JPH03170503A - 細胞外エキソポリマー、その調製方法及び該エキソポリマーを含む薬剤組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 本発明は、Ｉｊｆｊｄｏｂｉｃｔｅｒｊｕｚ属の選択さ
れた細菌株を培養することによって産生され、免疫調節
特性を付与された、細胞外エキソポリマーに関する。本
発明はまた、このエキソポリマーの調製方法、並びにこ
のエキソポリマーを活性戊分として含有する薬剤にも関
するものである。

［従来の技術コ アレルギー　自己免疫疾患、ある種の感染症及びある種
のがんなどの数多くの疾病は、それらの共通の公約数と
して、免疫系の原発性または二次性異常を有する。原発
性免疫不全症は稀であり、一般に遺伝的な原因を有する
ものであるが、二次性免疫不全症はより頻繁なものであ
って、それらの原因はほとんどの場合内因性であり、た
とえば再発性の感染症、老化、がん、低栄養、免疫毒性
物質に対する暴露、及びストレスなどがある。

免疫療法は、原発性免疫不全症の症状を軽減し、二次性
免疫不全症の場合には免疫状態を回復させることを可能
ならしめる。

多くの免疫療法剤が、免疫刺激剤や免疫抑制剤の形で開
発されてきている。一般に、免疫調節剤というものは、
宿主の特異的反応性及び非特異的エフェクター機構を非
特異的に増強する薬剤である。合成免疫調節剤と、生物
学的な由来の免疫調節剤との間で区別を行うことができ
る。後者は微生物の産生物、及び動物やヒト由来の抽出
物であり、例えば胸線ホルモン、白血球の透析抽出物、
インターフェロン及びサイトキ二ンの如きである。

実際に、リンパ球やマクロファージの活性化、及びこれ
らの相互調節は、微生物の構造分子や微生物によって産
生された生物学的活性成分に対する暴露によって大きく
修正される。広範囲な種々の微生物及び微生物的産生物
が、免疫系に対する影響を立証してきている。この微生
物由来の免疫調節剤の従来例には、ミコバクテリア及び
その産生物、ダラム陰性細菌のリボ多糖、コレラ菌（　
１／ｉｂｒ１０　ｃ／ｔｏｌｅｒｉｅ）のエンテロトキ
シン、連鎖球菌（　Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）の産
生物、種々のダラム陰性細菌のりボタンパク質及び糖タ
ンパク質、及び種々の由来の多糖が含まれる。

この分野では、現在活発な研究が行われている。

［発明の解決しようとする課題］ 本発明は、この免疫療法の分野に別個の要素を追加する
ものである。というのは、本発明は、非常に興味深い免
疫調節特性を付与された新規な細胞外エキソポリマーに
関するものだからである。より正確には、本発明は、特
許請求の範囲第１項に規定された如き、そこに記述の方
法によって調製された前記工牛ソボリマー、並びに細胞
外エキソポリマーを得るための方法を包含している。本
発明の他の項目については、以下に記載される。

本発明に係るエキソポリマーは、新規に分離されたｌｊ
ｆｉｄｏｂｓｃｔｅｒｉｕｚ　ｉｎｆｚｔｔｔｉｓ　ｌ
ｏＨｔｔｘ種の遺択された株を培養することによって産
生された。これはダラム陽性細菌であり、指標形質は１
ｉｆｉｄｏｂｓｃｌｅｒｔ’ｕｚ　ｉｎｆｓｔｔｔｉｓ
とｌｉｆｉｄｏｂｓｃｔｅｒｉｕｘｌθ／ｌｌ：ＩＩの
間のものを示す。免疫調節特性を有していることが実験
的に立証され、従ってこのエキソポリマーはヒト及び動
物に対する薬剤について非常に興味のあるものである。

