CZ391597A3

CZ391597A3 - Nové norpregnany působící na hypotalamus a farmaceutický prostředek je obsahující

Info

Publication number: CZ391597A3
Application number: CZ973915A
Authority: CZ
Inventors: White Clive L. Jennings; David L. Berliner; Nathan William Adams
Original assignee: Pherin Pharmaceuticals, Inc.
Priority date: 1995-06-07
Filing date: 1996-06-07
Publication date: 1998-06-17
Also published as: AU6380796A; EA000965B1; HUP9900887A2; NO975709L; US5792757A; EP0830369B1; DE69628163D1; WO1996040727A1; ES2197949T3; HUP9900887A3; US5962443A; ATE240344T1; MX9709693A; DE69628163T2; NZ312303A; US6242619B1; CN1191542A; EP0830369A1; BR9609012A; EA199800052A1

Description

Nové norpregnany působící na hypotalamus $ fa. ίΊί'$3γ/3

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká farmaceutických prostředků a způsobů pro provedení změn funkce lidského hypotalamu, a tak změn určitého chování a fyziologie podmíněných hypotalamem. S výhodou se předkládaný vynález týká použití 19-norpregnanovych steroidů jako neurochemických činidel ovlivňujících fyziologii a chování.

Dosavadní stav techniky

Předkládaný vynález se týká U. S. Patentu č. 08/127 908, 28. 9. 1993, který je částečně pokračováním U. S. Patentu č. 07/903 604, 24. 6. 1992, který je postupně pokračováním patentů U. S. Patent č. 07/708 936, 31. 5. 1991, U. S.. Patente. 07/638 185, 7. 1. 1991.

Předkládaný vynález se také týká U. S. Patent Č.08/127 980,28. 9. 1993, který dále navazuje na U. S. Patent č. 07/903 604, U. Š. Patent č. 08/077 359,15. 6. 1993 a souvisí sU. S. Patentem č. 07/903 525, 24. 6. 1992 (pokračování U. S. Patentu Č. 07/707 862, 31.5. 1991, který částečně navazuje na U. S. Patent č. 07/638 743, 7.1. 1991), který má název „Estrenové steroidy jako neurochemické iniciátory změny funkce lidského hypotalamu a příbuzných farmaceutických prostředku a postupů“; a souvisí a částečně navazuje na 07/903 525, U. S. Patent č. 08/077 140. Zmíněné U. S. Patentové aplikace jsou zde uvedeny jako odkazy.

Konečně, předkládaný vynález souvisí sU. S. Patent nazvaným „Vonně prostředky obsahující lidské feromony“, 24. 5: 1992, U. S. S. N. 07/856 435.

Předkládaný vynález se týká sloučenin, s výhodou 19-norpregnanových steroidů a podobných sloučenin a způsobů použití těchto sloučenin, jako jsou lidské vomeroferiny, které ovlivňují funkci hypotalamu, a tak působí změny chování a fyziologie, např. snížení úzkosti. 19-Norpregnanové Steroidy jsou charakterizovány čtyřmi kruhy steroidní povahy, methylací v poloze 13 a ethylací v poloze 17. 19-Norpregneny jsou podskupinou, která obsahuje nejméně jednu dvojnou vazbu.

·· ···· • ·

Ohloff, G. a kol. (Helv. Chim. Acta (1983, 66: 192-217), kteří jsou zmíněni v odkazech, dokázali, že některé steroidy (androstcny) mají vůni, která se mění s různými izomerními, diastereoizomemími a enantiomerními formami. Některé tyto sloučeniny jsou známé u některých savců jako feromony, např. 5a-androst-16-en-3-on a 5a-androst-16-en-3cc-ol u vepřů (Melrose, D. R. a kol., Br. Vet. J. (1971) 127:497-502. Tyto 16-androsteny vylučují samci prasat a ovlivňují tak chování samic v říji. (Claus a kol., Experimentia (1979)35:1674-1675).

V některých studiích bylo zmíněno, že různé charakteristiky některých 16-androstenů (např 5a-androst-16-en-3a-ol a 5a-androst- 16-en-3-on), jako jsou koncentrace, metabolismus, a lokalizace jsou závislé na pohlaví (Brooksbank a kol, J. Endocr. (1972) 52: 239-251; Claus a kol., J. Endocr. (1976) 68: 483-484; Rwan a kol., Med. Sci. Res. (1987) 15: 1443-1444). Například u 5a-androst-16-en-3a-olu a 5a-androst-16-en-3onu, stejně jako androsta-4,16-dien-3 -onu byly zjištěny různé koncentrace v periferním krevním oběhu, slinách a podpažním sekretu mužů a žen (Kwan, T. X. a kol., Med Sci. Res. (1987) 15: 1443-1444) abyla dokázána jejich funkce jako lidskéhoferomonu (Id , viz. také Gower a kol., „Význam vůně steroidů v podpažním sekretu“, Perfumery, str. 68-72, Van Troller a Dodd, Eds., Chapman a Halí, 1988); Kirk-Smith, D. A. a kol., Res. Comm. Psychol. Psychiat. Behav. (1978) 3: 379).

Androstenol (5a-androst-16-en-3á-ol) vykazuje feromonovou aktivitu v pánských a dámských parfémech (Andron pro muže a Andron pro ženy od Jovan). Japonský Kokai č. 2295916 se týká parfémových prostředků obsahujících androstenol a/nebo jeho analoga. a-Androstadien-33-ol (a pravděp. 3a-ol) byl také nalezen v lidském podpažním sekretu (Gower a kol., Výše 57-60). Na druhou stranu, v literatuře se diskutuje o tom, jestli domnělé feromony hrají určitou roli v sexuálním nebo reprodukčním chování savců, s výhodou člověka. Viz.: Beuchamp, G. X. a kol., „Pojem feromony v chemické komunikaci savců: kritika“, Čich savců. Reprodukční proces a chování, Doty R. L., Ed., Academie Press, 1976). Viz. též Gower a kol., Výše 68-73.

Jsou popsány feromonové vlastnosti některých estrenových steroidů. Michael, R. P. a kol., Nátuře (1968) 218: 746 se týká estrogenů (zvláště estradiolu) jako feromonových atraktantů samců opic. Parrot, R. F., Hormony a chování (1976) 7: 207-215 popisuje, že injekce benzoátu estradiolu způsobuje reprodukční chování u krys, kterým byly vyjmuty vaječníky; a dále popisuje úlohu úrovně estradiolu v krvi při sexuální reakci (Phoenix, C. H., Physiol. and Behaviour (1976) 16: 305-310) a sexuální reakci samic (Phoenix, C. H., Physiol. And Behaviour (1977) 8: 356-362) u opic. Na druhou stranu neexistuje v literatuře úplná shoda, zda feromony jako takové hrají nějakou roli při reprodukčním chování a vzájemné komunikaci savců (Bcuchamp, G. K. a kol., „Pojem feromony v chemické komunikaci savců: kritika“, Čich savců. Reprodukční proces a chování, Doty R. L., Ed., Academie Press, 1976).

Předkládaný vynález se týká nesystémového nosního podávám steroidů 19-norpregnanů a 19-norpregnenů za účelem ovlivnění chovám nebo fyziologické odezvy lidského subjektu, např. sníženi negativních pocitů, ovlivnění nálady a povahy. Nosní podávání zajistilo kontakt jednoho nebo více steroidů nebo prostředků obsahujících steroidy s neurochemickými receptory, známými jako vomeronasální orgán („VNO“), také známými jako Jacobsonůn orgán, u kterého byla dříve nesprávně chápána jeho neuroendokrinní struktura. Tento orgán je přístupný u většiny vyšších živočichů přes nosní dírky-od hadů až ke člověku, a souvisí s vnímáním feromonů (Muller-Schwarze & Sirverstein, Chemical Signals, Plenům Press, New York (1980)). Nervové výběžky neuroepitelu vomeronasálního orgánu, umístěné nad patrem, tvoří vomeronasální nerv a mají přímé napojení na čichový orgán a nepřímo vstupují do šedé mozkové kůry předního mozku a hypotalamického jádra mozku. Distální nervové výběžky nervových zakončení mohou také sloužit jako neurochemické receptoiy ve VNO. Stensaas, L. J., a kol., J. Steroid. Biochem. And Molec. Biol. (1991) 39: 553. Tento nerv je přímo synapticky napojen na hypotalamus.

Johnson, A. a kol., (J. Otolarynaoloav (1985) 14: 71-79) uvedl důkaz přítomnosti vomeronasálního orgánu u většiny dospělých lidí, ale uvádí, že orgán je pravděpodobně nefunkční. Rozporuplné výsledky, které dokazují, že VNO je funkční chemosenzorový receptor uvádí Stensaas, L. a kol., Výše; a Moran, D. T. a kol., Garcia-Velasco, J. a M. Mondragon; MontiBloch, L. a B. GroSser, všichni v J. Steroid. Biochem. And Molec. Biol. (1991)39.

Je zřejmé, že je nutno identifikovat a syntetizovat lidské vomeronefriny a feromony a vyvinout farmaceutické prostředky a způsoby použití vlivu na hypotalamickou funkci. Předkládaný vynález se týká neočekávaného zjištění, že když se lidskému subjektu nosně podává určitá neurochemická látka, s výhodou 19-norpregnanový steroid,

19-norpregnenový steroid a podobné sloučeniny nebo farmaceutické prostředky obsahující 19-norpregnany, 19-norpregneny nebo podobné sloučeniny, specificky se váže k chemoreceptoru určité buňky nosního neuroepitelu a touto vazbou vzniká série neuroíýziologických reakcí, které mění funkci hypotalamu. Když se tyto sloučeniny řádně podávají, působí na funkci hypotalamu a mění chování nebo fyziologické jevy jako např. úzkost, předmenstruační stres, strach, agrese, hlad, krevní tlak, a další chování a fyziologické funkce regulované hypotalamem. Viz. Otto Appenzeller, The Autonomie Nervous Systém. An Itroduction of Basic and Clinical Concepts (1990); Rorncr, P. 1., Centrál nervous control of autonomie cardiovascular function, a Levý N. M. a Martin, P.

J., Neural control of the heart, oboje v Handbook of Physiology: Sekce 2:

Cardiovascular System-the heart, Odd, I, Washington, DC, 1979, Američan

Physiological Soc.; Fishman, A. P. a kol., Handbook of Physiology: Sekce 3: Respirátory systém. Odd. II Control ofBreathing, Bethesda MD, 1986, Američan Physiological Soc.

V některých případech se 19-norpregnanový steroid nebo podobná sloučenina podává společně v kombinaci s 19-norpregnenovým steroidem a/nebo podobnou sloučeninou a v některých případech se jeden nebo více norpregnanových steroidů podává společně s jedním nebo více estranovým nebo estrenovým steroidem, androstanovým nebo androstenovým steroidem nebo podobnou sloučeninou.

Podstata vynálezu

Definice:

„Afekt“ znamená přechodný pocit. Typickými negativními afekty jsou pocity nervozity, napětí, studu, úzkosti, podrážděnosti, zlosti, zuřivosti a podobně. „Náladovost“ je déle trvající pocit jako např. pocit viny, smutek, beznaděj, pocit méněcennosti, kajícnost, pocit neštěstí, apod. „Povahové rysy“ jsou stálé vlastnosti jednotlivých osobností. Typickými negativními povahovými rysy jsou přecitlivělost, lítostivost, pocit viny, tvrdohlavost, rozmrzelost, rozhořčenost, plachost, lenost apod.

„Pregnanové steroidy“ jsou alifatické polycyklické uhlovodíky charakterizované čtyřmi kruhy steroidní struktury s methylací v poloze 10 a 13 a ethylací (včetně nenasycených skupin) v poloze 17. 19-Norsloučeninám chybí na místě, kde se normálně nachází C-19, • · • · · « · ·

• · • · · · methylová skupina nebo jiný substituent obsahující uhlík na C-10. Pregnen je podskupinou pregnanů a rozumí se jím sloučenina, která obsahuje nejméně jednu dvojnou vazbu.

„Chemoreceptor“ je molekula receptoru, která se vyskytuje na povrchu „chemosenzoru“ buňky neuroepitelu a která stereospecificky váže určitý ligand nebo ligandy. Tato specifická vazba způsobí přenos signálu, který zahajuje nervový impuls. Chemoreceptory se mimo jiné nachází v chuťových pohárcích, čichovém epitelu a vomeronasální tkáni.

„Pregnenové steroidy“ jsou alifatické poiycyklické uhlovodíky se čtyřmi kruhy steroidní struktury, nejméně jednou dvojnou vazbou v kruhu A, methylací v pozici 10 a v pozici 13, ethylací (včetně nenasycených skupin) v pozici 17 a oxo, hydroxy skupinami nebo hydroxylovými deriváty jako jsou alkoxy, esterová, benzoátová, cypionátová, sulfátová nebo glukuronidová skupina v pozici 3 . I9-Nor sloučeninám chybí na místě, kde se normálně nachází C-19, methylová skupina nebo jiný substituent obsahující uhlík nebo C-10. Deriváty, které obsahují tyto strukturní charakteristiky se obecně nazývají pregnenové steroidy.

Na následujícím obrázku je uvedena steroidní struktura o čtyřech kruzích typická pro pregnanové a pregnenové steroidy. Při popisu umístění skupin a substituentů se používá následující systém:

„Sexuálně nejednotný“ znamená, zeje rozdíl mezi účinkem nebo odezvou na farmaceutický prostředek mezi mužem a ženou.

„Účinné množství“ léku znamená množství a/nebo koncentraci, která, když je v případě potřeby podávána, přináší požadovaný fyziologický a/nebo psychologický účinek.

V tomto případě se podává osobě s obtížemi psychologického nebo společenského rázu, • · • · · ·

·· ·· • ♦ · · • · ··.

• · · · · * • · * « tí ♦ · které jsou běžně regulovány hypotalamem, a které je možno ovlivnit změnou funkce hypotalamu. Účinné množství daného léku se mění v závislosti na funkci, kterou má ovlivnit, požadovaném účinku, způsobu podáváni apod. Například, když se steroid podává jako roztok, který působí na pokožku obličeje subjektu, účinná koncentrace je 1 pg/ml až 100 pg/mi, s výhodou 10 až 50 pg/ml a nejvýhodněji 20 až 30 pg/ml. Když se steroid zavádí přímo do VNO, účinné množství je 1 pg až 1 ng, výhodněji 10 pg až 50 pg. Když se steroid podává do nosní dírky jako mast, krém nebo aerosol apod., účinné množství je 100 pg až 100 pg, s výhodou 1 ng až 10 pg. U některých léku záleží účinnost na způsobu podávání. Při nesprávném způsobu podávání nejsou účinné.

