CZ466590A3 - Extracellular exopolymer, process of its preparation, pharmaceutical composition containing such extracellular exopolymer and use - Google Patents
Extracellular exopolymer, process of its preparation, pharmaceutical composition containing such extracellular exopolymer and use Download PDFInfo
- Publication number
- CZ466590A3 CZ466590A3 CS904665A CS466590A CZ466590A3 CZ 466590 A3 CZ466590 A3 CZ 466590A3 CS 904665 A CS904665 A CS 904665A CS 466590 A CS466590 A CS 466590A CZ 466590 A3 CZ466590 A3 CZ 466590A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- exopolymer
- extracellular
- culture medium
- molecular weight
- microorganisms
- Prior art date
Links
- 229920000912 exopolymer Polymers 0.000 title claims abstract description 76
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 6
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 18
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 16
- 241000186015 Bifidobacterium longum subsp. infantis Species 0.000 claims abstract description 10
- 229940004120 bifidobacterium infantis Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 9
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 8
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 8
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 8
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 7
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 7
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 6
- 230000002924 anti-infective effect Effects 0.000 claims description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 6
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 4
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 claims description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 2
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 abstract description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 21
- 239000000047 product Substances 0.000 description 15
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 6
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 6
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 5
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 5
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 5
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 3
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011640 AKR mouse Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 2
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- -1 i.e. Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001032 ion-exclusion chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000006140 methanolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- 238000005583 trifluoroacetylation reaction Methods 0.000 description 2
- JVGJWHQKHATXLD-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1,2-dihydrobenzo[j]aceanthrylene Chemical compound C1=CC=C2C(C=C3C=CC=C4CC(C5=C43)C)=C5C=CC2=C1 JVGJWHQKHATXLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000709711 Coxsackievirus B5 Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 1
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- PPQNQXQZIWHJRB-UHFFFAOYSA-N Methylcholanthrene Chemical compound C1=CC=C2C3=CC4=CC=C(C)C(CC5)=C4C5=C3C=CC2=C1 PPQNQXQZIWHJRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 208000031951 Primary immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 206010054979 Secondary immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000719 anti-leukaemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000760 immunoelectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 231100000110 immunotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002625 immunotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000013586 microbial product Substances 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- JCXJVPUVTGWSNB-UHFFFAOYSA-N nitrogen dioxide Inorganic materials O=[N]=O JCXJVPUVTGWSNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002687 nonaqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 1
- 238000003359 percent control normalization Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 208000037920 primary disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 208000037921 secondary disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000724 thymus hormone Substances 0.000 description 1
- LASOLDQRFPFANT-UHFFFAOYSA-N tris(2-nitrophenyl) phosphate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC=C1OP(=O)(OC=1C(=CC=CC=1)[N+]([O-])=O)OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O LASOLDQRFPFANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019871 vegetable fat Nutrition 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
Oblast techniky
Vynález se týká extracelulárního exopolymeru, způsobu výroby tohoto extracelulárního exopolymeru, který je možno získat kultivací kmene bakterie Bifidobacterium, přičemž tyto látky mají imunomodulační vlastnosti. Vynález se rovněž týká farmaceutického prostředku obsahujícího tento extracelulární exopolymer a použití tohoto extracelulárního exopolymeru jako léčiva s imunomodulačními, antiinfekčními a/nebo protinádorovými účinky.
Dosavadní stav techniky
Rada onemocnění, jako jsou alergie, autoimunitní onemocnění, některá infekční onemocnění a také některé druhy nádorů, mají jako společnou příčinu primární nebo sekundární poruchu imunitního systému. Zatímco primární poruchy tohoto systému jsou vzácné a jejich příčina je obvykle genetická, sekundární poruchy jsou poměrně časté, a příčinou jejich vzniku jsou obvykle vnější faktory, jako opakující se infekce, stárnutí, zhoubné nádory, nevhodná výživa, vliv imunotoxických látek a stres.
Imunoterapeutické metody umožňují zmírnit příznaky primární imunodeficience a vrátit organismus do normálního stavu v případě sekundární imunodeficience.
Podle dosavadního stavu techniky byla již vyvinuta řada imunoterapeutických látek ve formě buďto imunostimulantů nebo imunosupresív, to znamená látek, které podporují nebo potlačují imunologickou odpověď. Tyto imunomodulátory jsou obvykle látky, které nespecificky zlepšuji specifickou reaktivitu hostitele a nespecifické efektorové mechanismy. Tyto látky je možno rozdělit na syntetické imunomodulátory a imunomodulátory biologického původu. Tyto druhé uváděné látky biologického původu jsou mikrobiální produkty a extrakty živočišného nebo i lidského původu, jako jsou například hormony brzlíku, dialyzované extrakty leukocytů, interferony a cytokiny.
Aktivace lymfocytů nebo makrofágů může být podstatně modifikována vlivem strukturálních molekul mikroorganismů nebo účinných látek, produkovaných mikroorganismy nebo biologicky účinnými látkami produkovanými mikroorganizmy.
V současné době byl prokázán vliv řady bakterií a bakteriálních produktů na imunologický systém. Do skupiny těchto imunomodulačních látek bakteriálního původu je možno zařadit mycobacterie a jejich produkty, lipopolysacharidy odvozené od gram- bakterií, enterotoxiny Vibrio cholerae, produkty Streptococcus, lipoproteiny a glykoproteiny různých gram- bakterií a polysacharidy různého původu. V současné době se provádí v tomto oboru intensivní výzkum.
Podstata vynálezu
Předmětný vynález poskytuje další aspekt v oblasti imunoterapie, neboř se týká nového extracelulárního exopolymeru se zajímavými imunomodulačními vlastnostmi, způsobu jeho výroby, farmaceutických prostředků obsahujících tyto produkty a použití tohoto extracelulárního exopolymeru jako léčiva s imunomodulačními, antiinfekčními a/nebo protinádorovými účinky.
