DE2223864C3

DE2223864C3 - Verfahren zur Herstellung von Glucose-Isomerase

Info

Publication number: DE2223864C3
Application number: DE2223864A
Authority: DE
Inventors: Robert Edward Park Forest Heady; William Arthur Downers Grove Jacaway Jun.
Original assignee: Unilever Bestfoods North America
Current assignee: Unilever Bestfoods North America
Priority date: 1971-05-20
Filing date: 1972-05-16
Publication date: 1978-09-14
Also published as: FR2138797A1; BE783688A; NL7206884A; CA997694A; FR2138797B1; DE2223864B2; AU4239772A; IT1025009B; US3770589A; DK130424C; JPS5443595B1; DK130424B; NL176275C; GB1395053A; DE2223864A1; NL176275B

Description

Die Erfindung betrifft die in den Ansprüchen definierten Gegenstände.

Seit M a r s h a 11 und K ο ο i über die erste technisch brauchbare enzymatische Dextrose-Laevulose-lsomerislerung in »Science«, 1957, Band 125, S. 648 und 649, berichteten, sind zahlreiche Versuche zur Ausarbeitung wirtschaftlich tragbarer enzymatischer Isomerisierungsprozesse unternommen worden. Die bekannten Verfahren zur Bildung von Glucose-Isomerase vermögen jedoch in bezug auf Enzymausbeute nicht voll zu befriedigen.

Es wurde nun gefunden, daß durch die erfindungsgemäße Züchtung Glucose-Isomerase in stark erhöhter Ausbeute erzfelbar ist.

Die Aktivitätsmengen an Glucose-Isomerase, die auf diese Weise erzielbar sind, sind z. B. mindestens 3mal und in einigen Fällen etwa lOOmal höher als gemäß dem aus Agr. Biol. Chem., 30, 1966, Seiten 1247-1253, bekannten Verfahren, und sie sind auch eindeutig höher als gemäß den in der DE-OS 20 18 058 sowie US-PS 29 50 228 beschriebenen Verfahren.

Durch die Erfindung wird erreicht, daß die Gewinnung des Isomerase-Enzyms, mit dessen Hilfe laevulosehaltige Erzeugnisse aus Stärkehydrolysaten und Dextroselösungen in vorteilhafter Weise herstellbar sind, auf das IV2- bis 2fache gesteigert werden kann, wobei auch eine Zunahme des gesamten produzierten mikrobiologischen Zellmaterials beobachtet wird, die jedoch nicht in der gleichen Größenordnung erfolgt wie das Ansteigen der Enzymausbeute. Das Verfahren der Erfindung bringt große wirtschaftliche Vorteile, da die Kosten für das Kulturmedium eines Fermcnters im technischen Maßstab sehr hoch sind, so daß die Kosten des Zusatzes einer ausreichenden Menge Glycin und Ammoniumnitrat nicht sonderlich ins Gewicht fallen, andererseits jedoch durch diesen Zusatz eine Verdoppelung der Isomerase-Ausbeute zu erreichen ist.

10

15 Wird Glycin in größerer als der angegebenen Menge verwendet, so werden keine sehr wesentlichen zusätzlichen Verbesserungen erzielt, von der damit verbundenen Kostenerhöhung ganz abgesehen. So ergeben, jeweils berechnet auf 100 ml Kulturmedium, 0,5 g Glycin zwar eine größere Menge an mikrobiologischem Zellmaterial als 0,25 g, doch ist dann das Anwachsen der produzierten Enzymmenge geringer. Der Zusatz von 1,0 g Glycin führt sogar zu einer Behinderung des Wachstums.

Obwohl sich zeigte, daß außer Glycin auch bestimmte andere Aminosäuren eine stimulierende Wirkung auf die Erzeugung von Glucon-Isomerase ausüben, ist diese Wirkung deutlich geringer als mit Glycin, oder es werden derartig große Aminosäuremengen benötigt, daß der Prozeß unwirtschaftlich und unpraktikabel wird.

Jede Enzym-Zubereitung scheint ihre eigenen Charakteristika zu besitzen, z. B. optimales pH, optimale Temperatur, erforderliche Metallionen, Michaelis-Konstante und Mechanismus der Laevulose-Bildung.

Typische geeignete Streptomyces-Arten bzw. -Stämme sind z. B.

