DE2140417B2 - Behaelter und verfahren fuer die durchfuehrung einer 2-dimensionalen quantitativen immunelektrophorese - Google Patents

Description

Gegenstand der Erfindung ist ein Behälter zur Aufbewahrung von Trenngel neben Antikörpergel und ein Verfahren für die Durchführung einer zweidimensionalen quantitativen Immunelektrophorese.

Antigene sind bekanntlich Stoffe, meistens Proteine, die im Organismus die Bildung von Antikörpern bewirken. Bei der Reaktion von Antigenen mit Antikörpern fällt ein Niederschlag aus, das sogenannte Immumpräzipitat. Zur Bestimmung von Antigenen sind bereits Dosen aus durchsichtigem Material bekannt, deren Bodenplatte parallel zu ihren erhöhten Seiten in einen zur Aufnahme eines feuchten Schwamms dienenden Innenraum und einen Außenraum unterteilt ist, der mit einem Antiserum enthaltenden Träger beschichtet ist. Mit dieser Vorrichtung läßt sich unter Verwendung von spezifischen Antiseren jeweils immer nur eine spezielle Antigenbestimmung durchführen.

Für die quantitative Bestimmung von Proteinen, die in der klinischen Diagnostik eine große Rolle spielen, ist die in den letzten Jahren entwickelte quantitative Immunelektrophorese (zweidimensionale Immunelektrophorese) von zunehmender Bedeutung. Mit dieser Methode gelingt es, Antigene eines Antigengemisches, z. B. Serumproteine oder Proteine anderer Körperflüssigkeiten, in einer einzigen Analyse gleichzeitig nebeneinander quantitativ zu bestimmen, wobei auf die Verwendung von spezifischen Antiseren verzichtet werden kann. Die elektrophoretische Differenzierung des Antigengemisches erlaubt die Anwendung der leicht zugänglichen polyvalenten Antiseren.
Das Prinzip der quantitativen Immunelektrophorese besteht darin, daß die Proteine des Antigengemisches in einem ersten elektrophoretischen Schritt (1. Dimension) in Agar, Agarose oder einem anderen Trenngel aufgetrennt werden. In einem zweiten elektrophoretischen Schritt (2. Dimension) wandern die aufgetrennten Antigene in ein antikörperhaltiges Gel ein und gelangen dort zur Immunausfällung. Dabei entstehen Ausfällungsspitzen (Präzipitations-Peaks), deren Höhe der Antigenkonzentration proportional ist. Eine wesentliche Voraussetzung für die erfolgreiche Durchführung dieser Methode ist, daß keine Antikörper aus dem antikörperhaltigen Gel (2. Dimension) in das Trenngel der 1. Dimension eindiffun- λ dieren, da sonst schon während der ersten elektro- ™ phoretischen Auftrennung eine Immunausfällung

as stattfindet, die eine quantitative Auswertung unmöglich macht. Man hat dies bisher dadurch verhindert, daß man das antikörperhaltige Gel erst kurz vor dem zweiten elektrophoretischen Schritt an den Gelstreifen der ersten elektrophoretischen Auftrennung angießt.

Dieses bekannte Verfahren, zu dem noch die Bereitung des antikörperhaltigen Gels hinzukommt, ist kompliziert und für routinemäßige Untersuchungen nicht geeignet.

Gegenstand der Erfindung ist ein Behälter zur Aufbewahrung von Trenngel neben Antikörpergel für die Durchführung einer zweidimensionalen quantitativen Immunelektrophorese, bestehend aus einer durchsichtigen Form mit durchsichtigem Deckel, der dadurch gekennzeichnet ist, daß ein Deckel 1 das Unterteil der Form mit runder oder quadratischer Grundfläche dicht verschließt und das Unterteil 2 durch eine entfernbare Trennwand 3 in zwei ver- ^ schieden große Räume geteilt ist und der kleinere \ Raum das Trenngel und der größere das antikörperhaltige Gel enthält.

Gegenstand der Erfindung ist des weiteren ein Verfahren zur Bestimmung von Antigenen mittels Antiserum, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man nach Entfernung des Deckels von einem Behälter mit quadratischer oder runder Grundfläche, der durch eine Trennwand in einen kleineren und einen größeren Raum aufgeteilt ist, von denen der kleinere Trenngel und der größere Raum antikörperhaltiges Gel enthält, die Trennwand am Haltegriff aus dem Behälter zieht, eine Serumprobe in ein vorgebildetes Loch im Trenngel einfüllt, mittels Elektrolytbrücken eine Verbindung zum Elektrophoresepuffer in handelsüblichen Elektrophoresekammern herstellt, die elektrophoretische Auftrennung in bekannter Weise durchführt, dann den Spalt zwischen Trenngel und Antikörpergel im Behälter mit flüssigem Trenngel füllt, wieder mit Elektrolytbrücken eine Verbindung zum Puffer m der Elektrophoresekammer herstellt und nach Durchführung der zweiten Elektrophorese das gewünschte Immunpräzipitat erhält.

