DE2004560A1 - Diagnostische Methode und Vorrichtung zum Nachweis von Bakterien - Google Patents

Diagnostische Methode und Vorrichtung zum Nachweis von Bakterien

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DE2004560A1
DE2004560A1 DE19702004560 DE2004560A DE2004560A1 DE 2004560 A1 DE2004560 A1 DE 2004560A1 DE 19702004560 DE19702004560 DE 19702004560 DE 2004560 A DE2004560 A DE 2004560A DE 2004560 A1 DE2004560 A1 DE 2004560A1
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bacteria
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DE19702004560
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Clark Searle Lake Forest; Kenney Donald Sykes Northbrook; 111. Wadley (V.St.A.). C12k 1-00
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Abbott Laboratories
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Description

Patentanwälte
Dr. Ing. Waiter Abitz .
Dr. Dieter F.Morf
Dr. Hans-A. Brauns
8München86, Pienzenauefitr.2S . 2. Februar 1970
2606
',.' ABBOTTLABORATORIES Chicago,. Illinois (V.St.A.)
Diagnostische Methode und Vorrichtung zum Nachweis
von Bakterien
Die Erfindung betrifft ein diagnostisches Verfahren und eine Vorrichtung zum Nachweis von Bakterien, insbesondere im Harn, daa eine Kombination von vier ausgewählten Medien aufweist, welche mit der verdächtigen Probe beimpf t werden und dann über Nacht inkubiert werden. Durch Beobachtung des Bakterienwachsturas auf jedem der vier Medien und der auftretenden biochemischen Reaktionen können die in der verdächtigen Probe vorliegenden Organismen in einem Inkubationszeitraum ermittelt, quantitativ bestimmt und itentifiziert werden.
Bakterien im Urin sind ,ein Symptom für Infektionen des Harntraktes, wenn das Ausmaß an Bakterien je ml Urin im Bereich von 100 000 oder mehr liegt. Ferner fallen 87 bis 95 $> der aus derartigen Infektionsfällen isolierten Bakterien unter sechs Genera, nämlich; E. coli, Klebsialla-Aerobacter, Pseudomonas, Proteus, Staphylococcus und,
OPiöiHAL INSPECTED
Enterococcus. Um das Vorliegen eines krankheitserzeugenden Bakteriums zu ermitteln, erfolgt nach derzeitigen Methoden die Einimpfung der verdächtigen Urinprobe auf eine Blutagarplatte oder ein ähnliches Medium gewöhnlich mit einer geeichten Öse. Nach einem geeigneten Inkubationszeitraum werden die erhaltenen Bakterienkolonien gezählt. Danach erfolgen die Isolierung des Organismus und die Beimpfung einiger unterschiedlicher Medien zur Identifizierung. Nach einer zweiten Inkubationsperiode kann die Identifizierung des Bakteriums im allgemeinen abgeschlossen werden. Diese Methoden erfordern .jedoch wiederholte Beimpfungen und Inkubationen verschiedener Medien, um beispielsweise krankheitserregende Organismen zu identifizieren.
Das diagnostische Verfahren und die Vorrichtung gemäß der Erfindung bestehen in einer Kombination von vier ausgewählten Medien, die in spezifischer Kombination das Wachstum der angegebenen Bakterien unterstützen können. Bei Betrieb wird die Vorrichtung verwendet, indem jedes Medium mit einem Auftraginstrument, das in die unter Verdacht stehende Urinprobe eingetaucht und dann aufeinanderfolgend quer über die Oberflächen der vier Medien gestrichen wird, geimpft wird. Die Medien werden dann über Nacht inkubiert, wonach das Bakterium durch Beobachtung #des ersten Mediums quantitativ bestimmt werden kann. Da einige'biochemische Reaktionen in jedem der Medien auftreten können, kann der in der Urinprobe vorliegende spezifische Organismus durch Beobachtung des Bakterienwachstums in jedem der Medien identifiziert werden.