［課題を解決するための手段］ 本発明に包含される方法は、パスツール研究所（Ｉｎｓ
ｔｉｔｕｔ　Ｐａｓ’ｔｅｕｒ）の国立微生物培養菌寄
託所（Ｃｏｌｌｅｃｔ１０ｎ　Ｎａｔ１０ｎａｌｅ　ｄ
ｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｄｅＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｊｓｍ
ｅｓ　（ＣＮＣＭ））にＮｏ．　Ｉ−８８５として寄託
されたＩｉｆｉｄｏｂｓｃｔｅｒｉｕｚ　ｉｎｆａｎｔ
ｉｓ　Ｉｏｔｔｇｕｚの細菌株ＩＢＳを適当な培地にお
いて嫌気的条件下で培養し、培地から該微生物を除去し
た後に産生されたエキソポリマーを分離し、濃縮し、次
いで有機溶媒を添加して沈澱させることを特徴としてい
る。最後に、沈澱によって得られた生成物は凍結乾燥さ
れる。

ＩＢＳ株は、その戊分が１０，　０００ドルトンよりも
低い分子量の適当な培地のどのようなタイプにおいても
、嫌気的条件下において好ましくは約３７℃で培養する
ことができる。かかる培地の組戊の詳細については後述
する。

微生物は好ましくは遠心分離によって培地から除去され
、エキソポリマーは例えば、１０，　０００ドルトンに
等しいかまたはこれよりも大きな保持閾値を有する較正
された多孔質膜上で限外濾過することによって分離され
る。

こうして分離された産生物は、次いで濃縮され、透析さ
れ、有機溶媒、好ましくはエタノールを添加することに
よって枕澱され、そして最後に凍結乾燥される。

その結果得られるエキソポリマーは、本来的に多糖的な
性質を有し、１：１から４＝１の割合のグルコースとガ
ラクトースとから基本的になり、多くて３０重量％に等
しいタンパク質的フラクションを含んでいる。

本発明のエキソポリマーの有するみかけの分子量は１０
，　０００から１０ｏ，　０００ドルトン、好ましくは
２０，　０００から３０，　０００ドルトンである。こ
れは平衡状態において、低分子量のユニットとともに、
約１０’の゜分子量の集塊を形威し得る。これはまた、
核酸、脂質及び有機酸を含んでいない。

こうして分離され精製されたエキソポリマーは、無毒で
ある一方、興味深い免疫調節特性を有している。ｉｎ　
ｖｊｔｒｏ及びｉｔｙ　ｙｉｙｏのいずれの実験におい
ても、ＩＢＳ株から産生されたエキソポリマーが免疫調
節剤のように作用し、宿主の非特異的耐性を高めること
が示された。これはまた明確な抗白血病（抗腫瘍）特性
を有するが、その由来は後述するｒｌＢｓ株産生エキソ
ポリマーの免疫調節特性の測定」に記載されたその免疫
調節特性に結び付けることができる。

かくして、ＩＢＳ株によって産生されたエキソポリマー
は各種の薬剤の活性成分として有利に用いることができ
、かかる薬剤は経口、非経口並びに局所的に投与するこ
とができる。これらの薬剤は、ヒト及び動物用の薬剤と
して通常用いられている形態、例えば錠剤や糖衣錠、カ
プセル、小丸剤、液体、シロノプ、座薬、注射液、ペノ
サリー　クリーム、ポマード、ローション、点滴剤及び
目薬などの形態で提供することができる。

活性戊分（エキソポリマー）は上記のような薬剤中に、
単独で叉は他の薬理学的活性剤と共に含有させることが
できる。この目的について用いられる賦形剤は通常のも
のであり、例えばタルク、アラビアゴム、マンニトール
、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、力ヵオバター
水性又は非水性ビヒクル、動物又は植物由来の脂肪性物
質、バラフィン誘導体、グリフール類、各種の湿潤剤、
分散剤叉は乳化剤、並びに防腐剤などである。

動物については、マウスについての著しい免疫調節効果
が、マウスー匹あたり４−４００μｇの間の投与量にお
いて観察された。

以下に示す実施例は、限定ではなく本発明を例示的に示
すことを意図している。これらはより特定的には、エキ
ソポリマー（ＰＢａＤともいう）の調製と、その薬理作
用に関するものである。

