DE2059310A1

DE2059310A1 - Neue 6alpha,16alpha-Dimethylsteroide

Info

Publication number: DE2059310A1
Application number: DE19702059310
Authority: DE
Inventors: A Domenico; U Kerb; K Kieslich; K Mengel
Original assignee: Schering AG
Current assignee: Bayer Pharma AG
Priority date: 1970-11-28
Filing date: 1970-11-28
Publication date: 1972-06-08
Also published as: CH617709A5; BE775901A; FI49159B; PL74335B1; CA933915A; ZA717489B; DK135131B; CS166787B2; FI49159C; DK135131C; IE35822B1; SE374109B; US3828083A; AT312824B; AU3598871A; EG10261A; NL7116335A; IL38241A0; DE2059310B2; CH591518A5

Description

Neue 6ff,leg-Dimethylsteroide

Die Erfindung., betrifft neue 6a,16or-Dimethylsteroide der allgemeinen !Formel I

(D,

worin R ein Wasserstoffatom oder eine Acylgruppe, X ein Halogenatom und Y eine ß-Halogenmethylengruppe, deren Halogenatom ein gleichgroßes oder kleineres Atomgewicht als X besitzt, eine ß-Hydroxymethylengruppe oder eine Carbonylgruppe "bedeuten.

ü Säurereste R eignen sich Acylreste physiologisch verträglicher Säuren. Bevorzugte Säuren sind organische Carbonsäuren mit bis zu 15 Kohlenstoffatomen. Die Säuren können auch ungesättigt, verzweigt,- mehrbasisch oder -in üblicher Weise -zum Beispiel durch Hydroxy-, Oxo- oder Aminogruppen oder Halogen-

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atome substituiert sein. Geeignet sind auch cycloaliphatische, aromatische, gemischt aromatisch-aliphatische oder heterocyclische Sahiren, die ebenfalls in geeigneter V/eise substituiert sein können. Solche Säuren sind zum Beispiel Ameisensäure, Essigsäure, Propionsäure, Buttersäure, Valeriansäure, Capronsäure, Önanthsäure, Undecylsäure, Trimethylessigsäure, Diäthylessigsäure, t-Buthylessigsäure, Phenylessigsäure, Cyclopentylpropionsäure, Ölsäure, Milchsäure, Mono-,Di- und Trichloresßigsäure, Aminoessigsäure, Diäthylamino-, Piperidino- und Morpholinoessigsäure, Bernsteinsäure, Adipinsäure, Benzoesäure, Nicotinsäure. Ferner kommen die gebräuchlichen anorganischen Säuren, wie zum Beispiel Schwefel- und Phosphorsäure,in Betracht.

•r.

Zur Herstellung wasserlöslicher Präparate können substituierte Aminoacylate wie Diäthylamino-, Piperidino- und Morpholinoacetate in die Säureadditionssalze und die schwefelsauren und phosphorsauren Ester in die Alkalimetallaalze überführt werden.

.Weiterhin betrifft die Erfindung " ein Verfahren zur Herstellung der neuen 6a,l6cr-Dimethylsteroide der allgemeinen Formel I, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß man in an

~Trteh"i3glfännter 17eise än~die~Ä^ '-Doppelbindung eines 6a, 16a-Dimethyl.steroids der allgemeinen Formel II

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CH₂OR

C=O

^l3

(ID,

worin R die'gleiche"Bedeutung wie in Formel I besitzt und Cp;·;".;'.". C-, eine Einfach- oder Doppelbindung darstellt, Halogen, unterchlorige oder unterbromige Säure addiert, die gebildeten Qa-Chlor- oder 9a-Brom-llß-hyäroxysteroide der Formel I gewünschtenfalls in die entsprechenden 9>Hß-Epoxyde überführt und anschließend den Epoxydring mit Fluorwasserstoff oder Chlorwasserstoff öffnet, eine gegebenenfalls im Ausgangsmaterial vorhandene .-C₂ ⁷^rJBinfaghbindung. .durch Perm ent ation ..mit. ,einem, zur Δ -Dehydrierung gebräuchlichen Mikroorganismus dehydriert, eine llß-Hydroxygruppe gewünschtenfalls zur Oxogruppe oxydiert

und eine veresterte 21-Hydroxygruppe gewünschtenfalls verseift und dann gewünschtenfalla erneut verestert.

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Pur die Anlagerung von Halogen an die λ"^ '-Doppelbindung stehen eine ganze Reihe Möglichkeiten zur Auswahl. So kann man z. B. Halogene, '..Ie Chlor oder Brom, oder Verbindungen der Halogene miteinander, 'de z. B. Chlormonofluorid oder Brommonochlorid, oder Halogen aus Polyhalogeniden, wie z.B. Kaliumtrijodid oder Jodbenzoldichlorid, direkt an die Doppelbindung anlagern.

