CZ302033B6

CZ302033B6 - Derivát chinolinkarboxylové kyseliny a jeho soli, farmaceutický prostredek je obsahující, jejich použití

Info

Publication number: CZ302033B6
Application number: CZ20014598A
Authority: CZ
Inventors: Yazaki@Akira; Niino@Yoshiko; Kuramoto@Yasuhiro; Hirao@Yuzo; Ohshita@Yoshihiro; Hayashi@Norihiro; Amano@Hirotaka
Original assignee: Wakunaga Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 1999-07-01
Filing date: 2000-06-22
Publication date: 2010-09-08
Also published as: KR100628414B1; SK19162001A3; DE60004846T2; NO20016378D0; WO2001002390A1; ZA200110357B; AU766014B2; EP1193266A4; EP1193266B1; HK1047103A1; PT1193266E; ES2206257T3; US6858625B1; CN1157389C; CZ20014598A3; IL147043A; JP3477465B2; ATE248162T1; IL147043A0; DK1193266T3

Abstract

1-(6-amino-3,5-difluorpyridin-2-yl)-8-brom-7-(3-ethylaminoazetidin-1-yl)-6-fluor-4-oxo-1,4-dihydrochinolin-3-karboxylová kyselina nebo její sul a farmaceutický prostredek obsahující uvedenou slouceninu. Tato sloucenina má charakteristické rysy, kterými, když se aplikuje orálne, jsou extrémne vysoký polocas rozpadu v krvi a biologická využitelnost, pricemž si uchovává vlastnosti, jako jsou extrémne vysoké antibakteriální úcinky a nízká toxicita. Tato sloucenina se muže použít v širokém rozsahu pri prevenci a terapii ruzných infekcních onemocneních u cloveka a zvírat.

Description

Oblast techniky

Tento vynález se týká derivátů chinolinkarboxylové kyseliny a jejich solí, které mají výborné antimikrobiální účinky a mohou se orálně absorbovat, a také antimikrobiálních činidel, která uvedené látky obsahují.

Dosavadní stav techniky

Sloučeniny, které mají základní strukturu chinolinkarboxylové kyseliny, jsou známy tím, že !5 zahrnují řadu sloučenin použitelných jako syntetická antimikrobiální činidla, protože obsahují silnou antimikrobiální aktivitu a mají široké antimikrobiální spektrum. Mezi takové sloučeniny patří norfloxacin (popisuje se v dokumentu JP 53-141 286 A), enoxacin (popisuje se v dokumentu JP 55-31 042 A), ofloxacin (JP 57 46 986 A), ciproflacin (JP 58-74 667 A), tosufloxacin (popisuje se v dokumentu JP 60-228 479) a podobně. Tyto sloučeniny se v širokém spektru pou20 žívaj i jako terapeutická činidla v případě infekčního onemocnění.

Tyto sloučeniny však nemají ještě dostatečnou antimikrobiální aktivitu, intestinální absorpci a metabolickou stabilitu a stále je jejich využití ovlivněno řadou problémů, které je nutné řešit, např. snížení fototoxicity a cytotoxicity jak chinolinkarboxylové kyseliny, tak i jejích derivátů.

V současné době se objevují bakterie rezistentní na řadu farmaceutických prostředků, což je také problém.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je poskytnout antimikrobiální činidlo, které je klinicky přijatelné, vykazuje skvělý antimikrobiální potenciál, metabolickou stabilitu a absorbuje se ve střevech a má mizivé vedlejší účinky.

Za daných okolností se provedl rozsáhlý výzkum, přičemž vznikly farmaceutické prostředky s výborným klinickým využitím. Popisují se deriváty pyridonkarboxylové kyseliny obecného vzorce I

(I), kde symbol R¹ reprezentuje atom vodíku nebo skupinu chránící karboxyl, symbol R² reprezentuje 40 hydroxylovou skupinu nižší alkoxylovou skupinu nebo substituovanou nebo nesubstituovanou aminoskupínu, symbol R³ reprezentuje atom vodíku nebo atom halogenu, symbol R⁴ reprezentuje atom vodíku nebo atom halogenu, symbol R⁵ reprezentuje atom halogenu nebo substituovanou či nesubstituovanou saturovanou cyklickou aminoskupínu, symbol R⁶ reprezentuje atom vodíku,

- 1 CZ 302033 B6 halogenový atom, nitroskupinu nebo chráněnou nebo nechráněnou aminoskupinu, symboly X, Y a Z mohou být stejné nebo různé a každý nezávisle reprezentuje atom vodíku, -CH= nebo CR-. kde symbol R⁷ reprezentuje nižší alkylovou skupinu, halogenový atom nebo kyanoskupinu, s výjimkou, že alespoň jeden symbol X, Y a Z reprezentuje atom dusíku, a symbol W reprezentuje atom dusíku nebo -CR^S=, ve kterém symbol R⁸ reprezentuje atom vodíku, atom halogenu nebo nižší alkylovou skupinu, a jeho soli mají výborný antimikrobiální účinek a jsou proto použitelné jako syntetická antimikrobiální činidla a popisují se v dokumentu WO 97/11 068 A).

