DE69333305T2

DE69333305T2 - Kulturmedium zum nachweis von salmonella und prozess zur verwendung davon

Info

Publication number: DE69333305T2
Application number: DE69333305T
Authority: DE
Inventors: Alain Rambach
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1992-10-20
Filing date: 1993-09-30
Publication date: 2004-09-09
Anticipated expiration: 2013-10-01
Also published as: EP0665894B1; DE69333305D1; EP0665894A1; FR2697028B1; FR2697028A1; WO1994009152A1

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Isolationsmedium, welches die Identifikation von Bakterien der Art Salmonella gestattet.
Die Identifikation des Bakteriums Salmonella, das für Menschen pathogen ist, ist ein Hauptproblem in der medizinischen Bakteriologie und bei der Überwachung von Nahrungsmittelhygiene.
So sind im Fall von Epidemien, welche von Hühnerfarmen übertragen werden, die im Darm befallenen Vögel nicht krank, sondern stellen ein Reservoir von Salmonella dar. Das Letztgenannte kann insbesondere durch Eier in der Nahrung nach diesen Epidemien fortgepflanzt werden. In der Tat ist Salmonella ein Bakterium, dessen Bekanntgabe obligatorisch ist.
Heutzutage wird es wesentlich, für einen Nachweis in großem Maßstab von infizierten Orten und spezieller von Farmen zu sorgen, die mit dem Salmonella-Bakterium infiziert sind, um diese Epidemien zu verringern.
Insbesondere müssen Salmonellen im Allgemeinen unter anderen Mikroorganismen, wie den kommensalen Arten Escherichia coli und Proteus, erkannt werden.
Der Nachweis von Salmonella wird normalerweise auf einem Agarmedium für die selektive Isolation von Enterobakterien durchgeführt, welches die Differenzierung der pathogenen Enterobakterien und den Nachweis von verdächtigen Salmonella-Kolonien gestattet. Ein ideales Isolationsmedium sollte das Wachstum von Enterobakterien, die Differenzierung der vorhandenen verschiedenen Arten gestatten, um eine anschließende Identifikation einer Kolonie jeder Art und den Nachweis von verdächtigen Salmonella-Kolonien zu gestatten.
Das Ziel der vorliegenden Erfindung ist es zu ermöglichen, hoch vereinfachte Routinetests für Salmonella, zum Beispiel Verfahren zur Überwachung der mikrobiologischen Qualität von Wasser unter Verwendung von Einweichungsverfahren oder der Überwachung der mikrobiologischen Qualität von Nahrungsmittelfabriken unter Verwendung von Kontaktverfahren, zur Diagnose oder alternativ zum Nachweis von pathogenen Mikroorganismen unter Verwendung herkömmlicher mikrobiologischer Petri-Schalen-Verfahren auf festem Medium oder auf halbfestem selektivem Medium mittels eines Mediums gemäß der Erfindung duchzuführen.
Das Ziel der Erfindung ist es, den Nachweis und die Differenzierung von Salmonella durch Enthüllung der für diese Bakterien spezifischen Aktivität zu gestatten.
Das Salmonella-Bakterium weist in seinem Bereich von Enzymen Esterasen auf, die insbesondere Caprylat-Derivate, wie Nitrophenylcaprylat, spalten.
Es könnte daher angestrebt werden, in einem Isolationsmedium ein Chromogen, das an das Caprylat und seine Derivate angeknüpft ist, ein Substrat für Esterasen, das unter der Wirkung dieser Enzyme in das Medium freigesetzt würde, zu verwenden, was die Identifikation von Salmonella-Kolonien ermöglichen würde.
Jedoch haben Tests bei Chromogenen, wie 5-Brom-4-chlor-3-indolylcaprylat, in einem herkömmlichen Kulturmedium für Salmonella es nicht ermöglicht, Färbungen zu identifizieren, die für die eingeimpften Kolonien spezifisch sind.
Einige chromogen Verbindungen, die an Fettsäuren geknüpft sind, sind als Substrate für Salmonella in einem herkömmlichen Medium untersucht worden (Agban et al., Eur. J. Med. Chem., 1990, 25, 697 – 699).
Es wurde überraschen gezeigt, dass die Zugabe eines Detergens zu dem Kulturmedium in einer geeigneten Konzentration, die mit einem hohen Salmonellen-Wachstum kompatibel ist, es ermöglicht, eine Färbung der Salmonella-Kolonien zu erhalten.
Die vorliegende Erfindung betrifft deshalb ein Kulturmedium mit einem chromogenen Agens für die Identifikation von Salmonella-Bakterien, das eine Verbindung, die an eine (C₇-C₁₀)-Fettsäure geknüpft ist, und Natriumdesoxycholat umfasst, dadurch gekennzeichnet, dass das chromogene Agens die Kombination der Verbindung, die an eine (C₇-C₁₀)-Fettsäure geknüpft ist, und des Natriumdesoxycholats bei einer Konzentration von mehr als 1 g/l, vorzugsweise zwischen 1,5 g/l und 5 g/l, zum Ergebnis hat.
