DE2105418B2

DE2105418B2 - Alkylendiaminsalze der p-Chlorphenoxyisobuttersäure, ihre Herstellung und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel

Info

Publication number: DE2105418B2
Application number: DE19712105418
Authority: DE
Inventors: G Delmar; A Foldes
Original assignee: Delmar Chemicals Inc
Current assignee: Delmar Chemicals Inc
Priority date: 1970-02-06
Filing date: 1971-02-05
Publication date: 1975-04-24
Also published as: NO130943C; DE2105418A1; JPS5118484B1; FR2081494A1; NO130943B; CH540214A; CA957373A; FR2081494B1; DE2105418C3; SE375756B; GB1336632A

Description

Die Erfindung betrifft Alkylendiaminsalze der p-Chlorphenoxyisobuttersäure, ihre Herstellung und diese Verbindungen enthaltende Arzneimittel.

p-Chlorphenoxyisobuttersäure mit der Formel

Cl

O —C—COOH

CH₃

40

und deren Alkali- und Erdalkalisalze sowie deren Ester, wie Äthyl-4-chlor-2-ph^f;noxyisobutyrat (üblich als »Clofibrat« bezeichnet) reduzieren bekanntlich die Cholesterinkonzentration im Blutserum.

Auch verschiedene Aminsalze, z. B. das Dimethylaminoäthanolsalz und das Äthanolaminsalz der p-Chlorphenoxyisobuttersäure und deren cholesterinspiegelsenkende Eigenschaften sind schon bekannt (vgl. Chemical Abstracts, Bd. 72, 1970, 11 204 g und Chemical Abstracts, Bd. 72, 1970, 88 979h).

Cl

CH₃

O — C — COO CH₁

(II)

Aus der OE-PS 2 57 580 und der FR-PS 7 451 (M) sind weiterhin Aminsalze von weiteren Säuren und ihre einschlägige pharmakologische Wirkung bekannt.

Von den Verbindungen der p-Chlorphenoxybuttersäure sind bereits einige Verbindungen, insbesondere das Clofibrat, zur Behandlung von Erscheinungsbildern, wie Coronararterienerkxankungen und Arteriosklerose verwendet worden.

Diese Verbindungen, auch die derzeit am besten bekannte Verbindung, nämlich das »Clofibrat«, werden normalerweise in Form von ölen erhalten. So ist beispielsweise das »Clofibmt« ein farbloses bis leichtgelbes öl, das einen Siedepunkt von 148 bis 150 C 20 Torr besitzt. Methyl-4-chlor-2-phepoxyisobutyrat ist ein öl mit einem Siedepunkt von 148 bis 150 C, 20 Torr,n-Propyl-4-chlor-2-phenoxy-isobutyrat ist ein öl mit einem Siedepunkt von 167 bis 169°C/15 Torr und n-Butyl^-chlor^-phenoxyisobutyrat ist schließlich ein öl mit einem Siedepunkt von 178 bis 182C 15 Torr. Daher sind diese Verbindungen schlecht zu handhaben und müssen gewöhnlicherweise oral in der Form von Emulsionen oder Kapseln verabreicht werden. Diese perorale Verabreichung solcher Verbindungen ist nicht nur weniger angenehm als die Verabreichung von festen Zubereitungsformen, wie Tabletten, sondern es hat sich auch herausgestellt, daß damit gastro-intestinale Beschwerden, z. B. Diarrhöen und Reizungen der Schleimhaut des Verdauungstraktes, verbunden sind.

Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, Verbindungen der p-Chlorphenoxybuttersäure zur Verfugung zu stellen, welche bessere therapeutische Eigenschaften, insbesondere hinsichtlich der cholesterinspiegelsenkenden Wirkung zeigen, als die bereits bekannten Verbindungen. Diese Verbindungen sollen auch in kristalliner, pulverförmiger Form anfallen und somit leichter zu handhaben sein, als die bislang bekannten flüssigen (öligen) Derivate.

Gegenstand der Erfindung sind daher Alkylendiaminsalze der p-Chlorphenoxyisobuttersäure der allgemeinen Formel

H H

I I

Η — Ν—Χ — Ν — Η
H II

worin X eine niedrige Alkylengruppe bedeutet.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung dieser Alkylendiaminsalze der p-Chlcrphenoxyisobuttersäure, das dadurch gekennzeichnet ist, daß man das Alkylendiamin und die freie p-Chlorphenoxyisobuttersäure in an sich bekannter Weise miteinander umsetzt und das Salz aus dem Reaklionsmedium gewinnt.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist schließlich ein Mittel zur Reduzierung des Cholesteringehalts im Blutserum, das durch den Gehalt wenigstens eines dieser Alkylendiaminsalze der p-Chlorphenoxyiso-

buttersäure neben einem pharmazeutisch verträglichen, nichttoxischen Träger gekennzeichnet ist.