io Výsledkem dalšího výzkumu jsou shora popsané deriváty pyridonkarboxylové kyseliny obecného vzorce I l-(6-amino-3,5-difluoropyridin-2-yl)-8-bromo-7-(3-ethylaminoazetidin-1-yl)-6fluoro-4-oxo-l,4-dihydrochinolin-3-karboxylová kyselina, které mají 6-amino-3,5-difluoropyridylovou skupinu v poloze 1, ethylaminoazetidinylovou skupinu v poloze 7 a atom bromu v poloze 8 a jsou vyjádřeny následujícím vzorcem

ajejich solí, které mají významné vlastnosti. K. těmto vlastnostem patří extrémně dobrý antimikrobiální potenciál a široké antimikrobiální spektrum, které překrývá i rezistentní bakterie, nevykazují fototoxicitu, což je toxicita specifická pro chinolin a vykazují snížení hypertenze a zanedbatelné vedlejší účinky na kůži, jako je vyrážka. Pak známé sloučeniny podobných struktur vykazují dlouhý čas rozpadu v krvi, extrémně vysokou biologickou využitelnost a jsou velmi účinné jako preventivní a terapeutická činidla v případě různých infekčních onemocnění.

Vynález popisuje l-(6-amino-3,5-difluoropyridin-2-yl)-8-bromo-7-(3-ethylaminoazetidm-lyl)-ó-fluoro-4-oxo-l,4-dihydrochinolin-3-karboxylovou kyselinu (nazvanou „sloučenina 1”) nebo jej i sůl.

Vynález popisuje farmaceutický prostředek, který obsahuje jako aktivní složku sloučeninu I nebo její sůl.

Vynález popisuje farmaceutický prostředek obsahující sloučeninu 1 nebo její sůl a farmaceuticky přijatelný nosič.

Vynález dále popisuje použití sloučeniny 1 nebo její soli jako terapeutický prostředek.

Vynález dále popisuje způsob léčby infekčních onemocnění, který zahrnuje aplikaci sloučeniny 1 nebo její soli.

Podstata vynálezu 40

Sloučenina 1 podle vynálezu může tvořit solí kyselou i bazickou adicí. Je nutné poznamenat, že tyto látky zahrnují sloučeniny boru tvořící cheláty.

-2CZ 302033 B6

Příklady kyselých adičních solí mohou zahrnovat (a) soli s minerálními kyselinami, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina sírová a kyselina fosforečná, (b) soli s organickými karboxylovými kyselinami, jako je kyselina mravenčí, kyselina octová, kyselina citrónová, kyselina trichloroctová, kyselina trifluoroctová, kyselina fumarová a kyselina maleinová a (c) soli kyseliny sulfonové, jako je methansulfonová kyselina, benzensulfonová kyselina, p-toluensulfonová kyselina, mesitylensulfonová kyselina a naftalensulfonová kyselina, zatímco příklady bazických adičních solí mohou zahrnovat (a') soli alkalických kovů, jako je sodík nebo draslík, (b') soli z kovů alkalických zemin, jako je vápník a hořčík, (c') amonné soli, (ď) soli organických bází obsahující dusík, jako je tri methy lamin, triethylamin, tributylamin, pyridin, Ν,Ν-dimethylanilin, N—methylpiperidin, N-methylmorfolin, diethylamin, cyklohexylamin, prokain, dibenzylamin, N-benzylβ-fen ethy lamin, 1-efenamin a Ν,Ν'-dibenzylethylendiamin. Příklady sloučenin boru jsou halidy boru, jako je fluorid boritý a nižší acy 1 oxyboroskupina, jako je acetoxyborová skupina. Z těchto kyselých adičních solí se preferují maleáty, methansulfonát, p-toluensulfonát a zvláště se preferuje kyselina chlorovodíková.

Sloučenina 1 nebo její soli podle předkládaného vynálezu mohou existovat ne pouze v nerozpustné formě, ale mohou také existovat ve formě hydrátu nebo solvátu. Sloučeniny podle vynálezu mohou každá vykazovat všechny krystalické formy, její hydráty a solváty.

Sloučenina 1 nebo její sůl podle předkládaného vynálezu může každá být vyrobena požadovaným způsobem. Příklad takového způsobu může být ilustrován následujícím způsobem:

(1),

-3 CZ 302033 B6 kde symbol R¹ a R² reprezentuje nižší alkylové skupiny a symbol R³ reprezentuje atom vodíku nebo skupinu chránící aminoskupinu (jako je například /-butyl, benzyl, p-methoxy benzyl nebo

1,1,3,3-tetramethylbutyl).

Sloučenina podle vynálezu se může získat reakcí esteru ortoformiátu nebo methyl formiátu se sloučeninou vzorce A za vzniku derivátu akrylátesteru vzorce B, reakcí derivátu akrylátesteru s aminosloučeninou vzorce C za vzniku sloučeniny vzorce D, přičemž se sloučeninou vzorce D se provede cyklizační reakce za vzniku sloučeniny vzorce E, která hydrolyzuje sloučeninu vzorce io E na sloučeninu vzorce F a pak reaguje sloučenina vzorce F s 3-ethylaminoazetidinem.