Die naoh dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendeten vier Medien weisen ein erstes angereichertes Medium auf, das
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2606 *
die Fähigkeit besitzt, das Wachstum sämtlicher Pathogene im Harntrackt zu unterstützen., Das Medium inhibiert das ■Schwärmen von Proteus, Jedoch erlaubt es das Wachstum diskreter Kolonien. Quantität, Dextrosefermentation und Katalaseproduktion werden, sämtlich auf diesem Medium bestimmt. Das zweite Medium" inhibiert gram-positive Bakterien und zeigt iactose^fermentation. Ein drittes Me- ' dium wird verwendet, welches die Produktion der Enzyme, Gelatinase und Urease nachweist, und ein viertes Medium ermittelt, wenn das Bakterium fähig ist, Citrat als eine Kohlenstoffquelle zu verwenden ■ ' A
Nach Inkübierung des Mediums über Nacht kann die quantitative Bestimmung des in dem Urin vorliegenden Bakteriums durch Zählen der Kolonien auf dem ersten Medium und Multiplikation mit einem geeigneten Paktor erfolgen, wobei die Anzahl Bakterien je ml Urinprobe erhalten wird. Durch Bestimmung der verschiedenen biochemischen Reaktionen auf dem Medium, kann eine Identifizierung der in dem Urin vorliegenden Bakterien in einer einzigen Inkubation erreicht werden. Obgleich die Erfindung in Verbindung mit der Untersuchung von Urin beschrieben wird, können die Vorrichtung und das Verfahren der Erfindung zum Nachweis von Bakterien in anderen verdächtigen Proben angewendet W werden.
Die Erfindung wird unter Beachtung der folgenden Beschreibung mit Bezug auf die Zeichnungen besser verständlich , in denen
Pig. 1 eine perspektivische Ansicht einer zur Durchführung der Erfindung geeigneten und das Medium enthaltenden Schale, "
0 0 9 8 3 8 / 2 2 2 9 ORiGiNAL INSPECTED
200A560
2606 ι.
Pig. 2 eine Querschnittsansicht längs der Linie 2-2 der Pig. 1,
Pig. 3 eine Seitansicht teilweise im Schnitt eines Auftraginstruments zum Aufbringen der unter Verdacht stehenden Probe auf das Medium und
Pig. 4 eine bildmäßige Wiedergabe einer Identifizierungskarte als bequeme Bezugnahme bei der Durchführung des Verfahrens, darstellen.
Unter Bezug auf die Zeichnungen ist in Pig. 1 eine Schale mit vier Abteilungen 11, 12, 13 und 14 dargestellt, die die Medien I, II, III bzw. IV enthalten. Ein Deckel 15 schließt in der Aufrechtstellung während des ImpfVorgangs ab und verschließt dicht während der Inkubation. Zur Erleichterung der Quantitätsbestimmung können Gitterlinien in den Boden der Abteilungen 11, 12, 13 und 14 oder Mediumschalen eingeformt sein. Nach dem Wachstum der. Bakterien kann die quantitative Bestimmung in einfacher Weise durch Auszählen der Kolonien und Multiplikation mit einem geeigneten Paktor, wie im folgenden erläutert wird, durchgeführt werden. Pig. 2 ist eine Querschnittsansicht einer der Abteilungen oder Mediumschalen, welche das Medium enthalten. Die Oberfläche des Mediumskann durch Abdecken der Abteilungen 11, 12, 13 und 14 mit einer dünnen Polie (nicht gezeigt) geschützt werden. Pig. 3 erläutert ein geeignetes Auftraginstrument (20), das einen Drahtrahmen 21 mit einer Öse oder einem Bügel 22 an einem Ende zur bequemen Handhabung und eine querverlaufende Spitze 23 an dem anderen Ende aufweist. Anliegend über die Spitze 23 und einen Teil des Rahmens 21 befindet sich ein dochtähnliches Material 24, wie beispielsweise Baumwollschnüre. Eine Hülse 25, die aus einem gewebten synthetischen Textilmaterial, z.B. Rayon, bestehen kann, ist
