DE2029455A1 - Verfahren zur Herstellung eines neuen Prothrombinkomplexes - Google Patents

Verfahren zur Herstellung eines neuen Prothrombinkomplexes

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DE2029455A1 DE19702029455 DE2029455A DE2029455A1 DE 2029455 A1 DE2029455 A1 DE 2029455A1 DE 19702029455 DE19702029455 DE 19702029455 DE 2029455 A DE2029455 A DE 2029455A DE 2029455 A1 DE2029455 A1 DE 2029455A1
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Description

ΡΛΤΕΝ-ΑΝ VALTE
dr. w. Schalk · dipl-in.g. peter
DIPL.-ING.G. E.M. DANNENBERG · DR. V. SCHMIED-KOWARZI K
6 FRANKFURTAM MAIN
CR. ESCHENHEIMER STR. 39
Baxter Laboratories, Inc. Morton Grove, 111. 60 053 / USA
Verfahren zur Herstellung eines neuen Prothrombinkomplexes
Die vorliegende Erfindung benzieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung eines neuen Prothrombin-Komplexes, der die Koagulations-Faktoren Prothrombin (Paktor II), Proconvertin (Faktor VIl), den antihaemophilen Faktor B (Paktor IX) und den Stuart-Prower-Faktor (Faktor X) enthält.
Die Gerinnung; des Blutes ist ein komplizierter physiologischer Vorgang, bei dem zahlreiche, in normalem gesundem Blut anzutreffende Substanzen fuaammenwirken. Es ist bekannt, dass bei bestimmten Menschen einige, »ur Blutgerinnung beitragende Faktoren fehlen oder nur in unzureichender Menge vorhanden sind. Eine dieser Substanzen ist der antihaemophilen Faktor B (Faktor IX), der auch als Plaseathromboplastin-Komponente
■K-.-.t . ; ■ . ■ . ■ -
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(PTC) oder als Christmas-Faktor bekannt ist. Bei Personen, die unter congenitaler Haemophilia (HaemophilieB) leiden, fehlt dieser Faktor vollständig oder teilweise.
Andere, für die Blutgerinnung ebenfalls wichtige Faktoren sind die Faktoren II, VII und X. Auch diese Faktoren können, wie der Faktor IX, bei bestimmten Personen teilweise oder vollständig fehlen.
Zur Behandlung von Patienten, die unter einem Hangel an diesen Faktoren leiden, ist bekanntlich ein Plasmakonzentrat sehr geeignet, das einige oder alle der genannten Faktoren enthält. So wird z.B. in der USA- . ·.. Patentschrift 2 999 791 die Herstellung eines Prothrombin-Komplexes aus frischem Plasma durch Bariumsulfat-Adsorption beschrieben, und nach der Veröffentlichung von Soulier et al in "La Presse Medicale",
Band 72, Seiten 1223-1228 (1964), kann dieser Komplex aus frischem Plasma durch Tricalciumphosphat-Adsorption gewonnen werden. In «Brit.J.Haemat.% Band 13, Seit©n 568-580 (1967)» wird die Herstellung eines Prothrombin-Komplexes aus einer, als GL· bezeichneten, Fraktion, die reich an Globulinen ist, beschrieben. Biese G„»Fraktion wird nach Bidwell durch Alkohol-Ausfällung von Plasma erhalten und dann weiter fraktioniert, um durch Tricalciumphospast-Adaorption und Behandlung mit Diäthyläther bei niedrigen Temperatures, ©inen Prothrombin-Komplex zu gewinnen.
Ziel der vorliegenden Erfindung ist dia S©fesffuag ©ines neuen-Verfahrens zur Herstellung eines P?othroi9bin«>Koaip3.exes· ·
Weiterhin soll ein neuer Prothrombin-Komplex mit hoher Wirksamkeit geschaffen werden, der intravenös und intramuscular injiziert werden kann.
Unter der Bezeichnung "Prothrombin-Komplex" ist ein Konzentrat von Blutproteinen zu verstehen, das zur Blutgerinnung beiträgt und im wesentlichen aus den Faktoren II, YII, IX und X besteht.