Reakce mezi sloučeninou vzorce A a ortoformiátesterem se může provést v obecném případě při teplotě 0 °C až 160°C, přičemž se upřednostňuje teplota 50 °C až 150 °C, a reakční čas může v obecném případě být 10 minut až 48 hodin, přičemž se upřednostňuje 1 až 10 hodin. Orto15 formiátester se přednostně může použít v ekvimolárním množství nebo ve větším množství což se vztahuje k přibližné hodnotě 1 až lOnásobek hodnoty sloučeniny vzorce A, Preferuje se přidání reakčního promotoru, kterým je anhydrid karboxylové kyseliny, jako je anhydrid kyseliny octové. Tento anhydrid karboxylové kyseliny se může přednostně použít v ekvimolárním množství nebo ve větším množství vzhledem ke sloučenině vzorce A, přičemž se přednostně používá molární množství 1 až lOnásobek množství sloučeniny A.

Reakce se sloučeninou vzorce C se provede buď způsobem bez použití rozpouštědla, nebo rozpuštěním ve vhodném rozpouštědle. Při této reakci se použije libovolné rozpouštědlo, které neovlivňuje reakci. Příkladem jsou aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, ethery, jako jsou diethylether, tetrahydrofuran, dioxan, monoglym a diglym, alifatická uhlovodíky, jako je pentan, hexan, heptan a ligroin, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform a chlorid uhličitý, aprotická polární rozpouštědla, jako je dimethylformamid a dimethylsulfoxid, a alkoholy, jako je methanol, ethanol a propanol. Tato reakce se může provést v obecném případě při teplotě 0 až 150 °C, přičemž se upřednostňuje teplota 0 až 100 °C. Reakční čas je v obecném případě 10 minut až 48 hodin. Sloučenina vzorce C se může použít v ekvimolárním množství nebo ve vyšším množství vztaženo na sloučeninu vzorce A. Významné je molámí množství tvořící přibližně jednonásobek až dvojnásobek množství sloučeniny vzorce A.

Při jiném způsobu acetal, jako je Ν,Ν-dimethy Iformamiddimethylacetal nebo Ν,Ν-dimethy l35 formamiddiethylacetal, reagoval se sloučeninou vzorce A, pak následovala další reakce se sloučeninou vzorce C za vzniku sloučeniny vzorce D. V reakci s acetalem je možné použít libovolné rozpouštědlo, které neovlivňuje reakci. Příklady jsou uvedené shora v textu. Tato reakce se provedla v obecném případě pri teplotě 0 °C až 150 °C, přičemž se upřednostňuje teplota 100 °C a reakční čas může být v rozmezí od 10 minut do 48 hodin, přičemž se upřednostňuje 1 až 10 hodin.

Dále reakce, kde sloučenina vzorce D vstupuje do cyklizační reakce, aby vznikla sloučenina vzorce E, je provedena v přítomnosti nebo nepřítomnosti základní sloučeniny rozpuštěné v rozpouštědle. V této reakci je možné použít libovolné rozpouštědlo, které ovlivňuje reakci. Pří45 kladem jsou aromatické uhlovodíky, jako je benzen, toluen a xylen, ethery, jako je diethylether, tetrahydrofuran, dioxan, monoglym a diglym, halogenované uhlovodíky, jako je methylenchlorid, chloroform a chlorid uhličitý, aprotické polární rozpouštědlo, jako je dimethylformamid a dimethylsulfoxid, a alkoholy, jako je methanol, ethanol a propanol. Jako bazické sloučeniny se mohou použít například alkalické kovy Jako je kovový sodík, kovový draslík, hydridy kovu, jako je hydrid sodíku a hydrid vápníku, anorganické soli, jako je hydroxid sodný, hydroxid draselný, uhličitan sodný a uhličitan vápenatý, alkoxidy, jako je methoxid sodný, ethoxid sodný a tbutoxid draselný, fluoridy kovu Jako je fluorid sodný a fluorid draselný, a organické báze Jako je triethylamin a 1,8-diazabicyklo[5,4,0]undecen (DBU). Rozmezí teploty reakce je v obecném případě od 0 do 200 °C, přičemž se upřednostňuje teplota od 0 °C do 200 °C, více se upřed55 nostňuje teplota od teploty místnosti do 180°C a reakce může probíhat po dobu 5 minut až

-4 CZ 302033 B6 hodin. Bazická sloučenina se může použít v ekvimolámím množství nebo v množství větším, než je množství sloučeniny vzorce D. Toto množství je přibližně 1 až 2 násobek sloučeniny vzorce D.

Eliminace skupiny chránící karboxylovou skupinu, jako je symbol R¹, a skupiny chránící aminoskupinu, jako je symbol R³, hydrolýzou sloučeniny vzorce E dává možnost vzniku sloučeniny vzorce F.