Bevorzugte Alkylendiaminsalze gemäß der oben angegebenen Formel sind diejenigen, die sich von unsubstituierten geradkettigen niedrigen Alkylendiaminen ableiten, z. B. von Äthylendiamia, 1,2-Propandiamin, 1,3-Propandiamin, 1,4-Butandiamin, 1,5-Pentandiamin, 1,6 - Hexamethylendiamin, η - Methyl-1,3-propandiamin und l,2-Diamino-2-methyipropan. Bei der Umsetzung mit 2 Moläquivalenten der freien Säure werden unter geeigneten Bedingungen das Äthylendiaminsalz, das 1,2-Propandiaminsalz, das 1,3-Propandiaminsalz, das 1,4-Butandiaminsalz, das 1,5-Pentandiaminfalz, das 1,6-Hexamethylendiaminsalz, das n-Methyl-l,3-propandiaminsaIz und das l,2-Diamino-2-methy!propansalz der p-Chlorphenoxyisobuttersäure erhalten.

Bei der Durchführung des erfindungsg^mäßen Verfahrens zur Herstellung der Aminsalze werden das jeweilige Amin und die freie p-Chlorphenoxyisobuttcr säure in einer gemeinsamen Lösung miteinander umgesetzt. Zweckmäßigerweise wird als Lösungsmittel ein nichtpolares, organisches Lösungsmittel verwendet, in welchem beide Ausgangsstoffe leicht löslich sind. Das organische Lösungsmittel der Wahl ist Benzol, obgleich auch andere geeignete Lösungsmittel verwendet werden können, wie Chloroform, Toluol und Diäthyläther.

Die Reaktion erfolgt vorzugsweise unterhalb Raumtemperatur, wobei im Bereich von 10 bis 15° C die glatteste Umsetzung und die höchste Ausbeute der gewünschten Alkylendiaminsalze erhalten werden können. Naturgemäß kann auch bei etwas niedrigeren oder höheren Temperaturen gearbeitet werden, obgleich Temperaturen oberhalb Raumtemperatur die Bildung kautschukartiger Nebenprodukte begünstigen und die Ausbeulen erniedrigen, so daß sie am besten vermieden werden sollen.

Die so erhaltenen Alkylendiaminsalze fallen in üblicher Weise aus dem Reaktionsmedium aus. Sie werden auf herkömmliche Weise, z. B. durch Filtration, abgetrennt und erforderlichenfalls aus einem organischen Lösungsmittel umkristallisiert, wodurch im wesentlichen das reine Alkylendiaminsalz erhalten wird, das in der Form eines feinen kristallinen Pulvers vorliegt.

Die Erfindung wird in den Beispielen erläutert. Die Schmelzpunkte wurden in Kapillarröhrchen bestimmt.

Beispiel 1
Äthylendiaminsalz

1 g (0,0166 Mol) Äthylendiamin in 5 ml trockenem Benzol wurden zu einer gerührten Lösung gegeben, die in 135 ml trockenem Benzol in einem Erlenmeyerkolben 7,1 g (0,033 Mol) p-Chlorphenoxyisobuttersäure enthielt. Das Gemisch wurde in einem Eisbad auf etwa 10⁰C abgekühlt, über einen Zeitraum von 2 Stunden wurde eine Temperatur von 10 bis 15" C aufrechterhalten, wobei das Gemisch kontinuierlich gerührt wurde. Das Äthylendiaminsalz der p-Chlorphenoxyisobuttersäure, das ausfiel, wurde abnltriert, mit trockenem Benzol gewaschen und bei 50° C in einem Vakuumexsikkator getrocknet. Das Material wurde aus Methanol-Äther umkristallisicrt, wodurch 6,8 g des oben bezeichneten Produkts mit einem Schmelzpunkt von 187 bis 192°C und einer Ausbeute von 82.9% erhalten wurden. Das Produkt lag in Form eines weißen, fast geruchlosen, kristallinen Pulvers vor.

Analyse für C₂₂H₃₀N₂O₆Cl₂:

Berechnet ... C 53,99, H 6,17, N 5,72%;
gefunden .... C 54,14, H 6,05, N 5,64%.

Infrarot-Spektrum

Das Infrarot-Spektrum dieser Verbindung ist in den ίο F i g. 1 a und 1 b dargestellt.

Beispiel 2

Hexamethylendiaminsalz

ig (0,008 Mol) Hexamethylendiamin wurde
einer gerührten Lösung gegeben, die 3,64 g (0,016 Mol) p-Chlorphenoxyisobuttersäure in 70 ml trockenem Benzo! enthielt. Das Gemisch wurde in einem Eisbad auf etwa 10⁰C abgekühlt, über einen Zeitraum von 2 Stunden wurde eine Temperatur von 10 bis 15° C beibehalten, wobei kontinuierlich gerührt wurde. Das Hexamethylendiaminsalz der p-Chlorphenoxyisobuttersäure, das ausfiel, wurde abfiltriert, mit trockenem Benzol gewaschen und bei 50⁰C in einem Vakuum-

Ϊ5 exsikkator getrocknet. Dieses Material wurde aus Methylalkohol umkristallisiert, wodurch 4,0 g des oben bezeichneten Produkts mit einem Schmelzpunkt von 221 bis 225° C in einer Ausbeute von 86,2% erhalten wurden. Das Produkt lag in Form eines weißen, fast geruchlosen, kristallinen Pulvers vor.