Erfindungsgemäss wird ein neuer Prothrombin-Komplex aus einer Plasmafraktion hergestellt, die die Faktoren II, TII, IX und X enthält, vorzugsweise aus einer Cohn-Plasmafraktion der Gruppe von II + III, III,
/oder . -
IH-O1 IV-1 und/lV-1 + IV-4. Diese Cohn-Fraktionen sind im wesentlichen ©Ι-, ß- und/oder V*-Globulin-Fraktionen von Blutplasma und werden durch
aufeinanderfolgende'
/ .Ausfällungen mit kaltem Äthanol erhalten; eine genaue Beschreibung dieser Fraktionen ist dem Band 68 des "J.Am.Chem.Soc", Seiten 495-575 (1946), zu entnehmen.
Ein besonderer Vorteil des erfindungsgemässen Verfahrens ist darin zu sehen, dass die als Ausgangsmaterial verwendeten Cohn-Plasmafraktionen sowohl aus überaltertem (outdated) wie auch aus frischem Plasma gewonnen werden können. So kann also eine sonst zu verwerfende, überalterte Plasmafraktion als Ausgangsmaterial.für das erfindungsgemässe Verfah-
ren dienen.
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Gemäss einer bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemässen Verfah= rsns wird die Cohn-Plasmafraktion, vorzugsweise eine Fraktion IY-1, in einer normalen physiologischen Kochsalzlösung (ca» O9 9 % Kochsalz) suspendiert^ der pH-Wert auf etwa 6}8 bis etwa 7,2 eingestellt und tribasisches Calciumphosphat sorgfältig mit der Suspension vermischt„ mn die Koagulationsfaktoren zu adsorbieren=, Die so erhaltene, adsorbiertes Protein enthaltende tribasische Calciumphosphat-Ausfällung wird dann sorgfältig mit etwa O9O5~M~ bis etwa O^-lf-Trinatriumciträt vermischt j-worauf die überstehende Flüssigkeits die die gewünschten Koagulationsfaktoren enthält» gewonnen wird«, Die überstehende Flüssigkeit wird, vorzugsweise nach Zugabe eines Abtrennungsmittels für Calcimaionen, zweimal mit Polyäthylengjykol ausgefällt? zuerst bei einem pH=7/ert von etwa 6S8 bis etwa 8s0 und bis zu einer Konzentration von etwa 5 Gew.-^ bis etua 10 Gew.-ji Polyäthylenglykolp wobei die überste= hende Flüssigkeit gewonnen wirdj, und dann bei einem pH-Wert von etwa 5|0 bis etwa 5s4 ^nQ- ^is 3^ einer Konzentration des Polyäthylenglykols von wenigstens eti?a 20 Gei7»=^s besogen auf das Gewicht der gewonnenen überstehenden Flüssigkeit9 wobei die Ausfällung zurückbehalten wird» Diese Ausfällung; die den aktiven Prothrombin-Komplex enthält t \¥ird. dann voraugs?/eise in citratisierter Kochsalzlösung suspendiert t bis ein Tollmen von etwa I/25 bis etwa 1/1O des Volumens der ursprünglichen Cohn-Plasmafraktion-Suspension erreicht v.forden ist»
Sobald das Ausgangsmaterial erfindungsgemäss supendiert worden ist, erfolgt die Adsorption dar Xoagulationsfaktoran, indsa man den pH=?/srt der Suspension auf etwa 6S8 bis etwa 7»2 einstellt und anschliesssnd
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eine kleine Menge tribasisch.es Calciumphosphat zusetzt. Das erfindungsgemäss verwendete tribasische Calciumphosphat ist ein polymeres Material der Formel 1OCaO.3P2O1-.H3O oder Ca10(OH)2(PO )g. Durch Verwendung von etwa 0,5 bis etwa 2 Gew.-$ tribasischem Calciumphosphat kann eine gute Adsorption der Koagulationsfaktoren erzielt werden* eine Konzentration von etwa 1 Gew.-^ wird bevorzugt. Eine maximale Adsorption der Koagulationsfaktoren wird erzielt, wenn sich das tribasische Calciumphosphat etwa 15 bis etwa 50 Minuten mit der Suspension vermischen kann.