„Hypotalamus“ je část mezimozku obsahující ventrální stenu třetí komory pod rýhou hypotalamu a obsahující strukturu tvořící dno dutiny zahrnující zrakové chiasma, nepárový šedý hrbolek na bazální části hypotalamu, nálevkovitý výběžek na spodině hypotalamu a mamiláris. Hypotalamus reguluje autonomní nervový systém a kontroluje některé psychologické a společenské funkce jako jsou pocity napětí a uvolnění, sexuální motivace, rovnováha vody, metabolismus cukrů a tuků, hlad, regulace tělesné teploty, vnitřní sekrece a další. Hypotalamus je také zdrojem vasopresinu, který reguluje krevní tlak a oxytocinu, který vyvolává porod a tvorbu mléka. Všechny funkce hypotalamu jsou potenciálně ovlivnitelné vomeroferinovou terapií popsanou v předkládaném vynálezu.

„Ligand“ je molekula, která způsobí chemický signál vytvořením specifické vazby k molekule receptoru na povrchu buňky receptoru. Takto vyvolá přenos signálu přes povrch buňky. Vazbu ligandu k chemosensorickému receptoru je možno měřit. Chemosensorická tkáň, jako je vomeronasální neuroepitel nebo čichový neuroepitel, obsahuje velký počet neuroreceptorových buněk, přičemž každá představuje nejméně jeden receptor na povrchu buňky. Mnoho molekul receptorů je schopno vázat stejný ligand. Proto, když je tkáň vystavena působení ligandu pro který je specifická (např. působení VNO na vomeroferin), může být měřena celková změna potenciálu na povrchu buněčného receptoru.

„Nižší alkyl“ znamená rozvětvený nebo nerozvětvený nasycený uhlovodíkový řetězec o 1 až 4 atomech uhlíku, např. methyl, ethyl, n-propyl, i-butyl apod. „Alkoxy“ znamená skupinu -OR, kde R je alkyl.

• · · ·

„Feromon“ je látka, která způsobuje chemickou komunikaci mezi jedinci stejného druhu pomocí vylučování a povrchových chemoreceptorů. Feromony savců jsou většinou vnímány pomocí receptoru ve vomeronasálním orgánu v nose. Obecně feromony působí na vývoj, rozmnožování a příbuzné chování. „Vomeroferin“ je obecnější termín, který zahrnuje feromony a znamená látku, která působí jako chemosensorický posel, který se váže k určitému receptoru vomeronasálního epitelu a má fyziologický nebo společenský účinek. Fyziologický účinek vomeroferinu se přenáší pomocí vomeronasálního orgánu.

Pikogram (pg) je 0,001 nanogramu (ng). Nanogram je 0,001 mikrogramu (jig) Mikrogram je 0,001 g.

Předkládaný vynález se týká určité skupiny 19-norpregnanových steroidů.

Má se za to, že podskupina 19-norpregnanů v uvedené skupině je nová. Syntézy popsané v souladu s překládaným vynálezem jsou uvedeny podle následujícího schématu: Schéma 1 zahrnuje 19-norpregnany, na které je zaměřen předkládaný vynález, který ale není omezen na tyto příklady. Syntetické diagramy, které následují zobrazují syntézu meziproduktů a podstruktur, které se využijí při přípravě 19-norpregnanů

Přehled obrázků na výkresech

Obr. 1 a obr. 2 uvádějí EVG a frekvenci signálu vomeronasálního nervu steroidů E2/P4 a kontrolu u samic krys.

Obr. 3 až 24 ukazují EVG, EDA, RF, CF, EMG, BT a EEG (alfa-V, alfa-T, beta-V, beta-T) údaje při podávání jmenovaného 19-norsteroidu do VNO u žen.

Obr. 25 až 46 ukazují EVG, EDA, RF, CF, EMG, BT a EEG údaje při podávání jmenovaného 19-norsteroidu do VNO u mužů.

Popis vynálezu

Cílem předkládaného vynálezu je připravit farmaceutické prostředky, které obsahují lidské vomeroferiny nebo feromony a jsou vhodné pro nosní podávání.

Dále je cílem předkládaného vynálezu nabídnout způsob použití těchto prostředků pro ovlivnění funkce hypotalamu.

••.iZMĚNĚNý-USr • · · · « · · · · · · ·· · ·

Dalším cílem předkládaného vynálezu je poskytnout způsob použití těchto prostředků pro ovlivnění psychologických a společenských funkcí, které jsou normálně řízeny hypotalamem.

Úkolem předkládaného vynálezu je také poskytnout způsob pro ovlivnění funkce hypotalamu, který má následující výhody: 1) podávání přímo k chemoreceptoru v nosní dírce a vomeronasálním orgánu bez použití tablet nebo jehel - t.j. neinvazně; 2) technika působení léku přes nervový systém a ne přes oběhový systém - takže funkce mozku může být ovlivněna bez ohledu na bariéru mozek-krevní oběh; 3) přímý způsob působení na hypotalamus - mezi receptorem feromonu a hypotalamem je pouze jeden synaptický uzel; a 4) zajištění vysoce specifického působení léku, atak snížení nebezpečí vedlejších účinku - protože nervové senzory mají vztah k u určité části mozku. Další cíle, výhody a nové rysy předkládaného vynálezu budou vysvětleny dále v popisu, který následuje a odborníkům se částečně vyjasní po popisu testování.

Cíle předkládaného vynálezu bylo dosaženo po přípravě farmaceutických prostředků vhodných pro nosní podávání. Prostředky obsahují farmaceuticky vhodné nosiče a pregnanové steroidy obecného vzorce:

kde Pj je oxo, a- nebo β-hydroxy, a- nebo β-acetoxy, a- nebo β-propionoxy, a- nebo β-nižší acetoxy, a- nebo β-nižší acyloxy, nebo a- nebo β- benzyloxy skupiny;

„a“, „b“, „c“, „d“, „e“, „ř‘, „g“, „h“, „i“, ,j“, „m“ a „n“ jsou alternativní místa pro výhodné dvojné vazby a „k“ je nepřítomno nebo přítomno pro tvorbu trojné vazby s ,j“;

·· ····

P₂ je hydroxyskupina, vodík, nižší alkoxyskupína o 1 až 6 atomech uhlíku, nebo P₂ není přítomno;

P₃ je oxoskupina, vodík, hydroxyskupina, nižší alkoxyskupína o 1 až 6 atomech uhlíku nebo halogen skupina;

P4 je methyl nebo ethyl;

Ps je vodík, methyl nebo halogen skupina;

P_fi je vodík nebo methyl.

Jedna třída výhodných stéroidních prostředků obsahuje steroid, kde „d“ je dvojná vazba a „b“ je s výhodou dvojná vazba. Další výhodná třída obsahuje „a“, „d“ a „e“ a případně jsou přítomny ,,g“ nebo „h“. Jestliže je v tomto případě přítomno „g“, je s výhodou přítomno také „n“. Další výhodná třída obsahuje „c“ a s výhodou také „f*.

Novou třídou jsou 19-norpregnany výše uvedeného vzorce, a jako jejich příklady je možno uvést sloučeniny, kde P3 a Pe jsou vodík; „f‘, „n“, „h“ a „g“ nejsou přítomny; P₄je methyl a R' a R nejsou halogen:

i) když Pj je oxoskupina, „c“ je přítomno a P₂ a P₅ jsou vodík; potom ,j“ nebo „i“ nejsou přítomny nezávisle, „m“ a ,j“ nejsou přítomny zároveň nebo „i“ a ,j“ nejsou přítomny zároveň, nebo „mi“, ,j“ a „k“ nejsou přítomny zároveň a nejméně jeden člen ze skupiny „i“,, j“ a „k“ musí být přítomen;

ii) když Pi je OH, „a“, „d“ a „e“ jsou přítomny a P₅ je vodík, potom “j“, „i“ nebo „m“ nejsou přítomny samostatně nebo ,j“ a „k“ nejsou přítomny zároveň nebo „i“ a ,j“ nejsou přítomny společně nebo „m“, ,j“ a „k“ nejsou přítomny společně a nejméně jeden člen ze skupiny „i“, ,j“ a „k“ musí být přítomen;

iii) když Pi je beta-OH, „c“ je přítomno a P₂ a P₅ jsou vodík, potom „i“ a, j“ nejsou přítomny společně nebo „m“, ,j“ a „k“ nejsou přítomny společně;

iv) když Pi je -OME a „d“ a „b“ jsou přítomny, potom ,j“ a „i“ nejsou přítomny samostatně;

*· ····

.......* ίο

v) když Pi je oxoskupina a „d“ je přítomno a P₅ je vodík, potom „i“ není přítomno samostatně nebo, j“ a „k“ nejsou přítomny zároveň.

Termín nižší alkyl; nižší alkoxy skupina atd. znamená, že skupina obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku, s výhodou 1 až 4 atomy uhlíku.

Další cíl předkládaného vynálezu byl dosažen po zajištění způsobu pro ovlivnění funkce hypotalamu a/nebo autonomní funkce. Ligand pro chemorcceptor na povrchu buněk nosního neuroepitelu funguje pokud je buňka částí jiné tkáně než čichového epitelu; a ligand se podává nosní dírkou a pak se specificky váže k chemoteceptoru působí na funkci hypotalamu.

Všechna provedení předkládaného vynálezu se týkají a zahrnují lunkční ekvivalenty uvedené v těchto provedeních a modifikovaných steroidů, které vykazují jmenovanou funkční podobnost.

V následujícím schématu jsou uvedeny výhodné 19-norpregnany.

Η

··	····		·· ··	• · • Φ	♦	44 •
• ·	•	•	• · φ • 4	• Φ		«Φ
•	•	•		• · ··	•	•
•	4	• ·	φ ·	•	•	4
• ·· · ·	• · ♦ ·	•	φ . · • 4 44 ··	4·		• ·

^-^Ο^ίξ^βΛ/Υ

QQ

' I

o p / &

< . •^X. O 3^ 7 fc

1

i

*·,

*< gj

'i © 2;

Tl· / \ £

ι*—

\

\ / ·

1

&

í

i

#s í t f ° Z

> o

(1

........... ' ¹ i •*c. > T J o J / a

C0

\

ο

V

s

%

í

o

1:

o

í

7 O &

;> o 2; i

·< ✓s< >

W3

Έ=

ii-

Έ

s-2

·< .’ •it= z

Ο

3

s

o

J

ž_

ϊ

k— <

v. a

·<

·< >

τ-L i

nr

•řL ^ě

2.

T J

Λ

O

<υ

Ο

g

<'¹ γ·

kiF\ 1

2'

p”

-ď, -rfk Ž

&

fl S

K

γη. ^g

L > £ ,

«>

ο

k

%

o

v/

^BO

1'

•<1 1' k. -

< ‘

•

·< . > ž .

·< _X > (1 © l.j,/ z-

CM

C»

asý-

g

o

<=»

·7*

1 7

í·

-*£

*

-< p*

'< ~ >

i

X? ί

vU^g

£

Γ 7 z

.·

^4

Ό

v

Q

s-í

Ο

§

*2

g

o

Cly/ yAíJ

—

CM

m

-

w>

se

»«-.

·· ·♦♦· • ·

-// Μ

·· ·#♦· Φ ♦ *	• 0 ··.	99 9 9 9 9	9 · • ♦ 00
• *	• !	• 9 9 9	• ♦
• «	• « · ·	9	• 9
• · · ♦ ·· · ··	• 0 0 ·· 0000	99	• 9

Příprava sloučenin: Typ E

El: xb

Frank B. Colton, Leonard N. Nysted, Byrón Ricgel a Albert Rymond, J. Amer. Chem

Sóc., 1957, 79, 1123.

Také komerčně dostupná látka, např. 17a-ethinyl-19-nortestosteron.

Toto je komerčně dostupná látka, např. estron, ethinylestradiol.

44	4444	44 ♦· » Λ · *	4 4 4 4	44 4 4
• 4	4	i . 4	4 ·	44
• *	4 •	• * - • · · *	4 ··♦ 4	4 ♦ 4 ·
4 ♦ ·· ·	4 « • 4	• · · •4 444·	• 4	• 4

Pierre Crabble, U. S. patent 3 492 318, 1970.

co

Toto je komerčně dostupná látka, např. 6-dehydroestron.

PyHBr^Py

2. Zn

Viz. Příklady.

i • ·· ·

Viz. Příklady.

C1O3

.......>

Viz Příklady.

0.1 Fedorova, Ο. S. AnisimovaaG. S. Grinenko, Khim. Prir. Soedin., 1976, 2, 180.

Frank B. Colton, Leonard N. Nysted, Byron Riegel a Albert Rymond, .1. Amer. Chem.

Soc., 1957, 79, 1123.

ESt

Toto je komerčně dostupná sloučenina, např. equilin.

.··.···:	♦· ··. • · · * _ A 4	44 4 4 4 *	44 4 44
.· %	• · _ 4 · · ·	4 444 4	• 4
♦ · · ···· ··	• 4 · «4 444·	• 4	44

E1Q1

Toto je komerčně dostupná sloučenina, např. equilenin.

uah₄

O (E13)

HO

(E11)

Viz. Příklady.

E12;

JO?

OH

LlAH*

AcO

UAH<

nu ·· ♦ 9 ♦

9999 ·«·« ♦

• · • · • 9· •· • · ♦ ♦♦· ·· • 9 9· •* **.

♦ ·· 99

9·

9999

Viz. Příklady.

(COjHfe

(E13)

(COjHfe

Viz Příklady.

Příprava sloučenin: Typ P

NjUNHj

O. I. Fedorova, O. S. Anisimova a G. S. Grinenko, Khim. Prir. Soedin., 1976, 2, 180.

·· 9999 • ♦ ·	·» ··. • · · ·	99 9 · • ·	·« • ♦ ··
• · 9 ·	• · ’ • · ·	* ··:	• · 9 9
9 · · 9999 99	• 9 · «· 9999	··	99

Richard H. Peters, David F. Crowe, Mitchell A. Avery, Wesley K. M. Chong, a Masato

Tanabe, J Med, Chem., 1989, 32, 1642.

