DE2107411A1

DE2107411A1 - Verfahren zur Herstellung von alpha Asparagmylrest enthaltenden Dipeptiden

Info

Publication number: DE2107411A1
Application number: DE19712107411
Authority: DE
Inventors: Peter Donald Ferring West Sussex Ralston Ashley Joseph Hove Sussex Roberts David Glyn Goring Green West Sussex McDonald, (Großbritannien)
Original assignee: Beecham Group Ltd , Brentford, Middlesex (Großbritannien)
Priority date: 1970-02-21
Filing date: 1971-02-16
Publication date: 1971-08-26
Also published as: FR2078640A5

Description

¹¹ Verfahren zur Herstellung von den oL -Asparaginylrest enthaltenden Dipeptiden " ■

Priorität: 21". Februar 1970, Nr. 8463/70, ßrossbritantiien

In der britischen-Patentschrift Nr.M 152 977 sind Dipeptid^ der allgemeinen Formel I . ■

■ H₀N - CH - CONH .- CH - iCOOH

CH_{2 T}^v

(D

CH₂COOH

beschrieben, in der H eine Alkylgrupjpe mit 1 bis 7 O-Atomtn : ' und B₁ ein Wasserstoffatoiu bedeutete Diese Dipeptide sind ausgezeichnete Süßstoffe. In der genannten Patentschrift wird dargelegt, dass die süssende Eigenschaft der Dipeptide auch von der stereochemischen Beschaffenheit der beiden Aminosäure- , Bausteine der Dipeptide, d.h. Asparaginsäure und Phenylalanin,

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INSPECTED

abhängt. Jede Aminosäure kann in der D- oder L-Porm vorliegen? es wurde aber festgestellt, dass die L-Asparaginyl-L-phenylalanylester süss sind, während die entsprechenden D-D-, • !D-L-und L-D-Isomeren nicht süss sind. Isomerengemische, die das L-L-Dipeptid, das heisst, DL-Asparaginyl-L-phenylalanyl-, L-Asparaginyl-DL-phenylalanyl- und DL-Asparaginyl-DI-phenylalanylester, enthalten, sind auch süss",

Iu der genannten Patentschrift ist auch ein Verfahren zur Herstellung der Dipeptide beschrieben, das etliche Stufen beinhaltet und toei dem teure Heagentien benötigt werden. Dieses Verfahren ißt deshalb zur Herstellung der Dipeptide in technischem Maßstab nicht vollkommen befriedigend.

In der belgischen Patentschrift Hr. 709 655 sind andere Pipepti4· der allgemeinen Formel I beschrieben, und es wird dirgelegt, dass diese Dipeptide Süßstoffe sind. Die in der genannten Patentschrift beschriebenen Verfahren zur Herstellung 4«r Dipeptide sind wegen der Zahl der benötigten"Reaktionssohritte auch nicht vollkommen befriedigend.

• ■ . ! j

Aufgabe der Erfindung war es daher, ein leues Verfahren zur Herstellung der Dipeptide der allgemeine* Formel I zur Verfügung zu stellen,j das bei der technischen! Herstellung der Dipeptide befriedigendere Ergebnisse liefert als die in den genannten Patentschriften beschriebenen Verfahren.Diese Aufgabe wird durch die Brfindung gelöst.

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Gegenstand der Erfindung ist somit ein Verfahren zur Herstel^ lung von den cc-Asparaginylrest enthaltenden Dipeptiden der allgemeinen Formel I

H₉N - CH - CONH - CH - COOR

I I xf—^-Ri (D

CH₂COOH CH₂

und deren Salzen mit Säuren oder Basen, wobei in der allgemeinen Formel I R eine Alkylgruppe mit 1 bis 7 C-Atomen und R₁ ein Wasserstoff- oder ein Halogenatom, eine Hydroxyl-/ eine . niedere Alkoxy- oder eine niedere Alkylgruppe bedeutet, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man einen oL -Aminosäureester der allgemeinen Formel II

