DE19781703B4

DE19781703B4 - Gegen Tumoren wirksame Anthracyclindisaccharide, Fermentationsverfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende therapeutische Zusammensetzung

Info

Publication number: DE19781703B4
Application number: DE19781703A
Authority: DE
Inventors: Anna Luisa Colombo; Giovanni Rivola; Lorena Luisa Fedeli; Augusto Inventi Solari; Andrea Buccinasco Pavesi; Marina Ripamonti
Original assignee: Ministero dell Universita e della Ricerca Scientifica e Tecnologica (MURST)
Current assignee: Ministero dell Universita e della Ricerca Scientifica e Tecnologica (MURST)
Priority date: 1996-04-24
Filing date: 1997-04-11
Publication date: 2006-11-30
Anticipated expiration: 2017-04-12
Also published as: GB2328688A8; DE19781703T1; IT1282379B1; WO1997040057A1; JP2000508546A; JP3971801B2; GB2328688A; GB2328688B; ITMI960819A0; GB9823306D0; ITMI960819A1

Abstract

Verbindung der Formel:

worin R eine -COCH₃-, -CHOHCH₃- oder -COCH₂OH-Gruppe bedeutet, und deren pharmazeutisch akzeptablen Additionssalze.

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue, gegen Tumoren wirksame Anthracyclindisaccharide, ihre Herstellung und pharmazeutische Präparate, die sie enthalten, gemäß den Patentansprüchen. Diese Anthracycline sind als Antitumormittel verwendbar und wirksam gegen gram-positive und gram-negative Bakterien.
EP 0 311 054 A2 beschreibt ein Anthracyclin-Derivat, das eine Daunosamin-Rhodinose oder Daunosamin-Deoxyfucose an der Position 4' aufweist. US 4418192 beschreibt Anthracyclinonglycoside, die erhalten wurden, indem ein Trisaccharid mit verschiedenen Anthracyclinonverbindungen, wie z.B. Aklavinon, Daunomycinon, Adriamycinon und Carminomycinon, behandelt wurden.
Die Verbindungen, die den Gegenstand der vorliegenden Erfindung bilden, haben die nachstehend angegebene Formel:
worin R bedeutet:
(I) COCH₃ = 4'-O-Vancosaminyldaunomycin,
(II) CHOHCH₃ = 4'-O-Vancosaminyl-13-dihydrodaunomycin
(III) COCH₂OH = 4'-O-Vancosaminyldoxorubicin.
Das Disaccharid des Anthracyclins (I), worin R = COCH₃, kann durch ein mikrobiologisches Verfahren hergestellt werden, das die Fermentierung von Streptomyces sp.-Kulturen umfaßt, die in unserer Stämmebank mit der Nr. 15105 identifiziert sind und am 20.03.1996 bei der DSMZ – Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSMZ), Mascheroder Weg 1b, D-38124 Braunschweig, Deutschland hinterlegt wurden, welche den Status einer internationalen Hinterlegungsbehörde unter dem Budapester Vertrag über die internationale Anerkennung der Hinterlegung von Mikroorganismen zum Zweck der Patentverfahren erwarb, und zwar unter der Nr. 10632 unter aeroben Bedingungen in einem Flüssigsubstrat, das assimilierbare Quellen für Stickstoff, Kohlenstoff und Mineralsalze enthält.
(I) wird aus der gleichen Kulturbrühe gemäß dem in der vorliegenden Erfindung beschriebenen Verfahren erhalten.
Die Verbindung mit der Formel (I), worin R = COCH₃ ist, kann in andere Verbindungen mit der Formel (II), in denen R = CHOHCH₃ ist, und (III), worin R = COCH₂OH ist, mittels geeigneter chemischer Reaktionen umgewandelt werden.
Charakteristiken des Mikroorganismus
Mikroskopische Charakteristiken
Das vegetative Mycel ist aus verzweigten Hyphen mit unterschiedlicher Länge und 0,5 bis 0,9 μm Durchmesser gebildet; das Luftmycel, das sich von dem ersteren ableitet, ist aus langen und gebogenen Hyphen gebildet, die oft kollabiert und verdreht sind und einen Durchmesser von 0,9 bis 1,2 μm haben. Die Sporulierung ist sehr schlecht und erfolgt in kurzen Ketten, die in Form von Haken enden. Die Sporen sind oval und messen 0,8 bis 1,1 × 1,9 bis 2,2 μm. Bei rasterelektronenmikroskopischer Überprüfung erscheinen die Sporen mit einer glatten Oberfläche.
Makroskopische Charakteristiken
Die Kulturcharakteristiken des 15105 Stamms werden in Tabelle 1 angegeben. Das Wachstum ist allgemein gut auf organischen und synthetischen Medien. Der Verlauf des Wachstums wurde nach 14 Tagen Inkubation bei 28°C bewertet.
Tabelle 1
Die biochemischen und physiologischen Charakteristiken des Stamms 15105 werden in den Tabellen 2 und 3 angegeben.
Kein Wachstum wurde bei Temperaturen oberhalb 40°C beobachtet.
Identifizierung und Klassifizierung von Stamm 15105
Alle Charakteristiken, die der Stamm 15105 zeigt, entsprechen eindeutig denen, die von Waksman and Henrici für die Gattung Streptomyces berichtet wurden.
Tabelle 2 Biochemische Charakteristiken von Stamm 15105
Tabelle 2 (Fortsetzung)
Tabelle 2 (Fortsetzung)