Vedle hydrolýzy je možné aplikovat normální podmínky hydrolýzy. Hydrolýzu je možné ovlivnit například přítomností bazické sloučeniny, jako je hydroxid sodný, hydroxid draselný, uhličitan sodný nebo uhličitan draselný, minerální kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina sírová nebo kyselina bromovodíková nebo organická kyselina, jako je /?-toluensu!fonová kyselina v rozpouštědle, jako je například voda, alkohol, jako je methanol, ethanol nebo propanol, ether, jako je tetrahydrofuran nebo dioxan, keton, jako je aceton nebo methyl ethyl keton, nebo kyselina octová nebo směs rozpouštědel. Reakce může probíhat v obecném případě při teplotě místnosti až 180 °C, přičemž se upřednostňuje teplota místnosti až 140 °C, a reakční doba může být v obecném případě v rozmezí 1 až 24 hodin.

Dále sloučenina vzorce F reagovala s 3-ethylaminoazetidinem, aby se získala sloučenina 1 podle vynálezu.

Tato reakce se může provádět v rozpouštědle, které neovlivňuje reakci, například aromatickém uhlovodíku, jako je benzen, toluen nebo xylen, alkoholu, jako je methanol nebo ethanol, etheru, jako je tetrahydrofuran, dioxan nebo monoglym, halogenovaném uhlovodíku, jako je methylenchlorid, chloroform nebo chlorid uhličitý, aprotíckém polárním rozpouštědle, jako je dimethylformamid, diethyl sulfoxid nebo N-methy Ipyrro lidon, acetonitril nebo pyridin, v přítomnosti kyselého neutralizačního činidla, je-li potřeba, například uhličitan sodný, uhličitan vápenatý, triethylamin nebo l,8-diazabicyklo[5,4,0]undecen (DBU) při teplotě místnosti až 160 °C. Reakční doba je v rozmezí několika minut až 48 hodin, zatímco se preferuje rozmezí od 10 minut do 24 hodin. 3-ethylaminoazetin se může použít v ekvimolámím množství nebo v množství větším, než je množství sloučeniny vzorce F, přičemž se upřednostňuje molámí množství, které je 1 až 5krát větší, než je množství sloučeniny vzorce F.

Sloučenina 1 se může převést na kyselou adiční sůl nebo bazickou adiční sůl způsobem známým v oboru.

Tato reakce se může provést v polárním rozpouštědle, jako je například alkohol, kterým je methanol nebo ethanol, nebo voda v přítomnosti minerální kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková, kyselina sírová nebo kyselina fosforečná, organická karboxylová kyselina, jako je kyselina mravenčí, kyselina octová, kyselina citrónová, kyselina trichloroctová, trifluoroctová, kyselina fumarová nebo kyselina maleinová, organická sulfonová kyselina, jako je methansulfonová kyselina, benzensulfonová kyselina, p—toluen sulfonová kyselina, mesitylensulfonová kyselina nebo naftalensulfonová kyselina, bazická sloučenina, jako je hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid vápenatý nebo hydroxid hořečnatý nebo organická báze obsahující dusík, jako je amoniak, triethylamin, trimethylamin, tributylamin, pyridin, Ν,Ν-dimethylanilin, N-methylpiperidin, N-methyImorfolin, diethylamin, cyklohexylamin, prokain, dibenzylamin, N-benzylβ-fenethylamin 1-efenamin nebo Ν,Ν-dibenzylethylendiamin, při teplotě místnosti nebo při zahřívání.

Počáteční sloučenina vzorce A se může produkovat například způsobem, který se popisuje v jedné z následujících publikací: J. Heterocyclic. Chem., 22, 1033 (1985), Liebigs Ann. Chem., 29 (1987), J. Med. Chem., 31, 991 (1988), J. Org. Chem., 35, 930 (1970), J. Med. Chem., 29, 2363 (1986), J. Fluorin. Chem., 28, 361 (1985), v dokumentu JP 62-246 541 A, JP 63-26 272 A, JP 63-145 268 A, JP 63-198 664 A, JP 63-264 461 A, JP 63-104 974 A.

-5CZ 302033 B6

Na druhou stranou reagující sloučenina vzorce C se produkovala požadovaným způsobem. Tato sloučenina se může produkovat substitucí aminového derivátu za atom halogenu vázaného na atomu uhlíku, kterýje členem 6-ti členného kruhu, v souladu se známou substituční reakcí halogen-amin tak, jak se popisuje v dokumentu WO 97/11 068 A nebo WO 97/38 971 A.

Sloučenina podle vynálezu se získala způsobem popsaným shora v textu a čistila se způsobem známým v oboru. V závislosti na podmínkách pro izolaci a čištění se získaly ve formě soli nebo ve formě volné karboxylové kyseliny nebo volného aminu. Tyto dvě formy se mohou přeměnit jedna na druhou, jestli je to možné, a sloučenina podle vynálezu se může produkovat v uvedené formě.