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über dem dochtähnlichen Material 24 angebracht. Beim Eintauchen in den Urin absorbiert der Docht 24 eine kleine Menge. Unter Anwendung eines leichten nachunten gerichte- ' ten Stoßes kann dervTechniker einen sehr gleichmäßigen Impffilm abscheiden, der die Organismen gleichmäßig über die gesamte Oberfläche des Mediums verteilt. Sämtliche vier Impfungen erfolgen durch ein einziges Eintauchen. Diese Methode erleichtert die Quantitätsbestimmung der Bakterien erheblich, da sie das unebene oder überlappende Wachstum von Kolonien ausschaltet, das bei fehlender Erfahrung auftreten kann, wenn eine geeichte Öse nach bisherigen Methodenverwendet wird. Die Breite der Spitze 23 sollte etwa l|| der Breite des Mediums in den Schalen 11, 12, 13 und 14 entsprechen. Bei einer Breite des Mediums von 25 mm sollte die Spitze 23 in gleicher Weise 25 mm aufweisen.
Die in den Abteilungen oder Schalen 11, 12, 13 und 14 enthaltenen Medien sind so ausgewählt, daß sie eine positive Identifizierung· von Bakterien,. die in der verdächtigen Probe vorliegen können, über den kürzesten Weg, der möglich ist, gestatten. Dadurch wird dem Untersuchenden eine direkte Reihe von Angaben bezüglich des spezifischen Wachsturas und der' Stoffw'echselwirksamkeit der sechs Pathogene, die am häufigsten für' Infektionen des Harntraktes verantwortlich sind, äk und ein Anzeichen für andere Pathogene, die vorliegen können, vermittelt. Mit einer einzigen Impfung und Inkubation kann der Untersuchende rasch die Anwesenheit von Eo coil, Klebsiella-Aerobacter, Pseudomonas aeruginosa, Proteus, Staphylococcus oder Enteroeocci feststellen. Ferner vermittelt die Anwendung der Vorrichtung und des Verfahrens der Erfindung wertvolle Anhaltspunkte aur. Identifizierung v/eni·= ger häufig angetroffener Organismen und weist auf die Not« wendigkeit weiterer Untersuchungen unter Anwendung von Standard-Laboratoriuinsverfahrsn hin.
·--.■■■■ , - 5> ■ ""''■-
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Die spezielle Kombination von Medien zur Herbeiführung des gewünschten Ergebnisses kann wie folgt beschrieben werden. Medium I ist ein angereichertes Dextrosemedium, um das Wachstum sämtlicher Pathogene im Harntrakt zu ermöglichen und Katalasereaktionen und Dextrosefermentation anzuzeigen. Es ist speziell zusammengestellt, um das Ausbreiten oder Schwärmen von Proteus zu verhindern, um diskrete zählbare Kolonien herbeizuführen, während gleichzeitig ein ungehemmtes Wachstum gestattet wird. Dieses Medium wird auch zur Bestimmung der Morphologie der Kolonien verwendet. Medium II ist Eosin-Methylenblau-Agar, das Grundkulturmedium des Bakteriologen für gram-negative Arten. Dieses Medium inhibiert das Wachstum von gram-positiven Organismen und zeigt Lactosefermentation. Medium III ist ein Harnstoff-Gelatinemedium, das grundlegend als das Medium für die Bestimmungen der Urease- und Gelatinaseerzeugung dient. Medium IV ist Simmons-Citratmedium, das gewisse gram-negative Arten, wie beispielsweise klebsiella-Aerobacter und Pseudomonas unterscheidet, indem es Citratverbrauch anzeigt. Geeignete Ansätze von Medien, die jeweils in den entsprechenden Abteilungen oder Schalen 11, 12, 13 und 14 enthalten sein sollen, sind im folgenden aufgeführt;
_ I. Zählmcdiuir.