äA

ROOC - CHNH₂ - CH₂--r^ ^λ ' (II)

in der R die oben angegebene und R^ die letztgenannte Bedeutung hat, mit einem eine Aminoschutzgruppe P enthaltenden Asparaginsäureanhydrid der allgemeinen Formel III ~

CH₂-

au einem Dipeptid der allgemeinen Formel IY P-NH-CH-CO-NH-CH- COOR

CH₂COOH

umsetzt, aus dem Dipeptid der allgemeinen Formel IV die Aminoschutzgruppe abepaltet, das so erhaltene Dipeptid der allge-

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meinen Formel I gegebenenfalls nach üblichen Methoden in dessen Salze mit Säuren oder Basen überführt und das Dipeptid

oder gegebenenfalls dessen Salze mit Säuren oder Basen isoliert.

In der vorliegenden Beschreibung und in den Beispielen bedeutet der Begriff "tX-Asparaginylrest" den Asparaginsäurerest der Formel V

H₉N - CH - CO - (V)

C.

CH₂-COOH

Das Verfahren der Erfindung wird vorzugsweise mit Ausgangsverbindungen durchgeführt, von denen mindestens eine vollständig in der L-Form vorliegt.

Das eine Aminoschutzgruppe enthaltende Asparaginsäure&nhydrid kann entweder durch Kondensation von Asparaginsäure mit einer eine Aminoschutzgruppe enthaltenden Verbindung und nachfolgende Wasserabspaltung "zum entsprechenden Asparaginsäureanhydrid oder durch praktisch gleichzeitige Kondensation und Wasserabspaltung hergestellt werden.

Da die Aminoschutzgruppe in einer spätei en Stufe des Verfahrens abgespalten wird, muss die Aminoschutzgruppa so beschaffen sein, dass sie unter Reaktionsbedingungen abgespalten werden kann, unter denen die übrigen Teile des Moleküls nicht verändert werden* So darf z.B. bei der Abspaltung der Aminoschutzgruppe kei ne Hydrolyse der Estergruppe R und keine durch Racemisierung bedingte Konfigurationsänderung an den optisch aktiven Zentren

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des Dipeptide eintreten. Solche Aininoschutzgruppen sind z.B. die in der Peptidchemie verwendeten Formyl-, Carbobenzoxy- und Triphenylmethylgruppen.

Eine bevorzugte Aminoschutzgruppe ist die.Pormy!gruppe, die durch Formylieren der Asparaginsäure in das Molekül eingeführt werden kann. Vorzugsweise wird Asparaginsäure mit Ameisensäure und Essigsäureanhydrid umgesetzt.

Eine weitere bevorzugte Aminoschutzgruppe ist die Carbobenzoxygruppe, die durch Umsetzung von Asparaginsäure mit Chlor- · ^ ameisensäurebenzylester in alkalischem Medium, im allgemeinen bei einem pH-Wert von 9,5 bis 10,0, in das Molekül eingeführt werden kann.

Das eine Aminoschutzgruppe enthaltende Asparagineäureanhydrid der allgemeinen Formel III wird im allgemeinen durch Umsetzung der eine Aminoschutzgruppe enthaltenden Asparaginsäure mit einer relativ milden wasserabepaltend wirkenden Verbindung, z.B. mit Essigsäureanhydrid, hergestellt. Als wasserabspaltend wirkende Verbindungen können auch andere Anhydride niederer i aliphatiBcher Carbonsäuren, Säurehalogenide oder Phosphoroxychlorid verwendet werden. Ferner kann das abzuspaltende Wasser durch azeotrope Destillation unter Verwendung von Benzol oder Toluol entfernt werden.