Také viz Příklady.

Frank B. Colton, Leonard N. Nysted, Byron Riegel a Albert Rymond, J. Amer. Chem

Soc., 1957, 79, 1123.

Richard H. Peters, David F. Crowe, Mitchell A. Avery, Wesley KM. Chong, a Masato

Tanabe, J. Med. Chem., 1989, 32, 1642.

El

H. Kaufmann, P. Wieland a J. Kalvoda, Helv Chim. Acta, 1972, 55(2), 381 • «

O. I. Fedorova, OS. AnisimovaaG. S. Grinenko, Khim. Prir. Soedin., 1976, 2, 180.

Richard H. Peters, David F Crowe, Mitchell A. Avery, Wesley K M. Chong, a Masato

Tanabe, J. Med. Chem., 1989, 32, 1642.

• ·

Peter Kašpar a Herbert Witzel, J. Steroid. Biochem., 1985, Vol. 23, č. 3, str. 259.

Tanabe, J. Med. Chem , 1989, 32, 1642.

··»· efii

Frank B. Colton, U. S. Patent 2 840 582, 1958.

Píerre Crabble a Esperanza Velarde, U. S. Patent 3 681 410, 1972.

·· • · • •	···· • • •	·· ·· • · · 1 • · · • · · ·	·· 9 · Φ * • •	·· 9 9 9 9 9 9 9 9
• ····	• · ··	• · · ·· ·♦··	··	99

Peter Kašpar a Herbert Witzel, J. Steroid. Biocheni., 1985, Vol. 23, č. 3, str. 259.

TsOHMcaO OR poa₃

Pierre Crabble, U. S. Patent 3 492 318, 1970.

Klaus Prezewowsky a Rudolf Wiechert, U. S. Patent 3 682 983, 1972.

Methylnorpregnany

19-Norpregnany v této řadě se připravují s methylskupinou v pozici 6a, 7a, 18, 20 nebo

21.

U. S. Patent 3 681 410 uvádí přípravu 6a-methylovaných analogů.

•SMÉNMtišr ··♦·· · · · • · · · ♦ · · · ·· ··

U. S. Patent 3 682 983 uvádí přípravu 18-methylovaných analogů.

U. S. Patent 3 492 318 uvádí přípravu 7α, 18 a 21-methylovaných analogu.

21-methyl analoga:

r · · ··

I»

Η ’·

L. A. Van Dijck, B. J Lankwcrdwn, J. G. C M. Vermeer a A. J. M. Weber, Reci. Trav. Chim. Pays-Bas Belg., 1971, 90, 801.

a, 18, 20 a 21-methyl analoga.

Tanabe, J. Med. Chem., 1989, 32, 1642.

Z dalších methylovaných výchozích látek jsou komerčně dostupné např.:

7a-METHriESTR0N

Z těchto 7oc-methyl nebo 18-methyl analog mohou být připraveny látky, u kterých je prekursorem 17<x-ethinyl-19-nortestosteron (norethindron).

Halogennorpregnany

U. S. Patent 2 840 582 popisuje přípravu:

U. S Patent 3 681 410 popisuje přípravu:

Tanabe, J. Med. Chem., 1989, 32, 1642.

Alkoxy deriváty se připravují z odpovídajících hydroxy steroidů reakcí s alkylačním činidlem jako je trimethyloxoniumfluoroborát, triethyloxoniumfluoroborát nebo methylfluorosulfonát v inertním chlorovaném rozpouštědle jako je CI I₂C1_?. Podobně mohou být použita alkylační činidla jako jsou alkylhalogenidy, alkyltosyláty, alkylmesyláty a dialkyl sulfáty a báze jako NaH, KM nebo KOBut, oxid stříbrný nebo oxid bamatý v polárním aprotickém rozpouštědle, např. DMF, DMSO a hexamethylfosframid.

Postupy použité při syntéze steroidů jsou odborníkům v této oblasti známé. Reakční teplota a čas se stanoví pomocí běžných postupů. Po přidáni požadovaných činidel se směs míchá v inertní atmosféře a v hodinových intervalech se odebírají vzorky. Aby se zjistil stupeň zreagování výchozí látky, odebrané vzorky se analyzují chromatografícky. Jestliže výchozí látka nezreaguje do 24 hod, směs se zahřívá k varu a v hodinových intervalech se analyzují vzorky podle postupu uvedeného výše, dokud výchozí látka nezreaguje. Před dalším zpracováním se směs nechá vychladnout.

Čištění produktů se provádí chromatografícky a/nebo krystalizací podle postupů, které jsou odborníkům známé.

Farmaceutické prostředky a způsoby použití

Předmětem předkládaného vynálezu je způsob ovlivnění funkce hypotalamu pacienta. Dalším předmětem předkládaného vynálezu je ovlivnění autonomní funkce pacienta. Těmito autonomními funkcemi jsou rychlost srdeční činnosti, rychlost dýchání, mozková činnost (procentuální obsah alfa kortikální činnosti), tělesná teplota. Další předměty, na které ale není předkládaný vynález omezen, jsou zmírnění negativního působení, špatné nálady nebo zmírnění negativních povahových rysů pacienta. Dalším provedením předkládaného vynálezu je způsob léčby předmenstruačního stresu u žen. Všechny tyto předměty předkládaného vynálezu se provádí pomocí nesystémového nosního podávání určitého pregnanového steroidů, směsi pregnanových steroidů a směsi jednoho nebo více pregnanových steroidů a jednoho nebo více androstanů a/nebo estrenových steroidů.

Tento speciální způsob podávání se liší od alternativních způsobů, jako je užíváni nebo podávání v injekční podobě, v několika důležitých bodech, které jsou zapříčiněny přímým kontaktem s VNO, který je zajištěn nosním podáváním steroidního ligandů. Při • · • · • ·

způsobech v souladu s předkládaným vynálezem se vhodný ligand podává přímo k chemosensorům v nosní dírce a vomcronasálnímu orgánu bez použití tablet nebo jehel t.j.neinvazně. Působení léku je zprostředkováno vazbou ligandu ke specifickému receptoru umístěnému na buňkách nosního neuroepitelu, s výhodou ve VNO. Lék působí přes nervový systém a ne přes oběhový systém - tudíž funkce mozku je ovlivněna bez ohledu na bariéru krevní oběh-mozek. Tyto způsoby léčby nabízí přímý prostředek pro působení na hypotalamus přes nervový systém, protože mezi recept ořem feromonu a hypotalamem je pouze jeden synaptický uzel. Protože čidla nervů mají specifické umístění v mozku, jsou při této metodě účinky léků vysoce specifické, a tak se snižuje možnost nežádoucích vedlejších účinků.

VNO kontakt je důležitý, protože VNO je spojen s působením chemoreceptor/feromon. VNO obsahuje dvě slepé trubicovité výchlipky, které se nachází na spodním okraji nosní přepážky. VNO obsahuje neuroepitel, jehož nervové výběžky vedou nervová vlákna do mandlí a odtud do hypotalamu. Existence VNO byla dobře dokumentována u většiny suchozemských obratlovců včetně člověka; nicméně u dospělého člověka se předpokládá, že je nevyvinutý (viz. Johnson a kol., výše).

z

Účinnost proti plodnosti

Steroid 19-norpregna-l,3,5(10)-trien-3-ol (sloučenina E2/P4 v tabulce 19-norpregnanů) byl testován ve VNO samic krys. EVG a frekvence signálu vomeronasálního nervu jsou uvedeny na obrázku 1 a 2. Tato data ukazují stimulaci VNO. Ukázalo se, že když se steroid E2/P4 podává orálně samicím krys, které mají nízkou hormonální aktivitu (měřeno pomocí vazby estrogen-receptor), je postkoitálně účinný proti oplodnění. (Peters a kol., J. Med. Chem., 1989, 32, 1642-52). Údaje na obrázcích 1 a 2 naznačují, že tuto aktivitu proti oplodnění je možné vysvětlit tím, že E2/P4 není hormon, ale působí jako vomeroferin pomocí stimulace VNO, který působí na hypotalamus. V souladu s údaji získanými z modelu u krys sloučenina E2/P4 také vykazuje stimulaci VNO u žen (viz. obr. 22) a v menší míře u mužů (viz. obr. 44), a tak je možno očekávat, že vomeroferin působí proti oplodnění u člověka.

Stimulace hypotalamu přes VNO může umožnit snížení uvolňováni LH a FSH. Toto může poskytnout klinický způsob pro léčbu rakoviny prostaty, předčasného dospívání (mužů a žen), endometriózy, nezhoubného nádoru dělohy, rakoviny prsu, předmenstruačniho syndromu a dysfunkce odvzdušnění dělohy.

Ligandy nebo jejich sulfatované cypionované, benzoované, propionované nebo glukuronované deriváty mohou být podávány přímo, ale s výhodou se podávají jako směsi. Připravují se v kapalné dávkovači formě, např. jako kapaliny, suspenze apod., s výhodou ve spojených dávkových formách, které jsou vhodné pro jednotlivé podávání přesných dávek. Kapalné dávky mohou být podávány jako nosní kapky nebo aerosol. Alternativně se aktivní sloučenina může připravit ve formě krému nebo oleje a podávat místně do nosní dutiny. Dále se může vomeroferin podávat jako výpar vyfouknutý do nosní dutiny. Dalším způsobem podávání je kontrolované uvolňování těchto látek z opouzdřeného prášku nebo v mikroskopickém množství za použití syntetických polymerů, jako jsou silikony a přírodních polymerů jako je želatina a celulosa. Rychlost uvolnění je možno kontrolovat vhodným výběrem polymerního systému, který umožňuje kontrolovat rychlost difúze (Langer, R. S. a Peppas, N. A., Biomaterials 2, 201, 1981). Přírodní polymery jako je želatina a celulosa se pomalu rozpouštějí během minut až hodin, zatímco silikony zůstávají neporušené asi měsíc. Prostředky budou obsahovat běžné farmaceutické nosiče nebo látky usnadňující vstřebávání, jednu nebo více aktivní 19-norpregnanovou sloučeninu a mohou také obsahovat jeden nebo více androstanových nebo estrenových steroidů. Dále mohou prostředky obsahovat další léčivé látky, farmaceutické prostředky, nosiče, adjuvanty atd.

Nej vhodnější způsob přenosu ligandu je vdechováním přírodního feromonu, který je na pokožce jiného člověka. Odhaduje se, že maximální přírodní koncentrace pregnanového steroidů na pokožce člověka je 2 až 7 ng/cm². Odhaduje se, že během intimního kontaktu může být člověk vystaven působení maximálně 700 ng přírodního steroidů. Protože tyto sloučeniny jsou relativně netěkavé, odhaduje se, že během intimního kontaktu vdechuje člověk maximálně 0,7 pg přírodního steroidů z pokožky jiného člověka. Z celkového inhalováného množství se k receptorům vomeronasálního orgánu dostane asi 1 % hmotn. Odhaduje se tedy, že vystavení přírodnímu feromonu je 0,007 pg.

Množství podávaného vomeroferinu je závislé na léčené osobě, závažnosti stavu, způsobu podávání, častosti podávání a posudku osoby, která lék předepisuje. Jedna dávka nejméně 10 pg podávaná přímo do dutiny vomeronasálního orgánu je účinná při ····

vyvolání přechodné autonomní odezvy. Při podávání do nosní dutiny se podává dávka 100 pg až 10 mikrogramů, s výhodou 1 ng až 10 gg, výhodněji 10 ng až 1 gg. Pokud jde o častost podávání, je vhodné rozmezí jedné dávky za hodinu až jedné dávky za měsíc, s výhodou 8x za den až jednou za den, výhodněji jednou až třikrát za den Masti obsahující jednu nebo více aktivních sloučenin a výhodných farmaceutických adjuvantů na nosiči jako je voda, solný roztok, vodná dextrosa, glycerol, ethanol apod. se připravují za použití základu jako např. petrolejové želé, sádlo nebo lanolin.

Kapalné farmaceutické prostředky vhodné pro podávání se připravují např. rozpuštěním, dispergováním atd. aktivní sloučeniny a vhodného farmaceutického adjuvantu na nosiči jako je voda, solný roztok, vodná dextrosa, glycerol, ethanol apod. za vzniku roztoku nebo suspenze. Je-li to nutné, farmaceutické prostředky mohou obsahovat malé množství netoxické přídavné látky jako je zvlhcující nebo emulsifikační činidlo, pH pufřující činidlo apod. např. octan sodný, sorbitan monolaurát, triethanolaminoctan sodný, triethanolaminoleát, atd. Běžné způsoby pro přípravu těchto dávkovačích forem jsou známé nebo jsou odborníkům zřejmé; např. viz. Remingtons Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, 15 vydání, 1975. Prostředky nebo formy podávané jakýmkoli způsobem obsahují jednu nebo více aktivních sloučenin v množství vhodném pro zmírnění příznaků léčených potíží.

Při podávání ve formě aerosolu se aktivní složka s výhodou dodává do konečně rozdělené formy společně s povrchově aktivní látkou a hnací látkou. Procentuální obsah aktivní složky je 0,001 až 2 % hmotn., s výhodou 0,004 až 0,10 % hmotn.

Povrchově aktivní látka musí být samozřejmě netoxická a s výhodou rozpustná v hnací látce. Takovými látkami mohou být estery nebo poloestery mastných kyselin obsahujících 6 až 12 atomů uhlíku jako např. estery kyseliny kapronové, oktanové, laurové, palmitové, stearové, linolenové, oleoštearové a olejové s alifatickými polyalkoholy nebo jejich cyklickými anhydridy jako jsou anhydridy ethylenglykolu, glycerolu, erytritolu, arabitolu, manitolu, sorbitolu a hexitolu odvozené od sorbitolu (estery sorbitolu prodávané pod obchodním názvem „Spans“) a polyoxyethylenové a polyoxypropylenové deriváty těchto esterů. Mohou být použity směsi esterů jako např. smísené nebo přírodní glyceridy. Výhodnými povrchově aktivními látkami jsou oleáty nebo sorbitan např. prodávané pod obchodním názvem „Arlacel C“ (sorbitan seskvioleát), „Spán 80“ • ·

(sorbitan monooleát), a „Spán 85“ (sorbitan trioleát). Povrchově aktivní látky tvoří 0,1 až 20 % hmotn. prostředku, s výhodou 0,25 až 5 % hmotn.

