CZ297896B6 - Kamptothecin, farmaceutická kompozice s jeho obsahem a jeho pouzití - Google Patents
Kamptothecin, farmaceutická kompozice s jeho obsahem a jeho pouzití Download PDFInfo
- Publication number
- CZ297896B6 CZ297896B6 CZ20000711A CZ2000711A CZ297896B6 CZ 297896 B6 CZ297896 B6 CZ 297896B6 CZ 20000711 A CZ20000711 A CZ 20000711A CZ 2000711 A CZ2000711 A CZ 2000711A CZ 297896 B6 CZ297896 B6 CZ 297896B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- formula
- compound
- mmol
- camptothecin
- mixture
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
- C07D491/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
- C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D491/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Resení se týká kamptothecinu vzorce II, farmaceutických kompozic s jeho obsahem a jeho pouzití pro prípravu protinádorových, antivirálních a antiparazitárních léciv.
Description
Kamptothecin, farmaceutická kompozice s jeho obsahem a jeho použití
Oblast techniky
Vynález se týká nových kamptothecinových analogů, jejich použití jako léčiv, farmaceutických kompozic s jejich obsahem a jejich použití pro přípravu protinádorových, antivirálních a antiparazitámích léčiv.
Dosavadní stav techniky
Kamptothecin je přírodní sloučenina, která byla poprvé izolována z listů a kůry čínské rostliny nazývané camptotheca acuminata (viz Wall a kol., J. Amer. Chem. Soc. 88: 3888 (1966)). Kamptothecin je pentacyklická sloučenina, představovaná fragmentem indolizino[l,2-b]chinoleinu kondenzovaným s α-hydroxylaktonem s šesti řetězci. Atom uhlíku v poloze 20, který nese skupinu α-hydroxy, je asymetrický a propůjčuje molekule schopnost rotace. Přirozená forma kamptohecinu má absolutní konfiguraci „S“ atomu uhlíku v poloze 20 má následující vzorec:
HO
O
Kamptothecin vykazuje anti-proliferativní aktivitu u řady rakovinných buněčných linií, zahrnující buněčné linie lidského národu tračníku, plic a prsu (Suffness, M. a kol.: The Alkaloids Chemistry and Pharmacology, Bross, A., ed., Vol. 25, str. 73 (Academie Press, 1985)). Bylo navrženo, že anti-proliferativní aktivita kamptothecinu souvisí s jeho inhibiční aktivitou topoizomerázy I DNA.
Bylo indikováno, že α-hydroxylakton je bezpodmínečně nutný jak pro aktivitu in vivo, tak i pro aktivitu in vitro kamptothecinu (Camptothecins : New Anticancer Agents, Putmesil, M. a kol., ed., str. 27 (CRC Press, 1995); Wall M. a kol., Cancer Res. 55: 753 (1995); Hertzberg a kol.; J. Med. Chem. 32: 715 (1982) a Crow a kol., J. Med. Chem. 35: 4160 (1992)). Později přihlašovatelé nalezli novou třídu analogů kamptothecinu, u kterých β-hydroxylakton nahrazuje přírodní α-hydroxylakton kamptothecinu (viz přihláška vynálezu WO 97/00876).
Podstata vynálezu
Vynález se týká nových enantiomericky čistých analogů kamptothecinu.
Předložený vynález se tedy především týká nových analogů kamptothecinu, které se odlišují od všech dosud známých sloučenin a které mají následující obecný vzorec II
-1 CZ 297896 B6
(Π) nebo nových solí sloučenin obecného vzorce II jak jsou například soli obecného vzorce III
Klíčový meziprodukt syntézy tohoto typu opticky čistých sloučenina je produkt obecného vzorce M:
ve kterém R představuje přímý nebo rozvětvený alkylový zbytek obsahující od 1 do 10 atomů uhlíku. Výhodně R představuje ethylový zbytek.
-2CZ 297896 B6
Sloučeniny obecného vzorce II mohou být připraveny způsobem, který zahrnuje následující kroky:
kopulace sloučeniny obecného vzorce
((+)-EHHOPD) , s jednou nebo s druhou ze sloučenin obecného vzorce Ni nebo N2:
pro získání sloučeniny obecného vzorce Oi respektive sloučeniny obecného vzorce O2:
-3CZ 297896 B6
- následná cyklizace sloučeniny Οβ cyklizace sloučeniny O2 dává sloučeninu obecného vzorce II, která může být po salifíkaci přeměněna na sloučeninu obecného vzorce III.
Vytváření sloučenin O] nebo O2 se sloučeniny obecného vzorce M ve které M představuje ethylový zbytek a Ni nebo N2 se provádí zpracováním známým odborníkovi v oboru pod jménem Mitsunobu reakce (s odvoláním na práci Mitsunobu, O a kol., Synthesis, str. 1 (1981)). Jedná se o náhradu hydroxylové funkční skupiny sloučeniny N nukleofílem jako je sloučenina M nebo deprotonovaným derivátem této sloučeniny, zpracování fosfinem, například trifenylfosfinem a derivátem azodikarboxylátem, například diethyl-azodikarboxylátem nebo diizopropylem, v aprotickém rozpouštědle jako je například, tetrahydrofuran nebo N,N-dimethylformamid. Cyklizace sloučenin Oi a O2 pro získání sloučenin obecného vzorce II se provádí výhodně v přítomnosti paládiového katalyzátoru (například octanu paladnatého) za bazických podmínek (získaných například použitím alkalického octanu popřípadě kombinovaného s činidlem fázového přenosu jako je například tetrabutylammoniumbromid), v aprotickém rozpouštědle jako je acetonitril nebo Ν,Ν-dimethylformamid, při teplotě v rozmezí mezi 50 a 120 °C (R. Grigg a kol., Tetraheddron 46, str. 4003 (1990)).
Předložený vynález se také týká jakožto nového průmyslového produktu sloučeniny obecného vzorce M, tak jak byla definována výše. Tento produkt může být použit pro výrobu léčiv.
Sloučenina obecného vzorce M se syntetizuje novým způsobem, který je součástí předmětu předloženého vynálezu a sestává z posloupnosti následujících kroků:
- racemický t-butylester obecného vzorce
(pro jeho přípravu, viz zejména přihláška vynálezu WO 97/00876) se zpracovává kyselinou trifluoroctovou po dobu 18 hodin při teplotě okolí pro získání odpovídající karboxylové kyseliny;
- chinidinová sůl kyseliny získané v předchozím kroku se potom zahřívá v izopropylalkoholu při teplotě vyšší než 30 °C, s výhodou okolo 50 °C, před odchlazením reakční směsi až na teplotu okolí, takže jeden z enantiomerů výše uvedené kyseliny krystalizuje, zatímco sůl druhého enantiomeru, jehož aniont má obecný vzorec
zůstává v roztoku — koncentruje se izopropylalkoholový roztok soli enantiomeru, který nekrystalizoval, a zpracovává se kyselinou chlorovodíkovou a míchá, což vede k vytvoření sloučeniny obecného vzorce A
-4CZ 297896 B6
- následně se uvede sloučenina obecného vzorce A do kontaktu s vlhkým paládiem na uhlí, potom se do směsi přidá mravenčan amonný nebo kyselina mravenčí pro získání debenzylovaného produktu obecného vzorce B
(B),
- dále se cyklizuje sloučenina obecného vzorce B působením dicyklohexylkarbodiimidu pro získání laktonové sloučeniny obecného vzorce C
- nakonec se transformuje skupina -OCH3 laktonové sloučeniny obecného vzorce C na karbo10 nyl, působením jodidu sodného a trimethylsilylchloridu, pro získání sloučeniny obecného vzorce M uvedené výše
-5CZ 297896 B6
Při provádění výše uvedeného způsobu se reakce přeměňují sloučeninu obecného vzorce A na sloučeninu obecného vzorce B provádí výhodně v methanolu a výhodně za zahřívání reakční směsi na teplotu zhruba 40 °C po přidání mravenčanu amonného. Cyklizace sloučeniny obecného vzorce B pro získání sloučeniny C se může provádět v tetrahydrofuranu, výhodně za teploty zhruba 50 °C, zatímco se výhodně pracuje při teplotě okolí s acetonitrilem jako s rozpouštědlem v reakci vedoucí od sloučeniny obecného vzorce C ke sloučenině obecného vzorce M.