Sloučenina 1, která má 6-amino-3,5-difluoropyridylovou skupinu v poloze 1, ethy lamin oazetidinylovou skupinu v poloze 7 a atom bromu v poloze 8, a její soli se získaly způsobem popsaným shora v textu, stejně jako se bude popisovat v testech 1 až 4, vykazují účinky, které se nedají předpovídat ze strukturně aktivitních korelací akceptovaných k datu podání přihlášky ve spojení s deriváty pyridonkarboxylové kyseliny obecného vzorce I, která má dlouhý poločas rozpadu, když se aplikuje orálně a vykazuje extrémně vysokou hodnotu biologické dostupnosti až 78 %, jak se vypočítalo z AUC až 24 hodin po aplikaci. Zbývající skvělé vlastnosti jsou extrémně vysoký potenciál a nevykázaná fototoxicita, která odpovídá toxicitě specifické pro chinolin. Dále sloučenina I a její soli také mají výborné vlastnosti, které snižují hypertenzi a vedlejší účinek na kůži, jako je dráždění, pak známé sloučeniny mají podobné struktury.

Sloučenina 1 a její soli podle vynálezu mohou tvořit v prostředcích vhodných pro parenterální aplikaci antimikrobiální činidlo spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem. Mohou se aplikovat ve formě injekce, rektální aplikaci nebo instalaci nebo orální aplikaci a mohou se vyskytovat v pevné nebo kapalné formě. Příklady přípravy injekce mohou zahrnovat farmaceuticky přijatelné, sterilní vodné nebo nevodné roztoky, suspenze a emulze. Příkladem nevodných nosičů, ředidel, rozpouštědel a vehikul jsou propylenglykol, polyethylenglykol, rostlinné oleje, například olivový olej, a organické estery, které je možné zavést injekcí, například ethyloleát. Takové roztoky mohou také obsahovat aditiva, jako jsou ochranná činidla, zvlhčovači činidla, emulgační činidla a dispergační činidla. Tyto injekce se mohou sterilizovat například filtraci přes bakteriální filtry nebo přidáním bezprostředně před použitím sterilizujícího činidla, které je ve formě sterilního pevného prostředku rozpustného v některém jiném sterilním médiu, které je vhodné pro zavedení injekcí.

K prostředkům vhodným pro aplikaci kapáním, lze přidat vedle sloučenin podle vynálezu rozpouštěcí činidla, ochranná činidla, isotonická činidla, zahušťovací činidla.

Příklady takových pevných prostředků vhodných pro orální aplikací zahrnují kapsule, tablety, pilule, prášek a granule. Při formulaci takových pevných prostředků se sloučeniny podle vynálezu v obecném případě smíchají s alespoň inertním plnidlem, například sacharózou, laktózou nebo škrobem. Při vytvoření prostředků, materiálů jiných, nežje inertní plnidlo, se mohou také použít lubrikační prostředky (například stearát hořečnatý). V kapsu lích, tabletách a pilulích se mohou použít pufry. Na tablety a pilule je možné aplikovat střevní potah.

Příklady kapalných přípravků pro orální aplikaci mohou zahrnovat farmaceuticky přijatelné emulze, roztoky, suspenze, sirupy a elixíry, které mohou obsahovat běžně používaná inertní ředidla, jako je například voda. Vedle inertních ředidel se mohou také přidávat aditiva, jako jsou smáčecí činidla, emulgační činidla nebo suspendační činidla, sladidla a příchutě.

Přípravky pro rektální aplikaci mohou obsahovat vedle sloučenin podle vynálezu excipienty, jako je kakaové máslo a vosk vhodný pro rektální čípky.

Dávka každé sloučeniny podle vynálezu kolísá v závislosti na vlastnostech sloučeniny, způsobu aplikace, požadované době léčby a jiných faktorech. V obecném případě denní dávka může před-6CZ 302033 B6 nostně být v rozmezí od 0,1 do 1 000 mg/kg, ale více se preferuje dávka v rozsahu od 0,5 do 100 mg/kg. Dále tato denní dávka se může aplikovat ve dvou až čtyřech částech podle nutnosti.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1: Syntéza ethyI-8-bromo-l-[6-(/-butylamino)-3,5-difluoropyridÍn-2-yl]—6,7dífluoro—4—oxo— 1,4-dihydrochinolin—3-karboxylátu io

V roztoku chloroformu (objem 5 ml), ve kterém se připravil ethyl-3-ethoxy-2-(3-bromo-2,4,5trifluorobenzoyl)akrylát z ethyl-3-bromo-2,4,5-trifluorobenzoylacetátu (1,32 g), se rozpustil způsobem známým v oboru. Přidávání 2-amino-6-(/-butylamino)-3,5-difluoropyridmu do reakční směsí se sledovalo TLC až do okamžiku celkové konverze na derivát aminoakrylátu.

Reakční směs se koncentrovala za sníženého tlaku a získal se žlutý pevný zbytek. Ke zbytku nevodného uhličitanu draselného (v množství 1,2 g) se přidal N,N-dimethylformamid (o objemu 2 ml) a směs se míchala při teplotě 90 °C po dobu 15 minut. Směs se nechala zchladnout. K reakční směsi se přidal chloroform (o objemu 30 ml) a destilovaná voda (o objemu 300 ml) a směs se nechala separovat do jednotlivých vrstev. Vrstva chloroformu se dvakrát promyla desti20 lovanou vodou (o objemu 300 ml), sušila se přes nevodný síran hořečnatý, koncentrace se zvýšila za sníženého tlaku a pak se nechala stát. Sraženina se získala filtrací a promyla se ethanolem a diisopropyletherem za účelem získat sloučeninu uvedenou v názvu (v množství 1,41 g) ve formě bezbarvého prášku.

