DE1617300A1

DE1617300A1 - Virus-enthaltende Zubereitungen

Info

Publication number: DE1617300A1
Application number: DE1967A0056648
Authority: DE
Inventors: Howard Tint
Original assignee: American Home Products Corp
Current assignee: Wyeth LLC
Priority date: 1966-08-31
Filing date: 1967-08-31
Publication date: 1971-02-25
Also published as: FR7233M; US3458621A; DE1617300C3; DE1617300B2; GB1125210A; FR1560264A; JPS526337B1

Description

DR. EULE DR. BERG DIPL.-ING. STAPF

PATENTANWÄLTE 8 MÜNCHEN 2. HILBLE8TRA8SE 2O

• Dr, Eule Or. Berg Dipl.-Ing. Stapf, 8 Manchen 2, HilbtatraB· 20

Be/ri

Anwalts-Akte 16 494

American Home Products Corporation New York, 0.S.A.

Virus-enthaltende Zubereitungen"

Die Erfindung betrifft im allgemeinen Virus-enthaltende Zubereitungen, die zur Herbeiführung von Immunisierung nach Anwendung vorgesehen sind. Im besonderen betrifft die Erfindung eine verbesserte Dosierungsform für die Immunisierung des Intestinaltrakts mit Zubereitungen Ie-

' bender Viren und ein Verfahren zur Herstellung dieser

BAD ORIGINAL Dosierungsform·

AHP-4038-f -2-

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Es ist seit vielen Jahren bekannt, daß es mitunter möglich ist gegen Virenbefall, bzw. -erkrankungen durch Immunisieren das Lebewesen über die orale Anwendung von homologen Viren zu schützen, wobei diese gewöhnlich über die Fälligkeit klinische Erkrankung herbeizuführen, abgeschwächt sind. Das Prinzip der Immunisierung gegen Poliomyelitis durch Verwendung des "Sabin Vakzine" kann als Beispiel angesehen werden.

Jedoch ist es im Gegensatz zum Sabin-System, wo der Immun!- sierungsverlauf vergleichbar ist mit dem Weg der natürlichen Infektion, ebenso bekannt, daß man immunisieren kann durch. Infizieren des Intestinaltrakte mit einem Virus, der normalerweise in erster Linie andere empfängliche Bereiche angreift. So werden die Adenovirustypen ebenso den Dünndarm als auch die Atmungeorgane infizieren, und eine Vakzinierung kann auf dem Wege über die Atmungsorgane zum Freiwerden des Virus in dem Dünndarm und dadurch der Herstellung einer Immunisierung erreicht werden·'

Das hier zuletzt aufgezeigt· Prinzip ist wenigstens ein paar Jahre bekannt, und tatsächlich werden Dosierungsformen, die diesen Zweck erreichen sollen, bereits hergestellt und verwendet. Diese Dosierungsformen bestehen aus einem flüssigen oder getrockneten, lebensfähigen Adenovirus (mehrere Typen) in Kapseln, die ihrerseits in einer zweiten Kapsel

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eingeschlossen sind und diese letztere wurde gewöhnlich mit den üblichen, pharmazeutischen, auf den Darm wirkenden Zubereitungen beschichtet. Ein System wurde in einer vorbe reitenden Veröffentlichung, die in dem "Annual Review of Respiratory Diseases, 83x394-403" erschienen ist, beschrie ben. Ein System mit einer au± den Darm wirkenden Kapsel, die den lyophilisierten Virus enthält, ist in einer späteren und mehr ins einzelne gehenden Veröffentlichung beschrieben, die in dem "Journal of the American Medical Association, 195«453-459, 1966" erschienen ist. Wie in den bezeichneten Veröffentlichungen angegeben, ist die Herstellung der bekannten Doeierungsforraen auf die dort beschriebene Gelatineeinkapeelungstechnik begrenzt.