Dextroae 2G g
BBL Myosatpepton 10 g
BBL Biosatpepton 10 g
Difco-Fleißohextrakt 2 g
Phenolrot 0,1 g
Agar 25 £
H2O 1000 ml
Eins te llung auf. pH 7,8
6 -
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II. EMB-Agar .
EMB-Agar 36 g
Lactose 15 g
1000ml
C.
III. Urease-Gelatinase-Agar,
' Difco-Pepton 4g
Difco-Fleischextrakt 4 g
Difco-Trypton 4g . ... 0,08 g
Gelatine 30 g 1000 ml
• ' Harnstoff +) :' '"5 s '
KH2PO4 ■ 10 g
Phenolrot. . 0,05 g
Agar ■ .15 g
H2O 1000 ml
Einstellung des pH-Wertes auf 6,2
IV, Citrat-Agar
Simmons-Citrat-Agar 24,3 g
Br om thymo ITd lau
H2O
+) Steril filtriert und aseptisch nach der Behandlung im Autoklaven zugegeben. "
Die in den Torstehenden Ansätzen für die Medien aufgeführten Bestandteile können wie folgt identifiziert werden:
BBLi Abteilung der Bio Quest, Abteilung von Becton,
Dickinson and Company. '
Difco: Difco Laboratories, Inc.
Myosatpeptons Ein Pancreashydrolysat des Herzmuskels Biosatpeptons · Ein Hydrolysat sowohl von pflanzlichen als
auch tierischen Proteinen, das aus Hefe- ' autolysat und dem Pancreasverdauungsprodukt von Casein aufgebaut ist und diese Merkmale vereinigt, „ ■ , . :
Fleischextrakt: Infusionen von Fleisch
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2606 Λ
Außer der direkten Beobachtung des Bakterienwachstums bestehen die beiden einzigen zusätzlich geforderten Stufen zur Vervollständigung der erfindungsgemäßen Methode in dem Katalasetest und dem Gelatinasetest. Geeignete Reagen- · tien für diese Versuche sind folgende. Für den Katalasetest wird eine 3-#-ige lösung von Wasserstoffperoxyd verwendet. Nach Inkubierung und Wachstum der Bakterien werden einige Tropfen der Wasserstoffperoxydlösung zu den Bakterienkolonien auf Medium I gegeben. Die Reaktion verläuft positiv, wenn eine Gasentwicklung aus den Kolonien auftritt.Ein geeignetes Gelatinasetestreagenz weist 15 g OgCl2, 20 ml konzentrierte HCl und 100 ml Wasser auf. Nach Inkubation und Wachstum der Bakterien wird Medium III mit der Quecksilberchloridlösung bespült. Falls Gelatinase erzeugt wurde, liegt eine klare Zone um die Bakterienkolonien vor.
