CZ295997B6 - Farmaceutický prostředek s obsahem ligandu Notch a způsob tvorby T-buněk - Google Patents

Farmaceutický prostředek s obsahem ligandu Notch a způsob tvorby T-buněk Download PDF

Info

Publication number
CZ295997B6
CZ295997B6 CZ19991639A CZ163999A CZ295997B6 CZ 295997 B6 CZ295997 B6 CZ 295997B6 CZ 19991639 A CZ19991639 A CZ 19991639A CZ 163999 A CZ163999 A CZ 163999A CZ 295997 B6 CZ295997 B6 CZ 295997B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
cells
notch
antigen
notch ligand
delta
Prior art date
Application number
CZ19991639A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ163999A3 (cs
Inventor
Jonathan Robert Lamb
Margaret Jane Dallman
Gerald Francis Hoyne
Original Assignee
Lorantis Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9623236.8A external-priority patent/GB9623236D0/en
Priority claimed from GBGB9715674.9A external-priority patent/GB9715674D0/en
Priority claimed from GBGB9719350.2A external-priority patent/GB9719350D0/en
Application filed by Lorantis Limited filed Critical Lorantis Limited
Publication of CZ163999A3 publication Critical patent/CZ163999A3/cs
Publication of CZ295997B6 publication Critical patent/CZ295997B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2799/00—Uses of viruses
    • C12N2799/02—Uses of viruses as vector
    • C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
    • C12N2799/027—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a retrovirus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/02—Screening involving studying the effect of compounds C on the interaction between interacting molecules A and B (e.g. A = enzyme and B = substrate for A, or A = receptor and B = ligand for the receptor)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)

Abstract

Řešení se týká použití ligandu Notch pro výrobu léčiva pro použití při imunoterapii. Součást řešení tvoří také způsob tvorby T-buněk, tolerantních vůči alergenu nebo antigenu in vitro, při němž se T-buňky v přítomnosti takového alergenu nebo antigenu vystaví působení buněk, prezentujících antigen a exprimujících nebo nadměrně exprimujících ligand Notch.

Description

Oblast techniky
Vynález se týká použití terapeutických sloučenin při modifikaci aktivace T-buněk. Zvláště se vztahuje k jejich použití při modulaci interakce mezi proteiny rodiny Notch a jejich ligandy a dále k použití těchto látek při terapii stavů, jako je odmítnutí transplantátu, autoimunita, astma, infekční onemocnění a nádory.
Dosavadní stav techniky
Řízená interakce mezi T-buůkami a buňkami vykazujícími antigen (ACP) je životně důležitá funkce lidského imunitního systému. U jistých patologických stavů může být terapeuticky výhodné modifikovat takové interakce, ať už pozitivně nebo negativně. Při stavech, jako je například autoimunita, alergie a odmítnutí transplantátu, je nutné vyvolat tlumení imunitní odezvy stimulací negativní interakce T-buněk nebo interakce T-buňka-APC. Modely „infekční tolerance“ a „vázání suprese“ naznačují, že stačí indukovat malé množství T-buněk a tyto T-buňky pak přenášejí tuto toleranci na jiné T-buňky a tak se přechází účinnému imunologickému účinku. Při jiných patologických stavech, jako je nádorem indukovaná imunosuprese, parazitická virová nebo bakteriální infekce, je imunosuprese běžným jevem. Při takových stavech je proto nutné inhibovat interakce T-buněk probíhající při infekční toleranci.
Doposud však není znám mechanizmus, který probíhá při interakci T-buněk a T-buňka-APC. Dokument WO 92/19734 popisuje nukleotidové sekvence lidských genů Notch a Delta a aminokyselinové sekvence proteinů, které kódují. Popis ukazuje, že rodina genů Notch je důležitá při regulaci vývoje embryonální buněčné linie hmyzu, jako Drosophila.
Proteiny patřící do rodiny Notch jsou transmembránové receptory, které obsahují několik konzervativních peptidových motivů. Každý protein rodiny vykazuje přítomnost charakteristické repetice podobné extracelulárnímu EGF (epidermální růstový faktor) a juxta-membránovému LinYHNotch motivu. Každý protein má navíc na konci uloženém v cytoplazmě 6 až 8 motivů repetice ankyrinu spolu se sekvencí PĚST. Ligandy Notch mají diagnostickou doménu DSL (kde D znamená Delta, S znamená Serrate a L je Lag2), která obsahuje na N-konci proteinu 20 až 22 aminokyselin a na extracelulárním povrchu obsahuje 3 až 8 repetic podobných EGF. Proteiny mají krátký konec uložený v cytoplazmě, jehož funkční domény nejsou konzervativní.
Současné důkazy naznačují, že signál Notch se podílí na vývoji nezralých T-buněk v thymu a směruje vývoj thymocytů směrem k linii CD8+, která je nezávislá na rozeznání MHC (Robey E., et al., Cell 1996, 87: 483-492). Během zrání v thymu buňky získají schopnost rozlišit vlastní antigeny od těch, které jim nejsou vlastní. Tento proces se nazývá autotolerance (von Boehmer H, et al., Ann Rev. fmmunol. 1990; 8: 531). Důležitost mechanizmů indukce a udržení tolerance je v mnoha ohledech podhodnocena. Existuje řada experimentálních modelů odmítnutí transplantátu, autoimunitního onemocnění a specifické odezvy na alergeny, které jasně ukazují schopnost indukovat stav, kdy u recipienta imunizovaného antigenem nedochází ke specifické odezvě (tolerance nebo alergie). Při použití těchto systémů se došlo ke dvěma důležitým zjištěním. Za prvé, imunizace peptidovým fragmentem antigenu za určitých podmínek může inhibovat specifickou odezvu ne pouze na tento fragment, ale také i na jiné oblasti stejné molekuly, přičemž se intaktní proteiny používá při opakované imunizaci (vázaná suprese; Hoyne GF, et al. J. Exp. Med. 1993; 178:183 a Metzler B. Wraith DC, Int. Immunol. 193; 5:1159). Za druhé, při použití experimentárních modelů transplantace je nejlépe popsaným jevem „infekční tolerance“, kde se praví, že imunokompetentní buňky, které jsou tolerantní ke specifickému antigenu, jsou schopny inhibovat odezvu jiných buněk a dále že tato druhá populace buněk se stává regulační a tolerantní populací
-1 CZ 295997 B6 (Qin SX, et aL, Science 1993; 258:974). Imunologické mechanizmy probíhající při těchto jevech nebyly dosud charakterizovány.