Die adsorbiertes protein enthaltende tribasische Calciumphosphat-Ausfällung wird dann durch Zentrifugieren abgetrennt und in Trinatriumcitrat suspendiert, wobei das Volumen der so erhaltenen Suspension vorzugsweise etwa I/10 bis etwa I/2OO des Volumens der Ausgangs-Suspension beträgt. Eine wässrige Lösung aus bis zu etwa 0,005-molarem Trinatriumcitrat kann zum Auswaschen der gegebenenfalls anwesenden verunreinigenden Proteine verwendet werden, während die Koagulationsfaktoren mit etwa 0,05- bis etwa 0,2-molarem Trinatriumcitrat aus dem tribasischen Calciumphosphat-Adsorbierungsmittel ausgewaschen werden. Die Ausfällung wird vorzugsweise in dem Trinatriumcitrat suspendiert, wobei etwa 15 bis etwa 50 Minuten ständig gerührt wird, um eine maximale Aus-
Eltiierung .
waschung/der verunreinigenden Proteine und der gewünschten Koagulationsfaktoren zu erzielen. Diese Substanzen werden vorzugsweise durch Zentrifugieren unter ständigem Rühren von den Tricalciumphosphat-Teilchen getrennt. "
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Ό29455
Nach Entfernung der tribasischen Calciumphosphat-Ausfällung wird der Lösung vorzugsweise ein Abtrennunungsmittel für Calciumionen zugesetzt/ s.B. das Dinatriumsala von Äthylendiaaiintetraessigsäure» Vorzugsweise werden auf je 1 1 Lösung etwa 3 bis 4 g des Dinatriumsalzes von Ä'thylendiamintetraessigsäure (0,01 M) verwendet«,
Das erfindungsgemäss als Ausfällungspittsl verwendete Polyäthylenglykol ist ein Polymerisat mit hohem Molekulraargewicht, das im allgemeinen
durch Umsetzung von Ithylenozyd mit Ätliylenglykol odsr Wasser herge~ stellt wird und folgende Strukturformel aufweist8
In dieser Formel steht η für die durchschnittliche Anzahl der Osyäthylengruppen« Für die ©rfisduHgsgeaässen Zwecke sollte dieses Polyäthylenglykol nicht toxisch sein9 und sein Molekulargewicht kann zwischen etwa 200 uad etwa 20 000 liegeap. vorzugsweise aiiischen etwa 400 und etwa 6000» Bevorzugt wird PEG 400O9 ein Polyäthylsnglykol mit eiaea durchschnittlichen Mol©kularg©wiclit von @twa 4000° Di® Ausfällung mit diesen Polyäthylsaglykolen erfolgt vorsugsrasis® bei Zimmertemperatur, d.h. etwa 25°O
hintereinander
Nachdem zweimal/mit Polyäthylenglyk-ol ausgefällt vforden ist9 wird dia erneut suspendierte Polyäthylenglykol=Ausfällung? die doa aktiven Pro= throfflbin-Komplsx enthält9 vorgHgswäis© lyophilisiert oder gsfrierg©-_ trocksietj nachdes giaerst ®ia Koagialations=SstotgHiitt©l9 S0B0
in einer Menge von etwa 1 bis etwa 10 Einheiten pro ecm (U.S. Pharmacopeia-Einheiten) zugegeben, der pH-Wert auf etwa 6,8 gebracht und filtriert wurde, um unerwünschte Teilchen zu entfernen und gleichzeitig ein steriles Produkt ohne Erhitzen zu erhalten, Bas trockene, lyophilisierte Produkt ist stabil und kann vor der Verwendung bei intravenösen, subcutanen oder intramusculären Injektionen mit Wasser rekon~ stituiert werden. Durch intravenöse, subcutane oder intramuscular Ver-.abfolgung des Prothrombin-Komplexes läsat sich vorübergehend der Gehalt an Faktoren II, VII, IX und X bei Personen, denen diese Faktoren fehlen, korrigieren; ausserdem können durch diese Injektionen Blutungen zum Stillstand gebracht und/oder zu erwartende Blutungen verhindert werden, z.B. Blutungsstörungen bei Leberkrankheiten oder haemorrhagisehe Erkrankungen bei Neugeborenen,