V konkrétním případě, kdy R představuje ethylovanou skupinu se sloučenina obecného vzorce M syntetizuje způsobem, sestávajícím postupně z následujících kroků:
- racemický t-butylester obecného vzorce
(pro jeho přípravu, viz zejména přihláška vynálezu WO 97/00876) se zpracovává kyselinou trifluoroctovou po dobu 18 hodin při teplotě okolí pro získání odpovídající karboxylové kyseliny;
- chinidinová sůl kyseliny 3-(3-benzyloxymethyl-2-merthoxy-4-pyridyl)-3-hydroxy-pentanová se potom zahřívá v izopropylalkoholu při teplotě vyšší než 30 °C, s výhodou okolo 50 °C, před ochlazením reakční směsi až na teplotu okolí, takže sůl enantiomeru (+) kyseliny 3-(3benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxypentanové krystalizuje, zatímco sůl enantiomeru (-), jehož aniont má obecný vzorec
zůstává v roztoku koncentruje se izoproylalkoholový roztok soli enantiomeru (-) kyseliny 3-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxy-pentanové a zpracovává se kyselinou chlorovodíkovou a míchá, což vede k vytvoření sloučeniny vzorce A'
(A’)
-6CZ 297896 B6
- následně se uvede sloučenina obecného vzorce A' do kontaktu s vlhkým paládiem na uhlí, potom se do směsi přidá mravenčan amonný nebo kyselina mravenčí pro získání debenzylovaného produktu vzorce B'
- dále se cyklizuje sloučenina obecného vzorce B' působením dicyklohexylkarbodiimidu pro získání laktonové sloučeniny vzorce C'
(Cr)
- nakonec se transformuje skupina -OCH3 laktonové sloučeniny obecného vzorce C' na karbonyl, působením jodidu sodného a trimethylsilylchloridu, pro získání (+)-5-ethyl-5-hyd10 roxy-l,3,4,5,8,9-hexahydrooxepino[3,4-c]pyridin-3,9-dionu (neboli (+)-EHHOPD) obecného vzorce
((+)-EHHOPD) .
Sloučenina obecného vzorce Nj může být získána z anilinu obecného vzorce Pi
(Pl) následujícím způsobem: anilin obecného vzorce P] se N-acyluje zpracováním acetylačním činidlem jako je například acetanhydrid. Acetanilid získaný tímto způsobem, zpracovávaný za teploty v rozmezí od 50 do 100 °C, výhodně 75 °C, reaktantem známým odborníkovi v oboru podle názvem Vilsmeyerův reaktant (získaný působením oxychloridu fosforečného na N,N-dimethylformamid za teploty v rozmezí od 0 a 100 °C) dává odpovídající 2-chlor-3-chinoleinkarbaldehyd (reference viz například Meth-Cohn a kol., J. Chem. Soc., Perkin Trans. I. str. 1520 (1981); Meth-Cohn a kol. J. Chem. Soc., Perkin Trans. I, str. 2509 (1981); aNakasimhan a kol., J. Am. Chem. Soc., 112, str. 4431 (1990)). 2-chlor-6,7-difluor-3-chinoleinkarbaldehyd se snadno redukuje na odpovídající 2-chlor-6,7-difluor-3-chinoleinmethanol vzorce Ni za klasických podmínek, známých odborníkovi v oboru, jako je například zpracování v alkoholovém rozpouštědle (například methanolu) borhydridem sodným za teploty v rozmezí od 0 do 40 °C.
Sloučenina obecného vzorce Nj může být získána následujícím způsobem: anilin obecného vzorce P2
(Pl) se ortho-acyluje reakcí s chloracetonitrilem v přítomnosti chloridu boritého a další Lewisovy kyseliny jako je chlorid hlinitý, chlorid titaničitý nebo diethylaluminiumchlori v aprotickém rozpouštědle nebo směsi aprotických rozpouštědel, následovanou hydrolýzou (viz Sugasawa, T, a kol. J. Am. Chem.Soc. 100, str. 4842 (1978)). Takto získaný meziprodukt se potom zpracovává ethylmalonylchoridem v aprotickém rozpouštědle jako je acetonitril v přítomnosti báze jako je triethylamin, potom se zpracovává alkalickým alkoholátem, například methylátem sodným v methanolu, pro získání ethyl-7-chlor-4-chlormethyl-6-methyl-2-oxo-l,2-dihydro-3-chinolinkarboxylátu. Posledně uvedená sloučenina se přemění na ethyl-2,7-dichlor-4-chlormethyl-6methyl-3-chinolinkarboxylát zpracováním oxychloridem fosforečným. Potom se provede nukleofílní substituce zpracováním 4-methylpiperidinem. Funkční skupina ethylkarboxylát se potom redukuje diizobutylaluminiumhydridem v aprotickém rozpouštědle jako je dichlomethan pro získání sloučeniny obecného vzorce N2. Pořadí posledních dvou etap může být popřípadě obráceno.
Analogy meziproduktových sloučenin typu N| nebo N2 byly popsány v literatuře, zejména v patentové přihlášce PCT 95/05427.
Sloučenina obecného vzorce II může být přeměněna na farmaceuticky přijatelnou sůl obvyklými způsoby. Farmaceuticky přijatelné soli zahrnují, uvedeno jako neomezující příklad, adiční soli anorganických kyselin jako je hydrochlorid, síran, fosforečnan hydrogenfosforečnan, hydrobromid a dusičnan nebo soli organických kyselin jako je octan, maleinam, fumeran, vínan, jantaran, citronan, mléčnan, methansulfonát, p-toluensulfonát, palmitan, salicylát, šťavelan a stearan. Další příklady farmaceuticky přijatelných solí mohou být nalezeny v „Pharmaceutical Salts“, J. Pharm. Sci. 66:1 (1977).
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mají zajímavé farmakologické vlastnosti. Sloučeniny podle předloženého vynálezu mají inhibiční aktivitu pro topoizomerázu I a/nebo II aprotinádorovou aktivitu. Stav techniky naznačuje, že sloučeniny podle předloženého vynálezu vykazují aktivitu antiparazitickou a/nebo antivirální. Sloučeniny podle předloženého vynálezu tak mohou být použity v různých terapeutických aplikacích.
-8CZ 297896 B6
V příkladové části uvedené dále je možno nalézt ilustrace farmakologických vlastností sloučenin podle předloženého vynálezu.