Vynález vznikl na základě objevu receptorů rodiny Notch a jeho ligandů, Delta a Serrate, které se exprimují na buněčném povrchu normálních zralých buněk periferního imunitního systému.
Podstata vynálezu
Vynález popisuje použití ligandu Notch nebo jeho fragmentu nebo derivátu nebo kódového polynukleotidu pro ligand Notch nebo jeho fragment nebo derivát pro výrobu léčiva pro použití při imunoterapii.
Expresivní patern receptorů rodiny Notch a jejich ligandů v normálním periferním dospělém imunitním systému nebyl doposud popsán, ale vynález ukazuje, že T-buňky mají vrozenou expresi mRNA Notch 1, zatímco exprese Delta je omezena pouze na nastavení T-buněk v periferních lymfatických tkáních. Exprese Sterrate je omezena na úlohu buněk nesoucích antigen (APC) v periferním imunitním systému (obrázek č. 1). Proto tato rodina receptorových ligandů může pokračovat v regulaci rozhodování o osudu buněk v imunitním systému, stejně jak je tomu v jiných tkáních během embryonálního vývoje (Ellisen LQ, et al. Cell 1991; 66:649). Signály Notch mají ústřední úlohu při indukci stavu, kdy nedochází k periferní odezvě (tolerance nebo energie) a mohou poskytnout fyzikální vysvětlení vázané suprese a infekční tolerance.
Vynález dále popisuje použití ligandu Notch při ošetření reakce zprostředkované T-buňkami. Pozorovalo se, že při expozici populace prvně použitých T-buněk ligandu Notch, které exprimují APC v přítomnosti alergenu nebo antigenu, je ligand Notch schopen vytvořit populaci T-buněk tolerantní vůči uvedenému antigenu nebo alergenu. Tato populace T-buněk, když je následně vystaven druhé populaci tolerantní vůči uvedenému alergenu nebo antigenu.
Vynález se také týká použití ligandu-iVoteA při vázané toleranci a/nebo infekční toleranci.
Další provedení vynálezu se týká použití ligandu Notch při modulaci exprese funkčního proteinu Notch nebo signální cesty Notch.
Ve shora popsaných provedeních vynálezu se ligand Notch může aplikovat na T-buňky inkubací/smícháním T-buněk s buňkami nesoucími antigen (APC), které v přítomnosti antigenu nebo alergenu exprimují nebo nadměrně exprimují ligand Notch. (Nadměrné) exprese genu ligandu Notch lze dosáhnou tak, že APC se transfekují genem schopným exprimovat ligand Notch nebo APC jsou vystaveny působení činidla schopného zvýšit expresi endogenního genu(ů) ligandu Notch.
Vhodná činidla, která ovlivňují expresi ligandů Notch, zahrnují činidla, která způsobují expresi genů Delta a/nebo Serrate. Například v případě exprese genu Delta se navážou extracelulární BMP (kostní morfogenní proteiny, Wilson, P.A. and Hemmati-Brivanlon A. 1997 Neuron 18: 699-710, Hemmati-Brivanlou, A and Melton, D. 1997 Cell 88: 13-17) na jejich receptory, přičemž se zeslabují transkripce genu Delta, což způsobila inhibice exprese transkripčního faktoru komplexu achaete/scute. Věří se, že tento komplex se přímo podílí na regulaci exprese genu Delta. Libovolné činidlo, které inhibuje navázání BMP na jejich receptory je schopné zesílit expresi genu Delta a/nebo Serrate. Taková činidla zahrnují noggin, chordin, follistati, Xnr3, FGF, fringe a jejich deriváty nebo varianty (činidlo noggin se popisuje v publikaci Smith W.C. and Harland, R. M. Cell 70: 829-840, činidlo chordin se popisuje v publikaci Sasai, Y. et al., 1994 Cell 79:779-790). Činidla noggin a chodrin se váží na BMP, přičemž zamezují aktivaci jejich signální kaskády, která vede ke zeslabení transkripce genu Delta.
-2CZ 295997 B6
V některých stádiích onemocnění může být imunitní systém těla oslaben a je nutné zeslabit expresi genů Delta a/nebo Serrate za účelem obejít vynucenou imuno-supresi. V takovém případě se mohou použít činidla, která inhibují expresi genu Delta a/nebo Serrate. Příklady činidel, která inhibují expresi genu Delta a/nebo Serrate, zahrnují protein toll (Medzhitov, R. et al., 1997 Nátuře 388: 394-397), BMP a jiná činidla, která snižují nebo interferují s produkcí činidel noggin, chordin, follistatin, Xnr3, FGF a fringe. Vynález dále popisuje použití činidla schopného snižovat expresi proteinů Delta nebo Serrate při výrobě léčiv používaných při léčení bakteriálních infekcí nebo nádorem indukované imunosuprese.