Vorzugsweise wird zur Herstellung des eine Aminoschutzgruppe P enthaltenden Asparaginsäureanhydrids der allgemeinen Formel III, in der P die Carbobenzoxygruppe bedeutet, N-Carbobenzoxyaspara-

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ginßäure in Essigsäureanhydrid aufgeschlämmt und umgesetzt. Diese Umsetzung kann bei Raumtemperatur oder bei Temperaturen unterhalb oder oberhalb der Raumtemperatur durchgeführt werden; es wurde jedoch gefunden, dasB die Ausbeute durch kurzzeitiges ' Erhitzen unter Rückfluss, z.B. während 30 Minuten, verbessert werden kann.

Das N-Formylasparäginsäureanhydrid kann erfindungsgemäss in einer Einetufenreaktion und mit überraschend hoher Ausbeute durch Umsetzung von Asparaginsäure mit einem Gemisch aus Ameisensäure und Essigsäureanhydrid hergestellt werden. Vorzugsweise wird Asparaginsäure in Abwesenheit eines weiteren Lösungsmittels in einem Gemisch aus Ameisensäure und EsBigsäureanhydrid aufgelöst. Die Umsetzung kann jedoch auch in Gegenwart eines weiteren Lösungsmittels, z.B. Chloroform, Dimethylsulfoxid oder Tetrahydrofuran, durchgeführt werden. N-Forroylasparagin-Bäureanhydrid ist eine neue.Verbindung.

Der im Verfahren der Erfindung eingesetzte <*—Aminosäureester der allgemeinen Formel II ist ein Alkylester des Phenylalanine

oder ein

oder eines substituierten Phenylalanine, wie Tyrosin,/Tyrosinäther, 4—Chlorphenylalanin oder ,4-Methylphenylalanin. Die genannten Alkylester können durch Umsetzung der entsprechenden oC-Aminosäure mit einsm aliphatischen Alkohol mit 1 bis 7 C-Atomen hergestellt werden.

Im Verfahren der Erfindung v/erden vorzugsweise die Meth>lester der entsprechenden c?C-Aminosäuren und insbesondere L-PhenylalaninmethyleBter verwendet.

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Di.e Umsetzung des eine Aminosehutzgruppe enthaltenden Aspara-· ginsäureanhydrids mit dem Phenylalaninester oder dem Ester .' " eines substituierten Phenylalanine der allgemeinen Formel II wird im allgemeinen in einem Ester als Lösr-igsmittel, z.B. in Essigsäureäthylester, durchgeführt. Es wurde gefunden, dass die bei der Umsetzung erhaltene hohe Ausbeute des denoc-Asparaginylrest enthaltenden Dipeptide durch Verwendung eines Esters, z.B. Essigsäureäthylester, als Lösungsmittel noch erhöht werden kann. Es ist überraschend, dass bei der beschriebenen Umsetzung vor allem das den oc-Asparaginylrest enthaltende Dipeptid und nur in untergeordnetem Mass das den ß-Asparaginylrect enthaltende Dipeptid entsteht.

Die Aminoschutzgruppe kann durch verschiedene Reaktionen abgespalten werden. Vorzugsweise werden zur Abspaltung der Aminoschutzgruppe solche Reaktionsbedingungen gewählt, unter denen andere Teile des Moleküls nicht angegriffen werden. So kann die C&rbobenzoxyschutzgruppe durch Hydrierung, vorzugsweise, durch katalytische Hydrierung, z.B.. unter Verwendung eines 5 Prozent Palladium auf Aktivkohle enthaltenden Katalysators, abgespalten werden. Die Formylschutzgruppe kann durch Hydrolyse abgespalten werden. Vorzugsweise wird die Hydrolyse unter relativ schonenden Bedingungen durchgeführt, damit die Estergruppe nicht angegriffen wird. Die Hydrolyse der Pox'mylschutzgruppe wird im allgemeinen in einer Lösung einer Mineralsäure in einem organischen Lösungsmittel durchgeführt. Als Lösungsmittel werden vorzugsweise Alkohole und insbesondere der Alkohol verwendet, dessen Alkylrest dem Alkylresc der Estergruppe entspricht. So kann z.B. die Formy!schutzgruppe des N-Formyl-

