DE1808514C3

DE1808514C3 - Mikrobiologisches Verfahren zur Herstellung von Mycel, das Isorenieratene der aus Isorenieraten, 3-Oxyisorenieraten und 3,3'-Dioxyisorenieraten bestehenden Klasse enthält, bzw. von Isorenieratenen der aus Isorenieraten, 3-Oxysorenieraten und 3,3-Dioxyisorenieraten bestehenden Klasse

Info

Publication number: DE1808514C3
Application number: DE1808514A
Authority: DE
Inventors: Giovanni Franceschi; Arpad Grein
Original assignee: SOC FARMACEUTICI ITALIA MAILAND (ITALIEN)
Current assignee: SOC FARMACEUTICI ITALIA MAILAND (ITALIEN)
Priority date: 1968-05-14
Filing date: 1968-11-13
Publication date: 1975-04-24
Also published as: CH525955A; DK122733B; DE1808514B2; BE723901A; BR6804065D0; AT281734B; DK127904B; NL151131B; FR1591037A; GB1181609A; DE1808514A1; IL31045A; IT1050354B; IL31045A0; NL6815796A; US3598702A; SE357384B; ES360241A1

Description

stoff- und eine Stickstoffquelle und Mineralsalze Mikroskopische Eigenschaften

enthalt, züchtet, daß man das die pigmentierenden 15

Produkte enthaltende Mycel von der Fennenta- Auf den üblichen Kulturmedien wird das vegetative

tionsbrühe abfiltriert oder abzentrifugjert, bzw. daß Mycel durch mehr oder weniger dünne Hyphen, 0,4 bis

man daraus die pigmentierenden Stoffe isoliert. 0,9 μ dick, lang und reichlich verzweigt, gebildet, die

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekenn- größere, 1 bis 1,3 μ dicke, lange und gerade Hypher zeichnet, daß die Fermentierung bei einer Tempera- ao bilden. Von diesen Hyphen verzweigen sich monopotur von 24 bis 37°C während eines Zeitraumes von dial Hyphen, die Sporen oder Sporophoren bilden, die 72 bis 160 Stunden bei einem pH-Wert von 6 bis 8 gerade oder leicht gewunden und lang sind und durch durchgeführt wird. kleine Sporenketten, die zuerst verbunden und dann

3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch frei sind, gebildet werden. Die Sporen haben eine gekennzeichnet, daß die pigmentierenden Produkte as glatte, überwiegend kubische Form, sind aber manchvom sie enthaltenden Mycel mit einem organischen mal auch zylindrisch oder rundlich. Bei mikroskopi-Lösungsmittel durch Extraktion abgetrennt werden scher Prüfung treten sie als charakteristische kleine und danach isoliert und durch Chromatographie Würfel mit Größen von 0,9 bis 1,1 0,9 bis 1,1 μ ir gereinigt werden. Erscheinung.

4. Verwendung des nach Anspruch 1 oder nach 30 ,. , . . , _c. ..,
Anspruch 2 erhaltenen MycelsTüs Zusatz zu üb- Makroskopische Eigenschaften

liehen Tiernahrungsmitteln. In Tabelle I sind die Kultureigenschaften angegeben

die an den angeführten Medien festgestellt wurden

auf welchen der Mikroorganismus bei 28°C gezüchtei

35 wurde, wobei die Beobachtungen am 3., 8., 15. unc

20. Tag nach der Animpfung vorgenommen wurden

Der Mikroorganismus zeigt im wesentlichen eir rasches und reichliches Wachstum unter Bildung eine! kompakten festen vegetativen Mycels als glatte Patini

Isorenieraten ist ein bekanntes Produkt, in der Lite- 40 mit dotter- bis orangegelber Färbung. Auch das L uft

ratur von Yamaguchi, Bull. Chem. Soc., Japan, 1957, mycel ist auf allen Kulturmedien reichlich, mit einen

30, S. 111, beschrieben; ebenfalls bekannt sind 3-Oxy- ehre wattigen Aussehen und einer Vanillegelb- bii

isorenieraten und 3,3'-Dioxyisorenieraten, die in der Rötlichgelb- oder Beigegelb-Färbung. Es wurden in

belgischen Patentschrift 687 906 beschrieben werden. Aussehen des Mikroorganismus keine wesentlicher

Die Isorenieratene, insbesondere 3-Oxy- und 3,3'-Di- 45 Unterschiede festgestellt, wenn erauf synthetischenodei

oxyisorenieraten, weisen eine starke pigmentierende organischen Medien gezüchtet wurde.