Unter Verwendung der vorstehend beschriebenen Vorrichtung und der speziellen Kombination von Medien kann das erfindungsgemäße Verfahren in der folgenden Weise durchgeführt werden. Eine verdächtige Urinprobe wird zunächst geschüttelt, um eine gleichmäßig vermischte Probe zu erhalten. Der Dekkel 15 der Schale 10 wird angehoben, bis er in der Aufrechtstellung, wie in Fig. 1 erläutert, abschließt. Palls die Medien durch eine Folie geschützt sind, wird die Folie jeweils von den vier Agar-Schalen 11, 12, 13 und 14 entfernt. Das Auftraggerät 20 wird dann in die Probe eingetaucht, so daß gerade die querverlaufende Spitze 23 bedeckt ist, und rasch entfernt. Eine Kontaktzeit von 1 see ist ausreichend. Nach einer kurzen Pause zur Einstellung des Gleichgewichts von etwa 15 see wird jedes Medium nacheinander gestrichelt, wobei mit Medium I begonnen wird, und die Länge der Agar-Fläche vollständig bedeckt wird. Es ist nicht notwendig, den Urin zwischen den Strichen wieder zu einer Probe zu vereinigen. Die äußere Hülse 25 bietet der Urinprobe rasche
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Absorption und leichten Zugang zu dem Inneren dochtähnlichen. Material 24. Die Wirkung besteht darin., daß eine geringe Menge der Urinprobe rasch von der Hülse 25 und dem dochtähnlichen Material 24 aufgenommen wird, so daß durch das Auftraginstrument 20 eine einheitliche Beimpfung auf jedem Medium mit gleichmäßiger Verteilung-der vorliegenden Organismen abgeschieden wird, Nach der Impfung wird der Deckel 15 geschlossen und die Schale 10, welche die geimpften Medien 1t, 12, 13 und 14 enthält, wird während 18 "bis 24 Stunden bei 35 bis 37 0C inkubiert. Nach der Inkubierung erfolgt eine rasche Quantitätsbestimmung der Bakterien, in- M dem die Kolonien auf. dem Medium I gezählt und mit einem Faktor multiplisiert werden,- wobei sich Si© Zahl-der Bakterien 3e mm äer Urinprobe ergibt» Bei den Abmessungen der Mediumoberfläche von 25" χ 38 mm (1 χ 1-1/2·'inch)" werden sämtliche Kolonien gezählt und mit 400 multipliziert,,' mn die Eakterienanssahl zu erhalten. Diese Methode des? Quanti-tätsbestimmung kann in allen lallen angewendet werden« Die folgenden Alternativverfahren können verwendet werden, wenn in den Mediumschalen■ GXtterquäar-ate gebildet sind* Beispielsweise wird, wenn Gitterquadrate von 4 am (1/4 '.inch") im Bo-' den der Schalen. 11 s 129.13 und' H8 *?i© vorstellend beschrieb bens ausgebildet sind, falls mehr-als 10 Kolonien, je Gitter=» quadrat vorliegen, ein Quadrat si it einer repräsentativen £ Ansah! von Kolonien gewählt und mit 10 000 aiultipli Palis 4 bis· 10 Kolonien ^e "Gitterquadrat vorliegenε 5 representative .Quadrate gezählt, und dann mit "2000 nulti pliziert. PaIIs weniger als 4 Kolonien je Gitterquadrat vorliegen", werden eämtliche Quadrate gezählt unä alt 400 maltiplissiert ο feeh der Quantitätsbestiffimung der kann, falls die Bakterien in einer Höhe von etwa 100. 000 je ml Urin ©der mehr vorliegen was eine Infektion ciea
daftfe
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Organismus in Verbindung mit der in Pig. 3 wiedergegebenen Karte identifiziert werden, indem das Wachstum auf dem Medium beobachtet wird und gegebenenfalls der vorstehend beschriebene Katalase- und Gelatinaaetest durchgeführt wird. Obgleich im allgemeinen eine Zahl von 10 000 Bakterien je ml Urin im allgemeinen als Anzeichen einer Infektion des Harntraktas angesehen wird, können die Vorrichtung und das Verfahren der Erfindung zur Quantitätsbestimmung und zur Identifizierung wesentlich geringerer Werte verwendet werden.
Bin Beispiel für die Identifizierung verschiedener Mikroorganismen« die für Infektionen des Harntraktes verantwortlich sind j kann wie folgt beschrieben werden. Nach der vorstehend beschriebenen quantitativen Ermittlung der Bakterien w
as WachstUKJ auf Median; II beobachtet. Falls
kein Wachstum auf Medium TI erfolgt, wird Medium I dann hinsichtlich der Dextrosefermentation geprüft. Palis Säure aus Dextrose vorliegt, was durch eine gelbe Reaktion rund um die Kolonien angezeigt wird, wird der oben beschriebene Katalaseteat auf Medi.uüi I durchgeführt. Palis der Versuch -ooeitl.v :rn .■■,,[■■■■ : ■■■ ■;... !nstuii! in Medium III er- :-o",..'·, ■ .. >.· ■ .-ruf Medium I beobachtet.