Většinu prostředku obvykle tvoří hnací látka. Kapalné hnací prostředky jsou za normálních podmínek většinou plynné a jsou zkapalněny pod tlakem. Mezi vhodné kapalné hnací látky patří nižší alkany, které obsahují do pěti atomů uhlíku, např. butan a propan; fluorované a fluorchloro váné alkany, např. látky prodávané pod názvem „Freon“. Mohou být také použity směsi výše uvedených látek.

Při přípravě aerosolu se nádoba vybavená vhodným ventilem naplní příslušnou hnací látkou obsahující dobře rozpuštěnou aktivní látku a povrchově aktivní látku. Složky se tak udržují za zvýšeného tlaku, dokud se neuvolní otevřením ventilu.

Dalším způsobem podávání je místní použití těkavého kapalného prostředku na pokožku, s výhodou na pokožku obličeje. Prostředek obvykle obsahuje alkohol, např. ethanol nebo isopropanol. Prostředek může také obsahovat příjemně vonící látku.

Měřeni změn v afektu, náladě a povaze

Stavy spojené s afektem, náladou a povahou se měří za pomocí dotazníku. Pacientům se například předkládají dotazníky obsahující množství přídavných jmen, které odpovídají jejich stavu. Pacienti hodnotí svůj stav popsaný přídavnými jmény a měří intenzitu pocitu pomocí číselné stupnice. Seskupením příbuzných přídavných jmen a statistickou analýzou hodnocení pacienta přídavnými jmény se získá základ pro měření různých pocitů.

Alternativně se mohou pocity měřit pomocí autonomních změn, např. polygrafickým hodnocením (galvanická odezva pokožky, rychlost tepu, apod.). Cabanac M , Annual Review of Psychology (1975), 37: 415; Hardy J. D., „Body Temperature Régulation“, kapitola 59, str. 1417. Medical Psychology. Díl II, Vydal: VB Mountcastle (1980); Wolfram Bouscein. Electrodermal Activity (Plenům Press, 1992). Mohou být také měřeny mimoslovní podněty jako výraz tváře a držení těla.

··

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady mají za úkol ilustrovat předkládaný vynález, ale tento vynález není omezen pouze na tyto příklady.

Zkratky použité v příkladech jsou následující: aq. - vodný; RT = teplota místnosti; PE = petrolether (t. v. 50-70 °C); DMF = Ν,Ν-dimethylformamid; DMSO = dimethylsulfoxid; THF = tetrahydrofuran.

• 9 · · · ·

Reakční schéma 1. Příprava 19-norpregnanů.

j-ZMÍNĚNÍrysr

Reakční schéma 2. Příprava dalších norpregnanů.

·· ♦··· ·· ·«

Reakční schéma 3. Další přípravy norpregnanů.

........,,ZMÉNÉIý.Ý.U§T’ • · · · ····· ♦ ··· ♦ · · *··· · ······ * · · ···· ·· ·♦ ···· ·· ··

II

·· ····

Reakční schéma 4.17-ethylenace ketonů.

Ph₃P»CHCH₃

Příklad 1 l9-norpregna-4,20-dien-3fi-ol, 1: 19-norpregna-4,20-dien-3-on (0,38 g, 13 mmol) a lithium tri-t-butoxyaluminiumhydrid (1,36 g, 5,35 mmol) ve 20 ml bezv. etheru bylo 5 hod mícháno při teplotě místnosti, poté bylo přidáno 6,74 g Glauberovy soli. Vzniklá směs byla míchána 5 hod a poté filtrována přes skleněnou fritu. Zbytek byl promyt 5x20 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Surový produkt byl čištěn pomocí preparativní TLC na silikagelu GF za eluce směsí 5 % obj. ethylacetát/CHjCh za získání žluté pryskyřice (39,6 mg, 0,138 mmol, 11 % hmotn ), TLC (5 % obj. ethylacetát/CH₂C12 na silikagelu; Rf 0,29).

·· ····

Příklad 2

19-norpregna-l, 3, 5 (JO), 17, 20-pentaen-3-ol, 2: K suspenzi Li A1H₄ (256,1 mg. 6,748 mmol) a chloridu hlinitého (296,8 mg, 2,227 mmol) v 20 ml bezv. etheru pod argonem byl přidán ethinylestradiol (1,0000 g, 3,3738 mmol) ve 20 ml bezv. etheru. Po 20 hod varu byla reakční směs rozložena přidáním Glauberovy soli (2,0 g) a míchána další 2 hod. Směs byla filtrována přes křemelinu a zbytek byl promyt 3x10 ml ethylacetátu. Po odpaření spojených filtrátů, chromatografií na silikagelu za eluce 15 % obj. ethylacetát/hexan a dvojnásobné rekrystalizaci z vodného ethanolu byly získány světle hnědé jehly (367,5 g, 1,311 mmol, 39 % hmotn ), t.t. 132-133 °C, TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu ; Rf 0,36; estra-1, 3, 5 (10), 16-tetraen-3-ol Rf 0,36).

Příklad 3

19-norpregna-l, 3, 5 (l)-trien-3-ol-20fi-yn, 3: K chladnému (lázeň suchý led/aceton) roztoku 19-norpregna-l, 3, 5 (10), 17, 20-pentaen-3-olu (2,280,4 mg, 1,000 mmol) v 28 ml bezv. THF pod argonem bylo během 10 min přidáno n-BuLi (2,5 M v hexanu,

1,2 ml, 3,0 mmol). Míchám pokračovalo 18 hod a během této doby se reakční směs pomalu ohřívala na teplotu místnosti. Reakční směs byla rozložena 25 ml 1 N HGl a poté extrahována 3x10 ml etheru. Spojené organické extrakty byly promyty nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 25 ml solanky, sušeny nad síranem horečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za Sníženého tlaku. Po chromatografií žluté pryskyřice na silikagelu za eluce 20 % obj. ethylacetát/hexan, následné rekrystalizaci z vodného ethanolu byly získány bílé jehly (150,5 mg, 0,5367 mmol, 54 % hmotn.), t.t. 148-149 °C, TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu; Rf0,34; výchozí látka Rf 0,37).

Příklad 4

19-norpregna-l, 3, 5 (10), 16, 20-pentaen-3-ol, 4: 19-norpregna-l, 3, 5 (10),

16-tetraen-3-ol-20-yn (200 mg, 0,7184 mmol) v 9 ml bezv. THF byl přidán k 30 ml bezvodého amoniaku. Po malých kouscích byl přidán sodík (0,07 g, 3 mg-atom) a reakční směs byla míchána 1 hod a během této doby se odbarvila. Byl přidán abs ethanol (3 ml) a směs byla nechána zahřívat na teplotu místnosti přes noc. Ke směsi byla přidána ·· ····

HC1 (1 N, 20 ml) a směs byla 3x extrahována 10 ml CH2CI2 Spojené organické extrakty byly promyty 10 ml solanky, sušeny nad síranem horečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml CH2CI2 a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po preparativní TLC vzniklé žluté pryskyřice (silikagel GF, 20 % obj. ethylacetát/hexan) a následné rekrystalizaci ze směsi benzen/hexan byl získán bílý prášek, t.t. 123-125 °C. Podle TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan) má hlavní produkt Rf 0,38 a vedlejší produkt Rf 0,04.

Příklad 5

19-norpregna-5 (10), 20-dien-3-on, 5: 19-norpregna-2, 5 (10), 20-trien-3-ylmethylether (750,0 mg, 2,51.3 mmol) byl rozpuštěn v 80 ml acetonu a byla přidána kyselina šťavolová (0,88 g, 7,0 mmol) ve 12 ml vody. Aby se většina sraženiny rozpustila, bylo přidáno dalších 20 ml acetonu a reakční směs byla míchána 6 hod. Reakční směs byla rozložena nasyceným roztokem hydřogenuhličitanu sodného (30 ml) a dvakrát promyta 40 ml ethylacetátu. Spojené organické extrakty byly dvakrát promyty 50 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 25 ml ethylacetátu a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po chromatografíi (10 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) byla získána bezbarvá pryskyřice (0,54 g,

1,9 mmol, 76 % hmotn.).

Příklad 6

19-norpregna-5 (10), 20-dien-3-ol, 6: Ketherickému roztoku (8,4 ml) 19-norpregna-5 (10), 20-dien-3-onu (0,42 g, 1,5 mmol) bylo přidáno 69,7 mg (1,84 mmol) LAHu a reakční směs byla míchána 30 min. Byla přidána Glaubcrova sůl (2,79 g) a suspenze byla míchána dalších 10 min. Směs byla filtrována přes křemelinu a zbytek byl extrahován 4x35 ml etheru. Spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku a vzniklý olej byl čištěn chromatografícky (20 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) za získání bílé pěny (0,38 g,

1,3 mmol, 88 % hmotn..

Příklad 7

19-norpregna-4, 20-άϊβη-10β-ο1-3-οη, 7: 19-norpregna-5 (10), 20-dien-3-on (5, 0,45 g,

1,6 mmol) v DMF (5,7 ml) byl ochlazen v lázni led/aceton a bylo přidáno Jonesovo ·· ···· činidlo (2,67 Μ, 0,19 ml, 0,51 mmol). Po 1,5 hod míchání bylo přidáno 0,19 ml Jonesova činidla. Míchání pokračovalo 45 min a poté bylo přidáno 0,38 ml Jonesova činidla. Reakční směs byla po další hodině míchání rozložena přidáním 2-propanolu (0,38 ml). Byl přidán cthylacetát (100 ml) a směs byla promyta 3x50 ml vody, 50 ml solanky, sušena nad síranem hořečnatým a filtrována přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml ethylacetátu a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po preparativní TLC na alumině za eluce směsí 50 % obj. ethylacetát/hexan byl získán bílý krystalický film (89,2 mg, 0,297 mmol, 19 % hmotn.). Podle TLC (50 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) měl produkt Rf 0,46 a byl znečištěn výchozí látkou o Rf 0,73.

Příklad 8

J9-norpregna-4, 9 (10), 20-trien-3~on, 8: Roztok 19-norpregna-5 (10), 20-dien-3-onu (0,34 g, 1,2 mmol) v bezvodém pyridinu (4,0 ml, 49 mmol) byl ochlazen v lázni led-sui na -8 °C a byl přidán pevný pyridiniumbromidperbromid (1,26 g, 3,94 mmol) tak rychle, aby teplota reakční směsi nepřesáhla -2 °C. Po 1 min míchání bylo přidáno 0,20 g fenolu, chladící lázeň byla odstraněna a reakční směs byla míchána 24 hod při teplotě místnosti. Bylo přidáno 50 ml ethylacetátu a směs byla promyta 50 ml 1 N HCl, 25 ml nasyceného CuSO₄, 25 ml 5 % hmotn. hydroxidu sodného, 25 ml vody a 25 ml solanky. Směs byla 4 hod sušena nad síranem hořečnatým a poté filtrována přes skleněnou fritu. Zbytek byl promyt 10 ml ethylacetátu a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Vzniklý tmavý sirup (512,8 mg) byl převeden do 8 ml abs. ethanolu, byl přidán zinkový prach (260,8 mg, 3,990 mg-atom) a suspenze byla vařena 0,5 hod. Reakční směs byla filtrována přes bavlnu a zbytek byl promyt 10 ml ethanolu. Po odpaření spojených filtrátů a dvojí preperativní TLC, poprvé na silikagelu GF (1000 μ, 20 % obj. ethylacetát/hexan), poté alumina GF (1000 μ, 20 % obj. ethylacetát/hexan) byla získána téměř bezbarvá pryskyřice (152,8 mg, 0,5410 mmol, 45 % hmotn.), TLC (Rf 0,22, 10 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu; pregna-4, 20-dien-3-on Rf 0,25).

Příklad 9

19-norpregna-l, 3, 5 (10), 20-tetraen-3-ol, 9: Ethynyiestradioldiacetát (2,0004 g,

5,2576 mmol) v 10 ml bezv. THF byl přidán ke 140 ml bezv. amoniaku a poté byl během min přidán pomalých kouscích sodík (1,88 g, 81,8 mg-atom). Po 1 hod míchání tmavě ·· ····

99·♦ t· · •· ·· * ♦ 9

99

modrého roztoku byl přidán abs. ethanol a reakční směs byla přes noc nechána ohřívat na teplotu místnosti. Bylo přidáno 100 ml 1 N HC1, vrstvy byly odděleny a vodná vrstva byla dvakrát extrahována 50 ml etheru. Spojené organické vrstvy byly promyty 3x100 ml solanky, sušeny nad MgSO₄ a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 25 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Zbytek byl převeden do 25 ml CH2CI2, Sušen nad síranem sodným a filtrován přes křemelinu. Zbytek byl dvakrát promyt 10 ml CH2CI2 a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po chromatografií (15 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) byla získána bílá krystalická pevná látka (0,86 g, 3,0 mmol, 58 % hmotn.).

Příklad 10

19-norpregna-l, 3, 5 (10), 20-tetraen-3-ylmethylelher, 10: K surovému 19-norpregna1, 3, 5 (10), 20-tetraen-3-olu (9, 0,86 g, 3,0 mmol) v 75 ml 90 % obj. ethanolu byl přidán uhličitan draselný (6,73 g, 55,2 mmol) a suspenze byla refluxována 0,5 hod. Byl přidán dimethylsulfát (0,75 ml) a reakční směs byla refluxována další 0,5 hod. Ve třech

1,8 ml podílech (celkem 6,15 ml, 65,0 mmol) byl během 1 hod přidán dimethylsulfát a reflux pokračoval další 0,5 hod. Poté bylo přidáno 65 ml ledové vody, směs byla ochlazena v ledové lázni a míchána 2 hod. Suspenze byla odstředěna filtrována přes hrubou fritu. Zbytek byl promyt 50 ml vody, 50 ml 5 % hmotn. hydroxidu sodného, 3x50 ml vody. Zbytek rekrystalizován z vodného ethanolu za získání bílých jehel, t.t. 108,5 110 °C (lit. t.t. 108-110 °C).