Teplota tání je 198 °C až 203 °C 'H-NMR (CDCh) δ: 1,38 (s,9H), 1,40 (t, J = 7 Hz, 3 Hz), 4,04 (q, J = 7 Hz, 2H), 4,71 (brs, 1 H), 7,20 (dd, J = 8 Hz, 10 Hz, 1H), 8,36 (dd, J - 9 Hz, 10 Hz, 1H), 8,54 (s, 1H).

Příklad 2: Syntéza l-(6-amino-3,5-difluoropyridin-2-yl)-8-bromo-6,7-difhioro- 4 -oxo1,4—díhydrochinolin—3-karboxylové kyseliny

Ethyl-8-bromo-l-[6-(Z-butylamino)-3,5-difluoropyridin-2-yl]-6,7-difluorO“4-oxo-l,4dihydrochinolin-3-karboxylát (v množství 1,38 g) se přidal ke kapalné směsi 12% kyseliny chlo35 ro vodíkové (v množství 3,5 ml) a octové (v množství 3,5ml)asměsse nechala zahřívat po dobu hodin za stálého míchání a zpětného toku. Po přidání destilované vody (v množství 5 ml) se směs nechala zchladnout. Sraženina se shromáždila filtrací a následně se promyla etanolem a diisopropyletherem za účelem získat sloučeninu uvedenou v názvu (v množství 1,10 g) ve formě bezbarvého prášku.

Bod tání: 272 °C až 278 °C 'H-NMR (D₆-DMSO) δ: 6,80 (s, 2H), 7,99 (t, J = 9 Hz, 1H), 8,38 (t, J = 9 Hz, 1H), 8,93 (s, 1H).

Příklad 3: Syntéza l—(6-amino-3,5—difluoropyridin-2-yl)- 8- bromo 7 {3 ethy]aminoa7Ctidin-l-yl) 6 fluoro-4-oxo l.4-dihydrocfiinolin-3-karboxvlové kyseliny (sloučenina 1)

Smíchal se 3-ethy lam i noazetidin (v množství 700 mg), 1—(6-amino-3,5-difluoropyridin-2-yl)50 8-bromo-6,7-difluoro-4-oxo-l,4-dihydrochinolin-3-karboxylová kyselina (v množství 1,5 g), N-methylpyrrolidin (v množství 2,0 g) a dimethylsulfoxid (v množství 4,5 g) a směs se zahřála za stálého míchání při teplotě 40 °C po dobu 24 hodin. Pak se směs nechala zchladnout, přidal se i sopropy lether (v množství 10 ml) a směs se míchala a odstranila se Čirá vrstva na povrchu směsi. Stejný postup se opakoval ještě jednou a koncentrace zbytku se zvýšila za sníženého tlaku. Přidal sc ethanol (v množství 5 ml) a směs se nechala zahřívat za stálého míchání při teplotě 70 °C po

-7CZ 302033 B6 dobu 30 minut. Sraženina se sebrala filtrací. Vznikla sloučenina uvedená v názvu v množství

1,38 g ve formě bezbarvého prášku.

Bod tání: 195 °Cažl96°C 'H-NMR (D₆-DMSO) δ: 0,99 (t, J = 7 Hz, 3Π), 2,48 (q, J - 7 Hz, 2H), 4,05 - 4,15 (m, 2H), 4,35 - 4,42 (m, IH), 4,60- 4,69 (m, 2H), 6,74 (brs, 2H), 7,88 (d, J= 14 Hz, IH), 7,93 (t, J 9 Hz, IH), 8,69 (s, IH).

Příklad 4: Syntéza maleátu l-(6-amino-3,5-difluoropyridin-2-yl)-8-bromo-7-(3-ethylaminoazetidin-l -yl)- 6- fluoro 4 oxo-1,4—dihydrochinolin-3-karboxytové kyseliny (sloučenina 2)

Ke kyselině ]-{6 amino 3.5 dilluoropyridin-l-yl)—6-ť1uoro-4—oxo-1,4- dihydrochinolin-3karboxylové (1,38 g) se přidal ethanol a ke směsi se postupně přidávala kyselina maleinová (400 mg). Směs se zahřála za stálého míchání při teplotě 70 °C po dobu 5 hodin. Pak se směs nechala zchladit a pevné látky se shromáždily filtrací. Pevné látky se promyly ethanolem. Získala se sloučenina uvedená v názvu v množství 1,33 g ve formě bezbarvého prášku.

Bod tání je 196 °C až 199 °C.

'H-NMR (D₆-DMSO) δ: 1,16 (t, J “ 7 Hz, 3H), 2,93 (q, J = 7 Hz, 2h), 3,99- 4,06 (m, IH), 4,41 - 4,48 (m, 1H), 4,50 - 4,56 (m, 1H), 4,67 - 4,74 (m, 1H), 4,74 - 4,82 (m, 1H), 6,02 (s, 2H),

6,76 (brs, 2H), 7,95 (t,J = 9Hz, IH), 7,97 (d,J= 14 Hz, IH), 8,75 (s, IH).