ｌＢＳ株を以下の寒天培地において、３７℃の嫌気的条
件下（空気は発酵の開始時に除去した）で培養する。

ベブトン（ＭＷ＜　１０，　０００ドルトン〉５ｇ／塩
化ナトリウム　　　　　　　　　３　　　ｇ／グルコー
ス　　　　　　　　　　　１０　　　ｇ／システイン　
　　　　　　　　　　　０．５　　ｇ／酢酸ナトリウム
　　　　　　　　　２　　　ｇ／リン酸水素二ナトリウ
ム　　　　　２．８７　ｇ／リン酸二水素カリウム　　
　　　　１．１２ｇ／硫酸マグネシウム　　　　　　　
　０．０９　ｇ／リン酸二水素ナトリウム　　　　　０
．１５ｇ／炭酸水素ナトリウム　　　　　　　２．２　
　ｇ／ＩＴｗｅｅｎ　８０　　　　　　　　　　　　　
１　　ｍｌ／１ビタミン溶液　　　　　　　　　　　１
０　　ｍｌ／１収率を上げるために、ＣＹＴＯＤＥＸ＠
叉は同様な固形支持体を培地に添加すると有利となり得
る。

この条件下において、ＩＢｓ株はエキソポリマーを産生
じ、それはここにおける目的のために開発された後述の
ＥＬ　Ｉ　ＳＡ試験法を用いて、上清中で定量すること
ができる。

実施例 １０リットルの上記培地を調製し、殺菌するために１２
リットルの発酵槽に入れた。次いでこの発酵槽に、同じ
培地で４８時間培養したＩＢｓ株の培養細菌１０００ｍ
ｌを接種した。９０％のＮ，と１０％のＣＯ，の混合物
を、１分あたり３リットルの割合で２０分間にわたって
吹き込んだ。

培養は３７℃において４００ｒｐｍで攪拌しながら、発
酵の最初の２時間の間に培地に注入される通常の割合の
Ｎ．／Ｃｏ．混合物の存在下において行った。４８時間
後の発酵過程の完了に際し、産生された多糖の量をＥＬ
　Ｉ　ＳＡ法によって測定した。

最小収量は３５μｇ／ｍ　１であった。

段階Ｂ：産生エキソポリマーの分離精製発酵過程の完了
に際し、細胞を遠心によって分離する。細胞が沈降した
後、Ａｍｉｃｏｎ　ｈａｌｌｏｗＦｉｂｅｒ　Ｈ５　Ｐ
ＩＯ−４３型の装置を用いて、上清を限外濾過する。１
０，　０００ドルトンよりも大きな分子だけが保持され
る。産生されたエキソポリマーを含む溶液を１０倍に濃
縮し、次いで透析する。

濃縮した溶液は、アルコール（エタノール／水；３：１
ｖ／ｖ）で沈澱させる。

最後に、エタノールで沈澱させた産生物を凍結乾燥する
。かくして得られた生成物は、白っぽく、繊維質に見え
る。

実施例 前述した培地から１０リットルの上清溶液が得られ、遠
心によって１リットルに濃縮した。蒸留水を用いて容積
を１０リットルに調節し、次いで再度の遠心によって１
リットルに濃縮した。

この操作を２度行った。かくして得られた１リットルの
濃縮溶液を、次いでエタノールを用いて沈澱させたくエ
タノール／水；３：１ｖ／ｖ）。

得られた沈澱物を凍結乾燥し、約４００ｍｇの凍結乾燥
物を生成させた。

ＥＬ　Ｉ　ＳＡ法 用いた抗原は、フェノールによる付加的な脱タンパクに
よって純度を高めた多糖調製物である。初期投与ｊｌ０
．５ｍｇをウサギに対し２回の注射により、即ち一つは
腹腔内注射、もう一つは皮下注射により、フロイントの
完全アジュバントと共に注入した。

この注射を１５日目に、今度はフロイントの不完全アジ
ュバントと共に再度行った。その１５日後にウサギから
採血し、ＳＥＰＨＡＤＥＸ　Ｇ　２００のカラムによる
クロマトグラフィーにより精製されたエキソポリマーと
、エタノールで沈澱させた後にｌｉｆｉσσｂａｃｔｅ
ｒｌｕｚの培地の上清中に存在しているエキソポリマー
をＥＬ　Ｉ　ＳＡ法によって認識するのを可能ならしめ
るだけの高い抗体レベルの抗血清を得た。