Příklad 11

19-norpregna-l, 3, 5 (10), 16-tetraen-6-on-20-in-3-ylacetát, //.‘ Oxid chromový (2,68 g, 2,68 mmol) byl suspendován ve 40 ml CH2CI2 a suspenze byla ochlazena v lázni led-sul na -8 °B. Byl přidán 3,5-dimethylpyrazol (2,58 g, 26,8 mmol) a suspenze byla míchána 20 min. Během 5 min byl přidán 19-norpregna-l,3,5(10,16-tetraen-20-in-

3-ylacetát (0,86 g, 2,7 mmol) tak, aby teplota v reakční směsi nepřesáhla -7 °C. Po dalších 2 hod míchání byla reakční směs přelita přes sloupec silíkageli (30 mm x 116 mm) za eluce CH2CI2. Po odpaření příslušné frakce byl získán hnědý film (0,16 g, 0,48 mmol, 18 % hmotn ).

ΦΦ 99

Φ · · • ·· • ΦΦΦ ·

Φ Φ Φ

φ· φφφ» ·Φ· ·

Příklad 12

19-norpregna-1,3,5 (10),16-tetraen-6-on-20yn-3-ylaceláí, 12: Surový 19-norpregna-1, 3, 5 (10), 16-tetraen-6-on-20-in-3-ylacetát (11, 0,16 g, 0,48 mmol) byl suspendován ve 20 ml bezv. etheru, byl přidán LAH (36,7 mg, 0,967 mmol) a a směs byla zahřívána k varu 18 hod. Po ochlazení byla přidána Glauberova sůl (1,22 g) a suspenze byla míchána 0,5 hod. Směs byla filtrována přes křemelinu a zbytek byl promyt 4x 10 ml horkého ethylacetátu. Po odpaření a čištění pomocí preparativní TLC (50 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu GF, 1000 μ) byla získána bílá pevná látka (26,0 mg,

88,3 μιηοΙ. 18 % hmotn), TLC (50 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu R_t 0,48).

Příklad 13

19-norpregna-1,3,5 (10),17-tetraen-3-ol, 13: Ethyltrifenylfosfoniumbromid (1,3947 g, 3,7572 mmol) a t-butoxid draselný (422,5 mg, 3,765 mmol) byl pod argonem suspendován v bezv. DMSO (4,1 ml), umístěn do olejové lázně (80-84 °C) a míchán 1 hod. Byl přidán equilin (200,2 mg, 0,7459 mmol) v 4,1 ml bezv. DMSO a reakční směs byla míchána další hodinu. Po ochlazení bylo přidáno 25 ml ledové IN HC1 a směs byla třikrát extrahována 20 ml etheru. Spojené organické extrakty byly promyty 25 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, 25 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po chromatografii (20 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu GF, 1000 μ) následovala preparativní TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu GF, 1000 μ) za získání nažloutlé pryskyřice (182,9 mg, 0,6523 mmol, 87 % hmotn.), TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan, R_t 0,42).

Příklad 14

19-norpregna-1,3,5 (10), 6,17-pentaen-3-ol, 14: Ethyltrifenylfosfoniumbromid (1,3945 g, 3,7561 mmol) a t-butoxid draselný (422,5 mg, 3,765 mmol) byl pod argonem suspendován v bezv. DMSO (4,1 ml), umístěn do olejově lázně (77-79 °C) a míchán 1 hod. Byl přidán 6-dehydroestron (200,4 mg, 0,7466 mmol) v 4,1 ml bezv. DMSO a reakční směs byla míchána 1 hod. Reakční směs byla nechána ochladit a byla nalita do 25 ml ledové 1 N HC1. Směs byla třikrát extrahována 20 ml etheru a spojené organické extrakty byly promyty 25 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, 25 ml solanky, • ·· · • ·

sušeny nad síranem horečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po chromatografií (15 % obj. ethylacetát/hexan) a preparativní TLC (15 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu GF, 1000 μ) byla získána bílá krystalická látka (212,9 mg, 100 % hmotn ), TLC (15 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu, Rf 0,21).

Příklad 15

19-norpregna-l,3,5 (10,6,8,17-hexaen-3-ol, 15: Ethyltrifenylfosfoniumbromid (1,3945 g, 3,7561 mmol) a t-butoxid draselný (422,5 mg, 3,765 mmol) byl pod argonem suspendován v bezv. DMSO (4,1 ml), umístěn do olejové lázně (74-83 °C) a míchán 1 hod. Byl přidán equilenin (200,2 mg, 0,7518 mmol) v 4,1 ml bezv. DMSO a reakční směs byla míchána další hodinu. Po ochlazení bylo přidáno 25 ml ledové 1 N HCl a směs byla třikrát extrahována 20 ml etheru. Spojené organické extrakty byly promyty 25 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, 25 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po chromatografií (20 % obj. ethylacetát/hexan) následovala preparativní TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu GF, 1000 μ) za získání nažloutlého krystalického vosku (180,6 mg, 0,6487 mmol, 86 % hmotn.).

Reakční schéma 5. Příprava 19-norpregnenů katalyzovaná Pd(ll).

(C00H)₂/H₂0

Příklad 16

17-Jodestra-l,3,5(10),7,16-peniaen~3~ol, 16: K surovému equilin 17-hydrazonu (1,0058 g, 3,5000 mmol) v 21 ml bezv. THF + 4,4 ml (32 mmol) triethylaminu pod * · · ········ • · ·· ····· • · · · · · · ···· · ······ · · ·

................

argonem za chlazení v ledové lázni byl v průběhu 33 min přidáván jod (2,10 g,

16,5 mmol) v 21 ml bezv. THF dokud nezůstal roztok žlutý a nepřestal se vyvíjet plyn (zbývající roztok jodu: 5,5 ml). Míchání pokračovalo 20 min a poté byla reakční směs odpařena za sníženého tlaku a suspendována v 90 ml etheru. Suspenze byla promyta 35 ml 1 N HCI, 35 ml 5 % hmotn. thiosíranu sodného pentahydí átu, 35 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, 35 ml solanky, sušena nad síranem horečnatým a filtrována přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po chromatografií (20 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) byla získána žlutá pěna (953,8 mg. 2,522 mmol, 72 % hmotn.).

Příklad 17

19-Norpregna-l,3,5(10),7,16-pentaen-3-ol, 17: Směs 17-jodestra1,3,5(10),7,16-pentaen-3-olu (953,8 mg, 2,522 mmol), [l,r-bis(difenylfosfino)ferrocen]palladium(II)chlorídu CH2CI2 (51,5 mg, 63,1 μιηοΐ).

ml THF, 2,8 ml (2,8 mmol) 1,0 M triethylboranu v THF a 2,5 ml 15 % hmotn. hydroxidu sodného byla refluxována pod argonem 24 hod. Po ochlazení bylo přidáno 10 ml 1 N HCI a reakční směs byla třikrát extrahována 10 ml CII2CI2. Spojené organické extrakty byly promyty 10 ml nasyceného roztoku hydrogenuličitanu sodného, 10 ml solanky, sušeny nad síranem horečnatým a fitrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml CH2CI2 a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po preparativní TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu GF, 1000 μ) byla získána žlutá pryskyřice (54,4 mg, 0,194 mmol, 7,7 % hmotn.); TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu; produkt Rf 0,3 9, 7-jodestra-1,3,5(10), 7,16-pentaen-3 -ol Rf 0,3 7).

Příklad 18

19-Norpregna-2,5(10),16-trien-3-ylmethylether, 18: 19-Norpregna-1,3,5 (10), 16tetraen-3-ylmethylether (1,00 g, 2,27 mmol) v 15 ml bezv. THF + 11,4 g t-butanolu bylo přidáno ke 100 ml bezvodého amoniaku. Dále bylo po malých kouscích přidáno lithium (0,41 g). Po 4 hod míchání byla reakční směs rozložena přidáním 3,8 ml bezvodého methanolu a amoniak byl během 3 hod vyvařen. Bylo přidáno 100 ml vody a směs byla extrahována 2x100 ml etheru. Spojené organické extrakty byly promyty 3x50 ml solanky, sušeny nad MgSO₄ a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 25 ml etheru • · • ··· • · • ·

• · · · · · · • · · · · · • · · ···· · • · · · · • · · · · · · · · · a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po rekrystalizaci vzniklého sirupu z 95 % obj. ethanolu se vyloučily bílé krystaly (586,7 mg, 1,966 mmol, 58 % hmotn ), t.t. 70-72 °C.

Příklad 19

19-Norpregna-4,16-dien-3-on, 19: K roztoku 19-norpregna-2,5( 10), 16-trien-3ylmethyletheru (18, 298,5 mg, 1,000 mmol) v 8 ml acetonu + 2,5 ml methanolu bylo přidáno 2,5 ml 1 N HC1. Po 1 hod míchání byla hydrolýza opatrným přidáním hydrogenuhličitanu sodného zastavena. Když ustalo šumění. Směs byla extrahována 3x10 ml CH2CI2. Spojené organické extrakty byly promyty 10 ml solnky, sušeny síranem sodným a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml CI I2CI2 a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po dvou preperativních TLC (15 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu GF, 1000 μ) vzniklé žluté pryskyřice byla získána žlutá pevná látka (107,4 mg, 0,3776 mmol, 38 % hmotn ); TLC (15 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu; produkt Rf 0,29; pregna-4,16-dien-3-on Rf 0,32).

Příklad 20

19-Norpregna-5(10),16-dien-3-on, 20: K roztoku 19-norpregna-2,5(10),16-trien-3ylmethyletheru (18, 1,38 g, 4,62 mmol) v 65 ml acetonu bylo přidáno 1,60 g (12,7 mmol) dihydrátu kyseliny šťavelové v 23 ml vody. Bylo přidáno 85 ml acetonu a reakční směs byla míchána 8 hod. Hydrolýza byla přerušena přidáním 65 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs byla extrahována 3x100 ml etheru Spojené organické extrakty byly promyty 2x100 ml solanky, sušeny přes noc nad síranem sodným a filtrovány přes skleněnou fritu. Po chromatografií vzniklého sirup (10 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) a rekrystalizaci z hexanu byly získány dva podíly bílých krystalů (775,8 mg, 2,727 mmol, 59 =). První podíl: t.t. 82,5-85 °C, TLC (5 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) Rf 0,13; 19-norpregna-4,16-dien-3-on Rf 0,03.

Příklad 21

9-Norpregna-4,16-dien-10fi-ol-3-on, 21: K roztoku 19-norpregna-5(10),16-dien-3-onu (20, 341,3 mg, 1,200 mmol) v 8,2 ml chloroformu ochlazenému v lázni aceton/suchý led byla přidána kyselina 3-chlorperbenzoová (0,89 g, 5,2 mmol) v 9 ml etheru v průběhu

5,5 min. Reakční směs byla míchána 2 hod a potom nechána v lednici 16 hod. Reakční směs byla nalita do 70 g 5 % hmotn. thiosíranu sodného pentahydrátu a vrstvy byly odděleny. Vodná vrstva byla extrahována 3x15 ml ethylacetátu. Spojené organické fáze byly promyty 15 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 15 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml ethylacetátu a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Ke vzniklé bílé pevné látce byl přidán 5 % hmotn. hydroxid draselný v methanou a směs byla refluxována bez přístupu vlhkosti 1 hod. Směs byla nalita do 140 ml směsi led solanka a extrahována 3krát etherem. Spojené organické extrakty byly promyty 2x100 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 25 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po preparativní TLC (silikagel GF, 1000 μ) jednou za eluce směsí 50 % obj. ethylacetát/hexan a jednou za clucc směsí 10 % obj. ethylacetát/CM^Clo byla získána žlutá pryskyřice (157,7 mg, 0,5249 mmol, 44 % hmotn,); TLC (50 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu); produkt Rf 0,32; pregnenolon Rf 0,40.

Reakční schéma 6. Příprava I9-norpregnanů.

MtO

• · · · · · « · · · · • · · · · • · · · ·

Příklad 22

19-Norpregna-2,5(10)-dien-3-ylmethylether, 22: Roztok 19-norpregna-1,3,5(10)-trien-

3-ylmethyletheru (800 mg, 2,680 mmol) v 12 ml bezv. THF a 8,86 g t-butanolu byl přidán k 90 ml bezv. amoniaku. Poté bylo po kouscích přidáno lithium (0,33 g). Po 3 hod míchání byly přidány 3,0 ml methanolu a amoniak byl vyvařen přes noc. Bylo přidáno 80 ml vody a směs byla extrahována 2x80 ml etheru. Spojené organické extrakty byly promyty 3x40 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 25 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po rekrystalizaci z vodného ethanolu byla získána bílá pevná látka (638,6 mg, 2,125 mmol, 79 % hmotn ), t.t. 84-88 °C. TLC (5 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu), produkt Rf 0,56; výchozí látka Rf 0,49) se stopami méně polární nečistoty (Rf 0,80).

Příklad 23 ]9-Norpregna-5(10)~en~3-on, 23: K roztoku 19-norpregna-2,5(10)-dien-3ylmethyletheru (22, 500,0 mg, 1,664 mmol) v 55 ml acetonu byl přidán dihydrát kyseliny Šťavelové (0,58 g, 4,6 mmol) v 8,3 ml vody. Po 7 hod míchání bylo přidáno 25 ml nasyceného roztoku hdrógenuhličitanu sodného a směs byla extrahována 3x35 ml etheru. Spojené organické extrakty byly promyty 3x35 ml solanky, sušeny nad síranem sodným přes noc a filtrovány přes hrubou fritu. Zbytek byl promyt 25 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po chromatografií (10 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) byla získána nažloutlá látka ve formě sirupu (394,1 mg, 1,3 76 mmol, 83 % hmotn ).

Příklad 24

19-Norpregna-4-en-10p~ol-3-on, 24: K roztoku 19-norpregna-5(10)-en-3-onu (23,

330,3 mg, 1,153 mmol) v 7,9 ml chloroformu ochlazenému v lázni aceton/suchý led byla přidána kyselina 3-chlorperbenzoová (0,86 g, 5,0 mmol) v 8,6 ml etheru v průběhu 6 min. Reakční směs byla míchána 2 hod a potom nechána v lednici 24 hod. Reakční směs byla nalita do 70 g 5 % hmotn. thiosíranu sodného pentahydrátu a vrstvy byly odděleny. Vodná vrstva byla extrahována 3x15 ml ethylacetátu. Spojené organické fáze byly promyty 15 ml nasyceného roztoku hydrogenuhiičitanu sodného, 15 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt i 0 ml • · · · ethylacetátu a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Ke vzniklému bílému sirupu bylo přidáno 55 ml 5 % hmotn. hydroxidu draselného v methanolu a směs byla refluxována bez přístupu vlhkosti 1 hod. Směs byla nalita do 140 ml směsi led solanka a extrahována 3 krát etherem. Spojené organické extrakty byly promyt y 2x100 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a filtrovány přes hrubou fritu. Zbytek byl promyt 25 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po preparativni TLC (silikagel GF, 1000) za eluce směsí 10 % obj. ethylacetát/CH2C12 byla získána žlutá pryskyřice (105,6 mg, 0,3491 mmol, 30 % hmotn ); TLC (50 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu), produkt Rf 0,47; pregnenolon Rf 0,42 se stopami nečistoty Rf 0,39.

