DE1293705B - Verfahren zur Gewinnung eines elastolytisch wirksamen Bauchspeicheldruesen-Praeparates - Google Patents
Verfahren zur Gewinnung eines elastolytisch wirksamen Bauchspeicheldruesen-PraeparatesInfo
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Description
Aus der Bauchspeicheldrüse gewonnene, elastolytisch wirksame Präparate sind bereits bekannt. So ist so einen pH-Wert von 8,7 aufweist; dieser Wert wurde,
im Handel ein »Enzyser« genanntes Präparat (nach- wenn notwendig, eingestellt. Es wurden 2,4 cm3 dieser
folgend mit »Handels-Elastase« bezeichnet) erhältlich Pufferlösung benutzt, zu der 0,1 cm3 der konzentrierten
und weiter ist der britischen Patentschrift 837 444 ein Elastase hinzugefügt wurden. Unter diesen Bedingun-Verfahren
zur Herstellung von Elastase zu entnehmen, gen wurde das in F i g. 1 gezeigte Spektrum erhalten,
bei dem zunächst ein wäßriger Extrakt von zerkleiner- 35 das durch zwei Maxima ausgezeichnet ist, die etwa bei
ter entfetteter Bauchspeicheldrüse vorzugsweise in 2250 bzw. bei etwa 2775 Ä liegen.
Gegenwart von 8 % Natriumchlorid hergestellt wird.
Dieser wäßrige Extrakt wird dann mit einem Natriumacetat-Essigsäure-Puffer auf pH 4,5 bis 5 und eine
Ionenstärke von weniger als 0,4 gebracht und bei 30
25°C mit einem schwachen Kationenaustauscher behandelt. Nach Abtrennen und Waschen des Kationenaustauschers wird die' an ihm fixierte »Elastase-Substanz« mit einer wäßrigen Lösung von pH 4,5 bis 5 und
Dieser wäßrige Extrakt wird dann mit einem Natriumacetat-Essigsäure-Puffer auf pH 4,5 bis 5 und eine
Ionenstärke von weniger als 0,4 gebracht und bei 30
25°C mit einem schwachen Kationenaustauscher behandelt. Nach Abtrennen und Waschen des Kationenaustauschers wird die' an ihm fixierte »Elastase-Substanz« mit einer wäßrigen Lösung von pH 4,5 bis 5 und
einer Ionenstärke von zumindest 0,4 und vorzugsweise 35 hinzugegeben, daß 18 cm3 erhalten wurden, dabei
0,8 bis 1,5 eluiert. wurden gesteigerte Mengen der erfindungsgemäß ge-
Diese Ionenaustauscherbehandlung kann gegebenen- winnbaren Zusammensetzung für die Untersuchungen
falls wiederholt werden, worauf sich dann eine weitere benutzt. Es wurde eine Lösung von 1 mg/cm3 mit
Reinigung der im Eluat enthaltenen Elastase durch einem Proteingehalt von etwa 100 Mikrogramm/cm3
Fraktionierung mit Ammoniumsulf at bei über 80°/0iger 40 verwendet.
Sättigung oder mit Alkohol mit über 65 Volumprozent Die Lösungen der erfindungsgemäß gewinnbaren
Zusammensetzung wurden nach Zugabe des Elastins auf 18 cm3, wie oben angegeben, aufgefüllt; für die
Untersuchungen wurden 0,5, 1 und 1,5 cm3 der Lösung der erfindungsgemäß gewinnbaren Zusammensetzung
benutzt.
Nach Filtrieren wurden entnommene Proben in ein auf 2800 Ä eingestelltes Spektrophotometer gebracht
Die abgelesenen Zahlenwerte entsprechen der Extinkveranschaulichen das Inlösunggehen des
Anschließend wurde die elastolytische Wirksamkeit der erfindungsgemäß gewinnbaren enzymatischen Zusammensetzung
gemessen.
Hierzu wurden 18 mg Elastin in kleine Erlenmeyer-Kolben in Gegenwart von Pufferlösung aus Natriumkarbonat
und n/100-Salzsäure mit einem pH-Wert von 8,8 eingebracht. Die Lösung der erfindungsgemäß gewinnbaren Zusammensetzung wurde in der Weise
anschließt. Abschließend wird (nach einer gegebenenfalls stattfindenden Dialyse zur Entfernung von Salzen
und Lösungsmitteln), getrocknet, vorzugsweise durch Gefriertrocknen.