ＥＬ　Ｉ　ＳＡテストは、マイクロプレート上で行った
。抗原を吸着させ、次いで、空いたまま残された個所に
血清アルブミンを満たした。次にウサギから得た特異的
抗体を用いて培養を行った。次いでこのウサギの抗体に
対する抗体を添加した。これらはアルカリホスファター
ゼに接合されていた。最後に基質（オルトニト口フェニ
ルホスフェート）を添加した。培養の後、３Ｍ　ＮａＯ
Ｈを用いて反応を停止させた。ＥＬ　Ｉ　ＳＡリーダー
により、４０５　ｎｍで光学密度　（吸光度）を測定し
た。この手順により、４μｇの精製抗原濃縮物について
ｌＯ−４という抗血清の希釈倍率についても確実な読み
取りを可能ならしめるだけの十分に高い抗体力価が得ら
れる。

ＩＢＳ林産生エキソポリマーの性質 １）得られた産生物は本質的に、５：１の比率の糖質（
フェノール／硫酸法により測定）とタンパク質（ローリ
一法により測定）とからなる。

イオン排除クロマトグラフィー叉はガスクロマトグラフ
ィーによる分析結果によれば、この産生物はいかなる核
酸も含んではいない。

いかなる場合にも、氷解物はペントースを含まない。ｎ
−へブタンで抽出した後にガスクロマトグラフィーで得
た結果によれば、この産生物は脂質を含まない。イオン
排除クロマトグラフィーにより行った測定によれば、有
機酸は存在していない。

２）　　ＲＰ−８　３００人のカラムによる高性能液体
クロマトグラフィーにより得られた結果によれば、産生
物は糖タンパク質的な性質を有する。

３）　イオン排除、薄層およびガスクロマトグラフィー
によって得られた分析的な証拠によれば、糖質部分はグ
ルコースとガラクトースとからなる。

４）　メタノリシスにより加水分解し次いでトリフルオ
ロアセチル化によりアセチル化したモノマーからガスク
ロマトグラフィーによって得た結果によれば、グルコー
スとガラクトースは３：２の割合で存在している。

５）　メチル化され（メタノリシスにより）次いでアセ
チル化された（トリフルオロアセチル化により）モノマ
ーからのガスクロマトグラフィーにより得たクロマトグ
ラムによれば、多糖部分は１−２、１−３、１−４及び
１一６結合で分岐している。

６）　ブラーク形戊細胞（ＰＦＣ）の数の増大を刺激す
る能力として測定される生物学的活性は、糖質部分に由
来しており、プロテイナーゼＫで処理してタンパク質部
分を損傷した後にも維持される。

７）おおよその分子量は、ＳＥＰＨＡＤＥＸ　Ｇ　２０
０を用いたクロマトグラフィーによって得られた結果に
よれば、２０，　０００から３０，　０００ドルトンの
間である（低分子量のピーク値）。

このエキソポリマーは、低分子量のユニットとの平衡状
態において、約ｌＯ＠ドルトンの分子量の集塊を形成し
得る。

牌細胞の増殖 マイトジェンの存在下における牌細胞の増殖は、ミトコ
ンドリア脱水素酵素によるＭ　Ｔ　Ｔ　（３−（４．５
−ジメチルチアゾール−２イル）−２．　５−ジフエニ
ルテトラゾリウムブロマイド）のホルマザンへの還元に
よって測定することができる。

犬凰剋 増殖（マウスの牌細胞Ｃ５７ＢＬ／６）は５６０　ｒｕ
＋＋での光学密度（吸光度）により、ＰＢ３Ｄ又は基準
ＰＢ３Ｄの誘起する増殖は、は、ＬＰＳによって誘起さ
れるよりも僅かに少ない。