Vynález se týká extracelulárního exopolymeru, který má imunomodulační vlastnosti, který je přepravitelný kultivací kmene bakterie BLfidobacterium infantis longum, uloženém ve sbírce Collection Nationale de Cultures de Microorganisms CNCM/Institut Pasteur pod číslem 1-885, za anaerobních podmínek v kultivačním médiu, odstraněním mikroorganismů z tohoto kultivačního média, zkoncentrováním a potom vysrážením takto vzniklého exopolymeru přidáním organického rozpouštědla a nakonec lyofylizací produktu získaného po vysrážení přičemž tento exopolymer je na bázi polysacharidu a obsahuje primárně glukózu a galaktozu ve hmotnostním poměru v rozmezí od 1 : 1 do 4 : 1, má zdánlivou molekulovou hmotnost v rozmezí od 10 000 do 100 000 a tvoří agregáty s molekulovou hmotností řádově 10^ v rovnovážném stavu s jednotkami nižší molekulové hmotnosti.
Ve výhodném provedení tento extracelulární exopolymer obsahuje proteinovou frakci v množství nejvýše 30 % hmotnostních.
Uvedený hmotnostní poměr glukózy ke galaktoze je ve výhodném provedení 3:2.
Výhodný je extracelulární exopolymer jehož zdánlivá molekulová hmotnost je v rozmezí od 20 000 do 30 000.
Významným kvalitativním znakem tohoto extracelulárního exopolymeru podle vynálezu je to, že je prostý nukleových kyselin, lipidů a organických kyselin.
Podstata postupu přípravy extracelulárního exopolymeru podle uvedeného vynálezu spočívá v tom, že se kmen bakterie Bifidobacterium infantis longum, uložený ve sbírce
Collection Nationale de Cultures de Microorganisms
CNCM/Institut Pasteur pod číslem 1-885, kultivuje za anaerobních podmínek v kultivačním médiu a po odstranění mikroorganismů z tohoto kultivačního média se takto vzniklý exopolymer oddělí, zkoncentruje a vysráží přidáním organického rozpouštědla a nakonec se produkt získaný po vysrážení lyofylizuje.
Tento exopolymer se z kultivačního média výhodně odděluje ultrafiltraci přes kalibrovanou porézní membránu s retenčním prahem vyšším nebo rovným 10 000. Rovněž je výhodné exopolymer, oddělený z kultivačního média, zkoncentrovat ultrafiltraci.
Tento exopolymer se výhodně vysráží přidáním alkoholu, s výhodou ethanolu.
Do rozsahu vynálezu rovněž náleží farmaceutický prostředek, který má imunomodulační, antiinfekční a/nebo protinádorové terapeutické účinky, přičemž jeho podstata spočívá v tom, že obsahuje jako účinnou složku extracelulární exopolymer definovaný ve shora uvedeném textu.
Do rozsahu vynálezu rovněž náleží použití extracelulárního exopolymeru, definovaného výše, pro přípravu léčiva s imunomodulačními, antiinfekčními a/nebo s protinádorovými účinky.
Exopolymer podle vynálezu je možno získat, jak již bylo uvedeno, kultivací vybraných kmenů nově izolované čeledi Bifidobacterium infantis longum. Jde o gram-posítivni bakterii, jejíž taxonomické vlastnosti jsou mezi vlastnostmi Bifidobacterium infantis a Bifidobacterium longum. Vzhledem k pokusně prokázaným imunomodulačním vlastnostem je tento exopolymer vhodný pro použití v lidském těle a veterinárním lékařství.
Postup podle vynálezu spočívá v tom, že se pěstuje kmen IBS Bifidobacterium infantis longum, uložený pod číslem 1-885 ve veřejné sbírce Institut Pasteur - Collection Nationale de Culture de Microorganismes (CNCM) za anaerobních podmínek ve vhodném prostředí a po oddělení mikroorganismů se izoluje z kultivačního média exopolymer, a to zahuštěním a vysrážením přidáním organického rozpouštědla. Po vysrážení se produkt lyofilizuje.
Kmen IBS je možno pěstovat v jakémkoliv živném prostředí (neboli kultivačním médiu), jehož složky mají molekulovou hmotnost nižší než 10 000, za anaerobních podmínek, s výhodou při teplotě 37 ’C. Vhodné prostředí bude podrobněji popsáno v dalším textu.
Mikroorganismus se z kultivačního média odstraní s výhodou odstředěním, exopolymer se izoluje například ultrafiltrací nebo pomocí kalibrované porézní membrány s retenčním prahem odpovídajícím přibližně molekulové hmotnosti 10 000 nebo vyšší.
Isolovaný produkt se pak zahustí, dialyzuje, vysráží přidáním organického rozpouštědla, s výhodou ethanolu a lyofilizuje.
Výsledný exopolymer má povahu polysacharidu, je tvořen primárně glukosou a galaktosou ve hmotnostním poměru v rozmezí od 1 : 1 do 4:1a obsahuje bílkovinovou frakci v množství nejvýše 30 % hmotnostních. V poíysacharidové frakci je hmotnostní podíl glukosy a galaktosy v rozmezí od 1 : 1 do 4 : 1, s výhodou je tento poměr asi 3:2.
Exopolymer podle vynálezu má zjevnou molekulovou hmotnost v rozmezí od 10 000 do 100 000, s výhodou od 20 000 do 30 000. Může tvořit agregáty s molekulovou hmotností přibližně 10®, které jsou v rovnováze s jednotkami o nižší molekulové hmotnosti. Tento exopolymer je prostý nukleových kyselin, lipidů a organických kyselin.
Takto izolovaný a vyčištěný exopolymer má zajímavé imunomodulační vlastnosti a současně je netoxický. Pokusy in vitro i in vivo prokázaly, že se tento exopolymer produkovaný z kmene IBS se chová jako imunomodulátor a zvyšuje nespecifickou odolnost hostitele. Má také určité antileukemické (protinádorové) vlastnosti, jejichž příčinou mohou být imunomodulační vlastnosti, které jsou uvedeny v publikaci : Determínation of the Immunomodulatory properties of the exopolymer produced by the strain IBS, což bude zmíněno v dalším textu.
