DE1911240A1

DE1911240A1 - Neues Antibioticum und seine Herstellung

Info

Publication number: DE1911240A1
Application number: DE19691911240
Authority: DE
Inventors: Jean Lunel; Homme Jean Preud
Original assignee: Rhone Poulenc SA
Current assignee: Rhone Poulenc SA
Priority date: 1968-03-05
Filing date: 1969-03-05
Publication date: 1969-10-02
Also published as: DE1911240C3; NL6902920A; FR1583752A; JPS4944347B1; NL143988B; DE1911240B2; CH492017A; GB1226494A; US3987028A

Description

Dr. F. Zumsfein - Dr. E. Assmann

Dr. R. Koenigsberger Dipl. Phys. R. Ho'zbauer

Palentanwä'.le

München 2, Bräuhausstrafje 4/111

SC 3288

RHONE-POULENC S.A., Paris/Frankreich

Neues Antibioticum und seine Herstellung

Die vorliegende Erfindung betrifft ein neues Antibioticum« das mit der Nummer 20 798 RP bezeichnet wird, und seine Herstellung» sowie die medizinischen Zusammensetzungen, die es enthalten.

Das Antibioticum 20 798 RP entspricht der Formel

OCH,

OH 0 - CH -CH₂ - CH - CH - CH - CH_?

OH

NH,

Dieses Antibioticum wird neben dem Antibioticum 9865 dessen drei Hauptbestandteile mit den Nummern 15 057 RP

909840/1740

- 2 - 19112^0

(Daunorubicin), 13 21? HP und I3 330 RP bezeichnet werden, durch "Streptomyces eoeruleorubidus" (NBRL 3Q45) unter äen in der belgischen Patentschrift 632 391 beschriebenen Ztteh» tungsbedingungen erzeugt.

Dieses neue Produkt weist infolge seiner ausgeprägten antitumoralen Wirksamkeit ein ganz besonderes Interesse auf=

Das Antibioticum 20 793 RP besitzt in Fores des Hydro Chlorids der Bruttoformel CgJH^₁O₁₀N · HCl · HgO die folgenden physikalisch-chemischen Merkmale:

Aussehens Orangerote Nadeln Schmelzpunkt» 225 - 230^cC

Löslichkeitt Es ist in Hasser und Alkoholen löslich· iß Chloroform wenig löslich und in Benzol und Sther praktisch unlöslich.

Ultraviolett-Spektrum {bestimmt mit einer Lösung mit 10«09 mg/1 in Äthanol mit einen Gehalt von 0,1 % 1n°Salssäure):

Schulter bei etwa 219 mn Schulter bei etwa 228 no Absorptionsmaximum bei Absorptionsminimum bei 242 mn Absorptionsmaximum bei 252 nm Schulter bei etwa 272 nm Absorptionsminimum bei 280 nm

909840/1740

1	% cm	465
E¹	cm	635
A	£ _ cm	782
A	s« . cm	483
E¹	cm	563
1	cm	200
1	cm ^β	158

SAD ORIQlWAt

1 et

Absorptionsiaaxiinum bei 290 mn E, ;._ » 178

■ cm

1 35 Absorptlon&minlmuin bei etwa 320 mn ^Ei cm " ²^

Dieses Spektrum ist in Fig. 1 gezeigt.

Sichtbares Spektrum (bestimmt mit einer Lösung mit 17»50 mg/1 in Ethanol mit einem Gehalt von 0,1 % In-Salzsäure):

1 eg Absorptionsmaximum bei 475 nm ^E1 cm ^ ■"*

Schulter bei etwa 53? raa ^Ei cm ^{s 79}

Schulter bei etwa 553 nra ^E1 cm ^ ^⁰

Dieses Spektrum ist in Fig. 2 gezeigt.

Infrarot-Spektrum (Bestimmung an mit Kaliumbromid verpress tem Produkt)s

Dieses Spektrum ist in FIgO₁ 3 gezeigt, in der als Abszisse einerseits die VlellenlUngen* ausgedruckt in Mikron (oberer Massstab^ und andererseits die Wellenzahlen in cm" (unterer MasEstab) und als Ordinate die optischen Dichten aufgetragen sind.