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COPY

asparaginyl-phenylalanylmethylesters durch Hydrolyse in einer Lösung von Chlorwasserstoff in Methanol abgespalten werden. Die Formylschutzgruppe kann auch durch Oxydation, z.B. durch Erhitzen in einer Wasserstoffperoxydlösung, abgespalten werden. Im allgemeinen wird eine verdünnte, wässrige Wasserstoffperoxydlösung mit einem Gehalt von ζ·Β· unter 25 i° und -vorzugsweise unter 10 $> verwendet. Die Abspaltung der Formylschutzgruppe kann bei Raumtemperatur oder bei Temperaturen unterhalb oder oberhalb der Raumtemperatur durchgeführt werden. Um die Abspaltung der Formylschutzgruppe zu erleichtern, wird vorzugsweise z.B. in Gegenwart eines platinhaltigen Asbestkatalysators gearbeitet.

Der erhaltene Dipeptidester kann entweder als solche^ als Salz einer Säure, z.B. als Hydrochlorid, oder als Salz einer Base, z.B. als Natriumsälz, isoliert werden. Salze mit Basen, z.B. Alkalimetallsalze, können durch Umsetzung des Dipeptidesters mit einer entsprechenden Base hergestellt werden. Der freie Dipeptidester kann mit Hilfe eines Entionisierungsverfahrens hergestellt werden. Salze mit Säuren können durch Umsetzung des Dipeptidesters mit einer entsprechenden Säure hergestellt *.'/_;%r'len.

Die "bei der Umsetzung von N-Formyl-asparaginsäureanhydrid mit einem <% -Äal^icuäu:. »ester der allgemeinen Formel II entstehenden Allylester von IT-Forrayl-oC-s-sparaginyl-Dipeptiden der allgemeinen Formel VI

(VI) 109835/1652

in·der R und R. die oben angegebene Bedeutung haben, sind neue Verbindungen. Ihre Salze mit Säuren können nach üblichen Methoden hergestellt werden. Die Verbindungen der allgemeinen Formel VI sind Zwischenprodukte zur Herstellung von °i— Asparaginyl-phenylalanylalkylestern, die als Süßstoffe verwendet werden.

Die Beispiele erläutern die Erfindung. Beispiel 1

Herstellung von L- oi-Asparaginyl-L-phenylalanylmethylester unter Verwendung von N-Carboben^oxy-L-asparaginsäureanhydrid

Stufe 1: Herstellung von N-Oarbobenzoxy-Ir-asparaginsäure

Es wird in Anlehnung an ein von Swallow et al., J. Biochem., Band 70 (1958), S. 359 beschriebenes Verfahren gearbeitet.

20 g (0,15 Mol) Asparaginsäure werden in einem Gemisch aus 80 ml Wasser und 10 ml Äther gerührt und mit 80 ml lOprozentiger Natronlauge versetzt. Der pH-Wert des Gemisches beträgt i 9,5 bis 10,0. Das Gemisch wird unter lieftigern Rühren innerhalb -von 30 Minuten mit 25 ml (0,16 Mol) Chlorameisensäurebenzylester versetzt, wobei der pH-Wert durch Zugabe von insgesamt 30 ml lOprozentiger Natronlauge auf 9»5 bis 10,0 gehalten wird. Wenn sich der .pH-Wert nach etwa 2 Stunden nicht mehr ändert, ist die Umsetzung vollständig abgelaufen. Die Ätherschicht v/ird abgetrennt, und die wässrige Phase wird zweimal mit 60 ml Äther gewaschen. Die wässrige Phase wird mit 15 ml konzentrierter Salzsäure vorsetzt. Der pH-Wert be-