S. griseolus

S. griseoruber

S. griseus

S. herbaricolo.-

S. hygroscopicus

S. lipmani

S. niveoruber

S. olivaceus

S. phaeochromogenes*)

S. purpeofuscus

S. rockei

S. roseochromogenes

S. rutgersensis

S. vinaceus

S. achromogenus
S. albus*)

S. antibioticus ATCC 10332
S. aureus
S. bobiliae
S. californicus
S. coelicolor
S. diastaticus
S. flavovirens
S. fradiae
S. gaelicolor
S. galbus
S. galilaeus
S. gedanensis
S. virginiae

*) Die Stämme wurden von den USDA Laboratories, Preora, Illinois, erhalten.

Typische geeignete Mikroorganismen sind außerdem Bacillenstämme, die aus Laboratoriumsluft isoliert wurden, B. megaterium, ferner thermophile Bacillen, insbesondere Bacillus stearothermophilus.

Die Enzym-Zubereitung wird in üblicher bekannter Weise erzeugt. So ist z. B. ein auf Schrägagar bereitetes Impfmaterial zum Impfen eines in einem Kolben befindlichen geeigneten Kulturmediums zur Entwicklung des Impfmaterials verwendbar. Es kann z. B. eine Kultur von einem zur Erzeugung von Glucos-Isomerase befähigten Streptomyces-Stamm zur Beimpfung eines Substrats, das eine geeignete Kohlenstoffquelle enthält, verwendet werden. Die Inkubationszeit kann stark variieren und hängt vom Typ des verwendeten Stammes sowie des verwendeten Kulturmediums ab. In der Regel beträgt die Inkubationszeit etwa 4 bis 48 Stunden. Üblicherweise wird dann ein aliquoter Teil der Kultur oder die ganze Kultur dafür verwendet, um ein noch größeres Volumen des Kulturmediums oder Nährbodens zu beimpfen. Dies kann je nach Erfordernis ein oder mehrere Male wiederholt werden. Die Endkultur, die in dem besonders zusammengesetzten Nährmedium gezüchtet wird, um die Enzymerzeugung herbeizuführen, wird dann mit oder ohne Reinigung als Enzymquelle verwendet, um die Isomerisierung von Glucose zu Laevulose zu bewirken.

Die Kohlenstoffquelle des Kulturmediums kann aus Xylose, einem Gemisch aus Xylose und Stärke oder aus Xylose in Kombination mit anderen Kohlenstoffquellen, wie Mannit, Gluconsäure, Galactose, Glycerin, Sorbit. Glucose und anderen reinen oder unreinen Kohlenhydra tquellen bestehen.

Der Xyiose-Anteil des Kulturmed'ums kann aus Xylose selbst oder aus ihren nativen Formen bestehen, die in den Zellwänden fast sämtlicher Pflanzen als Xylanpolymeres der Xylose vorkommen, welches Xylose als Hauptbestandteil enthält. So können Stroh, Häcksel, Weir.enkleie und ähnliches Material als Xylanquelle verwendet werden. Üblicherweise werden diese Materialien mit Alkali behandelt, um das Xylosepolymere zu extrahieren.

Eine bevorzugte Kohlenstoffquelle für das Kulturmedium ist ein Gemisch aus 25 bis 75 Gew.-% Stärke und 75 bis 25 Gew.-% Xylose, bezogen auf das Gesamtgewicht dieser beiden Stoffe. Anders ausgedrückt wird die Kohlenstoffquelle, die aus dem Gemisch dioser beiden Stoffe besteht, dem Kulturmedium in einer Menge von 0,2 g bis 10 g je 100 ml zugesetzt. Vorzugsweise werden von dem Gemisch 0,5 g bis 3 g als Kohlenstoffquelle für das Kulturmedium verwendet.

Eine Proteinquelle für das Kulturmedium ist Maisquellwasser. Ein sehr brauchbares Kulturmedium wird erhalten, wenn dem Kulturmedium je 100 ml von 0,1 bis 5 g Maisquellwasser zugesetzt werden.

Außer der Kohlenstoffquelle kann das Kulturmedium zusätzlich weitere Stoffe, wie anorganische Salze, beispielsweise Magnesiumsulfat, Kaliumdihydrogenphosphat und ähnliche Salze, enthalten.

