CZ301697B6

CZ301697B6 - Indolový derivát a jeho použití a farmaceutický prostredek s jeho obsahem

Info

Publication number: CZ301697B6
Application number: CZ20014496A
Authority: CZ
Inventors: Farina@Carlo; Gagliardi@Stefania; A. T. Novella@Pietra
Original assignee: Nikem Research S.R.L.
Priority date: 1999-06-18
Filing date: 2000-06-16
Publication date: 2010-05-26
Also published as: CN1370159A; ES2226870T3; WO2001002388A1; DE60013859T2; MY129425A; IL147012A0; PT1212317E; AR024390A1; NO20016149D0; US20040235930A1; ATE276245T1; CO5200757A1; ZA200200177B; PL352964A1; BR0011708A; GC0000341A; KR20020025079A; AU5816500A; IL147012A; CN1179960C

Abstract

Indolový derivát nebo jeho sul nebo solvát, farmaceutické prostredky s jeho obsahem a použití této slouceniny nebo prostredku v lékarství. Jednotlivé indolové slouceniny jsou selektivní vuci savcím osteoklastum, pricemž pusobí tak, že selektivne inhibují jejich kost resorbující aktivitu. U techto sloucenin se tedy má za to, že jsou obzvlášte užitecné pro lécbu a/nebo profylaxi chorob spjatých se ztrátou kostní hmoty, jako je osteoporóza a související osteopenní choroby, Pagetova choroba, hyperparathyroidismus a související choroby. Tyto slouceniny se také považují za slouceniny mající antitumorovou aktivitu, antivirovou aktivitu, protivredovou aktivitu, imunosupresivní aktivitu, antilipidemickou aktivitu, antiaterosklerotickou aktivitu a má se za to, že jsou užitecné pri lécbe AIDS a Alzheimerovy choroby. Dále jsou tyto slouceniny také považovány za užitecné pri inhibici angiogeneze, tj. tvorby nových cév, která se pozoruje u ruzných typu patologických stavu, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriáza a solidní tumory.

Description

Indolový derivát a jeho použití a farmaceutický prostředek s jeho obsahem

Oblast techniky

Tento vynález se týká jistých indolových derivátů, farmaceutických prostředků s obsahem takových sloučenin a použití takových sloučenin a prostředků v lékařství.

io Dosavadní stav techniky

O chorobách spjatých se ztrátou kostní hmoty je známo, že jsou zapříčiněny nadměrnou aktivitou buněk osteoklastů. Je také známo, že jisté sloučeniny, obvykle příbuzné s bafí lomy cínem, jsou užitečné při léčbě takových chorob. Například mezinárodní patentová přihláška publikačního čísla WO 91/06296 (Aktiebolaget Astra) popisuje jisté bafilomycinové makrolidy pro léčbu chorob postihujících kost.

Deriváty bafilomycinu však nejsou u lidí selektivní vůči osteoklastům. Použití těchto sloučenin je tudíž spjato $ nepřijatelnou toxicitou v důsledku generalizované blokády jiných esenciálních v-ATPas. Ve skutečnosti dodnes neexistuje žádná selektivní léčba, která by byla selektivní vůči lidským osteoklastům.

Hledání úspěšné léčby chorob spjatých se ztrátou kostní hmoty u lidí je dále komplikováno tím, že povaha terapeutického cíle selektivní inhibice osteoklastů je kontroverzní. Baron a kol. (mezi* národní patentová přihláška publikačního čísla WO 93/01280) tedy ukazuje, že u osteoklastů byla identifikována specifická vakuolámí ATPasa (v-ATPasa), jako potenciální terapeutický cíl. Baron však svou práci provedl na kuřatech a Halí a kol. (Bone and Minerál, 27, 159 až 166 (1994)) ve studii týkající se savců shrnuje, že oproti ptačí osteoklastové v-ATPase je savčí vATPasa farmakologícky podobná v-ATPase v jiných buňkách aje tudíž nepravděpodobné, že by byla dobrým terapeutickým cílem.

Nyní bylo překvapivě nalezeno, že jisté indolové sloučeniny jsou selektivní pro lidské osteoklasty, přičemž působí tak, že selektivně ínhibují jejich kost resorbující aktivitu. Tyto sloučeniny jsou tudíž považovány za obzvláště užitečné pro léčbu a/nebo profylaxi chorob spjatých se ztrátou kostní hmoty, jako je osteoporóza a související osteopenní choroby, Pagetova choroba, hyperparathyroidismus a související choroby. Těmto sloučeninám se také přisuzuje antitumorová aktivita, antivirová aktivita (například proti viru Semliki Forest, vesikulámí stomatitidy, Newcastleské choroby, chřipky A a B a HIV), protivředová aktivita (například tyto sloučeniny mohou být užitečné pro léčbu chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helico40 bacter pylori), imunosupresivní aktivita, antilipidemická aktivita, antiaterosklerotická aktivita a má se za to,že jsou užitečné při léčbě AIDS a Alzheímerovy choroby. Dále jsou tyto sloučeniny také považovány za užitečné při inhibicí angiogeneze, tj. tvorby nových cév, která je pozorována u různých typů patologických stavů (angiogenních chorob), jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriáza a solidní tumory.

Podstata vynálezu

Předmětem tohoto vynálezu je indolový derivát, který je vybrán ze seznamu sestávajícího z:

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl>-3-ethoxy-N-{2,2,6,6-tetramethyIpiperidin-4-yl)benzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-benzyloxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)benzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-propoxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)benzamÍdu;

-1CZ 301697 B6

4-( 5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-[3-[4-0-methoxy feny l)piperazin-1-yl] propy l]-3-methoxybenzamidu;

4-(5,6-dÍchlor-lH-indol-2-yl)-N-[3-[4-(2-pyrimidyl)piperazin-l-yl]propyl]-3_methoxybenzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethyIpiperidin-4-yl)-3-methoxybenzamidu; 4—(5,6—dichlor—1 H-indol-2-yI)-N-( 1,2,2,6,6-pentamethy lpiperidin-4-yl)-3-ethoxy benzamidu; 4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(3-pyridyl)“3-ethoxybenzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(3-(6-methoxypyridyl)}-3-ethoxybenzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yí)-N-(l-benzylpiperidÍn-4-yl)-3-ethoxybenzamidu;

i o 4—(5,6—dichlor— 1 H-indol-2-y I)-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin^-y l^^-dimethoxybenzamidu;

4—(5,6—dich lor— 1 H-indol-2-y I)-N-( 1,2,2,6,6-pentamethylpiperidin^-y l)-2,5-dimethoxybenzamidu;

4-(5-methoxy-6-chlor-lH-indol-2-yl)-N-<2,2,6,6-tetramethylpiperidin^-yl)~3-ethoxybenz15 amidu;

4—(5,6—dichlor—1 H-indol-2-yl)-3-methoxy-N-(( 1 -ethoxy karbony lbutyl)piperidin-4-yl)benzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-methoxy-N-((karboxybutyl)piperidin-4-yl)benzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(2,2_J6₅6-tetramethylpiperidin-4-yl)-3-(hydroxy karbonyl20 methoxy)benzamidu;

4—(5,6—dichlor—1 H-indo 1-2-y l)-N-(2,2,6,6-tetramethy lpiperid in-4-y l)-3-(2-hy droxyethoxy)benzamidu;

4-( 5,6-dichlor-1 H-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethy lpiperid in-4-y l)-3-(3-aminopropoxy)benzamidu;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-3-(2-dÍmethylamÍnoethoxy)benzamidu a

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-3-(2,3“dihydroxypropoxy)benzamidu nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí nebo jejich farmaceuticky přijatelných solvátů.

Předmětem tohoto vynálezu je také indolový derivát vymezený svrchu, pro použití jako aktivní terapeutická látka.

Předmětem tohoto vynálezu je také indolový derivát vymezený svrchu, pro použití pro léčení nebo profylaxi chorob spjatých s nadměrnou aktivitou osteoklastů u savců.

Předmětem tohoto vynálezu je také indolový derivát vymezený svrchu, pro použití pro léčení nebo profylaxi osteoporózy a souvisejících osteopenních chorob.

Předmětem tohoto vynálezu je také indolový derivát vymezený svrchu, pro použití pro léčení tumorů, zvláště tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnující virus Semliki Forest, virus ves i ku lamí stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a B, virus HIV), vředy (například chronické gastrítidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter pylori), autoimunitními chorobami a transplantací, pro léčení a/nebo prevenci hypercholesterolemických a aterosklerotických chorob, AIDS a Alzheimerovy choroby, angiogenních chorob, jako je revmatoídní artritida, diabetická retinopatie, psoriáza a solidní tumory, u lidí a savců jiných, než je člověk.

-2CZ 301697 B6

Předmětem tohoto vynálezu je dále farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje indolový derivát vymezený svrchu ajeho farmaceuticky přijatelný nosič.

Předmětem tohoto vynálezu je rovněž použití indolového derivátu vymezené svrchu, pro výrobu léčiva pro léčení a/nebo profylaxi chorob spjatých s nadměrnou aktivitou osteoklastů u savců.

Předmětem tohoto vynálezu je rovněž použití indolového derivátu vymezené svrchu, pro výrobu léčiva pro léčení a/nebo profylaxi osteoporózy a souvisejících osteopenních chorob.

Předmětem tohoto vynálezu je rovněž použití indolového derivátu vymezené svrchu, pro výrobu léčiva pro léčbu tumorů, zvláště tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vesikulámí stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a B, virus HIV), vředy (například chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter is pylori), autoimunitními chorobami a transplantací, pro léčení a/nebo prevenci hypercholesterolemických a aterosklerotických chorob, AIDS a Alzheimerovy choroby, angiogenních chorob, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriáza a solidní tumory.

Dále se uvádějí podrobnější údaje související s předloženým vynálezem, stejně jako údaje pro dokreslení předloženého vynálezu v širších souvislostech a údaje srovnávací.

Tento vynález je založen na sloučeninách obecného vzorce I

⁰ (D nebo jejich solích nebo solvátech, ve kterém

Ri a R₂ každý nezávisle představují alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo atom halogenu;

R3 a R4 každý nezávisle představují atom vodíku, alkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, arylalkoxyskupinu $ 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylové Části, hydroxyskupinu, karboxyalkoxyskupinu s 1 az 6 atomy uhlíku v alkoxylové Části, hydroxyalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, dihydroxyalkoxyskupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, mono- a dialkylaminoalkoxyskupinu s 1 až 6 atomy uhlíku jak v alkylové, tak v alkoxylové Části nebo aminoalkoxy35 skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, a

Rs představuje skupinu -NRsRt, kde R_s a R, každý nezávisle představuje atom vodíku, nesubstituovanou nebo substituovanou alkylovou skupinu $ 1 až 6 atomy uhlíku nebo nesubstituovaný nebo substituovaný heterocyklyl.

Vhodně Ri a R₂ každý nezávisle představují methoxyskupinu nebo atom chloru.

Vhodné polohy pro substituci substituenty Ri nebo R₂ jsou polohy 4,5,6 nebo 7.

S výhodou Ri nebo R₂ jsou v poloze 5 nebo 6.

Výhodně Ri je 5-chlor a R₂ je 6-chlor.

-3CZ 301697 B6

Vhodně Rj je hydroxyskupina, methoxyskupina, ethoxyskupina, propoxyskupina, benzyloxyskupina, ethoxykarbonylová skupina, hydroxyethoxyskupina, dihydroxypropoxyskupina, d i methy lam inoethoxy skup ina nebo aminopropoxyskupina.

Vhodně R₃ je umístěn k části ~COR₅ v poloze ortho nebo meta.

Vhodně R4 je atom vodíku nebo methoxyskupina.

o Vhodně R4 je umístěn k části -COR₅ v poloze meta.

Vhodně R_s nebo Rt představují nesubstituovanou nebo substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku nebo nesubstituovány nebo substituovaný heterocyklyl,

Když R_s nebo Rt představují nesubstituovanou nebo substituovanou alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, jsou vhodnými alkylovými skupinami s 1 až 6 atomy uhlíku ethyl, propyl a butyl.

Když R_s nebo Rt představují substituovaný alkyl, jsou výhodnými skupinami 3-[4-(3-methoxyfenyl)piperazin-l-yl]propyl a 3-[4-(2-pyrimidinyl)piperazin-l-yl]propyL

Vhodně Rs nebo R_t představují nesubstituovanou nebo substituovanou piperidylovou skupinu.

S výhodou R_s nebo R, představují nesubstituovanou nebo substituovanou 4—piperidylovou skupinu.

Když Rj nebo R_t představují substituovanou piperidinylovou skupinu, vhodné substituenty zahrnují alkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, kondenzovanou cykloalkylovou skupinu se 3 až 8 atomy uhlíku, aralkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, hydroxyalkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, polyhydroxyalkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku, alkoxy30 karbonylalkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkoxylové části a 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části, karboxyalkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku v alkylové části a aminoalkylovou skupinu s 1 až 6 atomy uhlíku.

Výhodnými substituenty piperidinylových skupin jsou alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, obzvláště methylové skupiny.

Když Rg nebo R, představují substituovanou piperidiny lovou skupinu, je výhodné, když substituenty jsou připojeny najeden nebo oba atomy uhlíku v poloze alfa k atomu dusíku.

