DE1517935A1 - Mittel zur Gelchromatographie - Google Patents

Description

151793:-

Merck- Anlagen 17. Januar 1970

Gesellschaft mbH

Darmstadt

Mittel zur Gelchromatographie

Es sind oereits verschiedene Substanzen bekannt geworden, die als Molekularsiebe in der GelChromatographie verwendet werden können. Hierher gehören insbesondere mit Divinylbenzol vernetztes Polystyrol, mit Äthylenglykol-dimethacrylat vernetztes Polymethylmethacrylat, mit Methylen-bis-acrylamid vernetztes Acrylamid sowie vernetzte Dextrane, Cellulosen, Polysaccharide und Polyvinylalkohole.

Es wurde nun gefunden, daß man ein besonders vorteilhaftes, zur Gel-Permeations-Chromatographie geeignetes Gel dann erhält, wenn man einen bis zu 20 C-Atome enthaltenden Vinylester und/oder Vinylencarbonat mit einer oder mehreren vernetzungsfähigen Vinylverbindung(en) copolymerisiert und dabei entweder direkt oder in einer anschließenden Reaktion eine Vernetzung bewirkt. Die dabei erhaltenen Produkte können anschließend partiell oder vollständig verseift werden. Diese neuen Mittel zur Gelchromatographie besitzen den besonderen Vorteil, daß die an sich organophilen Copolymerisate durcn Hydrolyse beliebig partiell verseift werden und damit in Gele mit, definierten hydrophilen Eigenschaften überführt werden können. Darüberhinaus besitzen die vollständig verseiften, hydrophilen Gele nach der Erfindung insbesondere gegenüber den vernetzten Dextrangelen die Vorteile einer erhöhten Hydrolysebeständigkeit und einer erheblich größeren Resistenz gegen Bakterien- oder Pilzbefall.

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Durch die Copolymerisation der Vinylester bzw. des Vinylencarbonats mit der vernetzenden Komponente erhält man im Gegensatz zu Produkten, die durch nachträgliche Vernetzung löslicher Polymerer hergestellt worden sind, Gele mit besonders vorteilhaften Eigenschaften. Die Polymerisate nach der Erfindung weisen in ihrer molekularen Struktur eine wesentlich größere Inhomogenität auf, wodurch erheblich günstigere mechanische Eigenschaften der Gele erreicht werden. Deshalb weisen insbesondere auch die vollständig verseiften Gele nach der Erfindung gegenüber nachträglich vernetzten Polyvinylalkoholen bei gleichen Vernetzergehalten eine erheblich höhere Festigkeit der Gelpartikel auf, so daß z. B. höhere Filtriergeschwindigkeiten, gegebenenfalls Anwendung von Druck, und längere Säulen bei der Chromatographie und damit höhere Trennleistungen möglich sind.

Gegenstand der Erfindung sind somit Mittel zur Gelchromatographie, die aus einem vernetzten Copolymer!sat bestehen, das erhalten wurde durch Copolymerisation unter gleichzeitiger oder anschließender Vernetzung eines bis zu 20 C-Atome enthaltenden Vinylesters und/oder von Vinylencarbonat mit einer oder mehreren vernetzungsfähigen Vinylverbindung(en). Weiterhin sind Gegenstand der Erfindung solche Produkte, die durch partielle oder vollständige Verseifung eines solchen vernetzten Copolymerisats erhalten werden.

Ferner ist Gegenstand der Erfindung ein Verfahren zur Trennung von Substanzen mit unterschiedlichem Molekulargewicht unter Verwendung der Mittel zur GelChromatographie nach der Erfindung.

Als Vinylester können alle Ester von Carbonsäuren mit 1 bis 18 C-Atomen verwendet werden, wobei die Vinylester der niederen Fettsäuren mit bis zu 4 C-Atomen, also die Formiate, Acetate, Propionate und Butyrate, von besonderem Vorteil sind. Bevorzugt werden Vinylacetat oder Vinylpropionat verwendet, weil diese Verbindungen großtechnisch leicht zugänglich sind. Es lassen sich aber, insbesondere für spezielle Verwendungszwecke, mit

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Vorteil auch die Vinylester z. B. der höheren Fettsäuren verwenden, insbesondere die der Stearin-, Palmitin-, Myristin- und Laurinsäure. Neben den Estern aliphatischer Monocarbonsäuren kommen jedoch zur Herstellung der neuen Gele auch die Vinylester aliphatischer Dicarbonsäuren sowie die vinylester aromatischer oder cycloaliphatischer Säuren in Präge. Beispielsweise seien hier Benzoesäure, Toluylsäure, Cyclohexancarbonsäure, Bernsteinsäure, Adipinsäure, Glutarsäure und Malonsäure genannt. Für besondere Anwendungsgebiete ist es auch vorteilhaft, Gemische dieser Vinylester untereinander oder mit Vinylencarbonat einzusetzen. Besonders wichtig sind z. B. Gemische von Vinylestern niederer aliphatischer Carbonsäuren mit bis zu 20 % an Estern der höheren Fettsäuren.

Um die zur Chromatographie geeigneten Gele nach der Erfindung zu ernalten, werden die Vinylester und/oder das Vinylencarbonat, mit vernetzungsfähigen Vinylverbindungen copolymerisiert. Entscheidend ist hierbei die Struktur CHp=CH-, so daß sowohl die eigentlichen Vinylverbindungen als auch die entsprechenden (die Vinylgruppe enthaltenden) Allylverbindungen verwendet werden können.

Zur Vernetzung befähigte Substanzen sind bekanntlich solche, die zwei reaktionsfähige Gruppen im Molekül besitzen, mit deren Hilfe· die Verknüpfung der Polymerketten erfolgen kann. In der Regel sind diese vernetzungsfähigen Gruppen endständig angeordnet.

Zur Vernetzung befähigte Vinylverbindungen sind z. B. solche, die mindestens 2 Vinylgruppen im Molekül enthalten und bei denen diese Vinylgruppen durch C-C-Bindungen verknüpft sind. Besonders geeignet sind <x,co-Divinylalkylene mit bis zu 20 C-Atomen, z. B. 1,5-Hexadien, 1,9-Dekadien oder 2-Ohlorbutadien. Es ist jedoch auch möglich, solche Verbindungen zu verwenden, bei denen die Vinylgruppen statt durch Alkylengruppen durch Heteroatome

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oder -gruppen verknüpft sind, ζ. B. durcxi Si, SO₂ oder 0. Hierher gehören beispielsweise Diallyldimethylsilan, Methyltriallylsilan, Tetraallylsilan, Divinyl- oder Diallylsulfon sowie die Vinyl- oder Allyläther von 2- bis 6-wertigen Alkoholen, die gegebenenfalls auch nur partiell veräthert sein können, z. B. Alkandioldivinyl- oder -diallyläther wie die Divinyl- oder Diallyläther von Äthylenglykol, Propylenglykol, Butandiol, Hexandiol sowie die Di- oder Trivinyl- bzw. -allyläther des Glycerins oder Divinyl- oder Diallyläther des Sorbits. In Betracht kommen ferner die Divinyl- oder Diallyläther des Di- und Triäthylenglykols sowie die der Polyäthylen- und Polypropylenglykole und die Trivinyl- und Triallyläther des Polypropylentriols.