fenr. das erfindungsgemäss verwendete Ausgangsmaterial unlösliche Teilchen, Plasminogen oder Lipide, enthält, wie z.B. bei den Gohn-Plasmafraktionen III und III-O, so muss nach Suspendierung des Ausgangsma~ terisls gleich zu Beginn*des Verfahrens eine zusätzliche Ausfallungsstufe mit Polyäthylenglykcl eingeschoben werden. Sobald eine Suspension erhalten worden ist, wird der pH-Wert auf etwa 4,6 bis etwa 7,2 gebracht, Polyäthylenglykol bis zu einer Konzentration von etwa 1,5 bis etwa 10 % zugegeben und die Suspension zentrifugiert. Durch dieses Ausfallungsverfahren werden die obengenannten, unerwünschten Stoffe und verschiedene andere verunreinigende Proteine, die aus der vorhergehenden Fraktionierung stammen, entfernt. Wird eine Cohn-
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?lasHiafraktion-III=Paste als Ausgangsmaterial verwendet, so besitzt ■Μ·-2 Suspension anfangs einen pH~lfert- von etwa 5p4j un(i die Ausfällung mit Polyätkylenglykol erfolgt zweckmässigerweise, indem man den pH·= '?ϊγϊ dieser Suspension mit einem fei&a44s«&©5> Reaktionsmittel auf etwa 4j6 bis etwa 5j2s vorzugsweise auf etwa 4»8? senkt und dann Polyäthylen- ;5;l„yicol bis zu einer Konzentration von etwa 1,5 Gewo-$ ^2-s etwa 3s5 ^a -rorsugs^eise etwa 2<,5 GevJO~^9 mit der Suspension vermischt ο
■"iia er-findungsgemäss "bevorzugtes alkalisches Seaktionsmittel sur Regelung des pH-Wertes ist eine wässrige Lösung von etwa 1-N=Natriumhydroxydo Anstelle von Matz-'iumhydroxyd kann jedoch ZoB0 auch Natrium-= bicarbonat verv/endet werden« Wird zur Regelung des pH-Wex'tes Säure benötigt,, so v/ird eine wässrige Lösung von etwa 1-lf=Salzsäure bevorsagt.
Die nachstehenden Beispiele dienen zur Erläuterung des erfindungsgemäs sea Verfahrens. Wenn nicht anders angegeben, verstehen sich alle ge= nannten Teile und Prozentsätze auf einer Gewichts-vOlumen-Basis (Gewicht/Yolumen).
1 O 9"8 O 9 / 19 9
Beispiel 1
Eine Cohn-Plasinafraktion IV-1 wurde in normaler physiologischer Kochsalzlösung in einer Konzentration von 10 ^ (Gewicht/Volumen) suspendiert und mit 1-N-NaOH auf einen pH-Wert von 7>2 gebracht. Dann wurden 500 g tribasisches Calciumphosphat zu 50 1 dieser Suspension der Fraktion IV-1 gegeben, und die Mischung wurde etwa 30 Minuten gerührt. Die Suspension wurde anschliessend zentrifugiert und die überstehende Flüssigkeit verworfen. Die zurückbehaltene Ausfällung wurde in 0,1-M-Trinatriumcitrat bis zu einem Volumen von 5 1 suspendiert. Die Suspension wurde erneut zentrifugiert und die Ausfällung wurde verworfen. Dann wurde der pH-Wert der gewonnenen überstehenden Flüssigkeit (etwa
51) mit 1-N-HCl auf 7»2 gebracht; es wurde Polyäthylenglykol 4OOO bis zut
Konzentration
einer / von 5 $ zugegeben und die so erhaltene Suspension etwa 30 Minuten gerührt. Die Suspension wurde durch Zentrifugieren geklärt, wobei die überstehende Flüssigkeit behalten und die Ausfällung verworfen wurde. Der pH-Wert der überstehenden Flüssigkeit wurde mit 1-N-HCl auf 5»2 gebracht, und dann wurden Polyäthylenglykol 4OOO zugegeben, bis eine Konzentration von 20 i<> erhalten worden war. Die Suspension wurde zentrifugiert und die gewonnene Ausfällung in citratisierter Kochsalzlösung (1 Teil 0,1 -M-Trinatriumcitrat auf 4 Teile 0,9 <$> Natriumchlorid) bis zu einem Volumen von 2 bis 5 1 gelöst; dieses Volumen entsprach I/25 bis I/IO des Volumens der ursprünglichen Suspension der Fraktion IV-1. Es wurde nun Heparin in einer Menge von 1 Einheit pro ecm zugesetzt, und die Lösung wurde geklärt und sterilisiert, indem sie durch eine Kombination von Membranfiltern mit abgestufter
