DE1808514A1 - Verfahren zur Herstellung von pigmentierenden Produkten - Google Patents

Description

DR. 08. J. REirSTOTT« Wl-NO. W. BONTE

• MONCHlN V, HAVONSHASSt S

Verfahren zur Herstellung von pigmentierenden Produkten

Die vorliegende Erfindung bezieht sieh auf ein neues Verfahren zur Herstellung von Produk&en mit pigmentierender Wirkung.

Insbesondere bezieht eich die Erfindung auf ein mikrobiologisches Verfahren zur Herstellung von Isorenierafcenen der aus laorenieraten, 3~Oxyisorenieraben und 3i3'-DiO3ryißorenieraten bestehenden Klasse durch den neuen Mikroorganismus etrepbomyce* mediolani·

laorenieraten ist ein bekanntes Produkt, in der Literatur von Tamaguchi, Bull.Chem-Soc* Japan» 1957? 50»

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Seite 111 beschrieben, und ebenfalls bekannt sind 5<~öxyisorenierafeen und 5?;5^f-Bioxyisorenieraten, di© io der "belgischen Patentschrift Nr- 637 906 beschrieben sind.

Die obigen Produkte, insbeeondere J-Oxy- xxi>.d 5,3^l~Dio3iy> isorenieraben, weisen eine starke pigmentierende Wirkung auf UDd werden daher bei der Tierhaltung angewendet.

Derartige Produkte können nach der Literatur duroh ziemlich komplizierte chemische Synthesen hergeßteilt werden,

Es wurde nun überraschenderweise ein mikrobiologisoheju Verfahren zur Herstellung derartiger Verbindungen gebunden, das gute Ausbeuten ergibt und viel einfach·? und wlrfcecfeaffclieh vorteilhafter ist ale dio bekannte ohaaischo

Zur Verwendung der so ertjaltenöö Produkt;© in Tierhaltungist es tatsächlich nicht notwendig, eine Trennung und Reinigung derselben durchzuführer-, sondern das Bycel» daa die pigment;ierendon Produltfee enthält, kann als ganzes direkt als Zueaba zu den üblichen Tlernalinmgsioitteln weudeö verden.

StrepüOE^ceß laediolaiiif als Sbaiara 22^5/7* ?·!· garaiferJli&~SfcamEaafflmlTinG beaeichnefe» wurde beim tngtltut für Pflanzenpathologie der Universität; Mailand hinterlegt; UDd erhielt dis Nummer I.P.7. 1952 und wurde weiterhin bei* Commonwealth Mycological Institute, Perry Lane, Kew, Surrey, hinterlegt und erhielt die Nummer I.M.I. 134886.

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Der Mikroorganismus zeigte die folgenden mikroskopischen und biochesrischon morphologischen Eigenschaffcen.

bat d«m üblichen Stil turas dien wird das vegetative durch mehr oder weniger dünne Hyphen, 0*4- - 0-»9/ti dick» lang und reichlich verzweigt, gebildet, die größere, 1 - 1 »3AX dicke, lange und gerade Hyphen "bilden. Von diesen Hyphen verzweigen sich aonopodial Hyphen, die Sporen oder Gporophoren ■bilden, die gerade oder leicht göfranden und lang sind und durch kleine Sporenketten, die zuerst verbunden und dann frei Bind, .gebildet werden. Die Sporen haben eine glatte! überwiegend kubische Fora, sind aber manchmal aueh zylindrisch oder rundlich. Bei mikroskopischer Prüfung treten sie als charakterietische kleine Würfel mit Größen von 0,9 - 1,1 mal 0,9 - 1*1 /a in 35rachoinung.

Eigensciiaf fr ent

Xn Tabelle I aind die Kulfcureigenschaften angegeben, die 811 den angeführten Medien festgestellt vnirden, auf welchen de;:-: Mikroorganismus bei 2Ö°Ö gezüchtet wurde, wobei die Beobach-jungeii am 3.₉ 8., 15« und 20. Tag nach der Animpfuag vorgenommen vrordön,

Der Mikroorganismus zeigt im wesentlichen ein rascb.ee ui)d reichliches Wachetum unter Bildung eines kompakten festen vegetativen K,7ceLg als glatte Patina mit dobfeer- bis orangegelber Färbiuig» Auch das Luftmycel ißt auf allen Kulturmedien

reichlich 8O0849./O73S *-*-#*--**

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reichlich, mit einem eher wattigen Aussehen und einer vanillegelb bis rStliehgelb oder beigegelb Färbung· Bb wurden Im Aussehen des Mikroorganismus keine wesentlichen Unterschiede feet/geeteilt ? wenn er auf synthetischen oder organischen Medien gezüchtet wurde. biochemische Eigenschaften! Proteolyse von Gelatinet positiv Reduktion von Nitraten zu Nitriten» positiv ßtärkehydrolyset positiv .

