CZ297299B6

CZ297299B6 - Tricyklické deriváty indolu s antiangiogenními úcinky

Info

Publication number: CZ297299B6
Application number: CZ20031042A
Authority: CZ
Inventors: Giannini@Giuseppe; Ornella Tinti@Maria; Pisano@Claudio; Marzi@Mauro
Original assignee: Sigma-Tau Industrie Farmaceutiche Riunite S. P. A.
Priority date: 2000-11-03
Filing date: 2001-10-16
Publication date: 2006-11-15
Also published as: EP1343789A1; PL364908A1; CN1471535A; HUP0400546A3; JP2004513130A; ITRM20000570A1; DK1343789T3; HUP0400546A2; DE60112966D1; ES2247182T3; CA2427568A1; US6887892B2; BR0115119A; US20040034052A1; DE60112966T2; MXPA03003798A; KR20030042030A; ATE302780T1; IT1317926B1; AU1518602A

Abstract

Tricyklické deriváty indolu obecného vzorce (I) vhodné jako lécivo s cytotoxickým a antiangiogennímúcinkem.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká tricyklických derivátů indolu s antiangiogenními účinky

Dosavadní stav techniky

Používání antineoplastických léčiv v humánní terapii způsobuje mnoho toxických nebo vedlejších účinků, které musí následně vést ke snižování dávek podávaného léčiva a v některých případech i k přerušení terapie. Omezení množství podávaného léčiva nebo přerušení terapie způsobí zvýšení růstu primárního nádoru a/nebo výskyt nádorových metastáz.

Růst primárního nádoru je podporován dobrou vaskularizací (angiogenezí) nádorové tkáně. Odpovídající přívod kyslíku a nutrientů podporuje rychlý růst samotného nádoru. Bylo prokázáno, že nadměrná angiogeneze může být v prognóze neoplazmy extrémně negativním faktorem.

Angiogeneze u dospělých je běžně klidná a znamená normální funkci, například u hojících se zranění, nebo při rekonstrukci endometria během ženského reprodukčního cyklu.

Pokud jsou vaskulámí funkce omezeny a perfuze tkání je neodpovídající, je angiogenní odezva fyziologicky stimulována.

Obecněji lze tvrdit, že za fyziologických podmínek angiogeneze vytváří pozitivní zpětnou vazbu jako odezvu na neodpovídající perfuzi, nebo na omezený přísun kyslíku a živin, tak, jako to nastává v případě okluze arterií při vzrůstu hmoty tkání (například neovaskularizace, která je provázena tvorbou svalové tkáně) a v případě zvýšeného pracovního vypětí souvisejícího se zvýšenými požadavky na kyslík a živiny.

K udržení perfuze v případě lokální ischemie způsobené částečnou nebo úplnou okluzí arterie, je nezbytné vytváření kolaterál.

Jak již bylo výše zmíněno, bylo prokázáno, že při prognóze neoplazmy může být nadbytečná angiogeneze extrémně negativním faktorem (van Hinsgergh, V. W., Collen, A., Koolwijk, P., Ann. Oncol., 10. dodatek. 4, 60- 63, 1999; Buolamwini, J. K., Curr. Opin. Chem. Biol., 3, (4), 500-509, srpen 1999).

Také je známo, že neoplazmatická oblast, která je základním stadiem v biologii nádorových buněk, má schopnost metastázovat.

Nádorové buňky, které metastázují, ztrácejí přilnavost k okolním strukturám, napadají krev a lymfatické cesty a kolonizují další vzdálené tkáně, kde mohou pokračovat ve vlastní reprodukci.

Metastázování je také kritickou událostí v klinické historii onemocnění a je základní příčinou smrti v důsledku rakoviny. S tím je úzce spjata a také tomu napomáhá přítomnost vaskulámí tkáně v místě nádoru a přilehlých oblastech.

Migrace nádorových buněk obklopujícími strukturami umožňuje buňkám dosáhnout krevního řečiště uvnitř nádoru, a to ať už tam před tím existovalo, nebo bylo vytvořeno neoangiogenezí, a tak se dostat do krevního oběhu (Ray, J. M., Stetler - Stevenson, W. G., L. A., Kleiner Jr., D. E., FASEB J., 7, (15), 1434 - 1441, prosinec 1993).

-1 CZ 297299 B6

Existence komunikace mezi lymfatickými a krevními cestami vaskulámí oblasti nádoru umožňuje neoplastickým buňkám pohyb v obou vaskulámích systémech.

Poslední studie ukázaly přímý vztah mezi angiogenezí a artritickým onemocněním (Koch, A. E., Arthritis and Rheumatism, 41, 951 - 962, 1998). Zvláště bylo prokázáno, že neovaskularizace kloubních chrupavek hraje klíčovou roli při vytváření pannusu a postupu arthritidy. Normální chrupavky nemají krevní řečiště, zatímco synoviální tekutina artritických pacientů obsahuje faktor stimulující angiogenezí vytvářený endotheliálními buňkami (EASF).

Výskyt tohoto faktoru je spojen s vaskularizací a degradací chrupavek.

I další onemocnění jsou spojena s abnormální angiogenezí.

Bylo zjištěno, že neovaskularizace postižených tkání je podpůrným faktorem při diabetické retinopatii (Histol. Histopathol., 14, (4), 1287- 1294, říjen 1999), psoriaze (Br. J. Dermatol., 141, (6), 1054 - 1060, prosinec 1999), chronickém zánětu a arterioskleróze (Planta Med., 64, (8), 686 - 695, prosinec 1998).

V posledních třiceti letech byly syntetizovány sloučeniny s cykloalkanindolovou strukturou a studovány s ohledem na možné využití jejich terapeutického potenciálu.

Základním požadavkem na tyto sloučeniny - indoly substituované v poloze 3 - je vlastnost, kterou přinášejí takové přírodní látky jako je melatonin a tryptofan.

V 70. letech byly studovány sloučeniny cykloalkanindolu pro jejich protizánětlivé vlastnosti (J. Med. Chem., 19, (6), 787 - 792, 1976) nebo pro jejich antidepresantivní vlastnosti J. Med. Chem., 19, (6), 792 - 797, 1976).

Tyto studie byly pak následovány dalšími (o mnoha aminotetrahydrokarbazolech) k prokázání jejich účinků na CNS (J. Med. Chem., 20, (4), 487 - 492, 1977) tím, že mají strukturu podobnou tryptaminové.

V 80. letech bylo nalezeno mnoho derivátů s antibakteriálními vlastnostmi se strukturou tetrahydrokarbazolů: ty v kulturách inhibují Trypanosoma cruzi (Rev. Argent. Microbiol., 19, (3), 121 - 124, 1987).

V 90. letech byly studovány sloučeniny s cykloalkanindolovou strukturou jako potenciální analgetika (Xenobiotica, 19, (9), 991 - 1002, 1989), látky s účinkem na serotoninové receptory (J. Med. Chem., 36, (13), 1918 - 1919, 1993) a látky s účinkem na melatoninové receptory (Eur. J. Pharmacol., 287, (3), 239 - 243, 1995).

V posledních několika letech byly studovány deriváty tetrahydrokarbazolu pro jejich antiproliferativní vlastnosti (Farmaco, 53, (6), 431 - 437, 1998), a to zvláště deriváty N-pyridinia, které mohou působit mechanismem umocňujícím inhibici topoisomerasy II.

Patent US 5 017 593 popisuje deriváty kyseliny cyklohept[b]indol alkanoylové jako leukotrienového antagonisty.

EP 0496237 popisuje N-imidazolylové deriváty tetrahydrokarbazolu a cyklohept[b]indolů jako antagonistů tromboxanu (TXA-2), vhodné k léčbě kardiovaskulárních poruch (myokardiální infarkt a angína), cerebrovaskulámích onemocnění (mrtvice, přechodné ischemické ataky, migréna), periferních vaskulámích onemocnění (mikroangiopatie), onemocnění ledvin (glomerulální skleróza, lupulus nephritis, diabetická nephropatie), respiračních onemocnění (bronchokonstrikce a astma) a aterosklerózy.