Der erfindungsgemäße Behälter ist etwa 10 X 10, vorzugsweise 5 X 5 cm groß und hat insbesondere

eine quadratische Form. Durch die entfernbare Trennwand wird er vorzugsweise in zwei nebeneinanderliegende Räume aufgeteilt.

Im Trenngel ist gemäß einem weiteren Merkmal der Erfindung vorzugsweise eine öffnung zum Einfüllen der Serumproben vorgesehen, insbesondere ein eingestanztes oder in anderer Weise hergestelltes Loch.

Der erfindungsgemäße Behälter erlaubt es, gebrauchsfertiges Trenngel (1. Dimension) und ge- ίο brauchsfertiges Antikörpergel (2. Dimension) nebeneinander für längere Zeit aufzubewahren, ohne daß eine Antikörperdiffusion von der zweiten in die erste Dimension stattfindet. In dem dicht schließenden Deckel der Form befindet sich vorzugsweise an der Innenseite ein Feuchtigkeitsschwamm.

Zur Herstellung des Behälters gemäß der Erfindung eignen sich die meisten bekannten durchsichtigen Behältermaterialien, insbesondere aber thermoplastische Kunststoffe, vorzugsweise Polyolefine wie Polyäthylen, Polypropylen und Polystyrol oder Polyvinylchlorid. Als Gele können alle Gele vorliegen, die in der Elektrophorese üblich sind, insbesondere Agarose und Antikörper-Agarose.

Die Erfindung wird nachstehend mit Bezug auf die Zeichnung erläutert, die eine beispielsweise Ausführungsform der Erfindung zeigt.

Fig. 1 zeigt einen Behälter gemäß der Erfindung mit einem Behälterdeckel 1;

F i g. 2 zeigt den unteren Teil 2 des Behälters mit dem Trennstück 3, das einen Haltegriff 4 hat;

F i g. 3 ist schließlich ein Schnitt durch das Unterteil 2 des Behälters, das die Gelschichten enthält und in der Trenngelschicht das Loch 5 ausgebildet hat.

Zur quantitativen Untersuchung einer Serumprobe zum Nachweis von Antigenen mit einem polyvalenten Antiserum unter Verwendung des erfindungsgemäßen Behälters geht man zweckmäßig wie folgt vor:

Nach Entfernung des Deckels 1 vom Unterteil 2 der Form entfernt man das Trennstück 3 mit dem Haltegriff 4 zwischen Trenngel und Antikörpergel. Man füllt die Serumprobe in das vorgestanzte oder auf andere Weise hergestellte Loch 5 im Trenngel und stellt die Verbindung zum Elektrophoresepuffer durch übliche Elektrolytbrücken, insbesondere Papierstreifen (nicht gezeigt), her. Nach Durchführung der elektrophoretischen Auftrennung verschließt man den beim Herausziehen der Trennwand entstandenen Spalt zwischen Trenngel und Antikörpergel mit flüssigem Trenngel. Über übliche Elektrolytbrücken wird dann die Verbindung zum Puffer hergestellt und die zweite Elektrophorese durchgeführt, die zum Ausfallen des Immunniederschlags führt. Nach 1 bis 25 Stunden ist das Ergebnis der Analyse zu beurteilen.

Der erfindungsgemäße Behälter läßt sich ohne Schwierigkeiten in die handelsüblichen Elektrophoresekammern einsetzen.

Hierzu 1 Blatt Zeichnungen COPY

Claims (4)

Patentansprüche:

1. Behälter zur Aufbewahrung von Trenngel neben Antikörpergel für die Durchführung einer zweidimensionalen quantitativen Immunelektrophorese, bestehend aus einer durchsichtigen Form mit durchsichtigem Deckel, dadurch gekennzeichnet, daß ein Deckel (1) das Unterteil (2) der Form mit runder oder vorzugsweise quadratischer Grundfläche dicht verschließt und das Unterteil (2) durch eine entfernbare Trennwand (3) in zwei verschieden große Räume geteilt ist und der kleinere Raum das Trenngel und der größere das antikörperhaltige Gel enthält.

2. Behälter nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß durch die Trennwand (3) nebeneinanderliegende Räume gebildet sind.

3. Behälter nach den Ansprüchen 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß im Trenngel eine Öffnung (5) zum Einfüllen der Serumprobe vorliegt.

4. Verfahren zur Bestimmung von Antigenen mittels Antisenim, dadurch gekennzeichnet, daß man nach Entfernung des Deckels von dem Behälter der Ansprüche 1 bis 3 die Trennwand am Haltegriff aus dem Behälter zieht, eine Serumprobe in ein vorgebildetes Loch im Trenngel einfüllt, mittels Elektrolytbrücken eine Verbindung zum Elektrophoresepuffer in der Elektrophoresekammer herstellt, die elektrophoretische Auftrennung hi bekannter Weise durchführt, dann den Spalt zwischen Trenngel und Antikörpergel im Behälter mit flüssigem Trenngel füllt, wieder mit Elektrolytbrücken eine Verbindung zum Puffer in der Elektrophoresekammer herstellt und nach Durchführung der zweiten Elektrophorese das gewünschte Immunpräzipitat erhält.