DE2019218A1 - Verfahren zur Herstellung von Zellkulturkonzentraten - Google Patents
Verfahren zur Herstellung von ZellkulturkonzentratenInfo
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Description
"Verfahren zur Herstellung von Zellkulturkonzentraten" *
Konzentrate aus bakteriellen Zellkulturen mit einer erhöhten
Aktivität können durch ein Verfahren hergestellt werden, bei dem man ein flüssiges Kulturmedium, das mit Protease behandelte Milch oder mit Protease behandelte Molke als Hauptnährstoff
quelle und Kohlenhydrate enthält, mit einer Bakterienkultur von Streptococcus lactis, Streptococcus durans,
Streptococcus thermophilus, Lactobacillus bulgaricus oder Leuconostoc citrovorum impft, das so geimpfte Medium zur
Züchtung der Bakterienzellen bei einem pH-Wert in der Mitte
zwischen ungefähr 5 und ungefähr 6 inkubiert und die Inkubation
solange fortsetzt, bis die späte logarithmische Phase des Zellenwachstums erreicht ist, das Medium abkühlt und die
Zellen der Bakterienkultur von dem flüssigen Teil des Kulturmediums abtrennt, wobei ein Konzentrat der Zellkulturen
entsteht.
Bei der Herstellung von Käse wird z.B. Milch mit eine Bakterienkultur und mit einem Milchgerinnungsmittel, wie
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. . - 1A-37 760
Reniiin, behandelt, wobei ein fester Quark entsteht, der dann
von der flüssigen Molke abgetrennt wird. Der Quark wird dann weiterverarbeitet und zu dem fertigen Käse gereift. Die
Bakterienkultur oder "Starterkultur" wird verwendet, um Milchsäure freizusetzen und dadurch die gewünschten sauren Bedingungen
für die Käseherstellung zu erzeugen. Diese Starterkultur erzeugt auch den gewünschten Geschmack, den Körper,die
Struktur und den Geruch des entstehenden Käses.
Bei einer typischen bekannten·Käseherstellungsvorrichtung wird
eine gefriergetrocknete Bakterienkultur verwendet, um. ein verhältnismäßig kleines Volumen von ungefähr 0,6 1 (2/3 Quarz)
sterilisierter, nicht fetter Milch mit einem Feststoffgehalt von ungefähr 10 bis 12 % (Gew.-/Vol.)zu impfen. Dieses Gemisch
wird dann inkubiert, wobei die gewünschte Menge Bakterien gebildet wird. Die entstehende Kultur wird dann in einer Menge
von 1 Vol.-% verwendet,um eine Menge von ungefähr 11 1
(3 Gallons) teilweise sterilisierter, nicht fetter Milch zu impfen. Dieses Gemisch wird dann inkubiert, wobei eine
"Mutterkultur" entsteht. Die Mutterkültur wird dann vollständig
verwendet, um ungefähr 1100 1 (300 Gallons) teilweise sterilisierter, nicht fetter Milch zu impfen. Dieses Gemisch
wird dann inkubiert, wobei eine Gesamtstarterkultur ("bulk starter culture")entsteht, die dann in Mengen von 1 Vol.-%
verwendet wird, um die Produktionschargen pasteurisierter oder wärmebehandelter Milch zu impfen. Diese Produktionschargen von ungefähr 110 000 1 (30 000 Gallons) geimpfter
Milch werden dann zur Käseherstellung verwendet.
Dieses bekannte Verfahren besitzt verschiedene Nachteile für den Käsehersteller. Als erstes erfordert es viele getrennte
Wachstumsschritte zur Herstellung der Starterkultur, die dann verwendet wird, um die Produktionschargeri von Milch zu impfen.
Derartig viele Wachstumsschritte erfordern Zeit, Arbeit und
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P ; : : ■ ■■ ■■ ■ ; ■■.
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ßxtra-Vorrichtungen. Als zweites besteht bei jedem Impf-
und damit verbundenen Wachstumsschritt die Möglichkeit einer Verunreinigung durch unerwünschte Mikroorganismen und
Bakteriophagen. ...