Analyse für C₂₆H₃₈N₂O₆Cl₂:

Berechnet ... C 57,27, H 7,07, N 5,13%;
gefunden .... C 57,14, H 6,87, N 5,27%.

Infrarot-Spektrum

Das Infrarot-Spektrum dieser Verbindung ist in den Fig. 2 a und 2 b dargestellt.

Nachstehend werden zwei Beispiele für geeignete Tablettenformulierungen gegeben:

Beispiel A
Formulierung

Bestandteile

Äthylendiaminsalz der p-Chlorphenoxyisobuttersäure

Lactose

Stärke

Dextrin (20%ige Lösung)

Stearinsäure

Magnesiumstearat

Gehalt

175 g
502,25 g
122 g
q. s. '
3,5 g
1,75 g

Herstel Iungsweise

Das Aminsalz, die Laktose und die Stärke werder getrocknet und durch ein Sieb mit einer Maschenweiti von 420 μ passiert. Das Gemisch wird dann mit dei 20%igen Dextrinlösung granuliert, mit einer Maschen weite von 700 μ. gesiebt, über Nacht bei Raumtempe ratur an der Luft getrocknet und erneut mit einei Maschenweite von 700 μ gesiebt. Das getrocknet!

Granulat wird gründlich mit der Stearinsäure unc dem Magnesiumstearat als Schmiermittel vermisch und hiernach zu 230 mg gekerbten Tabletten (di<

jeweils 50 mg des Aminsalzes enthalten) auf einer geiigneten Tablettenpresse gepreßt.

Die Alkylendiaminsalze der Erfindung haben wertvolle therapeutische Eigenschaften zur Reduzierung des Cholesteringehalts im Blutstrom. Die therapeutisehen Eigenschaften wurden gemäß den nachstehenden Versuchsberichten nach den pharmakologischen Standardtestmethoden ermittelt.

Versuchsbericht I

Vergleich des Älhylendiaminsalzes der p-Chlorphcn-

oxyisobuttersäure gemäß der vorliegenden Erfindung

mit dem 2-Dimethylaminoäthanolsalz von p-Chlor-

phenoxyisobuttersäure

Es wurden die Aktivitäten dieser Verbindungen zur Reduzierung des Cholesterin- und Triglyceridspiegels bei Ratten bestimmt.

Hierzu wurden 80 männliche junge Ratten vom Wistar-Stamm einer Standard-P. E.R.-Caseinkontrolldiät unterworfen. Die Zusammensetzung der Diät ist in Tabelle 1 zusammengestellt.

Tabelle 1 Zusammensetzung der Grunddiät

Bestandteile

Casein

Weizenstärke

Maisöl

Cellulose

Salzgemisch

Vitamingemisch

11,04

68,96

10,00

5,00

4,00

1,00

100,00

6,624

41,376

6,000

3,000

2,400

0,600

60,000

Nach einer Vorperiode von 5 Tagen wurden sämtliche Ratten gewogen und auf Grund des Körpergewichts in Behandlungsgruppen aufgeteilt, wobei jede Behandlungsgruppe Ratten mit ähnlichem Gewicht und Gesamtgewicht enthielt.

In Tabelle 2 ist das statistische Schema angegeben. Die Tabelle 3 zeigt das Anfangsgewicht der Ratten.

Tabelle Statistisches Schema

Behandlung	A	B
1. Kontrolle 2.1 2-Dimethylaminoätha- 3.1 nolsalz der p-Chlorphen- 4.J oxyisobuttersäure 5.1 Äthylendiaminsalz 6.1 der p-Chlorphenoxy- 7.J isobuttersäure	24 1 21 3 23 2 22	5 27 7 25 8 28 6

Wiederholungen

30 10

32 12

29 11 31 13
36
15
33
14
35
16

E	F
40	63
17	41
37	61
19	43
39	64
18	42
38	62

45
66
47
65
46
68
48

H	I
72	55
51	73
69	53
49	75
71	56
52	76
70	54

77 57 80 59 79 60 78

Tabelle

Behandlung

Kontrolle

2.1 2-Dimethylaminoätha-

3. [ nolsalz der p-Chlor-

4. J phenoxyisobuttersäure
5.1 Äthylendiaminsalz

6. [ der p-Chlorphenoxy-7.J isobuttersäure
*) Wiederholung.