Nach dem Stand der Technik schien die Verwendung der vorausgehend bezeichneten Technik als der alleinig erreichbare Weg Dosierungsformen für die Darstellung des Iaaunisierungsprinsips su erhalten. Jedoch hat diese Technik und die sich ergebenden Dosierungsformen viele innewohnende Beeinträchtigungen und Nachteile. Als schwerster Nachteil wurde befunden, daß die bekannten doppelt-eingekapselten Dosierungsformen nicht gegen das versehentliche Freiwerden des lebenden Virus während des für den Darm vorgesehenen Beschichtungs-Arbeitsverfahrens schützen, eodafi die äußere Oberfläche der für den Darm vorgesehenen Beschichtung verunreinigt wird, Das beinhaltet die Gefahr des Verlust s des Virustiters und Kehr von Wichtigkeit die Kög-

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Henkelt der Infektion In der Mundhöhle und/oder des oberen Verdauungstrakts, was mit dem Risiko der unmittelbaren Infektion der oberen Atmungsorgane verbunden ist, statt die gewünschte Immunisierung an der entfernten Stelle zu schaffen« Obgleich es möglich wäre, die Kapseln vor ihrer Beschichtung mit einem dichten Verschluß zu versehen, um diese Gefahren zu vermeiden, so wäre dies ein extrem arbeitsreiches und zeitkostendes Arbeitsverfahren.ELn weiterer, schwerwiegender Nachteil der bekannten Dosierungsformen besteht darin, daß die Herstellung derselben Handarbeit erfordert und nicht zur Massenproduktion geeignet ist. Es besteht daher die Schwierigkeit eine automatische Vorrichtung für eine Breitenherstellung der bisher bekannt en^apsel-innerhalb-einer-Kapsel "-Formen einzuri ent en.

Es wurde nunmehr eine neue, verbesserte Dosierungsform gefunden, die besonders geeignet ist für die Immunisierung des Verdauungstrakts mit lebenden Viruszubereitungen und die nicht die Nachteile hat, die den bekannten Dosierungsformen, wie vorausgehend angegeben, lnnewohnen.

Me vorliegende Erfindung schafft eine verbesserte Dosierungsform, die umfaßt eine innere gepreßte Tablette, die wenigstens ein pharmazeutisch annehmbares, festes Streckmittel und einen lebenden Virus enthält, der zum Infizieren des Inteetinaltrakts geeignet ist; eine dazwischen liegende, gepreßte Schicht, die wenigstens ein pharmazeutisch annehm-

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bares, festes Streckmittel enthält, wobei die dazwischen liegende Schicht die innere, gepreßte Tablette vollständig einschließt und eine Schale bildet, die als solche eine minimale Wandungsstärke von 0,03 inch (0,76 mm) hat und ein äußeres, für den Darm bestimmtes Beschichtungsmaterial, das vollständig die dazwischen liegende, gepreßte Schicht umschließt. Die neue Dosierungsform kann hergestellt werden durch Mischen von einem Ansatz von lebenden Viren mit einem Ansatz von wenigstens einem pharmazeutisch annehmbaren, festen Streckmittel, Pressen des sich ergebenden Gemische in zusammenhängende Tabletten, weiterhin Schaffen eines Ansatzes von wenigstens einem pharmazeutisch, annehmbaren, Streckmittel, Fressen des Materials dieses Ansatzes, um die zusammenhängenden Tabletten in einer einschließenden Schicht zur Eildung einer Schale mit einer Wandstärke von wenig-* stens 0,05 inch (0,76 mm) und dann vollständiges Abdecken der sich ergebenden größeren Tabletten mit einer, für den Darm vorgesehenen Beschichtung· Der innere Teil oder Kern der beschriebenen Dosierungsform kann entweder eine gepreßte Tablette von lyophilisiertem Material oder eine gepreßte Tablette von festem Material sein, das den adsorbierten, flüssigen Virus enthält, der als ganzes für den Druck geeignet ist. Die letztere !Form beinhaltet halbtrockenes Material, das durch Adsorbieren von Virus-enthaltenden Flüssigkeiten, beispielsweise auf Zucker oder Harzen, erhalten wurde·

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Pie, durch die vorliegende Erfindung geschaffenen Vorteile sindt die ELnschiebung, bzw. das Zwischenschalten einer inerten Fressbeschichtung (dazwischen liegende Schicht) rund um den wirksamen Kern (innere Tablette), schafft eine Barriere gegenüber versehentlichen Freiwerden des lebenden Virus während dem Arbeitsverfahren für die Darmbeschiehtung, die, die äußere Oberfläche der Darabeschichtung verunreinigen könnte. Mit anderen Worten schafft die innere Fressbeschichtung rund um den wirksamen Kern eine physikalische Barriere gegenüber dem zufälligen Verlust von Virus-enthaltenden Fragmenten aus dem Kern in das Verfahren des Aufbringens der Darmbeschichtung, um damit eine zufällige Verunreinigung der Oberflächen der Mundhöhle und der oberen Atmungsorgan e während der Anwendung zu vermeiden.