Weitere zur Vernetzung der Vinylester oder von Vinylencarbonat geeignete Verbindungen sind z. B. die Divinyl- oder Diallylester von Dicarbonsäuren, bei denen die Verseifung durch sterische Hinderung erschwert ist. In Betracht kommen hier vor allem die Ester der Terepnthalsäure, der Tetramethylbernsteinsäure und der Cyclohexanol,4)-dicarbonsäure.

Neuen solchen Verbindungen, die mindestens zwei CHp=CH-Gruppen enthalten, sind zur Vernetzung von Vinylencarbonat oder der Vinylester ferner solche Substanzen geeignet, die neben einer Vinylgruppe noch mindestens eine andere, zur Vernetzung befähigte Gruppe enthalten. Solche Gruppen sind vorzugsweise Epoxyd- oder Aldehydgruppen. Verbindungen mit einer Epoxyd-Gruppierung sind z. B. das ßutadienmonoepoxyd, das Vinylcyclohexenmonoepoxyd oder das Alloocimendioxyd. Diese Epoxyde können mit dem Vinylencarbonat oder den Vinylestern in an sich üblicher ,Veise · copolymerisiert werden, wobei zunächst linearpolymere Verbindungen mit freien Epoxydgruppen entstehen. Anschließend findet die eigentliche Vernetzung statt; dabei kann entweder eine unmittelbare Reaktion der Epoxyde nach einem ionischen Mechanismus erfolgen, der beispielsweise durch Alkalialkoholate katalysiert wird, oder man kann die Epoxydgruppen mit anderen bifunktionellen Verbindungen reagieren lassen, wobei eine Ver-

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netzung der Polymerketten über die dadurch gebildeten Brücken erfolgt. Solche bifunktionellen Verbindungen sind insbesondere mehrwertige, vorzugsweise 2- bis 6-wertige, Alkohole wie Glykol, Glycerin oder Sorbit, ßutandiol, Hexandiol, Dekandiol, Propylenglykol, Pentaerythrit, Diäthylenglykol, Triäthylenglykol oder Verbindungen wie Glyceringlycid. Derartige Umsetzungen zwischen Epoxyden und Alkoholen sind an sich Gekannt und in der Literatur vielfältig beschrieben. Verwendet man eine Verbindung mit einer Aldehydgruppe als vernetzungsfähige Vinylverbindung, so kommt insbesondere Acrolein in Betracht, wobei zu beachten ist, daß die Vernetzung erst durch die während der Polymerisation ablaufende geringfügige Verseifung eintritt, die durch die gegebenenfalls anschließende partielle oder totale Verseifung vervollständigt werden kann.

Die Herstellung der vernetzten Copolymerisate des Vinylencarbonats und/oder der Vinylester mit bis zu 20 C-Atomen kann nach allen üblichen Methoden erfolgen. So kann die Polymerisation z. B. in Substanz, in Lösung, in Emulsion, als Pällungs- oder Perlpolymerisation durchgeführt werden. Bevorzugt wird zur Herstellung der G-ele nach der Erfindung die Perlpolymerisation angewendet, da hierbei die Teilchengröße der Gele von vornherein gesteuert werden kann und damit Verluste, die sonst beim Zerkleinern und Sieben entstehen, vermieden werden können. Die bevorzugte Teilchengröße der Gele liegt je nach dem geplanten Verwendungszweck zwischen 0,001 und 5 mm, vorzugsweise zwischen 0,01 und 0,5 mm.

Die Herstellung der Gele nach der Erfindung durch Perlpolymerisation bietet darüberhinaus den Vorteil, daß man diese Perlpolymerisation als 01-in-tfasser-Polymerisation durchführen kann, die bekanntlich technisch erheblich leichter zu beherrschen ist als die Polymerisation in der umgekehrten Phasenverteilung, die z. B. bei der nachträglichen Vernetzung von Polyvinylalkohol allein möglich ist.

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Die Perlpolymerisation selbst erfolgt nach allen üblichen, in der Literatur hinlänglich beschriebenen Verfahren. Häufig wird eine radikalische Initiierung bevorzugt, die z. B. durch Oxydationsmittel wie Peroxyde, insbesondere Dibenzoylperoxyd, Dilauroylperoxyd, Di-o-tolylperoxyd, Y/asserstoffperoxyd oder auch Salze der Peroxydischwefelsäure oder durch Azoisobutyrodinitril hervorgerufen werden kann. Auch eine Redox-Initiierung ist möglich, z. B. durch Verwendung des Systems Natriumdithionit/ Alkaliperoxydisulfat. Me Initiatoren werden in an sich üblicher Weise in Konzentrationen von 0,01 bis 10 ^, vorzugsweise 0,1 bis 2 ^c«, eingesetzt. Die Perlpolymerisation selbst wird im allgemeinen im Temperaturbereich von etwa 20⁰C bis zum Siedepunkt des am niedrigsten siedenden Monomeren durchgeführt, vorzugsweise bei etwa 50 bis 80⁰C.

Die Polymerisation kann als Substanz-, Lösungs- oder Fällungspolymerisation aucri mit ionischer Initiierung durchgeführt werden, wobei man allgemein bei niedrigeren Temperaturen und in Gegenwart von Lewis-Säuren als Katalysatoren arbeitet. Auch hier gelten die üblichen Reaktionsbedingungen·

Sowohl die Perl- als auch die Emulsionspolymerisation wird in Gegenwart von Wasser durchgeführt. Um ein vorzeitiges Abbrechen der Polymerisation zu verhindern, sollte die Reaktion zweckmäßig bei pH-Werten zwischen 5 und 8, vorzugsweise bei 7,5» erfolgen. Deshalb gibt man normalerweise Puffersubstanzen in wäßriger Lösung hinzu, z. B. Alkaliphosphate, Citrate oder tert. Amine.