Anfangsgewicht (g)

54,6 52,7 52,5 51,7 51,4 51,6 51,3

B	C
51,0	49.5
51,0	49,6
50.5	49.6
50,4	49,1
50,4	48.9
50,2	48,7
50,1	48.9

D	E
48.8	47.1
48,2	47,1
48,2	47,3
48,2	46.4
48,0	46,4
47,9	46,0
47,5	45,9

F»)	G	H	I	J	463,5	Xr
45.4	44,2	42,4	40,8	39,7	460.0	46,35
45.9	44,1	41,9	40,8	38,7	458.1	46,00
45.3	43,8	41,6	40,4	38,9	455,9	45.81
45.6	43,6	41,4	40.6	38,9	452,7	45.59
44,9	43.2	41.0	39,8	38,7	452,0	45.27
45,8	42,9	41,1	39,9	37,9	449,0	45,20
44.5	42,5	40,8	39,7	37,8	44,9C

Die Substanzen wurden in die Grunddiäten in verschiedenen Mengen gemäß Tabelle 4 eingearbeitet.

Tabelle 4 Verwendete Behandlungsdosierungswerte

Behandlung

1. Kontrolle
2.1

ϊ 2-Dimethylaminoäthanolsalz der p-Chlorj phenoxyisobuttersäure
4. J

mg/kgTag

42,6
142,0
426.0

Entsprechend

der

Clofibratsäure tag/kg/Tag)**)

mg/Ratte/Tag·**)

30
100
300

4,26 14,2 42,6

mg/kg/Diät

426 1420 4260

Behandlung

Fortsetzung

mg/kg/Tag

"' i Älhylendiaminsalz der p-Chlorphenoxy-[ isobuttersiiure

34,3 114,4 343,0

tntsprechend

der

Clofibratsäurc
(mg/kg/Tag)**)

30
100
300

mg/RaItc/Tag***)|

3,43
11,44
34,30

mg/k g/Diät

*) Grunddiät.
**) Dosierungsinengen der beiden Substanzen in der Weise berechnet, daß bei jedem Vcrglcichsversuchspaar(2 5; 3 - -6;4

Menge von Clofibratsäurclcilen erhalten wird. **) Unter der Annahme einer mittleren F^:utleraufnahmc = IO g.RatteTag. 343
1144
3430

7) die gleiche

Die entsprechenden Mengen der jeweiligen Test- i₅ erhalten und koagulieren gelassen. Das Serum wurde

materialien wurden mit einem Teil der Grunddiät vermengt und sodann in einem V-Mischer gründlich vermischt.

Von 10 von 20 Kontrollratten wurden Blutproben 7 Tage nach Beginn des Tests abgenommen. Von sämtlichen überlebenden Ratten wurden bei Beendigung einer 14tägigen Versuchsreihe Blutproben abgenommen. Die Blutproben wurden durch Herzpunktur

20

sodann einer Triglycerid- und Cholesterinanalyse nach den üblichen analytischen Arbeitsweisen unterworfen.

Ergebnisse

In den Tabellen 5 und 6 sind die Behandlungen sowie die Cholesterin- und Triglyceridwerte zusammengestellt.

Tabelle 5

Behandlungen

Kontrolle

2-Dimethylaminoüthanol- (42.6 mg) 3. \ salz der p-Chlorphen- (142,0 mg) 4.J oxyisobuttersäure (426,0 mg) 5.) Äthylendiaminsalz der (34,3 mg) 6. \ p-Chlorphenoxyiso- (114,4 mg) 7.) buttersäure (343,0 mg) 8. Caseinkontrollversuch

*) Blutproben, abgenommen am 7. Vcrsuchslag. **) Im Verhältnis zum Konlrollversuch.

Choleslerinwertc (mg/100 ml)

131 157 117 114 154 69 100 148

B	C
137	137
137	114
111	143
149	100
146	86
107	91
169	174
106	163

103 109 120 103 111 100 100 223

Tabelle 6

E	F	G	H	1	j
160	103	160	123	149	120
120	110	106	109	94	100
—	149	126	206	—	121
100	169	114	126	109	80
97	94	86	109	103	77
120	94	Hl	114	117	120
83	86	149	80	71	66
54	154	169	154	134	120

	x_c
1323	132,3
1156	115,6
1093	136,6
1164	116,4
1063	106.3
1043	104,3
878	87.8
1525	152,5

Verbesse rung (Reduktion)

12,6 -3,3 12,0 19,7 21,2 33,6

Behandlungen

1. Kontrolle

2.Ί 2-Dimethylaminoäthanol- (42,6 mg) 3. \ salz der p-Chlorphen- (14ZO mg) 4.J oxyisobuttersäure (426,0 mg)

5. ] Äthylendiaminsalz der (34,3 mg)

6. > p-Chlorphenoxyiso- (114,4 mg)

7. J buttersäure (343,0 mg) *) Im Verhältnis zum Kontroll versuch.

Die Betrachtung der Tabellen 5 und 6 ergibt, daß folgend beschrieb^^ bei jeder Behandlung bei den einzelnen Ratten eine 6₅ schiede (P^Ofll>* erhebliche Streuung des Serumcholestenn- und Tr- P££«™J

Triglycerid-Wcrt (mg/100 ml)

A	B
	172
172	157
145	187
127	157
105	150
67	108
105	82

202 112 142 150 177 123 157

120 112 150 157 126 165 67

195 97

150

105

112

60

202 157 135 135 82 165 112

G	H	I	j
172	148	148	75
120	120	120	112
127	162	—	75
135	90	.._	157
108	117	84	--
72		134	60
!45	135	55	66