Jak se popisuje shora v textu, vynález popisuje modifikaci exprese proteinu Notch nebo jeho prezentaci na buněčné membráně nebo signální cestu. Tyto uvedené postupy jsou zahrnuty v odezvách zprostředkovaných T-buňkami, které se podílejí na indukci tolerance (vázané a/nebo infekční). Činidla, která zesilují prezentaci plně funkčních proteinu Notch na povrchu buněk zahrnují matrixovou metaloproteinázu, jako je produkt Kuzbanienova genu u hmyzu Dorosphila (Dkuz, Pan, D and Rubín, G.M. 1997 Cell 90: 271-280) a dalších členů rodiny genů ADAMALYSIN. Činidla, která redukují nebo interferují s jejich přítomností, jako jsou plně funkční buněčný membránový protein může zahrnovat MMP inhibitory, jako jsou inhibitory založené na hydroxymatu.
Termín „buňka vykazují antigen nebo podobně“ není omezen na APC. Odborníkovi je zřejmé, že se může použít libovolný nástroj schopný prezentovat požadovaný ligand Notch vůči populaci T-buněk. Je výhodné, aby termín APC zahrnoval všechny tyto možnosti. Příklady vhodných APC zahrnují dendritické buňky, L-buňky, hybridomy, lymfomy, makrofagy, B-buňky nebo syntetické APC, jako jsou lipidové membrány.
V případě, že APC se transfekují genem schopným exprimovat ligand Notch, transfekci lze provést virem jako je například retrovirus nebo adenovirus nebo libovolným jiným nástrojem nebo způsobem jenž je schopný zavést gen do buněk. Mezi ně patří libovolný nástroj nebo způsob, který je účinný při genové terapii a zahrnuje retroviry, lipozomy, elektroporaci, jiné viry, jako jsou adenovirus, adeno-asociovaný virus, herpesvirus, vakcinii, DNA sráženou fosforečnanem vápenatým, DEAE dextranovou transfekci, mikroinjekce, polyethylenglykol, komplex DNAprotein.
Při použití takových nástrojů a způsobů samotných nebo v kombinaci je možné řídit zavedení genu na určité místo určité populace buněk, což umožňuje, aby se metody podle vynálezu uskutečnily in vivo. Virus se může použít v kombinaci s lipozomy za účelem zvýšit účinnost přijmutí DNA. Specifity pro určité místo lze dosáhnout inkluzí specifických proteinů (například jednořetězcové protilátky, které reagují s CD1 lc v případě dendritických buněk/makrofágů) ve virovém obalu nebo lipozomu.
Upřednostňuje se použití konstrukce, kde exprese genu (například serrate) nebo spojena s expresí antigenu. APC, které (nadměrně) exprimují gen serrate, budou také exprimovat velké množství relevantního antigenu a tak budou přednostně interaktovat s T-buňkami správné specifity.
Další provedení vynálezu se vztahuje k molekule, která obsahuje část ligandů Notch, spojenou s částí alergenu nebo antigenu T-buňky tak, že při vystavení T-buňkami jsou obě části schopny se navázat na svá místa. Taková molekula je schopna učinit T buňku specifickou pro tento antigen/alergen tolerantní vůči tomuto antigenu nebo alergenu, jehož základ tvoří uvedená část antigenu nebo alergenu. Specifitu části ligandů Notch zaručuje příbuznost částí alergenu nebo antigenu.
Částí alergenu nebo antigenu může například být komplex syntetický MHC-peptid. Jde o fragment molekuly MHC nesoucí zámek antigenu, který nese element antigenu. Takové komplexy se popisují v publikaci Altman J. D. et al., Science 1996, 274: 94-6.
-3CZ 295997 B6
V dalším provedení vynálezu je sloučeninou fúzní protein, který obsahuje segment Notch nebo extracelulámí domény ligandu Notch a Fc segment imunoglobinu. S výhodou jsou to segmenty IgGFc nebo IgMFc.
Ve všech shora popsaných provedeních vynálezu je výhodné, aby ligand Notch pocházel z proteinové rodiny Searrate nebo Delta nebo byl jejich derivátem, fragmentem nebo analogem.
Stádium onemocnění nebo infekce se může popsat jako onemocnění zprostředkované T-buňkami a může zahrnovat buď astma, alergii, odmítnutí transplantátu, autoimunitu, nádorem indukované aberace systému T-buněk a infekční onemocnění způsobené například specie Plasmodium, Microfilariae, Helminths, Mycobacteria, HIV, Cytomegalovirus, Pseudomonas, Toxoplasma, Echinococcus, Haemophilus influenza typ B, Hepatitis C, nebo Toxicara nebo spalničky. Když se použije správný antigen nebo alergen, je možné použít ligand Notch podle vynálezu k léčbě uvedeného onemocnění nebo infekce.
Vynález dále popisuje způsob detekce imunitní suprese indukovaný organizmem, který napadl jedince. Takové organizmy mohou produkovat rozpustné formy členů rodiny Serrate, Notch a/nebo Delta nebo jejich derivátů nebo proteiny, které způsobují jejich expresi in vivo, čímž indukují infekční tolerantní imunosupresi. Uvedený způsob zahrnuje test přítomnosti Serrate, Delta, Notch nebo jejich derivátů, které nejsou vázány in vivo na membráně. S výhodou obsahuje protilátky proti Serrate, Delta nebo Notch nebo jejich deriváty.
Způsoby použití při testech detekce zeslabené nebo zesílené exprese a/nebo úpravu proteinu Notch, Delta/Serrate zahrnují body:
1. Exprese genů Delta/Serrate, Notch a Fringe lze stanovit expozicí izolovaných buněk testovacích látek v kultuře, což se používá například:
(a) při stanovení množství proteinu specifickým barvením protilátek za použití imunochemie nebo průtokové cytometrie.
(b) při stanovení množství RNA kvantitativní polymerázovou řetězcovou reakcí na použití reverzní transkriptázy (RT-PCR). RT-PCR se může uskutečnit za použití kontrolního plazmidu s vestavenými standardy vhodnými pro měření exprese endogenních genů a primerů, které jsou specifické pro Notch 1 a Notch 2, Serrate 1 a Serrate 2, Delta 1 a Delta 2, Delta 3 a Fringe. Tato konstrukce se může modifikovat jako nový člen ligandů.