Příklady substituovaných piperidinylových skupin jsou l,2,2,6,6-pentamethylpiperidin-4-ylová skupina a 2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-ylová skupina.

S výhodou R, je atom vodíku.

Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela pod obecný vzorec I, které mají obecný vzorec Γ

-4CZ JU1Ď97 Bb ve kterém

R,, R₂, R₃, R4 a R_s mají význam definovaný u obecného vzorce I, za předpokladu, že obecný vzorec Γ nezahrnuje

4-<5,6-dichlor-1 H-indol-2-y l)-N-( 1,2,2,6,6-pentamethy lpiperidin^-y l)benzamid;

4—(5,6—dich lor— 1 H-indol-2-y l)-3-methoxy-N-( 1,2,2,6,6-pentamethy lpiperidin-4-yl)benzamid;

4-(5,6-dichlor-l H-indol-2-yl)-2-methoxy-N-( 1,2,2,6,6-pentamethylpiperidin^-yl)benz10 amid;

4-(5,6_dichlor-lH-indoI_2-yl)-3-rnethoxy-N-(3-diethylaminopropyl)benzamid;

4-(5_?6-dichlor~lH-indol-2-yl)-2-methoxy-N-(3-diethylaminopropyl)benzamid;

4-<5,6-dichlor-lH-indol”2-yl)“3-methoxy-N-[3-[4»(3-chlorfenyl)piperazinyl]propyl]benzamid;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-2-methoxy-N-[3-[4-(3-chlorfenyl)piperazinyl]propyl]benzamid;

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-methoxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-N-methylbenzamid nebo

4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-2-methoxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)--N-methyI20 benzamid.

Má se za to, že sloučeniny obecného vzorce Γ jsou nové. Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce Γ nebo její sůl nebo její solvát

Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela pod obecný vzorec l majících obecný vzorec IA

ve kterém

R_b R₂, R₃, R4 a R₅ mají význam definovaný u obecného vzorce I,

R_s je 3-[4~(3-methoxyfenyl)piperazin- 1-yl]propyl nebo 3-[4-(2-pyrimidinyÍ)piperazin-lyljpropyl, a

R, je atom vodíku.

Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce IA nebo její sůl nebo její solvát.

Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela pod obecný vzorec í, majících obecný vzorec IB

-5CZ 301697 B6 ° (IB).

ve kterém

R_b R₂, R₃, R4 a R₅ mají význam definovaný u obecného vzorce I,

R_s je 3-pyridyl nebo 3-(6-methoxy)pyridyI a

R_t je atom vodíku.

Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce IB nebo její sůl nebo její solvát. Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela pod obecný vzorec I, majících obecný vzorec IC

ve kterém

R₂, R4 a R₅ mají význam definovaný u obecného vzorce I,

R₅ je 2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4_yl,

R, je atom vodíku,

R₃ je 3-ethoxyskupina a

Ri je 5-chlor nebo 5-methoxyskupina.

Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce IC nebo její sůl nebo její solvát. Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela pod obecný vzorec I majících obecný vzorec ID

6CZ 301697 B6 ve kterém

Ri, R₂, R4 a Rs mají význam definovaný u obecného vzorce I,

Rg je 2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl,

Rt je atom vodíku,

R₃ je 2-methoxyskupina,3-methoxyskupina, 3-ethoxyskupina, 3-propoxyskupina, 10 3-benzyloxyskupína, 3-(2-ethoxykarbonyIová skupina), 3-(2-hydroxyethoxyskupina).

3-(2,3-dihydroxypropoxyskupína), 3-(2-dimethylaminoethoxyskupina) nebo 3-(3_aminopropoxyskupina) a 3-hydroxyskupina a

R4 je 5-methoxyskupina nebo atom vodíku.

Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce ID nebo její sůl nebo její solvát. Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela pod obecný vzorec I majících obecný vzorec IE

ve kterém

Ri, R₂, R4 a R₅ mají význam definovaný u obecného vzorce I,

Re je l,2,2,6,6-pentamethylpiperidin-4-yl,

R, je atom vodíku a

R₃ je 2-methoxyskupina nebo 3-ethoxyskupina a

R4 je 5-methoxyskupina nebo atom vodíku.

Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce IE nebo její sůl nebo její solvát. Existuje podskupina sloučenin spadajících zcela pod obecný vzorec I majících obecný vzorec IF

ve kterém

7CZ 301697 B6

Ri, R₂, R₃, R4 a R₅ mají význam definovaný u obecného vzorce I,

Rs je 1 —benzy 1 p i per id i n^4—y 1, 1 -(4-ethoxykarbonyl)butylpiperidin-4-y 1, 1 -(4-hydroxy5 karbonyl)butylpiperidin-4-yl a

Rt je atom vodíku.

Předložený vynález tudíž poskytuje sloučeninu obecného vzorce IF nebo její sůl nebo její solvát.

Jakje zde používán, pojem „alkyl“ zahrnuje alkylové skupiny s přímým nebo rozvětveným řetězcem, které mají od 1 do 12, vhodně od 1 do 6, výhodně od 1 do 4, atomů uhlíku, jako jsou methylová, ethylová, n- a isopropylová a n- iso- a terč-butylová a pentylová skupina a také zahrnuje tyto alkylové skupiny při tvorbě části jiných skupin, jako jsou alkoxyskupina nebo alkanoylová skupina.

Vhodné substituenty kterékoli alkylové skupiny zahrnují heterocyklylové skupiny, například piperazinyl.

Jakje zde používán, pojem „aryl“ zahrnuje fenyl a naftyl, obzvláště fenyl.

Vhodné případné substituenty jakékoli arylové skupiny zahrnují až 5 substituentů, vhodně až 3 substituenty, zvolené z alkylové skupiny, alkoxyskupiny, thioalkylové skupiny, hydroxyskupiny, atomu halogenu, arylové skupiny, heterocyklylové skupiny, trifluormethylové skupiny, alkyl25 karbonylové skupiny, kyanoskupiny, nitroskupiny nebo skupiny -NR„R_v,kde R_u a R_v každý nezávisle představují atom vodíku, alkylovou skupinu nebo alkylkarbonylovou skupinu.

Vhodné aralkylové skupiny zahrnují fenethylovou a benzylovou skupinu, obzvláště benzylovou skupinu.

Výhodně substituované aralkylové skupiny jsou substituovány v arylové části.

Jak jsou zde používány, pojmy „heterocyklický“ a „heterocyklyl“ zahrnují nasycené nebo nenasycené jednoduché nebo kondenzované kruhové heterocyklické skupiny, přičemž každý kruh má 4 až 11 atomů kruhu, obzvláště 5 až 8, výhodně 5, 6 nebo 7, přičemž tyto atomy kruhu zahrnují 1, 2 nebo 3 heteroatomy zvolené z O, Snebo N. Příklady takových skupin zahrnují piperidyl, pyridyl, piperazinyl a pyrimidinyl.

Vhodné případné substituenty kterékoli heterocyklylové skupiny zahrnují substituenty uvedené u arylové skupiny.

Jakje zde používáno, pojem „halogen“ zahrnuje fluor, chlor, brom a jod, vhodně fluor a chlor, výhodně chlor.

Když je zde použit, zahrnuje pojem „acyl“ alkylkarbonylovou skupinu.

Jisté ze sloučenin obecného vzorce I mohou obsahovat chirální atomy a/nebo násobné vazby a mohou tudíž existovat jako stereoizomery. Tento vynález zahrnuje všechny stereoizomemí formy sloučenin obecného vzorce 1, včetně geometrických izomerů, diastereoizomerů, enantiomerů a jejich směsí, včetně racemických modifikací. Stereoizomery se mohou dělit nebo rozštěpit obvyklými způsoby nebo jakýkoli daný izomer se může získat obvyklými stereospecifickými nebo asymetrickými syntézami.

-8*

Vhodnými solemi jsou farmaceuticky přijatelné soli.

Vhodné farmaceuticky přijatelné soli zahrnují adiční soli s kyselinou a soli karboxylových skupin.

Vhodné farmaceuticky přijatelné adiční solí s kyselinou zahrnují soli s anorganickými kyselinami, například jako kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou bromovodíkovou, kyselinou orthofosforečnou nebo kyselinou sírovou, nebo s organickými kyselinami jako například s kyselinou methansulfonovou, kyselinou toluensulfonovou, kyselinou octovou, kyselinou propionovou, io kyselinou mléčnou, kyselinou citrónovou, kyselinou fumarovou, kyselinou jablečnou, kyselinou jantarovou, kyselinou salicylovou, kyselinou maleinovou, kyselinou glycerofosforečnou nebo kyselinou acetylsalicylovou.

Vhodné farmaceuticky přijatelné soli karboxylových skupin zahrnují kovové soli, jako například soli hlinité, soli alkalických kovů, jako je sodík nebo draslík a lithium, soli kovů alkalických zemin, jako je vápník a hořčík a amoniové nebo substituované amoniové soli, například soli s alkylaminy s 1 až 6 atomy uhlíku, jako je triethylamin, s hydroxyalkylaminy s 1 až 6 atomy uhlíku, jako je 2-hydroxyethylamin, bis(2-hydroxyethyl)amin nebo tri(2-hydroxyethyl)amin, s cykloalkylaminy, jako je dicyklohexylamin, nebo s prokainem, 1,4-diben2ylpiperidinem,

N-benzyl-b-fenethylaminem, dehydroabietylaminem, Ν,Ν-bisdehydroabiety lam inem, glukaminem, N-methylglukaminem nebo s bázemi pyridinového typu, jako je pyridin, kollidin nebo ehinolin.

Vhodné solváty sloučenin obecného vzorce I jsou farmaceuticky přijatelné solváty, jako jsou hydráty.

Soli a/nebo solváty sloučenin obecného vzorce I, které nejsou farmaceuticky přijatelné, mohou být užitečné jako meziprodukty při výrobě farmaceuticky přijatelných solí a/nebo solvátů sloučenin obecného vzorce I nebo sloučenin obecného vzorce 1 samotných a jako takové tvoří další aspekt předloženého vynálezu.

Sloučenina obecného vzorce I se může vyrobit amidací vhodné karboxylové kyseliny vhodným aminem. Předložený vynález tudíž také poskytuje způsob výroby sloučeniny obecného vzorce I nebo její soli nebo jejího solvátu, přičemž tento způsob zahrnuje amidaci sloučeniny obecného vzorce II

⁰ (Π), ve kterém

R_r, R2 , Ry a R4 každý zvlášť představuje R_b R₂, R₃ a R4, které mají význam definovaný 40 u obecného vzorce I, nebo jeho chráněnou formu, sloučeninou obecného vzorce III

HNR_sRt (III), ve kterém

-9CZ 301697 B6

R_s a R_t každý představují Rg a Rt, které mají význam definovaný u obecného vzorce I, nebo jeho chráněnou formu a následně, pokud je to nezbytné, provedení jednoho nebo více z následujících kroků:

(i) konverze jedné sloučeniny obecného vzorce I na jinou sloučeninu obecného vzorce I, (ii) odstranění jakékoli chránící skupiny, (iii) příprava soli nebo solvátu sloučeniny takto vzniklé,

Vhodné způsoby amidace zahrnují zpracování sloučeniny obecného vzorce II se sloučeninou obecného vzorce III.

Reakce mezi sloučeninami obecného vzorce 11 a 111 se může provádět za příhodných amidačních podmínek, například v aprotickém rozpouštědle, jako jsou dimethylformamid, acetonitril a tetrahydrofuran, při jakékoli teplotě poskytující vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, příhodně při teplotě místnosti, výhodně se amidační reakce provádí za přítomnosti peptidového kondenzačního činidla, jako je 1-hydroxybenzotriazol (HOBT) a/nebo hydrochlorid 1—(3—dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimidu (WSC).

Sloučenina obecného vzorce II se může připravit cyklizací sloučeniny obecného vzorce IV

ve kterém

R,, Rj, R₃ a R4 mají význam definovaný u obecného vzorce II a

R_p představuje chráněnou karboxylovou skupinu nebo skupinu převoditelnou na karboxylovou skupinu, a poté, podle požadavku, převedení skupiny Rp na karboxylovou skupinu.

Vhodně se cyklizační reakce provádí za redukčních cyklizačních podmínek, například za použití směsí práškové železo/kyselina octová nebo hydrogensiřičitanu alkalického kovu, jako je hydrogensiričitan sodný, v jakémkoli vhodném rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, ethanol, methanol nebo voda nebo jejich směsi, při jakékoli teplotě poskytující vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, jako je zvýšená teplota, příhodně při teplotě zpětného toku rozpouštědla.

Když R_p je chráněná karboxylová skupina, vhodné skupiny zahrnují nižší alkoxykarbonylové skupiny, například methoxykarbonylovou skupinu nebo ethoxy karbony lovou skupinu, které mohou být odstraněny obvyklými způsoby hydrolýzy, například za použití bazické hydrolýzy s využitím ethanolického hydroxidu draselného.