.-sind, ist dies ein Anzei-Mi.'er ο Organismen der irs Gruppe i. Ist dies der !; er Ληλ ..ν: lur.g von Stan-ί ent ifIz^ >r;ng des speziel-
agebracht. Sind die Kolonien auf i;ediuxr. I klein und filternd, von weißer oder gelber Farbe, so zeigt dies die Anwesenheit der Species Staphylococcus λ;ti. Die vorete/ierdon Ausführungen erläutern die Identifizierung der SjecvUrj '-taphyloooocus, falls Dax-
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0 0 8 8 3 8.
BAD ORIGINAL
trosefermentatioh auf Medium I auftritt. Falls keine Säure aus Dextrose auf Medium I angezeigt wird, so ist dies ein'. Anzeichen für die Anwesenheit von Mikroorganismen in gemischter Gruppe A.
Zur Erläuterung der Identifizierung anderer Mikroorganismen, die für Infektionen des Harntraktes verantwortlich sindj, wird wiederum nach der Quantitätsbestimmung der Bakterien durch Beobachtung auf Medium I, wie vorstehend beschrieben, Medium II beobachtet. Falls gutes Wachstum mit kernbildenden Kolonien vorliegt, wird Medium IY hinsichtlieh des Yerbrauchs von Citrat geprüft. Wird Citrat verbraucht, was durch die blaue Farbe, die das Medium IY erhält, angezeigt wird, so bedeutet dies die Anwesenheit von Klebsiella-Aerobacter. Wird kein Citrat verbraucht, was durch keine Farbveränderung des Mediums angezeigt wird, so ist der vorliegende Mikroorganismus E. coli.
Falls mit Bezug auf Medium II gutes Bakterienwachstüm mit nicht'-kernbildenden Kolonien vorliegt, so wird Medium I geprüft. Falls ein schweres dickes schleimiges gallertiges und erhöhtes Wachstum vorliegt, zeigt dies die Anwesenheit von Klebsiella-Aerobacter.an. Sind die Kolonien auf Medium I nicht schleimig, so wird Medium I hinsichtlich der Dextrosefermentation unt-ersucht. Liegt eine stark saure Reaktion rund um die Kolonien oder über das gesamte Medium vor, so wird Medium III beobachtet. Falls sich eine positive Ureasereaktion auf Medium III ergibt, was durch eine leuchtend rosa Farbe rund um die Kolonien, oder über das ganze Medium angezeigt wird, so ist die Anwesenheit der Species Proteus nachgewiesen. Falls die Ureas er eakt lon negativ ist,· was durch keine Farbveränderung oder lediglich eine schwach rosa
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2606 Λ
AfL
Farbe in dem Medium angezeigt wird, so liegt ein Organismus der gemischten Gruppe B vor.
Zurückgehend auf Medium I, wird, wenn die Kolonien nicht schleimig sind und keine Dextrosefermentatipn auftritt, dann Medium IV hinsichtlich der Citratverwertung geprüft. Wird Citrat verbraucht, was durch keine Färbveränderung des Mediums angezeigt wird, so liegt ein Mikroorganismus der gemischten Gruppe C vor. Falls der Verbrauch von Citrat durch eine tief blaue Farbe in dem Medium angezeigt wird, so wird der vorstehend beschriebene Gelatinasetest auf Medium IV durchgeführt. Wird die Verwertung von Gelatinase angezeigt, so ist der vorliegende Mikroorganismus die Species Pseudomonas. Falls keine Gelatinase verwendet wird, so ist der vorliegende Mikroorganismus ein Mikroorganismus der gemischten Gruppe C.