Besonders gut gelingt die Halogenaddition, wenn man gleichzeitig ein positives und ein negatives Halogen auf die A * '-Steroide einwirken läßt. Als Reagenzien, die positives Halogen enthalten, kommen beispielsweise infrage: Halogensuccinimide, Halogenacetamide oder die Halogene selbst; als Reagenzien, die negatives Halogen liefern, kommen z. B. Halogenwasserstoffe und Alkalimetallhalogenide, insbesondere Lithiumhalogenide wie z. B. Lithiumchlorid und Lithiumbromid infrage.

Die Anlagerung von Halogenen an die Δ "^ '-Doppelbindung des Steroids geschieht stets so, daß sich das positiv geladene Halogen an die 9-Stellung und das negativ geladene Halogen an die 11-Stellung des Moleküls anlagert. Das Atomgewicht des Halogens in 9-Stellung kann wegen der bekannten verschiedenen Elektronegativität der Halogene nie kleiner als das des Halogens in 11-Stellung sein. Die Halogenanlagerung an die Ä * '-Doppelbindung wird vorzugsweise bei Temperaturen

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zwischen -75°C und 4-5O⁰C durchgeführt.

Die Anlagerung ovon unterchloriger oder unterbromiger Säure an die Δ ^ ■'-Doppelbindung der Verbindungen erfolgt nach den dafür allgemein bekannten Arbeitsmethoden. Eine bevorzugte Methode ist die Behandlung der δ"^ ^-Doppelbindung mit Reagenzien, die in Gegenwart von Wasser und im sauren Reaktionsmilieu im Verlauf der Umsetzung unterchlorige oder unterbromige Säuren freisetzen, also insbesondere mit Halogenkationen bildenden Reagenzien, wie z.B. Dibrommethylhydantöiny U-Halogenacylamide, insbesondere H-Chlor- oder H-Bromacetaraid oder IT-HaI ogenacylämi de, insbesondere ΙΓ-Brom- oder KVChlorsuccinimid.

Palis die letztlich gewünschten Verfahrensprodukte 9or-]?luorverbin düngen sein sollen, v;ird_rnach erfolgter Hypohalogenit-Anlagerung an die 9»!!-Doppelbindung in ebenfalls bekannter Weise die 9a-

Brom-(bzv/.Chlor-)llß-hydroxy-Gruppierung, z.B. durch Behandlung mit basischen Reagenzien wie NaOH, KOH, YL^OO^t Kaliumacetat, Pyridin u. ä. bei vorzugsweise erhöhter Reaktionstemperatur, zum 9,11-Oxidoring geschlossen, der anschließend mittels Fluorwasser-

llß-Hydr'o^y-^^-^ITiidrglrupplerung umgewandelt

In gleicher Weise kann man, falls erwünscht, die 9a-Brom-llß-hydroxysteroide der Formel I in die 9a-Ghlor-llß-hydroxysteroide

überführen, v/enn man den Epoxydring nicht mit Fluorwasserstoff sondern mit Ohlorv/ascerstoff öffnet.

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Falls im Ausgangsmaterial eine CpTTTTvC-j-Einfachbindung vorhanden ist, ist es erforderlich, diese durch Fermentation mit einem zur Δ -Dehydrierung gebräuchlichen Mikroorganismus zu dehydrieren. Als Mikroorganismus zur Durchführung dieses Verfahrensschrittes eignen sich vorzugsweise Bacillus lentus, insbesondere Bacillus lentus (ATCG 13805 ) oder Arthrobacter simplex, insbesondere Arthrobacter simplex (ATCC 6946 ). Die Durchführung der mikrobiologischen Dehydrierung erfolgt nach den bekannten Methoden mittels submerser, aerober Fermentation. Die Umwandlung des als lösung oder Suspension -zugesetzten Substrates wird durch dünnschichtchromatographische Analyse von Probenextrakten verfolgt. Nach beendeter Fermentation wird das Verfahrenaprodukt mit einem-geeigneten, mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel, aus der Kulturbrühe extrahiert und aus dem Extrakt, zum Beispiel durch Eindampfen und weitere bekannte Aufarbeitungsmethoden wie Umkristallisation und/oder Chromatographie an Silicagel gereinigt.

Zur Herstellung von 11-Keto-Verbindungen der allgemeinen Formel I v/erden die entsprechenden llß-Hydroxysteroide in an sich bekannter Weise, beispielsweise mittels Chromsäure, oxydiert. Zur Verseifung der 21-Acyloxyverbindungen kann man die bekannten Arbeitsmethoden verwenden, beispielsweise die Verseifung mittels Alkalialkoholaten in Alkohol oder mittels

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wässriger Alkali hydroxid- oder Alkali carbonatlösung.

Die Veresterung freier 21-Hydroxygruppen erfolgt nach den bekannten Verfahren, beispielsweise durch Einwirkung von Säure-, änhydriden- oder Säurenalogeniden auf die 21-Hydroxysteroide in Gegenwart iÄ.«-als©iier Katalysatoren \vie Pyridin, Lutidin , wässriger Natriumhydrogenearbonatlösung, etc.