Když Rp je skupina převoditelná na karboxylovou skupinu, vhodné skupiny zahrnují kyanoskupinu. Takové skupiny se mohou převést na karboxylové skupiny za použití obvyklých

-10CZ 301697 B6 způsobů, například když Rp je kyanoskupina, může být převedena na karboxylovou skupinu hydrolýzou za použití obvyklých způsobů, například za použití bazické hydrolýzy s využitím roztoku hydroxidu draselného v ethanolu při teplotě zpětného toku.

Výhodně Rp je kyanoskupina.

ve kterém

Ri- a R₂ mají význam definovaný u obecného vzorce II se sloučeninou obecného vzorce VI

ve kterém

R₃ a R4 a Rp mají význam definovaný u obecného vzorce IV a

L, představuje odstupuj ící skupinu, jako je atom halogenu, například chloru.

Reakce mezi sloučeninami obecného vzorce V a VI se může provádět v inertním uhlovodíkovém rozpouštědle, jako je cyklohexan, při jakékoli teplotě poskytující vhodnou iychlost tvorby požadovaného produktu, jako je zvýšená teplota, příhodně při teplotě zpětného toku rozpouštědla a za přítomností báze, výhodně terciárního aminu, jako je triethylamin.

Reakce mezi sloučeninami obecných vzorců V a VI probíhá cestou meziproduktu, který se obvykle neizoluje a který poskytuje požadovanou sloučeninu obecného vzorce IV při zahřívání in šitu. V alternativním aspektu se meziprodukt izoluje, čímž poskytne alternativní přípravu sloučeniny obecného vzorce IV, kde se sloučenina obecného vzorce VII ve kterém

(VID.

-11 CZ 301697 B6

R_t, R₂, R₃ a R4 mají význam definovaný u obecného vzorce II a R_p má význam definovaný u obecného vzorce IV, zahřívá k poskytnutí sloučeniny obecného vzorce IV jakje uvedeno výše.

Konverze sloučeniny VII na sloučeninu obecného vzorce IV se příhodně provádí v polární směsi rozpouštědel, jako je dioxan a voda, obvykle při teplotě zpětného toku směsi rozpouštědel za podmínek analogických podmínkám popsaným v J. Het. Chem., 11, 219 až 221 (1974).

Sloučeniny obecného vzorce V jsou známými sloučeninami nebo se připraví za použití způsobů analogických způsobům použitým k přípravě známých sloučenin, jako jsou způsoby, které jsou popsány v Meervein a kol., Ann. Chem., 641, 1 (1961) a Org, Synth, Collective VII, 34 až 41.

Sloučeniny obecného vzorce VI jsou známé, jsou komerčně dostupné nebo se připraví za použití způsobů analogických způsobům použitým k přípravě známých sloučenin, jako jsou sloučeniny popsané v J. March, Advanced Organic Chemistry, 3. vydání (1985), Wiley Interscience.

Sloučeniny obecného vzorce III jsou známé nebo se připraví za použití způsobů analogických způsobům použitým k přípravě známých sloučenin, jako jsou sloučeniny popsané v J. March, Advanced Organic Chemistry, 3. vydání, Wiley Interscience.

Aminy obecného vzorce HNR_S Rt se mohou připravit za použití způsobů známých v oboru pro přípravu aminů, například jak je uvedeno v Houben-Weil, Methoden der Organischen Chemie, díl XI/1 (1957) a díl El6d/2 (1992), Georg Thieme Verlag, Stuttgart.

Alternativně se sloučenina obecného vzorce II může připravit cyklizací sloučeniny obecného vzorce VIII

ve kterém

Ri, R₂, R₃ a R4 mají význam definovaný u obecného vzorce II a

Rp- představuje chráněnou karboxylovou skupinu nebo skupinu převoditelnou na karboxylovou 35 skupinu, a poté, podle požadavku, převedením skupiny R_p na karboxylovou skupinu.

Vhodně se cyklizační reakce provádí za použití Suzukiho reakčních podmínek za použití palladiového katalyzátoru, jako je chlorid bis(acetonitril)palladnatý, za přítomnosti organické báze, jako je triethylamin, v jakémkoli vhodném rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, pri jakékoli teplotě poskytující vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, výhodně při zvýšené teplotě, jako při teplotě zpětného toku rozpouštědla.

Když Rp je chráněná karboxylová skupina, vhodné chránicí skupiny zahrnují alkoxykarbonylové skupiny, například benzyloxykarbonylovou skupinu, které mohou být odstraněny obvyklými

-12CZ 3U1W7 Bb hydrolytickýmí způsoby, například za použití bazické hydrolýzy s využitím ethanolického roztoku hydroxidu draselného.

Výhodně Rp je benzyloxykarbonylová skupina.

Sloučenina obecného vzorce VIII se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce IX

(K).

ve kterém

Ri a R₂ mají význam definovaný u obecného vzorce II, se sloučeninou obecného vzorce X

(X).

ve kterém

R₃ a R4 mají význam definovaný u obecného vzorce II a 15

Rp má význam definovaný u obecného vzorce VIII.

Reakce mezi sloučeninami obecného vzorce IX a X se může provádět v aprotickém rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, při jakékoli teplotě, která poskytne vhodnou rychlost tvorby požadova20 ného produktu, výhodně od 0 do 25 °C, za přítomnosti palladiového katalyzátoru, výhodně chloridu bis(trifenylfosfin)palladnatého, a soli mědi, výhodně jodidu měďného.

Sloučeniny obecného vzorce IX jsou známými sloučeninami nebo se připraví za použití způsobů analogických způsobům použitým k přípravě známých sloučenin, jako jsou sloučeniny, které popsal Yu M. S. a kol., Tetrahedron Letters, 39,9347 (1998).

Sloučeniny obecného vzorce X se připraví reakcí sloučeniny obecného vzorce XI

<XD.

ve kterém

R₃ a R4 mají význam definovaný u obecného vzorce II a Rp- má význam definovaný u obecného vzorce VIII, se sloučeninou obecného vzorce XII

-13CZ 301697 B6

- SíMe (XII)

Reakce mezi sloučeninami obecného vzorce XI a XII se může provádět v aprotickém rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran, při jakékoli teplotě, která poskytne vhodnou rychlost tvorby požadovaného produktu, výhodně od 0 do 25 °C, za přítomnosti palladiového katalyzátoru, výhodně chloridu bis(trifenylfosfin)palladnatého, a soli mědi, výhodně jodidu měďného, a za přítomnosti báze, výhodně terciárního aminu, jako je triethylamin.

Reakce mezi sloučeninami obecných vzorců XI a XII probíhá cestou meziproduktu, který, pokud je to potřebné, se neizoluje a který poskytuje požadovanou sloučeninu obecného vzorce X io odstraněním chránící sily lově skupiny pomocí n-tetrabutylamoniumťluoridu. V alternativním aspektu se meziprodukt izoluje, čímž poskytne alternativní přípravu sloučeniny obecného vzorce X, kde se sloučenina obecného vzorce XIII

(xhd, ve kterém

R₃ a R4 mají význam definovaný u obecného vzorce II a R_p má význam definovaný u obecného vzorce VIII, se zahřívá k poskytnutí sloučeniny obecného vzorce X jak je uvedeno výše.

Sloučeniny obecného vzorce XI jsou známými sloučeninami nebo se připraví za použití způsobů analogických způsobům použitým k přípravě známých sloučenin, jako jsou sloučeniny, které popsal Buehler a kol., J. Am. Chem. Soc., 68, 574 (1946).

Sloučenina obecného vzorce I nebo její sůl nebo její solvát se může izolovat z výše uvedených způsobů podle standardních chemických postupů.

Příprava solí a/nebo solvátů sloučenin obecného vzorce I se může provádět za použití příhodného obvyklého postupu.

Pokud je to žádoucí, mohou se směsi izomerů sloučenin podle tohoto vynálezu dělit na jednotlivé stereoizomery obvyklými prostředky. Například enantiomery se mohou rozštěpit za použití opticky aktivní kyseliny jako štěpícího činidla. Vhodné opticky aktivní kyseliny, které se mohou použít jako štěpící činidla, jsou popsány v „Topics in Stereochemistry“, díl 6, Willey

Interscience, 1971, redaktoři AllingerN. L. a Eliel W. L.

Alternativně se může jakýkoli enantiomer sloučeniny podle tohoto vynálezu získat stereospecifickou syntézou za použití opticky čistých výchozích materiálů známé konfigurace.

Absolutní konfigurace sloučenin se může stanovit obvyklými postupy, jako jsou rentgenové krystalografické techniky.

- 14CZ 301697 B6

Chránění jakékoli reaktivní skupiny se může provádět v jakémkoli příhodném kroku výše uvedených způsobů. Vhodné chránící skupiny zahrnují skupiny používané v oboru obvykle pro každou chráněnou skupinu. Chránící skupiny se mohou připravit a odstranit za použití příhodného obvyklého postupu, například hydroxyskupíny, včetně diolů, mohou být chráněny jako silylované deriváty zpracováním s příhodným silylačním činidlem, jako je di-řerc-butylsilylbis(trifluormethansulfonát). Silylová skupina se poté může odstranit za použití obvyklých postupů, jako je zpracování s fluorovodíkem, výhodně ve formě pyridinového komplexu a případně za přítomnosti hliníku, nebo zpracováním s acetylchloridem v methanolu. Alternativně mohou být k ochraně fenolických skupin použity benzyloxylové skupiny, přičemž tyto benzyloxylové skupiny mohou být odstraněny za použití katalytické hydrogenolýzy s využitím takových katalyzátorů, jakoje chlorid palladnatý nebo 10% palladium na uhlí.

Aminoskupiny mohou být chráněny za použití obvyklých chránících skupin, například tercbutylestery karbamové kyseliny mohou být vytvořeny zpracováním aminoskupiny s di-Zerc.15 butyldikarbonátem, přičemž aminoskupina se regeneruje hydrolýzou esteru za kyselých podmínek, s využitím například chlorovodíku ve vodném ethanolu nebo kyseliny trifluoroctové v methylendichloridu. Aminoskupina se může chránit jako benzylový derivát, připravený z příhodného aminu a benzylhalogenidu za bazických podmínek, přičemž se benzylová skupina odstraní katalytickou hydrogenolýzou za použiti například katalyzátoru palladia na uhlí.

Indolové skupiny NH a obdobné skupiny mohou být chráněny za použití jakékoli obvyklé skupiny, například benzensulfonylové skupiny, methylsulfonylové skupiny, tosylové, skupiny, formylové skupiny, acetylové skupiny (všechny z nich jsou odstranitelné zpracováním s alkalickými činidly), benzylové skupiny (odstranitelné buď sodíkem v kapalném amoniaku, nebo A1CI₃ v toluenu), allylové skupiny (odstranitelné zpracováním s chloridem rhoditým za kyselých podmínek), benzyloxykarbonylové skupiny (odstranitelné bud* katalytickou hydrogenací, nebo alkalickým zpracováním), trifluoracetylové skupiny (odstranitelné buď alkalickým, nebo kyselým zpracováním), terc.-butyldimethylsilylové skupiny (odstranitelné zpracováním s tetrabutylamoniumfluoridem), 2-(trimethylsilyl)ethoxymethylové skupiny (SEM) (odstranitelné zpra30 cováním s tetrabutylamoniumfluoridem za přítomnosti ethylendiaminu), methoxymethylové skupiny (MOM) nebo methoxyethylové skupiny (MEM) (odstranitelné kyselým zpracováním za mírných podmínek).

Karboxylové skupiny se mohou chránit jako alkylestery, například methylestery, přičemž tyto esteiy se mohou připravit a odstranit za použití obvyklých postupů, jedním příhodným postupem pro konverzi methoxykarbonylové skupiny na karboxylovou skupinu je použití vodného roztoku hydroxidu lithného.

Odstupující skupinou je jakákoli skupina, která se, za reakčních podmínek, odštěpí z výchozího materiálu, čímž navodí reakci na specifickém místě. Příklady takových skupin, pokud není uvedeno jinak, jsou atomy halogenu, mesyloxyskupina, p-nítrobenzensulfonyloxyskupina a tosyloxyskupina.

Soli, estery, amidy a solváty sloučenin zde uvedených mohou podle požadavku být vytvořeny způsoby v oboru obvyklými. Například adiční soli s kyselinou se mohou připravit zpracováním sloučeniny obecného vzorce I s příhodnou kyselinou.

Estery karboxylových kyselin se mohou připravit obvyklými esterifikačními postupy, například alkylestery se mohou připravit zpracováním požadované karboxylové kyseliny s příhodným alka50 nolem, obecně za kyselých podmínek.

Amidy se mohou připravit za použití obvyklých amidačních postupů, například amidy obecného vzorce CONRs Rt se mohou připravit zpracováním relevantní karboxylové kyseliny s aminem obecného vzorce HNRe-R,·» kde Rj a Rt mají význam definovaný výše.

-15CZ 301697 B6

Alternativně alkylestery s 1 až 6 atomů uhlíku, jako je methylester kyseliny, se mohou zpracovat s aminem výše definovaného obecného vzorce HNR_S R, k poskytnutí požadovaného amidu, případně za přítomnosti trimethylhlíníku podle postupu popsaného v Tetrahedron Lett., 48, 4171 až 4173 (1977).

Jakje uvedeno výše, mají sloučeniny podle tohoto vynálezu užitečné terapeutické vlastnosti.