In diesem Zusammenhang können die bezeichneten Viren Säurelabil sein, und die Darmbeschichtung des druckbeschichteten Kerns ermöglicht dem Virus durch den Hagen im wesentlichen ohne Titerverlust hindurchzulaufen, wie bereits vorausgehend ebenso hingewiesen, schafft die doppelte Kapsel nach. dem Stand der Technik in dieser Hinsicht keine Garantien, wie dies bereite durch tatsächliche Versuche als ungünstig aufgezeigt wurde. Die Fressbeschichtung (dazwischen liegende Schicht)rund um den wirksamen Kern (innere Tablette) nach der Erfindung verhindert im wesentlichen eine schädliche Wirkung auf den Virustiter, die sich durch die Lösungsmittel ergeben könnte, die normalerweise bei der Auf-

BAD .OHiQi

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bringung der Darmbeschichtungen verwendet «erden. Der Schutz der Pressbeschichtung dient dazu, die Integrität des Kerne während der tatsächlichen Anwendung auf dem oralen Weg und gegen Schädigung durch Instrumente oder durch die Zähne beizubehalten. Während die bekennten ELnkapselung-Doeisformen Handarbeit eriorderlich machen und sich nicht leicht zur Massenherstellung eignen, kann letztlich die erfindungsgemäße, mit Darmmaterial abgedeckte, pressbeschichtete Tablette leicht mit einer erhältlichen Vorrichtung aui breiter Basis hergestellt werden.

Die erfolgreiche Herstellung einer erfindungsgemäßen, oralen Dosierungsfora ist besonders überraschend in Anbetracht der bereits bestehenden, theroretisehen Vorurteile, die von der Annahme ausgehen, daß eine bedeutende Wärmezerstörung des Virus während des doppelten Pressens der Tablettenform eintreten würde. Überraschenderweise wurde gefunden, daß dies nicht eintritt.

Bas nachfolgende, nicht-einschränkende Beispiel erläutert die erfindungsgemäSe, pressbeschichtete Tablettendosierungsform, die Art der Herstellung in weiteren Einzelheiten. Es ist klar, daß dieses Beispiel teilweise nur Vergleichszwekken dient.

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Beispiel 1. Herstellung von lyophilieiertem Virus

A. 6000 ml Ansatz von Menusvirus Typ IV₁ der als OPL Nr. 10 identifiziert wurde, wurden nach Standardverfahren filtriert.

B. Dann wurden die nachfolgenden Additive dem gefilterten Ansatz zugemischt»

Bestandteil Menge

(1) 2OjC dicke Magermilch

im Druckkessel bei 4,5 kg 1 500 ml 10 Minuten behandelt

(2) 5&ge Gelatine ÜSF

ia Druckkessel bei 15 Ib 120 ml

(6,8 kg) 15 Min. behandelt

(3) 5JÖ.ges humanes Serumalbumin 72 ml

C. Das sich ergebende Yirus-enthaltende Gemisch wurde dann der Lyophili si erung nach bekannten TrockenHech-Trocknungsverfahren unter Bildung von 344 g Gesamtgewicht lyophilisiertem Material unterworfen. Ee war daher 1 ml der Anfangsvirusfltlssigkeit in jeweils 57,3 mg lyophilisiertem Material vorhanden.

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2. Herstellung von Dosierungsform-Anteilen

A. Mischen vor dem Fressen

334,25 g lyophilisierter Feststoff, erhalten nach der Herstellung von I.G·, die 5833 ecm Anfangsadenovirustyp-IV-Flüssigkeit enthielten, worden mit einem Gemisch von 350 g mikrokristalliner Cellulose, 4,4 g Magnesiumstearat und 885,4 g Milchzucker gemischt.