-2CZ 297299 B6

J. Med. Chem., 41, 451 - 467, 1998 popisuje sloučeniny s tetrahydrocyklopent[b]indolovou (1), tetrahydrokarbazolovou (2) a hexahydrocyklohept[b]indolovou strukturou používané ke studiu melatoninových receptorů majících strukturu:

(1) n = 0 tetrahydrocyklopentfbjindól (2) n = 1 tetrahydrokarbazol (3) n = 2 hexahydrocyklohept[b]indol

Patent US 5 830 911; patent US 4 927 842 a patent US 4 616 028 popisují sloučeniny tetrahydrokarbazolu s protizánětlivými účinky obecného vzorce:

_R R = CH₂CN;CH₂COCH₃; V—v CH₂CH=N-OCH₃; / CH₂CH=N-OH; i i y—4-^-GOOH (CH₂)4-CH-CH₂ 1 ^X _H | pat. US 4 927 842 protizánětlivý

R = CH₂CH=CH₂ AY-30068 pat. US 4 616 028 protizánětlivý a antiangiozní

Sloučeniny popisované ve výše uvedených publikacích jsou odlišné od sloučenin nárokovaných v předkládaném vynálezu.

Přes pokrok v posledních letech se na farmaceutický průmysl zabývající se vyhledáváním nových léčiv pro léčbu nádorových onemocnění a poruch charakterizovaných abnormální angiogenezí, spoléhá ještě mnoho odborníků z oblasti medicíny jako na jednu z nej slibnějších oblastí.

Ve skutečnosti až dosud přetrvává velká potřeba nových sloučenin schopných blokovat nebo interferovat s nádorovými onemocněními a onemocněními způsobenými abnormální angiogenezí. Jak již bylo výše zmíněno, mezi tato onemocnění patří nádory, metastázy nádorů, artritická onemocnění, diabetická retinopatie, psoriáza, chronické záněty a arterioskleróza.

Podstata vynálezu

Zde popisovaný vynález se týká sloučenin majících tricyklickou strukturu typu tetrahydrocyklopent[b]indolu (1), tetrahydrokarbazolu (2) a hexahydrocyklohept[b]indolu (3), postupu jejich přípravy a farmaceutických přípravků, které je obsahují pro léčbu nádorů a onemocnění spojených s abnormální angiogenezí.

Jmenované sloučeniny mají následující obecný vzorec I:

kde:

X = CH

X! = N

R a Rj, které mohou být stejné nebo různé, se vybírají ze skupiny sestávající z: -H, -OH, OR₅, kde R₅ může být C1-C4 alkyl nebo benzyl, a pokud obě skupiny OR₅ spolu sousedí, je R₅ methylen; nebo mohou být R a Ri nezávisle na sobě nitroskupina; aminoskupina, případně monosubstituovaná C1-C4 alkylem; karboxyl; alkoxy(Ci-C4)karbonyl;

R₂ je z-H, fenyl, benzyl, lineární nebo rozvětvený C]-C₆ alkyl;

n = celé číslo od 0 do 4;

R₃, která může být stejná nebo odlišná od R4 může být: -H, -OH, -OR₆, kde Ráje lineární nebo rozvětvený C1-C4 alkyl, nebo pokud R₃ = R4 = OR₆ a sousedí spolu, je R<> izopropyliden

-4CZ 297299 B6 a Ai ·= H

A,=

aA = H, R₇

R₇ = C1-C4 lineární nebo rozvětvený alkyl, případně substituovaný jednou nebo dvěma skupinami OH, ORé, v případě dvou sousedních skupin je R_é izopropylidenem; nebo je R₇ skupina CHO, nebo CH=NOH.

Vynález zahrnuje všechny možné izomery, stereoizomery ajejich směsi.

Nyní bylo zjištěno, že sloučeniny obecného vzorce I charakterizované přítomnosti dvou aromatických bází (indolu nebo jednoho z jeho derivátů), u kterých je první kondenzována na nasycený kruh tetrahydrokarbazolového typu v poloze 2 - 3, a druhá aromatická báze vázaná v poloze 3 je přítomna jako substituent v benzylové poloze nasyceného kruhu, mají neočekávané protinádorové a antiangiogenní vlastnosti.

Sloučeniny obecného vzorce I jsou tudíž předmětem zde popisovaného vynálezu.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I ajejich použití v oblasti medicíny pro přípravu farmaceutických přípravků.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu jsou sloučeniny obecného vzorce I a postup jejich přípravy.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je farmaceutický přípravek obsahující jako účinnou složku sloučeninu obecného vzorce I a alespoň farmaceuticky přijatelný excipient a/nebo řídicí látku.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je farmaceutický přípravek obsahující jako účinnou složku sloučeninu obecného vzorce I k léčbě patologických nádorů, ve kterých nádor náleží do skupiny skládající se ze sarkomu, karcinomu, karcinoidu, kostního nádoru, nuroendokrinního nádoru, lymfoidní leukemie, akutní promyelocytní leukemie, myeloidní leukemie, monocytické leukemie, megakaryoblastické leukemie a Hodgkinsovy choroby.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je použití sloučenin obecného vzorce I k přípravě léčiva s antiangiogenními účinky.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je použití sloučenin obecného vzorce I k prevenci nastupujících nádorových metastáz.

-5CZ 297299 B6

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je použití sloučenin obecného vzorce I k léčbě artritického onemocnění.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je použití sloučenin obecného vzorce I k léčbě diabetické retinopatie.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je použití sloučenin obecného vzorce I k léčbě psoriázy.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je použití sloučenin obecného vzorce I k léčbě chronických zánětlivých onemocnění.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je použití sloučenin obecného vzorce I k léčbě arteriosklerózy.

Jak již bylo výše uvedeno, růst primárního nádoru je podporován dobrou vaskularizací nádorové tkáně a nadbytečná neoangiogeneze může být vysoce nepříznivým faktorem v prognóze neoplazmy. Odpovídající přísun kyslíku a živin do místa nádoru ve skutečnosti podporuje rychlý růst nádoru samotného.

Je dobře známo, že lékařům dostupné terapeutické úkony při léčbě nádorů jsou stále pro prevenci u mnoha pacientů umírajících na tato onemocnění nedostačující. Také je velmi dobře známo, že většina onkologických pacientů je léčena ne jedním protirakovinovým léčivem, ale kombinací několika protirakovinových látek.

Nutnost podávání protirakovinových léčiv v kombinaci přihlíží k tomu, že působení v různých metabolických oblastech vede v některých případech k úplnému vymizení nádoru, zatímco jiné látky prodlužují pacientovi život a/nebo zlepšují kvalitu života tohoto léčeného pacienta.

Až dosud stále přetrvává potřeba hledání nových sloučenin, které by se použily v boji proti rakovině v kombinaci se známými sloučeninami.

Sloučeniny podle zde popisovaného vynálezu mohou být použity v kombinaci s jedním nebo více protirakovinovými léčivy.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je kombinace sloučenin obecného vzorce I s jedním nebo více známými protirakovinnými léčivy.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je farmaceutický přípravek obsahující kombinaci sloučenin obecného vzorce I s jedním nebo více protirakovinovými léčivy a jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými excipienty nebo vehikuly.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je farmaceutický přípravek obsahující jako účinnou složku sloučeninu obecného vzorce I v kombinaci s jednou nebo více známými protinádorovými sloučeninami, ve kterých se protinádorová sloučenina vybírá ze skupiny sestávající z alkylačních látek, topoizomerázových inhibitorů, antitubulinových látek, interkalačních (vložených) sloučenin, antimetabolitů, přírodních produktů, jako je například alkaloid z barvínku, epipodophyllotoxinů, antibiotik, enzymů, taxanů a cytodiferenciačních sloučenin.

Dalším předmětem zde popisovaného vynálezu je použití kombinace sloučenin obecného vzorce I s protirakovinovými sloučeninami k přípravě léčiva k léčbě nádoru charakterizovaná tím, že sloučenina obecného vzorce I je přítomna jako koadjuvans protirakovinové sloučeniny.

-6CZ 297299 B6

Následující příklady vynález ilustrují.

Syntéza cyklizovaných produktů sestává ze dvou stupňů: první stupeň zahrnuje kondenzaci hydroxyaldehydu v geminální poloze se 2 aromatickými bázemi;

druhý stupeň spočívá v cyklizační reakci s DAST (diethylaminosulfotrifluorid).