Die Ausgangsverbindungen der allgemeinen Formel II kann man durch Wasserabspaltung aus den bekannten lla-, oder llß-Hydroxy-21-acyloxy-6a ,l6a-äimethyl-4-pregnadien-3,20-

T _

dionen bzw. deren Λ -Verbindungen (Deutsches Bundespatent Fr. 1 240 860 und Deutsche Offenlegungsschrift Nr. 1 909 152) herstellen. Eine Möglichkeit zur Wasserabspaltung besteht darin, daß man diese ll-Hydroxy-21-acyloxysteroide in an sich bekannter Weise mit einem Säurechlorid wie Methansulfonsäurechlorid in Gegenwart organischer Basen und Dimethylformamid unter ^!

Erhitzen behandelt.

—Bi-e -^aa«h~dera--erfindung&gemäßen- Verfahren iiergestellt-en - 6a,16a-Dimethylsteroide der allgemeinen Formel I zeichnen sich durch eine sehr gute anti phlogistiscl» Wirksamkeit aus. Sie besitzen darüberhinaus noch den Vorteil, daß sie sich, ver-

_^lichen_mit_den_bekannten Substanzen jnit -entzündungshemmender Wirkung, durch eine geringe t&ymoIytische Nebenwirkung auszeichnen. Die antiphlogistische Wirksamkeit der Verbindungen der

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Formel I wurde mittels des üblichen Pfotenödemtestes bestimmt. Für diese Versuche wurden SPF-Ratten im Gewicht von 130 Ms 150 g benutzt. Diesen Ratten wurde zur Erzeugung des Entzündungs herdes 0,1 ml einer 0,5$>igen Mycobacterium butyricum-Suspension (erhcältlich von der amerikanischen Firma Difco) in die rechte Hinterpfote injiziert. Vor der Injektion wurde das Pfotenvolumen der Ratten gemessen. 24 Stunden nach der Injektion -wurde das Pfotenvoli'iinen zur Bestimmung des Ausmaßes des Ödems abermals gemessen. Anschließend wurden den Ratten subcutan oder peroral unterschiedliche Mengen der entzündungshemmenden Substanzen Verabreicht. _JJach_ weiteren 24 Stunden yurde_ das Pfotenvolumen erneut bestimmt. Aus den erhaltenen Ergebnissen vurden die Regressionskurven ermittelt. Aus diesen Kurven wurde dann die Dosis (mg pro kg Körpergewicht) ermittelt, bei der eine f)O°i>ige Verminderung des Ödems*erreicht wurde

Zur Bestimmung des thymolytischen Effekts wurden SPF-Ratten im Gevficht von 70 bis 90 g unter Äthernarkose adrenalektomiert. 6 Tiere bildeten jeweils eine Gruppe, die über 3 Tage täglich mit unterschiedlichen Mengen Testsubstanz subcutan oder per-Qjig-j--iQeh^nSeVt^nxTden. "Am "vlerfen"TI?äg""'.?üfäen"die"~Tiere ^getötet Und ..die Tiiymus-Gewichte bestimmt. Aus den Thymus-Gewichten wurden die Regressionskurven ermittelt und aus diesen wiederum die Dosis (mg pro kg Körpergewicht) bei der eine Verminderung des

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Thymusgewichtes um 50 °/o beobachtet wurde

Die nachfolgende Tabelle zeigt am Beispiel des 9a-Pluor-113,21-dihydroxy-6a,I6a-dimethyl-l,4--pregnadien-3,20-dion die überlegene pharmakologisehe Wirksamkeit der erfindungsgemäß hergestellten Substanzen im Vergleich zu dem bekannten, handelsüblichen
Antiphlogistikum 6a-Pluor-llß,21-dihydroxy-l6a-methyl-l,A-pregnadien-3,20-dion.

Substanz

Ödemtest ED _c

Thymolysetest

S.C.

P.O.

I 6<x-Fluor-llß,21-dihydroxy-l6a-methyl-l,4-pregnadien-3,20-dion

g^y droxy-6a,I6a-dimethyl-,4-pregnadien-3 > 20-dioi

0,28

0,04

0,50

0,055

Wie man aus dieser Tabelle erkennt, ist das 9a-iTuor-llß,21-dihydroxy-6aA6a~dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion nach peroraler Verabfolgung etwa 58mal stärker antiphlogistisch wirksam, aber nur etwa 9mal stärker thymolytisch wirksam als das bekannte handelsübliche 6a-]?luor-llß,21-dihydroxy-l6a-methyl-l,4-pregnadien-3,20-dion.

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Da die neuen Verbindungen sich durch eine starke antiphlogistische Wirksamkeit und eine sehr günstige Dissoziation zwischen erwünschter entzündungshemmender Wirkung und unerwünschter thymolytischer Nebenwirkung auszeichnen, sind sie in Kombination mit den in der galenischen Pharmazie üblichen Trägermitteln gut geeignet zur Behandlung von z.B.

a) lokal: Kontaktdermatitis, Ekzemen der verschiedensten Art, " Neurodermitis, Erythrodermie, Verbrennungen 1.