Sloučeniny mohou inhibovat topoizomerázu, například topoizomerázu typu I a/nebo II u pacienta, například savce jako je člověk, při podávání tomuto pacientovi terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce II, nebo farmaceuticky přijatelné soli sloučeniny obecného vzorce II nebo libovolné směsi těchto látek.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mají protinádorovou aktivitu. Mohou být použity pro léčení nádorů, například nádorů exprimujících topoizomerázu, u pacienta podáváním uvedenému pacientovi terapeuticky účinného množství sloučeniny obecného vzorce II, nebo farmaceuticky přijatelné soli sloučeniny obecného vzorce II, nebo libovolné směsi těchto látek. Příklady nádorů nebo typů rakoviny zahrnují rakovinu jícnu, žaludku, střeva, konečníku, ústní dutiny, farynxu, larynxu, plic, tračníku, prsu, cervix uteri, corpus endometrium, vaječníků, prostaty, varlat, močového měchýře, ledvin jater, pankreasu, kostí, vaziva, kůže, očí, mozku a centrálního nervového systému, stejně tak jako rakoviny štítné žlázy, leukémii, Hongkinovu nemoc, lymfomy jiné než Hodgkinovy, vícenásobné myoelomy a další.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou také být použity pro léčení parazitálních onemocnění inhibicí hemoflagelátů (například trypanosomie nebo infekce leishmania) nebo inhibicí plasmodií (jako například v případě malárie), ale také při léčení infekcí nebo onemocnění virových.
Tyto vlastnosti vytvářejí z produktů obecného vzorce II látky vhodné pro farmaceutické použití. Předmětem předloženého přihlášky jsou produkty obecného vzorce II, tak jak byly definovány výše, nebo adiční soli s farmaceuticky přijatelnými anorganickými nebo organickými kyselinami produktu obecného vzorce III jako jsou například soli obecného vzorce III popsané výše nebo libovolné směsi těchto látek pro použití jako léčiva. Předložený vynález se také týká farmaceutických kompozic obsahujících jako účinnou složku alespoň jednoho z léčiv uvedených výše.
Předložený vynález se dále týká farmaceutických kom pozic obsahujících sloučeninu podle předloženého vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelnou adiční sůl spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem zvoleným podle způsobu podávání (například orální, intravenózní, intraperitoneální, intramuskulámí, transdermální nebo subkutánní). Farmaceutická kompozice (například terapeutická) může být ve formě pevné, tekuté, ve formě liposomů nebo lipidových micel.
Farmaceutická kompozice může být v pevné formě jako jsou například prášky, pilulky, granule, tablety, liposomy, želé nebo čípky. Pilulky, tablety nebo želé mohou být povlečeny látkou schopnou chránit kompozici před působením žaludečních kyselin nebo enzymů v žaludku po dobu dostatečnou k tomu, aby kompozice prošla nenatrávená do tenkého střeva pacienta. Sloučenina může také být podávána lokálně, například přímým nanesením na nádor. Sloučenina může také být podávána způsobem s pomalým uvolňováním (například kompozice s pomalým uvolňováním nebo infuzní pumpa). Vhodný pevný nosič může být například fosforečnan vápenatý, stearan hořečnatý, uhličitan hořečnatý, talek, cukry, laktóza, dextrin, škrob, želatina, celulóza, methylcelulóza, sodná karboxycelulóza, polyvinylpyrrolidin a vosky. Farmaceutické kompozice obsahující sloučeninu podle předloženého vynálezu mohou být také podávány v tekuté formě jako například roztoky, emulze, suspenze nebo přípravky s prodlouženým uvolňováním. Vhodné tekuté nosiče mohou být například voda, organická rozpouštědla jako je glycerol nebo glykoly jako je polyethylenglykol, stejně tak jako jejich směsi v různých poměrech s vodou.
Předložený vynález se také týká použití produktů obecného vzorce II definovaných výše nebo farmaceuticky přijatelných adičních solí produktu obecného vzorce II s anorganickými nebo organickými kyselinami, jako jsou například soli obecného vzorce III uvedené výše nebo libovolné směsi těchto látek pro přípravu látek určených pro inhibici topoizomerázy a obzvláště topoizomeráz typu I nebo typu II, pro přípravu léčiv pro léčení nádorů, pro přípravu léčiv pro
-9CZ 297896 B6 léčení parazitárních infekcí stejně tak jako pro přípravu léčiv pro léčení virových infekcí nebo onemocnění.
Dávka sloučeniny podle předloženého vynálezu určená pro léčení onemocnění nebo poruch uvedených výše se mění v závislosti na způsobu podávání, věku a tělesné hmotnosti léčeného subjektu stejně tak jako na jeho stavu a bude definitivně určena ošetřujícím lékařem nebo veterinářem.
Takové množství, určené ošetřujícím lékařem nebo veterinářem, je nazýváno „terapeuticky účinné množství“.
Pokud není uvedeno jinak, technické a vědecké názvy dále použité mají stejný význam jako je význam, ve kterém je používá běžný odborník v příslušném oboru, do kterého spadá tento předložený vynález. Navíc všechny publikace, přihlášky vynálezu a další uvedené citace jsou zahrnuty jako reference.
Následující příklady jsou uvedeny jako ilustrace a v žádném případě nepředstavují omezení rozsahu předmětu předloženého vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1 (+)-5-ethyl-5-hydroxy-l,3,4,5,8,9-hexahydrooxepino[3,4-c]pyridin-3,9-dion [(+)-EHHPDJ .a. Chinidinová sůl kyseliny 3-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxy-pentanové:
Terc.-butyl 3-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxy-pentanoát (40 g;
100 mmol) se zpracovává kyselinou trifluoroctovou (150 ml) a reakční směs se míchá po dobu 18 hodin při teplotě 20 °C. Po odpaření kyseliny trifluoroctové, se vlije methylenchlorid (200 ml) a přidává se nasycený roztok hydrogenuhličitanu sodného až do pH = 7,5-8. Po dekantaci, vodná fáze se promývá 100 ml methylenchloridu. pH vodné fáze se upraví na hodnotu 1 přidáním roztoku 6 N kyseliny chlorovodíkové. Produkt se potom extrahuje z vodné fáze methylenchloridem (dvakrát 200 ml). Roztok se suší na síranu hořečnatém a koncentruje. Takto získaná kyselina 3(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxy-pentanová (31,1 g : 90 mmol), vyjmutá v izopropylalkoholu (30 ml), se zpracovává roztokem chinidinu (29,2 g : 90 mmol) v izopropylalkoholu (30 ml) při teplotě 50 °C za míchání a do úplného rozpouštění. Potom se teplota nechá znovu poklesnout až na 40 °C, míchání se zastaví a teplota se nechá měnit až do 20 °C. Prostředí se přivede na teplotu 0 °C bez míchání a potom udržuje při této teplotě po dobu 16 hodin. Potom se teplot nechá vzrůst až na 20 °C a míchá se až do krystalizace. Prostředí se zředí izopropylalkoholem a potom filtruje. Precipitát se promývá izopropylalkoholem. Sůl enantiomerů (+) precipituje (m = 26,6 g) zatímco sůl enantiomerů (-) zůstává v roztoku v izopropylalkoholu. Takto se získá filtrát, který se koncentruje pro získání olej (34 g), který se použije bez dalšího čištění v následující etapě.
Produkty se analyzují pomocí HPLC na koloně CHIRAL AGP 5μ (10 cm x 4 mm) vymývané směsí izopropylalkohol/voda/fosfátový pufr. pH = 6,5:30/920/50, při průtoku l,2ml/min, detekce UV při 280 nm. Retenční doby jsou 6,4 minut pro enantiomer (-) a 2,8 minut pro enantiomer (+). Poměr enantiomer (-) / enantiomer (+) je roven 83 /17.