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trägt 0,5 "bis 1,0· Beim Abkühlen des Gemisches tritt Kristallisation ein. Die ausgefallenen Kristalle v/erden abfiltriert, mit Wasser gewaschen und bei 40 C getrocknet. Die Ausbeute beträgt 30 g (75 $>) · Die Verbindung hat einen Pp. von 113 bis 114 °C

"Stufe 2: Herstellung von N-Carbobenzoxy-L-asparaginsäureanhydrid

20 g (0,075 Mol) N-Carbobenzoxy-L-asparaginsäure werden in 18,9 ml (0,2 Mol) Essigsäureanhydrid aufgeschlämmt. Das Gemisch wird 30 Minuten unter Rückfluss erhitzt, wobei die Temperatur 50 ⁰G nicht übersteigen soll. Das Gemisch wird 30 Minuten gekühlt und anschliessend zur Ausfällung des IT-Carbobenzoxy-L-asparaginsäureanhydrids mit 80 ml eines Gemisches aus 1 Volumenteil Ä'ther und 3 Volumenteilen Petroläther mit einem Siedebereich von 40 bis 60 ⁰C versetzt. Die Ausbeute beträgt 13 g (70 °/o). Die Verbindung hat einen Fp. von 109 bis 110 ⁰C

Stufe 3: Herstellung von N-Carboberi5oxy-L-v£~asparaginyl-L-phenylalany!methylester

Eine Lösung von 3 g (0,0!2 Mol) H-Carbobeazoxy-L-asparaginsäureanhydrid in 30 ml Eesigsaureathyl^ter wird mit einer Lösung von 2,5 g (0,012 Mol) L-Phc.ny lalan I ame thylesterhydrochlorid in.60 ml Es&igaäureäihyliäte" vermischt. Das Gemisch wird über wasserfreiem tfatriuuurui £":■■:· getrocknet. Mach erfolgter Trookimg wird das ilatrxi-; .~ul C--1 ;:bf iltriert, Tas Gemisch wird 'lach 15sinir,cii.g.;Ui Otc-iicr. t'fi. ^ι> ⁰C mit verdünnter jä^!ii4-t «tid ^fchrmalc ei it j ο u> ,.ι einer In iiatri-

umcarbonatlösung extrahiert. Die Natriumcarbonat-haltigen Extrakte werden auf pH 1 bis 2 angesäuert, wobei ein Öl erhalten wird. Wenn dieses Öl beim Ansäuern der Katriumcarbonathaltigen Extrakte ausbleibt, ist die Extraktion vollständig. Der erste llatriumcarbcnat-haltige Extrakt wird verworfen, weil darin der Hauptteil des li-Cartobenzoxy-L-ß-acparaginyl-L-phenylalanylmethylesters und der nicht umgesetzten N-Carbobenzoxy-L-asparaginsäure enthalten ist. Die anderen liatrium-

dan öl v.'ird

carbonat-haltigen Extrakte werden vereinigt und/aus Essigsäureäthylester/Wasser (I ; 1) umkristallisiert, wobei der N-Carbobenzoxy-L- <x -asparaginyl-L-phenylalanylmethylester durch Zu- J gäbe von Aceton ausgefällt wird. Die Ausbeute des <=c-Dipeptide beträgt 3 g (58 $).- Die Yerbindung hat einen Fp. von 110 bis 112 ⁰C

Stufe 4 j Herstellung von L-od-Asparaginyl-I-phenylalanylmethylester — .

2 g N-Carbobenzoxy-L-cC-asparinyl-L-phenylalanylmethylester f v/erden in 20 ml einer Methanol-V/asser-Mischung aufgelöst und in Gegenwart von 2 g eines 5 Prozent palladium auf Aktivkohle enthaltenden Katalysators hydriert . Der Katalysator wird anschliessend abfiltriert₅ und die Lösung wird unter vermindertem Druck zur Trockene eiiigedaaipft. Der feste Rückstand wird in Wasser aufgenommen unä lyophilisiert. Es werden 1,1 g (80 $) einer süSsehmeckenden Verbindung mit einem Pp. von 235 ⁰C (Zersetzung) erhalten. Bei der Chromatographie in den nach-

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folgend beschriebenen Systemen entsprechen die R~-Werte der erhaltenen Verbindung denen einer authentischen Probe von L- ei-Asparaginyl-L-phenylalanylmethylester (ot-Dipeptid).