Milch wird nicht koaguliert» sondern pep ionisiert;

» Melaninproduktionι negativ

Zersetzung von !fyrosint positiv Produktion von Schwefelwasserstofft positiv Der Mikroorganismus erzeugt keine löslichen Pigmente

Die folgenden Kohlenstoff quellen wurden verwendet s Glucose, 1-Arabinose * Saccharose _v d-vfylose» d-Mannifc , d-Irvctose» Maltose» Bamnose und Glycerin! im Gegensatz dazu wurden Meso-Inosit und Baffinose nicht verwertet«

Der Mikroorganisxue wSehst bei 50⁰C nicht und keine Sklerotien· In flüssiger subuereer und geschüttelter Kultur erzeugt er Isovenleraten» J-dy-ißorenieraten und 3 ₉3 * -Dioxy-isorenieraten.

Tabelle I

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tatelle

j Medium	Wacheturn	Luffcmycel	vegetativee liycel	lösliches pigment
. Bennet*s Agar CD	reiohXich, in glatter Patina	reichlich, leicht wattig, vanillegelb alt beige oder rosa Tönen	dottergelb oder aprikosen- golbi gleiche Rück«eib·	keine«
OEaPeOk1S lgar (1)	mäßig, in glatter Patina.	reichlich, wattig, ranillegelb iBit beige- grauen Tönen	Htrongelb bis aprikoeen- gelb, gleiche 6ack»eitt	keine·
Glukose- igar (1)	reichlich, in glatter Patina	»tßig, glatt, vaniliegelb	Bitrongelb» gleiche löek- eeili	JCSiSMI
Glycin- Agar (1)	in leicht faltig** Patina j	reichlich, wattig, rötlichgelb bis rein gelb	aprikoeengelb, gleiehe Sück-	kein··
Baaersön1· Igar (1) j	reichlich, in falti ger Patina i	epSrlich, glattt creae- ITOtB	orangegelb, gleiche aflclc- eeite	keine*
ßtark«- agar und Balz© CS)	*ei*fclioii	reichlich, wattig» rötliehgelb bis hell- beige j	gleiche Büek- ■eifee	keine·
Kartoffel· agar C*) I	in glatter < Patina	staubig biß { wattig· rot- I lichgelb mife j fdnen ΐ	orangegelb, gleich.© ^ck*· s ei fee ;	lcein·^
reichlich» i in glatter ! Patina !

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Forts ofcsrmg der Tabelle

Hafer - agar (3)	reichlich} in glatter Patina	reichlich, ziemlich glatt, staubig rötlichgelb	hellorange, glaich© Bücicseite	ceines
Aeparagin- Glycerin- agar (1)	reichlich» in glatter Patina	reichlich, wattig, von rosa bis hellbeig©	orangegelbi gleiche Rück seite	keines
01υ1ίθ3β- Hefe- extr&kt- agar	röiahlich, in glatter Patina	reichlich, leicht wattig, vanillegelb bis hellbeige	tief orangegelb, gleiche Rück seite	keine»
Stärke- Pepfcon- agej? (1)	reichlich, ija glatter Patina	reichlich, wattig * gölb bie hellbeige	orangegelbf gleiche BÜCk- eeitö	keines
Kalium- niträt- Pepfcon- agar	reichlich» iu glatter Patina	mäßig, roea, vanillegelb mit staubig- rosa Tonen	hollorange- gelb, gleiche EöclsBeite	keines

<1) WeQrfiiaan S.A. "The Actinonorcetes", Bd. il, 1961, S. 328-334-

(2) Pi^idham 'P.G. eb al. "Antibiotics Annual", 1956-1957» S. 9^7-953

(3) Baldacci E. et al. "GiormMicrobipl. Jg, S. 39» 1961

(4) Grein A* et al. "Giorn.Mierobiol. 21$ ß· 2991 1965.

des

3ie Eigenscnsiten, die der geprüft« Mikroorganismus zeigt und die im vorhergehenden beschrieben wurden, gestatten es., ihn der Arfc Streptoioyces Waksman et Henrici (Bergey^ta

Manuaj.