.b. Kyselina (-)-3-(3-benzyloxymythyl-2-methoxy-4-pyridyl-3-hydroxypentanová
- 10CZ 297896 B6
Roztok v izopropylalkoholu získané chinidinové soli enantiomeru (-)-kyseliny 3-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-4-pyridyl)-3-hydroxy-pentanové (etapa l.a) se koncentruje. Koncentrát se vyjme v 270 ml methylenchloridu a 270 ml roztoku kyseliny chlorovodíkové IN. Reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě 20 °C. Po dekantaci se organická fáze koncentruje, koncentrát se vyjme v methanolu pro použití v následující fázi.
Získá se 13,5 g produktu (výtěžek 87%) a poměr enantiomer (-)/enantiomer (+) je roven 85/15.
Retenční doby HPLC (stejný protokol jako v 1 .a) jsou:
- enantiomer (-): 6,4 minut
- enantiomer (+): 2,8 minut
1. c (+)-5-ethyl-5-hydroxy-l,3,4,5,8,9-hexahydrooxepino[3,4-c]pyridin-3,9-dion:
Kyselina (-)-3-(3-benzyloxymethyl-2-methoxy-^l-pyridyl)-3-hydroxy-pentanová (13,5 g; 39 mmol; etapa Lb) se uvede do roztoku v 87 ml methanolu. Tento roztok se vlije pod dusíkovou atmosférou na 10% paládium na uhlí vlhké na 50% 27,7 g; 13 mmol). Reakční směs se míchá po dobu 5 minut, potom se přidá roztok mravenčanu amonného (11,5 g; 183 mmol) v 135 ml methanolu. Reakční směs se míchá po dobu 30 minut a teplota se nechá vyvíjet, potom se zahřívá při teplotě 40 °C po dobu 30 minut. Prostředí se potom filtruje přes vrstvu Clarcelu a koncentruje. Přilije se 40 ml toluenu, který se odpaří; tato operace se opakuje pro eliminacím ethanolu. Residuum takto získané se vyjme v 45 ml tetrahydrofuranu. Potom se přileje roztok dicyklohexylkarbodiimidu (7,180 g; 34,5 mmol) v 20 ml tetrahydrofuranu. Reakční prostředí se zahřívá při teplotě 50 °C po dobu 1 hodiny. Směs se přivede na teplotu 20 °C a potom se dicyklohexylmočovina filtruje. Filtrát se koncentruje do sucha. Residuum se uvede do roztoku (v 46 ml acetonitrilu, přidá se 6,0 g (40,5 mmol) jodidu sodného a potom 5,13 ml (40,5 mmol) trimethylsilylchloridu. Reakční směs se udržuje za míchání při teplotě okolí po dobu 5 hodin. Potom se přidá 28 ml acetonitrilu 5,6 ml vody. Získaný precipitát se filtruje a potom vyjme v 1 ml vody a pH se upraví na hodnotu 7,5 přidáním roztoku amoniaku. Získaná pevná látka se filtruje a suší. Získá se m = 4,2 g konečného produktu s výtěžkem 34 % a poměrem enantiomer (+) / enantiomer (-) rovným 88,4 /11,6.
Analýza HPLC se provádí na koloně Chiralcel OD 25 cm x 4,6 mm, použití vymývací rozpouštědla jsou heptan 600 a ethanol 400 a průtok je 1 ml/min 210 nm. Retenční doby jsou:
- enantiomer (-): 7,1 minut
- enantiomer (+): 9 minut.
Produkt se vyjme v acetonu (40 ml), potom se přidá voda (150 ml). Nechá se precipitovat a získá se 3 g produktu s poměrem enantiomer (+) / enantiomer (-) rovným 99,4 / 0,6.
*H NMR (250 MHz, DMSO D6): 0,8 (r, 3H, CH3-CH2); 1,65 (m, 2H, CH2-CH3); 3,00-3,35 (q, 1H+1H, -CH2-CaO); 5,3 (q, 2H, CH2-O); 5,7 (s, -OH); 6,35 (d, IH aromatický); 7,3 (d, IH, aromatický); 11,7 (s, N-H).
Příklad 2 (+)-5-ethyl-9,10-difluor-5-hydroxy-4,5,13,15-tetrahydro-lH,3H-oxapino[3',4':6,7]indolizino[ 1,2-b]chinolin-3,15-dion
2. a. N-(3,4-difluorfenyl)acetamid:
Směs 3,4-difluoranilinu (50 ml; 0,5 mol) a triethylaminu (70 ml; 0,5 mol) v dichlormethanu (1,5 1) se ochladí ledovou lázní. Acetanhydrid (71,5 ml; 0,75 mol) se přidá po kapkách a reakční
-11 CZ 297896 B6 směs se potom míchá po doba 1 hodiny při teplotě okolí. Získaná směs se potom promývá postupně vodou, roztokem hydrogenuhliěitanu sodného 10 % a nasycenou solankou. Organická frakce se suší na síranu sodném a koncentruje za sníženého tlaku. Residuum se suspenduje v pentanu, filtruje a suší za sníženého tlaku pro získání produktu z názvu (78 g; 91 % výtěžek) ve formě bělavé pevné látky.
(Teplota tání 126 až 127,5 °C).
’H NMR (DMSO): 2,15 (s,3H); 7,10-7,65 (m, 2H); 7,65-8,10 (m, 1H); 10,30 (široký pík, 1H).
2.b. 2-chlor-6,7-difluor-3-chinolin-3-karbaldehyd:
Používá se obecná procedura, kterou popsali Meth-Cohn a kol., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 1981, 1520 a 2509. K Vilsmeyerovu reaktantů, který byl získán přidáním po kapkách pod argonovou atmosférou oxychloridu fosforečného (103 ml; 1,1 mol) do bezvodého DMF (34 ml; 440 mmol) chlazeného ledovou lázní a míchaného po dobu půl hodiny předtím, než se teplota ponechá vzrůst na teplotu okolí, se přidá produkt etapy 2.a (32 g; 220 mmol). Směs takto získaná se míchá při teplotě 70 °C po dobu 16 hodin. Po ochlazení na teplotu okolí, se reakční směs přidá po kapkách do směsi voda-led (400 ml) a míchá po dobu 2 hodin. Získaný precipitát se filtruje a promývá vodou, potom suší pro získání produktu z názvu (9 g; 18 % výtěžek) ve formě žluté pevné látky.
(Teplota tání 226,5 až 229 °C).
Ή NMR (DMSO): 8,17 (dd, 1H), 8,39 (dd, 1H), 8,97 (d, 1H); 10,34 (d, 1H).
IR(KBr): 888, 1061, 1262, 1507, 1691 cm'1.
2.c. 2-chlor-6,7-difluor-3-chinolylmethanol:
Suspenze produktu etapy 2.b (9 g; 39 mmol) v methanolu (400 ml) se zpracovává borhydridem sodným (1 g; 53 mmol) při teplotě okolí po dobu půl hodiny. Přebytek borhydridu se odstraní kyselinou octovou (2 ml). Těkavé látky se odstraní za sníženého tlaku. Residuum se rozpustí v ethylacetátu (500 ml), získaná směs se potom promývá postupně zředěným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasycenou solankou. Potom se suší na síranu hořečnatém a koncentruje za sníženého tlaku. Residuum se rekrystalizuje v 1,2-dichlorethanu pro získání produktu v názvu (8 g; 80 % výtěžek) ve formě béžové pevné látky.
(Teplota tání 166,5 až 167 °C) ’H NMR (DMSO): 4,67 (d, 2H); 5,80 (t, 1H), 8,01 (dd, 1H); 8,22 (dd, 1H); 8,48 (s, 1H).
IR(KBr)871, 1038, 1253, 1513 cm1.