Papierchromatographie t

Elutionsmittel
Butanol/Was s er/Es s igs äure (4:1:1)

R_f-Wert

oC-Dipeptid ß-DJpeptid

0,5

Blaufärbung mit Kinhydrin

Dünnschichtchromatographie: Elutionsmittel .

Butanol/Essigsäure/Wasser (4:1: 5)

EsBigBäureäthylester/Pyridin/ Wasser/Essigsäure (5:5:3:1)

0,4

0,71

Beispiel 2

Herstellung von L-&c-Aeparaginyl-L-phenylalany!methylester unter Verwendung von N-Pormyl-L-asparaginaäureanhydrid

■Stufe 1 : Herstellung von ff-JOrrnyl-L-asparaginsäureanhydrid

20 g (0,15 Mol) L(+ ^Asparaginsäure werden in einem Gemisch aus 315 ml 98prozentjger Ameisensäure und 120 ml Essigsäureanhydrid, gelöst. Nach zweistündigem Rühren wird die Lösung unter ■vermindertem Druck auf etwa 1/5 des ursprünglichen Volumeas .

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eingeengt. Die so erhaltene Lösung.wird mit 250 ml Äther verse.tzt. Der Niederschlag wird abfiltriert und getrocknet. In

91-prozentiger Ausbeute werden 197 g (0,138 Mol) N-Formyl-L-asparaginsäureanhydrid mit einem Fp. von 141 ⁰C erhalten. Das IR-Spektrum zeigt, dass die Verbindung eine Anhydridgruppe enthält.

G H N

- C₅H₅ITO₄ : berechnet: 41,90 3,50 9,79

gefunden: 42,2 3,48 9,73

• : j

Stufe 2 : Herstellung von N-Formyl-L-o^- -asparaginyl-L-phenylalanylmethylester

10g (0,046 Mol) Phenylalaninmethylester-hydrochlorid v/erden in 50 ml V/asser gelöst. Die Lösung wird mit 50 ml Methylen-Chlorid versetzt: Anschliessend wird das Gemisch mit 20 ml 1n Natronlauge bis zu einem pH-Wert von 8 angesäuert. Der Phenylalaninmethylester wird durch Extrahieren in die Methylenchlorid-Schicht überführt. Die wässrige Schicht wird mit 25 ml Methylenchlorid gewaschen. Die vereinigten Methylen- f chlorid-Extrakte werden'unter vermindertem Druck eingedampft. Das so erhaltene Öl wird in 100 ml Essig3äureäthylester gelöst. Diese Lösung wird mit 6,6 g (0,046 Mol) N-Förmyl-L-asparaginsäureanhydrid versetzt. Der nach kurzer Zeit ausfallende F-Formyl-L-oc-asparaginyl-L-phenylalanylmethylester wird abfiltriert und mit 50 ml Essigsäureäthylester gewaschen. Nach der Umkrißtallisatibn aus Essigsäureäthylester werden 13 g (87 $>) der genannten Verbindung mit einem Fp. von 123°C erhalten.

