DE156354T1 - Kontrollierte oxydation von mikrobiell hergestellten cysteine enthaltenden proteinen. - Google Patents

Kontrollierte oxydation von mikrobiell hergestellten cysteine enthaltenden proteinen.

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DE156354T1 DE198585103559T DE85103559T DE156354T1 DE 156354 T1 DE156354 T1 DE 156354T1 DE 198585103559 T DE198585103559 T DE 198585103559T DE 85103559 T DE85103559 T DE 85103559T DE 156354 T1 DE156354 T1 DE 156354T1
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Claims (10)

EP 85 10 3559.2 Cetus Corporation Deutsche Übersetzung der Patentansprüche nach Art. 67 (1) EPÜ
1. Verfahren zur gesteuerten Oxidation eines vollständig reduzierten mikrobiologisch hergestellten synthetischen Proteins mit einer Aminosäuresequenz die im wesentlichen mit der eines nützlichen Proteins identisch ist, dessen Sequenz Cysteinreste enthält, die in dem nützlichen Protein intramolekular zu einem Cystinrest verbunden sind, wobei die Cysteinreste unter geringst möglicher Über-Oxidation und Bildung nicht der Konformation entsprechender Cystinreste oder Oligomere selektiv zu Cystinresten oxidiert werden, dadurch gekennzeichnet, daß man das vollständig reduzierte mikrobiologisch hergestellte synthetische Protein mit o-Iodosobenzoesäureester in einer wässrigen Phase umsetzt, in der der pH-Wert mindestens eine halbe pH-Einheit unter dem pK -Wert der genannten
Cysteine liegt und in der die Konzentration des synthetischen Proteins im Reaktionsgemisch weniger als etwa 5 mg/ml beträgt und das Molverhältnis von o-Iodosobenzoesäure zu Protein mindestens stöchiometrisch ist, unter der Voraussetzung, daß der o-Iodosobenzoesäureester im letzten Abschnitt der Umsetzung im Überschuß enthalten ist.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß
das nützliche Protein ein natürliches Protein mit einer nützlichen biologischen Aktivität ist und die intramolekulare Verbindung wesentlich für die biologische
Aktivität ist oder die biologische Aktivität erhöht. 35
3. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Protein ß-IFN oder IL-2 ist.
4. Verfahren nach einem der Ansprüche 1 - 3, dadurch ge-
kennzeichnet, daß der pH-Wert zwischen 5,5 und 9 liegt.
5. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-4, dadurch gekennzeichnet, daß die Konzentration des synthetischen Proteins im Bereich zwischen etwa 0,3 bis etwa 0,7 mg/ml liegt.
6. Verfahren nach einem der Ansprüche 1-5, dadurch gekennzeichnet, daß nach der Oxidation das oxidierte Produkt mit einem GeIfiltrations-Verfahren gereinigt wird.
7. Ein oxidiertes Präparat eines synthetischen Proteins mit einer Aminosäuresequenz, die im wesentlichen mit der eines nützlichen Proteins identisch ist, dessen Sequenz Cysteinreste enthält, die in dem nützlichen Protein intramolekular zu einem Cystinrest verbunden sind, dadurch gekennzeichnet, daß es
(I) dieselbe Disulfidbrücke wie das natürliche nützliche Protein aufweist;
(II) im wesentlichen frei von Oligomeren ist; und
(III) weniger als etwa 15 Gewichtsprozent Isomere ententhält, die vom natürlichen nützlichen Protein unterschiedliche Disulfidbrücken aufweisen.
8. Präparat nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß es weniger als etwa 1 Gewichtsprozent Oligomere enthält.
9. Präparat nach einem der Ansprüche 7 oder 8, dadurch gekennzeichnet, daß das synthetische Protein ein synthetisches Mutein eines biologisch aktiven Proteins ist, das mindestens einen zur Bildung einer Disulfidbindung
1 freien Cysteinrest enthält, der für die biologische Aktivität unwesentlich ist, wobei im Mutein mindestens einer der Cysteinreste deletiert ist oder durch eine andere Aminosäure ersetzt ist.
10. Präparat nach einem der Ansprüche 7-9, dadurch gekennzeichnet, daß das synthetische Protein ß-IFN oder IL-2 ist.
DE198585103559T 1984-03-28 1985-03-26 Kontrollierte oxydation von mikrobiell hergestellten cysteine enthaltenden proteinen. Pending DE156354T1 (de)

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