In der folgenden Tabelle 2 sind die Hauptbanden der Infrarot-Absorption für dieses Produkt angegeben.

909840/1740

BAD ORIGINAL

	SSt	T a b e	lie I	765	in
5410	Sch	1540 Sch	1195 Sch	750	Sch
5060	st	1510 Sch	1115 st	750	sch
2980	st	1500 Sch	1080 Sch	710	m
2940	Sch	1490 Sch	1O6O st	690	sch
2850	Sch	1470 Sch	1045 sch	665	sch
2580	sch	1460 Sch	1050 Sch	600	m
2000	sch	1445 st	1005 m	570	sch
1960	ssch	1450 sch	990 sst	555	sch
1720	sch	1410 sst	950 ssch	505	sch
1710	Sch	1580 st	955 sch	485	in
1655	Sch	1350 m	915 m	455	(D
1650	Sch	1285 sst .	905 sch	450	m
1650	St	Vl60 sech	870 m	590	m
1615	sst	1255 sech	840 m	545	sch
1580	Sch	1255 m	820 m	510	sch
1560		1210 sst	790 m
		SSt =	sehr stark
		St «	stark
		m a	mittel
		sch *	schwach
		ss eh =	sehr schwach
	Sch =»	Schulter

909840/1740

DrehvenntSgen;

[α]ρ° - + 191 ± 10° (ο - 0,2 % in Kthanol mit einem

Qehalt von 0,1 % 1η-Salzsäure)

Dae Antibioticum 20 798 RP kann durch aufsteigende DUnnsehichtchromatographi® mit Kieselgel unter Verwendung des Gemische Benzylalkohol-Kthylformiat-Ameisensäure-V/asser (4s4s1>5 Volumina) als Lösungsmittel identifiziert werden*

In diesem System besitzt das Antibioticum 20 798 RP einen Rf-Wert von 0,57» das Daunorublcin weist einen Rf-Wert von Op60 auf und die anderen Bestandteile des Antibiotioums 9865 RP haben einen Rf-Wert Über 0_p60,

Wie das Daunorubicin kann das Antibioticum SO 798 RP in saurem Medium hydrolysiert werden, um ein Aglykon und einen Aminozucker zu liefern. Das Aglykon gehört ebenfalls zum Bereich der Erfindung.

Die Prüfung des Infrarot-Spektrums _a des NMR-Spektrums und des Massen-Spektrums haben armüglißht_f dem Aglykon des Antibioticums 20 798 RP die folgende Formel zuzuordnen %

CHOH-CH-

309840/1740

191-12 4 O

Die Formal des Aglykone des Daunorubicins ist

OH

CO-CH,

Physikalisch unterscheidet sich dieses Aglykon von dem Äglykon des Daunorubieins durch Unterschiede in den Rf= Vierten bei der Dünnsehiehtehromafcographi© in mehreren Lösungsmittelsystemen und insbesondere in den folgenden Systemen:

System 1s ChlorofornHDloxan (95 s 5 Volumina) System 2: Leichte Phase des Osraisohs Kthylasetat-Kthsp« m/3 Phosphatpuffer von pH 4_P8 (5Os50 s25.VoIu-

System	Aglykon von 20 798 RP Rf	■.-.■■ --. -iifvr Aglykon von Daunorubl&in ' Ri¹ ■-".:-'-,■■■ \-\- ::■':
1 ^; 2	0,1 OY?	; "0*25 """ ']

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BAD ORIGINAL

Das Aglykon des 20 798 BP weist die folgenden physikalischchemischen Merkmale aufs

Aussehens Orangerote Nadeln
Schmelzpunkt» 285°C

Löslichkeit: Es ist in Äthylacetat_p Chloroform und Methanol wenig löslich, in Benzol sehr wenig löslich und in Wasser, Kther und Hexan praktisch unlöslich«