	X	Ver besse
	159,3	rung (Reduk tion)
	127,9	(%)·)
1434	140,4	—
1279	139,8	19,7
1123	117,1	11,9
1258	111.7	12,2
1054	98,4	26,5
1006	29,9
984	38,2

ίο

Diskussion der Tabelle 5

Die Serumcholesterinwertc für Ratten mit der Konti olldiät waren nach 7 Tagen (152,5 mg/100 ml) und 14 Tagen (132,3 mg/100 ml) ähnlich und sie waren signifikant höher als bei allen anderen Behandlungsgruppen mit der Ausnahme des mittleren Wertes des 2-Dimethylaminoäthanolsalzes der p-Chlorphenoxyisobuttersäure (Behandlung 3). Es ist bemerkenswert, daß die erfindungsgemäße Verbindung, nämlich das Äthylendiaminsalzderp-Chlorphcnoxyisobuttersäurc, bei vergleichbaren Dosierungswerten signifikant niedrigere Serumcholesterinwertc (P < 0,05) ergab als die Vergleichsverbindung. Daraus ergibt sich eine durchschnittliche Verbesserung (Verminderung des Cholesterinspiegels) der Vergleichsverbindung bei drei Dosierungswerten (Versuche 2, 3 und 4) gegenüber dem Kontrollversuch (Versuch 1) von 7,1%. Dem steht eine mittlere Verbesserung der erfindungsgemäßen Verbindung bei drei Dosierungen (Versuche 5,6 und 7) gegenüber dem Kontrollversuch (Versuch I)von24,8% gegenüber. Die mittlere Verbesserung der erfindungsgemäßen Verbindung gegenüber der Vergleichsverbindung beträgt somit 17,7%.

Diskussion der Tabelle 6

Die statistische Analyse der Serumtriglycerid-Werte dieser Tabelle ergibt, daß bei den Kontrollratten zwischen 7 und 14 Tagen eine hochsignifikante Zunahme der mittleren Triglyceridspiegel erfolgte. Ferner zeigt sich kein signifikanter Unterschied des Serumtriglyceridspiegels bei Verabreichung der Vergleichssubstanz in jeder Dosierung und bei den Kontrollratten. Demgegenüber ergaben sämtliche Dosierungen der erfindungsgemäßen Substanz nach 14 Tagen Scrumtriglyceridgehalte, welche signifikant niedriger waren als bei den Kontrolltieren. Die hohen Gehalte der erfindungsgemäßen Substanz ergaben einen signifikant niedrigeren Serumtriglyceridspiegel als hohe oder mittlere Gehalte der Vergleichssubstanz. Daraus ergibt sich die mittlere Verbesserung (Verminderung des Triglyceridspiegels) bei der Vergleichssubstanz bei drei Dosierungen (Versuche 2, 3 und 4) gegenüber dem Kontrollversuch (Versuch 1) von 14,6%. Dem steht eine durchschnittliche Verbesserung bei der erfindungsgemäßen Substanz bei drei Dosierungen (Versuche 5, 6 und 7) gleichfalls gegenüber dem Kontrollversuch (Versuch 1) von 31,5% entgegen. Daraus ergibt sich, daß die mittlere prozentuale Verbesserung der erfindungsgemäßen Substanz im Vergleich zu der Vergleichssubstanz 16,9% beträgt.

Schlußfolgerung

Die signifikant höhere Verbesserung des Serumcholesterin- und Triglyceridspiegels, welche mit der erfindungsgemäßen Diaminverbindung im Vergleich zu der Vergleichsverbindung erhalten werden kann, beweist, daß die Diaminverbindung ein wirksames hypocholesterinämisches Mittel zur Behandlung von Lipidstörungen darstellt.

Versuchsbericht Il

Vergleichende hypocholesterinämische Wirkung von Clofibrat (Äthyl-4-chlor-2-phenoxyisobutyrat = Verbindung A) und Clofibrat-Äthylendiamin (gemäß der vorliegenden Erfindung = Verbindung B)

Die Verbindungen A und B wurden bei jungen CFE-Ratten untersucht. Dse Ratten wurden auf der Cuthbertsor.-Diät (Cuthbertson, W. F. J., et al., Bril.J. Nutr. 13: 227 bis 242, 1959) gehalten. Beide Wirkstoffe wurden in Konzentrationen von 0,50 und 0,25% dem Futter zugesetzt. In jeder Gruppe wurden 10 Tiere verwendet. Es wurden die wöchentlichen Zunahmen des Körpergewichts und die Futtcraufnahme der Tiere bestimmt. Das Ausblutenlassen erfolgte durch Dekapitation.

Die erhaltenen Ergebnisse sind in den folgenden Tabellen zusammengestellt.