Der Zusatz des Glycins, mit oder ohne gleichzeitigen Zusatz von Ammoniumnitrat, kann erfolgreich in jeder Stufe der Vermehrung des Mikroorganismus erfolgen. Darüber hinaus wirkt sich der Zusatz bei allen bekannten Zusammensetzungen von Kulturmedien günstig aus. Dies gilt insbesondere für Zusammensetzungen zur Vermehrung von Mikroorganismen der Gattung Streptomyces, die durch die vorliegende Erfindung verbessert werden kann, wobei die folgenden typischen Zusammensetzungen angewendet werden:

Medium Hl
Fermentationsmedium

Xylose

Maisstärke

MgSO₄ -7 H₂O

CoCI₂ -6 H₂O, sofern verwendet

g/Liter

10

0,5

0.24(10-³M)

(Einstellungdes pH auf 7,1 vordem Sterilisieren)

In dem folgenden Beispiel beziehen sich alle Angaben in Teilen oder Prozenten auf das Gewicht, wenn nichts anderes gesagt ist, und auf Handelsbasis, sofern sie nicht ausdrücklich auf Trockenbasis oder eine andere Basis bezogen werden.

Beispiel

Erzeugung einer Glucose-Isomerase-Enzym-Zubereitung aus
Streptomyces olivochromogenes ATCC 21114

A. Entwicklung des Impfmaterials

Es wurden Sporen eines Stammes Streptomyces olivochromogenes ATCC 21114 in verschiedene 500-ml-Erlenmeyer-Kolben mit je 100 ml eines sterilen Mediums überimpft, das wie folgt zusammengesetzt war (Tabelle II):

Tabelle!!

Bestandteile

Mengen

Xylose
Maisstärke
Maisquellwasser
MgSO₄-7 H₂O
CoCI₂-6H₂O
Destilliertes Wasser

5,0 g

40,0 g

0,5 g

0,24 g

1000 ml

Vor dem Sterilisieren wurde das pH des Kulturmediums mit Natriumhydroxid auf 7,1 eingestellt. Die Kolben wurden beimpft und 60 Stunden lang bei einer Temperatur im Bereich von etwa 28°C bis etwa 30⁰C unter gelegentlichem Schütteln inkubiert.

Tabelle I
Medium-Zusammensetzungen

Medium I

Schrägmedium zur Aufrechterhaltung der Kul'.ur

	g/Litcr
Xylose	10
Hefeextrakt	1
Rindfleischextrakt	1
Nährmedium	2
Agar	20
CoCI₂-6 H₂O, sofern verwendet	0,24

Medium Il

Medium zur Entwicklung der Impfmasse

g/L.iter

Xylose 5

Maisstürke 5

Maisquellwasser 40

MgSO₄ 7 H_?O 0,5

CoCI₂ 6 H₂O, sofern verwendet 0,24(10 ¹M)
(Einstellung des pH auf 7,1 vordem Sterilisieren)

B. Erzeugung der Enzym-Zubereitung

In jeden von mehreren modifizierten Hinton-Erlenmeyer-Kolben wurden 200 ml eines sterilen Mediums der folgenden Zusammensetzung eingebracht (Tabelle III):

Tabelle III	Mengen
Bestandteile	10,0 g
Xylose	10,0 g
Maisstärke	40.0 g
Maisquellwasser	2,5 g
Brauereihefc-Extrakt	0,5 g
MgSO₄-7 H₂O	0,24 g
CoCI₂-OH₂O	1000 ml
Destilliertes Wasser	dem Sterilisieren
H- Wert wurde vor

Der ptl-wen wurde vor dem .Sterilisieren mit Natriumhydroxid auf 7,1 eingestellt.

Bei der Zubereitung der oben beschriebenen Nährmedien kann Xylan-Hydrolysat anstelle von Xylose mit im wesentlichen Bleichen l-'rBphnisspn verwendet

werden. Das Hydrolysat ist eine preiswerte Xylosequel-Ic.

Das Kulturmedium in b Kolben (Ansatz A in den Abbildungen) wurde dann in der folgenden Weise behandelt. Zu einem ersten Kolben wurde nichts hinzugefügt. Den übrigen 5 wurde Ammoniumnitrat in folgenden Mengen zugesetzt: 0,1; 0,2; 0,3:0,4 und 0,5 g je 100 ml des Kulturmediums.

