DE10704945T1 - Verbesserte konstruktion von small-interfering-rna - Google Patents

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Abstract

Isoliertes doppelsträngiges RNS-Molekül, das zur Ziel-spezifischen RNS-Interferenz befähigt ist, mit mindestens 3 G/C-Basenpaaren am 5'-Ende des Passenger-Strangs (bzw. Sinn-Strangs) und am 3'-Ende des Guide-Strangs (bzw. des Antisinn-Strangs).

Claims (17)

  1. Isoliertes doppelsträngiges RNS-Molekül, das zur Ziel-spezifischen RNS-Interferenz befähigt ist, mit mindestens 3 G/C-Basenpaaren am 5'-Ende des Passenger-Strangs (bzw. Sinn-Strangs) und am 3'-Ende des Guide-Strangs (bzw. des Antisinn-Strangs).
  2. RNS-Molekül nach Anspruch 1 mit 3 bis 10 G/C-Basenpaaren am 5'-Ende des Passenger-Strangs (bzw. Sinn-Strangs) und am 3'-Ende des Guide-Strangs (bzw. Antisinn-Strangs).
  3. RNS-Molekül nach Anspruch 1 oder 2, wobei der Passenger-Strang (bzw. Sinn-Strang) eine Sequenz von 3 bis 10 G-Nukleotiden am 5'-Ende und der Guide-Strang (bzw. Antisinn-Strang) eine Sequenz von 3 bis 10 C-Nukleotiden am 3'-Ende aufweist, oder umgekehrt.
  4. RNS-Molekül nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der Passenger-Strang (bzw. Sinn-Strang) einen 3'-Überhang von 1 bis 5 Nukleotiden aufweist.
  5. RNS-Molekül nach Anspruch 4, wobei der Überhang mit einem Fluorophor oder Chromophor verknüpft ist.
  6. RNS-Molekül nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Länge des Passenger-Strangs (bzw. Sinn-Strangs) und des Guide-Strangs (bzw. Antisinn-Strangs), ausgenommen die G/C-Sequenzen und ggf. der 3'-Überhang am Passenger-Strang (Sinn-Strang), 10 bis 26 Nukleotide beträgt.
  7. RNS-Molekül nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das terminale Nukleotid am 5'-Ende des Passenger-Strangs (bzw. Sinn-Strangs) einen Monophosphat-Rest an der 5'-Position der Ribose aufweist.
  8. RNS-Molekül nach einem der Ansprüche 1 bis 6, wobei das terminale Nukleotid am 5'-Ende des Passenger-Strangs (bzw. des Sinn-Strangs) einen Triphosphat-Rest an der 5'-Position der Ribose aufweist.
  9. Verfahren zur Herstellung des isolierten doppelsträngigen RNS-Moleküls nach einem der vorhergehenden Ansprüche, umfassend die Schritte: (a) Herstellen eines Passenger-Strangs (bzw. Sinn-Strangs) mit einer Sequenz von mindestens 3 G- und/oder C-Nukleotiden an dessen 5'-Ende, ggf. mit einem Überhang von 1 bis 5 Nukleotiden an dessen 3'-Ende, und eines Guide-Strangs (bzw. Antisinn-Strangs) mit einer Sequenz von mindestens 3 G- und/oder C-Nukleotiden an dessen 3'-Ende, wobei die Sequenz der mindestens 3 G- und/oder 3 C-Nukleotide am 5'-Ende des Passenger-Strangs (bzw. Sinn-Strangs) und die Sequenz der mindestens 3 G- und/oder C-Nukleotide am 3'-Ende des Guide-Strangs (bzw. Antisinn-Strangs) komplementär sind; (b) Zusammenbringen des Passenger-Strangs (bzw. Sinn-Strangs) und des Guide-Strangs (bzw. Antisinn-Strangs) unter Bedingungen derart, dass ein doppelsträngiges RNS-Molekül gebildet wird.
  10. Verfahren nach Anspruch 9, wobei der Passenger-Strang (bzw. Sinn-Strang) und der Guide-Strang (bzw. Antisinn-Strang) durch chemische Synthese hergestellt werden.
  11. Verfahren nach Anspruch 9, wobei der Passenger-Strang (bzw. Sinn-Strang) und der Guide-Strang (bzw. Antisinn-Strang) enzymatisch hergestellt werden.
  12. Verfahren nach Anspruch 11, wobei der Passenger-Strang (bzw. Sinn-Strang) und der Guide-Strang (bzw. Antisinn-Strang) durch eine RNS-abhängige RNS-Polymerase, vorzugsweise durch eine RNS-abhängige RNS-Polymerase eines Calicivirus hergestellt werden.
  13. Verfahren zur Ziel-spezifischen RNS-Interferenz, das den Schritt des Inkontaktbringens einer eukaryotischen Zelle oder eines eukaryotischen Organismus mit einem doppelsträngigen RNS-Molekül nach einem der Ansprüche 1 bis 8 umfasst, wobei die Zelle oder der Organismus eine RNS mit einer Sequenzidentität zum Passenger-Strang (bzw. Sinn-Strang) des doppelsträngigen RNS-Moleküls von mindestens 70% aufweist.
  14. Verfahren nach Anspruch 13, wobei das doppelsträngige RNS-Molekül in die Zelle oder den Organismus eingebracht wird.
  15. RNS-Molekül nach einem der Ansprüche 1 bis 8 zur Verwendung als Medikament, diagnostisches Werkzeug oder molekulares Werkzeug zur experimentellen Forschung in der Grundlagen- oder angewandten Wissenschaft.
  16. Pharmazeutische Zusammensetzung, die ein RNS-Molekül nach einem der Ansprüche 1 bis 8 in Kombination mit mindestens einem pharmazeutischen Träger, Hilfsstoff und/oder Verdünnungsmittel umfasst
  17. Eukaryotische Zelle oder eukaryotischer nicht-menschlicher Organismus, die bzw. der mit einem RNS-Molekül nach einem der Ansprüche 1 bis 8 oder mit einem dafür kodierenden DNS-Molekül transfiziert ist.
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