ＩＢＳ　　産生エキソポリマーの免疫調節特性の測定（
ｉｎｙｉｙｏ試験） 抗体合戊細胞の産生の刺激 マウスについて、本発明のエキソポリマーは、羊赤血球
と共に経口投与した場合、叉は羊赤血球なしで腹腔内投
与した場合に、抗体合戊細胞の産生を非特異的に刺激す
る。このエキソポリマーはまた、シクロホスファミドで
免疫抑制されたマウスについてのこの能力を正常化する
。

実施例 ＰＢ３Ｄを５日間経口投与し、１９日目と２０日目に追
加免疫した後（処置予定Ａ）、叉は追加免疫せずに（処
置予定Ｂ）、投与量に応じてマウスの牌臓におけるＰＦ
Ｃの数の増大を観察し＊＝ｐ＜０．０５ Ｘ塁旦 マウスあたり４００μｇの投与量のＰＢ３Ｄを一回で腹
腔内投与した後、４日の後にＰＦＣの数シク口ホスファ
ミドで免疫抑制されたマウスに対して本発明のエキソポ
リマーを投与することにより、未処理のマウスと比較し
て、処理されたマウスにおいては免疫抑制がより低＜、
アるいはＰＦＣの通常の数への回復がより早いこ１）シ
クロホスファミドで免疫抑制されたマウ２）シクロホス
ファミドで免疫抑制され後にＰ３Ｄを与えられたマウス ３〉生理的食塩水を与えられたマウス 血清タンパク質の組成に対する影響 ス Ｂ 種々の免疫調節剤が、Ｘ，ＬＡ及びＬＢとして認識され
る免疫電気泳動法によるパターンを変動させる。本発明
によるエキソポリマーは、そのような変動を生ずるもの
である。

Ｘ敷盟 マウス１匹あたりＰＢ３Ｄ４００μｇを腹腔内投与した
ところ、２４時間後及び４日後に、大腸菌（Ｅｓｃｈｅ
ｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ　）のリボ多糖（ＬＰＳ）によ
って生ずるのと共通性のある血清タンパク質の変性が生
じた。

Ｘ皇盟 同様に、合計で４００μｇの投与量を５日続けて８０μ
ｇの投与量に分割して経口投与したところ、エキソポリ
マーの投与の５日後に、タンパク質のそれとわかる変性
が生じた。

コロイドカーボンクリアランス ＢＡＬＢ／ｃマウスに対してエキソポリマーを静脈内投
与したくマウスあたり２．　５ｍｇ）。４８時間後に、
コロイドカーボン懸濁液０、２ｍｌを静脈内注射した。

クリアランスと呼ばれる血液中のカーボンの消失を、カ
ーボンの量を時間に対してプロットした対数グラフの傾
斜により表した。本発明のエシク口ホスファミドで免疫
抑制され低温に暴露されたマウスについて、本発明によ
るエキソポリマーが、粘膜レベルにおいてプソイドモナ
ス（ＰｓｅｕｄｏｚｏｔｔδＳ）により引き起こされる
ような細菌感染やウイルス感染（コクサッキ−Ｂウイル
ス）に対する宿主の非特異的耐性を増大することを観察
することができる。

実施例 ２００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドを腹腔内投与す
ることにより、マウスの免疫抑制を行った。