Ultraviolett-Spektrum (Bestimmung mit einer Lösung mit

H I — 1—IM 11» IWI HUI W m ι Il —^- mn I Ί WMfr— IIWP ^^

10Λ mg/1 Jn Äthanol):

Absorptionsmaximuin bei 218 nm E* „_ » 500

I dft

Schulter bei ©twa 228 nra E₁ *_ffl = 640

Absorptioiismaximum bei 233*5 nm ^1 em ^ra ^^

Absorptionsmaximum bei 251 nm ^E1 cm "^ ^®

Abßo'^ptionsiTfSxiiaiim bei 289 nm ^1 cm " ^^

Dieses Spektrum ist in Jjjig.·^ gezeigt»

Sichtbares Spektrum (Bestimmung mit einer Lösung mit 10,4 mg/1

in Kthanol):

Schulter bei etwa 470 nm e! 5™ ^m ²^8

Abaorptionamaximum bei 495 nm E^ ^ » 284

909840/ 17-40

Absorptionsmaximum bei 528 nra Schulter bei etwa 570 run

Dieses Spektrum ist in Pig. 5 gezeigt.

r *

Ί cm

1 era

175

24

Infrarot-Spektrum (bestimmt an mit Kaliumbromid verpress-

tem Produkt)ί

Dieses Spektrum ist in Flg. 6 gezeigt, in der als Abszisse einerseits die Wellenlängen in Mikron (oberer Massstab) und andererseits die Wellenzahlen in era (unterer Massstab) und als Ordinate die optischen Dichten aufgetragen sind.

In der folgenden Tabelle II sind die Hauptbanden der Infra rot-Absorption für dieses Produkt angegeben«

Tabelle

3540 Sch	15^0 sch	1065 st	745 sch
3500 Sch	1505 sch	1060 Sch	710 m
3450 st	1470 Sch	1030 m	695 sch
3100 ssch	1445 st	990 st	680 ssoh
2970 m	1435 m	940 st	660 sch
2935 m	1420 m	915 m	625 Sch
2890 sch	1380 st	905 sch	615 Sch
2840 sch	1350 Sch	880 sch	590 sch
2650 Sch	1285 sst	860 sch	545 sch
1655 Sch	1250 st	840 ssoh	500 ssoh

909840/ 1 7AO

	."... /"	1210 st	■	810 st	191 12A0
1635 Sch		1190 Sch	790 in	485 sch
1615 sst	"■■< ■■."-■.-■	1110 m	765 m	450 m
1585 sst		sst	* sehr stark	430 sch
		St	** stark
	m	* mittel
ach	* schwach
ssch	■ sehr schwach
Sch	* Schulter

Die bakteriostatische Wirksamkeit des 20 798 HP wurde nach einer der Üblicherweise für diesen Zweck verwendeten Ver» dünnungsmethoden bestimmt. Für jeden Keim wurde die kleinste Konzentration an Substanz bestimmt* die unter definierten Bedingungen jegliche sichtbare Entwicklung in einem geeigneten NHhrmediu» verhindert. Die Ergebnisse der versohle" denen Bestimmungen sind in der nachfolgenden Tabelle 2X1 zusammengestellt, in der die minimalen Konzentrationen in ug Substanz je ecm versuchsmedium ausgedruckt sind.

9098ΛΟ/174

T a b e lie

III

	Streptococcus faecalls	Minimale Henaii~ ^:χ	- ' ■.---■_
Geprüfte BakterienetgsKie	(Faculty de Pharmacle, Paris)	konzentration^ _{,	; ' . . 14 Ο.- -.- ---ν.
	*Mycobaoterium smegmatis ATOC 607**	in ug/ocm	24
Staphylococcus aureus, Stamm 209 P	Klebsiella pneumonlae ATCC 10 031		über 28
ATCC £538 P	Klebslella pneumonlae resistant gegen	too
das Antibioticum 9865 RP		über 83
Streptococcus pyogenes haemolytieus	über 33
(Stamm Dig 7, Institut Pasteur)	5,8
Dlplocoocus pneumonlae (Stamm Til«	über 330
Institut Pasteur)
*Sarcina lutea ATCC 931**	über 200
Bacillus subtilis (ATCC 663?)
Mycöbaoterium phlei (bakteriologisches	11
Institut von Lyon)
Mycobacterium para-enegmatis	■■ ;. ■ M ■. ■ . ■
(A 75» Lausanne)	12
Proteus X I9	21
Brucella bronohiseptica
(CN 387 -Wellcome Institut)	*31**
Pasteurella multocida
(A 125, Institut Paeteur)	- 3,1 ■.-. .-'
Lactobacillus easel ATCC 7469	über 83
Neisseria catarrhalis A 152
Salmonella paratyphi A	170
(Lacasse, Institut Pasteur)