0000 00

Reakční schéma 7. Další postup pro přípravu 19-norpregnénů.

«ZMĚNĚNý-UST ♦ 0 · 0 • · ·

0 0 •0 00«·

0 · 00 00

Příklad 25

19-Norpregna-l,3,5(10), 7,17,20-hexaen-3-ylmethylether, 25: K lithiumaluminium hydridu (98,4 mg, 2,59 mmol) a chloridu hlinitému (115,2 mg, 0,8642 mmol) pod argonem bylo opatrně přidáno 8,0 ml bezv. THF a roztoku 19-norpregna·· ···· l,3,5(10),7-tetraen-17P-ol-20-in-3-ylmethylethcru (400 mg, 1,297 mmol) v 8 ml bezv. THF. Reakční směs byla refluxována 24 hod a poté rozložena přidáním 0,77 g Glauberovy soli. Po dalších dvou hodinách míchání byla směs filtrována přes křemelinu a zbytek byl extrahován 3x5 ml ethylacetátu. Po odpaření spojených filtrátů byla získána světle žlutá pryskyřice, která byla čištěna chromatograficky (5 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu), pomocí preparativní TLC (5 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu GF, 1000 μ) a krystalizací z 95 % obj. ethanolu za získání bílých jehel (140,1 mg, 0,4971 mmol, 37 % hmotn.); t.t. 79-96 °C; TLC (10 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) produkt Rf 0,59, eslra-1,3,5(10), 16-tetraen-3-ylmcthylether Rf 0,62.

Příklad 26

19-Norpregna-l,3,5(10),7J6-pen1aen-20-in-3-ylmethylether, 26: K roztoku

19-norpregna-1,3,5( 10),7-tetraen-170-ol-2O-in-3-ylmethyletheru (308,4 mg,

0,9999 mmol) v 2,4-lutidinu (2,0 ml, 17 mmol) byl přidán oxychlorid fosforečný (0,31 g, 2,0 mmol). Po 18 hod míchání byla reakční směs nalita do 35 ml 3,6 N kyseliny sírové a extrahována 3x10 ml CH2C12 Spojené organické extrakty byly promyty 10 ml 3,6 N kyseliny sírové, 10 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, 10 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 5 ml CH2CI2 a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Vzniklá tmavá pryskyřice byla čištěna chromatograficky (5 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) a pomocí preparativní TLC (5 % obj. ethylacetát/hexan), jednou na silikagelu GF (1000 μιη) a jednou na alumiňě GF (1000 μηι), za získání žluté pevné látky (53,4 mg, 0,184 mmol, 18 % hmotn.).

Příklad 27

19^Norpregna-I,3,5(10),7,16~pentaen-20-m~3-ylacetíit, 27\ K roztoku 19-norpregna1,3,5(10),7-tetraen-l 7P-ol-20-in-3-yiacetátu (672,9 mg, 2,000 mmol) v 2,4-lutidinu (4,0 ml, 35 mmol) byl přidán oxychlorid fosforečný (0,63 g, 4,1 mmol). Po 16 hod míchání byla reakční směs nalita do 70 ml 3,6 N kyseliny sírové a extrahována 3x20 ml etheru. Spojené organické extrakty byly promyty 40 ml 3,6 N kyseliny sírové, 40 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, 40 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Vzniklá pěna byla čištěna chromatograficky (10 % obj.

·· ····

···· ·· ethylacetát/hexan na silikagelu) a krystalizována z vodného ethanolu za získání světle žlutých jehel (327,3 mg, 1,028 mmol, 51 % hmotn ), t.t. 89-94 °C. TLC (10 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) produkt Rf 03,1; 19-norpregna-1,3,5( 10), 16-tetraen-3 ylmethylether Rf 0,64; nečistoty Rf 0,27; 0,14; 0,04 a 0,00.

Příklad 28

19-Norpregna-l,3,5(10),7,]6-pentaen-3-ol-20-in, 28: K roztoku 19-norpregna1,3,5(10),7,16-pentaen-20-in-3-ylacetát (27, 318,4 mg, 1,000 mmol) v 50 ml methanolu bylo přidáno 2,4 ml 5 % hmotn. hydroxidu sodného. Po 0,5 hod míchání byly přidány 3 ml 1 N HCl a směs byla odpařena za sníženého tlaku. Po preparativní TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan na alumině GF, 1000 jun) byla získána světle žlutá pryskyřice (91,2 mg, 0,330 mmol, 33 % hmotn.); TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu; produkt Rf 0,36; estra-1,3,5( 10), 16-tetraen-3-ol Rf 0,43).

Reakční schéma 8, Příprava 19-norpregnenů.

o) NCP8A

b)KOH,ů

·« ··*· ethylacetát/hexan na silikagelu) a krystalizována z vodného ethanolu za získání světle žlutých jehel (327,3 mg, 1,028 mmol, 51 % hmotn.), t.t. 89-94 °C. TLC (10 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) produkt Rf 03,1; 19-norpregna-1,3,5(10),16-4 etraen-3ylmethylether Rf 0,64; nečistoty Rf 0,27; 0,14; 0,04 a 0,00.

Příklad 28

19-Norpregna-1,3,5(JO), 7,16-pentaen-3-ol-20-in, 28'. K roztoku 19-norpregna1,3,5(10),7,16-pentaen-20-in-3-ylacetát (27, 318,4 mg, 1,000 mmol) v 50 ml methanolu bylo přidáno 2,4 ml 5 % hmotn. hydroxidu sodného. Po 0,5 hod míchání byly přidány 3 ml 1 N HC1 a směs byla odpařena za sníženého tlaku. Po preparativní TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan na alumině GF, 1000 μιη) byla získána světle žlutá pryskyřice (91,2 mg, 0,330 mmol, 33 % hmotn ); TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu; produkt Rf 0,36; estra-1,3,5( 10), 16-tetraen-3-ol Rf 0,43).

Reakční schéma 8. Příprava 19-norpregnemi.

(C00H>2^/h2°

• · • · · ·· ····

* ·

Příklad 29

19-Norpregna~5(10), 17~dien-3-on, 29: K roztoku 19-norpregna-2,5(10),17-trien-

3-ylmethylelheru (422,2 mg, 1,415 mmol) v 45 ml acetonu byl přidán dihydrát kyseliny šťavelové (0,49 mg, 3,9 mmol) v 7 ml vody. Po 7 hod míchání byla hydrolýza zastavena přidáním 20 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a směs byla extrahována 3x30 ml etheru. Spojené organické extrakty byly promyty 2x30 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a fitrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po chromatografií vzniklého filmu (10 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) byl získán bezbarvý sirup (0,35 mg,

1,2 mmol, 87 % hmotn.).

Příklad 30

19-Norpregna-4,I7-dien-10p~ol-3-oň, 30: K chladnému (aceton/suchý led) roztoku 19-norpregna-5(10),17-dien-3-onu (29, 0,35 g, 1,2 mmol) byla přidána kyselina

3-chlorperbenzoová (0,89 g, 5,2 mmol) v 9 ml etheru v průběhu 6 min. Reakční směs byla míchána 2 hod a potom nechána v lednici 18 hod. Reakční směs byla nalita do 70 g 5 % hmotn. thiosíranu sodného pentahydrátu a vrstvy byly odděleny. Vodná vrstva byla extrahována 3x15 ml ethylacetátu. Spojené organické fáze byly promyty 15 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 15 ml solanky, sušeny had síranem hořečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml ethylacetátu a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Ke vzniklé nažloutlé pevné látce bylo přidáno 55 ml 5 % hmotn. hydroxidu draselného v methanolu a směs byla refluxována bez přístupu vlhkosti 1 hod. Směs byla nalita do 140 ml ledové vody a extrahována 140 ml etheru. Organický extrakt byl promyt 2x140 ml solanky, sušen nad síranem hořečnatým a filtrován přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po preparativní TLC (50 % obj. ethylacetát/hexan, silikagel GF, 1000 pm) byla získána žlutá pěna (84,6 mg, 0,282 mmol, 23 % hmotn.); TLC (50 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu); produkt Rf 0,26; dehydroepiandrosteron Rf 0,36.

♦ *

Reakční schéma 9. Příprava 19-norpregna-l,3,5(10),16-tetraen-3-ylmethyletheru.

EtjB/PdU)

Příklad 31

19-Norpregna-1,3,5(10,16-tetraen-3-ol, 31: Ke směsi 17-jodestra-1,3,5(10),16-tetraen-

3-olu (1,14 g, 3,00 mmol) a [1,1' -bis(difenylfosfino)fenOcen]palladium(l I)chloridu. Cl I2CI2 („Pd(Il) katalyzátor“,

61,2 mg, 74,9 prnol) v '1'111·' (12 ml) pod argonem byl přidán triethylboran v THF (1,0 M,

3,3 ml, 3,3 mmol) a 15 % hmotn. hydroxid sodný (3,0 ml) a reakční směs byla refluxována 24 hed: Po ochlazení bylo rozpouštědlo odstraněno za sníženého tlaku, byla přidána 1 N HC1 (12 ml) a vzniklá suspenze byla extrahována 3x10 ml CH2C12 Spojené organické extrakty byly promyty 10 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 10 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 5 ml CH2C12 a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po chromatografii (15 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) a krystalizaci z vodného methanolu byl získán bílý prášek (606,2 mg, 2,146 mmol,72 % hmotn ), t.t. 124-125 °C, TLC (15 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu, Rf 0,31, výchozí látka Rf 0,27).

·· ·♦·· ·· ·· ·· ·· ·· · ···· ♦ · · · ·· ·· ····· • ··· · · · to to to to · ······ ··· ···· ·· ·· ··......

Příklad 32

19-Nopregna-l,3,5(10),16-tetraen-3-ylmethylether, 32 z 19-nopregna1,3,5(10), 16-tetraen-3-olu: K roztoku 19-nopregna-l,3,5(10),16-tetraen-3-olu (31, 500,0 mg, 1,770 mmol) v acetonu (25 ml) byl přidán uhličitan draselný (0,37 mg,

2,7 mmol) a suspenze byla zahřívána k varu bez přístupu vlhkosti. Najednou byl přidán methylsulfát (0,42 ml, 4,4 mmol) a reakční směs byla reíluxována za míchání 24 hod. Po ochlazení bylo přidáno 35 ml 5 % hmotn. hydroxidu sodného a směs byla extrahována 3x35 ml etheru.Spojené organické extrakty byly promyty 35 ml solanky, sušeny nad síranem hořečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po rekryslalizaci z vodného ethanolu byly získány bílé jehly (476,3 mg, 1,607 mmol, 91 % hmotn ), t.t. 97-97,5 °C. TLC (1 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu), produkt Rf 0,1 se stopami polární nečistoty (Rf 0,00). Teplota tání a TLC ukázaly, že tato látka je identická s látkou připravenou níže.

Příklad 33

19-Norpregna-l,3,5( 10), 16-tetraen-3-ylmethylether, 33, z 17-jod-19-norpregna1,3,5(10),16-telraen-3-ylmethyleíheru:

než byl nalezen uspokojivý způsob pro zavádění alkylové skupiny na C-17 jádra estrenu bylo vyzkoušeno několik možných přístupů. Při prvním pokusu se ethylbromid uvolněný při Shapirově eliminaci (R. Chamberfin, E. L. Liotta a F. T. Bond, Org. Syn., 1982, 61: 141-146) z estra-l,3,5(10)-trien-17-tosylhydrazonu absorbuje na 17-lithioestren za vzniku 17-H sloučeniny. Pravděpodobně sterické důvody zabraňují alkylaci na pozici 17 a umožňují uvolnění vodíku z ethylbromidu. Náhrada jodu v 17-joďestra-l,3,5(10),16tetraen-3-olu alkylkuprátem (E. J. Corey a G. H. Posner, J, Am. Chem. Soc., 1968, 90: 5615-5616) podobně poskytne 17-H produkt pomocí transmetalace a následné protonolýzy. Niklem(ll) katalyzovaná náhrada jodu za použití ethyl Grignardova činidla (M. Kumada, K. Tamao a K. Sumitani, Org. Syn., 1978, 58: 127-133) byla rovněž neúspěšná.

Výměna jodu byla překvapivě úspěšná za použití palladium(ll) katalyzátoru. Bylo zjištěno (G. A. Potter, S. E. Barrie, M. Jarman aM. G. Rowlands, J. Med. Chem., 1995, •· ·♦··

38: 2463-2471), že alkylboronáty mohou být použity při výměně triflátu u 17-enol triflálů Nicméně, přenos alkylových skupin byl nepravděpodobný, což bylo dáno sklonem al kylpall ad i o vých meziproduktů k β-eliminaci. Při použití ethylboranu jako činidla přenášejícího alkylovou skupinu byl jod nahrazen u různých 17-jodestrenů za vzniku požadvaných 17-alkylestrenů (viz. schémata 9 a 10). Ke směsi 17-jodJ9-norpregna-l,3,5(10),16-tetraen-3-ylmethyletheru (394,3 mg, 1,000 mmol), Pd(Il) katalyzátoru (20,4 mg, 25,0 mmol), 3,0 N hydroxidu draselného (1,0 ml) a THF pod argonem byl přidán triethylboran (1,0 M, 1,1 ml, 1,1 mmol). Po 24 hod varu a postupném ochlazení byla reakční směs extrahována 10 ml benzenu Organický extrakt byl promyt 10 ml solanky, sušen síranem hořečnatým a filtrován přes křemelinu Zbytek byl promyt 2 ml benzenu a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po rekrystalizaci z 95 % obj . ethanolu s karborafinem byly získány hnědé jehly (219,4 mg, 0,7401 mmol, 74 % hmotn.). t.t. 97 °C. TLC (10 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu), produkt Rf 0,62; výchozí látka Rf 0,55; nečistoty Rf 0,00.