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Porengrösse geleitet wurde. Bann wurde die Lösung unter aseptischen Bedingungen in sterile Flaschen eines Fassungsvermögens von 10 ecm bis 30 ecm gefüllt, gefriergetrocknet und verschlossen. Das gefriergetrocknete Material kann mit sterilem w'ass.er rekonstituiert und dann durch intravenöse, subcutane oder intramusculäre Injektion Patienten verabreicht werden, die an einem Mangel der genannten Koagulationsfaktoren, insbesondere des Faktors IX, leiden. Me Faktor~IX-Wirksamkeit des so erhaltenen Produktes beträgt etwa das 20-Fache eines
gleichen Volumens an normalem .'Gesamtplasma und ist, verglichen mit, normalem Gesamtplasma, · in etwa 1/18 der Proteinmenge enthalten«.
Beispiel 2
Eine Cohn-Plasmafraktion-IXI-Paste aus frischem Plasma wurde in 0,85 foiger Kochsalzlösung bis zu einem Yolumen suspendiert, das 1/5 des Volumens des ursprünglichen Plasmas entsprach, und dann bis zur Erzielung einer homogenen Suspension gerührt» Der pH-Wert wurde mit einer wässrigen Lösung von 1 -N-S&&9&GS&k^4&O3E^&- auf 498 gebrachte Darauf wurde die Suspension zentrifugiert, und au der gewonnenen überstehenden
bis Flüssigkeit wurde PolyäthylenglykoX (PSG 4000)/su siner Konzentration von 2,5 fo gegeben» Nachdem 30 Minuten vermischt worden war* wurde die Suspension zentrifugiert t und der pH-Wert der überstehenden Flüssigkeit wurde mit "1-M-NaOH auf T9Q gebracht,= Dann wurd© tribasi-
•f aches Caloiumphosphat (M.F.) zu des überstehenden Flüssigkeit /gegeben.,
Die so erhaltene tribasischa Caleiuaphosphat=Amsfällung wxxa® in 0,005-M-Trinati'iuacitrßt suspendiert ρ bis das Volumen 1/2ΟΟ des Volumens der ursprünglichen Cohn-Fraktion-III'betrüge MacadsEi 30 Minuten .+
·/ bis zu einer Konzentration von 1 $"
0971795 st/ft W
bei 5° gemischt worden war, wurde die Suspension zentrifugiert, um die unerwünschten Verunreinigungen zusammen mit der überstehenden Flüssigkeit zu entfernen. Die zurückbehaltene Ausfällung wurde in 0,2-M-Trinatriumcitrat bis zu einem Volumen von 1/200 der ursprünglichen Cohn-Fraktion-III suspendiert. Die Suspension wurde erneut 30 Minuten bei 5 gemischt und dann zentrifugiert, um die tribasischen Calciumphosphatteilohen zu entfernen. Das Dinatriumsalz von Äthylendiamintetraessigsäure wurde zu der überstehenden Flüssigkeit bis zu einer Molarität von 0,01 in bezug auf das Dinatriumsalz der Äthylendiamintetraessigsäure gegeben, und dann wurde der pH-Wert mit 2-N-Essigsäure auf 6,8 gebracht. Es wurde soviel PEG 4OOO zugesetzt, dass die abschlies» sende Konzentration 10 % betrug. Die sich bildende Ausfällung wurde verworfen. Der pH-Wert der überstehenden Flüssigkeit wurde auf 5»2 gebracht, und es wurde PEG 4OOO bis zu einer Konzentration von 20 $ zugesetzt. Die Suspension wurde zentrifugiert und die gewonnene Ausfällung in citratisierter Kochsalzlösung (1 Teil 0,1-M-Natriumcitrat auf 9 Teile einer 5 $igen Natriumchloridlösung) bis zu einem Volumen gelöst, das 40 Einheiten des Faktors IX pro ecm lieferte. Der pH-Wert wurde mit 1-N-Natriumhydroxyd auf 6,8 gebracht. Dann wurde Heparin in einer Menge von 3 Einheiten pro ecm zugegeben, und die Lösung wurde filtriert, indem sie'durch eine Reihe von Millipore-Filtern mit abgestufter Porengrösse geleitet wurde. Die Lösung wurde unter aseptischen Bedingungen in sterile 100-ccm-Glasflaschen gegeben, wobei in jede Flasche 20 ecm Losung gefüllt wurden. Nach dem Gefrieren (shell-freezing) und dem Gefriertrocknen unter aseptischen Bedingungen v/urden die Flaschen im Vakuum mit sterilen Verschlüssen versehen. Das so erhaltene
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trockene produkt kann pro Einheit mit jeweils 20 ecm sterilem Wasser · aufgefüllt und dann für intravenöse oder intramusculäre Injektionen verwendet werden.