Exopolymer, produkovaný kmenem IBS je tedy možno s výhodou využít jako účinnou složku různých farmaceutických prostředků pro perorální, parenterální a místní podání. Tyto prostředky mohou být určeny pro lidské i veterinární lékařství, přičemž mohou být v různé formě, například ve formě jednoduchých nebo povlékaných tablet, kapslí, pilulek, roztoků, sirupů, čípků, injekčních přípravků, pesarů, krémů, pomád, lotionů, kapek a očních emulzí.
<?a
Exopolymer jako účinná složka těchto farmaceutických prostředků může být jedinou složkou těchto prostředků nebo mohou tyto prostředky obsahovat další účinné látky a mimoto běžné pomocné látky, jako mastek, arabskou gumu, mannitol, škrob, stearát hořečnatý, kakaové máslo, vodné nebo nevodné vehikulum, živočišné nebo rostlinné tuky, deriváty parafinu, glykoly, různá smáčedla, dispergační činidla, emulgační činidla a konzervační přísady.
U pokusných zvířat bylo možno pozorovat, například v případě myší, imunomodulační účinek v dávce v rozmezí od 4 do 400 gg na myš.
Příklady provedení vynálezu
Extracelulární exopolymer, způsob^ jeho přípravy a použití bude v dalším blíže popsán s pomocí konkrétních příkladů provedení, které jsou pouze ilustrativní a nijak neomezují rozsah vynálezu. V těchto příkladech bude pozornost věnována hlavně přípravě tohoto exopolymeru, (označován zkratkou PB3D) a jeho farmakologickým vlastnostem.
Příprava exopolymeru kultivací bakteriálního kmene IBS Bifidobacterium Infantis Longum.
Stupeň A : Kultivace kmene IBS
Kmen IBS se kultivuje za anaerobních podmínek při teplotě 37 °C (vzduch se odstraní na počátku fermentace) v živném prostředí s následujícím složením:
6b
| Pepton (molekulová hmotnost < 10 000) | 5 g/1 |
| Chlorid sodný NaCl | 3 g/1 |
| Glukóza | io g/i |
| Cystein | 0.5 g/1 |
| Acetát sodný | 2 g/1 |
| Hydrogenfosforečnan sodný Na2HPO4 | 2.87 g/1 |
| dihydrogenfosforečnan draselný | 1,12 | g/1 |
| síran hořečnatý | 0,09 | g/1 |
| dihydrogenfosforečnan sodný | 0,15 | g/1 |
| hydrogenuhličitan sodný | 2,2 | g/1 |
| Tween | 1 | ml/1 |
| roztok vitaminu | 10 | ml/1 |
Do živného prostředí je možno přidat ke zlepšení výtěžku pevnou podložku, jako CATODEX nebo ekvivalent. Za těchto podmínek produkuje kmen IBS exopolymer, který je možno v supernatantu kvantitativně prokázat při použití metody ELISA, vyvinuté k tomuto účelu a popsané dále.
P ř í kl a d 1 litrů svrchu uvedeného živného prostředí se vloží ke sterilizaci do fermentoru s objemem 12 litrů. Pak se fermentor naočkuje lOOOml kultury kmene IBS, pěstované 48 hodin v tomtéž prostředí. Pak se nechá 20 minut probublávat směs 90 % dusíku a 10 % oxidu uhličitého rychlostí 3 litry za minutu.
Kultura se inkubuje při teplotě °C za míchání 400 ot/min při použití směsi dusíku a oxidu uhličitého v obvyklém poměru, směs se do prostředí vstřikuje v průběhu prvních dvou hodin fermentace. Po 46 hodinách po ukončení fermentace se stanoví množství polysacharidu metodou ELISA. Minimální výtěžek je 35/Ug/ml.
Stupeň B: Izolace a čištění získaného exopolymeru
Po ukončení fermentace se buňky oddělí odstředěním. Po usazení buněk se supernatant podrobí ultrafiltrací při použití běžného zařízení (například typu Amicon hallow Fiber H5 P1O-43). Zadrženy jsou pouze molekuly s molekulovou hmotností vyšší než 10 000. Roztok s obsahem získaného exopolymeru se desetinédobně zahustí a pak se dialyzuje.
Zahuštěný roztok se pak vysráží působením alkoholu, například směsí ethanolu a vody v objemovém poměru 3 : 1.
Nakonec se produkt, vysrážený ethanolem podrobí lyofilizaci. Takto získaný produkt mé bělavou barvu a vláknitý vzhled.
Příklad 2
Ze svrchu uvedené kultury se získá 10 litrů supernatantu, který se zahustí ultrafiltrací na 1 litr. Objem se upraví destilovanou vodou na 10 litrů a pak se opět sníží ultrafiltrací na 1 litr. Tento postup se dvakrát opakuje. K 1 litru takto získaného koncentrovaného roztoku se pak přidá k vysrážení směs ethanolu a vody v poměru 3 : 1. Výsledná sraženina se lyofilizuje, Čímž se získá přibližně 400 mg lyofilizátu.
Metoda ELISA
Použitým antigenem je polysacharid, jehož čistota se zajistí dalším odstraněním bílkoviny působením fenolu. Počáteční dávka 0,5 mg se podá králíkům ve dvou injekcích, jedna se podán intraperitoneálně a druhá podkožně spolu s úplným Freundovým pomocným prostředkem.
Injekce se opakuje 15. dne při použití neúplného Frenndova pomocného prostředku. Po dalších 15 dnech se králíkům odebere krev, čímž se získé antiserum s vysokou hladinou protilátek, které umožňují metodou ELISA rozeznat exopolymer, čištěný chromatografií na sloupci Sephadexu G 200 a exopolymer, přítomný v supernatantu kultury Bifidohacterium po vysrážení ethanolem.