+ = positive Reaktion
– = negative Reaktion

Das für den Test verwendete Medium war Hefe-Stickstoffbase (Difco), ergänzt mit 1 % K₂HPO₄.
Tabelle 3 Biochemische Charakteristiken von Stamm 15105

+ = positive Reaktion
– = negative Reaktion

Das für das Wachstum des Stamms verwendete Medium war ISP3 (Difco). Zur Bestimmung der enzymatischen Aktivität wurde eine Suspension des Mycels in Wasser verwendet.
Fermentierung
Die Fermentierung kann in flüssiger Phase ausgeführt werden, die bei einer Temperatur im Bereich zwischen 25 und 33°C während Zeiten im Bereich von zwischen 4 und 7 Tagen gerührt wird. Das Kulturmedium kann aus Quellen für Kohlenstoff, Stickstoff und Mineralsalzen bestehen. Die Kohlenstoffquellen können Stärke, Dextrin, Glucose, Glyerin, Mannit und Maltose sein; Stickstoffquellen können Maislikör, Sojamehl, Trockenhefe, Pepton und Kasein sein. Gute Ergebnisse werden auch unter Verwendung von Ammoniumsalzen wie Ammoniumnitrat und Ammoniumsulfat erhalten. Die zur Produktion verwendeten Mineralsalze können in Abhängigkeit vom Kulturmedium variieren. In einem komplexen Kulturmedium, das verschiedene Arten von Mehlen oder Fermentationsresten enthält, kann die Zusammensetzung von Calciumcarbonat oder Calciumphosphat nützlich sein. Die Fermentierung kann in einem Becherglas und in Fermentern mit unterschiedlichen Volumina durchgeführt werden.
Analysemethoden
Wenn die Extrakte aus Fermenterbrühen, Rohmaterial, Fraktionen von Chromatographiesäulen und Proben, die sich von chemischen Reaktionen ableiten, durch Dünnschichtchromatographie (DC-Platten 60-F-254 Merck) überprüft und in einer Mischung von Chloroform:Methanol:Essigsäure:Wasser 80:20:14:6 entwickelt werden, zeigen die Verbindungen (I), (II) bzw. (III) chromatographische Rf-Werte von 0,25, 0,15 bzw. 0,12.
Wenn Proben, die durch eine milde Säurehydrolyse von (I), (II) und (III) erhalten werden, mit DC unter Verwendung des gleichen Laufmittels untersucht werden, erscheinen rote Flecken mit chromatographischen Rf-Werten von 0,5, 0,4 bzw. 0,35, die identisch zu denen von Daunomycin (IV), 13-Dihydrodaunomycin (V) bzw. Doxorubicin (VI) sind.
Der durch DC nach Entwicklung in einer Mischung von n-Propanol:Wasser:Ethylacetat: 30 % Ammoniumhydroxid (70:30:10:10) und Detektion mit Schwefelsäure überprüfte wäßrige Rückstand zeigte einen Fleck mit einem Rf-Wert von 0,55 identisch zu dem von Vancosamin (VII). Wenn die durch drastische Säurehydrolyse von (I), (II) und (III) erhaltenen organischen Extrakte durch DC mit einer Mischung aus Chloroform:Aceton 4:1 als Laufmittel durch DC überprüft werden, erscheinen rote Flecken mit einem chromatographischen Rf-Wert von 0,5, 0,11 und 0,15, die identisch zu den Flecken von Daunomycinon (VIII), 13-Dihydrodaunomycinon (IX) und Adriamycinon (X) sind.