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18085H ■■ - 7 -

Manual of Do'äenninatrive Bacteriology, 1957* S. 774· - 775) zu zna r einen*

Der Mikroorganismus gehört; zur Gruppe "Bectue-fleslbilis·¹, Reihe "yellow" von Pridhan et al. (Appl.iÄicrobiol. ,§, 195β, S. 5S)* Die Farben des vegetativen Ifycels und de» Luftmyoele gestatten es nicht, ihn einer der am meisten bekannttn Untergruppen, die von Weinman (The Actinomycefeee» Bd* XI, S* 117» 1961), Baldaoei (Giorn*ificrobiol· j§» 1958, S« 10), Oause efc al. (Zur Klassifizierung der Acfcinonycefcea, 1958, 8» 1?)* Jl&ig cfe al. (Areh.HikroblOl. JQ, 1C^₁ I960) und Bbtjllög«? e* W. (Aroh.Mikrobiol. £1, 326» 1958) vorg»achlag«n wurden» snzu~ ordnan.

Ein Vergleiah der Eigenschaften dee geprüften HUtrdorganisEitiB mifc jenen, dit in der üifceratmr für die Artjen angegeben sind, die zur Reihe "Tellow** von Pridnam et al· gehören, ergab, daß keiner der letzteren all gene Eigenschaften ■beoitzt, die der geprüfte Mikroorganieistts aufwaiat·

6o kann sue obigen Ausführungen geschlossen werden, daß der geprüfte Mikroorganismus nicht mit einer der in der Literatur beschriebenen Arten identifiziert werden kann und daher als eine neue Art betrachtet werden kann, die mit Stireptonsyceo mediolani bezeichnet wurde*

StreptoioQrcee mediolani kann durch aufeinanderfolgende AnimpfiiDgen fester· Medien oder durch Gefrier trocknung einer Suspension seiner Sporen in Milch aufbewahrt werden«

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Das erfindungsgemäße Verfahren besteht darin, daß der neue Mikroorganismus Stfeptomyces mediolani in subiaerser Kultur .kultiviert wird, wobei daß Kulturmedium eine ftohlensfcoff- und Stickstoffquelle und Mineralsalze enfchäXö« laabesandere wird der Mikroorganismus auf einem flüssigen Kulturmedium unter asroben Bedingungen bei einer Temperatur zwischen Stund 57⁰Cv vorzugsweise bei 27⁰C, während eines Zeitraumes von 72 bis 160 Stunden !kultiviert. Der pH-Wert kann entsprechend den angewendeten Mödien von 6 biß 8 variieren.

Alis Kohlenstoff quelle können Glukose, Dextrin, Starke, verschiedene Mehle (Maismehl₉ Sojamehl, Weizenmehl tiaw«)s Getreideweiohe und ander« Bube bangen, die gewöhnlich verwendet werden, angewendet werden·

Ale Stickstoffquelle können neben dem obtrwähntea Komplex stickstoffhaltige Substanzen, wie Kasein, Baumwolleamenmehl tnad Ammoniums al ze, wie Aemoniumsulfab _f -phosphat _f -cblorid und andere allgemein irerwe&dete Subet/anson« ang«-> wendet werden*

Die Mineralsalze» die für die Herstilltmg der Carotenoide aüfezlich eindi variieren entsprechend dem verwendeten Medium. Beispielsweise können natrium». Kalium-, Mägneeiuia-, Eisen-, Zink-, Kupfer- und Kobeltchloride, -sulfate oder -phosphate, Kaliumcarbonat und andere gewöhnlich atigawendete SaIse verwendet werden. Die Fsrziienfcierun«; kann in Kolben oder in Iiaboratoriunje- oder Indus trieiermentier-

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gefäßan verschiedener Kapazität durchgeführt werden.» Nach Beendigung der Fermonfcierung wird das Mycel von der KulturbiKihe; durch Filtrieren oder Zentrifugierea abgetrennt und die darin enthaltenen pigmentierenden Produkte werden durch Extraktion mit einem geeigneten organischen !»öaungsmifetel, das mit Wasser miechbar oder nicht mischbar ist« wie Methanols Chloroform, Aceton oder ilethylenchlorid* isoliert. Die Abtrennung ^edea Produktes erfolgt durch Chromatographie nach bekannten Methoden*