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Die antltumoralen Wirkungen des Antibiotlouma 20 798 RP wurden im Laboratorium nachgewiesen« wobei es sich als besonders wirksam gegen die Pfropftumoren der Maus, wie beispielsweise die feste Fora von Sarkom 180 und Leukaemia L 1210, erwiesen hat.

Die Toxizität dee Antibioticum 20 798 RP wurde hauptsächlich bei der Haue untersucht. Die letale Dosis 50 % oder DLcq wurde bei Verabreichung auf intraperitonealem Wege be« stimmt

DL₅₀ - 6,5 mg/kg i.p.

Die wirksame Dosis 50 % oder 2>Arq wurde bei der Maus bei I Verabreichung auf suboutanem Wege bei Sarkom 18O

^DA50 " °*Ö mgAg 8.0.

und bei Verabreichung auf Intraperitonealem Wege bei Leukaemle L 1210

DA₅₀ » 0,8 rag/kg i,p,

bestimmt.

Das Antibioticum 20 798 RP kann aus Fermentationsmaischen von Streptomyces coeruleorubidus (NRRL 304-5) nach verschiedenen Methoden isoliert werden.

Man kann die Fermentationsmaische bei einem pH-Wert zwischen 1,5 und 9 filtrieren. Es ist vorteilhaft, diesen Arbeltsgang in saurem Medium und insbesondere unter Ansäuern auf einen pH-Wert zwischen 1,5 und 2 mit Oxalsäure durchzuführen. Es ist auch möglich, die Filtration bei einem pH-Wert zwischen 2 und 7, vorzugsweise In der Nähe von 2, in Anwesenheit eines aliphatischen Alkohols mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen vorzunehmen.

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191 mo

Nach den oben genannten Filtrationsarbeltsgängen wird das gemischte Antibiotika (Bestandteile von 9865 RP und 20 798 RP) in wässriger oder wässrig-alkoholischer Lösung erhalten. Man führt das Gemisch in eine organische Lösung durch Extraktion mit Hilfe eines mit Wasser nichtmischbaren Lösungs» mittels* wie beispielsweise Butanol, Methyllsobutylketon« Äthylacetat oder Chloroform» bei einem pH-Wert zwischen 5 »5 und 9, vorzugsweise bei einem pH in der Nähe von 8«5« über. Dieser Extraktion geht gegebenenfalls eine Behandlung mit einem Ionenaustauscherharz voraus. In diesem Falle wird die wässrige Lösung auf einen pH-Wert in der Nähe von 4 eingestellt und dann an einem carboxylischen Kationenauetauseherharz, vorzugsweise Amberlite IRC 50, im sauren Zyklus fixierte Die Elution wird anschllessend mit einer wässrig-alkoholischen sauren Lösung oder Salzlösung« vorzugsweise mit Methanols das 10 % Wasser und 1 % Natriumchlorid enthält» durchgeführt. Das Eluat wird dann zur Entfernung des Alkohols eingeengt und ansohliessend wie oben angegeben extrahiert.

Man kann die Fermentationsroalsche auch einer Extraktion mit einem mit Wasser nichtmischbaren organischen Lösungsmittel« wie beispielsweise Butanol, Äthylacetat oder Chloroform« bei einem pH-Wert zwischen 5,5 und 9» vorzugsweise bei einem pH in der Nähe von 8,5* unterziehen. In diesem Falle geht die gesamte Aktivität in die organische Phase» die von der wässrigen Phase nach Üblichen Methoden abgetrennt wird.