OHN

°15^18^N2°6 ^l berechnet ι .56,0 5,60 8,69 ·

gefunden» 56,00 5,71 8,58

109835/1652 I

Stufe 3 ϊ Herstellung von L-οέ -Asparagjnyl-L-pheriylalanylmethylester

13 g N-Formyl-L- -asparaginyl-L-phenylalanylmethylester v/erden zur hydrolytischen Abspaltung der Formylschutzgruppe in einem Gemisch aus 50 ml Wasser, 50 ml Methanol und 25 ml 1n Salzsäure gelöst. Nach 48 Stunden wird d.as Reaktionsprodukt entweder als Natriumsalz oder als fx-eies Dipeptid wie nachstehend beschrieben isoliert :

a) Natriumsalz 'des N-Formyl-L- e6--^asparaginyl-L-phenylalanylmethylesters

Die oben erhaltene Lösung wird mit zehnprozentiger Natronlauge auf pH 7,0 eingestellt. Die neutralisierte Lösung wird zur Trockene eingedampft, und der Rückstand wird in 25 ml Methanol aufgelöst. Diese Lösung wird mit 50 ml Äthariol versetzt. Der ausgefallene Niederschlag wird abfiltriert, und das Piltrat wird zur Trockene eingedampft. Der feste Rückstand v/ird in 40 ml Äthanol gelöst. Diese Lösung wird mit Ahter versetzt, und der ausgefallene Niederschlag wird isoliert. Es werden 11,0 g (85 $) des Natriumsaizes des L-^-Asparaginyl-L-phenylalanylmethylesters erhalten, der. durch Umkristallisation weiter gereinigt wird.

b) L-oC-Asparaginyl-L-phenylalany!methylester

Das oben beschriebene Hydrolysegemisch wird zum Entionisieren auf eine 25 ml-Säule eines schwachen Anionen- austauschers in der OH-Porm gegeben. Der Durchlauf wird aufge- _: fangen und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft.

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Der feste Rückstand wird in 50 ml Äthanol gelöst. Diese Lösung wird mit 250 ml Äther versetzt. Der ausgefallene Niederschlag wird isoliert. Es werden 4,0 g (31 $>) L-oc -Asparaginyl-L-phenylalanylmethylester erhalten.
Beispiel 3:

Herstellung von L-oo-As/mraginyl-L-phenylalanylmethylester unter Verwendung von H^Formyl-L-asparaginsäureanhydrid

Die Stufen 1- und 2 "is Beispiels 2 werden wiederholt. 50 g N-i¹ormyl-L-oc.~&3paraginyl»L-phenylalan:^T].;;thylester werden 1 bei einer Temperatur ύοω. 35 ⁰C in 220 ml 6proze^.tigem Wasserstoffperoxid gelöst. Diese lösung wird 4 ϊ-^ge bei 35 ⁰C gehalten. Anschlieesenü wivd die Lösung 2 Stunden mit 0,2 g eines platinhaltigen Asbestkatalyse.tors gerührt Dx Katalysator wird abfiltriert, und cu-s FiI'.rar. -vir ·\ viermal m.-. ο je" 75 ml Essigsäureäthylester gewu-ο;ι«.α. Die #£ϊ· ge lsi \-λ -ig · ird unter vermindertem Druck su~? Trockene -sii .^vdampft. Jer .feste Rückstand wird bei 70"⁰G in j?I mi^- Methanol v^rg. .It' «j Äthanol gelöst. Nach dem Abkühlen wird die Lösung bei beginnender Kristallisation mit 500 ml Äther versetzt. Der feste Rückstand " wird abfiltriert, gewaschen.und getrocknet. Es werden 14,9 g 4* i

(32,6 #) L-oC-AsTDaraginyl-L-phenylalanylmethylester erhalten. ⁴T

■ ^:-- ■ .t:

Beispiel 4 - " '_sr

■ I

Herstellung von L-cxi-Asparaginyl-L-phenylalanylmethylester ^A

unter Verwendung von N-Forrnyl-L-asparaginsäureanhydrid

Die Stufen 1 und 2 des Beispiels 2 werden wiederholt.' 20 g N-Pormyl-L-oC-asparaginyl-L-phenylalanylmethyleBter werden