In dem wie oben beschrieben durch DC überprüften wäßrigen Rückstand werden auch Daunosamin (XI) mit einem Rf von 0,45 und Vancosamin nachgewiesen.
Der Gesamtgehalt der Anthracyclin-Komponenten wird spektrophotometrisch bei 495 nm bestimmt, wobei als Referenz die spezifische Extinktion von Daunomycin herangezogen wird.
Gewinnung des Rohmaterials aus Fermentierung
Am Ende des Fermentationsprozesses ist neue Verbindung (I) hauptsächlich im Filtrat der Brühe enthalten, das in alkalischer Umgebung mit einem wasserunmischbaren Lösungsmittel wie n-Butanol extrahiert werden kann. Aus der organischen Phase kann es in angesäuertes Wasser reextrahiert werden, von dem nach Konzentration in Gegenwart von Alkoholen, z.B. n-Propanol, durch Zugabe eines kaum polaren Lösungsmittels wie z.B. n-Hexan ein roher roter Niederschlag erhalten wird, der die Verbindung (I) zusammen mit den anderen glycosidierten Anthracyclinen enthält.
Aufreinigungsprozeß
Die Aufreinigung des Rohprodukts nach der Fermentation, das die Verbindung (I) und Verbindung (II) und (III), erhalten durch anschließende chemische Umwandlung von (I), enthält, kann mittels Revers-Phasen-Chromatographiesäulen, z.B. Lichroprep^® RP-(8) (Merck) erfolgen. Wäßrige Lösungen, die die aufzureinigenden Produkte enthalten, können mit Mischungen von Wasser und organischen Solventien wie z.B. Acetonitril, angesäuert mit Säuren wie Trifluoressigsäure, als Laufmittel chromatographiert werden. Die aus der Säule gewonnenen und vereinigten und konzentrierten Fraktionen können lyophilisiert werden.
Nach diesen Verfahren sind reine Proben der neuen Anthrachinondisaccharide 4'-O-Vancosaminyldaunomycin (I), 4'-O-Vancosaminyl-13-dihydrodaunomycin (II) und 4'-O-Vancosaminyldoxorubicin (III), Gegenstände der vorliegenden Erfindung, erhalten worden.
Physikochemische Eigenschaften von (I), (II) und (III)
Die neuen Verbindungen (I), (II) und (III), die als gefriergetrocknete rote Produkte in Form der Trifluoracetatsalze erhalten werden, sind in Wasser, Dioxan und Alkoholen löslich, jedoch in Chloroform, Ethylether und n-Hexan unlöslich.
Die physikochemischen Eigenschaften werden in Tabellen 4 und 5 zusammengefaßt.
Tabelle 4
Tabelle 5 [¹H-NMR-Spektrum von (I)]

(200 MHz, DMSO-d₆; 22°C): 1,12 (d, J=6,4Hz, 3H, CH₃-6'); 1,15 (d, 6,4Hz, 3H, CH₃-6''); 1,49 (s, 3H, CH₃-3''); 1,7–1,9 (m, 3H, 2'eq + 2'ax + 2''ax); 2,00 (dd, J=4,1Hz, J=13,2Hz, 1H, 2''eq); 2,10 (m, 2H, CH_2-8); 2,26 (s, 3H, COCH₃); 2,88–2,94 (zwei Doubletts, J=18,4Hz, 2H, CH₂-10); 3,27 (m, 1H, 4''); 3,45 (m, 1H, 3'); 3,73 (s, 1H, 4'); 3,97 (s, 3H, OCH₃); 4,28 (m, 2H, 5' + 5''), 4,91 (dd, J=4,5Hz, J=4,5Hz, 1H, 7); 4,97 (d, J=4,1Hz, 1H, 1''); 5,32 (s, 1H, 1'); 5,61 (s, 1H, OH-9); 5,73 (d, J=5,9Hz, 1H, OH-4''); 7,65 (m, 1H, 3); 7,90 (m, 2H, 1 + 2); 8,0 (bs, 6H, 2-NH₃+).