Grades, Pruritus vulvae et ani, Rosacea, Erythematodes cutaneus, Psoriasis, Liehen ruber planus et verrueosus;

b) oral: akute und chronische Polyarthritis, Neurodermitis,

Asthma bronchiale, Heufieber u.a.

Die Herstellung der Arzneimittelspezialitäten erfolgt in üblicher ) Weise, indem man die Wirkstoffe mit geeigneten Zusätzen,

Trägersubstanzen und Geschmackskorrigentien in die gewünschten Applikationsformen wie Tabletten, Dragees, Kapseln, Lösungen, -, -ü%eyf«tesM;*—M-e-Vrirkst-öffkenzentration-in -den -so

-formulierten Arzneimitteln ist von der Applikationsform-abhängig.

Die nachfolgenden Beispiele dienen zur Erläuterung des erfindungsgemäßen Verfahrens:

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Beispiel 1;

a) 6,5 g lla^l-Dihydroxy-öo^löcr-dimethyl-l^-pregnadien-3,20-dion v/erden in 65 ml Dimethylformamid gelöst, mit 13 ml Essigsäureanhydrid und 650 mg Blei-(ll)-acetat versetzt und zwei Stunden lang "bei Raumtemperatur gerührt.

Die Reaktionsmischung wird dann unter Rühren in 300 ml lO^iger Natriumacetatlösung eingetropft, anschließend eine Stunde lang gerührt, das ausgefüllte Produkt abgesaugt, mit Wasser gewaschen und "bei 60⁰C im Vakuum getrocknet. --Man -erhält-6,5 g lla-Hydroxy-21-acetoxy-6a,16a-dimethyll,4-pregnadien-3,2O-dion als Rohprodukt mit einem Schmelzpunkt von 160 Ms 164⁰C, welches nach Umkristallisieren aus Diisopropyläther 5,1 g Reinprodukt vom Schmelzpunkt 170 Ms 171°C ergibt.

"b) 5»3 g lla-Hydroxy-21-acetoxy-6a,l6a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion v/erden in 25 ml trockenem Pyridin gelöst und unter Rühren und Kühlen auf ca. O⁰G mit 3 ml Methansulf onsäurechlorid tropfenweise"versetzt. Anschließend rührt man die Reaktionsmischung 30 Minuten lang bei O⁰G und v/eitere - 90 Minuten lang bei+10 bis 4-20⁰C und tropft sie sodann in eine: Mischung von 600 ml Eiswasser und 30 ml konzentrierter Salzsäure ein. Man rührt das Gemisch eine Stunde lang, saugt das abgeschiedene Produkt ab und trocknet es bei 40⁰C im Vakuum. Man erhält 6,3g Ha-Me syloxy-21-acetoxy-

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6a,l6tt-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion als Rohprodukt vom Schmelzpunkt 174 bis 175⁰C.

c) 6,3 g lla-Menyloxy-21-acetoxy-6a,l6a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion werden in 120 ml Eisessig gelöst, mit 11,5 g wasserfreiem Nattiumacetat versetzt und in einer Stickstoffatmosphäre unter Rühren Beehr; Stunden lang zum Sieden erhitzt. .Dann .'erden im Vakuum bei ca. 6O⁰O Badtemperatur ca. 50 ml Eisessig abdestilliert, der Rückstand in ca. 600 ml Eiswasser eingetropft und das Gemisch noch eine Stunde gerührt. Man saugt das ausgefällte Produkt ab, wäscht es mit V/asser neutral und trocknet es im Vakuum bei 4O⁰C. Man erhält 4,9 g 21-Acetoxy-6a,l6(Y-dimethyl-l,4,9{ll)-pregnatrien-3,20-dion als Rohprodukt vom Schmelzpunkt 158 bis 163°C.

d) 6,2 g 21-Acetoxy-6a,16a-dimethyl-l,4,9(ll)-pregnatrien-3,20-dion •erden in 120 ml reinem Tetrahydrofuran gelöst und in einer Stickstoffatmonphäre bei ca. 20⁰C tropfenweise mit 50 ml In-Perchlorsäure versetzt. Anschließend gibt man portionsweise -9,1 -g-üT-Bromnucciniinid zu/ rührt die ~ Mischung-noch 30 "Minuten lang bei 20 C und versetzt sie dann anteilweise mit einer Lösung von 8,6 g Nat-riumsulfit in 1,1 1 Eiswasser. Man rührt das Gemisch noch eine Stunde, saugt das abgeschiedene Produkt ab, versetzt es mit Wasser und löst es in 120 ml Chloroform. Die Chloroformphase wird zweimal mit V/asser gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und mit Aktivkohle 30 Minuten lang bei Raumtemperatur

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gerührt. Dann filtriert man die Kohle a"b und engt die Chloroformphase im Vakuum bei 3O⁰C ein. Der Rückstand v/ird aus Chloroform-Diisopropyläther umkristallisiert und man erhält 5,8 g 9a~Brom-llß-hydroxy-21-acetoxy-6a,16a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion mit einem Zersetzungopunkt von 163 Ms 164⁰C.