B. Aniangsdruck

459 E ö.es in Abschnitt A. erhaltenen Gemische marden sofort in einem Standardtablettierungsapparat zu 5100 Tabletten gepreßt, wobei jede 90 mg wog und zylindrische Abmessungen hatte und zwar 0,250 inch (6,3 mm) Durchmesser und 0,113 inch (ca. 4,5 mm) Höhe. (Jede Tablette enthielt 19,1 mg lyophiIiaierten Peststoff oder das Äquivalent von 1/3 ecm Anfangsflüssigkeit.

C. Zweites Fressen

Von den 5100, im Abschnitt B. erhaltenen Tabletten, wurden nachfolgend 2500 Tabletten durch Fressen über jede Tablette pressbeschichtet mit einem Gemisch aus 288,7 mg Milchzucker, 0,9 mg Magnesiumstearat und 72,4 mg mikrokristalline Cellulose unter Bildung von 2500 pressbeschichteten Tabletten (oder "Tablette— in-einer-Tablette"), wobei jede 452 mg wog und zylindrische Abmessungen hatte, die 0,375 inch (9,5 mm)

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Im. Durchmesser und 0,212 incti (8,5 mm) in der Höhe betrugen.

B. Beschichtung für die Daxmeinwirkung

(1) Eine Beschichtungslösung für Darmeinwirkung wurde durch Mischen eines Ansatzes der nachfolgenden Zusammensetzung hergestellt:

Bestandteil Prozent

Celluloseacetat-

hydrogenphthalat 10

Eizinusöl 0,25

Aceton 44,75

Absolutes Äthanol 45

(2) (a) Die 2600 nicht-pressbeschichteten Tabletten wurden mit dem für den Darm bestimmten Gemisch beschichtet unter Verwendung der herkömmlichen Beschichtungsverfahren mit dem Filzmischer. Jede Tablette wurde mit ungefähr 6 mg (Trockengewicht) Barmheschichtungsmaterial überzogen.

(b) Die 2500 pressbeschichteten Tabletten wurden in ähnlicher Weise, unter Verwendung derselben herkömmlichen Beschichtungstechniken unter Verwendung eines Pilzmischers beschichtet. Jede dieser Tabletten wurde mit ungefähr 25 mg (Trockengewicht) Daxmbeschichtungsmaterial überzogen.

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E. Lagerung

Yor der Verwendung wurden die Tabletten bei 5°C gelagert.

F. Prüiung

(1) Bei den nachfolgenden in Vitro-Auflösungeverfahren, wie sie in USF XVI beschrieben sind, widerstanden sowohl die, mit der Darmzubereitung beschichteten nichtpress-beschichteten Tabletten, wie sie unter D.(2)(a) erhalten wurden und die mit der Darmverbindung beschichteten pressbeschichteten Tabletten, wie sie unter D.(2)(b) erhalten wurden, dem künstlichen Verdauungsschleim während einer minimalen Zeitdauer von vier Stunden bei 37⁰C, lösten sich jedoch in einer simulierten Darmflüssigkeit bei 37 C innerhalb von 25 Minuten. Dadurch wurde erläutert, daß die Dosierungsform der Erfindung und damit die ihr innewohnenden Vorteile im Hinblick auf unerwünschtes Viruswandern oder Entweichen ohne Einbuße ihrer letztlichen Funktion im Darm erhalten wird.

(2) Die überragenden Ergebnisse des Intikörpertiters, der unter Verwendung der erfindungsgemäßen, pressbeschichteten Dosierungsform erhalten wurde, wird durch einen Vergleich der serologischen Zahlen der nachfolgenden Tabelle erläutert!

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Ansprechen neutralisierender Antikörper

	Typ IY in Daraver bindung-beschicht et en	Zahl	Zahl mit dem 4-	Tit er	A
	Tabletten	der	fachen Anstieg der	(Geometri
		Men	neutralisi erenden		,1
Tabletten-	Anfangsneu	schen	Antikörper
Typ	tralisieren		11 Tage 15 Tage		,2
	der Antikör-	13	X 13(100) 13(100)
	pertiter
		11	4(3£) 7(64)	sches Mittel)
Pressbe-	Veniger als
schichtet	4	20	10(50) 14(70)
	4 oder mehr	4	1(25) 1(25)	11 Tage 15 Tage
Nicht	Veniger			19,8 115,
pressbe-	als 4
schichtet	4 oder mehr	16,0 141,