Zkouška ELISA se provádí na mikroplotnách. Antigen se adsorbuje a pak se neobsazené vazby ve vyhloubeních vyplní sérovým albuminem. Pak se směs inkubuje se specifickými protilátkami, získanými z králíků. Pak se přidají protilátky proti králičím protilátkám, které se konjugují s alkalickou fosfatázou. Nakonec se jako substrát přidá o-nitrofenylfosfát. Po inkubaci se reakce zastaví přidáním 3M hydroxidu sodného. Optická hustota se měří při 405 nm. Tímto způsobem lze získat dostatečně vysoké titry protilátek k dosažení pozitivního odečítání při ředění antisera až do hodnoty 10“* pro koncentrace jištěného antigenu 4^ug.
Vlastnosti exopolymeru, produkovaného kmenem IBS ·
1) Získaný produkt je tvořen v podstatě glycidy (stanovení fenolem a kyselinou sírovou) a bílkovinami (stanovení Lowryho metodou) v poměru 5:1.
Produkt neobsahuje nukleové kyseliny při průkazu chormatografií s vyloučením iontů nebo plynovou chromatografií. V žádném případě neobsahoval hydrolyzát pentosy. Produkt je prostý lipidů při stanovení plynovou chromatografií po extrakci n-heptanem. Neobsahuje také organické kyseliny při měření chromatografií s vyloučením iontů.
2) Fodle výsledků, získaných vysokotlakou kapalinovou chromatografií (HPLC) na sloupci HP-8 30C $ mé produkt povahu glykoproteinu.
3) Glycidcvá část je tvořena glukosou a galaktosou podle stanovení, provedených s vyloučením iontů, chromatografií na tenké vrstvě a plynovou chromatografií.
4) Glukosa a galaktosa jsou přítomny v poměru 3 : 2 podle výsledků, získaných plynovou chromatografií z monomerů, hydrolyzovaných methanolýzou a pak acetylovaných trifluoracetylácí.
5) Polysacharidová část je ohraničena vazbami 1-2, 1-3,
1-4 a l-ó podle chromatogramu, získaného plynovou chromatografií z methylovaných (methanolýzou) a pak acetylovaných monomerů (trifluoracetylací).
6) Biologická účinnost, která byla měřena schopností stimulovat a zvyšovat počet buněk, vytvářejících plaky (PFC) vzniká v glycidové části a zůstává zachována i po působení proteinázy K, která rozruší bílkovinný podíl.
7) Přibližná molekulová hmotnost se pohybuje v rozmezí
000 až 30 000 podle výsledků chromátografie na Sephadexu G 200 (vrchol s nízkou molekulovou hmotností).
Exopolymer může tvořit agregáty s molekulovou hmotností přibližně 10 v^rovnovážném stavu s jednotkami s nižší molekulovou hmotností.
Stanovení imunomodulačních vlastností exopolymeru, produkovaného kmene IBS, průkaz in vitro
Proliferace splenocytů
Proliferaci splenocytů za přítomnosti mitogenů je možno měřit snížením MTT, což je 3-(4,5-dimethyl thiazol-2-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromid v důsledku jeho redukce na formazan mitochondriální dehydrogenázou.
Příklad 3
Proliferace splenocytů myšího kmene C57BL/6 byla vyjádřena jako optická hustota (absorbce) při 560 nm jako funkce koncentrace PB3D, jako referenční standard byl užit LPS.
PB3D LPS
| /Ug/ml 333 | OD při 560 nm .ug/ml | OD při 560 | |
| 1,483 | 20 | 1,486 | |
| 111 | 1,593 | 6,77 | 1,308 |
| 37 | 1,459 | 2,22 | 0,964 |
| 12,3 | 1,018 | 0,74 | 0,725 |
| 4,1 | 0,580 | 0,25 | 0,526 |
| 1,4 | 0,427 | 0,08 | 0,423 |
| 0,03 | 0,366 | ||
| kontrola 0 | 0,273 | kontrola 0 | 0,273 |
- 13 PB3D vyvolává proliferaci, která je o něco nižší než proliferace, vyvolaná LPS.
Stanovení imunomadulačních vlastností exopolymeru, produkovaného kmenem IBS, stanovení in vivo
Stimulace produkce buněk, syntetizujících protilátky 'J myši stimuluje exopolymer nespecificky produkci buněk, syntetizujících protilátky při perorálním podání společně s čerrerými krvinkami ovce nebo intraperitoneálním podání bez těchto krvinek. Exopolymer rovněž normalizuje tuto schopnost u myší, u nichž byla reaktivita imunologického systému snížena cyklofosfamidem.
Příklad 4
Po pětidenním perorélním podávání PB3D s následujícími dalšími dávkami 19 a 20 dne (postup A) nebo bez těchto dalších dávek (postup B) je možno pozorovat zvýšením počtu PPG v myší slezině v závislosti na podané dávce.
SRBC %
Postup A: 400^ug 100
100
100
40/Ug 100
100
100
Postup B: 400/Ug 100
100
100
40/Ug 100
100
100
PFC/106 PFC/slezina % buněk %
| 126X | 136x |
| 134X | 145X |
| 131X | 143* |
| 115X | 123x |
| 125x | 133x |
| 120x | 128x |
| 104 | 104 |
| 10 9X | 104 |
| 101 | 101 |
| lllx | 113X |
| 117X | 123X |
| 110x | 113X |
x = p<0,05
Příklad 5
Po intraperitoneálním podání PB3D v jediné dávce 400/Ug/myš je možno po 4 dnech pozorování statisticky významný vzestup počtu PFC.