In dem Versuch, die oben angegebenen Nachteile zu überwinden,
ist ein Verfahren beschrieben worden, bei dem ein Konzentrat
einer Bakterienkultur hergestellt wird, das direkt in einem
angemessen kleinen Volumen verwendet werden kann, um Milch
zur Bildung von Starterkulturen zur Käseherstellung zu impfen
oder direkt Produktionschargen von Milch für Milchprodukte,. . wie Buttermilch und Yoghurt zu impfen* Dieses bekannte Konzentrat wurde im allgemeinen dadurch hergestellt, daß man die
gewünschte Bakterienkultur in einem anderen Medium als Milch^,
züchtete, bis eine gewünschte Anzahl von Bakterienzellen ge*
bildet worden war· Die Zellen wurden dann von dem flüssigen Anteil des Mediums abgetrennt* Das Konzentrat konnte dann
direkt verwendet werden, um die Starterkultur zu impfen oder
es wurde vorzugsweise gefroren und im gefrorenen Zustand bei
einer Temperatur von ungefähr -2ÖQC gehalten, bis es später
verwendet wurde. Das Zellkonzentrat konnte auf diese Weise an
einem Ort hergestellt und im gefrorenen Zustand an schiedene Käsehersteller, z.B. an anderen Orten zur
den Verwendung verschickt werden« Diese bekannten Starterkulturkonzentrate waren im allgemeinen nicht geeignet*. Sie
besaßen eine nicht reproduzierbare Aktivität und erforderten
häufig unerwünscht längere Arbeitszeiten, um 2UB. bei der
Käseherstellung die gewünschte Milchkoagulation zu erreichen.
Einige dieser unerwünschten Eigenschaften der bekannten Konzentrate beruhten auf der Tatsache, daß sie aus einem änderen
Medium als Milch hergestellt worden waren. Wenn das Zellkonzentrat anschließend in Milch gegeben wurde, erlitten die Zellen
einen beachtlichen Schock durch die Unterschiede in dem
Kulturmedium. Selbst wenn milchhaltige Medien verwendet wurden,
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waren die erhaltenen Konzentrate noch nicht geeignet. Die bekannten milchhaltigen Medien besaßen auch den Nachteil,
daß ein koaguliertes Kasein entstand, das bei der Abtrennung des Zellkonzentrates störte.
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren, bei dem ein flüssiges Kulturmedium, das Stoffe, wie mit Protease behandelte
Milch und mit Protease behandelte Molke als Hauptnährstoffquellen
sowie.Kohlenhydrate enthält, mit einer Milchsäure erzeugenden
Bakterienkultur, wie Streptococcus lactis, Streptococcus durans, Streptococcus thermophilus, Lactobacillus
bulgaricus oder Leuconostoc citrovorum geimpft wird und dieses geimpfte Medium bei einem pH-Wert, zwischen ungefähr 5 und ungefähr
6 inkubiert wird, um die Bakterienzellen zu züchten und die Inkubation solange fortgesetzt wird, bis die späte
logarithmische Phase des Zellenwachstums erreicht wird, das Medium abgekühlt und die Bakterienzellen von dem flüssigen
Teil des Kulturmediums abgetrennt werden, wobei ein Konzentrat der Zellkultur entsteht.
Das bei dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendete Kulturmedium
sollte zwischen ungefähr 0,5 und ungefähr 10 % (Gew./Vol.) Peststoffe von nicht fetter Milch oder gefriergetrocknete
Käsemolke oder ein Gemisch dieser Stoffe enthalten. Vorzugsweise sollte das Kulturmedium zwischen ungefähr 3 und ungefähr
10 % (Gew. /Vol.) dieser Stoffe enthalten. Dieses wäßrige Gemisch wird dann ungefähr 2 bis ungefähr 5 k bei ungefähr 40 bis
ungefähr 50°G mit einer Protease zur Reaktion gebracht. Die
Proteasekonzentration in dem wäßrigen Gemisch beträgt zwischen ungefähr 0,001 bis ungefähr 1 % (Gew./Vol.). Die für dieses
Verfahren geeigneten Proteasen sind bekannte Substanzen und
werden aus mikrobiologischen, tierischen oder pflanzlichen Quellen gewonnen. Die Aktivitäten dieser Enzyme können in
Northrop-Einheiten pro g oder in anderen bekannten Einheiten an-
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gegeben werden. Diese Enzyme sollten vorzugsweise im wesentlichen keine Lipaseaktivität besitzen.