(c) při stanovení funkčního množství při testech buněčné adheze.
Zesílená exprese Delta/Serrate nebo Notch by měla vést k zesílení adheze mezi buňkami, které exprimují Notch a své ligandy Delta/Serrate. Testované buňky se určitým způsobem ošetří v kultuře a cílové buňky značené radioaktivně nebo fluoresceinem (transfekované proteinem Notch/Delta/Serrate) se přes ně přelijí. Směs buněk se inkubuje při teplotě 37 °C po dobu 2 hodin. Buňky, které se nezachytili, se odstraní, promýváním. Stupeň adheze se měří stanovením radioaktivity/imunofluorescence na povrchu plotny.
Za použití uvedených metod je možné detekovat látky nebo ligandy Notch, které způsobují expresi nebo zpracovávání proteinu Notch nebo ligandu Notch. Vynález se také popisuje látky nebo ligandy Notch detekovatelné použitím uvedených testovacích metod.
Vynález také zahrnuje způsoby testování, které zahrnují kontakt (a) protein Notch a ligandu schopného vázat se na protein Notch s (b) sloučeninou; a stanovení, zda sloučenina umožňuje navázání ligandu na protein Notch přednostně tam, kde protein Notch je spojen s T-buňkou.
-4CZ 295997 B6
Přednostně používané ligandy Notch podle vynálezu jsou proteiny rodiny Delta nebo Serrate nebo polypeptidy nebo jejich deriváty. Tyto proteiny lze s výhodou získat za použití standardních metod rekombinace, které jsou dobře známy v oboru. Sekvence genů vhodné pro použití při tvorbě takových látek podle vynálezu je možné získat z publikací, jako jsou WO 97/01571, WO 96/27610 a WO 92/19734. Vynález se však neomezuje pouze na v publikacích popsané sekvence Notch, Delta a Serrate. Upřednostňuje se, aby Notch, Delta nebo Serrate nebo členové rodiny, proteiny nebo polypeptidy nebo jejich deriváty byly fragmenty extracelulámích domén Notch, Delta nebo Seerate nebo členů rodiny nebo jsou deriváty takových fragmentů. Termín „ligand Notch.“ dále zahrnuje libovolný ligand nebo člena ligandové rodiny, které interagují s členem rodiny proteinů Notch a zahrnují skupinu proteinů, které jsou známy jako „toporytmické proteiny“. Jsou to proteinové produkty genů Delta, Serrate, Deltex a zesilovačů split genů stejně jako jiných členů této rodiny genů, které je možné identifikovat na základě schopnosti jejich genové sekvence hybridizovat s proteiny Notch, Delta nebo Serrate, nebo na základě homologie s těmito proteiny nebo na základě schopnosti jejich genů vykazovat fenotypické interakce.
Notch, Delta, Serrate se poprvé popisují u hmyzu Drosophila a proto reprezentují prototypové proteiny receptoru Notch a členů rodiny ligandů Notch. U řady druhů bezobratlých a obratlovců se popisuje řada proteinů Notch a ligandů. Jejich názvosloví se však může lišit od názvosloví používaných u hmyzu. Například Notch je monolog Linl2 a Gpl 1, Serrate/Deltajsou homology Jagged, Apxl a Lag-2.
Farmaceutické kompozice podle vynálezu se mohou vytvořit podle principů, které jsou dobře známy v oboru. Podstata ekcipienta a síla aktivity závisí na vytvofené sloučenině podle vynálezu.
Upřednostňuje se, aby farmaceutické kompozice byly ve formě jednotkových dávek. Dávku látky podle vynálezu vhodnou pro aplikaci pacientovi ve formě farmaceutické kompozice stanoví lékař.
Preferovaným způsobem aplikace formulace podle vynálezu je libovolná z obvyklých metod aplikace, které zahrnují intramuskulámí a itraperitonální, intravenózní injekce, inhalaci nosem, inhalaci do plic, podkožní, intradermální, intra-artikulámí, intratekální aplikaci, povrchovou aplikaci a aplikaci prostřednictvím zažívacího traktu (například Peyerovy náplasti).
Termín „derivát“ se používá ve vztahu k proteinům nebo polypeptidům podle vynálezu, které zahrnují libovolnou substituci, variaci, modifikaci, nahrazení, deleci nebo adici jednoho (nebo více) aminokyselinových zbytků sekvence, přičemž výsledný protein má schopnost modulovat interakce /Votc/z-ligandu Notch.
Termín „varianta“ ve vztahu k proteinům nebo polypeptidům podle vynálezu zahrnuje libovolnou substituci, variaci, modifikaci, nahrazení, deleci nebo adici jednoho (nebo více) aminokyselinových zbytků sekvence, přičemž výsledný protein má schopnost modulovat interakce Notchligandu Notch.
Termín „analog“ ve vztahu k proteinům nebo polypeptidům podle vynálezu zahrnuje libovolnou peptidům podle vynálezu zahrnuje libovolnou peptidomimetickou sloučeninu, kterou je chemická látka, a má schopnost modulovat interakce AU/c/z-ligandu Notch stejným způsobem jako rodičovský protein nebo polypeptid. Patří sem sloučeniny, které jsou agonisty nebo antagonisty exprese nebo aktivity proteinu Notch nebo ligandů Notch.
Uvažuje se, že sloučenina moduluje interakce A/o/cZz-ligand Notch, jestliže je schopna bud’ inhibovat, nebo zesilovat interakci Notch s jeho ligandy v rozsahu dostatečným pro účinnou terapii.
Exprese „Notch-lvganA Notch“ znamená interakci mezi členem rodiny Notch a ligandem schopným vázat jeden nebo více takových členů.
-5CZ 295997 B6
Termín „terapie“ (léčba) zde znamená diagnostické a profylaktické aplikace.