Beispiel 5
Das Verfahren des Beispiels 2 wurde wiederholt„ wobei jedoch die üohn-Plasmafraktion-III nicht aus frischem^ sondern aus überaltertem Plasma gewonnen wurde <> Das von einer Blutbank erhaltene Plasma war 2 lochen "bis 2 Monate alt und bis'su 9 Wochen bei -25°CO gelagert worden9. bevor es entsprechend dem Verfahren des Beispiels 1 verarbeitet wurde» Der auf diese V/eise erhaltene Prothrombin-Komplex wurde nach der Auffüllung mit sterilem Y/asser wie folgt analysiert?
a) Gehalt an Faktor Ils Die Prothrombin-Wirksamkeit der Lösung wurde gemäss den Verfahren von Ware und Seegers9 "Am»JoClin=Patholo"s Band 19, Seiten 471-482 (1949), und Wagner et al, "Blood Coagulations, Hemorrhage and Thrombosis" } Tocantins und Kazalj herausgegeben von Grune and Stratton, lew lorkj, Seiten 159-165 (1964) ? bestimmt. -
b) Gehalt an Faktor IXs .Die Lösung wurde gemäß dem mit Kaolin aktivierten Teüöiro-mboplastin-Zeitkorrektur-Verfahren in "Hyland Reference Manual of Coagulation Procedures", erschienen von den Hyland Laboratories, Los Angeles, Ca., Seite 19-21 (2. Aufl,; Ι96Ψ) auf FTC Wirksamkeit untersucht .
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c) Thrombin-Wirksamkeit: Die Anwesenheit von Thrombin wurde ermittelt, indem die Verklumpungszeit von recalcifiziertem normalem Plasma bei verschiedenen Verdünnungen gemäsa dem Verfahren von Bidwell und Dike, "Treatment of Hemophilia and Other Coagulation Disorders", bearbeitet von Biggs und MacFarlane, herausgegeben durch F-.A»Davis Co., Philadelphia, Seiten 62-69 (1966), bestimmt wurde.
d) Gesamt-proteingehalt: Der Gesamt-Proteingehalt wurde durch TJltraviolett-Adsorption bei einer Wellenlänge von 280 πω bestimmt.
Die obigen Verfahren ergaben, dass der Prothrombin-Komplex dieses Beispiels keine Thrombin-Wirksamkeit zeigte und im Durchschnitt etwa θ mg Protein pro ecm enthielt. Die durchschnittliche Faktor-IX-Wirksamkeit der proben betrug etwa das 20- bis 4Q~fache eines gleichen Volumens an normalem Gesamtplasma, und auch die durchschnittliche Faktor-Ϊϊ-Wirksamkeit war etwa 5- bis 15-mal so groiS wie die eines gleichen Volumens an Gesamtplasma. Da normales Gesamtplasma etwa 70 mg Protein pro ecm enthält, ist die Faktor-IX-Wirksamkeit des Prothrombin-Komplexes dieses Beispiels in einer Protein-Menge enthalten, die nur etwa 1/200 bis 1/400 der Proteinmenge entspricht, die bei normalem Plasma eine ähnliche Faktor-IX-Wirksamkeit hervorrufen würde. Die Faktor-II-Wirksamkeit kann mit dem Prothrombin-Komplex dieses Beispiels mit I/50 bis 1/130 der troteinmenge erzielt werden, die bei normalem Plasma für die gleiche Wirkung benötigt wird. .