Toto pořadí syntézy, i když s výjimkami, může reprezentovat postup syntézy použitý k přípravě všech zde popisovaných derivátů. V zájmu jednoduchosti popisu to je ilustrováno na sloučeninách obecného vzorce I, kde X je CH, X] je NH a R₃ a R4 je vodík. Je jasné, že odborníci z této oblasti mohou sloučeniny obecného vzorce I připravovat z vhodných výchozích látek a použít vhodné chemikálie jednoduše podle svých vlastních obecných znalostí nebo s ohledem na dostupné standardní příručky.

1. stupeň

HO

Jak odborníci z této oblasti jistě postihnou, první stupeň syntézy zahrnuje přípravu meziproduktů s bisindolovou strukturou.

Jejich příprava může být prováděna různými způsoby.

Schéma (1)

Reakce (Tetrahedron Asymmetry, 8, (17), 2905 - 2912, 1997): Indol nebo jeho deriváty (1 mmol) byl rozpuštěn vbezvodém Et₂O (50 ml). Pomalu byl kněmu přidáván roztok ethylmagneziumbromidu v etheru (3M) (0,33 ml; 1 mmol). Takto získaný roztok byl ponechán za míchání po několik minut v bezvodém prostředí; byla získána bílá hořečnatá sůl tohoto derivátu. Ether byl odpařen a získaný bílý zbytek byl rozpuštěn v bezvodém CH₂C1₂. Roztok byl ponechán ío za laboratorní teploty po dobu 12 hodin a pod refluxem 16 hodin.

Zpracování: roztok byl ochlazen přídavkem nasyceného roztoku NaHCO₃ a 10%NH₄Cl. Organická fáze byla oddělena, vysušena nad Na₂SO₄ a odpařena. Požadovaný produkt byl přečištěn mžikovou chromatografíí (hexan/aceton).

Postup B: Syntéza derivátů hydroxyaldehydu

n =0,1,2

R = R' = H

R - H, O-Bn, NO₂; R’ = H

R - R‘ = Ó-CHj-O

-8CZ 297299 B6

Schéma (2)

Reakce: indol nebo jeho derivát (2 mmol) byl rozpuštěn s aldehydem (5-hydroxypentanal nebo 2-ethoxytetrahydrofuran (1 mmol) v 15 ml MeOH/H₂O (2 : 1). Nakonec byl přidán dysprosium triflát a směs ponechána za laboratorní teploty reagovat po dobu 6 hodin a při 80 °C 36 hodin.

Zpracování: Reakční směs byla ochlazena 10 % NaHCO₃ a extrahována CH₂C1₂. Extrakty byly vysušeny nad Na₂SO₄ a odpařeny. Surový zbytek byl přečištěn preparativní HPLC a izolovány dva stereoizomery (X) a (Y).

Postup C: Cyklizační reakce mannofuranosových derivátů

Schéma (3)

Reakce: Bis-indolový derivát (476 mg; 1 mmol) byl rozpuštěn v CH₂C1₂ (80 ml). Do roztoku byl za laboratorní teploty přidán diethylaminosulftrifluorid (DAST) (400 μΐ; 3 mmol).

Jde o rychlou reakci.

Zpracování: po 60 minutách byl přidán 10% roztok NaHCO₃ a extrahováno CH₂C1₂. Organické extrakty byly vysušeny nad Na₂SO₄ a odpařeny. Reakční produkty přítomné v této surové směsi byly izolovány preparativní TLC nebo lépe preparativní HPLC RP-18.

-9CZ 297299 B6

Postup D: Cyklizační reakce derivátů s hydroxyaldehydem

Schéma (4)

Reakce: Symetrický derivát (1) nebo asymetrický derivát (2) (1 mmol) byl rozpuštěn v CH2CI2 (20 ml). K roztoku byl za teploty od 0 °C do laboratorní teploty přidán roztok DAST (200 μΐ;

1,5 mmol). Jde o rychlou reakci. Po 15 až 20 minutách výchozí produkt zreagoval téměř úplně.

Zpracování: Po 30 minutách byl přidán 10% roztok NaHCO₃ a takto získaný roztok byl extraho10 ván CH₂C1₂. Organická fáze byla vysušena nad Na₂SO₄ a odpařena. Reakční produkty obsažené v tomto surovém produktu byly izolovány preparativní TLC chromatografií nebo lépe preparativní HPLC-RP-18.

Z výchozích symetrických nebo asymetrických látek byl vytvořen jak derivát se sekundárním 15 indolovým zbytkem směrem k dolní části (3) s výtěžkem 30 až 60 %, tak derivát s indolovým zbytkem směrem k horní části (4); ten je přítomen v poměru k ostatním v množství mezi 10 a 25%.

-10CZ 297299 B6

Postup E: Debcnzylační reakce

MeOH; 16h

Reakce: Benzylovaný derivát (1 mmol) byl rozpuštěn v CH₃OH (50 ml).

K roztoku byl za laboratorní teploty přidán katalyzátor (10 % Pd/C; 30 mg).

Takto získaný roztok byl ponechán pod vodíkovou atmosférou při 414 kPa (60 psi).

Po 16 hodinách výchozí produkt zcela zreagoval.

Zpracování: Katalyzátor se odfiltroval. Organická fáze byla odpařena. Produkt s odstraněnou ochranou byl přečištěn mžikovou chromatografií. Výtěžek je 85 %.

Postup F: Reakce k odstranění ochrany

Schéma (6)

Reakce: chráněný produkt (1 mmol) byl rozpuštěn v tetrahydrofuranu (THF) (50 ml). K roztoku byla přidána 1 N HC1. Takto získaný roztok byl ponechán stát 1 hodinu při 20 až 40 °C. Za tu dobu výchozí produkt zcela zreagoval. Získaný základní produkt s odstraněnou ochranou byl požadovaným produktem.

Pokud se zmiňujeme pouze o produktu s odstraněnou ochranou na hexacyklickém zbytku, lze tohoto odstranění ochrany dosáhnout kyselou hydrolýzou za nízké teploty (extrakce IN HC1 za nízké teploty po dobu 30 až 60 minut).

-11 CZ 297299 B6

Zpracování: Získaný produkt (vědí es. 1) byl třepán s nasyceným roztokem NaHCO₃. THF byl odpařen a potom byl produkt extrahován v ethylacetátu (AcOEt).

Organická fáze byla odpařena a konečný produkt s odstraněnou ochranou byl přečištěn mžikovou chromatografií.

Výtěžek je 85 %.

Postup G: Oxidační reakce

Schéma (7)

Reakce: Aldehyd (1 mmol) byl rozpuštěn ve 20 ml MeOH. K roztoku byl přidán NalO₄ (1 mmol) a rozpuštěno ve 2 ml H₂O.

Takto získaný roztok byl ponechán stát při laboratorní teplotě po dobu 4 hodin.

Zpracování: 1. stupeň: Byl přidán vodný roztok Na₂S₂O₃.Organické rozpouštědlo bylo odpařeno a zbytek extrahován v ethylacetátu (AcOEt).

2. stupeň: Z chráněného meziproduktu lze ochranu odstranit podle popisu ve schématu 6.

- 12CZ 297299 B6

Příklady provedení

Příklad 1

ST 1345

(R,S)-5-hydroxy-l, l-(indol-2-yl, indol-3-yl)-pentan

TLC (Hexan/izopropanol = 97,5/2,5) : 0,5

HPLC RP-18 Waters 250 x 4,6 (70 % H₂O, 30 % CH₃CN, průtok 1 mimin’¹): 6,16

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M ): 317.

Elementární analýza: vypočteno: C = 79,21 %; H = 6,96 %; N = 8,79 %; nalezeno: C = 78,84 %; H = 7,15 %; N = 8,45 %.

-13 CZ 297299 B6

Příklad 2

ST 1346

5-hydroxy-l, l-di-(indol-3-yl)-pentan

TLC (Hexan/izopropanol = 97,5/2,5): 0,43

HPLC RP-18 Waters 250 x 4,6 (40 % H₂O, 60 % CH3CN, průtok 1 ml.min¹): 5,36

NMR 300 MHz (Η -1, CDC1₃): Hj (4,71, 1H); H₅ (3,8 t, 2H); H4 (2,3 m, 2H); H₃ (1,7 m, 2H); H₂ (1,8 m, 2H); H_r (7,2 s, 2H); Ify (7,15 t, 2H); H₆. (7,4 t, 2H); H4- (7,5 d, 2H); H₇< (7,8 d, 2H); H_r (8,15 br.s, 2H).