Das Gemisch der Antiblotica (Bestandteile des 9865 RP und 20 798 RP) wird« gleichgültig« welche Extraktionsweise gewählt wird« sohliesslich in organischer Lösung erhalten. Es kann zu diesem Zeltpunkt vorteilhaft seih« eine Reinigung vorzunehmen« indem das Gemisch der Antibiotics nacheinander in wässrige Lösung und dann in organische Lösung durch Änderung des pH-Werts Übergeführt wird. Das rohe Ahtibiotica*-

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- ¹³ - 191 12A0

gemisch kann anschliessend aus der zuletzt erhaltenen Lösung durch Einengen oder Ausfällen mit einem schlechten Lösungsmittel, wie beispielsweise Hexan» isoliert werden,

Oegebenenfalle kann die Fermentationsmaische vor den Extraktionsarbeltsgängen in saurem Medium bei einer Temperatur zwischen 10 und 75⁹C wahrend einer Zeitspanne, did von 30 Minuten bis zu 48 Stunden variieren kann» behandelt werden« um das Antibioticum 9865 RP an Daunorubicin anzureichern. Unter diesen Bedingungen wird das Antibioticum 20 798 RP nicht hydrolysiert.

Zum Ansäuern der Maische eignen sich Mineralsäuren (z.B. Salzsäure« Phosphorsäure, Schwefelsäure) oder organische f

Säuren (z.B. Essigsäure, Oxalsäure usw.) in verschiedenen Konzentrationen, doch wird vorzugsweise Salzsäure oder Oxalsäure bei Konzentrationen zwischen 0,01n und 1n verwendet.

Vorzugsweise wird die Hydrolyse zwischen 15 Stunden bei 20⁰C und 1 Stunde bei 50⁰C durchgeführt·

Eine besonders vorteilhafte Isolierungsmethode besteht darin, die organische Lösung auf einen pH-Wert in der Nähe von 4, vorzugsweise mit Essigsäure anzusäuern und sie dann unter vermindertem Druck auf ein kleines Volumen einzuengen. Die Zugabe eines schlechten Lösungsmittels* wie beispielsweise Hexan, zu dem erhaltenen Konzentrat führt dann zur Ausfällung des Oemlschs der Antibiotics.

Das rohe Antiblotioagemlsoh kann auch in Form eines Salzes, wie beispielsweise des Hydrochloride, isoliert werden, das man durch Zugabe einer Säure, wie beispielsweise Salzsäure, zu der Antibioticalösung und Ausfällung durch Zugabe eines sohlechten Lösungsmittels, wie beispielsweise Acetone herstellen kann. '

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-14- 19117ΛΠ

Das Antibioticum 20 798 RP kann von den Bestandteilen des ■'■ Antibioticums 9865 RP durch Anwendung üblicher Methoden« wie beispielsweise der Chromatographie an verschiedenen Ad» sorbentien^ der Oegenstromverteilung oder der Verteilung zwischen verschiedenen Lösungsmitteln_β abgetrennt werden. ^&

Es sei bemerkt, dass diesen verschiedenen Gegenstromverteilungsarbeitegängen verschiedene übliche Reinigungsarbeitsgänge, wie insbesondere Extraktion oder Umkristallisafcion, vorausgehen oder folgen können« um das Antibioticum 20 798 HP in einer für die vorgesehenen Anwendungszwecke geeigneten Form zu erhalten.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung, ohne sie zu beschränken. Im folgenden ist der Prozentsatz des 20 798 RP stets durch Dünnschichtchroraatographie mit Kieselgel mit dem Lösungsmittelsystem Benzylalkohol-Xthyiformlat-Amelsensäure« Wasser {^i4i1:5 Volumina) und direkte fluorimetrische Messung des Chromatogramms, bezogen auf eine Probe des reinen Pro« dukts» bestimmt.