2.d. (+)-8-(2-chlor-6,7-difluor-3-chinolinmethyl)-5-ethyl-5-hydroxy-l,3,4,5,8,9-hexahydrooxepino[3,4-c]pyridin-3,9-dion:
Do roztoku (+)-EHHOPD v bezvodém DMF (30 ml) (1,58 g; 7,08 mmol; etapa l.c). produktu etapy 2.c (1,62 g; 7,06 mmol) a tributylfosfinu (1,91 ml; 7,87 mmol) se přidá po kapkách při teplotě okolí a pod argonovou atmosférou diethylazodikarboxylát (1,24 ml; 7,87 mmol). Směs takto získaná se potom míchá po dobu 16 hodin. Reakční směs se potom odpaří do sucha za sníženého tlaku. Residuum se čistí chromatografií na koloně oxidu křemičitého (vymývací rozpouštědlo : ethylacetát). Získaná pevná látka se vyjme v diethyletheru, filtruje a suší pro získání produktu z názvu (1,56 g; 51 % výtěžek) ve formě bělavé pevné látky.
-12CZ 297896 B6 (Teplota tání 196 °C).
’H NMR (DMSO): 0,84 (t, 3H); 1,74 (m, 2H); 3,02 (d, 1H), 3,34 (d, 1H); 5,29 (s, 2H), 5,31 (dd, 2H), 5,75 (s, 1H); 6,51 (d, 1H); 7,80 (d, 1H), 8,03 (dd, 1H), 8,07 (s, 1H); 8,17 (dd, 1H).
IR(KBr): 875, 1057, 1360, 1507, 1574, 1647, 1749 cm'1.
2. e (+)-5-ethyl-9,10-difluor-5-hydroxy-4,5,13,15-tetrahydro-lH,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[ 1,2-b]chinolin-3,15-dion:
Směs produktu etapy 2.d (1,53 g; 3,52 mmol; etapa 2.d.), bromidu tetrahydrobutylammonia (1,25 g; 3,87 mmol), octanu draselného (520 mg; 5,28 mmol), trifenylfosfínu (180 mg; 0,70 mmol) a octanu paladnatého (79 mg; 0,35 mmol) se míchá pod argonovou atmosférou v bezvodém acetonitrilu a zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 22 hodin. Po návratu reakčního prostředí na teplotu okolí se směs koncentruje za sníženého tlaku před provedením chromatografie na koloně oxidu křemičitého (vymývací rozpouštědlo : směs CH2Cl2/MeOH 98/2). Takto se získá produkt z názvu (960 mg; výtěžek 68 %; čistota určená pomocí HPLC : 97,1 %). Tento produkt se vyjme v bezvodém CH2C12 (100 ml) a míchá 24 hodin, potom se filtruje a suší za sníženého tlaku pro získání čistého produktu z názvu (850 mg; výtěžek 61 %; čistota určená pomocí HPLC : 99,6 %) ve formě bílé pevné látky.
’HNMR (DMSO): 0,87 (t, 3H); 1,85 (m, 2H); 3,08 (d, 1H); 3,44 (d, 1H); 5,26 (s, 2H); 5,39 (d,2H); 5,52 (d, 2H); 5,99 (široký pík, 1H); 7,39 (s, 1H); 8,15 (dd, 1H); 8,23 (dd, 1H); 8,67 (s, 1H).
IR(KBr): 871, 1261, 1512, 1579, 1654, 1746 cm’1.
Příklad 3 (+)-chlor l-[9-chlor-5-ethyl-5-hydroxy-l0-methyl-3,15-dioxo-4,5,13,15-tetrahydro-l H,3Hoxepino[3',4':6,7]indolizino[l ,2-b]chinolin-12-ylmethyl]^-methyl-hexahydropyridinium .a. l-(2-amino-4-chlor-5-methylfenyl)-2-chlor-ethanon:
3-chlor-4-methylanilin (44,4 ml; 0,366 mol) v 1,2-dichlorethanu (440 ml), pod argonovou atmosférou, se ochladí ledovou lázní. Potom se do směsi přidá po kapkách a v daném pořadí: chlorid boritý (1M vheptanu; 400 ml; 0,4 mol), chloracetonitril (28 ml; 0,44 mol) adiethylaluminiumchlorid (1M v heptanu; 400 ml; 0,4 mol). Po dobu adice se teplota udržuje pod 20 °C. Vzniklá směs se potom zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 3 hodin a potom ochladí na teplotu 10 °C. Potom se opatrně provádí hydrolýza reakčního prostředí pomocí kyseliny chlorovodíkové 2N (240 ml) a zahřívá na teplotu zpětného toku po dobu 1 hodiny. Přidá se voda (1 1) a ethylacetát (1 1), získaná směs se míchá po dobu 15 minut před separací fází. Vodná fáze se znovu extrahuje ethylacetátem (200 ml) a potom se sloučené organické fáze promývaní vodou (500 ml). Organická fáze se suší na síranu hořečnatém a koncentruje. Residuum se vyjme v petroleumetheru (frakce s teplotu varu 45 až 60 °C; 150 ml) a směs takto získaná se nechá odpočívat po dobu 16 hodin při teplotě 4 °C. Vzniklý precipitát se získá filtrací, promývá petroleumetherem a suší za sníženého tlaku pro získání produktu z názvu (25 g; 31 % výtěžek). Teplota tání 129 až 130 °C.
’H NMR (DMSO): 2,20 (s, 3H); 4,98 (s, 2H); 6,90 (s, 1H); 7,15 (široký pík 2H); 7,70 (s, 1H).
I(KBr): 871, 1018, 1183, 1225, 1270, 1533, 1577, 1619, 1662 cm'1.
3. b. ethyl-7-chlor-4-chlormethyl-6-methyl-2-oxo-1,2-dihydro-3-chinolinkarboxylát:
-13CZ 297896 B6
Produkt etapy 3.a (25 g; 0,11 mol) a triethylamin (30,6 ml; 0,22 mol) se smíchají v acetonitrilu (520 ml). Přidá se ethylmalonylchlorid (28,1 ml; 0,22 mol) při teplotě okolí a pod argonovou atmosférou. Získaná směs se míchá po dobu 3 hodin. Potom se po kapkách přidá ethanolát sodný (připravený rozpuštěním 3 g, to jest 0,13 mol, sodíku v 140 ml absolutního ethanolu) a vzniklá směs se míchá při teplotě okolí po dobu 16 hodin. Precipitát se získá filtrací, promývá postupně ethanolem, vodou, ethanolem a etherem. Směs se potom suší za sníženého tlaku při teplotě 70 °C oxidu fosforečném pro získání produktu z názvu (28,6 g; 83 % výtěžek) ve formě bělavého prášku.
’H NMR (DMSO): 1,30 (t, 3H); 2,40 (s, 3H); 4,35 (q, 2H); 4,85 (s, 2H); 7,41 (s, 1H); 7,91 (s, 1H); 12,15 (široký pík, 1H).
IR (KBr): 879, 1108, 1250, 1288, 1483, 1664, 1721 (cm1).
,c. ethyl-2,7-dichlor-4-chlormethyl-6-methyl-3-chinolinkarboxylát:
Produkt etapy 3.b (28,4 g; 90 mmol) se zahřívá po dobu 4 hodin při teplotě zpětného toku v oxychloridu fosforečném (400 ml). Získaná směs se koncentruje za sníženého tlaku (20 mm Hg) při teplotě 80 °C. Residuum se vyjme v diizopropyletheru (400 ml). Vzniklý precipitát se získá filtrací, promývá etherem a petroleumetherem a potom suší za sníženého tlaku pro získání produktu z názvu (25,4 g; 85 % výtěžek) ve formě bělavého prášku.