Bei der Emulsions- und Perlpolymerisation werden die üblicherweise angewendeten oberflächenaktiven Stoffe zugesetzt; das sind bei der Emulsionspolymerisation vorzugsweise ionogene Stoffe wie beispielsweise Seifen oder Paraffinsulfonate in den gebräuchlichen Konzentrationen von 0,01 bis 10 $, vorzugsweise 0,1 bis 2 %. Bei der Perlpolymerisation werden im allgemeinen wasserlösliche Kolloide bevorzugt, insbesondere Polyvinylalkohol oder

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teilweise verseiftes Polyvinylacetat, Stärke, Pektine und ähnliche, für diesen Verwendungszweck bekannte Stoffe. Hier werden Konzentrationen von etwa 0,01 bis 10 ^, vorzugsweise 0,1 - 2 <fo, bevorzugt.

Das Verhältnis von, organischer zu wäßriger Phase liegt bei der Perlpolymerisation im allgemeinen zwischen 1:1 und 1:20, vorzugsweise zwischen 1:5 und 1:5.

Durch Variation der Polymerisationsbedingungen ist es möglich, die Porengröße der erfindungsgemäßen Verbindungen zu beeinflussen. Eine wesentliche Möglichkeit besteht im Variieren der Konzentration des zugesetzten Vernetzers. Mit zunehmendem Vernetzeranteil werden die Gele weniger quellbar und ihre Formstabilität wird erhöht.

Eine weitere Möglichkeit, die Ausbildung der Poren zu beeinflussen, besteht insbesondere bei der Perlpolymerisation oder bei der Polymerisation in Substanz in der Zugabe bestimmter Stoffe, die vor oder während der Polymerisation zugegeben werden. Hierfür kommen in erster Linie solche Verdünnungsmittel in Betracht, die für das eingesetzte Monomere Lösungsmittel und für das entstehende Polymere Quellungsmittel sind (z. B. Äthylacetat); ferner solche Substanzen, die für das Monomere Lösungsmittel, für das Polymere aber Fällungsmittel sind. Hierher gehören z. B. aliphatische Kohlenwasserstoffe wie Octan, Dodecan, Petroläther oder auch Alkohole, insbesondere Hexylalkohol, Decylalkohol, Heptylalkohol oder Amylalkohol und Äther, vorzugsweise Dibutyläther. Es können aber auch solche Inertstoffe ohne chemische Bindung in das Polymere eingebaut werden, die später wieder aus dem Gel entfernt werden. Hierfür kommen vor allem Polymere wie Polyvinylacetat oder Polystyrol sowie Erdalkalicarbonate, insbesondere Calciumcarbonat, Zucker oder Salze wie NaCl in Betracht. Die Zusatzstoffe müssen natürlich abgestimmt sein auf die übrigen Polymerisationsbedingungen, insbesondere auf die dabei verwendeten Lösungs- und/oder

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Fällungs- und/oder Suspendierungsiiiittel. Je nach der gewünschten Porengröße des Gels können natürlich auch verschiedene solcher Zusatzstoffe gleichzeitig angewendet werden.

Durch diese Zusätze können die verschiedensten Ausschlußgrenzen erreicht werden. Die Ausschlußgrenze ist ein Maß für den Porendurchmesser eines Gels, wobei üblicherweise das Molekulargewicht der kleinsten Moleküle angegeben wird, die gerade nicht mehr in die Poren des Gels eindringen können. So erzielt man durch die Beifügung der Fällungs-/Lösungsmittel Ausschlußgrenzen bis zu Molekulargewichten im Bereich von etwa 10 » vorzugsweise 10^ bis 10 . Die Zugabe von löslichen Polymersubstanzen ermöglicht die Herstellung von Gelen mit Ausschlußgrenzen, die in der Größenordnung der Molekulargewichte der zunächst eingebauten Polymeren liegen. Durch Zusätze von Peststoffen, die nach der Herstellung des Gels wieder entfernt werden, lassen sich aber auch noch Gele mit wesentlich höheren Ausschlußgrenzen herstellen.

Die nach der Erfindung durch Vernetzung von Vinylestern oder Vinylencarbonat erhaltenen Gele können durch partielle oder vollständige Verseifung in ihren Eigenschaften weitgehend verändert und insbesondere hydrophil gemacht werden. Es ist ein besonderer Vorteil der neuen Gele, daß die Verseifung auf jeder beliebigen Stufe abgebrochen werden kann, so daß man je nach dem geplanten Verwendungszweck Gele mit verschiedenen organophilen bzw. hydrophilen Eigenschaften herstellen kann.

Unter der anschließend an die Polymerisation gegebenenfalls durchzuführenden Verseifung sollen hier alle Verfahren verstanden sein, durch die die Hydroxylgruppen des vernetzten Polyvinylfcdencarbonats oder der Polyvinylester in Freiheit gesetzt werden.

Normalerweise wird die Verseifung entweder im sauren oder im alkaliscnen Medium durchgeführt. Sofern zur Herstellung der Gele Vinylformiat verwendet worden ist, kann die Verseifung auch durch einfaches Erwärmen mit Wasser durchgeführt werden.

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Die alkalische Verseifung wird vorzugsweise in solchen Fällen angewendet, wo eine totale Verseifung erwünscht ist. Normalerweise erfolgt die Reaktion mit alkoholischem Alkali, vorzugsweise durch methanolische oder äthanolische Lösungen von Alkali- oder Erdalkalihydroxyden. Neben Methanol und Äthanol lassen sich natürlich auch andere Alkohole, insbesondere Isopropanol, sowie Alkohol/Wasser-Gemische verwenden. Man läßt die Gele mit dem Alkali entweder mehrere Stunden bis Tage bei Raumtemperatur stehen oder man kocht einige Minuten oder Stunden unter Rückfluß. Die Verseifung kann auch in rein wäßrigen Lösungen durchgeführt werden, doch sind dann die benötigten Verseifungszeiten wesentlich langer.