Die durch das erfindungegemaBt Verfahren erhaltenen Frodukte können bei der Tierhaltung verwendet werden und Ihre hoch pigmentierende Wirkung hat eich insbesondere nütz-

an
lieh erwieee^f ale sie /Geflügel -verabreicht vurden«

Die Produkte werden ede β ο lohe oder in mit Futtermitteln zugesetzt oder voraugsweioe wird das am dom Föruenfeiejsrörfalirem erhaltene %oel dirökij verwendet. Im erateren Fall wird das pigmentierende Prediütt oit einem der Bestandteile der Nahrung» die gewöhnlich zus Füttern wird ^ gemieoht. Wenn de* Myce3# gebzOnnt von de?

Terwtndefe wird» wird ee «dto HeiBluft oder, im Vakuum getroökneb und dann gemahlen«

CaB bo erhaltene BiXirar wird Mit d«m im allgemeinen \^rerwendeten Fufcteriaittel β bark vermischt;. Die Meage des pigaQntierßSideR Pro4tikteat die dem Putfeeisiit-fceln zug^eetzt wird, kamm: enbeprechoiia der sewuiiscbbtn Pigment;ierun^ uad

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entsprechend den gegelrenenfalla vorhandenen natürlichen pigmentierenden J£Lem&B.t&& variieren» Versugsweise beträgt? sie 0,3 bis 6 g pro 100 kg Fafeistrmifctrel.

Die pigaon&isreBle Wirkimg der diireh am ei?fin&BgßgemßBe Vorfahren erhaltenen Produkte ward® durch die farMntensifeäfc yon Pofctiem hQab±mto_t die gemlS der koloriiaefearfLsclien Skala "Roche" (siehe laisgisy P. ©fe al» La eoletu? vitell-ine^M Ed. Hoffmann La Roche) gemessen wurde«, Der Vergäll wurde an 30 Legehennen dnrcfegefCBsrt^ die-? leaa^© alt ware&-_t W0bs& jede in einem linanlkifig war ι die·- ΗθηΒβη xmzoan ±n drei feupp-as. 2« Je 10 ge teil ti. Me letai&lmag aa*fo1e^e gamiß Schemaβ

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Die

(die Werte sind
Kisebaais

Haftr 1?*60

leiaenkleie

BAD

^llt::" : ΙΡΙΡ '!'"■"

ji-Xges Söoßmelil 15,00

Fleischmehl 3} 00

JlBCbmohl 3? 00

Torulaliefe - 1,00

äl-Mebhionin O₃IO

0,70

0_; 30

Schweinefett 1,00

Farcosplex (reg. Marke) 1,00

"Farcomplex" Isis eine liiscimng von Yit?aainen tmd Spurene lemenfcen der folgenden Zueammerusefezimg (die Werte beziehen sich auf 1 kg derselben Miechmig):

geschütztes Vitamin	Λ	j	750 000	I.E.	»Ε*
gaechütstes TTifcaisi»	D3		150 000	I1	»Ε.
geßchiitsfces Vitsusin	B		500	I.
Vitamin B2		Chlorte bracyclinhydrochlorid	0,4	S	*· e
Vitamin B12		OtOC	>2*
		0,1	6
Vitamin PP		2,5	ε	S
Polsäure		0,015
d-Ealaitturpentofchenat	1 8
dlHK&tzionin	^**" ο
	100 g
2 g

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Jod	O1	»1 S
Mangan	7	g
Zink	5	g
Hydroxybutyltoluol	10	g
unbekannte Wachs tumsfaktoren auf	1000

Bei den (trappen 2 und 3 wurden die dehydrierte lasern» und das Mycel durch analoge Kengen Weic'eslclele eraetit. Der Versuch, der 30 Tage dauerte, wurde in zwei Perioden geteilt:

1) Vorversuchsperiode (10 Tage)» in der alle Tiere »ach Belieben mit der Grundiiahrung, die keine Luaerne enthielt* gefüttert? wurden,

2) Ver&ucheperlod· (19 Tage), in der die Tiere, wie oben beschrieben, gefüttert wurden·