Tabelle 7 Mittleres Körpergewicht und Futteraufnahme

Mittleres Körpergewicht	Kontrolle	Verbindung A	Verbindung A	Verbindung B	Verbindung B
(g)	(Diät B)	(0.50%)	(0,25%)	(0,50%)	(0,25%)
Zu Beginn	73,1 ± 1,1	72,6 ± 1,0	72,5 ± 1,0	72,3 ±1,0	71,9 ± 1.1
I		0,34	0,40		0,77
	107,8 ± 2,5	100,5 ± 1,8	103,9 ± 1,6	98,6 ± 2,4	105,9 ± 2,1
Erste Woche		2,37*)	1,31	2,65**)	0,58
ί	139,8 + 4,3	136,6 ± 2,4	135,2 ± 4,!	134,0 ± 3,7	137,4 ± 2,5
		0,65	0,77	1,02	0,48
Zweite Woche ...
t

Tägliche Futter	9,4	7,7	8.6	7,5	8,6
aufnahme	87,2	76,6	82,8	76,1	81,2
Erste Woche
g/Ratte/Tag...	11,1	10,2	10,3	10,3	10,7
g/kg/Tag	79,4	74,4	76,2	76,9	77,9
Zweite Woche
g/Ratte/Tag...
g/kg/Tag

*) Differiert signifikant gegenüber dem Kontrollversuch (P <0,05). *♦) Differiert signifikant gegenüber dem Kontrollversuch (P <0,02).

11 12

Tabelle 8 Durchschnittlicher Plasmapho&pholipidgehalt

Durchschnittlicher Plasmaphospholipid- gehalt	Kontrolle (Diät B)	Verbindung A (0,50%)	Verbindung A (0,25%)	Verbindung B (0,50%)	Verbindung B (0,25%)
mg% ± S.E. ... I	222,7 + 14,4	224,0 ± 9,2 0,08 +0,6	235,1 ± 17,5 0,55 + 5,6	218,1 ± 7,2 0,29 -2,1	213,7 ± 13,9 0,45 -4,0
Verminderung oder Zunahme, %

Tabelle 9

Durchschnittlicher Plasmatriglyceridgehalt

Durchschnittlicher Plasmatriglycerid gehalt	Kontrolle (Diät B)	Verbindung A (0,50%)	Verbindung A (0.25%)	Verbindung B (0,50%)	Verbindung B (0,25%)
mg% ± S.E. ... t	37,0 ± 5,3	43,5 ± 9,4 0,60 -rl 7,6	52,1 ± 16,0 0,90 + 40,8	14,6 χ 4,2 3,31 -60,5	24,7 ± 6,4 1,48 -33,2
Verminderung oder Zunahme, %

Tabelle 10

Durchschnittliche Plasmaenzymkonzentrationen

Plasmakreatinphosphokinase Einheiten/ccm

± S.E

r

Plasma-SGO-T Einheiten/ccm

± S.E

t

Plasma-SGP-T Einheiten/ccm

± S.E

ί

Alkalische Plasmaphosphatase Bodansky Einheiten/ccm

± S.E

f

Kontrolle (Diät B)

Verbindung A (0,50%)

Verbindung A

(0,25%)

Verbindung B Diäthylenamin

(0,50%)

Verbindung B Diäthylenamin

(0,25%)