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in einem Gemisch aus 100 ml Wasser, 100 ml Methanol und 5 ml leonzentrierter Salzsäure gelöst. Diese Lösung v/ird zur hydrolytischen Abspaltung der Pormylschutzgruppe 4 Stunden bei 40°C gehalten. Anschliessend wird die Lösung auf eine einen schwachen Anionenaustauscher in der 0H-Form enthaltende Säule gegeben. Der Durchlauf wird so eingestellt, dass das pro Stunde durchgelaufene Volumen dem' 8fachen Bettvolumen entspricht. Der Anionenaustauscher wird mit dem 2fachen Bettvolumen eines Methanol-Wasser-Gemisches (4:1) gewaschen. Der Durchlauf der ursprünglichen Lösung und der beim Waschen erhaltene Durchlauf werden vereinigt und unter vermindertem Druck zur Trockene eingedampft. Der feste Rückstand wird bei 63 ⁰C in 50 ml Isopropylmethylsulfoxid gelöst. Nach dem Abkühlen wird die Lösung bei beginnender Kristallisation mit 250 ml Diäthyläther versetzt. Die Kristalle werden abfiltriert, gewaschen und getrocknet. Es werden 12,4 g (67,7 #) L-oc-Asparaginyl-L-phenylalanylmethylester erhalten.

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Claims

Patentansprüche ·:

1. j Verfahren zur Herstellung von den o£-Asparaginylrest enthaltenden Dipeptiden der allgemeinen Formel I

CH - CONH - CH - COOR ' (j) CH₂COOH · CH₂ ^ ^

und deren Salzen mit Säuren oder Basen, wobei in der all- * gemeinen Formel I -\ eine Alkylgruppe mit 1 bis 7 C-Atomen ·. und R₁ ein Wasserstoff- oder ein Halogenatom, eine Hydroxyl-, eine niedere Alkoxy- oder eine niedere Alkylgruppe

bedeutet, dadurch gekennzeichnet, daß man einen <*-Aminosäureester der allgemeinen Formel II ■ .

ROOC - CHNH₀ -

2 c. y^jj

■ (H)

in dei' R die oben angegebene und R.. die letztgenannte Bedeutung hat, mit einem eine Aminoschutzgiuppe P enthaltenden Asparaginsäureanhydrid der allgemeinen Formel III

P-WH-CH-CO

I >

CH₂-

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(III)

zu einem Dipeptid der allgemeinen Formel IV

(IV)

P-NH-CH-CO-NH-CH- COOK

CH₂COOH

umsetzt, aus dem Dipeptid der allgemeinen Formel IV die Aminoschutzgruppe abspaltet, das so erhaltene Dipeptid der allgemeinen Formel I gegebenenfalls nach üblichen Methoden in dessen Salze mit Säuren oder Basen überführt und das Dipeptid . oder gegebenenfalls dessen Salze mit Säuren oder Baser isoliert.

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man die Umsetzung mit Ausgangsverbindungen durchführt, von denen mindestens eine vollständig in der L-Form vorliegt. ' .-. ■

3· Verfahren nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, dass man die Umsetzung mit einem Asparaginsäureanhydrid der allgemeinen Formel III durchführt, in der P eine Formylgruppe bedeutet.

4· Verfahren nach Anspruch 1 feis 3, dadurch gekennzeichnet, dass man die Umsetzung in einem Ester alß Lösungsmittel durchführt.

5. Verfahren nach Anspruch 3 und 4, dadurch gekennzeichnet, dass man die Formylgruppe oxidativ, vorzugsweise unter Verwendung eines Peroxids, oder hydrolytisch abspaltet.

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. -19-

6. N-Formylasparaginsäureanhydrid.

7· Verfahren zur Herstellung von li-r-Formylasparaginsäureanhydrid, dadurch gekennzeichnet, dass man Asparaginsäure mit einem Gemisch aus Ameisensäure und Essigsäureanhydrid umsetzt und das entstandene N-Formylasparaginsäureanhydrid nach üblichen Methoden .isoliert.

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