Obwohl die oben angegebene, mit Protease behandelte Milch
oder mit Protease behandelte Molke oder deren Gemische die
Hauptquelle für Nährstoffe und Kohlehydrate in dem Kulturmedium darstellen, ist es oft. wünschenswert, andere, das Bakterienwachstum anregende Substanzen zuzusetzen. Einer oder
mehrere der folgenden Stoffe können in den angegebenen Mengen zugesetzt werden:
Zusatz . %
| (Gew. /VoI, | .) | |
| Hefehydrolysat | 0,1 - | 0,5 |
| Maiswasser (Corn Steep Liquor) | 0,1 - | 2,0 |
| Na tr iumc i t r at | 0,05 -■ | 0,2 |
| Natrium- oder Kaliumlactat | 0,05 -■ | 0,5 |
| Lactose | 0,5 ■- | 3,0 |
| Dextrose | 0,5 - | 3,0 |
| Sorbitan-Monooleat | 0,01 - | 0,1 |
Das Kulturmedium kann auch ungefähr 3 bis 6 % (Gew./Vol.)
Feststoffe von nicht fetter Milch oder ein Gemisch dieser Feststoffe und Phosphatsalze, wie Diammonrumphosphat, Monoammoniumphosphat,
Dinatriumphosphat u*ä. enthalten« Mindestens
50 Gew.-% der Phosphatsalze sollten Ammoniumphosphat sein. Wenn solche Milchfeststoffe zugesetzt werden, werden sie ■
mehr dazu verwendet, um das Kulturmedium abzupuffern, als
als Nährstoffe» Die Proteaseaktivitat sollte in dem Medium, z.B.
durch Kochen, zerstört worden(sein, bevor solche weiteren
Milchfeststoffe zu dem Medium zugesetzt werden.
Während des Wachstums der Milchsäure erzeugenden Bakterien-
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kultur in dem oben angegebenen Medium sollte der pH-Wert
zwischen ungefähr 5 und ungefähr 6 gehalten werden. Das kann
dadurch erreicht werden, daß man am Anfang wasserlösliche
Phosphate, wie Natrium-, Kalium- oder Ammoniumphosphate in einer Menge von ungefähr 0,05 bis 1,5 % (Gew./Vol.) zusetzt, um das
Medium während des Wachstums zu puffern. Alkalische Substanzen,
wie Magnesiumcarbonat oder Calciumcarbonat können anfangs ebenfalls in ausreichenden Mengen zugesetzt werden, um den
gewünschten pH-Wert während des Wachstums aufrechtzuerhalten. Wahlweise können auch in periodischen Abständen sterile alkalische
Substanzen, wie Kaliumhydroxid oder Natriumhydroxid zugesetzt werden, um das Medium während des Bakterienwachstums
auf dem pH-Wert in dem oben angegebenen Bereich zu halten.
Es ist wichtig, den pH-Wert innerhalb dieses Bereiches zu halten, um ein möglichst starkes Zellwachstum zu erreichen.
Das Kulturmedium wird dann vor der Verwendung der Bakterienkulturen durch bekannte Verfahren sterilisiert.
Bei der Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens wird das oben beschriebene Kulturmedium, das mit Protease behandelte
Milch oder Molke enthält, mit ungefähr 0,1 bis 1 Vol-,-% der
gewünschten Milchsäure erzeugenden Bakterienkultur geimpft
und das geimpfte Medium wird bei einer Temperatur zwischen ungefähr 200C und ungefähr 4O0G ungefähr 10 bis ungefähr 18 h
inkubiert, bis die späte logarithmische Phase des Zellwachstums erreicht ist. Zu diesem Zeitpunkt beginnt die Zellproduktion
abzunehmen und die Geschwindigkeit der Milchsäureproduktion sinkt ebenfalls ab» Im einzelnen hängen die Temperaturen und
Zeiten von der speziellen Bakterienkultur ab, die verx^endet
wird. Streptococcus lactis wächst bei 21°C innerhalb von ungefähr 15 bis 16 h. Streptococcus durans wächst bei ungefähr "
37° innerhalb von 14 bis 16 h«, Streptococcus thermophilus
und Lactobacillus bulgaricus wachsen bei ungefähr 37° innerhalb von ungefähr 10 bis 14 h und Leuconostoc citrovorma bei
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-ι _.- . ■■..-■■■■ ■....■
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ungefähr 210C innerhalb von 15 bis 18 h.