Wirkung auf und werden daher bei der Tierhaltung „. , . , _. , ,

angewendet. Ihre Wirkung erweist sich besonders bei Biochemische Eigenschaften

Geflügel nützlich. Proteolyse von Gelatine: positiv,

Die Verbindungen können nach der Literatur durch 50 Reduktion von Nitraten zu Nitriten: positiv,

chemische Synthesen !hergestellt werden. Nachteilig ist, Stärkehydrolyse: positiv,

daß solche Verfahren recht kompliziert sind. Die Er- Milch wird nicht koaguliert, sondern peptonisiert

findung ist daher darauf gerichtet, solchen Nachteilen Melaninproduktion: negativ,

abzuhelfen. Erreicht wird dies durch ein mikrobiologi- Zersetzung von Tyrosin: positiv

sches Verfahren, das viel einfacher und wirtschaftlich 55 Produktion von Schwefelwasserstoff: positiv,

vorteilhafter ist als die bekannte chemische Synthese; Der Mikroorganismus erzeugt keine löslichei

außerdem ergibt das neue Verfahren gute Ausbeuten. Pigmente.

Die Erfindung betrifft nun ein mikrobiologisches

Verfahren zur Herstellung von Mycel, das Isoreniera- Die folgenden Kohlenstoffquellen werden ver

tene der aus Isorenieraten, 3-Oxyisorenieraten und 60 wendet:

3,3'-Dioxyisorenieraten bestehenden Klasse enthält Glucose, 1-Arabinose, Saccharose, d-Xylose, d-Man

bzw. von Isorenieratenen der aus Isorenieraten, nit, d-Fructose, Maltose, Ramnose und Glycerin; in

3-Oxyisorenieraten und 3,3'-Dioxyisorenieraten be- Gegensatz dazu wurden Meso-Ionsit und Raffinosi

stehenden Klasse. Es ist dadurch gekennzeichnet, daß nicht verwertet.

man Streptomyces mediolani I. M. 1. 134 886 unter 65 Der Mikroorganismus wächst bei 50⁰C nicht under

aeroben Bedingungen und in submerser Kultur in zeugt keine Sklerotien. In flüssiger submerser und ge

einem flüssigen Kulturmedium, das eine Kohlenstoff- schüttelter Kultur erzeugt er Isorenieraten, 3-Oxy-iso

und eine Stickstoffquelle und Mineralsalze enthält, renieraten und 3,3'-Dioxy-isorenieraten.

Tabelle I

Medium	Wachstum	Luftmycei	Vegetatives Mycel	Lösliches Pigment
Bennets Agar¹)	reichlich, in glatter Patina	reichlich, leicht wattig, Vanillogelb mit beige oder rosa Tönen	Dottergelb oder Apri kosengelb, gleiche Rückseite	keines
Czapecks Agar¹)	mäßig, in glatter Patina	reichlich, wattig, Vanillegelb mit beige- grauen Tönen	Zitrongelb bis Apri kosengelb, gleiche Rückseite	keines
Asparagin-Glukose- Agar¹)	reichlich, in giatter Patina	mäßig, glatt, Vanille gelb	Zitrongelb, gleiche Rückseite	keines
Glycerin-Glycin-Agar¹)	reichlich, in leicht falti ger Patina	reichlich, wattig, Röt lichgelb bis Reingelb	Aprikosengelb, gleiche Rückseite	keines
Emersons Agar¹)	reichlich, in faltiger Patina	spärlich, glatt, Creme weiß	Orangegelb, gleiche Rückseite	keines
Stärkeagar und Salze²)	reichlich, in glatter Patina	reichlich, wattig, Röt lichgelb bis Hellbeige	Orangegelb, gleiche Rückseite	keines
Kartoffelagar⁴)	reichlich, in glatter Patina	reichlich, staubig bic wattig, Röilichgelb mit hellbeige Tönen	Orangegelb, gleiche Rückseite	keines
Haferagar³)	reichlich, in glatter Patina	reichlich, ziemlich glatt, staubig Rötlichgeio	Hellorange, gleiche Rückseite	keines
Asparagin-G lycerin- agar¹)	reichlich, in glatter Patina	reichlich, wattig, von Rosa bis Hellbeige	Orangegelb, gleiche Rückseite	keines
Glukose-Hefeextrakt- agar	reichlich, in glatter Patina	reichlich, leicht wattig, Vanillegelb bis Hell beige	Tieforangegelb, gleiche Rückseite	keines
Stärke-Peptonagar¹)	reichlich, in glatter Patina	reichlich, wattig, Gelb bis Hellbeige	Orangegelb, gleiche Rückseite	keines
Kaliumnitrat-Pepton- agar	reichlich, in glatter Patina	mäßig, Rosa, Vanille gelb mit staubigrosa Tönen	Hellorangegelb, gleiche Rückseite	keines