> 160,0 ± 0,0

309,0 ± 23,6

113,1 ± 15,6

72,8 ± 2,7

> 160,0 ± 0,0 0,00

376,0 ± 27,1 1,86

139,4 ± 12,4 1,32

74,5 ± 0,80 0,60

> 160,0 ± 0,0 0,00

364,0 ± 29,0 1,47

120,8 ± 14,1 0,37

72,4 ± 2,7 0,10

> 160,0 ±0,0
0,00

334,0 ± 18,1
0,84

119,9 ± 12,6 0,34

78,3 ± 0,80 0,18

> 160,0 ± 0,0 0,00

304,0 ± 15, 0,18

117,0 ± 0,20

72,4 dt 1,7 0,18

824

13 14

Tabelle 11 Durchschnittliches F.ndgewicht und Organgewichte

Organ	Kontrolle (Dial B)	Verbindung A (0.50%)	Verbindung A (0,25%)	Verbindung B <0,50%)	Verbindung B (0,25%)
Anfangskörper- aewicht. e	73,1 ± 1,1	72.6 ± 1,0 0.34	72,5 ± 1,0 0,40	72,3 ± 1,0 0,54	71,9 ± 1.1 0.77
Endkörper gewicht, g .... t	139,8 ± 4,3	136.6 ± 2.4 0,65	135,2 ± 4.1 0,77	134,0 ± 3,7 1,02	137,4 ± 2.5 0.48
Herz, a	0,59 ± 0,02	0,55 ± 0,01 1.79	0,52 + 0.02 *?.48\|**	0,53 ± 0Ό1 2,69**)	0.56 ± 0.01
ι	1.20 ± 0,03	1.20 ± 0.03 0.00	1.22 ± 0,05 0.34	1,18 ± 0,03 0,47	(.35
Niere, iz	9.84 ± 0,49	12,24 ± 0.31 4.14***)	10.36 ± 0.52 0.73	11,01 ± 0,51 1,65	1.21 ± 0.02 0.28
Leber, 2 t	0 65 ± 0 03	0,70 ± 0.04	0,64 ± 0.05	0,64 ± 0,02	10.47 ± 0.39 1.01
Milz g		1 00	0.17	0,28	0,65 ± 0.04
t	0.09 ± 0,00	0,08 ± 0.00	0,07 ± 0.00	0,08 i 0,00	0,00
Samengefaße, g t	1,83 ± 0,04	1,85 ± 0,05 0.31	1.82 ± 0,04 0.18	1,78 ± 0,04 0,88	0.08 ± 0.00
Testes, g ι	38,6 ± 1,7	44,1 ± 1,82 2,21*)	3S,2 ± 2.0 0,15	38,5 ± 1,43 0,05	1,86 ± 0.03 0,60
Nebennieren, g I	0,49 ± 0,04	0,43 ± 0,03 1,20	0.40 ± 0.03 1,80	0,46 ± 0,02 0,67	37,1 ± 1.6 0,64
Thymus. g f	0.39 ± 0,03 2.00

*) Differiert signifikant gegenüber dem Kontrollversuch (p <0,05).

**) Differiert signifikant gegenüber dem Kontrollvcrsuch (p <0,02).

***) Differiert signifikant gegenüber dem Kontrollversuch (p <0,001).

Schlußfolgerung

Die 2wöchigen Hypocholesterinämie-Versuche bei Ratten, welche mit der Cuthbertson-Diät gefüttert worden waren, zeigten folgendes:

I. Die erfindungsgemäße Diaminverbindung B verminderte den Plasmatriglyceridspiegel um 60,5% (p0,01) im Vergleich zu einer Zunahme von 17,6% für das bekannte Clofibrat bei der gleichen Dosierung.

II. Die erfindungsgemäße Verbindung B verminderte den Plasmaphospholipidgehalt stärker als die Verbindung A.

IiI. Sowohl die Verbindung A als auch die Verbindung B beeinflußten bei der Einarbeitung in das Futter in keiner Weise die verschiedenen enzymatischen Plasmakonzentrationen (SGO-T, SGP-T, alkalische Phosphatase und CPK).

IV. Die Verbindung A (0,50%) ergab eine signifikante Vergrößerung der Leber und der Nebennieren, was bei der Verbindung B nicht der Fall war.

V. Im allgemeinen standen die Körpergewichtszunahmen und die Futteraufnahme der behandelten Gruppen in einem günstigen Verhältnis zu der Kontrollgruppc.

Versuchsbericht III
Vergleich der Toxizität

Die akute perorale Toxizität des Clofibrats und des erfindungsgemäßen Äthylendiaminsalzes der p-Chlor phenoxyisobuttersäure wurden wie folgt bestimmt Albinomäuse mit einem Gewicht von 18 bis 20 ^

wurden zur Durchführung des Teste verwendet. Der Tieren wurde 4 Stunden vor der Behandlung mit der Arzneimitteln das Futter (Purina Rat Chow) vorcnt halten. Sie wurden jedoch beliebig mit Wasser ver sorgt. Danach wurde eine vollständige Untersuchung der akuten Toxizität unter Verwendung von 10 Tierer je Dosiswerl, welche gleichermaßen hinsichtlich de: Geschlechts aufgeteilt worden waren, durchgeführt Beide Verbindungen wurden peroral auf der Grund lage von mg/kg Körpergewicht zugeführt. Die An zeichen einer akuten Intoxikation sowie der Sterblich kcit über einen Zeitraum von 24 Stunden nach de Verabreichung der Wirkstoffe wurden ermittelt. Samt liehe überlebenden Tiere wurden die nachfolgender 14 Tage aufbewahrt, um eine verzögerte Mortalitä festzustellen. Sämtliche erhaltenen angesammeltet Mortalitätswertc werden nach der Methode voi Litchfield und Wilcoxon (J. Pharmocol Expcr. Therap. 96: 99 bis 113, 1949) statistisch analy siert.

16

Muskeltonus und eine Ataxie. Der unmitte bare waren, zeigten meine Krämpfe vorausgegangen.

Tabelle 12

Mortalitätsfrequenz be, Mausen, welche peroral mit verschiedenen Dosierungswerten von Clof.brat

behandelt worden waren

Clofi-	M	W	2	M	W	Mortalitätsfrequenz	3	M	W	in bezug auf die	Tage der Nachbehandlung und da.	Geschlecht	4	M	W	5	M	W	6	M	W	7 I	M	W	8	M	W	9	M	W	10	M	W	Il	M	W	12	M	W	13	M	W	/Dosierungswert.	weiblich	14	M	W	Gesamt morta- lität
brat-	—	—	1	—		—			—				Z																männlich, W =				(%)
dosie- reng	—	—	—	—	1	—	—	1	—	—		.__							_	._			_							10
(mg/kg)	3	2	1	—	—	—	—	—	—	—-			_	_..												....				20
1000	4	2	—	—	—	—	—		--							_.				-_.			....			._				60
1250	5	5	—	—	—	—	—	—	—	--			—		■-	-		—		—				-						60
1500	10 Mäuse			100
2000	M =
2500