Obzvláštní zájem je věnován osteoporóze spjaté s peří- a postmenopauzálními stavy. Zahrnuty jsou rovněž léčba a profylaxe Pagetovy choroby, hyperkalcémie spjatá s kostními neoplasmaty io a všechny typy osteoporotických chorob, jak jsou klasifikovány dále podle jejich etiologie: Primární osteoporóza ínvoluční typu I neboli postmenopauzální typu II neboli senilní juvenilní idiopatická u mladých dospělých

Sekundární osteoporóza endokrinní, abnormalita hyperthyroídismus hypogonadismus ovariální ageneze neboli Turnérův syndrom hyperadrenokorticismus neboli Cushingův syndrom hyperparathyroidismus abnormality kostní dřeně mnohočetný myelom a související poruchy systémová mastocytóza diseminovaný karcinom Gaucherova choroba abnormality pojivové tkáně osteogenesis imperfecta homocystinurie syndrom Ehlers-Danlos Marťanův syndrom Menkeho syndrom různé příčiny imobilizace nebo kachexie Sudeckova atrofíe chronická obstrukční plicní choroba chronický alkoholismus chronické podávání heparinu chronické užívání antikonvulzivních léčiv

Tento vynález dále zahrnuje léčbu tumorů, zvláště tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vezikulámí stomatitidy, virus Newcastleské choro50 by, víry chřipky A a B, virus HIV), vředy (například chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter pylori), pro použití jako imunosupresivní činidlo při autoimunitních chorobách a transplantaci, antilipidemické činidlo pro léčbu a/nebo prevenci hypercholesterolemických a aterosklerotíckých chorob a má se za to, že jsou užitečné pri léčbě AIDS a Alzheimerovy choroby. Tyto sloučeniny také považovány za užitečné pri léčbě angiogenních

-16CZ 301697 B6 chorob, tj. těch patologických stavů, které jsou závislé na angiogenezi, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriáza a solidní tumory.

Předložený vynález tedy poskytuje způsob léčby a/nebo profylaxe chorob spjatých s nadměrnou aktivitou osteoklastů u savců, přičemž tento způsob zahrnuje podávání účinného netoxického množství sloučeniny obecného vzorce I nebojejí farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu.

V dalším aspektu předložený vynález poskytuje způsob léčby osteoporózy a souvisejících osteoio penních chorob u lidí a savců jiných, než je člověk, který zahrnuje podávání účinného, netoxického množství sloučeniny obecného vzorce 1 nebojejí farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu člověku nebo savci jinému, než je člověk, který to potřebuje.

V dalším aspektu předložený vynález také poskytuje způsob léčby tumorů, zvláště tumorů souvi15 sejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vezikulámí stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a B, virus HIV), vředy (například chronické gastritidy a peptidického vředu indukovaného Helicobacter pylori), autoimunitními chorobami a transplantací, k léčbě a/nebo prevenci hypercholesterolemických a aterosklerotických chorob,

AIDS a Alzheimerovy choroby, angiogenních chorob, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriáza a solidní tumory, u lidí a savců jiných, než je člověk, který zahrnuje podávání účinného, netoxického množství sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo jejího farmaceuticky přijatelného solvátu člověku nebo savci jinému, než je člověk, který to potřebuje.

V ještě dalším aspektu předloženým vynálezem je sloučenina obecného vzorce I nebojejí farmaceuticky přijatelná sůl nebo jejího farmaceuticky přijatelný solvát pro použití jako aktivní terapeutická látka.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález sloučeninu obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebojejí farmaceuticky přijatelný solvát pro použití při léčbě nebo profylaxí chorob spjatých s nadměrnou aktivitou osteoklastů u savců.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález sloučeninu obecného vzorce I nebo její farma35 ceuticky přijatelnou sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát pro použití při léčbě nebo profylaxi osteoporózy a souvisejících osteopenních chorob.

V dalším aspektu představuje předložený vynález sloučeninu obecného vzorce I nebojejí farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát pro použiti k léčbě tumorů, zvláště tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vezikulámí stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a B, virus HIV), vředy (například chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter pylori), autoimunitními chorobami a transplantací, k léčbě a/nebo prevenci hypercholesterolemických a atero45 sklerotických chorob, AIDS a Alzheimerovy choroby, angiogenních chorob, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriáza a solidní tumory, u člověka a savce jiného, než je člověk.

Sloučenina obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl nebo její farmaceuticky přijatelný solvát se může podávat jako taková nebo, výhodně, jako farmaceutický prostředek rovněž zahrnující farmaceuticky přijatelný nosiě.

Předložený vynález tudíž také poskytuje farmaceutický prostředek obsahující sloučeninu obecného vzorce I nebojejí farmaceuticky přijatelnou sůl nebojejí farmaceuticky přijatelný solvát a její farmaceuticky přijatelný nosič.

-17CZ 301697 B6

Aktivní sloučeniny nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli nebo jejich farmaceuticky přijatelné solváty se obvykle podávají ve formě dávkové jednotky.

Množství účinné k léčbě poruch zde výše popsaných závisí na takových faktorech, jako je účinnost aktivních sloučenin, zvláštní povaze zvolené farmaceuticky přijatelné soli nebo farmaceuticky přijatelného solvátu, povaze a závažnosti léčených poruch a hmotnosti savce. Dávková jednotka však bude obvykle obsahovat od 0,01 do 50 mg, například od 1 do 25 mg, sloučeniny podle tohoto vynálezu. Dávkové jednotky budou obvykle podávány jednou nebo více než jednou za den, například 1-, 2-, 3-, 4-, 5- nebo 6-krát za den, obvykleji 1- až 3-krát nebo 2- až 4-krát za den tak, aby celková denní dávka byla obvykle v rozmezí, pro dospělého o hmotnosti 70 kg, od 0,01 do 250 mg, obvykleji od 1 do 100 mg, například od 5 do 70 mg, tj. v rozmezí od přibližně 0,0001 do 3,5 mg/kg za den, obvykleji od 0,01 do 1,5 mg/kg za den, například od 0,05 do 0,7 mg/kg za den.

Při takové léčbě se může aktivní sloučenina podávat jakoukoli vhodnou cestou, např. orální, parenterální nebo topickou cestou. Pro takové použití se sloučenina obvykle použije ve formě farmaceutického prostředku ve spojení s humánním nebo veterinárním farmaceutickým nosičem, ředidlem a/nebo pomocnou látkou, ačkoliv přesná forma prostředku bude přirozeně záviset na způsobu podání.

Prostředky se připraví smísením a jsou vhodně upraveny pro orální, parenterální nebo topické podání, a jako takové mohou být ve formě tablet, kapslí, orálních kapalných prostředků, prášků, granulí, pokroutek, pastilek, rekonstitubílních prášků, injektabilních a infundabilních roztoků nebo suspenzí, čípků a transdermálních prostředků. Prostředky k orálnímu podání jsou výhodné, obzvláště tvarované orální prostředky, jelikož jsou vhodnější pro obecně použití.

Tablety a kapsle pro orální podání jsou obvykle předkládány v dávkové jednotce a obsahují obvyklé pomocné látky, jako jsou pojivá, plnidla, ředidla, tabletovací činidla, mazadla, dezinte30 grancia, barviva, příchutě a zvlhčovadla. Tablety mohou být potaženy podle způsobů v oboru dobře známých.

Vhodná plnidla pro použití zahrnují celulózu, mannitol, laktózu a jiné podobné látky.

Vhodná dezintegrancia zahrnují škrob, polyvinylpyrrolidon a deriváty Škrobu, jako je natriumglykolát škrobu. Vhodná mazadla zahrnují například stearát hořečnatý. Vhodná farmaceuticky přijatelná zvlhčovadla zahrnují laurylsíran sodný.

Tyto tuhé orální prostředky se mohou připravit obvyklými způsoby míšení, plnění, tabletování nebo podobně. Opakované mísící operace se mohou použít k distribuci aktivní látky v těch prostředcích za využití velkých množství plnidel. Takové operace jsou samozřejmě v oboru obvyklé.

Orální kapalné prostředky mohou být ve formě například vodných nebo olejových suspenzí, roztoků, emulzí, sirupů nebo elixírů, nebo mohou být předloženy jako suché produkty k rekonstituci vodou nebo jiným vhodným vehikulem před použitím. Takové kapalné prostředky mohou obsahovat obvyklé přísady, jako jsou suspenzační činidla, například sorbitol, sirup, methylcelulózu, želatinu, hydroxyethylcelulózu, karboxymethylcelulózu, gel stearátu hlinitého nebo hydrogenované jedlé tuky, emulgační činidla, například lecitin, monooleát sorbitanu nebo arabskou gumu, nevodná vehikula (která mohou zahrnovat jedlé oleje), například mandlový olej, frakcionovaný kokosový olej, olejové estery, jako jsou estery glycerinu, propylenglykol nebo ethylalkohol, konzervancia, například methyl- nebo propyl-p-hydroxybenzoát nebo kyselinu sorbovou, a pokud je to žádoucí, obvyklé příchutě a barviva.

-18CZ 301097 Bb

Pro parenterální podání se připraví kapalné dávkové jednotky obsahující sloučeninu podle předloženého vynálezu a sterilní vehikulum. Sloučenina, v závislosti na vehikulu a koncentraci, může být buď suspendována, nebo rozpuštěna. Parenterální roztoky se obvykle připraví rozpuštěním sloučeniny ve vehikulu a sterilizaci filtrací před plněním do vhodné skleničky nebo ampule a uzavřením. Výhodně se ve vehikulu také rozpustí pomocné látky, jako jsou lokální anestetika, konzervancia a pufty. K posílení stability se prostředek může po naplnění do skleničky zmrazit a voda odpařit ve vakuu.

Parenterální suspenze se připraví v podstatě stejným způsobem s tím rozdílem, že sloučenina se io suspenduje ve vehikulu místo rozpuštění a sterilizuje se expozicí ethylenoxidu před suspendováním ve sterilním vehikulu. Výhodně se do prostředku zahrne povrchově aktivní látka nebo zvlhčovadlo k usnadnění rovnoměrného rozložení aktivní sloučeniny.

Pro topické podání může prostředek být ve formě transdermálního mazání nebo náplastí pro is systémové podání aktivní sloučeniny a může se připravit obvyklým způsobem, například podle popisu ve standardních učebnicích, jako je „Dermatological Formulations“ - B. W. Bány (Drugs and Pharmaceuticak Sciences - Dekker) nebo Hany's Cosmeticology (Leonard Hill Books).

Předložený vynález tudíž poskytuje použití sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo její farmaceuticky přijatelného solvátu pro výrobu léčiva k léčbě a/nebo profylaxi chorob spjatých s nadměrnou aktivitou osteoklastů u savců.

V dalším aspektu poskytuje předložený vynález použití sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli nebo její farmaceuticky přijatelného solvátu pro výrobu léčiva k léčbě a/nebo profylaxi osteoporózy a souvisejících osteopenních chorob.

V ještě dalším aspektu poskytuje předložený vynález použití sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné solí nebo její farmaceuticky přijatelného solvátu pro výrobu léčiva k léčbě tumorů, zvláště tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy (například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vezikulámí stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a B, virus HIV), vředy (například chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter pylori), autoimunitními choroby a transplantací, k léčbě a/nebo prevenci hypercholesterolemických a aterosklerotických chorob, AIDS a Alzheimerovy choroby, angiogenních chorob, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriáza a solidní tumory.

U sloučenin podle tohoto vynálezu se nepředpokládají žádné nepřijatelné toxikologické účinky, pokud se podávají v souladu s tímto vynálezem. Jako obvyklá praxe budou prostředky obvykle doprovázeny psanými nebo tištěnými pokyny pro použití při dotčené léčbě.

Následujícími popisy, příklady a farmakologické metody vynález ilustrují, ale žádným způsobem jej neomezují.

Příklady provedeni vynálezu

Popis 1 trans-4,5-Dichlor-2-nitro-p-dimethylaminostyren

19CZ 301697 B6

CiRoztok 10,3 g (50 mmol) 4,5-dichlor-2”nitrotoluenu (Helv. Chim. Acta, 19, 434 až 439 (1936)) ve směsi ll,9g (100 mmol) Ν,Ν-dímethylformamiddimethylacetalu v dimethylformamidu (25 ml) se zahřívá na teplotu 100 °C 16 hodin. Tmavá reakční směs se odpaří ve vakuu, odparek se naředí methylenchloridem a promyje se dvakrát vodou. Organický roztok se vysuší síranem hořečnatým, poté se odpaří ve vakuu, Čímž se získá 12,6 g (48 mmol, výtěžek 96,5 %) surové sloučeniny pojmenované v záhlaví jako tmavě červených krystalů.

io Popis 2

2-Methoxy-4-kyanbenzoylchlorid

—o

Kyselina 2-methoxy-4-kyanbenzoová (Tetrahedron Letters, 27(49), 5997 až 6000 (1986)) 15 (1 g, 5,6 mmol) se rozpustí v dichlormethanu (20 ml). Do roztoku se rychle zavede oxalylchlorid (1,5 ml, 8,2 mmol) a přidá se kapka dimethylformamidu. Proběhne silná reakce s nadměrnou tvorbou plynných produktů. Roztok se míchá 1 hodinu, poté se nechá stát přes noc. Rozpouštědlo se odpaří za použití rotační odparky k získání 1,1 g bělavé tuhé látky (5,6 mmol, výtěžek 99 %), která se použije bez dalšího čištění.