¹) W a k s m a η S. Α., »The Actinomycetess Bd. II, 1961, S. 328 bis 334.

²) P r i d h a m T. G. et al., »Antibiotics Annual», 1956 bis 1957, S. 947 bis 953. ') Baldacci E. et al., »Giorn. Microbiol., 9, S. 39, 1961.

⁴) G re i η A. et al., »Giorn. Microbiol.. 13, S. 299, 1965.

Identifizierung des Mikroorganismus

Die Eigenschaften, die der geprüfte Mikroorganismus zeigt und die im vorhergehenden beschrieben wurden, gestatten es, ihn der Art Streptomyces Waksman et Henrici (Bergeys Manual of Determinative Bacteriology, 1957, S. 774 und 775) zuzuordnen.

Der Mikroorganismus gehört zur Gruppe »Rectusflexibilis«, Reihe »yellow« von P r i d h a m et al. (Appl. Microbiol., 6, 1958, S. 52). Die Farben des vegetativen Mycels und des Luftmycels gestatten es nicht, ihn einer der am meisten bekannten Untergruppen, die von Waksman (The Actinomycetes, Bd. II, S. 117, 1961), Baldacci (Girorn. Microbiol., 6, 1958, S. 10), G a u s e et al. (Zur Klassifizierung der Actinomyceten, 1958, S. 17), F1 a i g et al. (Arch. Mikrobiol., 35, 105, 1960) und E 111 i η g e r et al. (Arch. Mikrobiol., 31, 326, 1958) vorgeschlagen wurden, zuzuordnen.

Ein Vergleich der Eigenschaften des geprüften Mikroorganismus mit jenen, die in der Literatur für die Arten angegeben sind, die zur Reihe »Yellow« von P r i d h a m et al. gehören, ergab, daß keiner der letzteren all jene Eigenschaften besitzt, die der geprüfte Mikroorganismus aufweist.

So kann aus obigen Ausführungen geschlossen werden, daß der geprüfte Mikroorganismus nicht mit einer der in der Literatur beschriebenen Arten identifiziert werden kann und daher als ein Vertreter einer neuen Art betrachtet werden kann, die mit Streptomyces mediolani bezeichnet wurde.

Streptomyces mediolani kann durch aufeinanderfolgende Animpfungen fester Medien oder durch Gefriertrocknung einer Suspension seiner Sporen in Milch aufbewahrt werden.

Als Kohlenstoffquelle können Glukose, Dextrin, Stärke, verschiedene Mehle (Maismehl, Sojamehl, Weizenmehl usw.), Getreideweiche und andere Sub-

1

stanzen, die gewöhnlich verwendet werden, angewendet werden.

Als Stickstoffquelle können neben dem obenerwähnten Komplex stickstoffhaltige Substanzen, wie Kasein, Baumwollsamenmehl und Ammoniumsalze, wie Ammoniumsulfat, -phosphat, -chlorid und andere allgemein verwendete Substanzen, angewendet werden.