Tabelle 13

Akute Toxizität

Art Maus

Gewicht 18 bis 20 g

Ohne Nahrung 4 Stunden

Dauer 14 Tage

Verbindung Clofibrat (destilliert)

Verabreichungsweg peroral

Träger Polyoxyäthylensorbitanmonooleat und destilliertes Wassei

Dosierung	Volumen	Konzentration
(mg/kg)	. (ml/20 g)	(mg'tnl)
500	0,5	20
1000	0,5	40
2000	0,5	80
1000	0,5	40
1250	0,5	50
1500	0.5	60
2000	0,5	80
2500	0,5	100

	Zahl	W	M
M		2	0
2		2	0
2		2	1
2		5	0
5		5	0
5		5	3
5		5	4
5		5	5
5

Mortalität
(24 h)

W
0
0
I

0
0

iGcsamtmortalitä

75

10 20 60 60 100

Minuten nach der Behandlung mit toxischen Dosierungsmengen zeigten sämtliche Mäuse mäßige Stimulierungen des ZNS. eine schwere Ataxie und einen erhöhten Muskeltonus. Dem Tod gingen oftmals Krämpfe voraus.

Tabelle 14

Akute Toxiziiät

Art Maus

Gewicht 18 bis 20 g

Ohne Nahrung 4 Stunden

Dauer 14 Tage

Verbindung Clofibrat-Äthylendiaminsalz

Verabreichungsweg oral

Träger Polyoxyäthylensorbitanmonooleat und destilliertes Wassei

	Volumen	Konzentration	Zahl	M	W	Mortalität	M	W	Gesamtmortalitä
Dosierung	(ml/20 g)	(mg/ml)	1	3	(24 h)	0	0	(%)
(mg/kg)	0,5	20	1	3	0	~)	0
500	0,5	40	1	3	1	3	50
1000	0,5	60	5	5	0	0	100
1500	0,5	30	5	5	1	0	0
750	0,5	40	5	5	1	0	10
1000	0,5	50	5	5	0	o	20
1250	0.5	60		40
1500

20 Minuten nach der Behandlung zeigten die meisten Mäuse eine mäßige Stimulierung des ZNS sowie eine schwere Ataxie und einen gesteigerten Muskeltonus. Die unmittelbare Mortalität war oftmals auf Krämpfe zurückzuführen. Bei einer Dosierung von 1250 mg/kg starb eine Maus 48 Stunden nach der Behandlung. Bei einer Dosierung von 1500 mg/kg starben zwei männliche Mäuse am dritten Tag der Nachbehandlung, und zwei weibliche Mäuse starben am vierten Tag.

Tabelle 15

Datenanalyse der akuten Toxizität von Clofibrat und der erfindungsgemäßen Verbindung,
per os Mäusen und Ratten verabreicht

Verbindung

Clofibrat

Äthylendiaminsalz von Clofibrat

Anzahl der Tiere

50 40

Akute Toxizität (mg/kg) LD₅₀ ± S. E. M. I LD₅₀-Bereich*)

1570 ± 171,1
1700 ± 243,5

1276 bis 1931 1250 bis 2312

S. E. M. = mittlerer Standardirrtum.
*) Bereich für einen 95%igen Verläßlichkeitswerl.

Die Tabelle 15 ergibt eine Datenanalyse der akuten Toxizität von beiden Verbindungen bei der Maus. Die LD₅₀ (± S. E. M.) von Clofibrat betrug 1570 ± 171,7 mg/kg, diejenige des Äthylendiaminsalzes von Clofibrat 1700 ± 243,5 mg/kg, bestimmt bei der Maus. Dies zeigt, daß die erfindungsgemäße Verbindung eine signifikant geringere Toxizität hat als die bekannte Clofibrat-Verbindung.

Hierzu 4 Blatt Zeichnungen

Claims

Patentansprüche: Alkylendiaminsalze der p-Chlorphenoxyisobuttersäure der allgemeinen Formel

H H

Η—Ν—Χ—Ν—Η

15

worin X eine niedrige Alkylengruppe bedeutet.
2. Äthylendiaminsalze der p-Chlorphenoxyisobuttersäure.
3. Verfahren zur Herstellung von Alkylendiaminsalzen der ρ - Chlorphenoxyisobuttersäure nach Anspruch 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß man das Afkyiendiamin und die freie p-Chlorphenoxyisobuttersäure in an sich bekannter Weise miteinander umsetzt und das Salz aus dem Reaktionsmedium gewinnt.
4. Mittel zur Reduzierung des Cholesteringehalts im Blutserum, gekennzeichnet durch den Gehalt wenigstens eines Alkylendiaminsalzes der p-Chlorphenoxyisobuttersäure nach Anspruch 1 und 2 neben einem pharmazeutisch verträglichen, nichttoxischen Träger.