Beiopiel 2; a)

5»8g 9a-Brom-llß-hydroxy--21-acetoxy-6a,l6a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion v/erden mit 10,6 g wasserfreiem Kaliumacetat und ~50 ml -Äthanol-versetzt und in-einer-Stiekstoffatmosphäre unter Rühren 90 Minuten lang zum Sieden erhitzt. Nach beendigter Reaktion kühlt man das Gemisch auf Raumtemperatur ab, gießt es in 600 ml Eiovasser und rührt eine Stunde lang. Das ausgeschiedene Produkt v/ird abgesaugt, mit V/asser gev/aschen und anschließend bei 40⁰C im Vakuum getrocknet. Man erhält 4,4 g 21-Acetoxy-9,llß-epoxy-6oc,I6a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion als Rohprodukt mit einem Schmelzpunkt von 170 bis 173⁰C.

b) 4,4 g 21-Acetoxy-9,llß-epoxy-6a,l6oc-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion werden portionsweise unter Rühren in eine auf —20°·ϋ -gekühlte- Mi s<;hung-aus -15 ml-flüssigem-Fluorwasserstoff und 15 ml Dimethylformamid eingetragen. Anschließend rührt man die Reaktionsmiychung 48 Stunden lang bei O⁰C und tropft sie dann unter Rühren in ein Gemisch von 600 ml Eiswasser und 60 ml

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konzentriertem Ammoniak. Man rührt dan Gemisch eine Stunde lang, saugt das abgeschiedene Produkt ab, wäscht es mit Wasser neutral und trocknet es bei 40 C im Vakuum. Das erhaltene Rohprodukt wird aus Methylenchlorid-Misopropyläther umkristallisierx und man erhält 4,5 g 9OC-FIuOr-IlBJ-Hydroxy-21-acetoxy-6oc,16a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion vom Schmelzpunkt 213 bis 21.6⁰C.

Beispiel 3;

2,2g 9a-Pluor-llß-hydrox,y-21-acetoxy-6a,16a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion v/erden in 120 ml wasserfreiem Methanol gelöst, unter Rühren mit 610 mg Natriummethylat versetzt und in einer Stickstoffatmosphäre 10 Minuten lang bei Raumtemperatur gerührt. Dann versetzt man das Gemisch mit 0,6 ml Wasser, rührt v/eitere fünf Minuten, neutralisiert mit Eisessig und engt es im Vakuum bei 40⁰C ein. Der Rückstand v/ird in Essigester gelöst, die Essigeaterphase zweimal mit Wasser gev/aschen, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum bei 4O⁰C eingeengt. Das erhaltene Rohprodukt v/ird

aus~Aceton-lfiisöpropyläther umkristallisiert und man erhält

1,6 g 9ff-Fluor-ll_ß, 21-di.hydroxy_-6_a,l6_a-ji:LmeJ;hyl-l,4.-pregnadien-3,20-dion vom Schmelzpunkt 214 bis 216⁰C.

Beispiel 4:

0,5 g 9a-Fluor-llß,21-dihydroxy-6a,l6a-dimethyl-l,4-pregnadier 3,20-dion v/erden mit 2 ml Pyridin und 0,5 ml Capronsäureanhydrid versetzt und 3 Stunden lang bei Raumtemperatur

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gerührt. Anschließend gießt man das Reaktionsgemische.

in 50 ml Wasser, extrahiert mit Methylenchlorid, väscht die Methylenchloridphase mit Wasser, trocknet sie über natriumsulfat und engt sie im Vakuum zur Trockne ein.

Der Rückstand wird mittels Aceton-Hexan-Gradient über eine Kieselgelsäule chromatographiert und man erhält 420 mg 9a-Pluor-llß-hydroxy-21~hexanoyloxy-6a,16a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion als Sirup.

Beispiel 5?

0,3g 9a-Pluor-llß,21-dihydroxy-6a,16a-dimethyl-l, 4— pregnadien-3""j20-dion v/erden mit 2 ml Pyridin und 0,5 ml Benzoylehlorid versetzt und 3 Stunden lang "bei Raumtemperatur gerührt. Nach Aufarbeitung des Reaktionsgemisches, wie in Beispiel 4 beschrieben, erhält man 0,23 g 9ff-Fluorllß-hydroxy-21-benzoyloxy-6a,16a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion als Sirup.

Beispiel 6;

2,2 g 21-Acetoxy-6a,16a--dimethyl-l,4T9(ll)-pregnatrien-3,20-dion werden mit 60 ml Tetrahydrofuran, 4,5 g N-Chlorsuccinimid und 25 ml ln-Perchlorsäure versetzt und 3,5 Stunden lang bei 3O⁰C gerührt. Anschließend gießt man das Reaktionsgemisch in Eiswasser, saugt den ausgefallenen Niederschlag ab und löst ihn in Methylenchlorid. Die Methylenchloridphase wird neutral gewaschen und im Vakuum zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wird aus Aceton-Hexan

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umkristallisiert und ergibt 9o^r-Chlor-llß-hydroxy-21-acetoxy-6a,l6cr-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion vom Zeraetzungspunkt 219 bis 221⁰C.