Es wurde nun festgestellt, daß man ein gegenüber den bekannten Elastase-Präparaten erheblich wirksameres
Produkt erhält, das, wie weiter unten gezeigt wird, den bekannten Produkten überlegen ist, wenn
man nach einem Verfahren arbeitet, das dadurch ge- so tion und
kennzeichnet ist, daß man das Pulver mit 1I100VCIoIaTeT Elastins.
Natriumacetat-Pufferlösung mit einem pH-Wert von 4,8 bis 5,0 extrahiert, aus dem Extrakt die elastolytisch
wirksamen Stoffe durch Zugabe von 48 bis 55 Gewichtsprozent/Volumprozent Ammoniumsulfat ausfällt, den 55 gewinnbaren
Niederschlag abtrennt, im Wasser suspendiert und dia- halten: lysiert, den so gereinigten Rückstand mit Alkohol
einer Konzentration von 50 Volumprozent behandelt, die unlöslichen Proteine abfiltriert, im Filtrat mit
Alkohol einer Konzentration von 80 Volumprozent einen elastolytisch wirksamen Niederschlag ausfällt
und diesen abtrennt, in Vioom°lärer Natriumacetat-Pufferlösung
mit einem pH-Wert von 4,8 bis 5,0 löst und lyophilisiert, wobei alle Verfahrensschritte unterhalb
von 50C, vorzugsweise —2° C, durchgeführt
werden.
Vorzugsweise wird dabei in Gegenwart von Calciumionen gearbeitet, die eine stabilisierende Wirkung auf
Unter diesen Bedingungen wurden für eine konstante Elastin-Menge und jeweils 18 cm3 Lösung in
Abhängigkeit von der Menge der erfindungsgemäß Zusammensetzung folgende Werte er-
Erfindungsgemäß gewinnbare Zusammensetzung, in
gelöster Form
(100 μg/cm3)
gelöster Form
(100 μg/cm3)
0,5 cm3 1 cm3 1,5 cm3 Am Spektrophotometer abgelesene
Extinksionswerte nach
Va Sunde | 1 Stunde Jl1/« Stunden
0,200
0,380
0,490
0,380
0,490
0,390 0,520 0,595
0,560 0,580 0,620
Da die Zahl der Einheiten der elastolytischen Verbindung eine Funktion der Menge des Elastins ist,
wurde eine weitere Untersuchung durchgeführt, bei der die Menge des Elastins bei gleichbleibender Menge
der erfindungsgemäß gewinnbaren Zusammensetzung verändert wurde; dabei wurde für die Bestimmung die
UV-Absorption bei 2800 Ä in oben angegebener Weise nach einer Wartezeit mit Elastin bei 370C benutzt.
Bei diesen Untersuchungen wurde von einer Lösung der reinen erfindungsgemäß gewinnbaren Zusammensetzung
mit 100μg/cm3 ausgegangen; davon wurden
0,5 cm3 entnommen und mit 12 cm3 Wasser verdünnt.
Man erhält eine Lösung mit einer Konzentration von 4 μg/cm3, von der für die Bestimmungen je 1 cm3 be- ίο
nutzt wurde. In der nachstehenden Tabelle sind die mit dem Spektrophotometer nach Ablauf von 1,2 oder
3 Stunden erhaltenen Werte in Abhängigkeit von der Elastinmenge angegeben.
Spektrophotometerablesungen (Extinktion) nach Ablauf von 1, 2 oder 3 Stunden
Elastin | 1 Stunde | 2 Stunden | 3 Stunden |
0 | 0,099 | 0,105 | 0,095 |
5 mg | 0,155 | 0,250 | 0,380 |
15 mg | 0,205 | 0,335 | 0,535 |
20 mg | 0,215 | 0,450 | 0,600 |
30 mg | 0,295 | 0,600 | 0,860 |
35
20
25
Die erfindungsgemäß gewinnbare elastolytische Zusammensetzung wurde mit einer Elastase-Vergleichsprobe, die im Handel unter dem Namen »Enzyser« vertrieben
wird, verglichen. Zum einen wurden die Spektren verglichen; F i g. 2 zeigt die Spektren der beiden
Produkte, die Kurve 1 gibt das Spektrum der erfindungsgemäß gewinnbaren Zusammensetzung wieder
und die Kurve 2 dasjenige des Handelsproduktes (Wellenlängen in Ä).