In einem zweiten Ansatz von 6 Kolben (Ansatz B in den Abbildungen) wurde das Kulturmedium in folgender Weise modifiziert. Zu dem ersten Kolben wurde nichts hinzugefügt. Den übrigen 5 Kolben wurde Glycin in folgenden Mengen zugesetzt: 0,1; 0,2; 0,3; 0.4 und 0,5 g je 100 ml des Kulturmediums.

Ansatz C: Es wurde entsprechend Ansatz B verfahren und den Kolben Glycin in den angegebenen Mengen zugesetzt. Dann wurden jedem der 6 Kolben 0,1 g Ammoniumnitrat je 100 ml Kulturmedium hinzugefügt.

Ansatz D: Es wurde ebenfalls entsprechend Ansatz B verfahren. Dann wurden jedem der 6 Kolben 0,2 g Ammoniumnitrat je 100 ml Kulturmedium zugesetzt.

Ansatz Zf: Ein weiterer Ansatz von 6 Kolben wurde beiseite gestellt und als Ansatz E bezeichnet. Den Kolben wurde ebenfalls Glycin entsprechend Ansatz B zugesetzt. Anschließend wurden jedem Kolben 0,3 g Ammoniumnitrat je 100 ml Kulturmedium hinzugefügt.

Ansatz F-Es wurde entsprechend Ansatz £verfahren, jedoch betrug die jedem Kolben zugesetzte Menge Ammoniumnitrat 0,4 g je 100 ml Kulturmedium.

Ansatz G: Entsprechend Ansatz F wurden 6 Kolben mit Glycin vorbereitet, jedoch wurden jedem Kolben 0,5 g Ammoniumnitrat je 100 ml Kulturmedium zugesetzt.

Der Inhalt von mehreren Kolben mit Impfmaterial wurde dann miteinander vermischt, um Homogenität zu gewährleisten. Daraufhin wurden von dem Gemisch gleiche Teile von 10 ml entnommen. Sie wurden dafür verwendet, um jeden einzelnen Kolben von allen Ansätzen, die in der beschriebenen Weise hergestellt waren, zu beimpfen. Die beimpften Kolben wurden dann 84 Stunden bei einer Temperatur im Bereich von etwa 28°C bis etwa 30°C in einer sich drehenden Schütteimaschine inkubiert.

C. Gewinnung der Enzym-Zubereitung Nach der Fermentation wurde ein aliquoter Teil von jedem Kolben bei der lOOOOfachen Erdbeschleunigung 15 Minuten lang zentrifugiert. Das Zentrifugat wurde durch Dekantieren abgetrennt, und die Zellmasse diente als Untersuchungsmaterial. Sie wurde entweder sofort untersucht oder sie wurde bis zur Untersuchung im gefrorenen Zustand aufbewahrt.

D. lnlösungbringen des Enzyms

Direkt vor der Untersuchung wurde die Zellmasse mit 0,05molarer Kaliumphosphat-Pufferlösung (pH 73) auf ihr ursprüngliches Volumen gebracht und die Zellen wurden erneut suspendiert Die rekonstituierte Zellmasse wurde dann bei 0 bis 5° C 13 bis 2,0 Minuten mit Hilfe eines Branson-Model W-185D Sonifier bei einer Einstellung von 80 Watt beschallt

Dann wurde die Isomerase-Aktivität der beschallten Zellen in der überstehenden Lösung nach folgender Methode ermittelt

E. Ermittlung der Isomerase-Aktivität

Die Untersuchungsmethode beruhte auf einer spektrophotometrischen Bestimmung der aus einer Glucose-Lösung unter standardisierten Bedingungen gebildetei Ketose.

Es wurde eine Vorratslösung folgender Zusammen setzung angesetzt:

Tabelle IV

Bestandteile

Mengen

0,1 M-MgSO₄-7 H₂O
0.01 M-CoCI₂ -6 H₂O
1 M-Phosphalpuffer
Wasserfreie D-Glucose
Destilliertes Wasser

1 ml 1 ml 0,5 ml 1.44 g

um ein Gesamtvolumen von 7,5 ml zu erhalten

Die in Lösung gebrachte, zur Untersuchung gelan gendc Enzym-Zubereitung wurde zunächst bis auf einer Gehalt von 1 bis 6 Isomerase-Einheiten je ml verdünnt.