(Teplota tání 126 až 127 °C).
’H NMR (DMSO): 1,37 (t, 3H); 2,58 (s, 3H); 4,49 (q, 2H); 5,14 (s, 2H); 8,6 (s, 1H); 8,35 (s, 1H).
IR (KBr): 874, 1006, 1163, 1243, 1278, 1577, 1723 cm’1.
3.d. 2,7-dichlor-4-chlormethyl-6-methyl-3-chinolylmethanol:
Produkt etapy 3.c (25,2 g; 76,5 mmol) se smíchá pod argonovou atmosférou s dichlorethanem (630 ml). Po kapkách se přidá diizobutylaluminiumhydrid (1M v dichlormethanu; 307 ml; 307 mmol), zatímco reakční směs se míchá a teplota se udržuje pod 20 °C. Reakční směs se potom míchá při teplotě okolí po dobu 3 hodin, potom se vlije do vodného roztoku vínanu draselného (koncentrovaného na 20 % hmotnostně; 1,5 1). Takto získaná emulze se intenzívně míchá po dobu 1 hodiny, filtruje přes celit a potom se dvě fáze separují. Vodná fáze se extrahuje ethylacetátem (200 ml) a sloučené organické fáze se promývají vodným roztokem chloridu sodného (koncentrace 20 % hmotn.; 500 ml). Získaná organická fáze se suší na síranu hořečnatém, filtruje a koncentruje za sníženého tlaku. Residuum se vyjme v diethyletheru (50 ml) a vzniklý precipitát se získá filtrací. Sušením za sníženého tlaku se získá produkt z názvu (18,3 g; 93 % výtěžek) ve formě bělavého prášku.
(Teplota tání 169 až 170 °C).
Ή NMR (DMSO): 2,57 (t, 3H); 4,84 (s, 2H); 5,36 (s, 2H); 8,06 (s, 1H); 8,27 (s, 1H).
IR (KBr): 870, 1022, 1102, 1304, 1482, 1567 cm’1.
3.e. 2,7-dichlor-6-methyl-4-(4-methylpiperidinomethyl)-3-chinolylmethanol:
Roztok produktu etapy 3.d (16,2 g; 55,7 mmol) v tetrahydrofuranu (70 ml) se zpracovává roztokem 4-methylpiperidinu (23 ml; 195 mmol). Získaná směs se míchá při teplotě okolí po dobu 2 hodin. Přidá se voda (200 ml) a dichlorethan (200 ml). Organická fáze se promývá vodným roztokem chloridu sodného (koncentrace 20 % hmotn.; 100 ml), suše na síranu hořečnatém a kon-14CZ 297896 B6 centruje za sníženého tlaku. Krystalizaci residua v diethyletheru se získá produkt z názvu (18,3 g;
% výtěžek) ve formě pevné krystalické bílé látky.
(Teplota tání 170 až 171,5 °C).
]H NMR (CDC13): 0,88 (d, 3H); 1,17 (m, 2H); 1,42 (m, 1H); 1,60 (m, 2H); 2,19 (t, 2H); 2,56 (s, 3H); 2,82 (d, 2H); 4,02 (s, 2H), 4,93 (s, 2H); 6,36 (široký pík, 1H); 7,95 (s, 1H); 8,02 (s, 1H).
IR (KBr): 971, 1013, 1105, 1293, 1479, 1559 cm'1.
3.f. (+)-8-[2,7-dichlor-6-methyl-4-(4-methylopiperidinomethyl)-3-chinolylmethyl]-5-ethyl-
5-hydroxy-l,3,4,5,8,9-hexahydrooxepino[3,4-c]pyridin-3,9-dion:
Suspenze (+)-EHHOPD (získaná v etapě l.c; 1,56 g; 7,00 mmol) v bezvodém dioxanu (70 ml) se zpracovává postupně pod argonovou atmosférou produktem etapy 3.e (2,47 g; 7,0 mmol), trifenylfosfinem (2,02 g; 7,7 mol) a diizopropylazodikarboxylátem (1,07 ml; 10,5 mmol). Směs se míchá při teplotě okolí po dobu 16 hodin. Těkavé látky se potom odpaří za sníženého tlaku. Residuum se čistí chromatografií na koloně oxidu křemičitého (vymývací rozpouštědlo : ethylacetát). Získaná pevná látka se vyjme v diethyletheru, filtruje a suší pro získání produktu z názvu (1,96 g; 50 % výtěžek) ve formě bělavé pevné látky.
(Teplota tání 182 °C).
’H NMR (DMSO): 0,89 (m, 8H); 1,23 (m, 1H); 1,41 (t, 2H); 1,64 (m, 2H); 2,09 (q, 2H); 2,59 (m, 5H); 3,15 (dd, 2H); 4,06 (dd, 2H); 5,31 (dd, 2H); 5,35 (dd, 2H); 5,75 (s, 1H); 6,29 (d, 1H); 7,17 (d, 1H); 8,06 (s, 1H); 8,46 (s, 1H).
IR (KBr): 878, 1053, 1275, 1474, 1572, 1648, 1747 cm'1.
3.g. (+)-9-chlor-5-ethyl-5-hydroxy-l0-methyl-l2-(4-methylpiperidinomethyl)-4,5,13,15tetrahydro-ÍH,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[l,2-c]chinolin-3,15-dion:
Směs produktu etapy 3.f (3,80 g; 6,80 mmol), tetrabutylammoniumbromidu (2,42 g; 7,5 mmol),. octanu draselného (1,00 g; 10,2 mmol), trifenylfosfinu (890 mg; 3,4 mmol) a octanu paladnatého (220 mg; 0,68 mmol) se míchá pod argonovou atmosférou v bezvodém acetonitrilu (85 mg) při teplotě zpětného toku po dobu 24 hodin. Po ochlazení na teplotu okolí se vzniklý precipitát odebere filtrací a promývá postupně acetonitrilem, vodou, acetonem a diethyletherem a tím se získá po sušení za sníženého tlaku, produkt z názvu (2,5 g; 70 % výtěžek) ve formě bělavého prášku.
‘HNMR (DMSO): 0,86 (m, 6H); 1,12 (q, 2H); 1,36 (m, 1H); 1,56 (d, 2H); 1,84 (q, 2H); 2,12 (t, 2H); 2,56 (s, 3H); 2,83 (dd, 2H); 3,26 (dd, 2H); 4,03 (dd, 2H); 5,28 (dd, 2H); 5,45 (ss, 2H); 6,04 (s, 1H); 7,34 (s, 1H); 8,14 (s, 1H); 8,38 (s, 1H).
IR (KBr): 870, 1058,1208, 1280, 1477, 1593, 1655, 1749 cm·1.
3.h (+)-chlorid l-[(5R)-9-chlor-5-ethyl-5-hydroxy-l0-methyl-3,15-dioxo-4,5,13,15-tetrahydrO“lH,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[l,2-c]chinolin-12-ylmethyl]-4-methyl-hexahydroxyridinia.
Směs produktu etapy 3.9 (2,3 g; 7,77 mmol) a absolutního ethanolu (300 ml) se podrobí po dobu 2 minut ultrasonikaci. Vzniklá mléčná suspenze se míhá a zpracovává kyselinou chlorovodíkovou (roztok IN; 13,2 ml; 13,2 mmol) pro získání jasně žlutého roztoku, který v klidu vytváří precipitát gelovitého typu. Precipitát se odebere filtrací Biichnerovou nálevkou a promývá postupně ethanolem a etherem, potom se suší za sníženého tlaku pro získání produktu z názvu (2,1 g; 85 %výtěžek).