Während der Vereuoheperiode und an abwechselnd·» Tagen wurde die Pigeenfclarung dea Bobttm gemeeeea und in der nachstehenden Tabelle II eind die aiinimaleii» aurch«chnit?t;-llchen und maxiaialon J3*gebni«e# engegeben·

Tabelle 11

Gruppen	Vereuchaperiode Roche-Skala	Minimum	Durchschnitt	7,80 4 9,14 11,88
1 2 3	7?00 7,46 7,06	7,50 9,99

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Τ8085Π

Die folgenden Beispiele sollen die vorliegende Erfindung näher erläutern _t ohne daß diese jedoch hierauf beschränkt sein soll.

BEISPIEL· 1;

Die Sporen tragende Oberfläche einer 10 Tage Alten KnIbur von Sbrepbomycea mediolani, der In einem Vereucherohr auf Karboffel-Glueosafc-Agar bei 28⁰C gezüchtet wurde 1 würde entfernt und in 4· ml eterilißiertem deetillierten Wasser gesaaanelt. 0,5 ml dieser Bußpension wurden dazu verwendet, einen 300 ml Kolben onzuimpfen, der 60 ml dee folgenden Mediums enthielt1 Dextrin 4 %

Oaßein . 1 %

Kalziumcarbonat O,5 % Ammoniumsulfat O₉I % Bikaliirophoaphafc 0,01 % Getreideweich« 1 % ■

Leifcungfiwaeser auf 100 ml

Dit Sterilisierun^ wvrde dBtroh KfW.6»«a in ein·» Autoklaven bei 120⁰C wtartod 20 Minuten

Nach der Sterilieieruag betrug de? pß-f«rt de· Medium· 6,9«

Der Kolben wurdt 26 Stunden lang bei 28⁰O auf einem Dr#hechüttler mit 225 tT.p_o|l. mit einen Hub von 3 om bebrütet.

2 ml der so erhalteaen Kultur wurden da2U verwendet, 3OO ml Kolben, die 60 ml des gleichen Mediums enthielten und wie oben beGchrieben e_;terilisiert w.aren, anzuin^fen.

BAD

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wurde unter den gleichen Bedingungen wie oben bebrütet. Nach 120 Stunden Fermentierung vrurden 500 ^ pigmentierende Produkt® pro ml Kulfcurbi'ühe erhalten.

BEISPIEL 2;

E3 wurde wie in Beispiel 1 verfahren mit dem unterschied, daß daß für die produktive Phase verwendete Medium folgende Zusammensetzung hattet unlösliche Stärke 4,5 % Sojamehl 2,25 %

Getreideweiche 2,35 % Natriumchlorid 0,5 % Kaliumcarbonat 0,35 % Leitungswasser auf 100 mi

Nach 120 Standen Fermentierung wurden 600 ψ pl^nentierende Produkte pro ml KultTurbrühe erhalten.

BEISPIEL 3_t ; *

Ss wurde wie in Beiepiel 1 verfahren mit dem Unterschied, daß das für die produktive Phage verwendete l&edium folgende !uusammeneetzunei h&ttHSs Glucose 0,5 %

Baurawoll3ajnenmehl 0,4 %

löeliche Stärke 7 %

Kalziuiaearbonat 1*2 %

Asjmoni^imsulfafc 0,75 #

Qetreideweiche 2,35 Sf

Leitungswasser auf 100

BAD ORIGfNAL

Nach 120 Stunden Fermentierung wurden 900 y»-pigmentier ende Produkt?e pro ml Kulturbrühe erhalten.

BEISPIEL 4;

Ss wurde vie in Beispiel 1 verfahren alt dem Unterschied, daß das für die produktive Phase verwendete Medium die folgende Zusammensetzung hattet
lösliche Stärke 4 %
Casein Λ %

Sojamehl 3 %

Rübennclaßse 0_f2%

Kaliumcarbonat 0,4 %
Magneeiuiaflulfat 0,1 %
Leitungswasser auf 100 ml

Nach 69 Stunden Pensonbieruug wurden 700^ pigmentierende Produkte pro ml Xulturl>rühe erhalten.

BEISPIEL· 5»

Mit einer 20 3age alten Kultur von Streptoagrceg der auf dem Medium und umter den Bedingungen, wie ta Beispiel 1 beschrieben, gezf&shtet werde, wurden drei 300 al Kolben agageiapft, die 60 al des In Beiepiel 1 heechriebentn Medluoe enthielten.