Falls das obige Verfahren nachweist, daß keines der sechs Pathogens, die am häufigsten für Infektionen des Harntraktes verantwortlich sind, vorliegt, sondern daß einige andere Mikroorganismen, wie vorstehend beschrieben, vorliegen, so ist die Anwesenheit von weniger häufig anzutreffenden Mikroorganismen nachgewiesen. Nach dem Verfahren wird ermittelt, daß diese Mikroorganismen einer von drei Gruppen A, B oder C angehören. Wird das Vorliegen einer dieser weniger häufig anzutreffenden Mikroorganismen angezeigt, so sind weitere Versuche unter Anwendung von Standard-Laboratoriumsverfahren erforderlich, um die endgültige Identifizierung durchzuführen. Sie mutmaßlichen Mikroorganismen innerhalb dieser Gruppen sind wie folgt:
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20Q4560
;26Q6 '■■■■■■■.-.■· . ' ,.- ■
■ . ■■■■..,.■ ■■■;-.<!■ ■■■ :.■■;..■;.■■■.■ ;'-■;;■·" -:
Gemischte Grappe A , : ·
Bacillus
Corynebacterluni (Diphtheriode) Λ
Diplococcus
Neisseria - - .
Streptococcus abweichend von der Enterococcus Gruppe (I&ncefield Gruppe JD)
GemiBchte Gruppe B
Arizona -.-."■ ■ .
Citrobacter ü
Providenöe
Serratia
Hafnia '
Salmonella -
Shigel.la .
Hefe· · ; ■■■■■ ■*..-'■■,
Gemischte Gruppe 0 '
Alcaligenes
Herellea
,- 15 09838/2229

Claims (1)

  1. 2. Februar I970
    Patentansprüche
    Verfahren zum Nachweis und zur Identifizierung von Bakterien in einer verdächtigen Probe, wobei die Bakterien aus E. coli, Klebsiella-Aerobacter, Pseudomonas, Proteus, Staphylococcus und/oder Enterococcus bestehen, dadurch gekennzeichnet, daß ein erstes Medium das zur Unterstützung des Wachstums der Bakterien fähig ist und Dextrosefermentation und Katalaseproduktion anzeigt, ein zweites selektives Medium, welches das Wachstum von gram-positiven Bakterien inhibieren und Lactosefermentation anzeigen kann, ein drittes Medium, welches die Erzeugung der Enzyme Gelatinase und Urease nachweisen kann und ein viertes Medium, welches Bakterien unterstützt, die Citrat als eine Kohlenstoffquelle benötigen, hergestellt werden, anschließend jedes Medium mit der Probe beimpft wird, die Medien inkubiert werden und die Medien hinsichtlich des Bakterienwachsturas und der Erzeugung bioohemischer Reaktionen beobachtet werden. x
    2. Verfahren r.aen ar^pruul· ί einschließlich der Quantitäts- bestv---.v:ati p.,·/.;; τ-.·,', ^r...<-■. ;alurch gekennzeichnet, daß "bei -:,;i' ■; .f--\\. -„u;:] ■'...■. es et/ >-?-a'ü die auf dem ersten Medium nach cUr inKubiercuig der Medien gebildeten Kolonien gezählt werden.
    3. Verfahren nach Anspruch t}, dadurch gekennzeichnet, daß die Medien während 18 bis 24 Stunden bei einer Temperatur von 55 bis 37 0C inkubiert werden.
    4· Verfahren nach Ansprach !, dadurch gekennzeichnet, daß auf dem ersten Msdium ein Katalasetegt \in% auf Ίβπι dritten Mod χ um ein Geiatinaatii,ösi'ti durchgeführt wird.