Nach der Beendigung der Inkubation wird das Kulturmedium
so schnell wie möglich auf eine Temperatur zwischen ungefähr
4 und ungefähr 7°C abgekühlt..Im allgemeinen sollte dieses
Abkühlen innerhalb von 30 min oder weniger durchgeführt
werden. Wenn das Abkühlen innerhalb einer längeren Zeit als 1 h
stattfindet, kann die Kultur ungefähr 10 bis 20 % ihrer Milchsäure
erzeugenden Aktivität verlieren. -
Das gekühlte Kulturmedium wird dann mit den üblichen Mitteln,
wie einer Zentrifuge, behandelt, um die Zellen der Bakterienkultur
von dem flüssigen Anteil des Kulturmediums abzutrennen. Das entstehende Zellkulturkonzentrat kann direkt verwendet
werden, um ein Milchmedium zur Käseherstellung oder andere Milchprodukte zu impfen. Es ist wünschenswert, daß das Konzentrat
weiterhin auf eine Temperatur von mindestens unterhalb von ~73°C, günstigerweise mindestens unterhalb von-184-0C
abgekühlt und bei dieser niedrigen Temperatur aufbewahrt wird, bis es anschließend verwendet wird. Es kann dann auf
die gewünschte Temperatur,ungefähr 10 bis 210C,erwärmt und,
zum Impfen verwendet werden. Es hat sich gezeigt, daß die
Lagerung bei Temperaturen von mindestens unterhalb von -73°C
notwendig ist, um die hohe Aktivität der'Kultur zu erhalten.
Die früheren Einfrier- und Lagerungstemperaturen von ungefähr
-20 C waren in dieser Beziehung nicht ausreichend.
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher erläutert. Wenn nichts anderes angegeben ist, sind alle Prozentgehalte auf der Basis von Gew./Vol. berechnet.
Verschiedene Anteile einer wäßrigen Lösung, die 10 % Feststoffe
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von nicht fetter Milch enthielt, wurden getrennt, 5 h bei
400C mit Anteilen von 0,1 % verschiedener Proteasen behandelt.
Die entstehenden Lösungen von mit Protease behandelter Milch wurden sterilisiert und zu jeder wurden 0,5 % steriles
Magnesiumcarbonat zugesetzt. Ein Vergleichskulturmedium, das
10 % Feststoffe nicht fetter Milch enthielt und nicht mit Protease behandelt worden war, wurde ebenfalls hergestellt.
Es wurden ebenfalls sterilisiert und enthielt 0,5 % Magnesiumcarbonat.
Alle oben angegebenen Kulturmedien wurden mit 1 Vol.-% einer Streptococcus lactis-Kultur geimpft und 16 h bei 210C
inkubiert, bis die Milchsäureproduktion in dem Medium abzunehmen begann. Der pH-Wert wurde mit Magnesiumcarbonat
zwischen 5 und 6 gehalten.. Die entstehenden Kulturmedien wurden
dann innerhalb von 30 min auf ungefähr 7°0 abgekühlt und
dann zentrifugiert, wobei Konzentrate der Zellkulturen entstanden. Die Zellkonzentrate von den mit Protease behandelten
Kulturmedien waren leichter von der Flüssigkeit abzutrennen, als das Kontrollkonzentrat. Die aus der mit Protease behandelten
Milch gewonnenen Konzentrate waren geeignet zur Herstellung von Milchprodukten mit Bakterienkulturen.
Am Ende der Inkubationszeit und vor dem Zentrifugieren wurden von jedem der oben angegebenen Kulturmedien Proben entnommen.
Diese Proben wurden jeweils in einer Konzentration von 1 Vol.-% verwendet, um ein wäßriges Kulturmedium zu impfen,
das 11,5 % nicht fetter Milchfeststoffe enthielt und dieses Medium wurde 6 h bei 300C inkubiert« Die Zunahme des Säuregrads,
berechnet als Milchsäure, wurde für jedes Medium bestimmt.
Die Ergebnisse sind· unten angegeben:
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| Verwendete | Protease- | Zunahme der |
| Protease | Aktivität | Säure |
| Wg | Gesamt-% | |
| Keine - Vergleich | 0,74 | |
| Picin | 500 | 0,86 ' |
| Papain | 641 | 0,88 |
| Bakterielle Protease | 690 | 0,88 |
| Pancreatin | 350 | 0,80 |
| Bromelain | 675 | 0,84 |
Man kann aus den oben angegebenen Daten sehen, daß in den
Kulturmedien,die mit Protease behandelte Milch enthalten, deutlich höhere Mengen von Milchsäure erzeugt werden, verglichen
mit einem Medium, das nicht behandelte Milch enthält. Hieraus ergibt sich die höhere Aktivität der in mit Protease behandelter
Milch gezüchteten Kulturen.