NMR 300 MHz (C - 13, CDC1₃): C, (34,2); C₂ (33,0); C₃ (24,6); C₄ (35,7); C₅ (63,2); C₇- (111,2); C₆. (119,2); C₄- (119,8); Cy (120,4); C₅- (121,6); C₂- (122); C₃-_bis (127,2); C_Tbjs (136,7).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M~): 317

Elementární analýza: vypočteno: C = 79,21 %; H = 6,96 %; N = 8,79 %; nalezeno: C = 78,70 %; H = 7,29 %; N = 8,39 %.

-14CZ 297299 B6

Příklad 3

ST 1422

5-hydroxy-1,1 —d i—( 5,6-methy lendioxy-indol-3-yl)-pentan

TLC (Hexan/izopropanol = 97,5/2,5): 0,55

HPLC RP-18 (50 % H₂O, 50 % CH₃CN, průtok 1 ml.min ’): 6,7

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): Hi (4,21, 1H); H₂ (2,2 m, 2H); H₃ - H₄ (1,4- 1,5 m, 2H); H₅ (3,4 q, 2H); H₈< (5,8 s, 4H); Hr - H₇« (6,8 s, 4H); H₂. (7,0 s, 2H); H_r (8,9 brs, 2H).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M~): 407

Elementární analýza: vypočteno: C = 67,97 %; H = 5,46 %; N = 6,89 %; nalezeno v souladu s teorií.

Teplota tání: 200 °C

-15CZ 297299 B6

Příklad 4

ST 1423

(R,S)-5-hydroxy-l,l-di-(5',6'-methylendioxy-indol-2-yl, 5,6-methylendioxy-indol-3-yl)pentan

TLC (Hexan/izopropanol = 97,5/2,5) : 0,63

HPLC RP-18 (50 % H₂O, 50 % CH₃CN, průtok 1 mimin¹): 8,2

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): II, (4,3 t, 1H); H₂ (2,2 m, 2H); H₃ - H4 (1,4- 1,6 m, 4H); H₅ (3,5 m, 2H); H_8a^_b (5,9 s, 4H); H₃._b (6,3 s, 1H); H₄._a - H₇-_a (6,8 - 6,9 d, 2H); H₄-_b - H_rb(7,0 d, 2H); H₂'_a (7,2 s, 1H); H_ra__rb (8,9 - 9,1 brs, 2H).

NMR 300 MHz (C - 13, CD₃CN): 25,1; 33,4; 34,9; 37,2; 62,5; 92,6; 93,0; 98,4; 99,2; 99,7; 101,3; 101,5; 121,7.

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M ): 407

Teplota tání: 220 °C

-16CZ 297299 B6

Příklad 5

ST 1730

4-hydroxy-l, l-di-(5',6'-methylendioxy-indol-3-yl)-butan

TLC (Hexan/izopropanol = 75/25): 0,44

HPLC RP-18 (60 % H₂O, 40 % CH₃CN, průtok 1 mimin^-1): 17,5

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): Hi (4,3 t, 1H); H₂ (2,3 m, 2H); H₃ (1,6 m, 2H); H₄ (3,6 q, 2H); H_g- (6,0 s, 4H); H₄- - H_r (6,9 s, 4H); H₂- (7,2 s, 2H); H, (9,1 brs, 2H).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M⁺): 393

Elementární analýza: vypočteno: C = 67,34 %; H= 5,14 %; N= 7,14%; nalezeno v souladu s teorií.

Teplota tání: 240 °C

-17CZ 297299 B6

Příklad 6

ST 1731

(R,S)-4-hydroxy-l,l-di-(5',6'-methylendioxy-indol-2-yl,5,6-methylendioxy-indol-3-yl)butan

TLC (Hexan/izopropanol = 75/25): 0,41

HPLC RP-18 (60 % H₂O, 40 % CH₃CN, průtok 1 mimin’¹): 23,4

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): Hj (4,3 t, 1H); H₂ (2,2 m, 2H); H₃ (1,6 m, 4H); H4 (3,7 m, 2H); H_8aM._b (6,0 s, 4H); H_yb (6,4 s, 1H); H₄._a - H_ra (6,8 - 6,9 d, 2H); Hr_b - H₇._b (7,0 d, 2H); H₂-_a(7,2 s, 1H); H_ra_i-_b (8,9 - 9,1 brs-brs, 2H).

NMR 300 MHz (C - 13, CD₃CN): 29,8; 30,4; 35,5; 60,8; 90,9; 91,4; 96,7; 97,5; 98,1; 99,6; 116,6; 116,9; 119,9; 121,6; 130,0; 130,9; 141,3; 141,5; 141,6; 142,9; 143,8.

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M ): 391

Elementární analýza: vypočteno: C = 67,34 %; H = 5,14 %; N = 7,14 %; nalezeno v souladu s teorií.

Teplota tání: 205 °C

-18CZ 297299 B6

Příklad 7

ST 1707

1, l-di-(indol-3-yl)-4-hydroxy-butan

TLC (Hexan/Ethylacetát = 1/1): 0,26

HPLC RP-18 (50 % H₂O, 50 % CH₃CN, průtok 1 mimin’¹): 8,3

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): Hj (4,3 t, 1H); H₂ (2,2 m, 2H); H₃ (1,4 m, 2H); H4 (3,41, 2H);

H₂- (7,2 s, 2H); H_y (6,81, 2H); H₆- (6,91, 2H); H₄- (7,2 d, 2H); H₇- (7,5 d, 2H); H_r (10,7 br.s, 2H).

NMR 300 MHz (C - 13, CD₃CN): Cj (61,5); C_{2 3} (32,2); C₄ (34); C_r (112); C₆- (118,5); C₃- - C₄(119,5 - 119,7); C₅- (121,2); C₂- (121,6); C_Vbjs (127,4); C_rbis (137,1).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M): 303

Elementární analýza: vypočteno: C = 78,92 %; H = 6,62 %; N = 9,20 %; nalezeno v souladu s teorií.

Teplota tání: 110 - 115 °C.

-19CZ 297299 B6

Příklad 8

ST 1750

4-hydroxy-l,l-di-(5',6'-methylendioxy-indol-2-yl)-butan

TLC (Hexan/izopropanol = 75/25): 0,60

HPLC RP-18 (60 % H₂O, 40 % CH₃CN, průtok 1 ml.min“¹): 19,9

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): Hj (4,3 t, 1H); H₂ (2,3 m, 2H); H₃ (1,6 m, 2H); H₄ (3,6 q, 2H); H₈· (6,0 s, 4H); H₄- - H_7a (6,9 - 7,02 s, 4H); H₃ (6,4 s, 2H); H_r (9,1 brs, 2H).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M~): 391

Elementární analýza: vypočteno: C = 67,43 %; H= 5,14 %; N= 7,14%; nalezeno v souladu s teorií.

Teplota tání: 250 °C.

Příklad 9

ST 1866

OH

1,1 -di-(7'-aza-indol-3-yl)-butanol

-20CZ 297299 B6

TLC (Hexan/Ethylacetát = 75/25) : 0,18

HPLC RP-18 (60 % H₂O, 40 % CH₃CN, průtok 1 mimin’¹): 4,4

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃OD): II, (4,41, 1H); H₂ (2,3 m, 2H); H₃ (1,6 m, 2H); H4 (3,6 t, 2H); H₂. (7,3 s, 2H); H₅· (6,9 m, 2H); H₄, (8,11, 2H); H₆. (7,8 d, 2H).

NMR 300 MHz (C - 13, CD₃CN): 30,3; 30,7; 33,6; 61,0; 114,0; 117,2; 119,4; 121,9; 127,5; 140,9; 147,7.

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M ): 305

Elementární analýza: vypočteno: C = 70,57 %; H= 5,92 %; N= 18,29%; nalezeno v souladu s teorií.

Teplota tání: 221 °C.