Die chemische Verschiebung wird als Wert (ppm) bezogen auf Tetramethylsilan angegeben.
Strukturaufklärung
Mittels einer schwachen Säurehydrolyse von (I), (II) und (III) werden Daunomycin (IV), 13-Dihydrodaunomycin (V), Doxorubicin (VI) bzw. Vancosamin (VII) erhalten.
Mittels einer drastischen Säurehydrolyse von (I), (II) und (III) werden die roten Aglycone Daunomycinon (VIII), 13-Dihydrodaunomycinon (IX), Adriamycinon (X), Daunosamin (XI) bzw. Vancosamin (VII) erhalten.
Auf Basis der durch Zersetzung erhaltenen Produkte und der spektroskopischen Daten kamen wir zur Schlußfolgerung, daß die Verbindungen (I), (II) und (III) neue Disaccharide der wohlbekannten Anthracycline Daunomycin, 13-Dihydrodaunomycin bzw. Doxorubicin sind, die in Position 4' das Zuckeramin Vancosamin gebunden enthalten.
Die in der vorliegenden Erfindung vorgeschlagenen chemischen Strukturen werden in Schema 1 angegeben.
Biologische Aktivität
a) Antibakterielle Aktivität
Die minimale inhibitorische Konzentration MIC von 4'-O-Vancosaminyldaunomycin (I) wurde für einige Mikroorganismen mit der Verdünnungsreihenmethode in Agar bestimmt und wird in Tabelle 6 angegeben.
Tabelle 6 Antibakterielle Wirksamkeit von 4'-O-Vancosaminyldaunomycin (I)
b) Antitumoraktivität
Die cytotoxische Aktivität von 4'-O-Vancosaminyldaunomycin (I) wurde in vitro mit LoVo-Zellen getestet, die sensitiv bzw. resistent gegenüber Doxorubicin (LoVo/Dxr) sind, und wird in Tabelle 7 gezeigt.
Tabelle 7 LoVo/Dxr-Zellen Kolonie-Test: 4 h Behandlung

IC₅₀ = Konzentration, die 50 % der Bildung der Kolonie inhibiert ± S. E. (Standardabweichung);
I.R. = Resistenzindex: Verhältnis zwischen IC₅₀ LoVo/Dx und IC₅₀ LoVo.

Die antileukämische Wirkung von 4'-O-Vancosaminyldaunomycin (I) wurde in vivo gegen L1210 aszitische Leukämie von Mäusen getestet, wie in Tabelle 8 gezeigt wird.
Tabelle 8 Antileukämische Wirksamkeit von 4'-O-Vancosaminyldaunomycin (I) gegen L 1210 aszitische Leukämie bei Mäusen

1 = mg/kg
2 = mittlere Überlebenszeit der behandelten Mäuse/mittlere Überlebenszeit der Kontrollen
3 = Anzahl Todesfälle aufgrund von Toxizität/Zahl der behandelten Mäuse