produkt
PFC/slezina poměr pokusná skupína/kontroly
| kontrola | 12,5 + 0 | |
| PB3D | 43,75 + 3|,37 | 3,5 |
| kontrola | 6,25 + 6,85 | |
| PB3D | 27,08 + 24,26 | 4,3 |
Příklad 6
Exopolymer, podaný myším, jejichž imunologický systém byl potlačen cyklofosfaraidem umožňuje částečně zrušit toto potlačení nebo umožnit rychlejší návrat počtu PEC oproti neošetřeným myším.
dny po potla- léčení čení systému
PFC/slezina PFC/108 lymfocytů
CI
PB
1)
2)
CY
PB
CY
PB
CY
PB kontrola
3)
1,04 + 2,25 4,71 + 7,32
7,29 + 6,14
18,75 x 13,11 60,41 + 64,4 + 10,2 18,75 + 8,83
9,5 + 8,75 + 73 83 + 146 + 84 + 38
382 +.508
110 + 96 86 + 83
58,31 + 49,2
1) Myši s imunologickým systémem, potlačeným cyklofosfamidem.
2) Myši s imunologickým systémem, potlačeným cyklofosfamidem, jimž byl později podán PB3D.
3) Myši, jimž byl podán fyziologický roztok chloridu sodného.
Vliv na složení bílkovin krevního sera
Různé imunomodulátory modifikují imunoelektroforézu bílkovin sera, označovaných jako X, LA a LB. Exopolymer podle vynálezu rovněž způsobuje takovou modifikaci.
P ř ík 1 a d 7
Po intraperitoneálním podání PB3D v dávce 400/Ug/myš dochází po 24 hodinách a po 4 dnech k modifikaci bílkovin sera, která je srovnatelná s modifikací po podání lipopolysacharidu Escherichia coli (LPS).
Příklad 8
Po podání 400/Ug PB3D perorálně, rozděleně na pět po sobě následujících dnů vždy po 80yug docnazi k téže modifikaci bílkovin sera, která je prokaza telné pět dnů po podání exopolymeru.
Clearance koloidního uhlíku
Exopolymer se podává nitrožilně v dávce 2,5 mg/myš myším kmene Balb/c. Po 48 hodinách se nitrožilně podá 0,2 ml suspenze koloidního uhlíku. Vymizení uhlíku z krve (clearance) závislostí množství uhlíku v zvyšuje.
čas kontrola (min) H20-NaCl 0,9 %
1,865 + 0,087 2 1,800 + 0,031 4 1,754 + 0,032 6 1,588 + 0,009 8 1,657 + 0,038
1,535 + 0,134 12 1,588 + 0,045 se vyjadřuje logaritmickou čase. Exopolymer tuto hodnotu pokusná skupina PB3E-2,5 mg
1,815 + 0,044 1,662 + 0,037 1,531 i 0,065 1,432 + 0,096 1,305 + 0,073 1,207 + 0,105 1,079 + 0,154
Vzestup nespecifické odolnosti
U myší, jejichž imunologický systém byl potlačen cyklofosfamidem a které byly vystaveny působení nižších teplot, bylo možno pozorovat, že exopolymer podle vynálezu zvyšuje jejich nespecifickou odolnost k bakteriální infekci, například Pseudomonas na úrovni sliznic nebo odolnost k virovým infekcím, například Coxsackie B.
Příklad 5
Potlačení imunologické odpovědi bylo vyvoláno intraperitoneálním podáním 200 mg/kg cyklofosfamidu. Třetího dne bylo započato s pětidenním perorálním podáváním exopolymeru v dávce 80/Ug/myš/den.
Kontrolním myším bylo podáno ekvivalentní množství fyziologického roztoku chloridu sodného. Několik hodin po ukončení léčby byly myši infikovány do nosu kmenem Pseudomonas aeruginosa, pathogenním pro myš. Z Výsledků je zřejmé, že přežití je vyšší u léčených myší.
| pokus | ošetření | přéžití | £ |
| 1 | kontrola | 8/18 | (44) |
| 400/Ug PB3L | 11/20 | (55) | |
| 2 | kontrola | 0/14 | (0) |
| 400/Ug PB3D | 10/29 | (34) | |
| 3 | kontrola | 7/12 | (58) |
| 400/Ug PB3D | 9/12 | (82) | |
| Příklad 10 i | |||
| Potlačení imunologické odpovědi bylo | |||
| vyvolánó intraperitoneálním podáním 200 mg/kg cyklofosfemidu | |||
| Třetího dne | bylo započato s pětidenním perorálním podáváním | ||
| exopolymeru | v dávce 80/Ug/myš/den. Kontrolním myším bylo po- | ||
| dáno ekvivalentní množství fyziologického roztoku | chloridu | ||
| sodného. Několik hodin po ukončení léčby byly myší | : intrape- | ||
| ritoneálně | infikovány virem Coxsackie | B5 (0,5 ml s | 10 7 PFU) |
| a bylo prokázáno, 2e přežití je vyšší | u léčených myší. | ||
| ošetření | podmínky po infekci | přežití | % |
| kontrola | 4 - 6 °C | 0/20 | ..Ό |
| P33D | 4 - 6 °C | 16/20 | 80 |
| kontrola | 20 °C | 6/10 | 60 |
| PB3D | 20 °C | 10/10 | 100 |
Testy na spontánní nebo indukovanou leukémii
Exopolymer podle vynálezu je schopen oddálit vypuknutí leukemie u myší AKR (kmen inbredních myší, u nichž se velmi často vyvíjí spontánní leukemie). Exopolymer je rovněž schopen u myší kmene RF oddálit vznik leukemie, vyvolané karcinogenní látkou, například methylcholanthrenem. Kmen RF je inbrední kmen, u nějž podání methylcholanthrenu rychle vyvolá leukémii.
Příklad li
Dvěma skupinám myší AKR byl perorálně podáván 5 dnů každý měsíc PB3D, třetí skupina bez ošetření byla kontrolní. Z dvou ošetřených skupin byla jedné skupině podávána celková dávka 400/Ug, a to 80/Ug/den/myš po pět po sobě následujících dnů, druhé skupině bylo podáno za měsíc 4yUg (0,8/Ug/den/myš po 5 dnů).