B e i s ρ i e 1 2
Eine wäßrige Lösung, die 1,5 % nicht fetter Milchfeststoffe
und 1,5 % Molkenpulver enthielt, wurde mit 0,05 % bakterieller Protease mit einer Aktivität von 690 Northrop-Einheiten pro g
vermischt und 4 h auf 400C erhitzt. Zu der entstehenden
Lösung von mit Protease behandelter Milch und mit Protease behandelter Molke wurden 0,5 % Maiswasser zugegeben und das
Medium wurde sterilisiert. Anschließend wurden 0,5 % steriles
Calciumcarbonat zugesetzt. Das entstehende Kulturmedium wurde dann mil Vo1.-% Streptococcus lactis geimpft und 16 h
bei 210C inkubiert, bis die Milchsäureproduktion in diesem
Medium abzunehmen begann. Der pH-Wert wurde durch das
Calciumcarbonat.zwischen 5 und 6 gehalten. Das entstehende
Medium wurde dann abgekühlt und zentrifugiert, wobei ein Zellkulturkonzentrat entstand, das sich leicht abtrennen ließ. Bei
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der Untersuchung der Aktivität ergab dieses Produkt eine
0,78%ige Zunahme der Milchsäure, während, mit einer Vergleichsprobe, bei der Milch verwendet wurde, die nicht mit Protease
behandelt worden war, nur eine 0,66%ige Zunahme der Milchsäure beobachtet wurde.
Eine Lösung von mit Protease behandelter Milch und mit Protease behandelter Molke wurde entsprechend Beispiel 2 hergestellt
und mit 0,25 % Hefehydrolysat vermischt und sterilisiert,
Sie wurde mit 1 Vol.-% Streptococcus durans geimpft und 15 h
bei 37 C inkubiert, bis die Milchsäureproduktion in dem Medium abzunehmen begann. ,Der pH-Wert wurde durch kontinuierliche
Zugabe von Kaiiumhydroxid zwischen 5 und 6 gehalten. Das
entstehende Medium wurde dann abgekühlt und zentrifugiert, wobei ein Zellkulturkonzentrat entstand, das leicht abgetrennt
.werden konnte. Dieses Konzentrat wurde dann in.flüssigem
Stickstoff bei ungefähr -195°C aufbewahrt. Bei der Untersuchung
der Aktivität? erhält man mit dem angegebenen Produkt 0,33 % Milchsäure, während ein Vergleiehspräparat aus nicht behandelter
Milch nur 0,24 % ergibt.
Eine Lösung von mit Protease behandelter Mi3ßh und von mit Protease behandelter Molke wurde entsprechend Beispiel 2
hergestellt und zum. Sieden erhitzt, um etwa noch vorhandene
Proteaseaktivxtät zu zerstören und anschließend mit 4- %
nicht fetter Milchfeststoffe und 0,25 % Hefehydrolysat vermischt und sterilisierte Es xvurde dann mit 1 VoI,-% Streptococcus
thermophilus geimpft und 12 h bei 3?°G inkubiert, bis die Milclisaureproduktion in dem Medium abzunehmen begann. Der pH-Wert wurde durch die puffernde Wirkung der η
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α ■ ■ : ■■■■'■■ : ■ ■ . . ^ ;; :
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festen Milchfeststoffe und durch periodische Zugaben von
Kaiiumhydroxid auf 5»6 gehalten. Das entstehende Medium wurde
dann abgekühlt und zentrifugiert, wobei ein Zeilkulturkonzentrat entstand, das leicht abgetrennt werden konnte. Dieses
Konzentrat wurde dann in flüssigem Stickstoff aufbewahrt. Bei der Untersuchung der Aktivität erzeugte dieses Produkt 0,68%
Milchsäure, während ein Vergleichsprodukt aus nicht behandelter Milch nur 0,52 % erzeugt.
Eine Lösung von mit Protease behandelter Milch und von mit Protease behandelter Molke wurde entsprechend Beispiel 2 hergestellt
und zum Sieden erhitzt, um etwa noch vorhandene
Proteaseaktivität zu zerstören und dann mit 4 % eines Gemisches
nicht fetter Milchfeststoffe und Phosphate vermischt, wobei mehr als 50 Gew.-% der Phosphate Ammoniumphosphate waren
sowie mit 0,25 % Hefehydrolysat vermischt und sterilisiert. *
Sie wurde dann mit 1 Vol.-% Lactobacillus bulgaricüs geimpft
und 12 h bei 37°C inkubiert, bis die Milchsäureproduktion in
dem Medium abzunehmen begann. Der pH-Wert wurde durch die
puffernde Wirkung des Milchfeststoffphosphatgemisches und
durch periodische Zugabe von Kaliumhydroxid auf 5,6 gehalten.