Vorzugsweise ist die chromogene Verbindung aus Caprylsäureestern ausgewählt, vorteilhaft aus Derivaten von Indolylcaprylat und dessen Salzen, insbesondere 5-Brom-4-chlor-3-indolylcaprylat.
Vorzugsweise wird das 5-Brom-4-chlor-3-indolylcaprylat bei einer Konzentration zwischen 40 und 200 mg/l verwendet.
Vorteilhaft liegt das Gewichtsverhältnis chromogene Verbindung/geeignetes Detergens zwischen 1/10 und 1/100.
Es sollte bemerkt werden, dass die vorliegende Erfindung nicht in einer bloßen Zugabe von Detergens zu einem Identifikationsmedium besteht und dass es notwendig ist, das Paar chromogene Verbindung/geeignetes Detergens in Betracht zu ziehen.
So machen es bei den Indolylcaprylat-Derivaten nur die kondensierten polycyclischen Detergentien, Derivate von Cholan, möglich, eine Färbung der Salmonella-Kolonien zu erhalten, wohingegen dessen Ersatz durch ein Detergens wie die anionischen Standard-Detergentien (insbesondere die Detergentien, die unter der eingetragenen Marke TERGITOL von der Firma UNION CARBIDE CORP. auf dem Markt sind) es nicht ermöglicht, eine Färbung zu identifizieren.
Es ist auch besonders wichtig zu bemerken, das das chromogene Agens des Mediums gemäß der Erfindung bei vielen anderen Enterobakterien keine Färbung zur Folge hat, selbst wenn man sie mehrere Wochen inkubieren lässt.
Ein Fachmann weiß natürlich, wie das Medium gemäß der vorliegenden Erfindung zu ergänzen ist, um außergewöhnliche Nicht-Salmonella-Bakterien zu eliminieren, insbesondere durch Identifikation anderer Salmonella-spezifischer Eigenschaften, insbesondere der Eigenschaften, die mit der Spaltung oder dem Metabolismus von beta-Galactosiden und beta-Glucosiden verbunden sind.
Vorteilhaft enthält das Medium gemäß der vorliegenden Erfindung auch beta-Glucoside und/oder beta-Galactoside.
So wird eine gefärbte Salmonella-Kolonie leicht auf einer mikrobiologischen Vorrichtung selbst in Anwesenheit von Tausenden anderer Kolonien oder auf einem halbfesten Medium zur Erhöhung der Spezifität des Nachweises identifiziert.
Im Allgemeinen wird eine tiefblaue Färbungscharakteristik der Anwesenheit von Salmonella erhalten. Jedoch können andere Färbungen in Betracht gezogen werden, abhängig von der verwendeten chromogenen Verbindung.
Darüber hinaus wird der Nachweis durch die Tatsache erleichtert, dass er weder die Verwendung eines nicht-entwicklungsfähigen gefärbten Indikators noch einer spezifischen Beleuchtung erfordert.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch ein Verfahren zum Nachweis von Stämmen von Salmonella in irgendeiner Probe, für den das Kulturmedium, wie oben beschrieben, mit der Probe beimpft wird und in dem die Färbungscharakteristik der Anwesenheit von Salmonella zumindest identifiziert wird.
Abhängig von der Form und der Präsentation des Mediums und abhängig von dem durchgeführten Test wird das Medium vorzugsweise durch Kontakt, durch Einweichen, durch Oberflächenimpfung oder durch Impfung innerhalb der Masse geimpft.
Ohne weitere Ausführungen nimmt man an, dass ein Fachmann unter Verwendung der vorangehenden Beschreibung die vorliegende Erfindung zu ihrem vollsten Ausmaß verwenden kann. Die bevorzugten speziellen Ausführungsformen sind deshalb als lediglich erläuternd anzusehen und beschränken die Offenbarung auf keinerlei Weise.
Die nachstehenden Beispiele sollen andere Merkmale und Vorteile der vorliegenden Erfindung erläutern.
BEISPIEL.: Nachweis von Salmonella-Stämmen
Verschiedene Konzentrationen von Natriumdesoxycholat werden zu dem Medium S gegeben (in g/l: Fleischextrakt 1; Hefeextrakt 2; Pepton 5; Natriumchlorid 5; Agar 15; 5-Brom-4-chlor-3-indolylcaprylat 0,2).
Die Schalen werden bei 37°C inkubiert, und die blaue Färbung der Kolonien des Bakteriums Salmonella AR3001 und des Kontroll-Bakteriums E. coli AR2901 wird nach 24-stündiger Inkubation bei 37°C überprüft.
Salmonella wird nur mit der Kombination aus chromogenem Substrat und Desoxycholat identifiziert.
Verschiedene Enterobakteria-Stämme werden auf dem Medium T (in g/l) isoliert: Fleischextrakt 1; Hefeextrakt 2; Pepton 5; Natriumchlorid 5; Agar 15; Neutralrot 0,03; Cellobiose 10; Natriumdesoxycholat 2,5; 5-Brom-4-chlor-3-indolylcaprylat 0,2.
Die Schalen werden bei 37°C inkubiert, und die Färbung der Kolonien wird nach 24-stündiger Inkubation überprüft.
Die Färbung der Kolonien macht es möglich, Salmonella von den anderen Enterobakterien zu unterscheiden.