	10,6 26,
32 256

x). Verte in Klammern sind Prozentsätze

Aus den Zahlen ist zu ersehen, daß die durch die Erfindung geschaffene Dosierungsform erfolgreich ein Antikörperansprechen bei Antikörper-negativen Individuen, denen es verabfolgt wurde, hervorruft und eine merklich grössere Zunahme Titeranstiegs zum Ergebnis hatf während die nichtpresebeschichteten Tabletten nicht nur beim Hervorrufen eines Antikörperansprechens bei den gesamten Antikörpernegativen Individuen schwächer waren, sondern zusätzlich die Größe des Titeranstiegs bedeutend geringer war*

G. Imaunisierungsverwendung Die Tabletten werden oral Personen verabfolgt, die Infek-

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tion durch Adenovirus verdächtig, bzw· eapfänglioh sind« Die Immunität gegenüber einer solchen Infektion wurde während einer Beobaohtungsdauer von 6 Wochen erhalten. Darüberhinaus zeigt die Prüfung der so immunisierten Personen keinen feststellbaren Befall des Adenovirus an den oberen Atmungsbereiohen. Andererseits wurde der Virus vom Darm abgegeben, wodurch angezeigt wurde, daß die Infektion in dieser entfernten Stelle stattgefunden hattte.

Es ist klar, daß der Virus, der in die erfindungsgemäß·, preßbesohichtete Tablette eingebettet werden kann bei* spielsweise ebenso Influenza, Parainfluenza, Bhinoviru» und andere Viren sein kann, deren primäre Infektionssteile nicht der Darm ist. Dem Fachmann bekannt· Exoipienten, ander· als solohe dieses Beispiels, können ganz oder teilweise ebenso wie die Darmbesohiohtungazubereitung ersetzt werden. Di· Ta-, blettenabmessungen (sowohl der inneren ala auch der äußeren) j können nach den umständen abgewandelt werden« Weiterhin kann die Wirksamkeit der Darminfektion zur Vakzinierung bei einem gegebenen Virus begründet werden. Die Anwendung des Virus bei Kindern oder bei anderen, für welche die orale Anwendung ein Problem sein kann, kann mittels Suppositorien erfolgen. " Es ist weiterhin klar, daß die besondere Virusart, die zuerst lyophilisiert oder anderweitig bearbeitet wird, bevor sie schließlich in die erfindungsgemäße Dosierungsform einverleibt wird, nach dem laohmann bekannten Verfahren herge-, stellt und/oder bebrütet werden kann, _BAD original

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Claims

Patentansprüche!

1. Verfahren zur Herstellung einer Dosierungeform, die geeignet ist zur Immunisierung des Intestinaltrakts mit lebenden Viruszubereitungen, dadurch gekennzeichnet, daß man einen Ansatz von lebenden Viren mit wenigstens einem pharmazeutisch annehmbaren, festen Streckmittel mischt und das sich ergebende Gemisch in zusammenhängende Tabletten preßt, erneut einen Ansatz von wenigstens einem pharmazeutisch annehmbaren Streckmittel herstellt und das Material dieses Ansatzes um die zusammenhängend en Tabletten in einer umhüllenden Schicht preßt unter Bildung einer zusammenhängenden Schale, die jede der zusammenhängenden Tabletten mit einer Stärke von wenigstens 0,03 Inch und dann die sich ergebenden, größeren Tabletten mit einer Darmzubereitungsbeschichtung überzieht.

2. Dosierungsform für die.Immunisierung des Intestinaltrakts «it lebenden Viruszubereitungen, gekennzeichnet durch eine innere gepreßte Tablette, die wenigstens ein pharmazeutisch, annehmbares, festes Streckmittel und einen lebenden Virus, der zur Infizierung des Intestinaltrakts geeignet ist, enthält j eine dazwischen liegende gepreßte Schicht, die wenigstens ein pharmazeutisch annehmbares, festes Streckmittel enthält, wobei die dazwischen liegende Schicht vollständig

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die innere gepreßte Tablette einschließt und eine Schale bildet, die als solche eine niniaale Wandungsstärke von 0,03 Inch hat und ein äußeres, auf den Bars einwirkendes Beschichtungematerial, das vollständig dl· daewisehen liegende gepreßte Schicht abdeckt.

^x (0,76 ■■)

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