Weiter wurde die elastolytische Wirksamkeit des erfindungsgemäß hergestellten Präparates (O) mit derjenigen
der Handels-Elastase »Enzyser« (S) und der nach der britischen Patentschrift 837 444 hergestellten
Elastase (A) verglichen, und zwar wurde die Auflösung von Elastin unter der Wirkung der verschiedenen
elastolytischen Präparate durch Spektrophotometerablesungen (Extinktion) bei 2800 Ä nach Stehenlassen
unter Rühren bei 37°C spektrophotometrisch verfolgt.
Zu diesem Zweck wurden in rohrförmige Behälter von 25 · 200 mm 20 mg Elastin, 0,5 ml Phosphatpuffer
und die zu prüfende Elastase eingebracht und mit Wasser auf 5 ml aufgefüllt.
Der Phosphatpuffer wurde hergestellt aus 19 ml einer Lösung von 7,8 g NaH2PO4 · 2H2O in 100 ml
wäßriger Lösung und 81 ml einer Lösung von 17,9 g Na2HPO4 · 12H2O in 100 ml wäßriger Lösung. Sein
pH-Wert liegt bei 7,4.
Die wie angegeben gefüllten rohrförmigen Behälter wurden unter ständigem Rühren 1, 2 oder 3 Stunden
lang bei 37° C belassen. Sie wurden dann auf 1°C abgekühlt und der Inhalt (durch Schleicher- und Schüll-Papier
595) filtriert.
Die nachfolgende Tabelle zeigt die für die verschiedenen Präparate erhaltenen Ergebnisse:
Elastasen
A 1 mg
S lmg
O lmg
S lmg
O lmg
Spektrophotometerablesungen (Extinktion) nach
1 Stunde I 2 Stunden I 3 Stunden
60
0,055
0,048
0,196
0,048
0,196
0,085 0,065 0,495
0,106 0,095 0,765
Wie die Tabelle zeigt, verläuft der Angriff des Elastins praktisch linear, und man erkennt die Kinetik
der enzymatischen Reaktion.
Diese Ergebnisse zeigen deutlich die überlegene elastolytische Wirksamkeit der erfindungsgemäß hergestellten
enzymatischen Zusammensetzung, die unbestreitbar viel höher ist als diejenige der bekannten
Elastasen.
Außerdem wurde eine Elektrophorese des erfindungsgemäßen elastolytisch wirksamen Präparates (O)
und der Handels-Elastase (S) an Agar-Agar-Schichten durchgeführt.
Dazu wurden Mikrotafeln nach Scheidegger verwendet und in folgendem Milieu bzw. unter folgenden
Bedingungen gearbeitet: Zur Herstellung der Agar-Agar-Schichten wurde ein l,5%iger Agar-Agar
in Veronalpuffer verwendet; diese Pufferlösung enthält Natriumdiäthylbarbiturat zur Einstellung eines pH-Wertes
von 8,2; die Ionenstärke betrug 0,05; die Spannung lag bei 100 Volt, entsprechend etwa 5 Volt/
cm; die Elektrophorese dauerte 60 Minuten.
Die Ergebnisse sind in F i g. 3 (Ziffer 1 bis 3) der
Zeichnungen wiedergegeben. Für die elastolytische Zusammensetzung O (Ziffer 3 der F i g. 3) wurden zwei
Fraktionen erhalten und für die Handels-Elastase (Ziffer 2 in F i g. 3) fünf Fraktionen.
Im Verhältnis zu den Bestandteilen des normalen menschlichen Serums (Ziffer 1 in F i g. 3), deren Beweglichkeiten
bekannt sind, erhält man: Für die elastolytische Zusammensetzung O:
eine Fraktion mit der Beweglichkeit der /31,/32-Globuline
und
eine Fraktion mit einer geringeren Beweglichkeit
als die y-Globuline.
Für die Elastase S:
Für die Elastase S:
eine Fraktion mit der Beweglichkeit der Albumine und der raschlaufenden Lipoproteine,
eine Fraktion mit der Beweglichkeit des «2-Globulins,
eine Fraktion mit der Beweglichkeit der /Sl,/S2-Globuline,
eine Fraktion mit der Beweglichkeit des y-Globulins,
eine Fraktion mit einer geringeren Beweglichkeit als die y-Globuline.