Termín „medicínský“ znamená aplikace na zvířata a lidi.
Termín „protein a polypeptid“ je synonymem pro protein, který se často používá v obecném smyslu pro indikaci relativně delších sekvencí aminokyselin, které se nacházejí vpolypeptidu.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek č. 1 zobrazuje výsledky hybridizace in šitu provedené způsobem, který se popisuje v příkladu 1.
Obrázek č. 2 zobrazuje výsledky experimentu popsaného v příkladu 4.
Obrázek č. 3 zobrazuje výsledky experimentu popsaného v příkladu 5.
Obrázek č. 4 zobrazuje výsledky experimentu popsaného v příkladu 6.
Obrázek č. 5 zobrazuje výsledky experimentu popsaného v příkladu 7.
Obrázek č. 6 zobrazuje výsledky experimentu popsaného v příkladu 8.
Obrázek č. 7 zobrazuje výsledky experimentu popsaného v příkladu 9.
Obrázek č. 8a a 8b zobrazuje výsledky experimentu popsaného v příkladu 10.
Obrázek č. 9 zobrazuje výsledky experimentu popsaného v příkladu 11.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: geny Notch, Delta a Serrate se exprimují v periferním imunitním systému
Syntetizovaly se sondy antimediátorové RNA specifické pro Notch 7, Delta 1 a Serrate 1 a začlenil se do nich dioxigeninem značený UTP. Každá sonda se rozpustila v hybridizačním pufru, zahřívala se na teplotu 50 °C po dobu 5 až 10 minut a přidaly se podložní sklíčka potažené materiálem TESPA, které obsahují 10 milimetrové sekce sleiny a thymu, jenž se před tím fixovaly 4 % paraformaldehydem a PBS. Materiál na sklíčkách se podrobil hybridizaci přes noc při teplotě 65 °C. Následující den se sklíčka promyla dvakrát při teplotě místnosti (RT) pufrem, který obsahuje lxSSC /50 % formamidu/ 0,1 % Tween 20. Dále se sklíčka dvakrát promyla pufrem MABT, který obsahuje 0,1 M kyselinu maleinovou/0,15 M NaCl/0,1 % Tween 20 pH 7,5, při teplotě místnosti a pak se materiál blokoval po dobu 2 hodin pufrem MABT + 20 % kozí sérum + 296 Boehringerovým blokovacím činidlem (BBR). Sklíčka se inkubovala přes noc při teplotě místnosti s antidigoxigeninovými fragmenty Fab. Po čtyřech promytí pufrem MABT se sklíčka dále promyly dvakrát s alkalickém substrátovém pufru. Přítomnost navázaných sond antimediátorové RNA se detekovala inkubací pruhů v substrátovém pufru, který obsahuje NBT + BCIP, ve tmě. Pruhy se barvily haemotoxylinem a hodnotily se v médiu Depx.
Výsledky těchto hybridizaci jsou uvedeny na obrázku č. 1, který ukazuje, že ve slezině myší, které jsou tři měsíce staré, exprimují gen Delta a Serrate izolované buňky v periarteriolámí membráně a nikoli v centru zárodku. Gen Notch je exprimován řadou buněk v periarteriolámí membráně.
-6CZ 295997 B6
Příklad 2: produkce fúzního proteinu Delta-Fc
Expresivní vektor PIG-1 (D. Simmons, „Clonning cell surface molecules by transient surface experssion in mammalian cells“ pp 93-128, Cellular Interactions in Development Ed. D. Hartley, Pub. Ox. Uni. Press (1993)) umožňuje produkci fúzního proteinu, který obsahuje extracelulární část Delta 1 spojenou s oblastí lidského IgGl-Fc. Fragment restrikčního enzymu, kteiý obsahoval pouze extracelulární doménu proteinu Delta 1 se klonoval do vektoru PIG-1. Výsledný plazmid se transformoval do kmene E. coli MC 1061 a kultivoval se v kultivačním médiu SOB, které obsahuje 10 pg/ml tetracyklinu/ampicilinu. Pro transfekci buněk COS in vitro se použil izolovaný vektor. Buňky COS se kultivovaly až do dosažení 50 až 75 % konfluence a transfekovaly se 10 pg plazmidové DNA na jednu plotnu za použití metody DEAE-dextran. 24 hodin po transfekci se vyměnilo kultivační médium za kultivační médium, které obsahuje 1 % FCS, a buňky se kultivovaly po další 3 až 6 dní in vitro. Buňky se centrifugovaly po dobu 5 minut při 5000 ot./min, aby vznikl pelet buněk a odpadního materiálu. Supematant se odstranil a uskladnil se pro další použití. Fúze Delta-FC se izolovala ze supematantů kultury přidáním 2 ml 50 % suspenze proteinu a sefarózy (Pharmacia) a směs se centrifugovala přes noc při teplotě 4 °C. Kuličky sefarózy se izolovaly tak, že supematant kultury procházel filtrem o velikosti pórů 0,45 mm, kuličky se promyly a přenesly se na plastovou kolonu o objemu 10 ml. Fúzní konstrukce DeltaFc se eluovala elučním pufrem spH 4,0 o objemu 2 ml. Eluát se neutralizoval přidáním lMTrisbáze.
Příklad 3: Příklady modelů, ve kterých se může zkoumat signální cesta ligandu Notch
Periferní tolerance na vlastní antigeny se může analyzovat v transgenních myších, které nesou receptor T-buněk (TCR), kde ligandy TCR se exprimují jako vlastní antigen pouze v periferní imunitním systému. Periferní tolerance vůči transplantovaným antigenům se může indukovat několika způsoby, které zahrnují pre-aplikaci recipientu T-buněčné protilátky nebo zablokování ko-stimulace. Tímto způsobem je možné ukázat vázanou supresi tak i infekční toleranci. Periferní tolerance vůči alergenům se může indukovat intranazálním zavedením peptidů odvozených z alergenů. Exprese /Vo/c/z-ligand Notch se měří v buňkách získaných z tkání dýchacích cest a/nebo z lymfoidních tkání po inhalaci alergenu a demonstrují se modifikace tolerance. V experimentálních modelech infekcí infekčními činidly se exprese /Vb/cá-ligand Notch může měřit pomocí organizmu (patogen) a imunokompetentních buněk hostitele.