Die Mineralsalze, die für das erfindungsgemäße Verfahren nützlich sind, variieren entsprechend dem verwendeten Medium. Beispielsweise können Natrium-, Kalium-, Magnesium-, Eisen-, Zink-, Kupfer- und Kobaltchloride, -sulfate oder -phosphate, Kalziumcarbonat und andere gewöhnlich angewendete Salze verwendet werden. Die Fermentierung kann in Kolben oder in Laboratoriums- oder Industriefermentiergefäßen verschiedener Kapazität durchgeführt werden. Nach Beendigung der Fermentierung wird das Mycel von der Kulturbrühe durch Filtrieren oder Zentrifugieren abgetrennt, und die darin enthaltenen pigmentierenden Produkte werden durch Extraktion mit einem ao geeigneten organischen Lösungsmittel, das mit Wasser mischbar oder nicht mischbar ist, wie Methanol, Chloroform, Aceton oder Methylenchlorid, isoliert. Die Abtrennung jedes Produktes erfolgt durch Chromatographie nach bekannten Methoden.

Es ist vorteilhaft, die Fermentierung bei einer Temperatur von 24 bis 37° C während eines Zeitraumes von 72 bis 160 Stunden bei einem pH-Wert von 6 bis 8 durchzuführen.

Das durch das Verfahren der Erfindung hergestellte Mycel wird als Zusatz zu üblichen Tiernahrungsmitteln verwendet.

Wenn das Mycel, getrennt von der Kulturbrühe, verwendet wird, wird es mit Heißluft oder im Vakuum getrocknet und dann gemahlen.

Das zu Pulver gemahlene Mycel wird mit dem im allgemeinen verwendeten Futtermittel stark vermischt Die Menge des pigmentierenden Produktes, die den Futtermitteln zugesetzt wird, kann entsprechend der gewünschten Pigmentierung und entsprechend den gegebenenfalls vorhandenen natürlichen pigmentierenden Elementen variieren. Vorzugsweise beträgt sie 0,3 bis 6 g pro 100 kg Futtermittel.

Die pigmentierende Wirkung der durch das erfindungsgemäße Verfahren erhaltenen Produkte wurde durch die Farbintensität von Dottern bestimmt, die gemäß der kolorimetrischen Skala »Roche« (s. Main guy, P. et al., »La coleur vitelline« Ed. Hoffmann La Roche) gemessen wurde. Der Versuch wurde an 30 Legehennen durchgeführt, die 7 Monate alt waren, wobei jede in einem Einzelkäfig war; die Hennen wurden in drei Gruppen zu je 10 geteilt. Die Behandlung erfolgte gemäß folgendem Schema:

Gruppe

Behandlung

55

Grundnahrung, enthaltend eine kleine Menge an Gesamtpigmenten entsprechend 13,89 mg/kg

Grundnahrung + dehydrierte Luzerne entsprechend einem Gehalt an Gesamtpigmenten von 1500 mg/100 kg der Mischung

Grundnahrung + Mycel entsprechend
einem Gehalt an Gesamtpigmenten von 1500 mg/100 kg der Mischung

su

Die Zusammensetzung der Grundnahrung war wie folgt (die Werte sind Gewichtsprozent):

Mischmais 39,00

Hafer.. 17.60

Weizenkleie 12,00

44%iges Sojamehl 15,00

Fleischmehl 3,00

Fischmehl 3,00

Torulahefe 1.00

dl-Methionin 0,10

Natilomphosphat 0,70

Kaliumcarbonat 6,30

Natriumchlorid 0.30

Schweinefett 1.00

Mischung mit der nachfolgenden

Zusammensetzung 1.00

Diese Mischung ist eine Mischung von Vitaminen und Spurenelementen der folgenden Zusammensetzung (die Werte beziehen sich auf 1 kg derselben Mischung):

Geschütztes Vitamin A 750 000 I. E.

Geschütztes Vitamin D₃ 150 000 I. E.

Geschütztes Vitamin E 500 I. E.