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Auch die Faktor-VII- und Faktor~X-Wirksamkeiten des Prothrombin-Komplexes dieses Beispiels sind,, verglichen mit normalem Gesamt plasma, sehr hoch. Sie werden im allgemeinen sur Bestimmung des Procomrertin-Stuart» Prower-Kompleses zusammen gemessen»
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Claims (6)

Patentansprüche :
1. Verfahren zur Herstellung eines Prothrombin-Komplexes, dadurch
ausgewählt aus
gekennzeichnet, dass man eine Cohn-Plasmafraktion/der Gruppe von II + III, III, IH-O, IV-1 und IV-1 + IY -4 in normaler physiologischer Kochsalzlösung suspendiert, den pH-Wert der Suspension auf etwa 6,8 bis etwa 7»2 einstellt, die überstehende Flüssigkeit zur Adsorption der Koagulationsfaktoren sorgfältig mit tribasischem Calciumphosphat vermischt, die adsorbiertes Protein enthaltende Tricalciumphosphat-Ausfällung sorgfältig mit etwa 0,05-M- bis etwa 0,2-M-Trinatriumcitrat vermischt und die so erhaltene überstehende Flüssigkeit gewinnt, und die gewonnene überstehende Flüssigkeit zweimal mit Polyäthylenglykol eines Molekulargewichts von etwa 200 bis etwa 20 000 ausfällt, zuerst bei einem pH-Wert von etwa 6,8 bis etwa 8,0 und einer Polyäthylenglykol-Konzentration von etwa 5 f° fcis etwa 10 "jo unter Gewinnung der überstehenden Flüssigkeit und dann bei einem pH-Wert von etwa 5»0 bis etwa 5»4 und einer Polyäthvlenglykol-Konzentration von wenigstens etwa
jeweils ·
20 Gew.-^,/bezogen auf das Gewicht der überstehenden Flüssigkeit, wobei die so erhaltene Ausfällung als aktiver Prothrombin-Komplex gewonnen wird.
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2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass PoIyäthylenglykol mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht von etna 400 bis etwa 6000, vorzugsweise etwa 4000, verwendet wird.
Verfahren nach Anspruch 1 und 2g dadurch gekennzeichnet, dass der aktive Prothrombin-Komplex bis zu einem Volumen von etwa 1/25 bis etwa I/IO des Volumens der ursprünglichen Cohn-Plasmafraktion-Suspension in citratisierter Kochsalzlösung suspendiert wird.
4. Verfahren nach Anspruch 1 bis 3» dadurch gekennzeichnet» dass durch Lyophilisierung ein praktisch trockenes Produkt erhalten wird.
5. Verfahren nach Anspruch 1 bis 4· dadurch gekennzeichnet, dass eine Cohn-Plasinafraktion-IV-1 verwendet wird.
6. Verfahren nach Anspruch 1 bis 4· dadurch gekennzeichnet, dass man eine Cohn-Plasmafraktion III verwendet und die Kochsalz-Suspension zu Beginn 4es Verfahrens einer zusätzlichen Ausfällungsstufe mit Polyäthylenglykol eines Molekulargewicht von etwa 200 bis etwa 20 000 bei einem pH-Wert von etwa 4 »6 bis etwa. 5t2 und einer Polyäthylengl.vkol-Konzentration von etwa 1,5 bis etwa 3,5 $ aussetzt, wobei die überstehende Flüssigkeit in die nächste Verfahrensstufe übergeführt wird.
Der Patentanwalt:
DE2029455A 1969-06-19 1970-06-15 Verfahren zur Herstellung eines neuen Prothrombinkomplexes Expired DE2029455C3 (de)

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DE2029455B2 DE2029455B2 (de) 1978-08-24
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