Příklad 4: Hybridomy exprimující gen Delta mohou inhibovat odezvy lymfocytů upravených antigenem
Myši se imunizovaly syntetickým peptidem, který obsahuje imunodominantní epitop alergenu roztoče (HDM; house dust mite) Der pl (p 110-31), nebo ovalbuminem (OVA, protein bílku vajec slepic). O týden později se izolovaly buňky lymfatických žláz (LNC) a připravila se buněčná kultura. Lymfatické žlázy získané ze zvířat, která se imunizovala různými antigeny, se udržovaly odděleně. Tyto buňky se nazvaly upravené LCD.
Hybridomy T-buněk se transfekovaly buď genem Delta v plné délce, nebo kontrolním plazmidem tak, že delta se exprimoval jako membránový protein. Po dvou dnech kultivace se hybridomy ozářily, aby se zabránilo jejich proliferaci nebo produkci cytokinů. Proto v testu měřená odezva pochází pouze ze samotných buněk lymfatických žláz.
Ozářené hybridomy se přidaly do kultury, která obsahuje upravené LNC. Pak se přidal vhodný antigen (to je pl 10-131 nebo OVA) a buňky se inkubovaly po dobu 24 hodin. Pak se získal supematant a stanovil se v něm obsah IL-2 (hlavní růstová faktor T-buněk). Měřila se také proliferační odezva buněk lymfatických žláz po 72 hodinách.
-7CZ 295997 B6
Výsledky ukazují, že buňky lymfatických žláz kultivované v přítomnosti ozářených hybridomů, které exprimují kontrolní plazmid, se stále pomnožují, jak je zobrazeno na obrázku č. 2, a v případě, že se kultura stimuluje vhodným antigenem vylučují 11-2. Jejich odezva se udržuje v poměru 1:1 LNC:hybridom. V případě, že se buňky lymfatických žláz inkubovaly v přítomnosti hybridomů, které exprimují gen Delta v plné délce, a vhodného antigenů (v poměru 1:1), proliferační odezva a produkce 11-2 se snížila alespoň o 88 %. Hybridomy se transfekovaly kontrolním virem (prázdná kolečka) a delta virem (prázdné čtverce). Obrázek č. 2 ukazuje data, které se prezentují jako počet impulzů za jednu minutu (cpm) 3H-Tdr začleněného po 72 hodinách od začátku inkubace. Dále obrázek zobrazuje hodnotu cpm buněk lymfatických žláz (LNC) kultivovaných v přítomnosti hybridomů, které exprimují gen delta nebo kontrolní konstrukce. Celkový počet buněk v misce je 4 x 105 (počet LNC kolísá v závislosti na poměru hybridomů LNC, také cpm bude kolísat). PÍ 10-131 LNC jsou buňky ošetřené antigenem Der pl (pl 10-131). OVA LNC jsou buňky ošetřené antigenem OVA). 2BB11 a 2BC23 jsou dva rozdílné hybridomy, které reagují s antigenem Der pl.
Tato data ukazují, že inhibice odezvy T-buněk, které exprimují gen Delta, se může zavést ve formě trans. Ačkoli v této kultuře systému Delta exprimujících T-hybridomy specifické pro antigen Derp 1 byly schopny inhibovat odezvu T-buněk ošetřených antigenem OVA, tento zjevný nedostatek specifity se jeví být způsobem blízkostí buněk ovlivněných kultivačním systémem. Tato data jsou uvedena na obrázku č. 8a a 8b a ukazují, že hybridomy exprimující ve zvířatech gen delta musí sdílet antigenní specifitu s imunogenem, aby došlo k modulačnímu účinku na imunitní odezvu vůči imunogenu. V tomto případě je zřejmé, že T-buňky exprimující gen delta se mohou dostat do blízkosti T-buněk vykazujících odezvu, jestliže rozeznávají stejný antigen na stejné APC.
Příklad 5: Dentritické buňky extrimující Serrate brání navázání antigenů na T-lymfocyty
Dendritické buňky (DC) jsou buňky nesoucí primární antigen v imunitním systému a jsou nutné pro stimulaci odezvy T-buněk. Dendritické buňky se získaly ze sleziny a transfekovaly se buď retrovirem, který umožňuje expresi proteinu Serrate v plné délce, nebo kontrolním retrovirem. Dendritické buňky se také podrobily pulzům DHM peptidem pl 10-131 po dobu 3 hodin in vitro při teplotě 37 °C. Dendritické buňky se promyly a použily se k podkožní imunizaci poprvé použitých myší za použití 105 buněk/myš. Po 7 dnech se získaly buňky LNC a novu se stimulovaly v kultuře peptidem při koncentraci 4x105 buněk/prohlubeň. Protože myši se imunizovaly pouze dendritickými buňkami, které se vystavily peptidovým pulzům, měřením se získala schopnost těchto buněk vyvolat imunitní odezvu.
Na obrázku č. 3 jsou data prezentována jako hodnoty cpm LNC 72 hodin po kultivaci získaná ze zvířat, která se imunizovala kontrolními transfekovanými dendritickými buňkami (prázdný kruh) nebo dendritickými buňkami transfekovanými genem Serrate (prázdné čtverce).