Das entstehende Medium wurde dann abgekühlt und zentrifugiert, wobei ein Zellkulturkonzentrat entstand, das leicht abgetrennt
werden konnte. Dieses Konzentrat wurde dann in flüssigem Stickstoff aufbewahrt. Bei der Untersuchung der Aktivität
erhielt man mit diesem Produkt 0,0A % Milchsäure, während
eine Vergleichssubstanz aus nicht behandelter Milch nur 0,71 % ergab.
Eine Lösung von mit Protease behandelter Milch und mit Protease
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behandelter Molke wurde entsprechend Beispiel 2 hergestellt und zum Sieden erhitzt, um etwa noch vorhandene Proteaseaktivitat
zu zerstören und dann mit 4 % nicht fetter Milchfeststoffe,
0,25 % Hefehydrolysat und 0,1 % Natriumeitrat vermischt und sterilisiert* Sie wurde dann mit 1 Vol.-%
Leuconostoc citrovorum geimpft und 16 h bei 210Q inkubiert,
bis die Müchsäureproduktion in dem Medium abzunehmen begann. Der pH-Wert wurde durch die puffernde Wirkung der Milchsäurefeststoffe
und des Natriumeitrats zwischen 5 'Ψ& 6 gehalten.
Das entstehende Medium wurde dann abgekühlt und zentrifugiert, W wobei ein Zellkulturkonzentrat entstand, das leicht abgetrennt
werden konnte. Dieses Konzentrat wurde in flüssigem Stickstoff aufbewahrt. Beim Auszählen auf dem Objektträger
ergab sich für dieses Produkt ein Gehalt von 5,8 χ 10 aktiven
Zellen/ml, während ein Vergleichspräparat aus nicht behandelter Milch nur 0,91 χ 108 aktive Zellen/ml enthielt.
PATENTANSPRÜCHE :
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Claims (5)
1). Verfahren zur Herstellung eines Zellkulturkonzentrats,
dadurch gekennzeichnet , daß man ein ·
flüssiges Kulturmedium, das mit Protease behandelte Milch
und/oder mit.Protease behandelte.Molke als Hauptquellen für
die-Nährstoffe und Kohlehydrate enthält, mit einer Milchsäure
erzeugenden Bakterienkultur,, wie Streptococcus laetis,
Streptococcus durans, Streptococcus thermophilus,
Lactobacillus bulgaricus und Leuconostoc citrovorum impft,
dieses geimpfte Medium bei einem pH-Wert zwischen ungefähr
5 und ungefähr 6 inkubiert, um die Bakterienzellen wachsen
zu lassen, und die Inkubation fortsetzt, bis die späte
logarithmische Phase des Zellenwachstums erreicht ist, das
Medium abkühlt und die Zellen der Bakterienkultur von dem
flüssigen Anteil des Kulturmediums abtrennt,
2) Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet , daß das Zellkulturkonzentrat weiter
auf eine Temperatur von mindestens unterhalb -73 Cabgekühlt und bei dieser niedrigen Temperatur aufbewahrt wird.
3) Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch g e k e η η
zeichnet , daß das Zellkulturkonzentrat weiter
auf eine Temperatur von mindestens -1840G abgekühlt und bei
dieser niedrigen Temperatur aufbewahrt wird.
4) Verfahren nach Anspruch 1 bis 3» dadurch ge k e n'n zeichnet
, daß das Medium»bevor die Zellen der
Bakterienkultur vom flüssigen Anteil des Kulturmediums abgetrennt
werden, schnell auf eine Temperatur von ungefähr 4
Mb ungefähr 7°G abgekühlt wird.
. - 14 -
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5) Verfahren nach Anspruch 1 bis 4, "dadurch gekenn
zeichnet , daß das Medium zwischen ungefähr 3
und ungefähr 10 % (Gew./Vol.) der mit Protease behandelten Substanzen enthält. -
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| DE2319457A1 (de) * | 1973-04-17 | 1974-11-07 | Franz Xaver Julius Dipl Roiner | Verfahren zum herstellen eines kulturenkonzentrats fuer saure lebensmittel |
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Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| IE33766L (en) | 1970-10-22 |
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| GB1260247A (en) | 1972-01-12 |
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