-15CZ 297896 B6
Ή NMR (DMSO): 0,87 (m, 6H); 1,59 (m, 5H); 1,84 (q, 2H); 2,64 (s, 3H); 3,28 (dd, 2H); 3,45 (s, 2H); 4,93 (s, 2H); 5,47 (dd, 2H); 5,61 (s, 2H); 6,04 (široký pík, 1H); 7,41 (s, 1H); 8,28 (s, 1H);
8,63 (s, 1H); 10,30 (široký pík, 1H).
IR(KBr); 1043,1212,1479,1585,1655,1751 cm’1.
Farmakologická studie produktů podle předloženého vynálezu
Test působení na buněčnou proliferaci.
V této studii bylo použito pět nádorových buněčných linií:
SW620 (lidský adenokarcinom tračníku), OVCAR-5 (lidský acenokarcinom vaječníku), PC-3 a DU 145 (lidské buněčné linie prostaty) a NCI-H69 (lidský adenokarcinom plic). Tyto linie pocházel z NCI/Frederick Cancer Research and Development Center (Frederick, MD). Linie byly kultivovány v úplném médiu obsahujícím médium RMPI-1640 obohacené 10% fetálního telecího séra a 2 mM L-glutaminu. Buněčné linie byly inkubovány při teplotě 37 °C ve vlhké atmosféře s 5 % CO2. Slepené buňky byly rozděleny zpracováním roztokem 0,25 % trypsinu a 0,2% EDTA (Worthington Biochemical Corp., Freehold, NJ) po dobu 5 minut při teplotě 37 °C. Počítání buněk se provádělo pomocí počítače Coulter 21 (Coulter Corp., Hialeah, FL). Životaschopnost byla hodnocena obarvením buněk propidiumjodidem a potom počítáním průtokových cytometrem EPICS Elitě (Coulter).
Sloučenina podle příkladů 2 a 3 určené k testování byly rozpuštěny na 5 mM v roztoku N,N-dimethylacetaminu (DMA, Aldrich). Další ředění byla prováděna kultivačním médiem. Konečné testované molámí koncentrace byly: 1.10'6, 2.10'7, 4.10'8, 8.10'9, 1,6-l O9, 3,2.10’’0, 6,4.10’’1, 1,28.10^1, 2,56.10 '2, a 5,12.10'3. Každá koncentrace byla testována v osmi jamkách. Kontrola na vliv DMA byla prováděna u všech buněčných linií. Z těchto kontrol byla zjištěna, že maximální použití koncentrace (0,02 %) DMA neměla účinek. Doxorubicin s koncentracemi 1. 10'7 M a 2.10'7 M byl používán jako pozitivní kontrola.
Buňky byly naočkovány v množství 5.103 buněk na jamku na mikrotitrační destičku s96 jamkami (Coster Corporation, Cambridge, MA). Buňky byly inkubovány 24 hodin při teplotě 37 °C, aby se umožnilo započetí buněčného množení. Sloučenina podle příkladů 2 a 3, určené k testování, byly potom přidány ve výše uvedených koncentracích a buňky byly inkubovány při teplotě 37 °C ve vlhké atmosféře s obsahem 5 % CO2 po dobu 3 dní pro spojení buňky (SV620, OVCAR-5, PC-3 a DU 145) a po dobu 5 dní pro buňky v suspenzi (NCI-H69).
Spojené buňky byly testovány způsobem SRB (který popsali L.V. Rubesnstein, R.H. Shoemaker, K.D. Paull, R.M. Simon, s. Tosini, P. Skehan, D.A. Scudiero, a. Monks, and M.R. Boyd „Comparison of in vitro inticancer-drug-screening data genetated with tetrazolium assay versus a protein assay against a diverse panel of human tumor cell lineš“, J. Nat. Cancer Inst., 82:1113-1118, 1990). Po třech dnech inkubace byl supematant odebrán a bylo přidáno 200 μΐ média RPMI-1640 bez telecího fetálního séra.
Buňky byly fixovány přidáním 50 μΐ kyseliny trichloroctové 50 % (výsledná koncentrace kyseliny trichloroctové 10 %) a inkubovány při teplotě 4 °C po dobu 1 hodiny. Jamky potom byly promývány pětkrát vodou a potom obarveny 50 μΐ roztoku 0,4 % sulforhodaminu B (SRB, Sigma), v 1 % kyselině octové při teplotě okolí po dobu 10 minut. Barvivo bylo rozpuštěno v 100 μΐ TRIS 10 mM, pH 10 po dobu zhruba 5 minut za míchání, mikrodestičky byly odečítány spektrofotometru při 570 nm.
Buňky v suspenzi byly testovány způsobem XTT (který popsali D.A. Scudiero, R.H. Shoemaker, K.D. Paull, A. Monks, S. Tiemey, T.H. Nofziger, M.J. Currens, D. Seniff a M.R. Boyd.
-16CZ 297896 B6 „Evaluation of a soluble tetrazolium/formazan assay for cell growth and drug sensitivity in culture using human and other tumor cell lineš“, Cancer Research 48: 4821-4833, 1988). Po inkubaci v přítomnosti testovaných sloučenin podle příkladů 2 a 3 byl ke kulturám přidán XTT [sodná sůl 2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfofenyl)-2H-tetrazolium-5-karboxanilidu, (Sigma)] a methosulfát fenazinu (PRS, Sigma) v roztoku ve fosfátově pufrovaném solném roztoku a buňky byly inkubovány po dobu 4 hodin při teplotě 37 °C v atmosféře s 5 % CO2. Konečné koncentrace XTT a PMS byly 50 respektive 0,38 pg na jamku. Vytváření formazanu bylo zastaveno přidáním 10 μΐ 10 % dodecylsulfátu sodného (Sigma) a absorbance byla odečítána spektrofotometricky při 450 nm s referenčním filtrem při 600-650 nm.
Výsledky
Molámí koncentrace sloučenin podle příkladů 2 a 3 inkubují na 50 % buněčnou proliferaci jsou uvedeny v následující tabulce:
| Buněčná linie | Příklad 2 | Příklad 3 |
| SW620 | ’ ’ 5.10’s | 3.10‘B |
| OVCAR-5 | 8.10s | 4.10”“ |
| PC-3 | 1.10 a | 3.10'8 |
| DU 145 | 1.10~a | 7.10's |
| NCI-H69 | 3.10~iU | 1.10'3 |
1. Kamptothecin vzorce II
Claims (4)
1. Kamptothecin vzorce II (II) nebo jeho sůl, jako je například sloučenina obecného vzorce III
- 17CZ 297896 B6
2. Kamptothecin podle nároku 1 vzorce II (II), nebo jeho adiční sůl s anorganickou nebo organickou farmaceuticky přijatelnou kyselinou, jako 5 je například sloučenina obecného vzorce III nebo jakákoli jejich směs pro použití jako léčivo.
-18CZ 297896 B6
3. Farmaceutická kompozice, v y z n a č u j í c í se tím, že obsahuje jako účinnou složku alespoň jednu ze sloučenin podle nároku 2.
5 4. Použití sloučeniny podle nároku 1 pro přípravu protinádorových léčiv.
Použití sloučeniny podle nároku 1 pro přípravu antivirálních léčiv.
Použití sloučeniny podle nároku 1 pro přípravu antiparazitámích léčiv.