Reakční sehéma lO. /-'/•//vzziz/ /9-7?3,5(10), 7,I6-pen1aenu.

.··. ···:«

Reakční schéma 10. Příprava 19-norpregria-l ,3,5(10),7,16-pentaenů.

· ·

0000 «·

ZMĚNĚNÝ. LIST’ • · 0 0 » · 0 0 • 0 0 «0 »4«· • ·· * « · · • 0 «0 00

Η^/Ε^Μ

l₂/H₃N

Ef₃8/Pd(II)

Příklad 34

Estra-1,3,5(10), 7-tetraen-17-hydrazon, 33: K equilinu (939,4 mg, 3,500 mmol) suspendovanému v 6,6 ml abs. ethanolu a 1,6 ml (11 mmol) triethylaminu bylo přidáno

3,1 ml (99 mmol) hydrazinu a směs byla refluxována bez přístupu vlhkosti 1,5 hod. Reakční směs byla poté přikapána do 28 ml vody a vzniklá suspenze byla umístěna do lednice, kde zůstala přes noc. Po filtraci přes hrubou fritu a sušení za sníženého tlaku nad P2O5 byly získány bílé krystaly (1,0213 g, 100 % hmotn ), t.t. 253-255 °C.

• ·

Příklad 35

17-jodestra-l,3,5(10),7,16-pentaen-3-ol, 34: Surový estra-l,3,5(10),7-tetraen-l7hydrazon (1,0058 g, 3,500 mmol) suspendovaný v 21 ml bezv. THF a 4,4 ml (32,0 mol) triethylaminu pod argonem byl ochlazen ve vodní lázni a byl přidáván jod (2,10 g,

16,5 mmol) v 21 ml bezv. THF dokud se nepřestala měnit a barva a neustal vývoj plynu (zbývající roztok jodu: 5,5 ml). Po dalších 20 min míchání byla reakční směs odpařena za sníženého tlaku a zbytek byl suspendován v 90 ml etheru. Suspenze byla promyta 35 ml 1 N HCl, 35 g 5 % hmotn. pcntahydrátu thiosíranu sodného, 35 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, 35 ml solanky, sušena nad síranem hořečnatým a filtrována přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml etheru a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po chromatografií (20 % obj. ethylacetát/hexan na silikagelu) a následné rekrystalizaci byla získána žlutá pěna (953,8 mg, 2,522 mmol, 72 % hmotn ).

Příklad 36

19-Norpregna-1,3,5(10), 7,16-pentaen-3-ol, 35: Ke směsi 17-jodcstra-1,3,5(10),7,16pentaen-3-olu (953,8 mg, 2,522 mmol) a Pd(II) katalyzátoru (51,5 mg, 63,1 pmol) suspendované v 10 ml THF pod argonem bylo přidáno 2,8 ml (2,8 mmol) 1 M triethylboranu, 2,5 ml 15 % hmotn. hydroxidu sodného a směs byla zahřívána k varu. Po 24 hod, během kterých se vyvařil THF, byl ochlazený zbytek suspendován v 10 ml 1 N HCl a extrahován 3x10 ml CH₂C1₂. Spojené organické extrakty byly promyty 10 ml nasyceného hydrogenuhličitanu sodného, sušeny nad síranem horečnatým a filtrovány přes křemelinu. Zbytek byl promyt 10 ml CH₂C1₂ a spojené filtráty byly odpařeny za sníženého tlaku. Po preparativní TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan, silikagel GF, 1000 pm) byla získána žlutá pryskyřice (54,4 mg, 0,194 mmol, 7,7 % hmotn ); TLC (20 % obj. ethylacetát/hexan, silikagel); Rf 0,39; 17-jodestra-l,3,5(10),16-tetraen-3-ol Rf0,37.

• · • · • · ·

Příklad 37

ElektrofyziGlogická studie:

Tato elektrofyziologická studie byla prováděna s klinicky normálními lidskými dobrovolníky obou pohlaví ve věku 19 až 29 let. Nebyla použita žádná anestetika a u žen bylo vyloučeno, že jsou gravidní.

Stimulační a záznamový systém se skládal z „multifunkčni minisondy“ popsané v MontiBloch, L. a Grosser, B. 1 (1991) „Účinek domnělých feromonů na elektrickou aktivitu vomeronazálního orgánu a čichové výstelky“, J Steroid Biochem. Molec. Biol., 39:573582. Měrná elektroda je 0,3 mm stříbrná kulička připojená k malému (0,1 mm) stříbrnému drátu izolovanému teflonem. Povrch elektrody byl nejprve zpracován tak, aby se vytvořilo rozhraní z chloridu stříbrného a poté byl obalen želatinou. Elektroda byla umístěna na malé teflonové hadičce (průměr 5 mm) tak, že konec elektrody vyčníval asi 2 mm. Teflonová hadička byla 10 cm dlouhá a tvořila koncový nástavec multikanálového zařízení, které produkovalo nepřetržitý proud vzduchu generující přetržité chemosenzorické pulsy. Proud vzduchu nejprve vstupoval do malé komory a byl probubláván přes roztok obsahující buď vomeroferin nebo přes čichovou látku v rozpouštědle nebo byl probubláván pres samotné rozpouštědlo. Pro rychlé přesměrování proudu vzduchu z komory do trubičky, která komoru obchází, se používal solenoid. Takto se tvořily přetržité pulsy stimulantu v proudu vzduchu. Zařízení elektroda-hadice obklopovala druhá vnější teflonová trubice o průměru 2 mm a její konec byl spojen s dýchacím přístrojem, který zajišťoval nepřetržité sání 3 ml/s. Toto soustředné uspořádání vnější sací trubice dovolovalo, aby byly emitované chemosenzorové pulsy lokalizovány v místě nazvaném „minipole“ (průměr asi 1 mm) a zabraňovalo rozptylu látek buď do prostoru vně místa stimulace nebo do dýchacího systému. Celé stimulační a záznamové zařízení bylo umístěno buď do neurosensorového epitelu s VNo nebo na povrchu čichového nebo dýchacího epitelu.

Elektrovomeronasogram (EVG): Měření se provádělo v tiché místnosti na ležícím pacientovi; multifunkčni minizařízení se nejdříve za použití nosního refraktoru umístilo do nosní dutiny. Referenční a zemnící elektrody se skládaly ze stříbrných destiček (8 mm), které byly umístěny na čelní kosti mezi nadobočnicovými oblouky.

• · • · ·· φ φφφφ φφφφ φφ φφ φ φφφφ φ φφφ φ φ φ φφφφ φ • · · · φ φ φφφ φφφφ φφ φφ φφφφ φφ φφ

Vstup do VNO nebo do vomeronasální dutiny byl proveden rozšířením nosní štěrbiny a předsíně dutiny nosní . Pro zavedení konce teflonové hadičky se používala binokulární lupa s halogenovým osvětlením, která zvětšuje 6x a záznamová elektroda se zapojila do VNO, když byla stabilizována v hloubce asi 1 mm ve vomeronasální štěrbině. Optimální umístění záznamové elektrody se určilo po testování přiměřené depolarizace v závislosti na testované látce.

Elektrické signály ze záznamové elektrody byly zachycovány do zesilovače, poté se digitalizovaly, zpracovaly pomocí počítače a ukládaly. Měřila se pík-pík amplituda signálů a plocha pod depolarizační vlnou se integrovala a zároveň se monitoroval signál jak na monitoru počítače, tak na digitálním osciloskopu. Artefakty vytvořené dýchacími pohyby se odstranily pomocí výcviku pacientů k dýchání ústy pomocí záklopky měkkého patra. Vzorky vomeroferinů v koncentracích 25-800 FMOL byly přiváděny v nepřetržitém proudu vzduchu po dobu 300 milisekund až 1 sekundy. Každou sérii krátkých testovacích pulsů odděloval interval 3 až 5 min. Všechny součásti zařízení pro testování byly vyrobeny z teflonu, skla nebo nerezové oceli a byly před použitím pečlivě vyčištěny a sterilizovány.Učinnost byla zapisována pomocí standardních elektroencefalografických (EEG) elektrod umístěných v pozicích Cz-Al a Tz-Al podle mezinárodního systému 10120; zemnící elektroda byla umístěna na soscovitém výběžku kosti spánkové. Teplota pokožky (ST) byla zaznamenávána pomocí malé (1,0 mm) termistorové sondy umístěné na pravém ušním lalůčku. Frekvence dýchám (RF) byla měřena pomocí nastavitelného přímého měřidla umístěného pod hrudníkem. Všechny elektrické signály byly DC zesilovány, digitalizovány (MP-100, Biopac systems) a nepřetržitě monitorovány za použití počítače.

Statistická analýza: Byly měřeny a statisticky analyzovány EVG, změny pík-pík a změny frekvence dalších parametrů. Význam výsledků byl určen buď za použití párových t-testů nebo analýzou odchylky (ANO V A).

Reflexní účinky vomeroferinů: Pomocí této studie byla zjišťována odezva centrálního nervového systému (CNS) na podráždění VNO vomeroferinem. Při testování se někdy objevila různá odezva na vomeronefriny v závislosti na pohlaví subjektů.

• · 4 ·

4 · ···· 4 4 44

4 4 4 ····· • 4 4 4 · 4 4 ····4

4 4 4 4 4··· ···· ·· ·· ·4·4 ····

Během aplikace vzdušných pulsů (300 ms až 1 s) obsahujících 200 FMOL vomeroncfrinu na VNO byla podle Cz a Tz u mužů a žen zaznamenána kortikální aktivita. Předběžně bylo zjištěno, že EVG nesouvisí s receptorem zprostředkujícím vnímání bolesti, když se do dýchacího epitelu nosní přepážky aplikuje lokální anestetikum (2 % hmotn. lidokain), které neblokuje ani nesnižuje EVG (Monti-Bloch, L. a Grosser, B 1. (1991) „Účinek domnělých feromonů na elektrickou aktivitu vomeronazálního orgánu a čichové výstelky“, J. Steroid Biochem Molec. Biol., 39:573-582 ). Subjekty také nevykazovaly vnímání bolesti v souvislosti s procedurou dráždění.

Následující studie porovnává účinky 23 vomeroferinů se strukturou 19-norpregnanů a plačeba (propylenglykol) na autonomním účinku a EEG. Na této studii se podílelo 12 subjektů (6 mužů a 6 žen) ve věku 19 až 29 let. Všechny sloučeniny byly podávány do vomeronasálního orgánu (VNO) vzduchem fouknutím trvajícím 5 s. Pro tento účel byla použita elektroda v podobě minisondy (popsaná dříve), která umožňovala lokální podráždění a současně záznam elektrovomerogramu (EVG) orgánu. Mezi parametry záznamu patří: elektrodermální aktivita (EDA), frekvence dýchání (RF), elektrokardiogram (CF), elektromyogram (EMG), tělesná teplota (BT), a EEG z CzAl a T₃A}. Autonomní účinek, EEG a EVG byly zaznamenány na povrchu elektrod. Žádné z použitých technik nejsou nebezpečné. Procedura byla provedena ve dvou sériích, každá trvala 1 hod. Elektrické záznamy byly zesíleny, digitalizovány a monitorovány a shromažďovány pomocí počítače. Testování a analýzy byly provedeny nezávisle.

Údaje o testování na ženách jsou uvedeny na obr. 3-24 a údaje o testování na mužích jsou uvedeny na obr. 25-46.

Výsledky jsou shrnuty v následujících tabulkách, které uvádějí souhrnný účinek každého vomeronferinu. Byl zaznamenán každý výsledek od 0 do 5 a byla porovnána relativní aktivita sloučenin vzájemně, přičemž všechny sloučeniny vykazovaly nějaký účinek.

Tyto výsledky ukazují, že účinek vomeroferinů na autonomní aktivitu a EEG je významně jiný, než účinek placeba. Výsledky také ukázaly, že účinky některých sloučenin se u různých pohlaví neliší.

• · · · • ·

Souhrn účinku vonierofcrinů na bázi 19-norpregnanů na EEG a autonomní aktivitu u žen

EVO HM RF CF EMG ΒΓ α-CA pCA Provedení Výsledek

Methylethcr ♦íoo

-M>

♦10

-13	10	-35	EDA*Jtř-,CF-3·
-23	♦3	33

W +30

Acetát «««* -oia a/ft c» wn -»3 £2/<7 *25 E2//r ca £1/M cX> aifi +43 εα/ft +40

Methylether wn +20

Acetát

ga/rt	+1
gl/fl	+20
gsrfrt	0
ec/r»	*23
	+25
e^frx	+20
	+30
EHjf9	+35
ga/Pi	+35

-»	4	+5	4
♦70	4	4	0
*130	0	0	0
cn	-23	-25	0
-10	0	+10	4
*50	+5	4	0
*30	0	0	0
+50	0	4	0
*110	•5	0	0
♦95	+3	♦5	0
+43	-23	4	0
-10	0	0	4
-10	0	+5	•25
-w	0	0	0
-10	-25	*23	4
+110	.0	0	0
«20	-25	4	0
+110	+23	0	0
+100	0	4	0
+1M	♦23	0	0

0	♦23	-23	EDA-JEMO-	3
0	4	4	EDA+KFCF-	4
*4	0	-13	EDA+.BT+3	4
*3	-10	40	EDA+	2
0	+10	+10	EDA-,CF+EMG-^o+	5
*10	-15	30	EOA+jrr+	3
0	-10	-40	0	0
0	-15	40	EDA+.CF-	3
0	4	-K>	0	0
0	0	-15	EDA. RF+.CF	4
0	4	-20	EDA+.CE-	3
0	0	-40	EDA-.EMG-3	4
-1	0	-23	0	0
0	0	40	0	0
3	+10	-20	£MG-JBT-.«+3·	5
+10	♦7	-20	EDA+jT+^a+3+	5
-23	♦7	4$	CF-J3T-,a*.5-	5
0	+30	-10	EDA+.a*3-	4
4	-10	-25	EDA+.CF-JJT-	4
-1	-10	-40	0	0

·· ···· ·· ·· ·· ·· • · · · · · · ···· ·· · · ♦ · · ·· • ··· · · * ···· · ······ ··· • · · · · · ·· · · · · · · ··

Souhrn účinků vomeroferinů na bázi 19-norpregnanů na EEG a autonomní aktivitu u mužů