Es wurde die Charakterisierung der verschiedenen getrennten oben angegebenen Fraktionen vorgenommen
: Die Ergebnisse sind in F i g. 4 der Zeichnungen wiedergegeben, in der 1 die erfindungsgemäße Zusammensetzung
und 2 die Handels-Elastase »Enzyser« bezeichnet.
a) Durch Esterasen-Untersuchung: Es wurde festgestellt, daß die beiden Fraktionen der elastolytischen
Zusammensetzung O eine Wirksamkeit besitzen, insbesondere die Fraktion /Sl, ß2. Die
Elastase S zeigt keine Aktivität.
b) Durch Untersuchung der elastolytischen Aktivität:
Beide elastolytischen Zusammensetzungen zeigen eine bedeutende Aktivität, die für das Produkt O
um den Faktor 3 höher ist, in einer Zone derselben Beweglichkeit, die von der langsamer als
die y-Globuline wandernden Fraktion herrührt.
c) Durch Lipoprotein-Charakterisierung: Nur die äußere Zone der Fraktion mit /31,/S2-Beweglichkeit
der elastolytischen Zusammensetzung O gibt in ihrem langsamen Teil eine Färbung durch
Sudanschwarz.
d) Durch Charakterisierung der Nukleinsäuren: Die äußere Zone der Fraktion ßl, /32 der elastolytischen
Zusammensetzung O nimmt das Pyronin an unter Bildung einer Spur, die von der Ausgangszone
absteigt bis zu der Zone «2.
Daneben wurde die erfindungsgemäße elastolytische Zusammensetzung durch ihre spezifische immunologische
Fällung charakterisiert. Hierzu wurde zu-Darüber hinaus wurden pharmakologische Untersuchungen
mit der erfindungsgemäßen elastolytischen Zusammensetzung durchgeführt.
Die Zusammensetzung wurde vollkommen von Kaninchen und Ratten vertragen, denen täglich auf
parenteralem Wege eine Menge von 500 γ der reinen Zusammensetzung in wäßriger Lösung pro Kilogramm
Körpergewicht verabreicht wurde. Nach einer solchen 10 Tage dauernden Behandlung wurden die
nächst die Bildung von Antiserum bei Kaninchen wie 10 Tiere untersucht und zeigten keine Anomalie. Nach
folgt bewirkt:
Zwei Kaninchen Nr. 59 und 60 erhielten mehrere Reihen-Injektionen der erfindungsgemäßen Zusammensetzung
mit Freundschen Adjuvans entsprechend dem in der nachfolgenden Tabelle angegebenen Schema.
Das Kaninchen Nr. 50 erhielt die Handels-Elastase »Enzyser« mit Freundschem Adjuvans.
Nach jeder Injektionsreihe wurde Blut der Kaninchen durch Punktieren entnommen, wie in der nachfolgenden
Tabelle angegeben ist.
Nach Immunoelektrophorese auf Agarose beobachtet man, daß die beiden Zusammensetzungen eine
verschiedene elektrophoretische Beweglichkeit besitzen und daß sie in stark selektiver Weise mit dem
jeweiligen Antiserum nach jeder Injektionsreihe oder am Ende der Injektionen ausfallen, wenn die besagten
Zusammensetzungen mit den beim Kaninchen durch Punktieren entnommenen Blutproben zusammengebracht
werden, die folglich das jeweilige Antiserum enthalten.
Die Bildung von »Fällungsbögen« wurde durch Anwendung
von l,5%igem Agar-Agar in Natriumdiäthylbarbituratpuffer
von pH 8,2 oder von Agar-Agar nach Michaelis mit pH9 vorgenommen, von
Antielastase des Kaninchens mit 0,1 elastolytischen Einheiten pro »Reservoir« bzw. Probe und von 1 mg
pro Reservoir der erfindungsgemäßen Zusammensetzung und der Handels-Elastase.
einer erneuten Verabreichungsperiode von 10 Tagen wurden die Tiere getötet und seziert, wobei keines der
entnommenen Organe Anzeichen von Entzündung, Schädigung oder Reizung zeigte.
Die Verträglichkeit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung wurde bei Kaninchen der gewöhnlichen
Rasse beiderlei Geschlechts untersucht. Diese Tiere wurden vor jeder Behandlung 10 Tage lang
klinisch beobachtet (Wiegen und Temperaturmessung
ao alle 48 Stunden).