Příklad 10

ST 1372

l-(indol-3-yl)-2,3-0-izopopyliden-4-(2,3-0-izopropylidenethyl)tetrahydrokarbazol

TLC (Hexan/aceton = 8/2) : 0,75

HPLC RP-18 Waters 300 x 3,3 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, průtok 1 ml.min¹): 12,8

Racemická směs

NMR 300 MHz (Η -1, CH₃CN): Hj + H₃ (4,52 m, 1H); H₂ (4,64 m, 1H); H4 (3,66 m, 1H); H₅ (4,67 m, 1H); H_ď (3,97/3,69 m, 2H); H₈ (1,42 s, 3H); H₉ (1,32 s, 3H); H_n (1,46 s, 3H);

-21 CZ 297299 B6

Hi2 (1,38 s, 3H); H₂-_a (6,94 s, 1H); H₄-_a (7,51 d, 1H); HLn, (7,69 d, 1H); H₆._a (7,16 m, 1H); H_ťb (7,09 m, 1H); H₇-_a (7,47 d, 1H); H_rb (7,26 d, 1H); H_Va (9,0 s, 1H); H_rb (8,3 s, 1H).

NMR 300 MHz (C- 13, CH₃CN): Cj (38,15); C₂ (80,77); C₃ (75,9); C₄ (40,77); C₅ (78,0); C₆ (68,33); C₈ (25,5); C₉ (26,8); C_u (25,9); C₁₂ (28,3); C£_a (124,5); C₂-_b (135,7); C₃,_a (115,9); C₃'_b (107,6); C_ťa (122,7); C₆₃₎ (121,9); C_ra (112,5); C_rb (111,9); C₈._a (127,5); C₈._b (128,2); C₉._b (137,7); C₉-_a (137,9).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M⁺): 459

Elementární analýza: vypočteno: C = 73,34 %; H = 6,59 %; N = 6,11 %; nalezeno: C = 73,11 %; H = 6,63 %; N = 5,55 %;

Teplota tání: 204 - 206 °C.

Příklad 11

ST 1381

l-(indol-3-yl)-indo[2,3a]cykloheptan

TLC (Hexan/izopropanol = 95/5 : 0,22

HPLC RP-18 Waters 300 x 3,3 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, průtok 1 ml.min¹): 22,1

Racemická směs

NMR 300 MHz (H -1, DMSO - d₆): Hj (4,65 br.s, 1H); H₂ (1,95 e 2,4 mm, 2H); H₃ (1,7 m, 2H); H₄ (1,6 e 1,9 mm, 2H); H₅ (2,75 e 3,0 mm, 2H); H_2a (6,68 s, 1H); H_s-_a - H_5b (6,95 m, 2H); H₆'_a (7,07 t, 1H); H_47j (7,45 m, 1H); H_rb (7,2 m, 1H); H₇._a (7,37 d, 1H); H^ (7,52 d, 1H); H_ra(10,8 s, 1H); H_rb(10,4 s, 1H).

NMR 300 MHz (C - 13, DMSO - d6): Cj (36,3); C₂ (33,2); C₃ (26,5); C₄ (28,6); C₅ (24,0); C_rb (110,5); C₇'_a (111,4); C₃-_a (115,6); C₄._b (117,2); C₅._b (117,7); C_Va (118,2); C₄-_a (118,5); C₆'_b (119,7); C₆'_a (120,7); C₂._a (123,5); C₈-_a (125,9); C₈-_b (128,6); C₉._b (134,2); C₉._a (136,6); C₂'_b (139,7).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M~): 299

-22CZ 297299 B6

Elementární analýza: vypočteno: C = 83,96 %; H = 6,71 %; N = 9,33 %; nalezeno: C = 81,19 %; H = 6,50 %; N = 9,03 %;

Teplota tání: 206 - 208 °C.

Příklad 12

ST 1621

5-(indol-3-yl)-indo[2,3a]cykloheptan

TLC (Hexan/izopropanol - 95/5 : 0,15

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, průtok 1 ml.mhC¹): 16,6

Racemická směs

NMR 300 MHz (Η -1, DMSO - d6): H₅ (4,8 br.s, 1H); H₄ (1,9 a 2,4 mm, 2H); H₃ (1,5 a 1,7 mm, 2H); H₂ (1,5 a 1,9 mm, 2H); Hj (2,9 br.s, 2H); H₂,_a (6,5 s, 1H); H₅._a (6,8 t, 1H); H_ďb (6,92 t, 1H); H5-_a (6,81, 1H); H₆._b (6,92 t, 1H); H_s-_a (6,971, 1H); H₆._a (7,071, 1H); H₄._b (7,13 d, 1H); H₇'_b (7,24 d, 1H); H₇,_a (7,3 d, 1H); Η₄·₃ (7,62 d, 1H); H_Va (10,6 s, 1H); H_rb (10,7 s, 1H).

NMR 300 MHz (C- 13, DMSO - d6): C₃ (25,2); C₂ (27,3); Cj (28,3); C₅ (31,8); C₄ (33,7); C_n (110,2); C₇-_a (111,3); C₃-_b (114,5); C₄-_b (117,1); C₃,_a (117,4); C₅₃₎ (117,7); C₅._a (117,9); C₄._a (118,6); C₆._b (119,6); C₆._a (120,5); C₂-_a (123,5); C₈,_a (126,2); C_o (128,5); C₉-_b (134,3); C₉’_a (136,6); C_n (137,4).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M^-): 299

Elementární analýza: vypočteno: C = 83,96 %; H= 6,71 %; N= 9,33 %; nalezeno v souladu s teorií.

Teplota tání: 170 °C.

-23 CZ 297299 B6

Příklad 13

ST 1728

-(1 H-indol-3-yl)-tetrahydro-l H-karbazol

TLC (Hexan/izopropanol = 9/1 : 0,66

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, průtok 1 ml.min¹): 18,4

Racemická směs

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): Hj (4,461, 1H); H₂ (2,1 a 2,3 mm, 2H); H₃ (1,9 a 2,1 mm, 2H); H₄ (2,811, 2H); H₂._a (6,98 s, 1H); H₅-_a (6,92 t, 1H); H_yb - H₆-_b (7,0 m, 2H); H₆._a (7,09 m, 1H); H₇>_b (7,15 m, 1H); H₄._a (7,29 d, 1H); H₇._a (7,4 dt, 1H); (7,46 d, 1H); H_Va (9,1 br.s, 1H);

H_rb (8,6 br.s, 1H).

NMR 300 MHz (C- 13, CD₃CN): C₄ (21,8); C₃ (23,1); C₂ (33,0); Cj (33,2); C₃'_b (110,6);

C₇-_b (111,4); C₇-_a (112,3); C₄<_b (118,5); C_?/a (118,7); C₅-_b (119,4); C₅-_a (119,7); C₄,_a (119,8);

C₆._b (121,5); C₆'_a (122,4); C₂._a (123,9); C₈._a (127,5); C₈₇> (128,6); C_97j (137,0); C₉._a (137,8);

Q_b (137,9).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M“): 287

Elementární analýza: vypočteno: C = 83,30 %; H= 6,99 %; N= 9,71 %; nalezeno v souladu s teorií.

Teplota tání: 207 °C.

-24CZ 297299 B6

Příklad 14

ST 1729

4-( 1 H-indol-3-yl)-tetrahydro-l H-karbazol

TLC (Hexan/izopropanol = 9/1 : 0,55

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, průtok 1 ml.min“¹): 12,4

Racemická směs

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): Hj (2,83 m, 1H); H₂ (1,95 a 1,84 mm, 2H); H₃ (2,17 a 2,04 mm, 2H); H₄ (4,491, 1H); H₂._a (6,77 d, 1H); H₄._a (7,43 d, 1H); H_f/a (7,06 t, 1H); H_Ta (7,36 d, 1H); H_{5 a} (6,92 m, 1H); H_n (7,27 d, 1H); H₄._b (6,83 d, 1H); H₅-_a (6,711, 1H); H₆-_b (6,94 m, 1H); H_ra (8,96 br, 1H); H_rb (8,94 br, 1H).

NMR 300 MHz (C- 13, CD₃CN): C₂ (22,0); C] (24,0); C₄ (31,0); C₃ (33,0); C_rb (111,3); C_ra (112,3); C_Vb (112,5); C₄._a (119,3); C₃._a (120,9); C₆._b (121,2); C₆-_a (122,1); C₂._a (123,7); C₈'_a (127,7); C₈._b (128,5); C₂._b (136,2); C₉._b (137,0); C₉-_a (137,8).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M⁺): 287

Elementární analýza: vypočteno: C = 83,30 %; H = 6,99 %; N = 9,71 %.

Teplota tání: 182 °C.