Získané výsledky ukazují, že u ošetře ných myší došlo ke vzniku leukemie později. Tento rozdíl byl jasně zřejmý u skupiny s dávkou 400/Ug měsíčně. Výsledky byly potvrzeny dalším pokusem, v němž ošetřené skupiny dostávaly 4C0 nebo 40/Ug EB3D.
(dny)
| Výskyt PB3D 400/ | lymfomu v ug PB3D | % 4/Ug | kontroly |
| 5 | 0 | 19 | |
| 5 | 0 | 26 | |
| 11 | 10 | 40 | |
| 21 | 10 | 48 | |
| 26 | 44 | 55 | |
| 37 | 55 | 62 | |
| 37 | 55 | 65 | |
| 42 | 61 | 79 | |
| 47 | 67 | 83 | |
| 55 | 72 | 91 | |
| 61 | 78 | 93 | |
| 65 | 78 | 98 | |
| 71 | 83 | 100 | |
| 71 | 83 | 100 | |
| 76 | 83 | 100 | |
| 76 | 83 | ICO | |
| 76 | 83 | 100 | |
| 76 | 89 | 100 | |
| 76 | 89 | 100 | |
| 82 | 94 | 100 |
Pokus 2
Výskyt lymfomu v % stáří dny_PB3D 400/Ug PB3D 40yUg kontroly
| 168 | 0 | 5 | 5 |
| 175 | 0 | 10 | 5 |
| 182 | 5 | 10 | 5 |
| 196 | 5 | 15 | 5 |
| 203 | 5 | 15 | 11 |
| 210 | 10 | 20 | 11 |
| 217 | 15 | 30 | 11 |
| 224 | 15 | 30 | 16 |
| 231 | 20 | 30 | 26 |
| 238 | 25 | 30 | 26 |
| 245 | 25 | 30 | 32 |
| 252 | 25 | 40 | 32 |
| 259 | 30 | 40 | 42 |
| 273 | • 37 | 45 | 47 |
| 280 | 42 | 45 | 53 |
| 287 | 53 | 50 | 53 |
| 294 | 53 | 55 | 58 |
| 301 | 53 | 60 | 58 |
| 308 | 53 | 65 | 58 |
| 315 | 53 | 65 | 63 |
| 336 | 60 | 65 | 63 |
| 343 | 60 | 65 | 68 |
| 350 | 60 | 70 | 68 |
| 406 | 65 | 70 | 74 |
| 462 | 65 | 80 | 84 |
| 518 | 80 | 85 | 95 |
| $60 | eo | 65 | 100 |
Příklad 12
V průběhu dvou měsíců před místním podáním methylcholanthenu byla myším kmene RF dvakrát podána perorálně dávka P33D v odstupu tří týdnů. Jedné z těchto skupin byla podána celková dávka 400^ug (80/ug/den/myš. po pět následujících dnů), druhé skupině byla podána celková dávka 4/Ug měsíčně (o,S/Ug/den/myš po 5 následujících dnů). Kontrolní skupina nebyla léčenp. Leukemie byla vyvolána podáním na oholenou kůži. Podání PB3D způsobilo zpoždění vzniku leukemie, statisticky významné při podání 400/Ug FB3D.
doba po podání stáří Výskyt lymforaů v % tteenÍC(díy' (dny) PB3E 400/us PS3C 4/us kontroly
| 50 | 170 | 0 | 6 1 | |
| 80 | 200 | 10 | 25 | 60 |
| 110 | 230 | 25 | 44 | 75 |
| 140 | 260 | 35 | 62 | 83 |
| 170 | 290 | 55 | 69 | 95 |
| 190 | 310 | 55 | 69 | 100 |
| 220 | 340 | 55 | 81 | 100 |
| 250 | 370 | 55 | 100 | 100 |
| 280 | 400 | 60 | 100 | 100 |
| 290 | 410 | 65 | 100 | 100 |
Akutní toxicita
Akutní toxicita byla zjištována nitrožilní injekcí exopolymeru v dávkách 1, 10, 1$, 100,
300, 600 a 1200/Ug na myš do ocasní žíly pěti myší. Žádná z těchto dávek nevyvolala u myší žádnou negativní reakci, dva měsíce po injekci myši ještě přežívaly.
Popis kmene
Kmen IBS Bifidobacterium infantis longum byl uložen 6. června 1989 ve veřejné sbírce Collection Nationale de Cultures de Microorganismus (Institut Pasteon, 25 rue du Docteur Roux, 75724 Paříž, Cedex, FR). Kultura má Číslo 1-885.
Tento kmen byl izolován z odpadní vody, obsahující lidské výkaly a jeho taxonomické vlastnosti jsou mezi Bifidobacterium infantis a Bifidohacterium longum, kmen je odlišitelný svými strukturními složkami, fermentačními katabolity D-glukosy, odolností proti antibiotikům a produkcí exopolymerů podle vynálezu.
fa •3ČVO3Í
Ο
Ο
2X5« rc
CO · CD
Claims (10)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Extracelulární exopolymer, který má imunomodulační vlastnosti, připravitelný kultivací kmene bakterie Bifidobacterium infantis longum, uložený ve sbírce Collection Nationale de Cultures de Microorganisms CNCM/Institut Pasteur pod číslem 1-885, za anaerobních podmínek v kultivačním médiu, odstraněním mikroorganismů z tohoto kultivačního média, zkoncentrováním a potom vysrážením takto vzniklého exopolymeru přidáním organického rozpouštědla a nakonec lyofylizací produktu získaného po vysrážení, přičemž tento exopolymer je na bázi polysacharidu a obsahuje primárně glukózu a galaktozu ve hmotnostním poměru v rozmezí od 1 : 1 do 4 : 1, má zdánlivou molekulovou hmotnost v rozmezí od 10 000 do 100 000 a tvoří agregáty s molekulovou hmotností řádově 10^ v rovnovážném stavu s jednotkami nižší molekulové hmotnosti.