Das in vivo bei Mäusen gegen L1210 murine aszitische Leukämie getestete Produkt (I) zeigte eine Aktivität vergleichbar zu der von Daunorubicin mit einer niedrigeren Toxizität, wie aus Tabelle 8 ersichtlich ist.
Die folgenden Beispiele dienen zur Erläuterung der Erfindung, ohne sie zu beschränken.
Beispiel 1
Die Kultur von Streptomyces sp. 15105 wurde 12 Tage bei 28°C auf CZY Agar-Medium gezüchtet (3 % Sucrose; 0,4 % Hefeextrakt; 0,3 % NaNO₃; 0,1 % K₂HPO₄; 0,05 % MgSO₄·7H₂O; 0,05 % KCl; 0,001 % FeSO₄·7H₂O; 2 % Agar, 100 ml entionisiertes Wasser; pH 6,7, Sterilisierung bei 120°C während 20 min).
Die so erhaltenen Sporen der Kultur wurden gesammelt und in einem 300 ml-Kolben, der 30 ml des folgenden Kulturmediums enthielt, suspendiert: 1 % Casein; 2 % Dextrin; 1 % Maislikör, 0,1 % (NH₄)₂SO₄; 0,01 % K₂HPO₄; 0,5 % CaCO₃; 100 ml entionisiertes Wasser. Sterilisierung bei 120°C während 20 min. Der pH nach der Sterilisierung variiert zwischen 6,8 und 7,0. Die inokulierten Kolben wurden dann 2 Tage bei 28°C auf einer rotierenden Schüttelmaschine bei 280 U/min mit 7 cm Exzentrizität gerührt. Ein Volumen entsprechend 2 ml der oben beschriebenen Kultur wurde in den 300 ml-Kolben, der 30 ml des folgenden Kulturmediums enthielt, inokuliert: 6 % Stärke; 1,8 % Maislikör; 0,1 % Hefeextrakt; 0,25 % NaCl; 0,3 % CaCO₃; 0,001 % FeSO₄·7H₂O; 0,001 % ZnSO₄·7H₂O; 0,001 % CuSO₄·5H₂O; 100 ml entionisiertes Wasser. Sterilisierung bei 120°C während 20 min. Die Kolben wurden 7 Tage bei 28°C auf einer rotierenden Schüttelmaschine bei 280 U/min mit 7 cm Exzentrizität inkubiert.
Beispiel 2
Die gemäß Beispiel 1 erhaltenen Kulturbrühen (20 l), ergänzt mit Acetonitril (10 l) wurden über Celite^® filtriert. Das Filtrat wurde unter Vakuum konzentriert (6 l) und bei pH 8,2 mit n-Butanol (2 × 500 ml) extrahiert. Zu der organischen Phase, die die Verbindung (I) mit anderen Anthracyclinen enthält, wurde mit HCl angesäuertes Wasser (100 ml, pH 2,5) und anschließend Ethylether (2 l) und n-Hexan (2 l) zugegeben. Nach Schütteln wurde die wäßrige Phase abgetrennt und unter Vakuum mit n-Propanol auf ein kleines Volumen konzentriert, spektrophotometrisch titriert, mit 2 Äquivalenten methanolischer HCl und einem Überschuß n-Hexan ergänzt, um so die Bildung eines rohen roten Niederschlags zu induzieren. Der Niederschlag wurde durch Filtration gewonnen und unter Vakuum getrocknet (600 mg).
Nach Überprüfung durch DC enthielt er auch die neue Verbindung (I) zusammen mit den anderen glycosidierten Anthracyclinen.
Beispiel 3
Der rohe Niederschlag, der (I) enthält und wie beschrieben in Beispiel 2 erhalten wurde, wurde in einem kleinen Volumen Wasser:Acetonitril (9:1) gelöst und auf einer Lichroprep RP-8-Säule (310-25 mm) chromatographiert. Die Eluierung erfolgte mit einer Mischung aus Wasser:Acetonitril (8:2), eingestellt auf pH 3 mit Trifluoressigsäure. Die gesammelten Fraktionen wurden durch DC analysiert, die Fraktionen mit einheitlichen Flecken zu einer einzigen Fraktion vereinigt und diese dann unter Vakuum konzentriert und lyophilisiert.
75 mg eines roten gefriergetrockneten lyophilisierten Produkts wurden erhalten, dessen Charakteristiken in Tabelle 4 und 5 beschrieben sind.
Ein Aliquot (6 mg), gelöst in Dioxan (0,5 ml) wurde nach Zugabe von 0,1 N wäßriger Essigsäure (0,2 ml) 1 h auf 85°C erhitzt. Die mit Wasser verdünnte Reaktionsmischung wurde bei pH 8,2 mit Chloroform extrahiert, die organische Phase über Natriumsulfat getrocknet und auf ein kleines Volumen eingeengt, titriert und mit einem Äquivalent methanolischer HCl ergänzt. Der gebildete gewonnene und getrocknete Niederschlag (3 mg) wurde durch DC analysiert und durch Vergleich mit einer authentischen Probe als Daunomycin (IV) identifiziert. Die restliche wäßrige Phase enthielt den Aminozucker Vancosamin (VII), der durch direkten Vergleich mit einer authentischen Probe im DC identifiziert wurde.