Die saure Verseifung ist dann bevorzugt, wenn eine partielle Verseifung angestrebt wird. Sie wird beispielsweise in wäßriger Lösung unter Zusatz von starken Säuren, z. B. Salzsäure, Schwefelsäure, Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäure oder p-Toluolsulfonsäure, durchgeführt. Erfolgt die Reaktion bei höheren Temperaturen (etwa 100⁰C), so können die Säuren in geringerer Konzentration eingesetzt werden, während bei Verwendung höherer Konzentrationen (15 bis 20 %) die Verseifung auch bei niederen Temperaturen (20 bis 60⁰O) erfolgt. Wird die Reaktion bei Raumtemperatur durchgeführt, so muß gegebenenfalls mehrere Stunden gerührt werden. Die Verseifung kann auch so gelenkt werden, daß ein beispielsweise aus Vinylacetat erhaltenes vernetztes Polymeres in Gegenwart von methanolischem Chlorwasserstoff mit Methanol behandelt wird. Durch Umesterung entsteht dabei Methylacetat, das abdestilliert werden kann, während der verseifte, vernetzte Polyvinylalkohol zurückbleibt. Es ist auch möglich, die Hydroxylgruppen des Vinylesters oder des Vinylidenearbonats in dem vernetzten Polymeren durch aminolytische Verfahren in Freiheit zu setzen. So kann man beispielsweise das aus Vinylacetat hergestellte Gel mit niederen sekundären Aminen, beispielsweise Diäthylamin, Dimethylamin, Piperidin oder Morpholin, umsetzen, wobei man das Polyvinylalkoholgel neben leicht auswaschbaren, substituierten Acetamiden erhält. Auch dieses Ver-

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fahren ist besonders vorteilhaft bei der Herstellung partiell verseifter Gele, da der Verseifungsgrad besonders gut durch Zusatz einer ganz bestimmten Aminmenge geregelt werden kann.

Die naoh der Erfindung erhaltenen Gele sind normalerweise in den üblichen Lösungsmitteln unlöslich. Die unverseiften (organophilen) Gele sind in den meisten organiscnen Lösungsmitteln gut quellbar„ Eine Ausnahme bilden die gesättigten Kohlenwasserstoffe, die beispielsweise bei vernetzten Polyvinylacetatgelen nur eine geringe (wie z. 3. η-Hexan) oder gar keine (wie z. B. n-Octan) Quellung hervorrufen. Naturgemäß hängt das Quellverhalten der Gele sehr stark von der Esterkomponente der Polyvinylester ab. So haben selbstverständlich Gele, die beispielsweise ganz oder teilweise aus vinylstearat hergestellt wurden, erheblich organophilere Eigenschaften und zeigen stärkere Quellbarkeit gegenüber Kohlenwasserstoffen als solche Gele, die aus Vinylacetat oder gar dem sehr hydrophilen vinylformiat hergestellt wurden.

Die verseiften Gele sind vor allem mit Wasser und auch den niederen Alkoholen quellbar. Je nach Vernetzergehalt können die verseiften Gele ein Mehrfaches ihres Volumens an Wasser durch Quellung aufnehmen.

Die Gele nach der Erfindung lassen sich praktisch zu allen Trennungen verwenden, für die eine Gel-Permeations-Chromatographie in Frage kommt. Bekanntlich erfolgt dabei eine molekulargewichtsabhängige Trennung. Moleküle oberhalb einer bestimmten Teilchengröße (Ausschlußgrenze) können überhaupt nicht in die Poren des Gels eindringen und werden zuerst eluiert. Substanzen mit einem Molekulargewicht im Bereich oder unter der Ausschlußgrenze des jeweiligen Gels werden im allgemeinen umso langsamer eluiert, je kleiner ihr Molekulargewicht ist.

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Die neuen (JeIe können ζ. B. zur Trennung von Substanzen mit sehr weit streuenden Molekulargewichten angewendet werden. Das Gel wird im Hinblick auf den geplanten Verwendungszweck, d. h. die zu trennenden Substanzen, die gewünschte Trennungskapazität und die Filtergeschwindigkeit ausgewählt. Sowohl niedermolekulare als auch hochmolekulare Substanzen können mit den Gelen nach der Erfindung getrennt werden.

Besonders gut geeignet sind die neuen Gele zur Abtrennung von Substanzen mit Molekulargewichten über 500, z. B. auch über 1000, weil solche Substanzen sehr oft durch andere Methoden nur schwierig zu trennen sind·

Spezielle Anwendungen der neuen Gele sind z. B. die Bestimmung der Molekulargewichtsverteilung von Polymeren. Im oligomeren Bereich lassen sich Substanzen molekulareinheitlich isolieren. Es ist auch möglich, Substanzen gleichen Molekulargewichts voneinander zu trennen, wenn die Polarität hinreichende Unterschiede aufweist.

So lassen sich z. B. Oligophenylene, Oligourethane, Oligoäthylenglykole und Oligostyrole in molekulareinheitliche Fraktionen zerlegen.

Bei Polymeren, beispielsweise Polystyrol, Polyvinylacetat oder Polyvinylchlorid läßt sich die Molekulargewichtsverteilung bis zu Molekulargewichten von etwa 10 bestimmen.

Die neuen Gele können mit Vorteil auch verwendet werden zur Trennung kolloidaler Substanzen von Substanzen in echter Lösung, insbesondere auch zur Trennung empfindlicher Kolloide, z. B. Enzyme oder Viren.

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Vorteile ergeben sich auch bei der Behandlung von Mischungen, die Proteine oder Polypeptide, z. B. Plasmaprotein, Enzyme wie Pepsin oder Pankreasenzyme oder Hormone, z_o B. Insulin, enthalten. Auch die Trennung von Polysacchariden wie Amylodextrinen, Heparin oder Amylosen ist möglicho

Die neuen Gele können auch Anwendung finden zur Auftrennung komplizierter Gemische, die mehrere ganz verschiedene Verbindungen enthalten, z. B. biologische Flüssigkeiten wie Pflanzenextrakte oder Extrakte aus Mikroorganismen oder tierischen Organen. Dabei kann sowohl eine Auftrennung als auch eine Reinigung erfolgen. In Präge kommt z. B. die fraktionierte Auftrennung von Blutplasma, Seren, Enzymen und anderen Proteinen, Peptiden, Nucleinsäuren, Vitaminen, Coenzymen, Hormonen, Antibiotika, Alkaloiden und Kohlenhydraten.

Speziell die hydrophilen Gele eignen sich beispielsweise zu Trennungen von hochmolekularen und ionischen Substanzen, z. B. zu Entsalzungen von Eiweißstoffen, die sich quantitativ und verlustlos durchführen lassen, wobei in den ersten Fraktionen der Gelchromato^raphie der hochmolekulare Anteil eluiert wird.

In ähnlicher V/eise kann man z. B. hochmolekulare Naturstoffe wie Eiweißstoffe, Kohlenhydrate und Nucleinsäuren, von einem Ionenmilieu in ein anderes Ionenmilieu überführen. Dabei kann sowohl die Natur der Ionen, ihre Konzentration und/oder der pH-Wert der Lösung geändert werden.