- 2. Extracelulární exopolymer podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje proteinovou frakci v množství nejvýše 30 % hmotnostních.
- 3. Extracelulární exopolymer podle některého z předchozích nároků 1 a 2, vyznačující se tím, že hmotnostní poměr glukózy ke galaktoze je 3 : 2.
- 4. Extracelulární exopolymer podle některého z předchozích nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že jeho zdánlivá molekulová hmotnost je v rozmezí od 20 000 do 30 000.
- 5. Extracelulární exopolymer podle některého z předchozích nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že je prostý nukleových kyselin, lipidů a organických kyselin.
- 6. Způsob přípravy extracelulárního exopolymeru, vyznačující se tím, že se kmen bakterie Bifidobacterium infantis longum, uložený ve sbírce Collection Nationale de Cultures de Microorganisms CNCM/Institut Pasteur pod číslem 1-885, kultivuje za anaerobních podmínek v kultivačním médiu a po odstranění mikroorganismů z tohoto kultivačního média se takto vzniklý exopolymer oddělí, zkoncentruje a vysráží přidáním organického rozpouštědla a nakonec se produkt získaný po vysrážení lyofylizuje.
- 7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, že se exopolymer z kultivačního média odděluje ultrafiltrací přes kalibrovanou porézní membránu s retenčním prahem vyšším nebo rovným 10 000.
- 8. Způsob podle nároku 6 nebo 7, vyznačující se tím, že se exopolymer, oddělený z kultivačního média, zkoncentruje ultrafiltrací.
- 9. Způsob podle nároků 6 až 8, vyznačující se tím, že se exopolymer vysráží přidáním alkoholu, s výhodou ethanolu.
- 10. Farmaceutický prostředek, který má imunomodulační, antiinfekční a/nebo protinádorové terapeutické účinky, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku extracelulární exopolymer podle některého z nároků 1 až 5.- 27 11. Extracelulární exopolymer podle některého z nároků 1 až 5 pro přípravu léčiva s imunomodulačními, anti infekčními a/nebo s protinádorovými účinky.ZZastupuje :Dr. Miloš Všetečka /
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH3536/89A CH679677A5 (cs) | 1989-09-29 | 1989-09-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ466590A3 true CZ466590A3 (en) | 1997-03-12 |
Family
ID=4258109
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS904665A CZ466590A3 (en) | 1989-09-29 | 1990-09-25 | Extracellular exopolymer, process of its preparation, pharmaceutical composition containing such extracellular exopolymer and use |
Country Status (37)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5114848A (cs) |
| JP (1) | JPH03170503A (cs) |
| KR (1) | KR910006489A (cs) |
| AR (1) | AR242263A1 (cs) |
| AT (1) | ATA188490A (cs) |
| AU (1) | AU644604B2 (cs) |
| BE (1) | BE1004569A3 (cs) |
| BG (1) | BG60275B1 (cs) |
| BR (1) | BR9004147A (cs) |
| CA (1) | CA2025155A1 (cs) |
| CH (1) | CH679677A5 (cs) |
| CZ (1) | CZ466590A3 (cs) |
| DD (1) | DD295764A5 (cs) |
| DE (1) | DE4028018A1 (cs) |
| DK (1) | DK191290A (cs) |
| EG (1) | EG19285A (cs) |
| ES (1) | ES2025972A6 (cs) |
| FI (1) | FI95483C (cs) |
| FR (1) | FR2652590B1 (cs) |
| GB (1) | GB2244998B (cs) |
| GR (1) | GR900100706A (cs) |
| HU (1) | HU210826B (cs) |
| IT (1) | IT1243709B (cs) |
| LU (1) | LU87809A1 (cs) |
| MA (1) | MA21945A1 (cs) |
| NL (1) | NL9001998A (cs) |
| NO (1) | NO178345C (cs) |
| NZ (1) | NZ235338A (cs) |
| PE (1) | PE15391A1 (cs) |
| PL (1) | PL165512B1 (cs) |
| PT (1) | PT95346A (cs) |
| RU (2) | RU2023445C1 (cs) |
| SE (1) | SE9002557L (cs) |
| TN (1) | TNSN90122A1 (cs) |
| TR (1) | TR25353A (cs) |
| YU (1) | YU47646B (cs) |
| ZA (1) | ZA906492B (cs) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60125708T2 (de) | 2001-02-23 | 2007-10-25 | Chemisches Laboratorium Dr. Kurt Richter Gmbh | Zusammensetzung zur topischen Anwendung |
| RU2192874C1 (ru) * | 2001-08-14 | 2002-11-20 | Колганова Нина Алексеевна | Концентрат для получения противоаллергического, противовоспалительного средства |
| JP2007508233A (ja) * | 2003-10-08 | 2007-04-05 | 雅美 森山 | 抗ウイルス剤 |
| RU2373957C2 (ru) | 2006-10-13 | 2009-11-27 | Александр Метталинович Тишин | Носитель для лекарственных средств и биологически активных веществ для лечения и диагностики и применение его для создания лекарственных средств и способа регулируемой управляемой доставки лекарственного средства или биологически активного вещества с регулируемой десорбцией его |
| ES2640351T3 (es) * | 2007-05-04 | 2017-11-02 | Alimentary Health Limited | Exopolisacárido de Bifidobacterium infantis 35624 (NICMB 41003) |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS56103194A (en) * | 1980-01-23 | 1981-08-18 | Meiji Seika Kaisha Ltd | Antitumor substance and its preparation |
| US4435389A (en) * | 1980-07-07 | 1984-03-06 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Composition for promoting growth of bifidobacteria |
| JPS58203913A (ja) * | 1982-05-25 | 1983-11-28 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 高分子多糖類物質ｍｐｓ−８２及びその利用 |