Beispiel 7:

1,9 g 9«-Chlor-llß-liydroxy-21-acetoxy-6a,16a-diraethyll,4-pregnadien-3,20-dion werden in 20 ml Methylenchlorid und 20 ml Methanol suspendiert, das Gemisch auf etwa 0 C gekühlt, mit einer Lösung von 120 mg Kaliumhydroxyd in 4 ml Methanol versetzt und 10 Minuten lang gerührt. Dann neutralisiert man das Gemisch mit Essigsäure, verdünnt es mit "Chloroform, v/äscht die Chloroformphase mit Wasser und dampft sie im Vakuum zum Trocknen ein. Der Rückstand wird aus Aceton-Hexan umkristallisiert und man erhält das 9-Chlor-llß-, 21-dihydroxy-6a,16a--dimethyll,4-pregnadien-3,20-dion vom Zersetzungspunkt 232 bis 234⁰C.

Beispiel 8;

pregnadien-3,20-dion v/erden in 8 ml Pyridin gelöst, die

Mischung auf -1O⁰C gekühlt, tropf env/eise mit 0,96 ml Isobutternäurechlorid versetzt und 60 Stunden lang bei ca. 0 C aufbewahrt. Danach gießt man das Reaktionsgemisch in Eiswasser, saugt das ausgefallene Produkt ab, v/äncht

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es mit Wasser und trocknet es im Vakuum bei 40 0-r Das Rohprodukt wird aus Aceton-Hexan umkristallisiert und man erhält das 9a-Chlor-llß-hydroxy-21-isobutyryloxy~ 6a,16a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion vom Schmelzpunkt 207 "bis 208°0.

Beispiel 9:

0,5 g 21-Acetoxy-6a,l6cr--dimethyl-l,4,9(ll)-pregnatrien-3,20-dion.werden in 20 ml Eisessig gelöst, mit 2 g lithiumchlorid versetzt und auf etwa O⁰C gekühlt. Dann gibt man zu dieser Mischung eine Lösung von 198 mg N-Chlorsuccinimid und 52 mg Chlorwasserstoff in 0,5 ml Tetrahydrofuran und rührt 4,5 Stunden lang bei Raumtemperatur. Anschließend v/ird das .Produkt mit Eisv/asser ausgefällt, abgesaugt und in Methylenchlorid gelöst. Die Methylenchloridphase v/ird * mit Wasser neutral gewaschen, im Vakuum eingeengt und der Rückstand aus lther-p_emtan umkristallisiert. Man erhält das 9a,llß-Bichlor~21-acetoxy-6a,16a-dimethy1-1,4-pregnadien-

3,20-dion vom Schmelzpunkt 180 bis 181⁰C.

Beispiel 10;

300 mg 9a,llß-Dichlor-21-acetoxy-6a,16a~dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion v/erden, wie in Beispiel 7 beschrieben, verseift. Man erhält das 9a,llß~Dichlor-21-hydroxy-6a,16a-'dimeth7/l-'l»4-pregnadien-3,20-dion vom Zersetzungspunkt 205⁰C.

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Beispiel 11;

a) Eine Mischung aus 5,6 g llß-Hydroxy-21-acetoxy-6a,16a-dimethyl-4-pregnen-3,20-dion, 28 ml Dimethylformamid, 5,5 ml Pyridin und 2,6 ml Methansulfonsäurechlorid v/ird 80 Minuten

lang unter Stickstoff auf dem Dampfbad gerührt. Nach Been der Reaktion wird das Gemisch in Wasser eingegossen, das ausgefällte Produkt abgesaugt und mittels Aceton-Hexan-Gxadient über einer Kieselgelsäule chromatographiert.

Man erhält 3,1 g 21-Aeetoxy-6a,l6a-dimethyl-4,9(ll)-pr#g-' nadien-3,20-dion, welches in 60 ml Tetrahydrofuran gelöst '.ird. Zu dieser Lösung tropft man bei Raumtemperatur 25 ml lUrPerchlorsäure und setzt anschließend 4,55 g N-Bromsuccinimid zu. Das Gemisch wird 30 Minuten lang gerührt, dann in eine Lösung von 4,3 g Natriumsulfit und 500 ml Eiswasser eingegossen und eine v/eitere Stunde lang gerührt. Da3 abgeschiedene Produkt v/ird abgesaugt und bei 30⁰C im Vakuum getrocknet.

Man erhält 3,0 g 9a-Brom-llß-hydroxy-21-acetoxy-6a,16adimethyl-4-pregnen-3,20-dion, welches man in 25 ml Äthanol suspendiert und mit 5 g wasserfreiem Kaliumacetat versetzt. Anschließend erhitzt man die Reaktioncmischung in einer Stickstoffatmosphäre unter Rühren 1,5 Stunden lang zum Sieden, läßt sie erkalten und gießt sie in 300 ml Eiswasser, Man rührt das Gemisch eine Stunde lang, saugt das

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ausgefallene Produkt ab, v/äncht es mit Wasser und trocknet es "bei 4O⁰C im Vakuum.