-25CZ 297299 B6

Příklad 15

ST 1749

l-(5'',6-methylendioxy-indol-3-yl)-5',6-methylendioxy-indo[2,3a]cykloheptan

TLC (Hexan/Ethylacetát = 8/2): 0,23

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, průtok 1 ml.min·¹): 15,4

Racemická směs

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): Hj (4,45 m, 1H); H₂ (2,05 a 2,25 mm, 2H); H₃ - H₄ (1,8 m, 4H); H₅ (2,85 m, 2H); H_m (5,85 d, 1H); H₁₀-_a (5,90 s, 2H); H_Tb (6,66 s, 1H); H₂-_a (6,8 d, 1H); H₄'_b (8,3 s, 1H); H₄._a (6,9 s, 1H); H_ra (6,94 s, 1H); H_rb (8,4 s, 1H); H_Va (9,0 s, 1H).

NMR 300 MHz (C- 13, CD₃CN): C₅ (25,4); C₃ - C₄ (29,5); C₂ (35,3); Cj (38,1); C₇-_b (92,4); C₇'_a (93,0); C₄'_a (97,3); C₄._b (98,4); C_1(rb (101,1); C₁₀-_a (101,5); C₃-_b (113,4); C₃._a (118,2); C₈'_a (121,3); C₂'_a (121,7); C_o (124,0); C₉._b (129,8); C₉-_a (132,7); C₂._b (139,3); C₆-_b (142,9); C₆._a (143,3); C_yb (144,3); C₅._a (145,5).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M⁺): 389

Elementární analýza: vypočteno: C = 71,12 %; H= 5,19 %; N= 7,21 %. nalezeno v souladu s teorií.

Teplota tání: 184 °C.

-26CZ 297299 B6

Příklad 16

ST 1751

l-(5',6'-methylendioxy-lH-indol-3-yl)-6,7-methylendioxytetrahydro-lH-karbazol

TLC (Hexan/izopropanol = 9/1) : 0,31

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, průtok 1 ml.mnT¹): 11,5

Racemická směs

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): H, (4,321, 1H); H₂ (4,321, 1H); H₂ (2,2 a 2,0 mm, 2H); H₃ (2,03 a 1,83 mm, 2H); H₄ (4,31, 2H); H_I0-_b (5,8 - 5,9 dd, 4H); H₄-_a (6,65 s, 1H); H_rb (6,72 s, 1H); H₂._a (6,88 d, 1H); H₇._a - Hn (6,90 s, 1H); H_vb (8,4 s, 1H); H_ra (9,0 s, 1H).

NMR 300 MHz (C- 13, CD₃CN): C₄ (21,8); C₃ (23,2); C₂ (33,0); C₃ (33,3); C_rb (92,8); C_7a (93,0); C₄'_b (97,6); C₄-_a (98,2); C₁₀-_a (101,2); Cm (101,5); C₃._b (110,8); C₃._a (119,1); C₈._a (121,4); C₂._a - C_n (122,4); C_n (131,6); C₉-_a (132,6); C₂._b (136,6); C_ffb (142,9); C₆._a (143,2); C_yb (144,6); C₅-_a (145,4).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M⁺): 375

Elementární analýza: vypočteno: C = 70,58 %; H = 4,85 %; N = 7,48 %. nalezeno v souladu s teorií.

Teplota tání: 200 °C.

-27CZ 297299 B6

Příklad 17

ST 1765

l-(5-benzyloxy-indol-3-yl)-5'-benzyloxy-indo[2,3a]-cykloheptan

TLC (Hexan/izopropanol = 9/1) : 0,62

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, průtok 1 mimin¹): 27,1

Racemická směs

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): H! (4,54 d, 1H); H₂ (2,32 a 2,08 mm, 2H); H₃ (1,83 m, 2H); H₄ (1,83 m, 2H); H₅ (2,88 m, 2H); H₁₀-_a (4,99 s, 2H); H₁₀-_b (5,13 s, 2H); H_s-_a - H₅._b (6,95 m, 2H); H₆'_b (6,74 q, 1H); H₆,_a (6,87 q, 1H); H₂._a (6,90 d, 1H); H₄._a (6,93 d, 1H); H_rb (7,07 d, 1H); H₄'_b (7,09 d, 1H); H₁₄._a - H_Wb (7,31 - 7,27 m, 2H); H₇._a (7,34 m, 1H); H_m (7,33 m, 1H); Hm (7,38 m, 1H); H₁₂-_a (7,39 d, 1H); H_m (7,47 d, 1H); H_rb (8,47 s, 1H); H_Va (9,0 s, 1H);

NMR 300 MHz (C- 13, CD₃CN): Ci (38,01); C₂ (35,1); C₃ (29,5); C₄ (29,4); C₅ (25,3); C_Wa (71,3); C₁₀-_b (71,4); C₄-_b (102,5); C₄-_a (103,7); C₆._b (111,7); C_rb (112,0); C₇-_a (113,1); Cm (128,6); Cm (129,3); C_m (129,4); C₈._b (130,5); C₉._b (130,7); C₉,_a (133,2); C_1Va (139,0); C_irb (139,3); C₂._b (141,7); C₇-_a (113,0); C_6/a - C₃._a (113,2); C₁₄-_a - C₁₄-_b - Cm (128,5); Cm (128,6).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M⁺): 513

Elementární analýza: vypočteno: C = 82,00 %; H = 6,29 %; N = 5,46 %. nalezeno v souladu s teorií.

Teplota tání: 286 °C.

-28CZ 297299 B6

Příklad 18

ST 1777

4-(5',6'-methylendioxy-lH-indol-3-yl)-6,7-methylendioxytetrahydro-lH-karbazol

TLC (Hexan/izopropanol = 9/1): 0,20

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, průtok 1 mimin¹): 7,9

Racemická směs

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): H_t (2,80, 1H); H₂ (1,96 a 1,84 mm, 2H); H₃ (2,13 a 1, mm, 2H); H₄ (4,311, 1H); H₁₀-_b (5,76 d, 2H); H₁₀-_a (5,86 d, 2H); H₄._b (6,22 s, 1H); H^ (6,74 s, 1H); H₂._a (6,75 d, 1H); H₇._b (6,82 s, 1H); H_Ta (6,88 s, 1H); H_rb (8,83 s, 1H); H_Va (8,86 s, 1H).

NMR 300 MHz (C- 13, CD₃CN): C₂ (22,3); Cj (23,9); C₄ (31,7); C₃ (33,1); C₇._b (92,7); C₇-_a (93,0); C₄._b (98,3); C₄-_a (98,5); C_m (101,1); C₁₀-_a (101,4); C₃._b (112,8); C_3<a (120,9); C₈,_a (121,5); C₈,_b - C₂-_b (122,3); C₉._b (131,6); C₉-_a (132,6); C₂-_b (134,7); C₆₃> (142,4); C₆._a (142,9); C₅-_b (144,2); C₅-_a (145,2).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M⁺): 373

Elementární analýza: vypočteno: C = 70,20 %; H = 5,36 %; N = 7,44 %. nalezeno v souladu s teorií.

Teplota tání: 228 °C.

-29CZ 297299 B6

Příklad 19

ST 1778

5-(5 -benzyloxy-indol-3-yl)-5 '-benzyloxy-indo[2,3 a]-cykloheptan

TLC (Hexan/izopropanol = 9/1): 0,4

HPLC RP-18 (40 % H₂O, 60 % CH₃CN, průtok 1 ml.miiT¹): 18,1

Racemická směs

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): Hj (2,89 m, 1H); H₄ (2,49 m, 2H); H₃ (1,6 a 1,8 mm, 2H); H₂ (1,6 m, 2H); H₅ (4,721, 1H); H₁₀-_b (4,89 d, 2H); H₁₀._a (5,08 s, 2H); H₂-_a (6,54 d, 1H); H₆._b (6,68 q, 1H); H₄._b (6,75 d, 1H); H_f/a (6,83 q, 1H); H_rb (7,16 d, 1H); Hr_a (7,16 d, 1H); H_7a (7,28 d, 1H); H_m (7,29 m, 1H); H_m (7,34 m, 1H); H_iya (7,37 m, 1H); H₁₂-_a (7,47 d, 1H); H_ra(8,90 s, 1H); H_rb (8,93 s, 1H).