Ein zweites Aliquot (6 mg) wurde in 0,2 N (2 ml) HCl gelöst und 1 h auf 100°C erhitzt. Der durch Filtration gewonnene, mit Wasser gewaschene und getrocknete rote Niederschlag (2 mg) wurde durch DC untersucht und als Daunomycinon (VIII) durch direkten Vergleich mit einer authentischen Probe identifiziert.
Der durch DC untersuchte wäßrige Rückstand enthielt zwei Aminozucker, die durch direkten Vergleich mit zwei authentischen Proben als Daunosamin (XI) und Vancosamin (VII) identifiziert wurden.
Das durch Fermentation so erhaltene Produkt wurde als 4'-O-Vancosaminyldaunomycin (I) identifiziert.
Beispiel 4
Eine Probe von reinem 4'-O-Vancosaminyldaunomycin (I) (8 mg), das gemäß Beispiel 2 erhalten wurde, wurde in Wasser (0,8 ml) gelöst, mit wäßriger NaHCO₃ auf pH 9 gebracht, mit NaBH₄ (0,6 mg) versetzt und 5 min bei Umgebungstemperatur gehalten. Nach Zugabe von einigen Tropfen Methanol und 0,05 N HCl bis pH 4,5 wurde die Lösung auf einer RP-8-Säule wie beschrieben in Beispiel 3 chromatographiert, so daß man nach Gefriertrocknung ein neues rotes Produkt erhielt, dessen Charakteristiken in Tabelle 4 beschrieben sind. Aus einem Aliquot, das einer milden Hydrolyse, wie beschrieben in Beispiel 3, unterzogen wurde, wurden 13-Dihydrodaunomycin (V) und Vancosamin (VII) erhalten und durch direkten Vergleich mit authentischen Proben im DC identifiziert.
Aus einem Aliquot, das einer drastischen sauren Hydrolyse unterworfen wurde, wie beschrieben in Beispiel 3, wurden 13-Dihydrodaunomycinon (IX), Daunosamin (XI) und Vancosamin (VIII) durch Vergleich mit authentischen Proben im DC identifiziert.
Das durch chemische Umwandlung von (I) so erhaltene neue Produkt wurde als 4'-O-Vancosaminyl-13-dihydrodaunomycin-(II) identifiziert.
Beispiel 5
Eine Probe von 4'-O-Vancosaminyldaunomycin (I) (15 mg) wurde in einer Mischung aus wasserfreiem Methanol:Dioxan 1:3 gelöst und mit Ethylorthoformiat (0,05 ml) versetzt. Nach 15 min wurde die Lösung auf 5°C abgekühlt, mit Br₂ (0,15 ml in 5 CHCl₃), HCl (2,5 M in 0,02 ml Methanol) versetzt und bei 4°C über Nacht gehalten.
Durch Zugabe von 5 Volumina n-Hexan wurde ein roter Niederschlag erhalten, der in Aceton (1 ml), 0,25 M wäßriger HBr (1 ml) gelöst und über Nacht bei 4°C stehen gelassen wurde. Diese Lösung wurde mit 1 M wäßriger NaCOOH auf pH 4,3 gebracht und unter magnetischem Rühren bei Umgebungstemperatur 2 Tage gehalten und dann auf einer RP-8-Säule wie beschrieben in Beispiel 3 chromatographiert.
Ein neues rotes Produkt wurde nach Gefriertrocknung (6 mg) erhalten, dessen Charakteristiken in Tabelle 4 beschrieben sind.
Aus einem Aliquot, das wie in Beispiel 3 einer milden Säurehydrolyse unterworfen wurde, wurden Doxorubicin bzw. Vancosamin erhalten und durch direkten Vergleich mit authentischen Proben im DC identifiziert.
Aus einen Aliquot, das einer drastischen Säurehydrolyse unterworfen wurde, wie beschrieben in Beispiel 3, wurden Adriamycinon (X), Vancisamin (VIII) und Daunosamin (XI) jeweils durch Vergleich mit authentischen Proben im DC identifiziert.
Das durch chemische Umwandlung von (I) so erhaltene neue Produkt wurde als 4'-O-Vancosaminyldoxorubicin (III) identifiziert.

Claims

Verbindung der Formel:
worin R eine -COCH₃-, -CHOHCH₃- oder -COCH₂OH-Gruppe bedeutet, und deren pharmazeutisch akzeptablen Additionssalze.
Fermentationsverfahren zur Herstellung des Antibiotikums der Formel (I) (R = -COCH₃), das eine Fermentation in an sich bekannter Weise in Gegenwart eines Stammes von Streptomyces sp. einschließt, die unter aeroben Bedingungen in einem flüssigen Nährmedium, das eine assimilierbare Kohlenstoff- und Stickstoffquelle enthält, durchgeführt wird.
Therapeutische Zusammensetzung, enthaltend eine oder mehrere Verbindungen gemäß Anspruch 1 zusammen mit einem pharmakologisch akzeptablen Träger.