Das erhaltene 21-Acetoxy-9jllß-epoxy-6or,16or-dime"Uhyl-4-pregnen-3,20-dion (2,2 f?) v.'ird portionsv/eise in eine auf -20⁰C gekühlte Mischung von 7,5 ml flüssigem Fluorwasserstoff und 15 ral Dimethylformamid eingetragen. Dar» Gemisch v/ird zwei Tage lang bei O⁰C gerührt und anschließend in eine Lösung von 30 ml konzentriertem Ammoniak in wasser eingetragen. Man saugt das abgeschiedene Produkt ab, v/äfjcht es mit Wasser, kristallisiert das erhaltene Rohprodukt aus Methylenchlorid-Diisopropylather um und erhält 2,1 g 9of-Fluor-llß-hydroxy-21-acetoxy-6a,16of-di" methyl-4-pregnen-3,20-dion vom Schmelzpunkt 198 bis 200°C.

b) Ein 2 1-Erlenmeyerkolben - mit 500 ml sterilem, wässrigen

Medium, enthaltend 1,5$ Pepton, 1,2$ Cornsteep liquor, (J-^f₀ "MgSO₄, gefüllt - wird mit einer Lyophilkultur von

± Bacillus _lQntus._XATßC 13805) -beimpf t-tmd~48 Strniöen' lang

bei 30⁰C mit 145 U/Min, geschüttelt.

--Mit 250 ml dieser"Bakteriensuspension wird ein 20 ml Glasfermenter - beschickt mit 14,75 1 sterilisierter Nährlösung bestehend aus 0,1$ Hefeextrakt, 0,5$ Cornateep liquor und 0,005$ Stärkezucker inokuliert und 24 h bei 29°C mit

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einer Belüftung von 15 1 luft/Min. und einer Rührgeschwindigkeit von 220 U/Min, germiniert.

Aus dieser Vorfermentation v/erden 0,5 1 in einen 20 1 Glasfermenter überführt, der mit 8 1 sterilisierten Mediums gleicher Zusammensetzung beschickt ist. Zur Hauptfermentation v.'erden die gleichen iechnischen Bedingungen vie bei der Vorfermentation angewendet. Nach 6 h An'./achsphase v/erden 2 g 9-i¹luor-llß~hydroxy-21-acetoxy-6a,16a-dimethyl-4"-pregnen-3,20-dion in 40 ml Dimethylformamid zugegeben und fermentiert. Nach etv/a 24 h-wirA-ili.*, falturbrühe zunächst mit 4 1 und weitere zv/eimal mit je 3 1 Methylisobuty'lketon • -ausgerührt. Die vereinigten Extrakte v/erd'en in einem Umlaufverdampfer im Vakuum bei 30 bis .35⁰C konzentriert und im Rotationsverdampfer bei maximal 40⁰C Badtemperatur Sm Vakuum zur Trockne eingeengt. Der Rückstand wird mit v/enig kaltem Hexan von Antischaummittel Hexan freigewaschen und aus Essigester umkristallisiert

~ Man erhält das 9ot-Fluor-llß,21-dihydroxy-6a,16a-dimeth.yl- - _J_,4-pregnadißjn-3^20~dion_vom-_S£!hmelzpunkt 213 bis .215⁰C.

Beispiel 12:

200 mg 9a-Pluor-llß-hydroxy-21-acetoxy-6a,l6a-dimethyll,4-pregnadien-3,20-dion v/erden in 12 ml 96?»igem Aceton gelöst, mit 137 mg N-Rronncetamid versetzt und 3,5 Stunden

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bei Raumtemperatur stehengelasoen. Dann gießt man die Reaktionsminchung in 60 ml Wasser und extrahiert sie mit Methylenchlorid. Die Methylenchloridphase wird mit Wasser neutral gewaschen, über.Natriumsulfat getrocknet und im Yakuum eingeengt. Man kristallisiert das erhaltene Rohprodukt mehrfach aus Essigester-Diisopropyläther um und erhält das 9a-3?luor-21-acetoxy-6a,16a.-dimethyl-l,4-pregnadien-3,11,20-trion vom Schmelzpunkt £02 bis 20,4⁰C.,

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Claims

worin R ein Wasserstoffatom oder eine Acylgruppe, X ein Halogenatom und Y eine ß-Halogenmethylengruppe, * deren Halogenatom ein gleichgroßes oder kleineres Atomgev/icht als X besitzt, eine ß-Hydroxymethylengruppe oder eine Carbonylgruppe bedeuten.
-2. ) -90C-Br-Om-Ilß-hy&roxy^l-aeetoxy-öajlöa-'dimeth;/!--!,4-pregnad"ien-3,20-dion
3.) 9cr-Pluor-llß-hydroxy-21-acetoxy-6a,16a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion
4.)