Die Tiere, deren Wachstum normal befunden wurde, wurden in vier Gruppen von Tieren mit einem mittleren
Gewicht von 3 kg eingeteilt:
Gruppe a ... 10 Kaninchen weiblich
Gruppe b ... 10 Kaninchen weiblich zum Vergleich Gruppe c ... 10 Kaninchen männlich
Gruppe d ... 10 Kaninchen männlich zum Vergleich
Gruppe b ... 10 Kaninchen weiblich zum Vergleich Gruppe c ... 10 Kaninchen männlich
Gruppe d ... 10 Kaninchen männlich zum Vergleich
Immunisierung mit Freundschem Adjuvans
Erfindun Zusamm Kani Nr. 59 |
gsgemäße snsetzung nchen Nr. 60 |
Handels- Elastase Kaninchen Nr. 50 |
Zahl der Tage |
|
ID | 1mg lmg lmg lmg 5 cm3 |
lmg lmg lmg lmg 5 cm3 |
lmg lmg lmg lmg 5 cm3 |
0 19 20 21 26 |
SC | lmg lmg lmg 5 cm3 |
lmg lmg lmg 5 cm3 |
lmg lmg lmg 5 cm3 |
39 40 41 47 |
IV | lmg lmg lmg 5 cm3 |
lmg lmg lmg 5 cm3 |
lmg lmg lmg 5 cm3 |
61 62 63 69 |
IV | I 10 mg |
10 mg | 10 mg | |
PS | ||||
SC | ||||
IV | ||||
IV | ||||
PS | ||||
SC | ||||
IV | ||||
IV | ||||
PS | ||||
Gesamtmenge der injizierten Zusammen setzung |
Bemerkung:
ID = intradermal,
SC = subcutan,
IV = intravenös,
PS == durch Punktieren entnommene Blutproben.
ID = intradermal,
SC = subcutan,
IV = intravenös,
PS == durch Punktieren entnommene Blutproben.
Nach der Beobachtungsperiode erhielten die Kaninchen der Gruppen a und c 8 Wochen lang täglich
Elastase in zweiparenteralen Verabreichungen in einer Menge von 2000 elastolytischen Einheiten (E. E.) pro
Kilogramm. Diese Dosis liegt um den Faktor 10 über der pro Kilogramm berechneten Dosis für den Menschen.
Die Dosis wurde in Form einer wäßrigen Suspension verabreicht mit einem Gehalt von
6000E.E./ml.
Die Kaninchen der Vergleichsgruppen b und d erhielten in derselben Weise und während derselben
Zeitdauer ein entsprechendes Volumen Wasser.
Nach Beendigung der Behandlung wurde die Verabreichung des Produktes gestoppt und die Tiere während einer Dauer von 10 Tagen wie vorher klinisch beobachtet.
Nach Beendigung der Behandlung wurde die Verabreichung des Produktes gestoppt und die Tiere während einer Dauer von 10 Tagen wie vorher klinisch beobachtet.
Nach dieser erneuten Beobachtungszeit wurden die Kaninchen getötet und seziert. Von Proben der Leber,
Niere, Darm, Magen, Herz und Lunge wurden histologische Schnittproben nach Einschließen in Paraffin
angefertigt.
Während der gesamten Dauer dieser Experimente wurden alle Tiere in gleicher Weise ernährt.
Es wurde festgestellt, daß das Produkt gut vertragen wird. In der Tat verlief das Wachstum der Tiere
normal, und es wurden darüber hinaus bei der Autopsie keine Anzeichen von Entzündung, Schädigung oder
Reizung festgestellt.
Die im Rahmen der vorliegenden Erfindung durchgeführten Untersuchungen lassen die folgenden Betrachtungen
und Feststellungen über die Art der erfindungsgemäßen enzymatischen Zusammensetzung
mit elastolytischer Aktivität zu:
65
1. Die Bauchspeicheldrüse von Diabetikern, die gegenüber Arteriosklerose sehr empfindlich sind,
enthält wenig elastolytische Fermente.
2. Untersuchungen mit S35 markierten Substanzen bestätigen, daß mit fortschreitendem Alter eine
Abnahme aller Elemente des Systems (Elastase-Elastin) im menschlichen Organismus eintritt.
3. Wenn sich das Enzym im Blutkreislauf befindet, so ist sein Gehalt dort gering.
4. Es existiert im Plasma ein Inhibitor des Serums für die elastolytische Zusammensetzung.
Die erfindungsgemäß gewinnbare elastolytische Zusammensetzung kann in injizierbarer Form angewandt
werden, dargeboten beispielsweise als lyophilisierter Inhalt einer Ampulle. Sie kann zur Regulierung
der proteidolipidischen Umlagerung im Bereich des Gewebes der Arterien und der verschiedenen Organe,
wie der Leber, benutzt werden. Sie wirkt auf den Lipidgehalt des Serums und auf die Glycoproteinwerte
ein.