Popis 3

3-Methoxy-4-[2-[(4,5-dichlor-2-nitro)feny 1 j-1-oxoethyl] benzonitril

2-Methoxy-4-kyanbenzoylchlorid (1,1 g, 5,6 mmol), připravený podle popisu 3, se po částech přidá do míchaného roztoku trans-4,5-dichlor-2-nitro-p-dimethylaminostyrenu (1,47 g, 5,6 mmol) a triethylaminu (1,5 ml, 10 mmol) v cyklohexanu (20 ml). Roztok se poté zahřívá na teplotu zpětného toku 16 hodin. Reakční směs se ochladí a všechny těkavé produkty se odpaří za použití rotační odparky. Získá se tmavý odparek, kteiý se poté rozpustí v dichlormethanu (40 ml) a jednou promyje 10% roztokem uhličitanu sodného (20 ml). Organická vrstva se poté vysuší bezvodým síranem sodným, zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří za použití rotační odparky. Získá se tmavě hnědý až černý prášek (2,42 g), který se rozpustí v co nejmenším množství ethylacetátu a k tomuto roztoku se přidá hexan k vysrážení světle hnědého prášku (1,72 g, t.t. ~ 167 až

170 °C), který se použije bez dalšího čištění v příštím kroku.

Tento surový meziprodukt (1,2 g) se rozpustí v 1,4-dioxanu (20 ml) a přidá se voda (10 ml).

Roztok se 48 hodin zahřívá na teplotu zpětného toku, ještě za horka se zfiltruje a poté se ochladí

-20CZ 301697 B6 na ledové lázni. Na Buchnerově nálevce se zachytí žluté až hnědé krystaly, Čímž se získá 0,60 g (1,6 mmol, výtěžek 30 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví, t.t. = 171 až 174 °C.

'HNMR (CDCh)δ = 8,27 (s, IH); 7,81 (d, IH); 7,49 (s, IH); 7,35 (dd, IH); 7,28 (d, IH); 4,61 ₅ (s, 2H); 4,00 (s, 3H).

Popis 4 i o 3-Methoxy-4-{5,6-dichIor-1 H-indol-2-y l)benzonitri 1

Methoxy-4-[2-(4,5-dichlor-2-nitro)fenyl-l-oxoethyl]benzonitril (0,4 g, 1,0 mmol) se rozpustí v ethanolu (10 ml) a AcOH (10 ml). Roztok se opatrně zahřeje na teplotu zpětného toku a během hodiny se po malých částech přidá železný prášek (0,5 g, 9 mmol). Roztok se zahřívá na teplotu zpětného toku 12 hodin, načež se rozpouštědla odpaří za použití rotační odparky. Odparek se několikrát extrahuje tetrahydrofuranem. Po odpaření rozpouštědla se získá surový 3-methoxy-^h(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)benzonitril (0,35 g, 1,0 mmol, výtěžek 100 %), který se použije v příštím kroku bez dalšího čištění. T.t. = 241 až 244 °C.

'HNMR (DMSO-Λ) δ = 11,60 (s široký, IH); 7,98 (d, IH); 7,85 (s, IH); 7,67 (s, IH); 7,65 (d, 1 H); 7,55 (dd, 1 H); 7,14 (s, IH); 4,00 (s, 3H).

Popis 5 25

Kyselina 3-methoxy-4-(5,6-dichlor-l H-indol-2-yI)benzoová

3-Methoxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-benzonitril (0,35 g, 1,0 mmol) se suspenduje ve 30% roztoku hydroxidu sodného (20 ml) a 95% ethanolu (20 ml). Směs se zahřívá na teplotu zpětného toku 12 hodin a poté se nechá ochladit na teplotu místnosti. Suspenze se odpaří na asi polovinu objemu za použití rotační odparky a poté se zfiltruje na Buchnerově nálevce, čímž se získá hnědě až žlutě zbarvený prášek. Ten se míchá 2 hodiny v 10% kyselině chlorovodíkové. Roztok se poté zfiltruje k získání 0,256 g (0,76 mmol, výtěžek 69 %) surové sloučeniny pojmenované v záhlaví, která se vyčistí chromatografií, k získání 150 mg čisté sloučeniny pojmenované v záhlaví, t.t. >270 °C.

'HNMR (DMSO-Λ) δ= 11,60 (s široký, IH); 7,92 (d, IH); 7,83 (s, IH); 7,66 (m, 3H); 7,10 (s, IH); 4,02 (s, 3H).

-21 CZ 301697 B6

Popis 6

Suspenze methy l-[2-ethoxy-^4-acetamidobenzoátu] (50 g, 211 mmol) ve vodném roztoku hydroxidu sodného (hmotnostně 15%, 200 ml) se mírně zahřívá na teplotu zpětného toku 16 hodin. Výsledný světle hnědý roztok se nechá ochladit na teplotu místnosti a poté se dále ochladí v ledové lázni. Přidává se koncentrovaná kyselina chlorovodíková (hmotnostně 37%) až roztok dosáhne hodnoty pH 6. Tuhá látka vysrážená z roztoku se zfiltruje ve vakuu, vysuší při io teplotě 50 ^ĎC k získání 38,3 g sloučeniny pojmenované v záhlaví (výtěžek 100 %).

Popis 7

V reaktoru o objemu 1 litr vybaveném uzavřeným mechanickým míchadlem se suspenduje kyanid měďný (12 g, 134 mmol) ve 10 ml destilované vody. Za silného míchání se přidá kyanid sodný (18,3 g, 373 mmol) a vnitřní teplota se udržuje pod 40 °C až se veškerý kyanid měďný rozpustí. Suspenze kyseliny 2-ethoxy-4-aminobenzoové (20 g, 110 mmol) ve vodě (200 ml) a koncentrované kyseliny chlorovodíkové (33 ml) se míchá a chladí na ledové lázni. Když teplota dosáhne 5 °C, přidává se po kapkách roztok dusitanu sodného (9,7 g, 140 mmol) ve vodě (30 ml) takovou rychlostí, aby se teplota udržela pod 5 °C. Když se přidá veškerý dusitan sodný, roztok se pomalu zavede přes ledem chlazenou kapací nálevku do reaktoru obsahujícího roztok kyanid sodný/kyanid měďný. Reakce proběhne za silné tvorby dusíku. Přidá se několik kapek oktanolu k udržení pěnění pod kontrolou. Míchání pokračuje 4 hodiny, Výsledná suspenze se poté extrahuje ethylacetátem (3 x 100 ml) a organická fáze se vysuší síranem hořečnatým a odpaří ve vakuu, čímž se získá 15 g sloučeniny pojmenované v záhlaví (výtěžek 71,1 %) jako světle hnědého prášku, t.t. = 170 až 172 °C.

COOH

Popis 8

Kyselina 3-ethoxy-4-{5,6-dichlor-l H-indol-2-yl)benzoová

Ch

Cí‘

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví tak, že se vyjde z kyseliny 2-ethoxy-^l-kyanbenzoové, připravené podle popisu 7, následuje postup podle popisů 1 až 5. Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví s celkovým výtěžkem 18 %, založeno na kyselině 2-ethoxy-^-kyanbenzoové.

'H NMR (DMSO-dó) δ = 11,63 (sširoký, IH); 7,89 (d, 1H); 7,83 (s, IH); 7,65 (s, IH); 7,64 (d, IH); 7,63 (s, IH) 7,13 (s široký, 1H); 4,27 (q, 2H); 1,48 (t, 3H).

-22LZ JUlOy/ BO

Popis 9

Suspenze kyseliny 2,5-dihydroxytereftalové (5 g, 25 mmol), uhličitan draselný (10 g, 72 mmol) a dimethylsulfát (11 ml, 116 mmol) v acetonu (100 ml) se míchá a zahřívá na teplotu zpětného toku 24 hodin. Směs se ještě za horka zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří na asi polovinu původního objemu. Při chlazení se vysráží bílé jehličky a ty se odfiltrují a vysuší, čímž se získá 4,6 g io sloučeniny pojmenované v záhlaví (výtěžek 73 %), t.t. = 141 až 143 °C,

Popis 10

Monomethylester kyseliny 2,5-dimethoxytereftalové

Suspenze dimethyl-[2,5~dimethoxytereftalátu] (4 g, 15,7 mmol), připravený podle popisu 9, v methanolickém hydroxidu draselném (0,86 g hydroxidu draselného ve 100 ml methanolu) se zahřívá na teplotu zpětného toku 25 hodin. Roztok se ochladí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu.

Odparek se zpracuje ředěnou kyselinou chlorovodíkovou a tuhá látka se odfiltruje. Surová směs se vyčistí sloupcovou chromatografií za použití směsi ethylacetát/hexan v poměru 1 : 1 jako rozpouštědla, čímž se získá 1,72 g sloučeniny pojmenované v záhlaví (výtěžek 44,7 %), t.t. = 123 až 124 °C.

Popis 11

Kyselina 2,5-dimethoxy-ⁱH5,6-dichIor-l H-indol-2-yl)benzoová

Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví podle popisu 1 až 5, přičemž se vychází z monomethylesteru kyseliny 2,5-dimethoxy-tereftalové, připraveného podle popisu 10. Sloučenina pojmenovaná v záhlaví se připraví s celkovým výtěžkem 46 %, založeno na monomethylesteru kyseliny 2,5-dimethoxytereftalové.

^lH NMR (DMSO-40 δ = 11,38 (s, široký, IH); 7,79 (s, IH); 7,68 (s, IH); 7,51 (s, IH); 7,43 (s, IH); 7,11 (d, 1H); 3,92 (s, 3H); 3,91 (s, 3H).

-23CZ 301697 B6

Popis 12

Kyselina 4-brom-3-hydroxybenzoová

Br

O

Tato kyselina se připraví podobným způsobem jaký popsal Buehler a kol. (Buehler, C, A., Harris, J. O., Shacklett, C. a Block, Β. P.; J. Am. Chem. Soc., 68, 574 až 577 (1946)). K míchané suspenzi kyseliny 3-hydroxybenzoové (50,0 g, 0,362 mol) v kyselině octové (495 ml), při teplotě místnosti pod atmosférou argonu, se během 2 hodin přidá roztok bromu (57,97 g, 0,3627 mol) v kyselině octové (192 ml). Během přidávání vnitřní teplota vzroste z 18,0 na 22,0 ^ŮC. Směs se io míchá 21 hodinu a poté se odpaří ve vakuu, přičemž se zachytí přibližně 500 ml destilátu. Výsledný koncentrovaný roztok se 2 hodiny skladuje při teplotě 4 ^QC. Výsledná bílá tuhá látka se odfiltruje a promyje studenou vodou (100 ml). Tato tuhá látka se rozpustí v minerálním objemu vroucí vody (220 ml), zfiltruje se a nechá se ochladit na teplotu místnosti. Výsledná tuhá látka se zachytí filtrací, promyje studenou vodou a vysuší ve vakuové sušárně při teplotě 58 °C k získání is sloučeniny pojmenované v záhlaví (12,50 g, výtěžek 15,9 %), t.t. = 231 až 232 °C, (lit. t.t. 225 až

226 °C).

Ή NMR (400,13 MHz, DMSO-de): 13,00 (IH, s široký, CO₂H), 10,64 (IH, s široký, OH), 7,60 (IH, d, H-5, J₅-6 8,0Hz), 7,52 (IH, d, H-2, J_{2 6} 2,0Hz), 7,29 (IH, dd, H-6, J₂_6 2,0 Hz,

Jj_6 8,0 Hz).

Popis 13

Benzylester kyseliny 3-benzyloxy-4-brombenzoové

K míchané suspenzi NaH (10,47 g, 60% hmotnostních, 0,2616 mol) v tetrahydrofuranu (1,40 litru), při teplotě 13,1 °C pod atmosférou argonu se přidá roztok kyseliny 4-brom-3hydroxybenzoové (28,11 g, 0,130 mol) v tetrahydrofuranu (400 ml) během 1,25 hodiny, přičemž vnitrní teplota se udržuje v rozmezí od 4 do 15 °C. Po 1,5 hodině se během 0,5 hodiny přidá roztok benzylbromidu (44,3 g, 0,2591 mol) v tetrahydrofuranu (70 ml). K výsledné suspenzi se přidá dimethylformamid (500 ml) a směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Po dalších 15 hodinách se k suspenzi přidá další dimethylformamid (1,5 litru). Po přibližně 30 minutách je reakční směs v podstatě čirá a analýza chromatografií na tenké vrstvě (25% EtOAc/hexan) ukazuje, že se efektivně spotřeboval veškerý výchozí materiál. Reakční směs se zalije zředěným chloridem amonným (100 ml) a odpaří ve vakuu. K odparku se přidá ethylacetát (1,0 litru) a zředěný chlorid amonný (1,0 litru) a frakce se rozdělí. Vodná frakce se zpětně extrahuje ethylacetátem (1 x 450 ml a 1 x 300 ml). Celková organická frakce se vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří ve vakuu. Výsledná tuhá látka se krystaluje ze směsi ethanol: voda (9:1;

objemově, 200 ml), zahřívá se na teplotu zpětného toku, ke které se přidává ethanol (65 ml) až se veškerý materiál rozpustí. Poté se po kapkách přidává voda (17 ml), následuje další ethanol (8,0 ml). Výsledný roztok se nechá pomalu ochladit na teplotu místnosti. Výsledná tuhá látka se odfiltruje a vysuší (44,54 g). Tato tuhá látka se poté rozpustí v horkém ethanolu (227 ml) a přidá se voda (5,0 ml) a poté se nechá pomalu ochladit na teplotu místnosti. Výsledné krystaly se

-24CZ 3W1697 B6 odfiltrují, promyjí studeným ethanolem (25 ml) a vysuší ve vakuové sušárně při teplotě 50 °C k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví (36,79 g, výtěžek 71,5 %). T.t, = 80,5 až 81,5 °C.