Testy

Výsledky testů provedených se sloučeninami podle vynálezu, kde se hodnotily jejích antimikrobiální účinky, fototoxicita a distribuce in vivo, se popisují v sekci testy 1 až 4. Jako sloučeniny vhodné pro srovnání se použily sloučeniny popsané v dokumentu WO 97/11 068 A a obecně dostupný cíprofloxacin (CPFX) a levofloxacin (LVFX).

Porovnávací sloučenina 1:

kyselina 1 (ó amino 3.5 <lif]uoropYridin-2-yl)-8-bromo-7—(3-rnethylaminoazetidin-l-yl)-6ťliioro-4—oxo-1,4-dihydrochinolin-3-karboxylová

Porovnávací sloučenina 2:

kyselina l-(6-amino-3,5-difluoropyridin-2-yl)-8-ehloro-7-{3-methylaminoazetÍdín-l-y])-6fluoro-4-oxo-l,4-dihydrochinolin-3-karboxylová

CPFX:

l-cyklopropyl-6-fluoro-7-( 1 —píperazinyl)—1.4-dihydro-4-oxochinolin--3-karboxylová kyselina

LVFX:

S(-)-9-fluoro—2,3-dÍhydro-3-methyl-10-(4-methyl-1-piperazinyl)-7-oxo-7H-pyrÍdo[l,2,3í/e][l,4]benzoxazín-6-karboxylová kyselina (1) Antimikrobiální účinky

Minimální koncentrace inhibice růstu (MIC, udává se v pg/ml) se stanovila podle standardní metody Japan Society of Chemotherapy (popisuje se v publikaci Chemotherapy, 29(1), 76 (1981)). Výsledky jsou uvedeny v tabulce č. 1.

-8CZ 302033 B6

Tabulka Č. 1

	Slouč.l	Porovn. slouč.1	Porovn. slouč.2	CPFX	LVFX
S. aureus 209P	0, 013	0,013	0,013	0,20	0,20
MRSA W200	0, 013	0,025	0,025	0,78	0,39
S. epidermis IFO12293	0, 025	0,05	0, 05	1,56	0,78
E. faecalis IFO1258Ó	0, 39	0,39	0, 78	1,56	1,56
M. luteus IFO12708	0,39	0,39	0,78	3,13	0,78
B. subtilis ATCC6633	0, 025	0,05	0,025	0,05	0,1
E. coli NIHJ-JC2	0, 025	0, 013	0, 025	0,025	0,05
K. pneumoníae KC-1	0, 05	0,025	0,05	0,05	0,1
P. vulgaris IFO3167	0, 1	0,1	0,2	0,05	0,05
S. marcescens IFO3736	1,56	1,56	1,56	0,2	0,78
P.aeruginosa IFO34 45	0, 78	0,39	0, 39	0,39	0,78
P.aeruginosa E-2	1,56	0,78	1,56	0,78	1,56

(2) Test fototoxicity

Test fototoxicity se uskutečnil následujícím postupem.

Samicím myší ICR. (5 až 6 týdnů staré) se intravenózně aplikovaly testované sloučeniny io (40 mg/kg/ v objemu 10 ml) a vystavily se po dobu 4 hodin ultrafialovým paprskům (320 nm až

400 nm, 1,8 mW/cm²/vteřinu). Sledovaly se abnormality na jejich uších v 0. hodině (ihned po expozici) a po 24 hodinách a po 48 hodinách.

Abnormality vytvořené na uších spadaly do následujících standardů: žádné abnormality (0 bodů), 15 mírné zrudnutí kůže (1 bod), střední zrudnutí kůže (2 body) a silné zrudnutí kůže a otok (3 body).

Výsledky jsou uvedeny v tabulce č. 2.

Tabulka Č. 2

	0. Hodina (body, frekvence)	24 hodin	48 hodin
Sloučenina 1	0, 0/3	0, 0/3	0, 0/3
Porov. slouč. 1	0, 0/3	0, 0/3	0, 0/3
Porov. slouč. 2	0,7, 2/3	0, 0/3	0, 0/3

(3) Antibakteriální účinky na klinicky izolované pneumokoky rezistentní na chinolin

Při použití agarových ploten s 5 % defibr i novanou ovčí krví se minimální růstové inhibiční koncentrace (MIC, vyjádřené v μg/ml) proti jistým pneumokokům stanovily podle standardní meto-9CZ 302033 B6 dy Japan Society of Chemotherapy (popisuje se v publikaci Chemotherapy, 29(1), 76 (1981)). Výsledky jsou uvedeny v tabulce ě. 3.

Tabulka č. 3

	Slouč. 1	Porovn. slouč. 1	CPFX	LVFX
Izolovaný kokus 1	0,03	0,06	8	2
Izolovaný kokus 5	0, 12	0,5	64	32

Z výsledků v tabulce 1 až 3 sloučenina podle vynálezu vykazovala antimikrobiální aktivity io porovnatelné nebo lepší než porovnávací sloučeniny a nevykazovala také žádnou fototoxicitu.

(4) Farmakokinetická studie in vivo

Provedl se výzkum absorpce a vylučování sloučenin podle vynálezu se psy.