Die enzymatische Isomerisierung wurde in der Weist durchgeführt, daß der Stammlösung in einer Menge vor 3 ml die Enzym-Zubereitung in einer Menge von 1 m zugesetzt wurde. Anschließend wurde 30 Minuten be 60⁰C inkubiert. Bei Beendigung der Inkubationszeil wurde eine Menge von 1 ml entnommen und durch Eintragen in 9 ml einer O.S-N-Perchlorsäure inaktiviert Die inaktivierte Lösung wurde dann auf ein Gesamtvo lumen von 250 ml verdünnt. Zum Vergleich wurde eir Blindversuch mit Glucose durchgeführt, bei dem 1 m der Enzym-Zubereitung bei Beginn der Inkubationszeil durch 1 ml Wasser ersetzt wurde.

Dann wurde der Gehalt an Ketosen durch eine Cystein-Schwefelsäure-Methode ermittelt Bei dieser Versuchen wurde eine Isomerase-Einheit als die Menge an Enzymaktivität definiert, die erforderlich ist, um eir Mikromol Laevulose je Minute unter den beschriebener Isomerisierungsbedingungen zu erzeugen.

F. Tabellarische Übersicht der Versuchsergebnisse Tabelle V

Wirkung von Glycin und Ammoniumnitrat auf die Bildung von Isomerase durch Streptomyces olivo chromogenes

Ammo	Glycin, g/100 m	0,1	I	0.2	4,1	4,7	73	7,4	03	0.4	7,6	0,5
niumnitrat,			I somerase- Ausbeute,	6,0	53	10,6	10,0		, Einheiten/ml	83
g/100 ml	0,0	3,0	83	83	9,6	93		4,2	83	83
		4,0	63	83	7,9	9,1	83	82	8,2
0,0	4,0	7,4	83	73	83	8,2	83	7,7
0,1	22	63	83	8,4	83	93	8,1	8.1
0,2	2,1	Zellgewicht, g/Liter,			83	auf	83
03	13	Trockenbasis		83		7,1
0,4	6,4	bezogen	10,0
0,5	7,0		93
	5,1	9,1	93	103
	5,1	9.6	10,4	10,1
0,0	43	93	103	9,8
0,1	3,1	10,1	10,0	113
0,2	9,4		10,4
03	93		103
0,4
03

Foitsct/.iiim

Ammo	Glycir	ι, g/100 ml	0,2	570	630	0,3	0,4	760	0.5 _s
niumnitrat,			Aktivität,	570	640		Einheiten/g	900	ZeII-
g/100 ml	0.0	0,1	material, bezogen auf'	890	940		TYockenbasis	860
	Spezifische	470	840	970	490	790	820
		610	940	1030	860	810	810 "·
0,0	880	760	1000	830	810	790
0,1	430		960		710
0,2	470		940		830
0,3	420	870	700
0,4
0,5

G. Graphische Darstellung der Ergebnisse

Der besseren Übersicht und des leichteren Verstandnisses wegen wurden die Ergebnisse der Tabelle V in den Abbildungen graphisch dargestellt.

In F i g. 1 kennzeichnet jede eingezeichnete Linie eine konstante Zusatzmenge an Ammoniumnitrat. Jeder eingezeichnete Punkt entlang der Linie des Ansatzes A gibt die jeweilige Konzentration des zugesetzten Ammoniumnitrats an. Jeder eingezeichnete Punkt entlang jeder anderen Linie gibt die Glycin-Konzentration an, die in dem Kulturmedium enthalten war.

So gibt beispielsweise die eingezeichnete Linie des jo Ansatzes A sechs verschiedene Mengen an zugesetztem Ammoniumnitrat wieder, angefangen mit 0 und endend mit 0,5 g je 100 ml des Kulturmediums, ohne daß überhaupt Glycin zugesetzt wurde. Die eingezeichnete Linie des Ansatzes B gibt die Wirkung des Zusatzes j-, verschiedener Mengen Glycin wieder, ohne daß gleichzeitig Ammoniumnitrat zugesetzt wurde. Die eingezeichneten Linien der Ansätze C bis G zeigen die Wirkung verschiedener Mengen Ammoniumnitrat bei verschiedenen Zusatzmengen Glycin.

Wie die in F i g. 1 eingezeichneten Linien erkennen lassen, übt der Zusatz von Ammoniumnitrat allein bis zu einer Konzentration von etwa 0,2 g Ammoniumnitrat je 100 ml Kulturmedium eine leicht stimulierende Wirkung auf die Erzeugung von Isomerase aus. Oberhalb dieser Menge scheint der Ammoniumnitratzusatz die Erzeugung des Enzyms zu vermindern.