'H NMR (400,13 MHz, CDC1₃): 7,67 - 7,28 (13H, komplexní m, aromatické látky), 5,35 (2H, s, 5 CH₂Ph), 5,20 (2H, s, CH₂Ph).

Popis 14

Benzylester kyseliny 3-benzyloxy-4-trimethylsilanylethynylbenzoové

Benzylester kyseliny 3-benzyloxy-4-brombenzoové, (33,00 g, 83,07 mmol) se umístí do trojhrdlé nádoby a atmosféra se nahradí, ve vakuu, argonem za použití Firestonova ventilu. Tuhá látka se rozpustí v tetrahydroftiranu (215 ml) za míchání, a poté se přidá triethylamín (396 ml).

Směs se ochladí na ledové lázni a roztok se 5-krát zbaví plynu jak je popsáno výše. Rychle se přidá jodid měďný (127 mg, 0,66 mmol) a chlorid bis(trifenylfosfin)palladnatý (933 mg, 1,33 mmol) a roztok se ještě dvakrát zbaví plynu.Poté se stříkačkou během 10 minut po kapkách přidá trimethylsilylacetylen (17,6 ml, 124,6 mmol). Chladicí lázeň se poté odstraní a roztok se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti. Po 21 hodině analýza chromatografií na tenké vrstvě (25% ÉtOAc/hexan) ukáže, že v podstatě veškerý výchozí materiál se spotřeboval. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a přidá se ethylacetát (500 ml) a ředěný roztok chloridu sodného (300 ml). Organická frakce se oddělí a vodná fáze se zpětně extrahuje ethylacetátem (1 x 250 ml a 1 x 100 ml). Celková organická frakce se vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří k získání surové hnědé tuhé látky (36,2 g). Tuhá látka se rozpustí v horkém ethylacetátu (80 ml), kde krystaluje sloučenina pojmenovaná v záhlaví. Tato tuhá látka se odstraní filtrací, promyje ethylacetátem a vysuší se vakuově sušárně při teplotě 40 °C k získání čisté sloučeniny pojmenované v záhlaví (13,75 g, výtěžek 39 %), t.t. = 110,5 až 111,5 °C.

’H NMR (400,13 MHz, CDCb): 7,66 - 7,28 (13H, komplexní m, aromatické látky), 5,36 (2H, s,

CH₂Ph), 5,19 (2H, s, CH₂Ph), 0,26 (9H, s, Si(Me₃)₃).

Filtrát se naloží do náplně silikagelu (400 g, Biotage 75M), která se poté eluuje 50% směsí ethylacetát/hexan, frakce produktu se shromáždí a odpaří ve vakuu k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví (21,1 g, výtěžek 60%) jako mírně nečisté světle hnědé tuhé látky, která se použije bez dalšího čištění.

Popis 15

Benzylester kyseliny 3-benzyloxy-4~ethynylbenzoové

K. míchanému roztoku benzylesteru kyseliny 3-benzyloxy-4-trimethylsilanyIethynylbenzoové (13,5 g, 32,56 mmol) v tetrahydrofuranu (182 ml), pod atmosférou argonu při teplotě -55 °C, se přidá po kapkách během 7 minut roztok tetra-n-butylamoniumfluoridu (33,9 ml, l,0M v tetra45 hydrofiiranu). Po dalších 3 minutách se odebere vzorek a analýza chromatografií na tenké vrstvě

-25CZ 301697 B6 (25% EtOAc/hexan) ukáže, že veškerý výchozí materiál se spotřeboval. Reakční smčs se zalije přidáním roztoku kyseliny chlorovodíkové (0,4M, 100 ml) v ředěném chloridu amonném. Přidá se ethylacetát (250 ml) a frakce se rozdělí. Vodná frakce se zpětně extrahuje ethylacetátem (1 x 200 ml a l x 50 ml). Celková organická frakce se vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří k získání hnědého oleje (14,3 g). Olej se vyjme toluenem (40 ml) a vloží se do silikagelové patrony (400 g, Biotage 75M) a vloží se do silikagelové patrony (400 g, Biotage 75M). Patrona se poté eluuje následovně: hexan (400 ml), hexan : toluen (1:1, objemově, 5,0 litrů) a konečně hexan : toluen (1 : 1, objemově, 2,3 litrů) při obsahu 4 % diethyletheru. Čisté frakce se shromáždí a odpaří ve vakuu k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví (7,86 g, výtěžek 70,5 %) jako bílé io tuhé látky.

'H NMR (400,13 MHz, CDC1₃): 7,67 - 7,27 (13H, komplexní m, aromatické látky), 5,34 (2H, s, CH₂Ph), 5,22 (2H, s, CH₂Ph), 3,44 (IH, s, acetylenový).

Popis 16

4,5™Dichlor-2-jodanilin

K míchanému roztoku 3,4-dichloranilinu (1,944 g, 12,0 mmol) v kyselině octové (40 ml) a pod atmosférou argonu pří teplotě místnosti se během 22 minut po kapkách přidá roztok chloridu jodného (2,96 g, 18,23 mmol) v kyselině octové (25 ml plus 5 ml na promytí). Po 1,5 hodině míchání se vysráží tuhá látka, která se odfiltruje a promyje 5% thíosíranem sodným (100 ml). Tuhá látka se rozpustí v ethylacetátu (100 ml) a promyje se nasyceným uhličitanem sodným (100 ml) a vodou (100 ml). Výsledná tuhá látka se vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří k získání tmavě zbarvené tuhé látky (2,69 g). Surová tuhá látka se rozpustí ve směsi EtOAc/hexan (1 :1, objemově, 6,0 ml) a vloží se na křemičitanovou patronu (90 g, Biotage), která se eluuje následovně: hexan (600 ml), 4% EtOAc v hexanu (1 litr) a 5% EtOAc v hexanu (1 litr). Čisté frakce se odpaří ve vakuu k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bělavé tuhé látky (0,912 g, výtěžek 26,4 %).

Ή NMR (400,13 MHz, CDC1₃): 7,66 (IH, s, H-3), 6,81 (IH, s, H-6), 4,14 (2H, s široký, -NH₂).

MS (AP⁺): m/z 288,0 a 290,1 (MH⁺).

Popis 17

Benzylester kyseliny 4-(2-amino_4,5-dichlorfenylethynyl)-3-benzyloxybenzoové

Benzylester kyseliny 3-benzyloxy-4-ethynylbenzoové (820 mg, 2,395 mmol) a 4,5-dichlor-2jodanilin (710 mg, 2,467 mmol) se umístí do trojhrdlé nádoby a atmosféra se ve vakuu nahradí argonem za použití Firestonova ventilu. Tuhé látky se poté rozpustí v tetrahydrofuranu (13,0 ml) za míchání, a poté se přidá triethylamin (20 ml). Směs se ochladí na ledové lázni a roztok se 4krát

-26CZ 301697 B6 zbaví plynu jak je popsáno výše. Rychle se přidá jodid měďný (4 mg, 0,02 mmol) a chlorid bis(trifenylfosfin)palladnatý (27 mg, 0,04 mmol) a roztok se zbaví plynu ještě dvakrát. Chladicí lázeň se poté odstraní a roztok se nechá pomalu ohřát na teplotu místnosti. Po 6 hodinách míchání při teplotě místnosti, analýza chromatografií na tenké vrstvě (25% EtOAc/hexan) ukáže, že veškerý benzylester kyseliny 3-benzyloxy-4-ethynylbenzoové se spotřeboval. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a přidá se ethylacetát (50 ml) a ředěný hydrogenuhličitan sodný (25 ml). Organická frakce se oddělí a vodná fáze se zpětně extrahuje ethylacetátem (1 x 25 ml). Celková organická frakce se vysuší síranem sodným, zfiltruje a odpaří k získání světle žluté tuhé látky (1,28 g). Tato tuhá látka se rozpustí v chloroformu (50 ml), přidá se silikagel (Merck 9385, ío 3,25 g) a směs se odpaří ve vakuu. Surový materiál, předem naložený na křemičitan, se vyčistí chromatografií (Biotage 40 g). Patrona se eluuje směsí chloroform : hexan (70 : 30), čisté frakce se shromáždí a odpaří ve vakuu k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví (1,113 g, výtěžek 92,5 %) jako světle žluté tuhé látky. Vzorek se rekrystaluje ze směsí toluen : chloroform (45 : 55), t.t. = 152,5 až 153,5 °C.

'HNMR (400,13 MHz, CDC1₃): 7,71 (2H, m, aromatická látka), 7,57 - 7,20 (12H, komplexní m, aromatické látky), 6,63 (IH, s, aromatická látka), 5,38 (2H, s, CH₂Ph), 5,15 (2H, s, CH₂Ph), 3,94 (2H, s,-NH₂).

MS (AP⁺): m/z 502,2 a 502,4 (MH*).

Popis 18

Benzylester kyseliny 3_benzyloxy-4-(5,6-dichlor-l H-indol-2-yI)benzoové)

O

Benzylester kyseliny 4-(2-amino-A,5-dichlorfenylethynyl)-3-benzyloxybenzoové (28,32 g, 56,38 mmol) se rozpustí v teplém acetonitrilu (1,50 litru) za míchání pod atmosférou argonu. Směs se ochladí na lázni led/voda a roztok se zbaví plynu pod nízkým vakuem za použiti Fires30 tonova ventilu, přičemž se atmosféra nahradí argonem. Tento postup se opakuje 5krát. Míchaná směs se ohřeje na teplotu 66 °C a rychle se přidá chlorid bis(acetonitril)palladnatý (1,666 g, 5,638 mmol) a poté se ohřeje na teplotu 75 °C. Po 1,5 hodině se odebere vzorek a analyzuje se chromatografií na tenké vrstvě (25% EtOAc/hexan), která ukáže, že veškerý výchozí materiál se spotřeboval. Reakční směs se nechá pomalu ochladit na teplotu místnosti, načež z roztoku vykrystaluje sloučenina pojmenovaná v záhlaví. Tuhá látka se zachytí filtrací, promyje studeným acetonitrilem (125 ml) a vysuší ve vakuové sušárně k získání sloučeniny pojmenované v záhlaví (21,375 g, výtěžek 75,5 %) jako bílé tuhé látky, t.t. = 168 až 169 °C.

'HNMR (400,13 MHz, CDC1₃): 9,79 (IH, sširoký,-NH), 7,90- 7,76 (3H, komplexní m, aromatické látky), 7,68 (IH, s, aromatická látka), 7,55 -7,32 (1 OH, komplexní m, aromatické látky), 7,22 (IH, s, aromatická látka), 6,91 (IH, m, aromatická látka), 5,39 (2H, s, CH₂Ph), 5,29 (2H, s, CH₂Ph).

MS (APM): m/z 502,2 a 502,4 (MH*).

Popis 19

Kyselina 3-benzyloxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol--2-yl)benzoová

-27CZ 301697 B6

o

Roztok benzylesteru kyseliny 3-benzyloxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)benzoové (0,2 g, 0,398 mmol) v ethanolu (10 ml) a tetrahydrofuranu (5 ml) s hydroxidem sodným (5,3 mg, 1,33 mmol) se zahřívá na teplotu zpětného toku 3 hodiny. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří ve vakuu a odparek se zpracuje 37% kyselinou chlorovodíkovou. Sraženina se zfiltruje, promyje vodou a vysuší ve vakuu k získání 0,14 g (výtěžek 85 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jako žlutého prášku, t.t. = >250 °C.

io Příklad 1

4—(5,6-D ich lor-lH-indo l-2-yI)_3-ethoxy-N-( 2,2,6,6-tetramethyl piperid in-4—yl)benzamid

K suspenzi kyseliny 3-ethoxy-4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)benzoové (200 mg, 0,57 mmol), připravené podle popisu 8, v CH₃CN (14 ml) a tetrahydrofuranu (6 ml) se přidá WSC (hydrochlorid N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimidu) (104 mg, 55 mmol) a 1-hydroxybenzotriazolu (77 mg, 0,57 mmol) a reakční směs se zahřívá na teplotu zpětného toku 3 hodiny. Do reakční směsi se zavede 4-amino-2,2,6,6-tetramethylpiperidin (108 mg, 0,7 mmol) a zahřívání na teplotu zpětného toku pokračuje další 2 hodiny. Reakční směs se ochladí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se zpracuje 30 ml 10% roztoku hydroxidu sodného a poté se zfiltruje. Výsledná tuhá látka se promyje vodou, vysuší a vyčistí chromatografií na silikagelu k získání 154 mg sloučeniny pojmenované v záhlaví jako světle žlutého prášku (výtěžek 55 %), t.t. = 253 až 255 °C.