Claims

Kulturmedium für die Identifikation von Salmonella-Bakterien, umfassend eine chromogene Verbindung, die mit einer (C₇-C₁₀)-Fettsäure verknüpft ist, und Natriumdesoxycholat, dadurch gekennzeichnet, dass die Natriumdesoxycholat-Konzentrationen zwischen 1,5 g/l und 5 g/l liegen.
Kulturmedium nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die chromogene Verbindung aus caprylsäureestern ausgewählt ist.
Kulturmedium nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die chromogene Verbindung aus Derivaten von Indolylcaprylat und deren Salzen ausgewählt ist.
Kulturmedium nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die chromogene Verbindung 5-Brom-4-chlor-3-indolylcaprylat ist.
Kulturmedium nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass das 5-Brom-4-chlor-3-indolylcaprylat bei einer Konzentration zwischen 40 und 200 mg/l verwendet wird.
Kulturmedium nach einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass das Gewichtsverhältnis chromogene Verbindung/Natriumdesoxycholat zwischen 1/10 und 1/100 liegt.
Kulturmedium nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass es in flüssiger, halbflüssiger oder fester Form vorliegt.
Verfahren zum Nachweis von Salmonella-Stämmen in irgendeiner Probe, dadurch gekennzeichnet, dass das Kulturmedium nach irgendeinem der Ansprüche 1 bis 7 mit der Probe geimpft wird und dass die Färbungscharakteristik der Anwesenheit von Salmonella identifiziert wird.
Nachweisverfahren nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass das Kulturmedium durch Kontaktieren, durch Einweichen, durch Oberflächenimpfung oder -abscheidung oder durch Impfung innerhalb der Masse geimpft wird.