Provedení Výsledek

	EVG	EDA	RF	CF	EMG	BT	a-CA	PCA
Methylcther	♦«5	0	4	43	•13	♦23	-10	EDA+X7-	3M
		♦20	-20	0	♦23	-15	4	-7	♦40	ET-	2
	syn	♦15	40	0	♦15	0	43	43	40	0	0
		+1»	♦70	0	0	0	♦7	-15	30	EM+JM-	4
Acetát			♦00	o	0	0	♦13	-10	40	EDA·	2
«//»—
	iW	♦i5	♦50	0	•23	0	4	-10	40	EDAsBT-J-	4
		♦20	4o	0	♦15	43	-1	0	«40	0	0
	ei/r	♦30	♦120	0	♦23	0	0	-10	40	0	0
	Ki/fX	♦10	♦90	0	0	0	+10	4	40	EDA+JT+3-	4
		♦12	♦ 100	0	0	0	43	0	-20	EDA»	2
	Xlf*	♦35	♦120	43	0	0	+13	23	40	EDA·	2
	sv*	♦30	♦120	0	O	0	-7	40	40	EDA+ET-XEBG^	4
Methylether		♦110	4	0	0	0	0	40	EDA+JtF·	3
	FT3/*	♦20	-20	0	0	44	0	4	-15	0	0
	o/*	♦1»	-20	+23	0	0	43	4	.15	0	0
	es/h	♦10	-20	0 '	43	•15	0	4	.10	0	0
Acetát	*07	♦2-5	40	0	43	-15	-23	4	•15	0	0
		♦30	♦100	0	0	0	0	-10	40	0	0
	ta/n.	♦15	♦30	0	0	0	+23	4	45	0	0
	W*	♦30	♦70	43	0	0	4	10	40	EDA+JBT-XEEGa)	-4
	ια/η	♦25	♦120	0	0	0	+23	-10	45	ΞΜ+	2
		♦30	♦130	0	0	0	+23	4	40	EDA·	2

Průmyslová využitelnost

Předkládaný vynález se týká sloučenin, s výhodou 19-norpregnanových steroidů a podobných sloučenin a způsobů použití těchto sloučenin, jako jsou lidské vomeroferiny, které ovlivňují funkci hypotalamu, a tak působí změny chování a fyziologie, např. snížení úzkosti.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY fy 3<?ΛΓ~^

1. Farmaceutický prostředek vyznačující se tím, zeje vhodný pro nosní podávám pacientům a že obsahuje 19-norpregnanový steroid obecného vzorce I (I), kde Pi je oxoskupina, a- nebo β-hydroxyskupina, a- nebo β-acetoxyskupina, a- nebo β-propionoxyskupina, nižší a- nebo β-alkoxyskupina, nižší a- nebo β-acyloxyskupina nebo a-nebo β-benzyloxyskupina;

a, b, c, d, e, f, g, h, i, j, m, n jsou alternativní polohy pro výhodné dvojné vazby a „k“ buď chybí nebo s ,j“ tvoří trojnou vazbu;

P₂ je hydroxyskupina, vodík, nižší alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo P₂chybí;

Pije oxoskupina, vodík, hydroxyskupina, nižší alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo halogen;

P₄ je methyl nebo ethyl;

P₅ je vodík, methyl nebo halogen;

P<, je vodík, methyl;

R' a R jsou nezávisle vodík nebo halogen, nebo chybí;

a farmaceuticky vhodný nosič.

• · • · · · · · · · · · · • · · · · · · 4· • · · · · · « · · · · · ······ · · · ' . ···· ·· ·· ···· ·· ·· 64
2. Sloučenina podle nároku 1, kde „a“, „e“ a „d“ jsou dvojné vazby.
3. Sloučenina podle nároku 2, kde „h“ je dvojná vazba.
4. Sloučenina podle nároku 2, kde „g“ je dvojná vazba.
5. Sloučenina podle nároku 4, kde „n“ je dvojná vazba.
6. Sloučenina podle nároku 1, kde „d“ je dvojná vazba.
7. Sloučenina podle nároku 6, kde „b“ je dvojná vazba.
8. Sloučenina podle nároku 1, kde „č“je dvojná vazba.
9. Sloučenina podle nároku 8, kde „f“ je dvojná vazba.
10. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, vyznačující s e tím, zeje uvedený steroid rozpuštěn v uvedeném nosiči.
11. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároku 1 až 9, vyznačující se tím, že uvedený prostředek je v tekuté formě.
12. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, vyznačující se t í m , že dále obsahuje farmaceuticky vhodný masťový základ.
13. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, vyznačující se tím, že neobsahuje více než jeden uvedený steroid.
14. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 9, vyznačující se tím, že obsahuje více než jeden uvedený steroid
15. Způsob substituce funkce hypotalamu v y z n a č u j í c i se t i m , že zahrnuje nanesení 19-nor-pregnanu obecného vzorce 1 • · · · · · • · · · · · ···· · • · · · · · · ·· ···· ·· · ·

R” kde Pi je oxoskupina, a- nebo β-hydroxyskupina, oc- nebo β-acetoxyskupina, ά- nebo β-propionoxyskupina, nižší a- nebo β-alkoxyskupina, nižší a- nebo β-acyloxyskupina nebo a-nebo β-benzyloxyskupina;

a, b, c, d, e, f, g, h, i, j, m, n jsou alternativní polohy pro výhodné dvojně vazby a „k“ buď chybí nebo s ,j“ tvoří trojnou vazbu;

P₂ je hydroxyskupina, vodík, nižší alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo P,₂chybí;

P₃ je oxoskupina, vodík, hydroxyskupina, nižší alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo halogen;

P₄ je methyl nebo ethyl;

P₅ je vodík, methyl nebo halogen;

P₆ je vodík, methyl;

R' a R jsou nezávisle vodík nebo halogen, nebo chybí;

na svrchní buňky nosního neuroepitelu, které jsou částí tkáně jiné než čichového epitelu; a podávání uvedeného 19-nor-pregnánového derivátu do nosní oblasti pacienta tak, že se uvedený 19-nor-pregnanový derivát specificky váže na uvedené receptory, čehož výsledkem je substituce funkce hypotalamu.
16. Způsob substituce autonomní funkce pacienta v yznačující se tím, že zahrnuje nanesení 19-nor-pregnanu obecného vzorce I (1) kde Pi je oxoskupina, a- nebo β-hydroxyskupina, a- nebo β-acetoxyskupina, a- nebo β-propionoxyskupina, nižší a- nebo β-alkoxyskupina, nižší a- nebo β-acyloxyskupina nebo a-nebo β-benzyloxyskupina;

a, b, c, d, e, f, g, h, i, j, m, n jsou alternativní polohy pro výhodné dvojné vazby a „k“ buď chybí nebo s, j“ tvoří trojnou vazbu;

P₂ je hydroxyskupina, vodík, nižší alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku, nebo P₂chybí;

Pa je oxoskupina, vodík, hydroxyskupina, nižší alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo halogen;

P₄ je methyl nebo ethyl;

P₃ je vodík, methyl nebo halogen;

P₆ je vodík, methyl;

R' a R” jšou nezávisle vodík nebo halogen, nebo chybí;

na svrchní buňky nosního neuroepitelu, které jsou částí tkáně jiné než čichového epitelu;

a podávání uvedeného 19-nor-pregnanového derivátu do nosní oblasti pacienta tak, že se uvedený 19-nor-pregnanový derivát specificky váže na uvedené receptory, čehož výsledkem je substituce funkce hypotalamu.

·· ···· • ·
17. Způsob podle nároku 16 v y z n ač u j i c í s e tím, žeseuvedené buňky ňeuroepitelu nachází ve vomeronasálním (týkající se nosní kosti radličné)

9 99 9 ·· ·· ·· • · · · · · ·· · • · · · ·· · · • · · · · · ·« · 99

9 9 9 9 9 9 99

99 99 9999 9999 orgánu uvedeného pacientu.
18. Způsob podle nároku 17 jsou dvojné vazby.

>

že „á“, „e“ a„d“
19. Způsob podle nároku 18 vazba.
20. Způsob podle nároku 18 vazba.
21. Způsob podle nároku 20 vazba.

že „g“ je dvojná
22. Způsob podle nároku 17 vazba.

že „d“ je dvojná
23. Způsob podle nároku 22 vazba.

·?

že „b“ je dvojná
24. Způsob podle nároku 12 vazba.
25. Způsob podle nároku 24 vazba.
26. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 15 až 25 vyznačující se tím, že podávané množství uvedeného 19-nor-pregnanového derivátu je 100 pg až 100 pg.
27. Způsob podle nároku 15vyznaČující se tím, že podávané množství uvedeného 19-nor-pregnanového derivátu je 1 ng až 10 pg.
28. Způsob podle nároku 27 vyznačující se tím , že podávané množství uvedeného 19-nor-pregnanového derivátu je 10 ng až 1 pg.

• · · · · · ^MěNĚMý-Lisr
29. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 15až 25 vyznačující se t í m , že dále zahrnuje přípravu farmaceutického prostředku obsahujícího uvedený pregnanový derivát rozpuštěný ve farmaceuticky vhodném nosiči.
30. Způsob podle nároku 29 vyzná farmaceutický prostředek je mast.

jí že uvedený
31. Způsob podle nároku 29 vyzná farmaceutický prostředek je tekutina.

jí že uvedený
32. Způsob podle nároku 29 v y z n a farmaceutický prostředek je aerosol.

jí že uvedený
33. Způsob podle kteréhokoliv z nároků 15 až 25 tím, že se podává více než jeden pregnanový steroid.

c i se
34. 19-nor-pregnanový steroid obecného vzorce I kde Pi je oxoskupina, a- nebo β-hydroxyskupina, a- nebo β-acetoxyskupina, a- nebo β-propionoxyskupina, nižší a- nebo β-alkoxyskupina, nižší a- nebo β-acýloxyskupina nebo a-nebo β-benzyloxyskupina;

a, b, c, d, e, f, g, h, i, j, m, n jsou alternativní polohy pro výhodné dvojné vazby a „k“ buď chybí nebo s ,j“ tvoří trojnou vazbu;

Pz je hydroxyskupina, vodík, nižší alkoxyskupina obsahující I až 6 atomů uhlíku, nebo P₂chybí;

• · ··· · ·· ·· ·· ·· • · · · · · · · · · · • · · · · · · · · • ··· · · « ···· · ······ « · ·

69 ...... ..........

P3 je oxoskupina, vodík, hydroxyskupina, nižší alkoxyskupina obsahující 1 až 6 atomů uhlíku nebo halogen;

P₄ je methyl nebo ethyl;

P₅ je vodík, methyl nebo halogen;

P₆ je vodík, methyl;

R' a R jsou nezávisle vodík nebo halogen, nebo chybí;

s tím, že pokud P3 a Pe jsou vodík, „f“, „n“, „h“, a „g“ chybí, P4 je methyl aR'aR nejsou halogen, pak:

i) pokud P] je oxoskupina, „c“ je přítomna a P₂ a P₅ jsou vodík hydrogen, pak buď ,j“ nebo „i“ nemůže být přítomna samostatně, nebo „m“ a ,j“ nemůžou být přítomny spolu, nebo ,j“ a „i“ nemůžou být přítomny spolu, nebo „m“, ,j“ a „k“ nemůžou být přítomny spolu a alespoň jedna z „i“, ,j“, „k“ nebo „m“ musí být přítomna;

ii) pokud P.i je OH a „a“, „d“ a „e“ jsou přítomny a P5 je vodík, pak žádná z ,j“, „i“ a ,,m“ nemůže být přítomna sama, nebo „i“ a, j“ nemohou být přítomny spolu nebo „m“, ,j“ a „k“ nemohou být přítomny spolu a alespoň jedna z „i“,, j“, „k“ a „m“ musí být přítomna;

iii) pokud P] je β-ΟΗ, „c“ je přítomna a P₂ a P_s jsou vodík, pak „i“ a J“ nemůžou být přítomny spolu, nebo „m“, ,j“ a „k“ nemohou být přítomny spolu;

iv) pokud P je OMe, „d“ a „b“ jsou přítomny, pak J“ nebo „i“ nemohou být přítomny samostatně;

v) pokud P] je oxoskupina, „d“ je přítomna a P₅ je vodík, „i“ nemůže být přítomna samostatně nebo ,j“ a „k“ nemůžou být přítomny samostatně.
35. Způsob alkylace steroidů majícího 17-halogen-16-en D kruh vyznačující s e tím, že zahrnuje krok smíchání uvedeného steroidů s trialkylboranem v přítomnosti katalytického množství Pd(II) za vzniku ) 7-alkyl-16-en steroidního produktu.

• · · ·
36. Způsob podle nároku 35 v y z n a č u j í c í steroid zahrnuje 17-jod-16-en D-kruh.

4 44 4444 • 4 4 44

4 4 44

44 44··♦

4 4 44

44 444444 * 4 • 44

4 4

4 4

·) že uvedený
37. Způsob podle nároku 35 v y z n a č u j í c í alkylová skupina obsahuje 1 až 6 atomů uhlíku.
38. Způsob podle nároku 37 vyznačuj ící alkylová skupina je ethyl.

že uvedená že uvedená
39. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-4,20-dien-3 p-ol.
40. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-1,3,5( 10), 16,20-pentacn-3-ol.
41. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-5-(10),20-dien-3-on.
42. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-5(10),20-dien-3-ol.
43. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-4,20-dien-10p-ol-3-on.
44. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-4,9(10),20-trien-3-on.
45. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-1,3,5(10), 16-tetraen-6-one20-in-3-ylacetát.
46. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-1,3,5(10), 16-tetraen-3,6p-diol20-in.
47. Sloučenina podle nároku 34, kterou je norpregna-l,3,5(10),17-tetraene-3-ol.
48. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-l,3,5(10),6,17-pentaen-3-ol.
49. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-1,3,5(10),6,8,17-hexaen-3-ol
50. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-l ,3,5(10),7,16-pentaen-3-ol.
51. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-2,5(10),16-trien-3-ylmethylether.
52. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-4,16-dien-3-on.

·· ♦♦♦·
53. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-5(10), 16-dien-3-on.
54. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norprcgna-4,16-dien-10|l-ol-3-on.
55. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna~2-5(10)-dien-3-yl-methylether.
56. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-5(10)-en-3-on.
57. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-4-en-10P-ol-3-on.
58. Sloučenina podle nároku 34, kterou je 19-norpregna-4,17-dien-10p-ol-3-on.