Vitamin B₂ 0,4 g

Vitamin B_x2 0,0024 g

Vitamin K₃ 0,1g

Vitamin PP 2,5 g

Folsäure 0,015 g

d-Kalzäumpantothenat Ig

dl-Methionin 40 g

Cholinchlorid 100 g

Chlortetracyclinhydrochlorid 2 g

Jod 0,1g

Mangan 7 g

Zink 5 g

Hydroxybutyltoluol 10 g

Unbekannte Wachstumsfaktoren

auf 1000 g

Bei den Gruppen 2 und 3 wurden die dehydrierten Luzerne und das Mycel durch analoge Mengen Weizenkleie ersetzt. Der Versuch, der 30 Tage dauerte, wurde in zwei Perioden geteilt:

1. Vorversuchsperiode (10 Tage), in der alle Tiere nach Belieben mit der Grundnahrung, die keine Luzerne enthielt, gefüttert wurden,

2. Versuchsperiode (19 Tage), in der die Tiere, wie oben beschrieben, gefüttert wurden.

Während der Versuchsperiode und an abwechselnden Tagen wurde die Pigmentierung des Dotters gemessen, und in der nachstehenden Tabelle II sind die minimalen, durchschnittlichen und maximalen Ergebnisse angegeben.

Tabelle II

60

	Minimum	Versuchsperiode	Maximum
Gruppen	7,00	Roche-Skala	7,80
	7,46	Durchschnitt	9,14
1	7,06	7,30	11,88
2	8,45
3	9,99

7 8

Die folgenden Beispiele sollen die vorliegende Nach 120 Stunden Fermentierung wurden 90Oy

Erfindung näher erläutern, ohne daß diese jedoch pigmentierender Produkte, die in der vorstehenden Erhierauf beschränkt seih soll, findungsdefinition angegeben sind, pro ml Kultur-

_, . . , , brühe erhalten.

Bet s pie ι 1 _c

Die Sporen tragende Oberfläche einer 10 Tage alten B e ι s ρ ι e 1 4 Kultur von Streptomyces mediolani I. M. I. 134 886, Es wurde wie in Beispiel 1 verfahren mit dem Unter*

der in einem Versuchsrohr auf KartoSel-Glucosat- schied, daß das für die produktive Phase verwendete

Agar bei 28°C gezüchtet wurde, wurde entfernt und Medium folgende Zusammensetzung hatte:

in 4ml sterilisiertem destillierten Wasser gesammelt, ίο ι - r t. c - ι, ,₍

0,5 ml dieser Suspension wurden dazu verwendet, Losucne MarKe 4/.

einen 300 ml Kolben anzuimpfen, der 60 ml des folgen- Casein . 1 /„

den Mediums enthielt: Sojamehl 3 %

Rubenmelasse 0,2%

rj-xtrin A°/ ,. Kalziumcarbonat 0,4%

CaSn r/ Magnesiumsulfat 0,1% Kaliumcarbonat".'.'.'.'.'.'.'.'.'.'.'.'.'. 0,5°% Leitungswasser auf 100ml Ammoniumsulfat 0,1 % Nach 69 Stunden Fermentierung wurden 700 γ Bikaliumphosphat 0,01 % pigmentierender Produkte, die in der vorstehenden Er-

Getreideweiche 1 % so findungsdefinition angegeben sind, pro ml Kultur-Leitungswasser auf 100 ml brühe erhalten.

Die Sterilisierung wurde durch Erhitzen in einem Beispiel » Autoklaven bei 120° C während 20 Minuten durchge- Mit einer 20 Tage alten Kultur des Streptomyces

führt. Nach der Sterilisierung betrug der pH-Wert des as mediolani I. M. I. 134 886, der auf dem Medium und Mediums 6,9. Der Kolben wurde 26 Stunden lang bei unter den Bedingungen, wie in Beispiel 1 beschrieben, 28°C auf einem Drehschüttler mit 225 U. p. M. mit gezüchtet wurde, wurden drei 300-ml-Kolben angeeinem Hub von 3 cm bebrütet. impft, die 60 ml des in Beispiel 1 beschriebenen

2 ml der so erhaltenen Kultur wurden dazu venven- Mediums enthielten.