0,5% suspenze jedné z testovaných sloučenin v methylcelulóze (10 mg/ml/kg) se aplikovala per os fenám bíglů starých 2 až 4 roky po dobu 16 až 17 hodin. 0,25 hod, 0,5 hod, 1 hod, 2 hod, 4 hod, 6 hod, 8 hod a 24 hod po aplikaci se odebraly vzorky krve a získaly se vzorky séra. Aby se stanovila rychlost vylučování moči, shromáždily se po 24 hodinách po aplikaci vzorky moči.

Koncentrace testované sloučeniny ve vzorcích séra a moči se měřily metodou papírového disku, přičemž jako testovací bakterie se použil BaciHus subtilis ATCC6633 a stanovil se rozsah absorpce a vylučování. Takto získané výsledky se uvádějí v tabulce 4.

- 10CZ 302033 B6

Tabulka č. 4

rozsah vylučování močí {%)	oo Oh I—1	r- r—t	oo =T t—1	r- co
Ό 0 — x: ε co \ Ό >CM 0 na x: o υ cp < —	CD CM CM	CO r~ T—1	*qr tO OO	CO CD r~*
Ό O 2 x: Ε-» ~	OO co	co 'qp	O CM	CO co
Ό « o e -C	T—	1-í	m o
r—t ε m θ' J i	CM OO	CO co	m co CM	<—i
z	co	CO	CM	co
	Sloučenina 1	Sloučenina 2	Porovnávací slouč. 1	Maleátová sůl porovn. slouč. 1

- 11 CZ 302033 B6

Z tabulky č. 4, kde jsou uvedeny výsledky farmakokinetícké studie in vivo, vyplývá, že sloučeniny podle vynálezu se ve srovnání s porovnávacími sloučeninami zlepšily.

Průmyslová využitelnost

Sloučenina 1 a její soli podle vynálezu mají charakteristické vlastnosti které, když se aplikují orálně, vykazují dlouhý poločas rozpadu a extrémně vysokou biologickou použitelnost, zatímco si uchovávají vlastnosti, jako je extrémně silný antibakteriální účinek a nízká toxicita. Sloučenina ίο 1 a její soli také vykazují skvělé vlastnosti, jako je snížení hypertenze a vedlejších účinků na kůži, jako je vyrážka. Sloučenina 1 a její soli se proto mohou použít v širokém rozsahu jako pri prevenci a terapii různých infekčních onemocněních u lidí a zvířat a také jako farmaceutické prostředky pro ryby, mohou se použít v zemědělství, jako konzervační činidla v zemědělství a podobně. Dále se očekává, že sloučenina 1 podle vynálezu má antivirové účinky, zvláště působí proti HIV, a považuje se za účinnou pri prevenci a léčbě AIDS.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. 1 -(6-amin o-3,5-difluoropy rid in—2--yl)-8-brom-7-(3-ethy laminoazet idin- 1-y l)-6-fluor4-oxo— 1,4-d i hydrochinol in-3-karboxy lová kyselina nebo její sůl.
2. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že jako aktivní složku obsahuje

25 l-(ú-amino- 3.5- difluoropyridin 2-yl)-8-brom-7-(3 ethylarninoazetidin-l-ylf ó fluor—4oxo-l,4-dihydrochinolin-3-karboxylovou kyselinu nebo její sůl.
3. Farmaceutický prostředek podle nároku 2, vyznačující se tím, že je určený pro mikrobiální infekční onemocnění.
4. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje l-(6-amino-3,530 d i fluoropy rid i n-2-yl)-8-brom-7-( 3-ethy lamí noazeti din-1-y l)-6-fluor-4-oxo-l,4-d i hydrochinol in-3-karboxy lovou kyselinu nebo její sůl a farmaceuticky přijatelný nosič.
5. Farmaceutický prostředek podle nároku 4, vyznačující se tím, že je určený pro mikrobiální infekční onemocnění.
6. Použití l-(6-amino-3,5-difluoropyrÍdin-2-yl)-8-brom-7-(3-ethy]aminoazetidin-l-yl)-635 íluor -·! oxo 1,4-dihydrochinolin-3-karboxylové kyseliny nebo její soli podle nároku 1 pro přípravu léčiva.
7. 1-(6-amino-3,5-difluoropyridin-2-yl)-
8-brom-7-(3-ethylaminoazetidin-1-yl)-6-fluor4-oxo-l ,4-dihydrochinolin-3-karboxylová kyselina nebo její sůl podle nároku 1 pro použití jako léčivo.

40 8. l-(6--amino--3,5--difluropyridin-2--yl)--8-brom-7(3-ethylaminoazetidín--1 —yl)--6-fluor—4oxo-l,4-dihydrochinolin-3-karboxylová kyselina nebo její sůl podle nároku 1 pro použití při léčbě mikrobiálních infekčních onemocnění.
9. l-(6-amino-3,5-difluoropyridin-2-yl)-8-brom-7-(3-ethylaminoazetidin-l-yl)-6-f]uor4-oxo-l,4-dihydrochinolin-3-karboxylová kyselina nebo její sůl podle nároku 1 pro použití

45 jako antimikrobiální činidlo.