| JPS59118712A (ja) * | 1982-12-27 | 1984-07-09 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | 抗腫瘍剤及びその製造法 |
| JPS61257930A (ja) * | 1985-05-09 | 1986-11-15 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | 感染防御剤 |
| US4701907C1 (en) * | 1986-02-03 | 2002-08-27 | Collins Mary | Dynamically reconfigurable time-space-time digital switch and network |
| EP0295961A3 (en) * | 1987-06-18 | 1989-07-12 | Kureha Kagaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Polysaccharides and antiviral drug containing polysaccharides as active ingredient |
-
1989
- 1989-09-29 CH CH3536/89A patent/CH679677A5/fr not_active IP Right Cessation
-
1990
- 1990-07-27 FI FI903777A patent/FI95483C/fi not_active IP Right Cessation
- 1990-08-02 SE SE9002557A patent/SE9002557L/ not_active Application Discontinuation
- 1990-08-09 US US07/566,294 patent/US5114848A/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-08-10 DK DK191290A patent/DK191290A/da not_active Application Discontinuation
- 1990-08-15 YU YU156990A patent/YU47646B/sh unknown
- 1990-08-16 ZA ZA906492A patent/ZA906492B/xx unknown
- 1990-08-17 PE PE1990173716A patent/PE15391A1/es unknown
- 1990-08-22 BR BR909004147A patent/BR9004147A/pt not_active Application Discontinuation
- 1990-08-29 IT IT02133290A patent/IT1243709B/it active IP Right Grant
- 1990-09-01 EG EG52290A patent/EG19285A/xx active
- 1990-09-04 DE DE4028018A patent/DE4028018A1/de not_active Withdrawn
- 1990-09-06 ES ES9002324A patent/ES2025972A6/es not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-06 MA MA22217A patent/MA21945A1/fr unknown
- 1990-09-10 PL PL90286821A patent/PL165512B1/pl unknown
- 1990-09-11 NL NL9001998A patent/NL9001998A/nl not_active Application Discontinuation
- 1990-09-12 CA CA002025155A patent/CA2025155A1/en not_active Abandoned
- 1990-09-14 GB GB9020112A patent/GB2244998B/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-14 TN TNTNSN90122A patent/TNSN90122A1/fr unknown
- 1990-09-17 AT AT0188490A patent/ATA188490A/de not_active Application Discontinuation
- 1990-09-17 NO NO904041A patent/NO178345C/no unknown
- 1990-09-17 FR FR9011823A patent/FR2652590B1/fr not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-17 NZ NZ235338A patent/NZ235338A/xx unknown
- 1990-09-17 BE BE9000883A patent/BE1004569A3/fr not_active IP Right Cessation
- 1990-09-17 AR AR90317880A patent/AR242263A1/es active
- 1990-09-17 DD DD90344062A patent/DD295764A5/de not_active IP Right Cessation
- 1990-09-18 GR GR900100706A patent/GR900100706A/el unknown
- 1990-09-18 AU AU62631/90A patent/AU644604B2/en not_active Ceased
- 1990-09-18 TR TR90/0878A patent/TR25353A/xx unknown
- 1990-09-18 PT PT95346A patent/PT95346A/pt not_active Application Discontinuation
- 1990-09-19 LU LU87809A patent/LU87809A1/fr unknown
- 1990-09-20 HU HU905988A patent/HU210826B/hu not_active IP Right Cessation
- 1990-09-20 JP JP2251646A patent/JPH03170503A/ja active Pending
- 1990-09-24 BG BG092896A patent/BG60275B1/bg unknown
- 1990-09-25 CZ CS904665A patent/CZ466590A3/cs unknown
- 1990-09-27 KR KR1019900015336A patent/KR910006489A/ko not_active Abandoned
- 1990-09-28 RU SU904831269A patent/RU2023445C1/ru active
-
1991
- 1991-04-01 RU SU914894870A patent/RU2025127C1/ru active
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3956481A (en) | Hydrosoluble extracts of mycobacteria, their preparation and use | |
| WO1994003500A1 (en) | Glucans with immunostimulant activity | |
| US4663438A (en) | Novel nucleic acid-containing glycoprotein | |
| US4343784A (en) | Composition and method employing extracts of Hansenula as a medicament | |
| EP0089266B2 (fr) | Procédé de préparation de protéoglycanes immunostimulants inducteurs d'interféron, protéoglycanes obtenus et médicament les contenant | |
| KR100197446B1 (ko) | 펠리누스 린테우스로부터 분리된 항암 면역활성 다당류 및 이의 제조 방법 | |
| CZ466590A3 (en) | Extracellular exopolymer, process of its preparation, pharmaceutical composition containing such extracellular exopolymer and use | |
| GB2304347A (en) | Antigenic preparations | |
| US20030091596A1 (en) | Immunomodulator, immunomodulator food | |
| EP0132981A2 (en) | Hypotriglyceridemically active polysaccharides | |
| US4001395A (en) | Hydrosoluble extracts of mycobacteria | |
| US6727081B2 (en) | Microorganism isolated from chinese elm (Ulmus sp.) and process for preparing exopolysaccharides by employing the microorganism | |
| JPS58318B2 (ja) | 制癌性物質の製造方法 | |
| JPS6147515B2 (cs) | ||
| EP0084333B1 (en) | Polysaccharide substance, process for the production of same, pharmaceutical compositions containing the same and their use as medicaments | |
| CA1276898C (en) | Hypocholesterolemically and/or hypotriglyceridemically active rna fractions | |
| US4824945A (en) | Hypocholesterolemically active RNA fractions | |
| US3060099A (en) | Complex polysaccharide, actinogan, and preparation thereof | |
| KR900003303B1 (ko) | 스트레팍스 및 이를 생성하는 균주 | |
| JPS62207256A (ja) | ３，６−ジメトキシ−４−ヒドロキシ−１，２−ジメチルカルバゾ−ルおよびその製造法 |