15 Konec dokumentu
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9710785A FR2768431B1 (fr) | 1997-08-29 | 1997-08-29 | Nouveaux analogues optiquement purs de la camptothecine, nouvel intermediaire de synthese optiquement pur et son procede de preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2000711A3 CZ2000711A3 (cs) | 2000-08-16 |
| CZ297896B6 true CZ297896B6 (cs) | 2007-04-25 |
Family
ID=9510590
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20000711A CZ297896B6 (cs) | 1997-08-29 | 1998-08-07 | Kamptothecin, farmaceutická kompozice s jeho obsahem a jeho pouzití |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP1007527B1 (cs) |
| JP (1) | JP2001514261A (cs) |
| KR (1) | KR100570254B1 (cs) |
| CN (3) | CN1104434C (cs) |
| AR (1) | AR016856A1 (cs) |
| AT (1) | ATE253069T1 (cs) |
| AU (1) | AU760863B2 (cs) |
| BR (1) | BR9811405A (cs) |
| CA (1) | CA2301739C (cs) |
| CZ (1) | CZ297896B6 (cs) |
| DE (1) | DE69819340T2 (cs) |
| DK (1) | DK1007527T3 (cs) |
| ES (1) | ES2209196T3 (cs) |
| FR (1) | FR2768431B1 (cs) |
| HK (2) | HK1031732A1 (cs) |
| HR (1) | HRP20000110A2 (cs) |
| HU (1) | HUP0003429A3 (cs) |
| IL (2) | IL134437A0 (cs) |
| NO (1) | NO324882B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ502862A (cs) |
| PL (1) | PL195289B1 (cs) |
| PT (1) | PT1007527E (cs) |
| RU (1) | RU2233283C2 (cs) |
| TW (1) | TW419479B (cs) |
| WO (1) | WO1999011646A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA987445B (cs) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2790261B1 (fr) * | 1999-02-26 | 2004-09-10 | Sod Conseils Rech Applic | Nouveaux analogues optiquement purs de la camptothecine et leurs procedes de preparation |
| US6207832B1 (en) | 1999-04-09 | 2001-03-27 | University Of Pittsburgh | Camptothecin analogs and methods of preparation thereof |
| US6372906B1 (en) | 2001-04-12 | 2002-04-16 | University Of Pittsburgh | Synthesis of silyl camptothecins and silyl homocamptothecins |
| US6723853B2 (en) | 2001-08-27 | 2004-04-20 | University Of Pittsburgh | Intermediates and methods of preparation of intermediates in the enantiomeric synthesis of (20R)homocamptothecins and the enantiomeric synthesis of (20R)homocamptothecins |
| CN100408582C (zh) * | 2004-02-12 | 2008-08-06 | 中国人民解放军第二军医大学 | 高喜树碱类化合物及其制备方法和用途 |
| EP1794127A1 (en) * | 2004-09-21 | 2007-06-13 | Société de Conseils de Recherches et d'Applications Scientifiques ( S.C.R.A.S.) | Novel processes for the production of useful intermediates |
| CN100465175C (zh) * | 2005-11-29 | 2009-03-04 | 中国人民解放军第二军医大学 | 7-位取代高喜树碱类化合物及作为药物的用途 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997000876A1 (fr) * | 1995-06-21 | 1997-01-09 | Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques (Scras) | Nouveaux analogues de la camptothecine, des procedes de preparation, leur application comme medicaments et les compositions pharmaceutiques les contenant |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5459269A (en) * | 1992-06-18 | 1995-10-17 | North Carolina State University | 14-halo-camptothecins |
-
1997
- 1997-08-29 FR FR9710785A patent/FR2768431B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-08-07 ES ES98941567T patent/ES2209196T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 PT PT98941567T patent/PT1007527E/pt unknown
- 1998-08-07 CA CA002301739A patent/CA2301739C/fr not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-07 DE DE69819340T patent/DE69819340T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 KR KR1020007002034A patent/KR100570254B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-08-07 WO PCT/FR1998/001768 patent/WO1999011646A1/fr active IP Right Grant
- 1998-08-07 RU RU2000107822/04A patent/RU2233283C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-08-07 EP EP98941567A patent/EP1007527B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 AU AU89896/98A patent/AU760863B2/en not_active Ceased
- 1998-08-07 PL PL98338835A patent/PL195289B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-08-07 AT AT98941567T patent/ATE253069T1/de active
- 1998-08-07 HU HU0003429A patent/HUP0003429A3/hu unknown
- 1998-08-07 DK DK98941567T patent/DK1007527T3/da active
- 1998-08-07 EP EP03077049A patent/EP1378512A1/fr not_active Withdrawn
- 1998-08-07 CN CN98808720A patent/CN1104434C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-07 CN CNB031021662A patent/CN1195758C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-07 CZ CZ20000711A patent/CZ297896B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-08-07 NZ NZ502862A patent/NZ502862A/xx unknown
- 1998-08-07 BR BR9811405-0A patent/BR9811405A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-08-07 JP JP2000508685A patent/JP2001514261A/ja active Pending
- 1998-08-07 IL IL13443798A patent/IL134437A0/xx active IP Right Grant
- 1998-08-18 ZA ZA987445A patent/ZA987445B/xx unknown
- 1998-08-19 TW TW087113646A patent/TW419479B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-08-21 AR ARP980104157A patent/AR016856A1/es active IP Right Grant
-
2000
- 2000-02-08 IL IL134437A patent/IL134437A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-02-28 NO NO20000995A patent/NO324882B1/no not_active IP Right Cessation
- 2000-02-29 HR HR20000110A patent/HRP20000110A2/hr not_active Application Discontinuation
-
2001
- 2001-04-03 HK HK01102373A patent/HK1031732A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-02-08 CN CN03102165A patent/CN1440972A/zh active Pending
-
2004
- 2004-02-25 HK HK04101371A patent/HK1058665A1/xx not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997000876A1 (fr) * | 1995-06-21 | 1997-01-09 | Societe De Conseils De Recherches Et D'applications Scientifiques (Scras) | Nouveaux analogues de la camptothecine, des procedes de preparation, leur application comme medicaments et les compositions pharmaceutiques les contenant |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2164515C2 (ru) | Соединения камптотецина, способы их получения, промежуточные соединения и терапевтические композиции | |
| JP3023990B2 (ja) | カンプトテシン誘導体及びその製造方法 | |
| CZ299794B6 (cs) | Analogy kamptothecinu, zpusob jejich prípravy a farmaceutické prostredky obsahující tyto analogy | |
| JPH11506453A (ja) | 水溶性カンプトテシン類似体 | |
| EP0828743A1 (en) | Water soluble camptothecin analogs | |
| RU2194051C2 (ru) | Новые аналоги камптотецина, их применение в качестве лекарственных средств и содержащие их фармацевтические композиции | |
| CZ297896B6 (cs) | Kamptothecin, farmaceutická kompozice s jeho obsahem a jeho pouzití | |
| AU2002300268B2 (en) | New benzo[b]pyrano[3,2-h]acridin-7-one compounds, a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| IL144987A (en) | History of homocamptocin and medicinal products containing them | |
| US6762301B2 (en) | Analogues of camptothecin, their use as medicaments and the pharmaceutical compositions containing them | |
| MXPA00001944A (en) | Optically pure camptothecin analogues, optically pure synthesis intermediate and method for preparing same | |
| CN117384162A (zh) | 选择性her2抑制剂 | |
| AU2005247032A1 (en) | New benzo [b]pyrano[3,2-h]acridin-7-one cinnamate compounds, a process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them | |
| KR100265033B1 (ko) | 헥사싸이클릭 캠토쎄신 유도체와 이의 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20110807 |