３日目に、エキソポリマーによる前述した５日間の経口
処理（８０μｇ／マウス７日）を開始した。

対照とするマウスには、等量の生理的食塩水を与えた。

処理の後数時間後に、マウスについて病原性としたＰｓ
ｅｕｄｏｚｏｎｓｓ　ｓｅｒｕｇｉｔｔｏｓｔｔの株を
マウスに鼻内感染させた。生存率は、処理したマ２００
ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミドを一回で腹腔内投与す
ることにより、マウスの免疫抑制を行った。３日目に、
エヰソボリマーによる前述した５日間の経口処理（８０
μｇ／マウス／臼）を開始した。対照とするマウスには
、等量の生理的食塩水を与えた。処理の後数時間後に、
コクサッキ−８５ウイルス（０．５ｍｌ．ＰＦＵ　１０
’）でマウスを腹腔内感染させ、生存率を評価した。生
存率は、本発明によるエキソポリマーは、ＡＫＲマウス
（自発性白血病を非常に頻繁に生ずる種類の近交系マウ
ス）における白血病の発現を遅らせることができる。こ
のエキソポリマーはまたＲＦマウスについて、メチルコ
ラントレンのような発ガン性物質により誘発された白血
病の発現を遅らせることができる。（ＲＦという種類は
、メチルコラントレンが自発性白血病を急速に発現させ
る種類の近交マウスである。） 実施例 ＡＫＲマウスの二つのグループに、前述した５日間のＰ
Ｂ３Ｄの経口投与による治療を毎月行い、他方において
もう一つのグループにはこのテスト用生成物を与えずに
対照用のグループとした。処理した二つのグループのう
ち、一方には月々合計で４００μｇ（８０μｇ／マウス
７日を５日間連続）の投与量を与え、他方のグループに
は月々合計で４μｇの投与量（０．８μｇ／マウス７日
を５日間連続）を与えた。

得られた結果は、処理したマウスにおける白血病の発現
の遅れを示していた。この遅れの程度は、月々合計で４
００μｇの投与を受けていたグループについて明らかに
重要なものであった。

このことは、処理グループにそれぞれ４００μｇと４０
μｇのＰＢ３Ｄを投与した別の実験によって確認された
。

実ＪＬＬ 実施例 前述した如きメチルコラントレンの投与に先立つ２カ月
の間に、ＲＦマウスの二つのグループにＰＢ３Ｄを３週
間離して２回経口投与した。

一方のグループには月々合計で４００μｇ（８０μｇ／
マウス７日を５日間連続）の量を投与し、他方のグルー
プには月々合計で４μｇの量（０．８μｇ／マウス７日
を５日間連続）を与えた。対照とするコントロールグル
ープには何も処理を行わなかった。白血病は、マウスの
体の適切に剃毛した区域で皮膚に塗布することによって
誘発した。ＰＢ３Ｄの投与は、白血病の発現を遅らせた
。この遅れは、４００μｇのＰＢ３Ｄを投与されたグル
ープにおいて明らかに重要なものであった。

急性毒性 急性毒性に関する試験は、エキソポリマーを次の投与量
でもって静脈内注射することによって実行した。即ちマ
ウスあたり１μｇ、１０μｇ、１５μｇ，　１００μｇ
，　３００μｇ，　６００μｇ及び１２００μｇを、各
々の投与量について５匹のマウスに対し、尾例の静脈内
に投与した。どの投与量についてもマウスにおける何の
拒絶反応もなく、マウスは注射後２カ月の後も生存して
いた。

細菌株の説明 １ｉｆｉｄｏｂａｃｌｅｒｊｕｚ　ｉｎｆａｎｔｉｓ　
ｌｏｔｔｇｕｚのＩＢｓ株は、１９８９年７月６日に、
国立微生物培養菌寄託所（Ｃｏｌｌｅｃｔ１０ｎ　Ｎａ
ｔ１０ｎａｌｅ　ｄｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ｄｅＭｉｃｒ
ｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｓ　（ＣＮＣＭ））　　（バスツ
ール研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ　Ｐａｓｔｅｕｒ，　２
５　ｒｕｅ　ｄｕ　Ｄｏｃｔｅｕｒ　Ｒｏｕｘ，７５７
２４　Ｐａｒｉｓ，　Ｃｅｄｅｘ，　Ｆｒａｎｃｅ）内
〉に寄託された。その寄託番号はＮｏ．　！−８８５で
ある。

この株はヒト由来の糞便排泄物を含有する廃水から分離
され、ｌｉｆｉｄｏｂｚｃｔｅｒｉｕｚ　ｉｎｆａｎｔ
ｉｓと！Ｈｆｉｄｏｂｚｃｔｅｒｉｕｚ　ｌｏＨｕｘの
間の指標形質を示す。

そしてこの株は、構戊戊分のプロフィール、Ｄ一グルフ
ースの発酵異化代謝産物のプロフィール、抗性物質耐性
のプロフィール、及び本発明に包含されるエキソポリマ
ーの産生によって類型化可能である。