Andererseits scheint der Zusatz von Glycin bei allen Mengen, über die F i g. 1 berichtet, die Enzymerzeugung zu vermehren.

Die Kombination von Ammoniumnitrat und von Glycin wirkt sich in völlig unerwarteter Weise synergistisch aus, wie ebenfalls aus F i g. 1 hervorgeht.

Besonders hervorzuheben ist der wirtschaftliche Vorteil dieser synergistischen Wirkung, da sich durch den Zusatz von Ammoniumnitrat die Glycinmenge, die erforderlich ist, um eine bestimmte Vermehrung der Enzymproduktion zu erreichen, verringern läßt. Da Ammoniumnitrat wesentlich preiswerter als Glycin ist, besteht ein wesentlich stärkeres wirtschaftliches Interesse zur Verwendung der synergistischen Kombination als zur Verwendung von Glycin allein.

F i g. 2 ist eine graphische Darstellung der Wirkung des Zusatzes von Glycin und von Ammoniumnitrat auf das Wachstum der Mikroorganismen. Wie sich zeigt, übt der Zusatz von Ammoniumnitrat allein eine toxische Wirkung auf das Wachstum der Mikroorganismen aus, jedenfalls bei Konzentrationen über 0,1 g je 100 ml des Kulturmediums. Wie sich aus der eingezeichneten Linie des Ansatzes B ergibt, vermehrt der Zusatz von Glycin allein die Zellproduktion.

Der gleichzeitige Zusatz von Glycin und Ammoniumnitrat übt einen synergistischen Effekt auf die Zellproduktion aus, wie aus den eingezeichneten Linien der Ansätze C bis G zu ersehen ist. Der synergistische Effekt auf das Zellwachstum ist bei niedrigen Zusatzmengen des Salzes besonders deutlich, wenn gleichzeitig geringe Mengen der Aminosäure zugesetzt werden. Ein deutlich vermehrtes Zellwachstum kann gleichfalls durch Zusatz größerer Mengen von Glycin allein erreicht werden.

F i g. 3 ist eine graphische Darstellung der Wirkung der Zusätze auf die Einheiten an Isomerase-Enzym je Gramm Zellmaterial der Mikroorganismen, bezogen auf Trockenbasis. Diese Abbildung zeigt, daß nicht nur das Zellwachstum durch den Zusatz von Glycin und von Ammoniumnitrat stimuliert wird, sondern daß gleichzeitig die Fnzymproduktion in noch stärkerem Maße vermehrt wird. Dies ist eine wichtige und unerwartete Beobachtung von großer wirtschaftlicher Bedeutung.

Die Fig. 1 a, 2a und 3a entsprechen den F i g. 1,2 bzw. 3 und zeigen vereinfachte Schaubilder für die angegebenen Zusatzstoffkonzentrationen.

Ähnliche Ergebnisse werden erhalten, wenn als Mikroorganismus Streptomyces venezuelae ATCC 21113 verwendet wird.

Hierzu 6 Blatt Zeichnungen

Claims

Patentansprüche:

1. Verfahren zur Herstellung von Glucose-Isomerase, dadurch gekennzeichnet, daß man Zellen von Glucose-Isomerase erzeugenden Streptomyces- oder Bacillus-Mikroorganismen in einem Medium kultiviert, das eine oder mehrere zur Induktion der Glucose-Isomerase-Bildung geeignete Kohlenstoffquellen enthält und das außerdem, jeweils pro 100 ml Medium, 0,1 bis 0,5 g Glycin und bis zu 0,5 g Ammoniumnitrat zugesetzt enthält.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man Zellen von Str. olivochromogenes ATCC 2". 114 oder S. venezuelae ATCC 21113 einsetzt

3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß man als Kohlenstoffquelle ein Gemisch von 25 bis 75 Gew.-% Stärke und 75 bis 25 Gew.-% Xylose (bezogen auf das Gesamtgewicht dieser Stoffe) in einer Menge von 0,2 bis 10 g/100 ml Medium einsetzt.

4. Verfahren zur Herstellung von Glucose-Isomerase, dadurch gekennzeichnet, daß man ATCC 21114 in den im Beispiel 1 angegebenen Nährmedien, _>·-, denen kein Glycin zugesetzt worden ist, unter den dort angegebenen Bedingungen kultiviert.