Die Anwendungstechnik der neuen Gele nach der Erfindung unter- ■ scheidet sich nicht von der der bekannten stationären Phasen in der Gelchromatographie. Üblicherweise füllt man die Gele in Säulen, die ab- oder aufsteigend von den Elutionsmitteln durchströmt werden. Häufig ist es zweckmäßig, während des Füllens der Säule das Lösungsmittel strömen zu lassen, um damit eine gleichmäßige Packung des Gels zu erzielen. Das Gel muß bis zur Erreichung des Gleichgewichtszustandes vorgequollen sein. Normalerweise wird zu diesem Vorquellen das gleiche Lösungsmittel

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verwendet, das für die spätere Elution vorgesehen ist. In vielen Fällen ist es bei der Herstellung der hydrophilen Gele auch vorteilhaft, die Verseifung gleichzeitig mit der Vorquellung durchzuführen, so daß die Gele in gequollenem Zustand anfallen und nach dem Auswaschen unmittelbar verwendet werden können. Zweckmäßigerweise werden hierbei die Gele vor der Verseifung gesiebt.

Zuweilen ist es aus Zeitersparnis auch günstig, die Chromatograpnie unter Druck durchzuführen. Die Anwendung erhöhter Temperaturen Cz. B. 30 bis 150⁰C) bei der Gelchromatographie begünstigt die Einstellung des Gleichgewichts und erhöht damit häufig die Trennschärfe.

Selbstverständlich können für die Chromatographie auch die verschiedensten Mischungen der neuen Gele verwendet werden. Solche Mischungen sind z. B. besonders dann erwünscht, wenn eine breitere PorengrÖßenverteilung erreicht werden soll, mit der ein größerer Molekulargewichtsbereich erfaßt werden kann. Das kann z. B. bei der Trennung von Polymeren mit hohen und niedermolekularen Anteilen der Pail sein.

A: Herstellung der Gele

Beispiel 1

a) 1200 ml einer 0,5 %igen Polyvinylalkohol-Lösung werden in einen Kolben gefüllt. Die Luft im Reaktionsgefäß wird durch Stickstoff verdrängt und die Lösung auf etwa 80⁰C erwärmt. Unter kräftigem Rühren wird eine entstabilisierte Mischung aus 99,5 g Vinylacetat und 0,5 g Butandiol-(1,4)-divinylätner und 0,2 g AzoisoDutyrodinitril zugetropft. Durch Zugaoe von 6 g Na₂HPO. und 0,35 g NaH₂PO^ wird der pH-Afert der Lösung auf etwa 6 bis 8 eingestellt. Nach etwa 5 Stunden

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wird das Reaktionsgemisch mit 3 1 Wasser gemischt. "Das entstandene Perlpolymerisat setzt sich am Boden ab. Das Wasser wird abdekantiert und das Polymerisat mehrfach mit Wasser gewaschen und anschließend getrocknet. Ausbeute 90 bis 95 %, Spezifisches Gelbettvolumen (Tetrahydrofuran): 8,7 ml/g.

b) 50 g des nach Beispiel 1 a) hergestellten Gels werden in einer Lösung von 20 g NaOH in 500 ml Methanol 10 Stunden unter Stickstoff gerührt, das Gel wird abfiltriert und sorgfältig mit Metnanol und vif asser gewaschen. Das Quellmittel wird im Rotationsverdampfer entfernt.

Beispiel 2

a) Analog Beispiel 1 a) wird eine in 1000 ml einer 0,5 <#igen Polyvinylalkohol-Ldsung suspendierte Mischung von 184 g Vinylacetat, 16 g iiutandiol-(1 ,4)-divinyläther und 0,5 g Azoisobutyrodinitril polymerisiert und aufgearbeitet. Ausbeute etwa 95 i>. Gelbettvolumen (Tetrahydrofuran): 3,9 ml/g.

b) 50 g des nach Beispiel 2 a) hergestellten Gels werden mit 500 ml 18 ^iger Salzsäure unter Stickstoff 10 Stunden gerührt und analog Beispiel 1 b) aufgearbeitet. Sofern das Produkt vor der Verseifung auf die gewünschte Perlengröße gesiebt worden ist, kann die gut mit Wasser gewaschene Suspension unmittelbar verwendet werden.

c) Je 5 g des mit 8 ⁰I Butandiol-(1,4)-divinyläther vernetzten Polyvinylacetatgels werden in 100 ml Erlenmeyer-Kolben einge wogen und unter unterschiedlichen Bedingungen bei Zimmertemperatur partiell verseift. Das Gel wird anschließend mit Wasser auf eine Nutsche gespült, neutral gewaschen und bis zur Gewichtskonstanz im Vakuumtrockenschrank getrocknet.

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Probe	1	2	5	4	5	6
konzentrierte HCl (ml)	0	5	5	5	5	5
H2O (ml)	0	5	5	5	15	5
CH^COOH (ml)	0	0	0	0	0	10
Zeit (Stdn.)	0	1	5	24	24	24
Trockengewicht d. verseiften Probe	5	4,8	5,4	5,1	4,9	5,8
Acetylgruppen- gehalt (unver- seiftes Pro dukt = 100)	100	ca. 100	49	25	ca. 100	62

Beispiel 3

Analog Beispiel 1 a) wird eine in 1200 ml einer 0,5 'folgen Polyvinylalkohol -Lösung suspendierte Mischung von 184 g vinylacetat, 16 g Butandiol-(1,4)-divinyläther, 86 g Amylalkohol und 0,5 g Azoisobutyrodinitril polymerisiert und aufgearbeitet. Ausbeute 90 ^. Das erhaltene Perlpolymerisat besitzt eine makroporöse Struktur und hohe mechanische Stabilität. Gelbettvolumen (Tetrahydrofuran): 6,6 ml/g.

Beispiel 4

In ein mit Stickstoff gespültes und auf 80⁰C erw'irmtes Reaktionsgefäß wird im Verlauf von etwa 2 Stunden eine Mischung aus 50 g Vinylpropionat, 2 g Diäthylenglykol-divinyläther und 0,5 g Dibenzoylperoxyd zugetropft. Nach 3 Stunden wird die Temperatur auf 120⁰C gesteigert. Nach weiteren 2 Stunden wird das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur abgekühlt und gemahlen. Das Produkt ist ein unschmelzbares, farbloses Harz, das in Tetrahydrofuran nicht löslich, aber quellbar ist.