Beispiel 1

Zu 400 1 einer gemäss Beispiel 1 der belgischen Patentschrift 632 391 erhaltenen Maische setzt man 30 g/l an Oxalsäure zu., Man erhitzt 1 Stunde unter ständigem Bewegen bei 50⁰C. Dann setzt man 12 kg Piltrierhilfe zu. Das Semisch von 50⁰C wird auf einer Filterpresse filtriert und der Filterkuchen mit Wasser von 30⁹C gewaschen. Das FlItrat, dessen Volumen 475 1 beträgt, wird auf +5⁰C abgekühlt. Der pH-Wert wird durch Zugabe von konzentrierter Natronlauge auf 4_X5 eingestellt. Das Filtrat wird dann in eine Säule geleitet» die 15 1 Amberllte IRC 50 im sauren Zyklus enthält. Das Filtrat durchströmt das Amber Ii te-Bett von unten nach oben mit einer

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Rate von 45 l/Stunde_f Die Säule wird anschliessend mit 150 1 Wasser mit einer Bate von 45 l/Stunde, da& von unten naoh oben geleitet wird« gewaschen. Die Säule wird anschllessend mit 225 1 einer Methanollösung mit 10 % Wasser, die von oben naoh unten mit einer Rate von 45 l/Stunde geleitet wird, ge« waschen· Die Waschflüssigkeiten werden verworfen, und die Säule wird dann mit einer Lösung der folgenden Zusammensetzung eIulerts

Natriumchlorid	ad	10	g
Wasser	100	ecm
Methanol	1000	ecm

Das Eluat, das den grösseren Teil der Antibiotica enthält, weist ein Volumen von 120 1 auf. Es wird unter vermindertem Druck bei 35°C auf ein volumen von 10 1 eingeengt.

Das Konzentrat wird bei pH 8,5 nacheinander zweimal mit Je 12 1 Chloroform extrahiert. Die Chloroformlösung wird unter vermindertem Drusk auf ®in Volumen von 200 ecm eingeengt. Man setzt 0,8 1 n-Butanol zu und konzentriert erneut unter vermindertem Druck bis %\x einem Volumen von 0,4 1. Zu dieser Lösung setzt man unter ständigem Bewegen 20 ecm 2n~8alz~ sMuro zu » Man erhitzt scat 65°C und setzt langsam 600 ecm Aceton von 50⁰C zu. Man erhält 15 g eines Gemische der kristallisierten Antlbleti>3&<-hydrochlorlde.

Dieses Gemisch enthält 20 % 20 798 RP und TO % Daunorubicln.

Beispiel 2

15 g des gemäss Beispiel 1 erhaltenen Produkts werden unter RUhren in 600 ecm eines Gemische Chloroform-Wasser (1:1 Vo-

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- 16 - 1911 2 4

lumina) gelöst. Der pH-Wert wird durch Zugabe von 18 com 1n-N&tronlauge auf 8,5 eingestellt. Man unterzieht dieses System einer Gegenstromvertellung mit 4 Überführungen in 1 1-(Je fasse η .Man verwendet die schwere Phase (Lösungsmittel) als mobile Phase und die leichte Phase (wässrige FImse) als stationäre Phase und setzt jedesmal 500 ecm von jeder Phase ein. Man behandelt getrennt die wässrige Phase des Gefässes (Lösung A), die Lösungsmitte !phase des Ge fasse s 5 (Lösung B) und das Gemisch wässrige Phase/Lösungsmittelphase der Oefasse 2, 3 und 4.

Die Lösung A wird nacheinander zweimal mit Je 150 ecm eines Gemische Chloroform-n-Bufcanol (1:1 Volumina) bei pH 8»5 ex» trahlert. Die Extrakte werden unter vermindertem Druck auf ein Volumen von 30 com eingeengt. Die so erhaltene Butanollösung wird durch langsame Zugabe von 15 ecm η»Butanols das mit In-Salzsäure gesättigt ist, auf 3 eingestellt. Das Hydrochloric! dee Antibioticums 20 798 RP kristallisiert aus. Die Kristalle werden abfiltriert« gewaschen und getrocknet„ Man erhält 1 g Hydroohiorid des Antibiotieums 20 798 HPo

Die Lösung B wird auf ein Volumen von 30 ecm eingeengt und anschliessend wie die Lösung A behandelt« Man erhält 3S g D&unorubicln-hydroQhlorld.