NMR 300 MHz (C- 13, CD₃CN): C₃ (26,6); C₂ (28,5); Q (29,7); C₅ (33,4); C₄ (34,7); C_m (71,2); C₁₀-_a (71,4); C₄._b (112,5); C₄._a (104,0); C₆._b (111,6); C₆,_a (111,8); C₇-_b (112,9); C₇'_a (112,9); C₃q> (116,1); C₃-_a (119,2); C₂-_a (125,3); C₈-_a (128,1); C₁₄«_b (128,5); C₁₄-_a (128,6); C₁₂._b (128,6); C_l2-_a (128,7); C₁₃-_a (129,2); C₁₃-_b (129,3); C₈-_b (130,5); C₉._b (131,0); C₉._a (133,3); Cn-a- C_irb (139,1); C₂«_b (139,7); C₅-_a (153,3); C₅-_b (153,5).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M⁺): 511

Teplota tání: 237 °C.

-30CZ 297299 B6

Příklad 20

ST 1783

-(5' '-hydroxy-1 H-indol-3-yl)-5 '-hydroxy-indo [2,3 a]-cykloheptan

TLC (Hexan/izopropanol = 9/1): 0,35

HPLC RP-18 Waters 300 x 3,3 (45 % H₂O, 55 % CH₃CN, průtok 1 ml.min¹): 4,2

Racemická směs

NMR 300 MHz (Η -1, CD₃CN): Hj (4,61 d, 1H); H₂ (2,3 a 2,0 mm, 2H); H₃ (1,9 m, 2H); H₄ (1,8 m, 2H); H₅ (2,97 m, 2H); OH (6,45 br.d, 2H); H_rb (6,67 d, 1H); H₇._a (6,83 d, 1H); H₄'_a H₄<_b (6,95 s, 2H); H₂-_a (7,0 s, 1H); H₆._b (7,1 d, 1H); H₆._a (6,4 d, 1H); H_rb (8,44 s, 1H); H_la (9,01 s, 1H).

NMR 300 MHz (C - 13, CD₃CN): Q (36,6); C₂ (33,6); C₃ (28,1); C₄ (28,0); C₅ (23,8); C₄'_b (101,1); C₄'_a (102,4); C₆-_b (109,1); C₇._b (110,1); C_7a (110,7); C₃._b - C_ďa (111,0); C₃._a (115,3); C₂>_a (126,5); C₈'_a (128,4); C₈._b (128,6); C₉-_b (129,2); C₉-_a (131,0); C₂._b (140,1); C₅._a- C₅._b (149,3).

Molekulová hmotnost ionizované sloučeniny (M⁺): 333

Elementární analýza: vypočteno: C = 75,88 %; H = 6,06 %; N = 8,43 %. nalezeno v souladu s teorií.

-31 CZ 297299 B6

Příklad 21

Podobným způsobem byly připraveny následující sloučeniny:

-32CZ 297299 B6

Sloučenina	Postup	Poznámka
ST 1866	A	bis-7-azaindolyl přes magneziumbromid
ST 1345	B	bis-indolyl kyselou katalýzou
ST 1346	B	>
ST 1422	B	>
ST 1423	B	/1
ST 1707	B	JI
ST 1750	B	Í1
ST 1372	C	cyklizace fragmentů cukrů
ST 1381	D	cyklizace necukerných fragmentů
ST 1621	D	11
ST 1728	D	JI
ST 1729	D	I!
ST 1749	D	JJ
ST 1751	D	JI
ST 1765	0	!J
ST 1777	D	11
SR 1778	D	jj
ST 1783	E	debenzylace
ST 1900	F	odstranění ochrany
ST 1901	F	odstranění ochrany
ST (všechny)	G	oxidace

Farmakologie

Zkratka ST následovaná číslem určuje sloučeniny v příkladech uváděných ve farmakologických 5 zkouškách.

Ke zkouškám antiangiogenních účinků byla použita zkouška s Boydenovou komůrkou (Werner, F., Goodwin, R. H. a Leonard, E. J., Joumal of Immunological Methods, 33, 239 - 247, 1980) s použitím jak bovinních aortálních endotheliálních buněčných (BAEC) kultur, tak bovinio nich medulámích endotheliálních buněčných (BMEC) kultur. Zkoušky byly prováděny při IC₀(maximální necytotoxická koncentrace), a výsledky byly vyjádřeny jako % inhibice migrace porézním filtrem jako odezva na chemotaktické stimuly (1% bovinní sérum v kultivačním médiu DMEM). Přímým odečítáním buněk při pozorování optickým mikroskopem byly získány hodnoty, z nichž byla podle vzorce (T- C/C)xl00, kde T=střední počet buněk migrujících do 15 vzorku a C = střední počet buněk migrujících do kontrolního vzorku, počítána procentuální inhibice migrace. Kontrolní vzorek obsahoval buňky, které migrovaly proti séru neovlivněné studovanými sloučeninami a obsahoval je každý chemotaxický pokus. Hodnoty udávají odečtené hod

-33CZ 297299 B6 noty v 5 mikroskopických polích na jednu jamku ve 4 nezávislých chemotaxických jamkách pro každý vzorek. Získané výsledky jsou uvedeny v tabulce 4.

Ke stanovení cytotoxických účinků byla použita proliferační kontrolní zkouška s různými nádorovými liniemi, jako například MCF-7 (humánní prsní karcinom), LoVo (humánní střevní karcinom), MES-SA (humánní děložní sarkom), nebo K-562 (humánní chronická myeloidní leukémie).

Ke zkoušce kontroly protirakovinových látek byl vNational Cancer Institute (Skehan, 1990) použit sulforodamin B. Látky ve skalárních koncentracích v rozmezí od 500 μΜ do 0,97 μΜ byly inkubovány souběžně s různými humánními buněčnými liniemi po dobu 24 hodin. Po odstranění látek byly přeživší buňky podrobeny po dalších 48 hodinách zkoušce NC1. Antiproliferační mohutnost sloučenin byla kvantifikována jako IC₅₀ ± std. odch. (koncentrace látky, která inhibuje 50 % přeživších buněk) zpracováním programem pro aproximaci křivek (De Lean, et al., 1978). Výsledky jsou uvedeny v tabulce 1 a tabulce 2.

Buněčný cyklus a apoptotická analýza nádorových linií byla provedena inkubací s látkami po dobu 24 hodin při koncentraci přibližně rovné hodnotám IC₅o s buňkami MCF-7. Látky byly odstraněny a buněčný cyklus a apoptóza byly vyhodnocovány v různých časových obdobích (0, 24, 48 hodin). Buňky byly barveny propidium jodidem a analyzovány cytofluorimetrem (FACS) (Beckman Dickinson fluorescence activated cell sorter - třídič fluorescenčně aktivovaných buněk) excitací argonovým iontovým laserem při 488 nm. K procentuálnímu vyhodnocení buněk v různých fázích cyklu byly analyzovány lineární histogramy DNA pomocí programu zpracovaného pro buňky a dodávaným výrobcem zařízení. K analýze apoptózy byla oblast umístěná pod peak kontrolního souboru G0/G1 a hodnoty byly analyzovány softwarem dodaným společností (Lysis II - C32). Získané výsledky jsou uvedeny v tabulce 3.

Cytotoxicita látek na nádorové linie odolné chemosenzitivizačním účinkům byla hodnocena na různých nádorových buněčných liniích odolných proti doxorubicinu (100 násobně) a křížově odolných proti daunorubicinu, actinomycinu D, mitoxantronu, vincristinu, vinblastinu, taxolu, kolchicinu a etoposidu expresí P-glykoproteinu. Cytotoxicita produktů byla hodnocena s použitím stejné zkoušky, která byla použita u citlivých nádorových buněk.

Později byly produkty hodnoceny s nižšími nebo stejnými koncentracemi, které inhibují 10 % přeživších buněk. Při těchto koncentracích byly látky souběžně zkoušeny v přítomnosti a nepřítomnosti doxorubicinu. Poměr MDR byl počítán pro hodnoty IC₅₀ za účelem stanovení stupně potenciace cytotoxických účinků doxorubicinu vyvolaných produktem (poměr MDR) (De Lean, et al., A. J. Physiol., 235, E97- 102, 1978); (Skehan et al., J. Nati. Cancer Inst., 82, 1107-1112, 1990).