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Beispiel 5

10Og Vinylacetat und 4 g Diäthylenglykol-divinylether werden entstabilisiert (durch Destillation) und mit einer Lösung von 5 g eines Emulgators (Gemisch von Natrium-alkylsulfonaten), 0,5 g Kaliumperoxydisulfat und 0,2 g Natriumdithionit in 300 ml Wasser unter Überleiten von Stickstoff und Rühren bis 80⁰O erwärmt. Der pü-,Vert der Lösung wird durch gegebenenfalls mehrfache Zugabe einer Natriumphosphatpufferlösung auf etwa 7,5 gehalten. Nacn etv/a 2 Stunden wird das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur abgekühlt, das Polymerisat abgesaugt und mit Wasser gewaschen. Nach H-stündigem Trocknen im Vakuumschrank bei etwa 50⁰O erhält man ein farbloses Pulver mit einer Teilchengröße unter 10 mm, die z. T. zu größeren Partikeln agglomeriert sind.

Beispiel 6

Analog Beispiel 1 a) wird eine Mischung aus 150 g Vinylacetat, 45 g Vinylstearat und 5 g Butandiol-(1,4)-divinyläther mit 0,6 g Azoisobutyrodinitril als Initiator in 1000 ml einer 0,5 "bigen wäßrigen Polyvinylalkohollö sung suspendiert, bei 60⁰O polymerisiert und aufgearbeitet. G-elbettvolumen (Tetrahydrofuran): 5 ml/g.

Beispiel 7

Analog Beispiel 1 a) wird eine Mischung aus 195 g Vinylacetat und 5 g Hexandiol-(1,6)-divinyläther mit 1 g Azoisobutyrodinitril als Initiator in 1500 ml einer 0,5 ^igen wäßrigen Polyvinylalkohollö sung suspendiert, bei 80⁰O polymerisiert und aufgearbeitet. Gelbettvolumen (Tetrahydrofuran): 4,3 ml/g.

Beispiel 8

Eine Mischung aus 50 g vinylacetat, 5 g Tetraallylsilan und 0,2 g Azoisobutyrodinitril wird portionsweise in einen mit

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Rückflußkühler versehenen Kolben gegeben, der mit Stickstoff gespült wird und auf 80⁰O geheizt ist. Nach 3 Stunden kühlt man ab und zerkleinert das Gemisch mechanisch auf eine Teilchengröße von etwa 0,5 mm. Das Polymerisat ist unlöslich, aber quellbar in Lösungsmitteln wie Tetrahydrofuran und Methanol.

Beispiel 9

Analog Beispiel 1 a) wird eine in 1200 ml einer 0,5 °4igen PoIyvinylalkohollösung durch kräftiges Rühren suspendierte Mischung von 188 g Vinylacetat, 12 g Butandiol-(1,4)-divinyläther und 0,4 g Azoisobutyrodinitril polymerisiert und aufgearbeitet» Ausbeute 90 - 95 ^, Gelbettvolumen (Tetrahydrofuran): 4,1 ml/g.

Beispiel 10

a) Analog Beispiel 1 a) wird eine in 1200 ml einer 0,5 folgen Polyvinylalkohollösung suspendierte Mischung von 198 g Vinylacetat, 2 g Butandiol-(1,4)-divinyläther und 0,4 g Azoisobutyrodinitril polymerisiert und aufgearbeitet. Gelbettvolumen (Tetrahydrofuran): 7,5 ml/g.

Die Quellung dieses Gels wird in verschiedenen Lösungsmitteln bestimmt. Je 1 g des trockenen Gels wird mit je 20 ml des Lösungsmittels überschichtet. Die Gelbettvolumina (ml/g) betragen:

Hexan 2,5; Cyclohexan 3,0; n-Heptan 1,8; n-0ctan 1,8; Benzol 6,7; Toluol 5,0? Methylenchlorid 10,0; Chloroform 10,0? Tetrachlorkohlenstoff 7,5; Chlorbenzol 7,3; o-Dichlorbenzol 6,9; Methanol 4,2; Äthanol 3,5? i-Amylalkohol 4,0? Diäthyläther 4,6? Di-n-butyläther 3,1? Tetrahydrofuran 7,2; Dioxan 7,7; Äthylacetat 6,8? n-Butylacetat 5,5; Aceton 6,9; Methylethylketon 6,6; Dimethylformamid 7,4; Dimethylsulfoxyd 4,8.

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b) 50 g eines nach Beispiel 10 a) Hergestellten und gesiebten (iels werden unter N₂ mit einer Lösung von 25 g NaOH, 415 ml Methanol und 415 ml Wasser etwa 10 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt und dann 2 Stunden auf 6O⁰C erwärmt. Das verseifte Gel wird abgesaugt und mit Yasser neutral gewaschen. Das Gel wird im gequollenen Zustand unter Wasser aufbewahrt. Es besitzt ein Gelbettvolumen von 170 ml.

Beispiel 11

a) Analog Beispiel 1 a) wird eine in 1200 ml einer 0,5 #igen Polyvinylalkohol^ sung suspendierte Mischung von 196 g Vinylacetat, 4 g Butandiol-(1,4)-divinyläther und 0,4 g Azoisobutyrodinitril polymerisiert und aufgearbeitet. Gelbettvolumen (Tetrahydrofuran): 5,4 ml/g»

b) Analog Beispiel 10 b) werden 35 g eines nach Beispiel 11a) hergestellten Gels verseift. Das Gel besitzt in Wasser ein Gelbettvolumen von 100 ml.

Beispiel 12

Analog Beispiel 1 a) wird eine in 1200 ml einer 0,5 ^igen Polyvinylalkohollösung suspendierte Mischung von 184 g Vinylacetat, 16 g Butandiol-(1,4)-divinyläther, 0,6 g Azoisobutyrodinitril, 86 g Hexylalkohol und 86 g Di-n-butyläther polymerisiert und aufgearbeitet.

Beispiel 13

Eine Mischung aus 50 g Vinylacetat, 2,9 g Dimethyl-diallylsilan und 0,3 g Azoisobutyrodinitril wird unter Stickstoff in einem mit Riickflußkühler versehenen Kolben auf 70⁰C erwärmt. Nach 4 Stunden wird das Reaktionsgemisch bis auf 120⁰C erwärmt und nach weiteren 3 Stunden abgekühlt. Als Reaktionsprodukt wird ein farbloses, zähelastisches Harz erhalten, daa in Tetrahydrofuran quellbar ist.