Das Gemisch aus den Gefäsaen 2_V 3 und 4 wird auf ein Volumen von 200 cc» eingeengt. Man setzt 600 ecm n-Butanol su und engt auf ein Volumen von 100 ecm ein. Durch Zugabe von 1000 ecm Hexan erhält man 8 g eines Gemische, das 20 % Antibioticum 20 798 RP und 70 # Dmmorubicin enthalte

Beispiel 3

2,6 g des wie in Beispiel 2 beschrieben erhaltenen Hydrochloride des Antibioticums 20 798 RP werden in 31 _S6 ecm

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eines Gemische Dioxan-Wasser (4t1 Volumina) gelöst«, Man setzt langsam unter gelindem Rühren 200 ecm wasserfreies Dioxan zu, um die Kristallisation des Hydrochloride des Antibioticum 20 798 RP zu bewirken« Die Kristalle werden abfiltriert und mit 10 ecm wasserfreiem Dioxan gewaschen. Die Kristalle werden 15 Stunden bei 50°C unter vermindertem Druck getrocknet, Man erhält 2,06 g Hydrochlorid des Antibioticums 20 798 RP in reiner Form in einer Ausbeute von 79 %· Dieses Produkt hat die folgende Elementarzusammensetzung:

C « 5^*8 $ H - 6,0 % 0 · 31,9 % N « 2,5 $> Cl » 5,8 %

HoO'--- 3tO % i

Beispiel 4

100 mg des gemHss Beispiel 3 erhaltenen Produkts werden in einem Gemisch Methanol-In-Schwefelsäure (1:1 Volumina) gelöst. Die Lösung wird 1 Stunde auf einem siedenden Wasserbad erhitzt. Durch Abkühlen erhalt man Kristalle, die ab-

filtriert, gewaschen und getrocknet werden. Man erhält so 36 mg Aglykon des Antibioticums 20 798 RP vom F » 285°C

Die vorliegende Erfindung betrifft auch die medizinischen Zusammensetzungen« die das Antibioticum 20798 RP zusammen mit Jedem anderen vertraglichen Produkt, das inert oder selbst physiologisch wirksam ist« enthalten.

Diese Zusammensetzungen können in allen pharmazeutischen Formen, die sieh für den vorgesehenen VerabreichungBweg eig nen, vorliegen ο

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19Τ12Λ0

Der Mengenanteil an wirksamem Produkt in diesen Zusammensetzungen kann je nach der gewünschten therapeutischen Wir·* kung variieren,

Zn der Humantherapie ist das Antibioticum 20 798 RP_r insbesondere gegen akute XymphoblastIsche und myeloblaetische leukaemien, bei Verabreichung auf intravenösem Wege bei täglichen Dosen zwischen 0,1 und 2 mg für einen Erwachsenen wirksam. Eine Zusammensetzung zur Injektion besteht beispielsweise aus einer Lösung mit O₄I nig/eem Wirksubstanz in physiologischem Serum.

Zur Behandlung auf buccalem Wege betragen die Dosen im allgemeinen zwischen 1 und 10 mg je Tag für einen Erwachsenen, Die Zusammensetzungen zur Verabreichung auf bueealem Wegs können insbesondere Tabletten sein«

Das folgende Beispiel erläutert eine erfinduagsgemtisse Iusanunenset zung.