-34CZ 297299 B6

Tabulka 1

Antiproliferační účinky na citlivé buňky

Řada	Sloučenina	IC₅₀ 1stř.odch. (μΜ)
		MCF-7	L0V0
tetrahydrokarbazóly	ST 1372	21,1 ±0,3	21,7+4,3
-	ST 1728	22+2,8	22,812,9
	ST 1729	3516,1	50,514,8
1«	ST 1777	0,96+0,19	0,64+0,003
hexahydrocyklohepb [bjindoly	ST 1381	28.511,8	22,512,6
M·	ST 1621	22.5+1.3	34,814.3
	ST 1765	11,5+1,1	10,5+0,07
n	ST 1778	28,5+1,4	54,5+7,4
M-	ST 1783	2714	2910,06

Tabulka 2

Antiproliferační účinky na odolávající buňky

Řada	Sloučenina	IC50 ± stř.odch. (μΜ)
		MCF-7/DX	LoVo/DX
tetrahydrokarbazóly	ST 1372	26,9+1,6	26,313,7
	ST 1751	58,619
hexahdrocyklohept[b}indoly	ST 1381	28,413	25,214,2
	ST 1621	68,3+4,6	23,813,7
	ST 1765	24,813,8	17,0310,91
>	ST 1778	7110,4	65,1+8,1
?>	ST 1783	39+0,03

-35 CZ 297299 B6

Tabulka 3

Buněčný cyklus a apoptosa MCF-7 buněk

Sloučenina	G0/G1 (%)	S(%)	G2+M (%)	apoptosa 48 hod (%)
ST 1372	C = 43,7 40pM = 57,8 20//M = 54,4	0 = 47,6 40 //M = 36,8 20//M = 34,2	C = 8,6 40 j/M - 5,4 20 χζΜ = 11,4	0 = 3,3 40 j/M = 16
ST 1381	C = 43,8 30//M = 57,7	C = 47,6 30 j/M = 32,2	C - 8,6 30//M = 10,1	e = 3,3 30T/M = 3,3

ST 1372 při μΜ zvyšuje a blokuje pro G0/G1 32 % buněk a při 20 μΜ zvyšuje a blokuje pro G0/G1 23 % buněk.

ST 1372 při 11 μΜ zvyšuje 3,5 krát účinky doxorubicinu jak u linie MCF-7/Dx, tak u buněčné linie LoVo/Dx.

ST 1381 při 30 μΜ zvyšuje a blokuje pro G0/G1 32 % buněčných linií; není cytotoxický pro endotheliální buňky (IC >100 μΜ); a je účinný chemotaxicky.

Tabulka 4

Cytotoxicita a chemotoxycita na BMEC

Řada	Sloučenina	MEC
		IO50 (//M)	ICo (J/M)	% inhibice migrace při ICo/ std. odch.
Hexahydrocyklo hept[b]indoly	ST 1381	>100	30	-61,7±6,3
<1	ST 1621	10	0,1	-43±4
	ST 1749	>200	100	-40±3
u	ST 1778	50	25	-40±4
	ST 1783	60	10	-46
U	ST 1729	80	25	-40+3

Přes to, že je ST 1381 lepší antichemotaxickou sloučeninou, je důležité poznamenat, že chemotaxicitu endotheliálních buněk snižují všechny sloučeniny této skupiny.

-36CZ 297299 B6

Přípravek podle vynálezu obsahuje jako účinnou složku alespoň (jednu) sloučeninu obecného vzorce I samotnou, nebo v kombinaci s dalšími účinnými složkami vhodnými k léčbě onemocnění uvedených ve zde popisovaném vynálezu, a to ve formě oddělených dávek nebo v takové formě, která je vhodná ke kombinované terapii. Účinná složka podle vynálezu bude ve směsi s odpovídajícími ve farmacii obvykle používanými vehikuly a/nebo excipienty, například takovými, které jsou popsány v posledním vydání „Remingtonů Pharmaceutical Sciences Handbook“. Přípravky podle vynálezu musejí obsahovat terapeuticky účinné množství účinné složky. Dávky musejí být stanovena odborníkem z oboru, například klinickým nebo praktickým lékařem, a to podle typu léčeného onemocnění a pacientova stavu, nebo podle dalších doprovodně podávaných účinných složek.

Mezi příklady farmaceutických přípravků patří takové přípravky, které umožňují orální, parenterální, intravenózní, intramuskulámí, subkutánní nebo transdermální podávání. Farmaceutickými přípravky vhodnými pro tento účel jsou tablety, tuhé nebo měkké tobolky, prášky, roztoky, suspenze, sirupy a tuhé formy k improvizované přípravě kapalných preparátů. Přípravky pro parenterální podávání jsou například všechny intramuskulámí, intravenózní a subkutánní injekční formy, a to ve formě roztoků, suspenzí nebo emulzí.

Zvláště je třeba uvést také liposomální přípravky. Mezi vhodné přípravky náležejí také takové formy, které jsou založeny na pomalém uvolňování účinné složky, a to ať už jde o formy pro orální podávání, tedy tablety potažené vhodnými vrstvami, mikrokapslové prášky, cyklodextrinové komplexy, nebo depotní formy, např. subkutánní, jako jsou například depotní injekce nebo implantáty.

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Tricyklické deriváty indolu obecného vzorce I kde:

X =CH

Xi =N

R a Ri, které mohou být stejné nebo různé, se vybírají ze skupiny sestávající z: -H, -OH, OR₅, kde R₅ může být C1-C4 alkyl nebo benzyl, a pokud obě skupiny OR₅ spolu sousedí, je R₅ methylen;

-37CZ 297299 B6 nebo mohou být R a Rj nezávisle na sobě nitroskupina; aminoskupina, případně monosubstituovaná C1-C4 alkylem; karboxyl; alkoxy(Ci-C₄)karbonyl;

R₂ je -H, fenyl, benzyl, lineární nebo rozvětvený Ci-C₆ alkyl;

n = celé číslo od 0 do 4;

R₃, které může být stejné nebo odlišné od R4 je: -H, -OH, -ORé, kde R(, je lineární nebo rozvětvený C]-C₄ alkyl, nebo pokud R₃ = R4 = OR₆ a sousedí spolu, je R₇, izopropyliden;

nebo aA = H, R_7;

R₇ = C]-C₄ lineární nebo rozvětvený alkyl, případně substituovaný jednou nebo dvěma skupinami -OH, -ORé, v případě dvou sousedních skupin je R₆ izopropyliden; nebo je R₇ skupina CHO, nebo -CH=NOH, jejich izomery a jejich směsi.

2. Použití tricyklických derivátů indolu obecného vzorce I podle nároku 1 pro přípravu farmaceutického přípravku.

3. Farmaceutický přípravek vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku tricyklické deriváty indolu obecného vzorce I podle nároku 1 a alespoň jeden farmaceuticky přijatelný excipient a/nebo diluent.

4. Použití přípravku podle nároku 3 pro přípravu léčiva k léčbě patologických nádorů, u kterých tento nádor náleží do skupiny sestávající ze sarkomu, karcinomu, karcinoidu, kostního nádoru, neuroendokrinního nádoru, lymfoidní leukemie, akutní promyelocytické leukemie, myeloidní leukemie, monocytické leukemie, megakaryoblastické leukemie a Hodgkinovy choroby.

5. Použití přípravku podle nároku 3 pro přípravu léčiva k léčbě patologických stavů způsobených abnormální angiogenezí.

6. Použití podle nároku 5, kde patologický stav je způsoben abnormální angiogenezí ze skupiny sestávající z nádorových metastáz, artritického onemocnění, diabetické retinopatie, psoriázy, chronických zánětlivých onemocnění nebo arteriosklerózy.

-38CZ 297299 B6

7. Použití tricyklických derivátů indolu obecného vzorce I podle nároku 1 k přípravě léčiva k léčbě patologických nádorů, kde tento nádor náleží do skupiny sestávající ze sarkomu, karcinomu, karcinoidu, kostního nádoru, neuroendokrinního nádoru, lymfoidní leukemie, akutní pro-

5 myelocytické leukemie, myeloidní leukemie, monocytické leukemie, megakaryoblastické leukemie a Hodgkinovy choroby.

8. Použití tricyklických derivátů indolu obecného vzorce I podle nároku 1 k přípravě léčiva k léčbě patologických stavů způsobených abnormální angiogenezí.

9. Použití podle nároku 8, kde se patologické stavy způsobené abnormální angiogenezí řadí do skupiny sestávající z nádorových metastáz, artritického onemocnění, diabetické retinopatie, psoriázy, chronických zánětlivých onemocnění a arteriosklerózy.