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Das in Tetrahydrofuran gequollene G-el wird durcn ein Sieb mit einer Maschenweite von 0,1 nun gepreßt und in die 10f ache Menge fesser eingetragen. Durch drei- bis viermaliges Dekantieren und Waschen mit der gleichen Menge Wasser wird das G-el vollständig entquollen. Das granulierte Produkt wird im Vakuumtrockenschrank bei 50⁰O von anhaftendem Wasser befreit und kann dann gesiebt werden.

Beispiel 14

Eine Mischung aus 25 g Vinylacetat, 2,5 g Divinylsulfon und 0,2 g Azoisobutyrodinitril wird unter Stickstoff in einem mit Rückflußkühler versehenen Kolben auf 60⁰C erwärmt und 12 Stunden bei dieser Temperatur gehalten. Danach läßt man erkalten und erhält ein weißes, undurchsichtiges, zähes Harz, das in Tetrahydrofuran quellbar iet_e

Beispiel 15

Analog Beispiel 1 a) wird eine in 1000 ml 0,5 ^iger Polyvinylpyrrolidonlösung suspendierte Mischung von 140 g Vinylacetat, 16 g Butandiol-(1,4)-divinyläther, 44 g Adipinsäuredivinylester, 200 ml n-Heptylalkohol, 100 ml n-0ctan und 4 g Azoisobutyrodinitril polymerisiert und aufgearbeitet. Gelbettvolumen (Tetrahydrofuran): 6,0 ml/g.

Beispiel 16

Analog Beispiel 1 a) wird eine in 1000 ml einer 0,3 ^igen wässerigen Polyvinylpyrrolidonlösung suspendierte Mischung von 140 g Vinylacetat, 16 g Butandiol-(1,4)-divinyläther, 44 g Adipinsäuredivinylester, 150 ml n-Heptylalkohol, 100 ml n-Octan und 4 g Azoisobutyrodinitril polymerisiert und aufgearbeitet. Gelbettvolumen (Tetrahydrofuran): 8,6 ml/g.

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Beispiel 17

Analog Beispiel 1 a) wird eine in 2000 ml 0,25 °'iger Polyvinylpyrrolidon^ sung suspendierte Mischung von 520 g vinylacetat, 80 g Adipinsäuredivinylester, 8 g Azoisobutyrodinitril und 600 ml n-Heptylalkohol polymerisiert und aufgearbeitet. Gelbettvolumen (Tetrahydrofuran): 6,2 ml/g.

Beispiel 18

Analog Beispiel 1 a) wird eine in 2000 ml 0,5 ^iger Polyvinylpyrrolidonlösung suspendierte Mischung von 280 g Vinylacetat, 55 g Adipinsäuredivinylester, 6,5g Azoisobutyrodinitril, 340 ml n-Heptylalkohol und 340 ml n-Octan polymerisiert und aufgearbeitet. Gelbettvolumen (Tetrahydrofuran): 9,3 ml/g.

Beispiel 19

14 g Polyvinylpyrrolidon werden in 1400 ml destilliertem Wasser zusammen mit 8,4 g sekundärem und 0,5 g primärem Natriumphosphat gelöst. Zu der klaren Lösung gibt man die Mischung aus 190 g Vinylacetat, 10 g Divinyladipat und 0,4 g Azoisobuttersäuredinitril. Die Luft im Kolben wird durch Stickstoff verdrängt und das Gemisch wird auf 5O⁰C erwärmt. Anschließend wird die Temperatur langsam auf 70° gesteigert und 4 Stunden beibenalten,, Nach beendeter Reaktion gießt man das Reaktionsgemisch auf etwa 3 1 Wasser. Das Perlpolymerisat sinkt langsam zu Boden. Nach einiger Zeit wird dekantiert und das Polymerisat mehrfach mit frischem Wasser gerührt, Dis das Wasser über dem Bodensatz klar bleibt. Ausbeute: 89 Io des eingesetzten Monomerengemiscnes. 93 % des Perlpolymerisates besteht aus klaren runden Perlen der Größe 0,05 - 0,15 mm. Das Ausscnlußmolekulargewicht des in Tetrahydrofuran gequollenen Gels beträgt 1,15 x 10 .

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Beispiel 20

Analog Beispiel 19 wird die Mischung aus 150 g vinylacetat, 50 g Divinyladipat, 123 g n-Octan, 184 g n-Heptylalkohol und 4 g Azoisobuttersäuredinitril in der Lösung von 10g Polyvinylpyrrolidon, 6,0 g sekundärem und 0,35 g primärem Natriumphosphat in 1000 ml Wasser durch Rühren dispergiert. Man erhitzt das Semisch langsam auf 75°O und steigert die Temperatur nach 2 Stunden auf 85⁰C. Die Verdünnungsmittel werden durch eine ''.Vas & er dampf destillation entfernt. Die weitere Aufarbeitung erfolgt analog Beispiel 19.

Die Ausbeute beträgt 85 > der eingesetzten Monomeren. 80 "h des Perlpolymerisats Destenen aus trüben, runden Perlen der Größe 0,015 - 0,05 mm. Das Ausschlußmolekulargewicht des in Tetrahydrofuran gequollenen Gels beträgt 2,5 x "ΙΟ-*.

Beispiel 21

Analog Beispiel 1 a) wird eine in 1200 ml einer 2 ^igen wässrigen Polyvinylpyrrolidon!^ sung suspendierte Mischung von 120 g Vinylacetat, dO g Divinyladipat, 200 ml n-Butylacetat und 1,2 g Azoisobuttersäuredinitril polymerisiert und aufgearbeitet. Gelbettvolumen (Tetrahydrofuran): 3,6 ml/g. Ausschlußmolekulargewicht für Polystyrol in Tetrahydrofuran; 31000.

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B: Anwendung der SeIe in der Chromatographie

Beispiel I

Ein mit 6 ^l% Butandiol-(1,4)-divinyläther vernetztes Polyvinylacetat (hergestellt nach Beispiel 9) wird in Tetrahydrofuran 24 Stunden gequollen. Die Suspension wird in ein Chromatographierohr (1,15 x 100 cm), das im oberen Teil graduiert ist, gefüllt. Während des Sedimentierens des Gels läßt man das Slutionsmittel scnwach strömen, um eine gleichmäßige Packung zu erzielen. Das Gelbettvolumen kann am graduierten Teil unmittelbar abgelesen werden. Je 1 mg der folgenden 4 Substanzen wird in 0,5 ml Tetrahydrofuran gelöst.

