im allgemeinen v/erden jedoch Dosen im Bereich von etwa 250 bis 1000 mg bevorzugt. Pur die parenterale Darreichung besteht die Einheitsdosis gewöhnlich aus der reinen Verbindung in etwas angesäuerter steriler wässriger Lösung oder in Form eines zur Auflösung bestimmten löslichen Pulvers.

Die optische Zerlegung der neuen dl-Cephalosporine in die aktiven Enantiomeren kann folgendermassen durchgeführt werden:

Beispiel 128

d-7ß-(2-Thienylacetamido)-7-methoxy-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure

353 mg dl-7ß-(2-Thienylacetamido)-7-methoxy-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure werden in 5 ml Methanol gelöst, und die Lösung wird mit 104 mg (-)-l-Phenyläthylamin versetzt. Das Gemisch wird erwärmt, bis Lösung eingetreten ist, und dann filtriert. Beim langsamen Abkühlen fällt aus dem FiI-trat ein kristalliner Niederschlag aus. Dieses Material wird gesammelt, mit kaltem Methanol gewaschen und umkristallisiert. Das so erhaltene Salz wird in 10 ml Wasser aufgenommen und mit überschüssigem liatriumbicarbonat versetzt. Das Gemisch wird filtriert, um das optische Zerlegungsmittel zu entfernen. Der wässrige Teil wird zweimal mit je 5 ml Chloroform gewaschen, mit 10 rol Äthylacetat überschichtet und mit 6-normaler Salzsäure auf .einen pH-Wert von 3 angesäuert. Die Äthylacetatphase wird abgetrennt, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und im Vakuum eingedampft. Man erhält d-7ß-(2-Thienylacetamido)-7-methoxy-3-carbamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure: £j*J-q + 190°.

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15 456 lh

Die Aufarbeitung der Mutterlaugen von der ersten Kristallisation liefert l-7ß-(2-Thienylacetamido)-7-niethoxy-3-car'bamoyloxymethyl-3-cephem-4-carbonsäure =

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Claims (2)

1. Patentansprüche

   Verfahren zur Herstellung von 7-Acylamidocephalosporinverbindungen der allgemeinen Formel

   B H

   COOR,

   in der Ac eine Acylgruppe, B ein Wasserstoffatom, eine Methoxy- oder Methylgruppe, R' Wasserstoff, Halogen, einen heterocyclischen Thiorest, einen Carbamoyloxyrest, einen N-substituierten Carbamoyloxyrest, einen N,N-disubstituierten Carbamoyloxyrest, einen Alkoxyalkoxy-, Alkoxy-, Aryloxy-, Aralkyloxy- oder Acyloxyrest und R» ein Wasserstoffatom oder eine Schutzgruppe bedeuten, sowie von Salzen und pharmazeutisch unbedenklichen Estern derjenigen Verbindungen, bei denen Rp ein Wasserstoffatom bedeutet, dadurch gekennzeichnet, dass man einen Phosphonoessigsäureester der allgemeinen Formel

   CO₂R₁

   P(OR),

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   15 *»56 YB

   in der R einen Alkyl- oder Arylrest und R₁ eine Carboxyl-Schutzgruppe bedeutet, mit einem Thxoformylierungsmittel umsetzt, die gebildete Thioformamidverbindung der allgemeinen Formel

   II • COOR₁

   mit einem substituierten Aceton der allgemeinen Formel

   R¹CH₂COCH₂X ,

   in der X Halogen oder eine Sulfonsäureestergruppe bedeutet, in Gegenwart eines säurebindenden Mittels umsetzt, die dabei erhaltene Thioformimidverbindung der allgemeinen Formel

   R¹CHp-CO-CH₀-S-CH=N-. -P(OR)₀ III

   COOR₁

   mit einer Base umsetzt, die erhaltene Thiazinverbindung der allgemeinen Formel

   IV

   COOR₁

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   YB.

   mit einer Azidoacetylverbindung der allgemeinen Formel

   3 H-COX'

   in der X¹ Halogen, OSO₂CP₃ oder OSO₂CH bedeutet, in Gegenwart einer Base umsetzt, die erhaltene dl-7-Azidocephalosporinverbindung der allgemeinen Formel

   ν ,

   in der die Azidogruppe in der ol-Stellung steht, wenn B ein Wasserstoffatom ist, und in der die Azidogruppe in der ß-Stellung steht, wenn B eine Methyl- oder Methoxygruppe ist, reduziert und die erhaltene dl-7-Aminocephalosporinverbindung der allgemeinen Formel,

   B H

   COOR,

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   acyliert, gegebenenfalls die erhaltene dl-7-Acylamidocephalosporinverbindung in ihre optischen Isomeren spaltet und/oder gegebenenfalls R» abspaltet und gegebenenfalls die freie Säure in ein Salz oder einen pharmazeutisch unbedenklichen Ester überführt.
2. 2. Verfahren nach Anspruch i, dadurch gekennzeichnet, dass man mit einem Säurehalogenid, Säureanhydrid oder gemischten Säureanhydrid oder enzymatisch acyliert.

   3· Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Reduktion der Azidoverbindung mit Wasserstoff in Gegenwart eines Edelmetallkatalysators durchführt.

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