det, 300 ml Kolben, die 60 ml des gleichen Mediums 3° Sie wurden 26 Stunden lang bei 28°C unter den in enthielten und wie oben beschrieben sterilisiert waren, Beispiel 1 beschriebenen Bedingungen bebrütet. anzuimpfen. Es wurde unter den gleichen Bedingungen 170 ml der so erhaltenen Kulturbrühe wurden dazu

wie oben bebrütet. Nach 120 Stunden Fermentierung verwendet, um 3000 ml des gleichen flüssigen Mediums wurden 500 γ pigmentierender Produkte, die in der anzuimpfen, das in einem 5 1 Fermentiergefäß enthalvorstehenden Erfindungsdefinition angegeben sind, 35 ten war, welches mit einem Schraubenrührer, einem Einpro ml Kulturbrühe erhalten. laßrohr zum Einblasen von Luft, das unter dem Schrau-. -i₀ benrührer endet, einem Wellenbrecher, Röhren für die Beispiel 2 Animpfung, Luftauslaßröhren und einer Tcmperatur-Es wurde wie in Beispiel 1 verfahren mit dem prüfeinrichtung versehen war.

Unterschied, daß das für die produktive Phase ver- 40 Das Verfahren wurde bei 28⁰C mit einer Belüftungswendete Medium folgede Zusammensetzung hatte: geschwindigkeit von 3 1 pro Minute und unter Rühren

400 U. p. M. durchgeführt. Während der Fermentie-

Unlösliche Stärke 4,5 % rung wurde das Schäumen dadurch gesteuert, daß ge- Unlösliche Stärke 4,5% geringe Mengen eines Schaumunterdrückers auf SiIi- Sojamehl 2,25% 45 konbasis zugesetzt wurden. Getreideweiche 2,35 % Die maximale Ausbeute an pigmentierenden Produk- Natriumchlorid 0,5% ten, die in der vorstehenden Erfindungsdefinition an- KaMumcarbonat 0,35% gegeben sind, wurde nach 77 Stunden Fermentierung Leitungswasser auf 100 ml erzielt und betrug 500 γ pro ml Kulturbrühe.

so 101 der Kulturbrühe wurden mit Hilfe von 2%

Nach 120 Standen Fermentierung worden 600 γ eines Filtrierhilfsmittels filtriert, und das Filtrat wurde pigmentierender Produkte, die in der vorstehenden Er- entfernt. Das Mycel wurde bei Raumtemperatur in 31

findangsdefinition pro ml Kulturbrühe — — Methanol suspendiert und geschüttelt; dann wurde

findungsde&mtion angegeben said, pro eil Kulturbrühe dreimal mit je 31 einer Mischung von Methanol-Chloerhaitea. 55 reform (1:1) extrahiert.

Die vereinigten Extrakte wurden wiederholt mit Beispiel 3 Wasser gewaschen und die abgetrennte Chloroform- Es wurde wie in Beispiel 1 verfahren mit dem Unter- schicht Ober Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum

schied, daß das für die produktive Phase verwendete bei 35C eingedampft. Der dunkdrote ölige Rückstand

Medium folgende Zusammensetzung hatte: 60 bestand aus einem Pigmentkomplex. Dieser Rückstand

wurde mit 300 ml Petroläther aufgenommen und ein

Glucose 0,3% braunroter Feststoff abfütriert, der 1,5 g wog. Die Baumwoilsanienniehi 0,4% ätherischen Mutterlaugen wurden bis auf etwa 100 ml Lösliche Stärke 7% konzentriert und über einer Säule neutralen Aluroinium- Katenimcarbonat 1,2% ⁶S oxyds Chromatographien, zuerst durch Ebneren mit Aramontnmsoffat. ■ 0,75% Petroläther. um Fette zn entfernen, und dann mit Getreioeweicbe 245% Petroläther. der 1 % Aceton enthielt. Das Eluat der Leitungswasser auf 100 ml großen oberen Zone wurde auf ein kleines Volumen

konzentriert und über Nacht in einem Kühlschrank stehengelassen; es wurden 400 mg eines purpurroten kristallinen Produktes mit einem Fp. von 200 bis 201 ° C abgetrennt. Adsorptionsmaxima im sichtbaren Spektrum bei folgenden Wellenlängen (Fraktion A):

Lösungsmittel A_n,,,, (m/i)