Beispiel 5

Man stellt nach einer üblichen Methode Tabletten mit einer Dosis von 1 mg Wirksubstanz der folgenden Rezeptur har:

Antibioticum 20 798 RP (Hydreehlorid) 0,001 g

Stärke 0,081 g

auogefüllte Kieselsäure 0.016 g

Magnesiumstearat 0,002 g

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Claims

Patentanspruch

Io Antibioticum„ das mit der Nummer 20 798 RP bezeichnet wird» der Formel

CHOH-OH

OGH, OH 0 - CH - OH₂ -CH-UH-CH -CH,

NH,

dessen hydratisierSes Hydroehlorid der Bruttoformel Cg₇H₅₁O^H* HCl · HgO die folgenden Merkmale besitzt: es liegt in Form von orsßgeroten N&3@1r von es 1st in \Ib.B' seF uaö Alkoholen löslich* in Chlor©fox=m wenig lUslioh und in Benzol und Kther pE'ektissh unlöslich j @s schmilzt bei

sein liltravioletit-Spekfcnim und sichtbares Spektrum sind durch die folgenden Absorptionsbanden

Schulter bei etwa 219 nm (E^ ^_m · 465) _t

Schulter bei etwa 22B nm

655)

Absorptionemeximum bei 234 nm (E? ?_rn « 782}

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BAD ORtGfNAU

« 20 »

19112Λ0

Absorptionsrainiraum bei 242 nm (e] £ * 483),

Absorptionsmaximum bei 252 nm (Ej £_m * 563)*

Schulter bei etwa 272 ηπί (Ej J_n « 2Od),

Absorptionsmini nium bei 280 nnt (E₁ ^ «

1 tfcir ^S

Absorptioneinaxiimira bei 290 nm {Ej ^r' 'S 178} ^

bei etwa 320 nm (E^[^_1n *» 28),

Absorptionsmaximum bei 475 nm (e] J_n «143

Schulter b#i etwa 533 nm (e] J_n * 79) und

Schulter b©i etwa 553 nm (E^ "J_n-ί 50) ι

sein Drehvermögen ist [ajjjj » + 191° + 10° (c » 0*2 <f> in Äthanol mit einem Gehalt von 0,1 # 1n«Chlorwasserstoff·= säure).

S₀ Aglyfcon des Antibiotieums 20 798 RP der formel

CHOH-CH₁ ■OH.*--

OH OR

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BAD ORIGfNAl

das die folgenden Merkmale besitzt:

es liegt in Form von orangeroten Nadeln vorι es ist in K thy lace tat, Chloroform und Methanol wenig löslich, in Benzol sehr wenig löslich und in Wasser, Äther und Hexan praktisch unlöslich; es schmilzt bei 285°Cj sein Ultraviolett-Spektrum und sein sichtbares Spektrum weisen die folgenden Absorptionsbanden auf:

1 4k Maximum bei 218 nm (E₁ J_n « 500),

1 4>

Schulter bei etwa 828 nm (E₁ £ » 640),

1 4L
Maximum bei 233,5 nm (E- JL .» 765),

cm
Maximum bei 251 nm (e] J_m * 650),

Maximum bei 289 nm (e] J_n =- 183),

Schulter bei etwa 470 nm (E₁ ^_n » 268),

Maximum bei 495 nm (E^ ^_1n » 284),

Maximum bei 528 nm (e] \_m - 175),

1 ί Schulter bei etwa 570 nm (E₁ £_m » 24).

3. Verfahren zur Herstellung des Antibiotlcums 20 798 RP aus einer Kulturmaische von "Streptomyces cöeruleorubldus" (NRHL 3045), dadurch gekennzeichnet, dass man eine der folgenden Arbeltswelsen durchführt:

a) Man extrahiert das 20 798 RP aus der Maische zusammen mit den Bestandteilen von 9865 RP und isoliert es dann

9098 4 0/1 7AO

durch Anwendung girier physikalisch^chemisehen Praktionierungsmethode;

b) men führt die Behandlung nach (a) nach Anreicherung der Fermentationsiaaische an Daunorubicin durch milde Hydrolyse in saurem Medium durch.

4. Medizinische Zusammensetzung» gekennzeichnet durch einen Gehalt an einer pharmakologisch wirksamen Menge des Antibioticums 20 798 RP in Anwesenheit eines Excipiens oder eines verträglichen therapeutischen Produkts.

909840/1740