［発明の効果］ 以上のごとく本発明によれば、免疫調節特性を与えられ
た細胞外エキソポリマーが、バスツール研究所（ＣＮＣ
Ｍ）にＮｏ．　Ｉ−８８５として寄託された１ｉｆｉｄ
ｏｂｓｃｔｅｒｉｔｔｚ　ｉｔｔｆｓｎｔｉｓ／ＩｏＨ
ｕｚ株を適当な培地で嫌気的条件下で培養することによ
り調製される。微生物を培地から除去した後に、産生さ
れたエキソポリマーは分離され、濃縮され、次いで有機
溶媒を添加することによって沈澱され、最後にこの沈澱
により得られた生成物が凍結乾燥される。

こうして得られたこのエキソポリマーは、細胞性免疫及
び体肢性免疫について活性を有し、従って全ての潜在的
な治療的用途において免疫調節剤として使用することが
できる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　仏国国立微生物培養菌寄託所（ＣＮＣＭ）にＮｏ．
   １−８８５として寄託したビフィドバクテリウム・イン
   ファンティス・ロングム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉ
   ｕｍｉｎｆａｎｔｉｓ　ｌｏｎｇｕｍ）の細菌株を適当
   な培地において嫌気的条件下で培養し、培地から該微生
   物を除去し、産生されたエキソポリマーを分離し、濃縮
   し、次いで有機溶媒を添加して前記エキソポリマーを沈
   澱させ、最後に沈澱により得られた生成物を凍結乾燥す
   ることを特徴とする細胞外エキソポリマー。 ２　免疫調節特性を特徴とする、請求項１記載のエキソ
   ポリマー。 ３　本質的に多糖的性質を有し、基本的にグルコースと
   ガラクトースを１：１から４：１の間の割合で含み、多
   くて３０重量％に等しいタンパク質画分を含有すること
   を特徴とする、請求項１叉は２記載のエキソポリマー。 ４　グルコース対ガラクトースの比が３：２の範囲にあ
   ることを特徴とする、請求項３記載のエキソポリマー。 ５　みかけの分子量が１０，０００から１００，０００
   ドルトン、好ましくは２０，０００から３０，０００ド
   ルトンの間にあり、低分子量のユニットとの平衡におい
   て約１０＾６ドルトンの分子量の集塊を形成し得ること
   を特徴とする、請求項１から４のいずれか１つに記載の
   エキソポリマー。 ６　核酸、脂質及び有機酸を含まないことを特徴とする
   、請求項１から５のいずれか１つに記載のエキソポリマ
   ー。 ７　請求項１に記載の細胞外エキソポリマーの調製方法
   であって、ＣＮＣＭにＮｏ．１−８８５として寄託した
   ビフィドバクテリウム・インファンティス・ロングム（
   Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｉｎｆａｎｔｉｓｌ
   ｏｎｇｕｍ）の細菌株を適当な培地において嫌気的条件
   下で培養し、培地から該微生物を除去した後に産生され
   たエキソポリマーを分離し、濃縮し、有機溶媒を添加し
   て沈澱させ、最後に沈澱により得られた生成物を凍結乾
   燥することを特徴とする方法。 ８　エキソポリマーは、１０，０００ドルトンに等しい
   か叉はこれよりも高い保持閾値を有する較正された多孔
   質膜上で限外濾過することによって培地から分離される
   ことを特徴とする、請求項７記載の方法。 ９　培地から分離されたエキソポリマーは限外濾過によ
   って濃縮されることを特徴とする、請求項７叉は８記載
   の方法。 １０　エキソポリマーはアルコール、好ましくはエタノ
   ールを添加することにより沈澱されることを特徴とする
   、請求項７から９のいずれか１つに記載の方法。 １１　請求項１から６のいずれか１つによる細胞外エキ
   ソポリマーを活性成分として含有する薬剤組成物。 １２　免疫調節活性、抗感染及び／叉は抗腫瘍治療活性
   を有する、請求項１１記載の薬剤組成物。