Petroläther (428), 448, 478

Benzol (440), 465, 495

Durch Chromatographie über einer dünnen Schicht Silikagel wurde gefunden: Rf = Ο..85 (Benzol) und Rf = 0,38 (Petroläther und 1 % Aceton). Diese Fraktion A wurde daher durch Chromatographie und spektrophotometrischen Vergleich und durch den Mischschmelzpunkt mit einer synthetisch hergestellten Probe als Isorenieraten identifiziert. Bei Fortführung der Eluierung der Säule mit Petroläther, der 10% Aceton enthielt, wurde eine zweite Zone gesammelt; von dem auf ein kleines Volumen konzentrierten Eluat wurden 200 mg eines ziegelroten Pulvers mit einem Fp. von 180 bis 185°C und folgenden Adsorptionsmaxima im sichtbaren Spektrum bei folgenden Wellenlängen erhalten (Fraktion B):

Lösungsmittel k_max (m/<)

Petroläther (425), 446, 475

Benzol (438), 463, 493

Durch Chromatographie auf einer dünnen Schicht Silikagel wurde festgestellt: Rf = 0,47 (Benzol) und Rf = 0,7 (Methylenchlorid).

Diese Fraktion B ist in den üblichen organischen Lösungsmitteln wenig löslich, wogegen es in alkoholischem Natriumcarbonat unter hellroter Färbung sehr löslich ist, und sie wird durch Ansäuern wieder ausgefällt.

S Durch Behandlung mit Essigsäureanhydrid in Pyridin wird ein Phenolacetat ν cm-¹ 1215, 1758, KBr erhalten, das in alkoholischem Natriumcarbonat unlöslich ist.
Diese Fraktion wurde durch Chromatographie und

ίο spektrophotometnschen Vergleich sowie durch den Mischschmelzpunkt als 3-Oxy-isorenieraten identifiziert. Der braunrote Feststoff (1,5 g), der vorher aus Petroläther gesammelt wurde, wurde über einer Säule Silikagel chromatographiert und mit Benzol, das 10% Aceton enthielt, eluiert. Von der großen Endzone wurden durch Abdampfen des Lösungsmittels und nachfolgende Behandlung i lit Petroläther 600 mg eines ziegelroten amorphen Feststoffes erhalten, der einen Fp. von 200⁰C (Zers.) und Adsorptionsmaxima im

ao sichtbaren Spektrum bei folgenden Wellenlängen hatte (Fraktion C):

Lösungsmittel Ä„_ax (m/t)

Petroläther (425), 446, 475

Benzol (438), 463, 493

Durch Chromatographie über einer dünnen Schichi Silikagel wurde festgestellt: Rf = 0,1 (Benzol) und Rf = 0,26 (Methylenchlorid). Diese Fraktion C wurde durch Chromatographie und spektrophotometrischen Vergleich sowie durch den Mischschmelzpunkt ah 3,3'-Dioxy-isorenieraten identifiziert.

Claims

\j züchtet, daß man das die pigmentierenden Pc PatentansDrüche- enthaltende Mycel von der Fermentationsbrühe abfal- : Patentansprüche. ^ ^ ab^ntrifugiert bzw. daß man daraus die

1. Mikrobiologisches Verfahren zur Herstellung pigmentierenden Stoffe isoliert.

von Mycel, das Isorenieratene der aus Isorenkra- S Dieser Streptomyces-mediolani-Stamm wurde beim

ten, 3-Oxyisorenieraten und S.S'-Dioxyisoreniera- Instimt für Pfiarizenpathologie der Universität Madand

ten bestenenden Klasse enthält bzw. von Isorenie- unter der Nummer I. O. V. 1952 und weiterhin beim

ratenen der aus Isorenieraten, 3-Oxyisorenieraten Commonwealth Mycological Institute 1Ferry Lane,

und 3,3'-Dioxyisorenieraten bestehenden Klasse, Kew, Surrey, unter der Nummer I. M I. 134 88e

dadurch gekennzeichnet, daß man io hinterlegt.

Streptomyces mediolani I. M. I. 134886 unter Der Mikroorganismus zeigt die folgeren miicro

aeroben Bedingungen und in submerser Kultur skopischen und biochemischen morphologischen Ei

in einem flüssigen Kulturmedium, das eine Kohlen- genschaften.