    009836/2229
    5β Verfahren zum Nachweis und zur Identifizierung von Bakterien .in einer Urinprobe, wobei die Bakterien am häufigst on für Infektionen des Harntraktes verantwortlich sind und aus E. cöli,-Klebsiella-Aerobacter, Pseudomomas, Proteus, Staphylococcus und/oder Enterocoocus bestehe»., sowie zur Bestimmung von weniger häufig anzutreffenden Organismen, bestehend aus Bacillus, Corynebaeterium, DiplocQccus, Heisseria-, Streptococcus-, Arizona.,, Gitrobacter, Providence, Serratla, Hafnia».Salmonella<, Shigella3 Hefe, Alcaligenes, Herellea und/oder Mima.? dadurch gekennzeichnet, daß ein erstes Medium, welches das Wachstum dieser Bakterien unterstützen und Dextrosefermeatation und Katalaseproduktion anzeigen kann, ein zweites selektives Medium, welches das Wachstum von gram-positiven Bakterien inhibieren und Iactosefermentation anaeigen kann,, ein drittes Medium, welches die Erzeugung der-Enzyme (jelatina.se- und Urease nachweisen kann und ein viertes Medium,"welches Bakterien unterstützen kann, die öitrat als eine Kohlenstoffquelle benötigen, hergestellt werden, anschließend jedes Medium mit der Probe beimpft wird, die Medien inkubiert werden und die Medien hinsichtlich des Bakterienwachstums und der Erzeugung biochemischer Reaktionen beobachtet werden.
    6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß zur Quantitätsbestimmung der Bakterien die auf dem ersten Medium nach Inkubierung des Mediums gebildeten Kolonien gezählt werden.
    7. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, daß auf dem ersten Medium ein Katalaset.est und auf dem dritten Medium ein Gelatinasetest durchgeführt wird.
    . ■"■■.:.,■. - 15 - ' - '■■■'■
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    2606
    > Λ
    8. Vorrichtung zum Nachweis und zur quantitativen Bestimmung von Bakterien in einer verdächtigen Probe, wobei die Bakterien aus E. coli, Klebsiella-Aerobacter, Pseudomonas, Proteus, Staphylococcus und/oder Enterococcus bestehen, gekennzeichnet durch eine Mehrzahl von Abteilungen (11, 12, 13, H) für die Medien, wobei die Abteilungen gesondert ein erstes Medium, welches ein Dextrosemedium aufweist, das zur Ermöglichung des Wachsturas dieser Bakterien und zum Nachweis von Katalasereaktionen und Dextrosefermentation durch bestimmte Arten dieser Bakterien angereichert ist, ein zweites Medium, welches Eosinmethylenblau-Agar zur Inhibierung des Wachstums von gram-positiven Bakterien aufweist und lactosefermentation durch andere ausgewählte Arten dieser Bakterien anzeigt, ein drittes Medium, welches ein Harnstoff-Gelatinemedium zum Fachweis der Urease- und Gelatinaseproduktion durch weitere ausgewählte Arten dieser Bakterien aufweist und ein viertes Medium, welches ein Citratmedium zum Nachweis des Citratverbrauchs durch noch weitere ausgewählte Arten dieser Bakterien aufweist, enthalten.
    9. Vorrichtung nach Anspruch 8, gekennzeichnet, durch ein Auftraginstrument (20) zur Beimpfung der Medien mit der
    α verdächtigen Probe.
    10. Auftraginstrument zum Aufbringen einer zu untersuchenden Probe auf Medien zum Bakterienwachstum, dadurch gekennzeichnet, daß das Auftraginstrument einen langgestreckten Rahmen (21) mit einer an einem Ende quer verlaufend zu dem Rahmen angeordneten Spitze (22);über die Spitze des Auftraginstruments zur Absorption der Probe angepaßtes Absorptionsmaterial und eine über das Absorptionsmaterial angeordnete Hülse (25) aufweist, wobei die Hülse der Probe * leichten Zugang zu dem Absorptionsmaterial verschafft ,
    - 16 -
    009838/2229
    - -'Λ
    wodurch das Auftraggerät, wenn es in die Probe eingebracht wird, ein genaues Quantum der Probe absorbiert und die Probe gleichmäßig auf der Oberfläche des Mediums verteilt.
    A-,
    -7*7
    009838/2229
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