Sie wurden 26 Stunden lang bei 28⁰O unter den in Beispiel 1 beschriebenen Bedingungen bebrütet;.

170 ml der eo erhaltenen Kulüurbrühe wurden daau ver« wendet, um 3000 ml des gleichen flüssigen Mediums ansmimpfen, daa in einem 5 1 Fermenfeiergefäß enthalten war, welches mit

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einem Schxaubenrührer, einem Einlaßrohr zum Einblasen von Joiffc» das unter den» Schraubenrührer endet, einem Wellenbrecher₉ Röhren für die Animpfung, Luftauslaßröhren und einer Temperaturprüf ernrichtung versehen.war.

Daß Verfahren wurde bei 28⁰O mit einer Belüftucge« geschwindigkeit von 5 1 pro Minute und unter Rühren mit «iner Geschwindigkeit von 400 U.p.M. durchgeführt. Während der Feraenfcierung wurde das Schäumen dadurch gesteuert, d&ß geringe Mengen eines Scnaumuntordrüekere auf Silikonbasis zugeaatst wurden.

Die maximale Auebeute an pigmentierenden Produkten nach
wurde/77 Stunden Patentierung erzielt und'-betrug 500v*

pro ml KnlturbrtÜie·

10 1 der Kulturbrtlhe wurden miti 2 % %fle ßupercel (registrierte Harke) filtriert und daj IiIbrat wurde entfernt. Das Mycel wurde bei jRauatemperatür in 3 1 Methanol suspendiert und geschütteltt dann wurde dreimal mit ö« 3 I einer Mischung τοη Methanol-Chloroform (1 i 1) extrahiert»

Die verainigten Ixtrakte wurden wiederholt mit Wae β er gewaechen und di· abgetrennt ο Chlorofaraeohioht; über Natriumsulfat getrocknet und in Vaksnm bei 35⁰O eingedampft« Der dw&elrote ölige Buckstand boetand aus cxnim Pigmentkonplex. Dieser Rückstand »mrde mit JOO ml Petroläishor aufgenommen und sin braunroter Feotstoff abfiltriert, der 1,5 g wog. Die ätherischen Mutterlaugen wurden bis auf stwa 100 ml konzentriert; und über einer Säule neutralen Aluniiniumosyde

909849/073S chromatpgrachiert.,..

BAD ORIGINAL

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■- 17 ~ - - V-. - .■'■"'

cbromato^r&phiert, zuerst durch Eluieran rait; Petroläther, um Fetöe au entfernen, und dann nib Petrolöther, der 1 ^ Aceton enthielt?· Das Sluat der großen oberen Zone wurde auf ein kleines Volumen konzentriert und über Wacht in einem Kühlschrank stehen gelassen! es wurden 400 mg eines purpurroten iirietallinen Produktes mit einem Pp. von 200 - 201⁰O abgetrennt. Adsorpüionsmaxima in sichtbaren Spektrum bei folgenden Wellenlängen (Fraktion A): üösunsBmittel ^ max ^¹V²)

Petroläther (428)» 448, 4?8

Benzol (440), 465» 495

Durch Chromatographie über einer dünnen Schicht

Silikagel wurde gefunden: Bf = 0,85 (Benzol) und Rf = 0,38

A (Petroläther und 1 % Aceton). Diese Traktlon/wurdo dahtr durch Chromatographie und spektrophoteometrißchen Verfltich und durch den lfiechachmtlzpunkt mit; einer synthetisch hergestellten Probe als Isorenieraten ident/ifiziert. Bei Port-führung der Eluierung der Säule mit Petroläther, der 10 % Aceton enthielt» wurde eine zweite Zone gesammeltt von dem auf ein kleines Volumen konzentrierten Bluafc wurden 200 mg eines ziegelroten Pulvers mit; ein« Jp· von 180 - 185⁰C und folgenden Adsorpkionsmaxima im sichtbaren Spektrum bei folgenden Wellenlängen erhalten (Fraktion B): Lösungsmittel λ _ffi

?etroläther (425),

Benzol (438), 463» '+93

909849/073i Durch

BAD

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Durch Chromatographie auf eiiier dünnen. Schicht Silikegol wurde festgestellt: Sf = 0,4-7 (Benzol) und Rf - 0,7 (Methylen-Chlorid)*