'H NMR (DMSO-d₆): δ = 11,56 (s široký, IH); 8,28 (d široký, IH); 7,85 (d, IH); 7,82 (s, IH); 7,64 (s, IH); 7,59 (s, IH); 7,57 (d, IH); 7,11 (s, IH); 4,40-4,21 (m, IH); 4,30 (q, 2H); 1,80 (d široký, 2H); 1,50 (t,3H); 1,30 (m,2H); 1,28 (s,6H); 1,15 (s,6H).

ESI POS; AQA: rozpouštědlo: MeOH/spray 3 kV/skimmer: 20 V/sonda 135 °C: m/z 488 (MH⁺).

Příklad 2

4-(5,6-Dichlor-lH-indol-2-yl>“3-benzyloxy-N“(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)benzamid

-28CZ 301697 Bb

K roztoku kyseliny 3-benz>loxy^-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)benzoové (0,14 g, 0,34 mmol), připravené podle popisu 19, v tetrahydrofuranu (14 ml), WSC (hydrochlorid N-(3-dimethyIaminopropyl)-N'-ethylkarbodiimidu) (0,078 g, 0,408 mmol) a 1-hydroxybenzotriazolu (0,0551 g, 0,408 mmol) se zahřívají na teplotu zpětného toku 6 hodin. Po kapkách se přidá roztok

4-amino-2,2,6,6-tetramethylpiperidinu (0,064 g, 0,408 mmol) v tetrahydrofuranu (2 ml) a směs se zahřívá na teplotu zpětného toku další 2 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a odparek se suspenduje ve vodě. Tuhá látka se odfiltruje a vysuší ve vakuu. Tuhá látka se trituruje CH₃CN (5 ml) k získání 0,094 g (výtěžek 45 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jako bílého prášku, t.t. = 220 ^ŮC.

io 'HNMR (DMSO-dé): δ - 11,64 (s široký, IH); 8,24 (d široký, IH); 7,87 (d, IH); 7,76 (s, 1H); 7,68 (d, IH); 7,62 (s, IH); 7,59 (dd,lH); 7,52 (d, 2H); 7,42 (dd, 2H); 7,34 (dd, IH); 7,06 (d, IH); 5,40 (s, 2H); 4,38 - 4,23 (m, 1H); 1,76 (dd, 2H); 1,25 (dd, 2H); 1,23 (s, 6H); 1,12 (s, 6H).

ESI POS; AQA; rozpouštědlo: MeOH / spray 3 kV / skimmer: 20 V/ sonda 135 °C: m/z 550 (MH⁴).

Příklad 3

4-(5,6-Díchlor-1 H-indol-2-yl)-3-hydroxy-N-(2,2,6,6-tetramethy lpiperidin-4-y l)benzamid

Směs 4—(5,6—dichlor—1 H-Índol-2-yl)-3-benzyloxy-N-(2,2,6,6-tetramethy lpiperidin-4-yl)benzamidu (0,08 g, 0,145 mmol), připraveného podle popisu vpříkladu 2, v 37% kyselině chlorovodíkové (5 ml) a ethanolu (5 ml) se zahřívá na teplotu zpětného toku 3 hodiny. Po ochlazení se rozpouštědlo odpaří ve vakuu. Výsledná tuhá látka se vyčistí sloupcovou chromatografii na silikagelu (dichlormethan/methanol/hydroxid amonný 86:10:0,6) k získání, po trituraci CH₃CN, 0,02 g (výtěžek 39 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jaké bílé tuhé látky, t.t. = >270 °C.

'HNMR (DMSO-dJ: δ = 11,44 (s široký, IH); 8,16 (d široký, IH); 7,80 (d, IH); 7,78 (s, IH); 7,69 (s, IH); 7,48 (d, IH); 7,39 (dd, IH); 7,08 (s, IH); 4,36 - 4,20 (m, IH); 1,73 (dd, 2H); 1,23 (dd, 2H); 1,23 (s, 6H); 1,11 (s, 6H). ESI POS; AQA; rozpouštědlo: MeOH / spray 3 kV / skimmer: 20 V/ sonda 135 °C: m/z 460 (MH⁺).

Příklad 4

4-{5,6-Dichlor-lH-indol™2-yl)-3-propoxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)benzamid

-29CZ 301697 B6

Směs 4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-hydroxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidinM-yl)benzamidu (0,05 g, OJ 09 mmol), připraveného podle popisu v příkladu 3, uhličitanu draselného (0,045 g, 0,33 mmol) a 2-brompropanu (0,046 mg, 0,33 mmol) v acetonu (5 ml) se zahřívá na teplotu zpětného toku 8 hodin. Po ochlazení se směs zfiltruje a organická fáze se odpaří ve vakuu.

Odparek se chromatografuje na silikagelu směsí dichlormethan/methanol/hydroxid amonný 32% (86 : 10:0,6). Získaná sloučenina se trituruje iPr₂O a zfiltruje k získání 0,017 mg (výtěžek 37 %) sloučeniny pojmenované v záhlaví jaké bílého prásku, t.t. - >250 °C.

'HNMR (DMSO-dň): δ = 11,55 (sširoký, IH); 8J9 (d široký, IH); 7,84 (d, IH); 7,83 (s, IH); io 7,62 (s, IH); 7,58 (s, IH); 7,56 (dd, IH); 7,10 (d, IH); 4,37- 4,24 (m, IH); 4,18 (t, 2H);

1,96-1,84 (m,2H); 1,73 (dd, 2H); l,20(dd,2H); 1,20 (s,6H); 1,08 (s,6H); 1,05 (t,3H).

ESI POS; AQA; rozpouštědlo: MeOH i spray 3 kV/ skimmer: 20 V/ sonda 135 °C: m/z 502 (MH⁺).

-30CZ 301097 Bó

Tabulka

Φ
1—1 TJ 0 CL Ή > (ó p CL •d >p cu		'>
Φ		Ρ ο
(0		Ρ
id		•d >ω
Φ		'(0
u		C
<d		φ
2		É
XI		(ϋ
f0		G
P		Ν
>		Ρ
'Φ		υ φ
β		Ρ
Φ		Ρ
TJ		Λ!
Φ		Φ
>		(1
β		01
•β	,
Ό	rd	2
<Ó		2
d	β
	Ό	>
'd	(0
>P	1—ΐ	Ρ
CL	λ:	Ρ
N	*>d >Ρ	• «
	CL	>
>1	Λ!
c	>	>
-rT		Η
β	Ρ
Φ	£Χ	Ρ
»ϋ	ι-1	>Φ
β	Ρ	>
0	W	(Π
(d	0	>
ω	CL	>

X 2 Ž	·, Ο -rf ~ « _tt X _ - 2- ~ ; - 5 .3- * ε 5- :·· “ I ». S 5 2- :· Ε § ο ί i 5 \ έ e Ι « a a s ” ^s 1 5 ? * ? \| $ ; -« 5 3 ř ϊ. f χ 8. g ř ί
Ρ ρ· Ρ	8 cm 5
2	P_ «r * \| Lh? í ? 5 ! g i . 8 1 s a \| « i “ E -* O w 55 Š* » η p S « ϋ s ; 3 s ϊ g < £ o S
tr CC	/ h o zx /
X	Z
σ: X	a O Λ
c\ X	ΰ ό
** X	0 ΰ
ΛΘΖ^Ν	1 1 ® 2 χ 1 5 c . C 2 . α> η α ο η ♦ Λ. λ Q 4 1 £ 5 I s ! 4 ζ ξ > ε
>ρ^: CU	η

CZ 301697 Bó

-32CL JV1W/ BO

OČ 5 ž

« S B Z 8 n ® n f S tg φ S v o g 11 i a'

i β X i š- te z

X » *w< s řs X s rs X T“

8 ř ·“ d o r* is f r£ $L rs

X £ « r* Ν' Ϊ «Μ» i v b? ř T*

1 rt o LO T* £ cu 2 Ž <

3 s »* 9 « I c i

3 s « X « 3 o Z i

z 3 * a rs’ í š 8 « I Τ'

tí $ b· Λ X 3 i /S Js z « 3. is

X Á tn s 3 8 b· X

3 řs o rt 4Í s 3 *“ £ 3 te β «

5 c S §

s LB <β <D ' ®i r- rs « ξ rf x š S. 3 8. i!

X τ· <a tn «„ 3 5 X

ώ « is Λ£ X 3 (O w řs X » š. rs

•T X 3 o rs“’ S i R fs

m O V ri O cu řs ri ή BB ri f cu 3

£ £ ri I 3 rt co ri í

< Š έ - i? 5 5 Su ~

P

8

g

4-i

& W

š cu

UJ s

ΰ 1

Č

i

?. I

8

CO S

1

tA U> sp

i S

Š‘

s 1

ri r- CU

g i

« 5

0 1

I

σ

š

s

5 i

él 8

<0 o κ S

co ι-

8

rt N 3

“ S

2

2 >

í

Ε

CU >

2 >

§

a

U-

Q

CC

\

7

>

Π-

c

r\

«Γ

> 2Z

J

y 22

\

-o

CC

X

σ

CC

w

ω

uu

0

o rt

O

«

rt

C tc

w 9

9

□

(O

to

«0

r*

tc

O

3

*ή

tn

té

X. 3. «

S eú

έ

? « cu

3

Í

š

ΐ

1

>

Z

c

Ό c

X i

Φ

TJ

X

£

N

f

>

Ί S

α

'<13

s ”

E

w

I

£

i S.

I

2

1 f s 1 *- s

« N I

Q 5 «

| ώ, í cn

5 I

8 a. 2 5. O M I i HÍ Z·

2 3

4 z

4

ž

«

▼ ±

•

O-l

c

CZ JV1W7 Bt>

X 5 Z

rt n B tr T ř·

X JÍ K CD tf X 2? 5 o X . 5

Ž Λ in tf 1 » 1 r- x » <# «_ K

X ž S tf X h- IA tf X

š ei 1 jj 3 <’ í w 2 *

X 2. 8 cú~ X έ e n~

5 S í £ 3 8 a έ £ M S ř ct, *L « —

í c » V

1 Σ n rt St *0 E 5 ? X

Λ X £ 2. P* oo“ έ 1 2 5-

£ « £ Ό* x S f- tů . IO e tf r * * s 3 N~ SS ~ tf Ξ

3 rt & tí i rt X i 3 tf

έ cj X * i fx «' X έ s ΓΪ

CQ B I a_ X rt έ 8. w

< 6 S i*- Š r» i É

O ®,

$

+J

ώ a

o §

'i

0

a

Ν' •0 w

>'

*

N 0 h

“X >

5 ? β a> □ 2

JC

»

v

JC

« “

03 5

«Γ

w > a. «»

> 8

co *r UT M É

tli

n

o S ϊ I

0 0.

s

0

2

5

ε υ

te

§

JC

Š

55

2

1 &

UJ

s

»

UJ

a *<

§

u

Z

>

/

X

i

í zz

5

\

rt

X

I

X

o tt o

tí)

3.

cu u 6 rt o tA tt

3.

Ť

|>s-i

Cb

Sloučeniny z přikladu uvedené v tabulce 2 se připraví podle postupu v příkladu 4.

Vysvětlivky: br v NMR spektrech znamená široký

CZ áU16V7 Bft

X 5 ž

- í. S i2 - t 7 < -5 I*. 8 ~ H 2 w x ~ ,

rf í í- I í £ £ SL s H rf' Š 8 f. rf* x £ ftl w

Ě i τ- ΙΟ N 5 Ě O o cT X Cl

4» e f $ s ·· O V> 8. 8. 1 i

** u Š } 7 $ £ 8 i I ~ S Sl· ± I

ώ IO irf- x 9H> rf O <D_ I*»“ I T* jí š

Ó V rf £ »- rf s- 5 e ®

8 cT í £ m ř·^ cT š É 8 rf~

rf Úl X M á Τ’ ř*_ rf

£ rf ξ » 1 £ O T* i

1 11 S 2. > S £ 7 2^8 t A £ s * 3 ® -5- 2 o i X ®- Λ T- fs.

ε έ. Γ * I W W <“ 5t ε I- £ ř (0 *· 2-š ε s, r· IO

X Cl E i rf á rf X Cl E 5 rf*

E o *- ** f £ w i i

£ •P

5

s cm §

CM 8

„ih

tr

X

tx

y

XX

ΣΖ

\

X

_CJ

JM ΪΒ

^Qci

3

X

2

*

O

rt X

CT ci I

5· CJ

£ « o

υ

£

X

? CT

1

$

CT

o

0

o X

3

. O

ΰ

ώ

<ó

T* X

□

iň

ΙΛ

<o

a

_J__L

A

s.

CT

rt

CJ i

11

Cl

1 *

s-

o c — X

4 n £ *· € £

X

4 č 5

X)

i i X W

£

N 'rt

.·= £.

T-

ta·

*- -

c

/

s '3 *

j

é

i

2. |

jj

5

5.