Auf diese Weise ist die erfindungsgemäß gewinnbare elastolytische Zusammensetzung besonders dazu geeig- so
net, den enzymatischen Mangelzustand im Organismus von Arteriosklerotikern zu beheben.
Es folgt ein Beispiel für die Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens; alle beschriebenen
Operationen wurden bei Temperaturen unter 5°C und vorzugsweise in der Gegend von —2° C ausgeführt.
10 kg zerkleinerte Bauchspeicheldrüse wurden in einem Extraktor im Gegenstrom mit Äther (oder
Aceton) behandelt. Man saugt bzw. schleudert das so vorgereinigte Produkt ab und erhält nach dem Entwässern
durch Gefriertrocknen 1,6 kg eines trockenen Pulvers entfetteter Bauchspeicheldrüse. Die abgetrennten
Fettanteile werden in bekannter Weise zur Kontrolle in dem aus dem Extraktor entfernten Äther
(bzw. Aceton) bestimmt.
Das so erhaltene Pulver wird dann in 101 M/100-Natriumacetatpuffer
mit einem pH-Wert zwischen 4,8 und 5 in Suspension gebracht. Diese Suspension wird
etwa 6 Stunden lang bei einer Temperatur in der Gegend von —2 bis +40C umgewälzt bzw. gerührt.
In diesem Acetatpufferextrakt werden dann etwa 5,5 kg Ammoniumsulfat zur Erzielung einer Konzentration
zwischen 48 und 55 Gewicht/Volumprozent gelöst. Der ausgefällte Anteil wird durch Zentrifugieren
bei —2 bis +4°C abgetrennt und erneut in Wasser suspendiert. Die so erhaltene Suspension wird
unter Verwendung einer üblichen Dialysemembran dialysiert. Auf diese Weise kann das infolge Übersättigung
in den Niederschlag gelangte Ammoniumsulfat entfernt werden. Man erhält 0,260 kg (Trockengewicht
nach Vertreiben der Wasserreste unter vermindertem Druck) einer entmineralisierten Fraktion.
Zu dieser werden 1,51 50volumprozentiger Alkohol zugegeben. Der unlösliche Anteil wird durch Filtrieren
abgetrennt. Man erhält 1,321 Filtrat, das mit 1,321 80volumprozentigem Alkohol versetzt wird. Man
gelangt so zu 1,3 g eines Produktes mit elastolytischer Wirksamkeit, das man durch Zentrifugieren bei einer
Temperatur von —2 bis +40C abtrennt.
Das erhaltene Produkt wird in einem M/100-Natriumacetatpuffer
von pH 4,8 bis 5 wieder aufgelöst und die Lösung einer Gefriertrocknung unterworfen.
Man erhält etwa 0,9 g gereinigtes lyophilisiertes Endprodukt mit elastolytischer Wirksamkeit.
Claims (2)
1. Verfahren zur Gewinnung eines elastolytisch wirksamen Präparates aus einem Pulver der entfetteten
Bauchspeicheldrüse, dadurch gekennzeichnet, daß man das Pulver mit 7100molarer Natriumacetat-Pufferlösung mit einem
pH-Wert von 4,8 bis 5,0 extrahiert, aus dem Extrakt die elastolytisch wirksamen Stoffe durch Zugabe
von 48 bis 55 Gewichtsprozent/Volumprozent Ammoniumsulfat ausfällt, den Niederschlag abtrennt,
im Wasser suspendiert und dialysiert, den so gereinigten Rückstand mit Alkohol einer
Konzentration von 50 Volumprozent behandelt, die unlöslichen Proteine abfiltriert, im Filtrat mit
Alkohol einer Konzentration von 80 Volumprozent einen elastolytisch wirksamen Niederschlag ausfällt
und diesen abtrennt, in 1J10^oIaTeT Natriumacetat-Pufferlösung
mit einem pH-Wert von 4,8 bis 5,0 löst und lyophilisiert, wobei alle Verfahrensschritte
unterhalb von 5°C, vorzugsweise —2°C, durchgeführt
werden.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man in Gegenwart von Calciumionen
arbeitet.
Hierzu 1 Blatt Zeichnungen 909518/353
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB40047/63A GB1076776A (en) | 1963-10-10 | 1963-10-10 | Process for the extraction of elastase |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DE1293705B true DE1293705B (de) | 1969-04-30 |
Family
ID=10412908
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DEL48994A Pending DE1293705B (de) | 1963-10-10 | 1964-10-09 | Verfahren zur Gewinnung eines elastolytisch wirksamen Bauchspeicheldruesen-Praeparates |
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