Diese Fraktion B iefc in den üblichen organischen Lösungsmitteln wenig löslich, wogegen es in alkoholischem Natriumcarbonat; unter hellroter Färbung sehr löslich ieb, und sie wird durch Ansäuern wieder ausgefällt« Durch Behandlung mit Essigsäureanhydrid in pyridin

-1 wird ein Phenolacetat (\> j^ 1215» 1758) erhalten, das in

alkoholischem Natriumcarbonat; unlöslich ist»

Diese Fraktion vairde durch Chromatographie und spektrophotomefcrischen Vergleich sowie durch, den punkt a3.3 3-Qxy-ißorenieraten idenfeifiziert. Der braunrote Feststoff (1,5 g)f der vorher aus Peüroläfeher gaeannaelt wurde, vajrde über einer Säule Silikagel chromafcographiarb und mit Bensol, das 10 % Aceton enthielt;* eluierfc. ?on der großen Endf.one mtrden durch Abdampfan des Löeuagamittels und nachfolgende Behandlung mit Petroläfeher 600 mg ©ines ziegelroten amorphen Feetetoffee erhalten_s der einen Fp. von 200⁰C (Zers.) und Ads ο rpfc ions maxima im sichfcbarQn Spektnoa bei folgenden Wellenlängen hatte (Fraktion C)t
Lösungsmittel Λ _max Ott/»)

Petroläther (425) * ^6, 475

Benzol (438), 463» 493

Durch Chromatographie über einer dünnen Schicht

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BAD OR-IGINAL

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ßilikag©l wui'cle ieetgeateilt'ί i?f - 0,1 (Benzol) und Rf = 0,26 iKetbylenchlorid). Diese Fraktion O wurde durch Chromafcograpliie tind spekfcrophobomebrischen Vergleich aowie durch den Mieohals 3_J3^I-Moxy**laorenleraten iaenfeifiziert?.

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Claims (1)

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to

Patentansprüche :

1. Mikrobiologisches Verfahren zur Herstellung τοη. Isorenierateneö. der au« iBOr©mera.ten_s jJ-Cxy-isorenierafc UDd ^^-Dio^yisorenieraben bestehenden Klasse, dadurch Kemrzeichnet, daB der neue Mikroorganismus ßtrepfeorayees medioiahi uister aeroban Bedingungen und in subicersdr K iB eiqem flüssigen EuItürmealvani das eine Kohlenstoff- υηά eine Stickstoff quelle vmä. Mineralsalz© enthält?» gezfichüefc wird und das die pigmentierenden Produkte enthaltende Mycel von der Fermentationsbrühe abfilfcrierfc oder abientrifugierfc Wird.

2* Verfahren nach Anspruch 1> dadurch gekennaeichnet, da0 die Fermentierung bei einer■. Temperatur von 24 bis 37⁰O während eines Zeitraumes von 72 bis 160 Bfcundon bei einsm pH-Wert von 6 bis 8 durchgeführt wird.

3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet , daß die pigmentierenden Produkte vom sie enthaltenden .Mycel von Streptorayces mediolani in an sich bekannter Weise mit einem organischen Lösungsmittel, das mit Wasser rnischbar oder nicht mi.ßchbar ist, durch Extraktion abgetrennt werden

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■* it il'T¹:':;¹¹!¹!';:¹¹ "f!" ' : "'■:,' '■ ■ ^:*

ratcL danach isoliert und durca Chromatographie gereinigte werden.

·'·!·.. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet,

daß das von der Fermenbabionabrühe abgetrennt© HycQl von Strepbomyces mediolani in on ßich bekannter ?/eise getrocknet; und gemahlen und Puttermitteln augesotzt wird*

5. Tierisches ITuftormifebei., dadurch eekennsoichnet, daß esa dao Mycel von StreptoE^rces inedioloni, hergestellfe nach einoEi oder mehreren der vorhergehenden Ineprüche, enthält.

6. Tierisches ?utiterraibbel nach Anspruch 5» dadaruh göker-iiaeichnet, daß es dia pigmenftieranden Prodtürta Iborenieraten, 3-Oxy-ißoren.ieraten and 3»3^Diöxy-isorenieraten enthalt.

809643/073»

BAD