S

§

o a.

O (O 5 ®”

11

2 o v

Φ

i

I

5 ó * δ ® ®

11

<o cí

Š 2 - ě

ó

j|

δ

X

« « ε

s

•á £L

io 2Í

tg

c

5

w a 2

CT y

4 2

5 £

4 2

M

Φ

4 έ 3

£i e.

• >W CU

CJ

** ¢4

Biologická stanovení

Podrobné informace

Je známo, že při připojení na kost se elektrogenní H⁺-adenositrifosfatáza (ATPáza) polarizuje na mezivrstvě osteoklast-kost. Tato pumpa transportuje velká množství protonů do resorpčního mikroprostředí k navození mobilizace kostního minerálu a k vytvoření prostředí s hodnotou pH v kyselé oblasti požadovaného kolagenázami k degradaci kostní matrix.

io Vakuolámí povahu osteoklastové protonové pumpy původně rozpoznal Blair (H. C. Blair a kot, Science, 245, 855 (1989)) a to poté potvrdil Bekker(P. J. Bekkerakol., J. Bone Min. Res., 5, 569 (1990)) a Váannánen [Η. K, Váánnánen a kol., J. Cell. Biol., 111, 1305 (1990)). Důkaz je založen na přípravcích zvlněných membránových fragmentů z ptačích osteoklastů (získaných z dřeňové kosti slepic nosnic s dietou bez vápníku). Výsledné membránové vezikuly se okyselily v odpově15 di na ATP, což se snadno stanoví měřením vyhasínání fluorescence akridinové oranže, což je slabá báze, která se akumuluje v kyselých kompartmentech.

Biochemický vzor ukazuje, že osteoklastové protonová pumpa patří k typu vakuolámích ATPáz, jelikož transport protonu se inhibuje N-ethylmaleimidem (NEM), což je sulfhydrylové činidlo, a bafilomycínem A, což je selektivní inhibitor vakuolámích H⁺-ATPáz (J. E. Bowman a kol., Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 85; 7972 (1988)), zatímco se neinhibuje ouabainem, což je inhibitor Na⁺/K⁺-ATPáz; orthovanadičnanem sodným, což je inhibitor P-ATPáz nebo omeprazolem nebo SCH 28080, což oba jsou inhibitory žaludeční H⁺/K⁺-ATPázy (J. P. Mattsson a kol., Acta Physiol. Scand., 146,253 (1992)).

Je známo, že specifické inhibitory vakuolámích ATPáz, jako je bafilomycin A_b jsou schopny inhibovat kostní resorpci v kulturách osteoklastů (K. Sundquíst a kol., Biochem. Biophys. Res. Commun., 168,309 až 313 (1990)).

Inhibice transportu protonu a aktivita v-ATPázy v membránových vezikulách.

Příprava surových kostních mikrosomů slepic nosnic s dietou prostou vápníku.

Vezikuly se připraví z dřeňové kosti získané z tibií a femurů slepic nosnic, které jsou na dietě prosté vápníku alespoň 15 dní. Stručně, kostní fragmenty se seškrábou ostřím skalpelu 24, suspendují ve 40 ml izolačního média (0,2 M sacharóza, 50 mM KC1, lOmM Hepes, 1 mM EGTA, 2 mM dithiotheitrol, pH 7,4) a zfíltrují přes nylonové síto s velikostí pórů 100 pm. Celý postup se provádí při teplotě 4 °C. Po homogenizaci v homogenizátoru (20 úderů) ve 40 ml izolačního média se provede počáteční odstředění (6 500 x g,^ x 20 minut) k odstranění mitochondrií a lysosomů, Supematant se odstřeďuje při 100 000 x g_max 1 hodinu a peleta se zachytí v 1 ml izolačního média, rozdělí na 200pl alikvoty, ihned zmrazí v kapalném dusíku a skladuje při teplotě -80 °C. Obsah proteinu se stanoví za použití kolorimetrické soupravy Biorad podle Bradforda (M. Bradford, Anal. Biochem., 72, 248 (1976)). Ke stanovení transportu protonu se použije 5 až 10 pl membrán.

Vyčištění osteoklastových membrán ml surových mikrosomálních vezikul připravených podle postupu uvedeného výše se aplikuje (okolo 0,2 ml na zkumavku) na vrcholek sacharózového krokového gradientu sestávajícího z 3,5 ml 15%, 30% a 45% (hmotnostně) saeharózy v izolačním médiu a odstřeďuje se pri 280 000 x 2 hodiny (SW 41 Ti rotor). Po odstředění se shromáždí mezivrstvy mezi 30 a 45% sacharózou, přibližně 20násobně naředí v izolačním médiu a peletují pri 100 000 x gmax 1 hodinu (SW 28 rotor). Peleta se poté resuspenduje v 1 ml izolačního média, alikvotuje a zmrazí v kapalném dusíku a skladuje se při teplotě -80 °C do použití.

-38CZ 301697 B6

Membrány z lidských ledvin

Membrány z lidských ledvin se získají z kortexu lidských ledvin, ihned po zákroku se zmrazí podle postupu popsaného v literatuře pro hovězí ledvinu (S. Gluck, J. BioL Chem., 265, 21957 (1990)).

Příprava lidských osteoklastových mikrosomálních vezikul

Osteoklastu podobné obří buňky izolované z osteoklastomového tumoru se homogenizují skleněío no-teflonovým homogenizátorem (frekvence otáček 1 000 za minutu x 20 úderů) a materiál se odstřeďuje při óOOOxg^ 20 minut. Výsledná peleta se poté odstřeďuje při lOOOOOxgm^ minut k peletací mikrosomální frakce. Resuspenduje se v 1 ml izolačního média s hodnotou pH 7,4, zmrazí ponořením do kapalného dusíku a skladuje se při teplotě -80 °C do použití.

Transport protonu v membránových vezikulách

Transport protonu v membránových vezikulách se stanoví, semikvantitativně, měřením počátečního sklonu zhášení fluorescence akridinové oranže (excitace 490 nm; emise 530 nm) po přidání 5 až 20 μί membránových vezikul v 1 ml pufru obsahujícího 0,2 M sacharózy, 50 mM KC1,

10 mM Hepes pH 7,4, 1 mM ATP.Na2, 1 mM CDTA, 5 μΜ valinomycinu a 4 μΜ akridinové oranže. Reakce se započne přidáním 5 mM síranu hořeČnatého. Výsledky se vyjádří jako procento střední hodnoty dvou kontrol.

Inhibice aktivity bafilomycin-senzitivní ATPázy

Inhibice aktivity bafilomycin-senzitivní ATPázy se stanoví ve vyčištěných membránových vezikulách měřením uvolňování anorganického fosfátu (Pí) během 30 minut inkubace při 37 °C na desce s 96jamkami buď za přítomnosti, nebo za nepřítomnosti bafilomycinu Al. Reakční médium obsahuje 1 mM ATP, lOmM HEPES-Tris pH 8, 50 mM KC1, 5 μΜ valinomycinu,

5 μΜ nigericinu, 1 mM CDTA-Tris, 100 μΜ molybdenanu amonného, 0,2 M sacharózy a membrány (20 μg proteinu/ml). Reakce se započne síranem hořečnatým (8-ramenná pipeta) a po 30 minutách se zastaví přidáním 4 objemů činidla malachitové zeleně (96ramenná pipeta) připravené podle Chana (Anal. Biochem., 157, 375 (1986)). Absorbance při 650 nm se měří po 2 minutách za použití mikrodeskového čítače. Výsledky se vyjádří jako nmol (Pi) x mg proteinu'¹ x min¹ a, pro každý experiment, představuje střední hodnotu ± standardní odchylka triplikátů. Farmakologická data

Sloučeniny popsané v předloženém vynálezu jsou schopny inhibovat bafilomycin-senzitivní

ATPázu kuřecích osteoklastů v rozmezí od 50 nM do 2 μΜ a lidských osteoklastů v rozmezí od 30 nM do 5 μΜ.

Claims

45 PATENTOVÉ NÁROKY

1. Indolový derivát vybraný ze seznamu sestávajícího z:

4-(5,6-dichlor-1 H-indol-2-y l)-3-ethoxy-N-(2,2,6,6“tetramethy lpÍperidin-4-y l)benzamidu;

so 4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-3-benzyloxy-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin^l~y l)benzamidu;

4-(5,6-dichIor-lH-indol-2-yl)-3-propoxy-N-(2,2,ó,6-tetramethylpiperidin-4-yl)benzamidu;

-39CZ 301697 B6

4-(5,6-dich lor-1 H-indol-2-yl)-N-[3-[4-(3-methoxyfeny l)piperazin-1 -yl] propy l]-3~methoxybenzamidu;

4-{5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-[3-[4-(2-pyrimidyl)piperazin-l-yl]propyl]-3-methoxybenzamidu;

5 4-(5,6-dich lor-lH-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethy lpiperidin-4-yl)-3-methoxy benzamidu;

4-(5,6-dich lor-1 H-indol-2-yl)-N-( 1,2,2,6,6-pentamethyIpiperidin-4-yl)-3-ethoxybenzamidu; 4—(5,6—dích lor-1 H-indol-2-y l)-N-(3-pyridy l)-3-ethoxybenzamidu;

4-(5,6-dichIor-1 H-indol-2-y l)-N-(3-(6-methoxypyridy l))-3-ethoxybenzamidu;

4-(5,6-dichlor-1 H-indol-2-y l)-N-( 1 -benzylpiperidin-4-y l)-3-ethoxybenzamidu;

1 o 4—(5,6—dichlor— 1 H-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-2,5-dimethoxybenzamidu;

4—(5,6—dichlor— 1 H-indol-2-yl)-N-( 1,2,2,6,6-pentamethy Ipiperidin-t-y l)-2,5-dimethoxybenzamidu;

445-methoxy-ó-chlor-lH-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidiiwJ-yl)-3-ethoxy15 benzamidu;

4-(5,6-dichlor-1 H-indo l-2-yl)-3-methoxy-N-(( l-ethoxykarbonylbutyl)piperidin-4-yl)benzamidu;

4-(5,6-dichIor-lH-indol-2~yl)-3-methoxy-N-((karboxybutyl)piperidin-4-yl)benzamidu;

445,ó-dichlor-lH-indol-2-yl}-N42,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-3-(hydroxykarbonyl20 methoxy )benzam idu;

4-(5,6-dich lor-1 H-indo l-2-yI)-N-(2,2,6,6-tetramethy lpiperidin-4-yl)-3-(2-hydroxyethoxy)benzamidu;

4-(5,6-dich lor-1 H-indo 1-2-y l)-N-(2,2,6,6-tetramethy lpiperid in-4-yl)-3-(3-aminopropoxy)benzamidu;

25 4-(5,6-dichlor-lH-indol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethylpiperidin-4-yl)-3-(2-<iimethylaminoethoxy)benzamidu a

4—(5,6—dichlor—Ϊ H-i ndol-2-yl)-N-(2,2,6,6-tetramethy lpiperid i n-4-y 1)-342,3-dihydroxypropox)benzamidu

30 nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí nebo jejich farmaceuticky přijatelných solvátu.
2. Indolový derivát podle nároku 1 pro použití jako aktivní terapeutická látka.
3. Indolový derivát podle nároku 1 pro použití pro léčení nebo profylaxi chorob spjatých s nad35 měrnou aktivitou osteoklastů u savců.
4. Indolový derivát podle nároku 1 pro použití pro léčení nebo profylaxi osteoporózy a souvisejících osteopenních chorob.

40 5. Indolový derivát podle nároku 1 pro použití pro léčení tumorů, zvláště tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic a leukémií, virovými stavy - například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vezikulámí stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a B, virus HIV; vředy - například chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter pylori; auto imunitním i chorobami a transplantací,

45 pro léčení a/nebo prevenci hypercholesterolemických a aterosklerotických chorob, AIDS a Alzheimerovy choroby, angiogenních chorob, jako je revmatoidní artritida, diabetická retinopatie, psoriáza a solidní tumory, u lidí a savců jiných, než je člověk.

6. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje indolový derivát

50 podle nároku 1 ajeho farmaceuticky přijatelný nosič.

-40CZ 301697 B6

7. Použití indolového derivátu podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčení a/nebo profylaxi chorob spjatých s nadměrnou aktivitou osteoklastů u savců.
5 8. Použití indolového derivátu podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčení a/nebo profylaxi osteoporózy a souvisejících osteopenních chorob.
9. Použití indolového derivátu podle nároku 1 pro výrobu léčiva pro léčbu tumorů, zvláště tumorů souvisejících s rakovinou ledvin, melanomem, rakovinou tlustého střeva, rakovinou plic io a leukémií, virovými stavy - například stavy zahrnujícími virus Semliki Forest, virus vezikulámí stomatitidy, virus Newcastleské choroby, viry chřipky A a B, virus HIV; vředy - například chronické gastritidy a peptického vředu indukovaného Helicobacter pylori; autoimunitními chorobami a transplantací, pro léčení a/nebo prevenci hypercholesterolemických a aterosklerotických chorob, AIDS a Alzheimerovy choroby, angiogenních chorob, jako je revmatoidní artriti15 da, diabetická retinopatie, psoriáza a solidní tumory.