Výsledkem imunizace myší dendritickými buňkami, které exprimují gen Serrate, je desetinásobné zvýšení počtu buněk získaných z lymfatických žláz v porovnání s imunizací kontrolními DC. Dále jsme zjistily, že LNC z myší, které se imunizovaly DC+Serrate, snížily proliferaci (93 % snížení kontrolní hodnoty, obrázek č. 3) nebo ve srovnání s buňkami imunizovanými kontrolními DC vylučují IL-2.
Příklad 6: Hybridomy T-buněk exprimující gen Delta jsou u zvířat schopny inhibovat vývoj imunity proti antigenů Der pl
Hybridomy T buněk (reagují s antigenem Der pl) se transfekovaly retrovirem, který obsahuje myší gen Delta tak, že gen Delta se exprimoval na buněčném povrchu nebo kontrolním retrovirem. Myším C57 BL se podkožní injekcí aplikovalo 10 milionů ozářených hybridomů a imunizo
-8CZ 295997 B6 vály se 50 mikrogramy antigenu Der pl, který tvoří emulzi s kompletním Freundovým adjuvans (CFA). Po sedmi dnech se izolovaly buňky lymfatických žláz a kultivovaly se s antigenem Der pl (koncentrace antigenu je 10 pg/m), s peptidem 110-131 antigenu Der pl (koncentrace peptidu je 10 pg/ml), nebo speptidem 81-102 antigenu Der pl (v koncentraci 10 pg/ml). Koncentrace buněk je 4 x 105 buněk/prohlubeň. Kultura se inkubovala při teplotě 37 °C po dobu 72 hodin a na posledních 8 hodin kultivace se přidal thymidin značený tritiem. Výsledky testů proliferace buněk pocházejících ze zvířat, kterým se injekcí zavedly hybridomy transfekované jako kontroly (čisté) nebo transfekované genem Delta (Delta~FL) jsou zobrazeny na obrázku č. 4.
LNC pocházející ze zvířat, kterým se injekcí zavedly hybridomy transfekované kontrolním virem produkují velké množství IL-2 a proliferují v kultuře v přítomnosti antigenu Der pl, peptidu 110-31 nebo peptidu 81-102. Naopak buňky, které pocházejí ze zvířat, kterým se injekcí aplikovaly hybridomy exprimující gen Delta nevykazují žádnou odezvu na libovolný z antigenů Der pl (obrázek č. 4).
Příklad 7: Lidské T-buňky exprimující gen Delta mohou blokovat odezvu normálních Tbuněk.
Klon T-buněk (HA 1.7), který reaguje na virus chřipky, se transfekoval myším genem Delta za použití retrovirové konstrukce, aby došlo k expresi proteinu Delta na povrchu buněk. Smícháním této populace buněk s normálními buňkami HA 1.7 se předešlo následné reakci normálních buněk HA1.7 speptidem HA306-318 a s buňkami nesoucími antigen. Buňky HA1.7 v koncentraci 5 x 105 se smíchaly s 1 x 106 ozářenými DRB 1*0101 priferálními krevními mononukleámími buňkami (PBMC) + 1 mikrogramem HA306-318 a kultivovaly se při teplotě 37 °C. O 6 hodin později se přidaly 5 % lymfo-kult (kultivační médiu obsahující IL—2) v celkovém množství 1 ml. 24 hodin pro iniciaci kultury Delta nebo kontrolního retroviru se nic nepřidává. 7 dní po začátku kultivace se buňky shromáždily, promyly se a transfekované buňky se ozářily. Transfekované buňky se smíchaly v poměru 2:1 s buňkami HA1.7, které nebyly ošetřeny, a kultivovaly se po dobu 2 dnů. Pak se smíchaná kultura izolovala, promyla se a nanesla se na plotny v koncentraci 2 x 104 buněk/prohlubeň spolu s
a) 2,5 x 104 DRB*0101 BPMC (médium)
b) 2,5 x 104 DRB*0101 PBMC + peptid (Ag+APC)
c) 5% lymfo-kultu (IL-2)
Na posledních 8 hodin kultivace se přidal thymidin značený tritiem a po 68 hodinách se buňky sklidily. Výsledky jsou uvedeny na obrázku č. 5.
Samotná kultura nebo kultura HA 1.7 transfekované kontrolním virem nebo neošetřená kultura buněk HA1.7 vykazují odezvu na peptid + buňky nesoucí antigen. Inkubace s ozářenými buňkami HA 1.7 transfekovanými genem Delta zcela bráni odezvě neošetřených buněk HA 1.7 na antigen + APC.
Uvedené buňky vykazují odezvu stejně jako neošetřené buňky nebo buňky HA1.7 transfekované kontrolním virem na IL-2, což ukazuje, že nejsou schopny se množit (obrázek č. 5).
Příklad 8: Exprese genu Serrate buňkami vykazujícími antigen předchází odezvě T-buněk
Klon HA1.7 se smíchal speptidem HA306-318 (1,0 pg/ml) v přítomnosti L-buněk exprimující Hla-BrBAl*0101 (buňky vykazující antigen), přičemž každý typ buněk se použil v koncentraci 2 x 104. L-buňky se transfekovaly kontrolním retrovirem (tzv. čisté buňky) nebo retrovirem
-9CZ 295997 B6 exprimujícím gen Serrate (Serrate L-buňky). Proliferační odezva se měřila po 72 hodinách po přidání thymidinu značeného tritiem, který byl přítomen v kultivačním médiu posledních 8 hodin. Výsledky v případě kultury HA1.7 jsou uvedeny na obrázku č. 6:
a) samotná kultura 0
b) +IL-2 S
c) + peptid +DRB*0101-L-buňky ®
d) + peptid +DRBl*0101-L-buňky transfekované kontrolním virem Ě
e) + peptid + DRB1 *0101-L-buňky transfekované virem exprimujícím gen Serrate ®
Buňky HA 1.7 stimulované L-buňkami exprimující gen Serrate vykazují slabou odezvu na antigen na rozdíl od buněk, které jsou stimulované L-buňkami transfekovanými kontrolním vektorem (obrázek č. 6).