1. Octamethyloctiphenyl (M = 723)

2. Tetramethyl-quaterphenyl (M = 362)

3. p-Terphenyl (M * 230)

4. Toluol (M = 92).

Die Lösung wird auf das Gelbett gegeben und die Säule mit Tetrahydrofuran eluiert. Die UV-Durchlässigkeit des Eluates wird kontinuierlich registriert. Die 4 Substanzen erscheinen auf dem Diagrammstreifen in Form von 4 getrennten Peaks. Bei einem Gelbettvolumen von 99,7 ml erhält man folgende Elutionsvolumina (Peakmaximum): für Substanz 1) 42,3 ml; 2) 53,8 ml; 3) 65,4 ml; 4) 72 ml.

Beispiel II

Analog Beispiel I wird eine Säule mit einem Polyvinylacetatgel, das mit 1 ^ Butandioldivinylather vernetzt ist (hergestellt nach Beispiel 10 a), gefüllt, und 10 mg eines Oligourethangemisches werden getrennt. Pur das aus 3 Substanzen bestehende Gemisch erhält man 8 verschiedene Peaks. Bei einem Gelbettvolumen von 97,0 ml werden folgende Werte erhalten:

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Substanz Molekulargewicht Elutionsvolumen (ml)

42,1 45,3 48,8 53,6 58,3 65,8 74,5 81,4

Tetradeca-urethan	2001
Dodeca-urethan	1727
Deca-urethan	1442
Octa-urethan	1167
Hexa-urethan	893
Tetra-urethan	618
Di-urethan	344
Diphenylharnstoff	212
Beispiel III

Ein analog Beispiel 11b) verseiftes und aus Vinylacetat und 2 Io Butandiol-(1 ,4)-divinyläther hergestelltes Copolymerisat (Perlgröße des unverseiften Produktes 0,05 bis 0,1 mm) wird in gequollenem Zustand in eine Säule von 1,6 χ 33 cm gefüllt und mit Wasser vom pH-Wert 8 äquilibriert. Auf diese Säule wird ein Gemisch von 20 mg Azoalbumin und 20 mg !Natriumchlorid, gelöst in 1 ml ,Vasser vom pH 8, gegeben. Ss wird mit ,Vasser vom pH-tfert 8 eluiert und das Eluat in .Fraktionen von 3,5 ml aufgefangen. Die Durcnlaufgeschwindigkeit beträgt 42 ml/h. Die Elution des Eiweißstoffes wird durch Messung bei 280 nm, diejenige des Salzes durch Leitfähigkeitsmessung verfolgt. Das gesamte Azoalbumin wird in den Fraktionen 5 und 6 wiedergefunden. 'Die Fraktionen 11 und 12 enthalten das gesamte Natriumchlorid. Das Azoalbumin wird quantitativ eluiert, ohne daß auf der Säule ein Rest zurückgehalten wird.

Beispiel IV

Ein analog Beispiel 10 b) erhaltenes, verseiftes Oopolymerisat aus Vinylacetat und 1 % Butandiol-(1,4)-divinyläther wird in gequollenem Zustand in eine Säule von 1,6 χ 35 cm gefüllt und mit Wasser vom pH-Wert 8 äquilioriert. Eine Probe von 20 mg Azoalbumin und 20 mg Natriumchlorid, gelöst in 1 ml Wasser, wird

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unter denselben Bedingungen wie in Beispiel 3 getrennt. Die Durchlaufgeschwindigkeit beträgt 25 ml/h. Das Azoalbumin wird mit den Fraktionen 6 bis 8 quantitativ eluiert, während das Natriumchlorid erst in den Fraktionen 11 bis 14 erscheint.

Beispiel V

Über eine analog Beispiel III gefüllte Säule wird unter den dort geschilderten Bedingungen eine Lösung von 60 mg Dextran-Blau 2000 (Handelsprodukt der Fa. Pharmacia, Schweden) und 60 mg Kaliumchromat in 2 ml Wasser vom pH-Wert 8 gegeben. Die Elution erfolgt analog Beispiel III. Das Dextran-Blau wird in den Fraktionen 5 bis 7 quantitativ eluiert, das Kaliumchromat wird in den Fraktionen 11 bis 13 gefunden.

Beispiel VI

Ein nach Beispiel 11b) hergestelltes Gel wird in eine Säule von 1,5 x 26 cm gefüllt und mit NagHPO, / Citrat-Puffer-Losung 0,1 / 0,05 m pH 6,0 äquilibriert. In einem Volumen von 0,5 ml dieser Pufferlösung wird ein Gemisch aus 25 mg Insulin und 5 mg Oxytocin aufgegeben und mit dieser Pafferlösung eluiert. Das Fraktionsvolumen beträgt 1,5 ml, die Durchflußgeschwindigkeit 60 Fraktionen/h. Die Elution wird durch Umsetzen der Fraktionen mit Folin-Reagenz und Messung bei 750 nm verfolgt. Das Insulin wird in den Fraktionen 14 - 22, das Oxytocin in den Fraktionen 29 - 36 aufgefangen.

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Claims (6)

Patentansprüche

1. Mittel zur Gelchromatographie, bestehend aus einem vernetzten Copolymerisate daa erhalten wurde durch Copolymerisation mit gleichzeitiger oder anschließender Vernetzung eines bis zu 20 C-Atome enthaltenden Vinylesters und/oder von Vinylencarbonat mit einer oder mehreren vernetzungsfähigen Vinylverbindung(en) und/oder bestehend aus einem durch partielle oder vollständige Verseifung eines solchen vernetzten Copolymerisate erhaltenen Produkt.

2. Mittel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die vernetzungsfähige Vinylverbindung ein Divinyläther eines Alkandiols, vorzugsweise 1,4-Butandiol-divinyläther, ein Divinyläther eines Oligoäthylenglykols, vorzugsweise Diäthylenglykoldivinyläther, oder Tetraallylsilan ist.

3. Mittel nach den Ansprüchen 1 und/oder 2, dadurcn gekennzeichnet, daß der Vinylester Vinylacetat oder Vinylpropionat oder ein Gemisch von Vinylacetat und/oder Vinylpropionat mit Vinylestern höherer Fettsäuren mit 12 bis 18 C-Atomen ist.

4. Mittel nach den Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß es durch Perlpolymerisation hergestellt worden ist.

5. Mittel nach Anspruch 4, dadurch gekennzeicnnet, daß es durch Perlpolymerisation in Gegenwart eines Alkohols und/oder Äthers, vorzugsweise in Gegenwart eines Gemisches aus Hexylalkohol und Di-n-butyläther, hergestellt worden ist.

6. Verfahren zur Trennung von Substanzen mit unterschiedlichem Molekulargewicht, gekennzeichnet durch die Verwendung eines Mittels nach einem der Ansprüche 1 bis 5.

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