3,20-dion

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SCHERING AG
5.) 9a-Fluor-21-acetoxy-6ff,16or-dimeth.yl-l,4-pregnadien-3,11,20-trion
6.) 9oc~Chlor-llß-hydroxy-21-acetoxy-6a,16a-dimetliyl-l,4~preg nadien-3,20-dion
7. ) 9Oc-ChIOr-IlB,21-dihydroxy-6a,16a-dimethyl-l,4-pregnadien 3,20-dion
8,) 9a~Chlor-llß-hydroxy-21-isol>utyryloxy-6a,16a-dimethyl-1,4-pregnadien-3,20-dion
9.) 9«,llß-Dichlor-21-acetoxy-6a,16a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion
IO.) 9«,llß-Dichlor-21-hydroxy-6a,I6u-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion
11.) 9«-I^lluor-llß-h.ydroxy_r21-liexanoyloxy-6a, 16a-dimethyl-l,4-n~T, 20-dion
12.) 9of-I'luor-llß-hydroxy-21-benzoyloxy-6a,16a-dimethyl-l,4-pregna.dien-3,20-dion
13.) 21-Acetoxy-6ff,16a-dimethyl-l,4,9(11)-pregnatrien-3,20-dion

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14.) 21-Acetoxy-g,llß-epoxy~6a,16a-dimethyl-l,4-pregnadien-3,20-dion
15.) Arzneimittel auf Basis der Verbindungen gemäß Anspruch 1 bis 12
16.) Methoden zur Behandlung von Entzündungen, dadurch gekennzeichnet, daß man den Patienten ein Arzneimittel ge_cmäß Anspruch 15 verabfolgt.
17.) Verfahren zur Herstellung von 6a,16aDimethylsteroiden der allgemeinen Formel I>

CH₂OR

C=O

(D,

worin R ein Wasserstoffatom oder eine Acylgruppe, X ein Halogenatom und Y eine ß-Halogenmethylengruppe, deren Halogenatom ein gleichgroßes oder kleineres Atomgewicht als X besitzt, eine ß-Hydroxymethylengruppe oder eine Carbonyl-

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gruppe bedeuten,

dadurch gekennzeichnet, daß man in an sich bekannter Weise an die A^y^ '-Doppelbindung eines 6ot,16a-Dimethylsteroido der allgemeinen Formel II

"CH,

(II),

vorin R die gleiche Bedeutung vie in Formel I besitzt und -CpT-'TTJC-,- eine Einfach- oder Doppelbindung darstellt, Halogen, unterchlorige oder unterbromige Säure addiert, die gebildeten 9ctrChlor- oder 9a-Brom-llß-hydrox,ysteroide der Formel I ge¹ -uns chtenf alls in die entsprechenden 9,llß-Epox,yde überführt und anschließend den Epoxydring mit Fluorwasserstoff oder Chlor- /asser st off öffne't, eine gegebenenfalls im Auögangsmaterial vorhandene -Cp¹ '" i'-Gi,- Einfachbindung durch Fermentation mit einem zur Λ -Dehydrierung gebräuchlichen Mikroorganismus dehydriert,

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eine 11 ß-Hydroxygruppe gev/ünschtenfalls zur Oxogruppe oxydiert

und eine veresterte 21-Hydroxygruppe gewünschtenfalls verseift und dann gewünscht enf a.lls erneut verestert.
18.) Verfahren nach Anspruch 17 dadurch gekennzeichnet, daß man zur Halogenaddition eini Halogenkationen und ein Halogenanionen lieferndes Reagenz verwendet, welche man gleichzeitg auf die Δ-^ '-Doppelbindung einwirken läßt.
19.) Verfahren nach Anspruch 17 dadurch gekennzeichnet, daß die Anlagerung von unterhalogeniger Säure mittels Halogenkationen liefernder Reagenzien durchgeführt wird.
20.) Verfahren nach Anspruch 18 und I9 dadurch gekennzeichnet, daß man als Halogenkationen lieferndes Reagenz freies Halogen, Halogenacylamide, vorzugsweise Halogenacetainid oder Halogenacylimide, vorzugsv.-eiee Halogensuccinimid, verwendet.
—21.-) if erfahren nach Anspruch 18"" da'dxtruh" gBke'tmz"ei""chne't," daß" man als negatives Halogen lieferndes Reagenz_ Halo£en"..'ass_erstoffsäure oder Alkalihalogenid, vorzugsweise Lithiumhalogenid, verwendet.
22.) Verfahren nach Anspruch 19, 19 und 21 dadurch gekennzeichnet, daß msu^ die Halogenaddition an die /S^ '-Doppelbin-

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dung zwischen et'.-a -75°C und etwa +5O⁰C durchführt.
23.) Verfahren nach Anspruch 17 dadurch gekennzeichnet, daß man eine im Auagangsmaterial vorhandene geeättigte CC-, Gruppierung durch Fermentation mit Bacillus lentus oder Arthrobacter simplex dehydriert.

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