Příklad 9: Buňky vykazující antigen exprimující gen Serrate indukují regulační T-buňky
Klon HA1.7 se smíchal speptidem HA306-318 a s L-buňkami (exprimující DRBl*0101 jako buňky vykazující antigen) DRBl*0101 v přítomnosti 2 % IL-2. L-buňky se transfekovaly buď kontrolním retrovirem, nebo retrovirem, který exprimuje Serrate. Po sedmi dnech kultivace se buňky HA 1.7 sklidily, promyly a ozářily, pak se smíchaly s čerstvými buňkami HA 1.7 (každá populace se použila v množství 2 x 104). Buňky se kultivovaly další dva dny a pak se stimulovaly peptidem (v koncentraci 1,0 pg/ml) + normálními buňkami vykazujícími antigen (DRBl*0101 PBMC). Proliferační odezva se měřila po 72 hodinách následujících po přidání tritiovaného thymidinu, který byl přítomen v kultuře posledních 8 hodin kultivace. Výsledky týkající se čerstvé kultury HA1.7 jsou uvedeny na obrázku č. 7:
a) samotná kultura 0
b) +IL-2 S
c) + kontrolním virem indukované buňky HA 1.7, pak peptid + DRB 1*0101 PBMC S
d) + virem, který exprimuje gen Serrate, indukované buňky HA 1.7, pak peptid +DRB 1*101 PBMC S
HA1.7 indukované L-buňkami, které exprimují Serrate, brání odezvě normálních HA1.7 na normální stimuly antigenu (obrázek č. 7). To ukazuje schopnost buněk, které se staly tolerantními expozicí Serrate, přenést jejich toleranci na poprvé použitou buněčnou populaci (infekční tolerance).
Příklad 10: Regulace indukována T-buňkami, které exprimují gen Delta, je specifická pro antigen
Myším se injekcí aplikovaly buňky hybridomů T-buněk v množství 107, které jsou transdukovány buď kontrolním retrovirem, nebo retrovirem obsahujícím gen Delta. Hybridomem je 2BC3, který je specifický pro peptid 110-131 antigenu Der pl. Ve stejnou dobu se zvířatům aplikoval buď antigen Der pl, nebo ovalbumin, které tvoří emulzi z kompletním Freundovým adjuvans.
-10CZ 295997 B6
O sedm dní později se izolovaly buňky lymfatických žláz a 4 x 105 buněk se kultivovalo v přítomnosti antigenu Der pl nebo ovalbumin (používá se stejný antigen, kterým se už imunizovaly).
Produkce IL-2 se měřila 24 hodin po začátku kultivace. Stimulační indexy produkce IL-2 jsou uvedeny na obrázku č. 8a (odezvy u zvířat imunizovaných antigenem Der pl) a na obrázku č. 8b (odezvy u zvířat imunizovaných OVA) v případě zvířat kterým se injekcí aplikovaly hybridomy transfekované kontrolním retrovirem (čisté) nebo retrovirem s genem Delta (delta).
Zvířata, kterým se injekcí aplikovaly hybridomy 2BC3 exprimující gen Delta, nevykazují žádnou odezvu na antigen Der pl, zatímco odezva zvířat, kterým se aplikoval OVA zůstala stejná. Tato data jsou uvedena na obrázku č. 8a a 8b, kde každý bod reprezentuje produkci IL-2 každé myši jako stimulační index (SI) kontrolní odezvy (není přidán antigen).
Příklad 11: T-buňky exprimují gen Delta během indukce tolerance
Buňky HA 1.7 se kultivovaly v přítomnosti peptidu HA306-318 (50 pg/ml), aniž jsou přítomny APC. Takové podmínky navozují u HA1.7 stádium tolerance. Buňky se sklízejí po 0, 30, 120 nebo 360 minutách v množství 1,5 x 106 buněk, vytvořil se pelet buněk a zamrazily se. RNA se připravila z buněčných peletů homogenizací v roztoku guanidiumhiokyanát centrifugaci v CsCl gradientu. 1 pg RNA se převedl na cDNA za použití oligo-dT primerů. Z výsledné cDNA se jedna dvacetina použila pro PCR (40 cyklů) za použití primerů, které jsou specifické pro lidský homolog genu (obrázek č. 9), kde v dráze 1 je markér, v dráze 2 jsou vzorky v čase 0, v dráze 3 jsou vzorky v čase 30 minut, v dráze 4 jsou vzorky v čase 120 minut, v dráze 5 jsou vzorky v čase 240 minut, v dráze 6 jsou vzorky v čase 360 minut a v dráze 7 je negativní kontrola.
Zbývající HA 1.7 neexprimují mRNA Delta, ale transkripty se objevily ve dvou hodinách iniciace protokolu získání tolerance.
Příklad 12: Analýza exprese Notch 1, Serrate 1 a Delta 1 během indukce tolerance imunohistologií a in šitu hybridizací.
Myším C57 BL/6J se intranazálně ve třech po sobě jdoucích dnech aplikovalo buď 100 mikrogramů antigenu Der pl, peptidu 110-131, nebo kontrolní roztok (fyziologický roztokpufrovaný fosforečnanem, PBS). Je známo, že intranazální aplikace antigenu tímto způsobem indukuje toleranci vůči uvedenému antigenu. Některá zvířata se pak testovala po dobu dvou týdnů. Pak se jim do báze ocasu opět injekcí podkožně aplikoval antigen v množství 50 μg/CFA. Superficiální lymfatické žlázy a slezina zvířat se získala v různém čase (den 0 je první den intranazální aplikace nebo opětovná imunizace antigenem). Vzorky se zpracovaly imunohistologickými metodami nebo hybridizací in sítu. V případě metod imunohistologie se tkáň zmrazila a nařezaly se 3 μπι sekce, fixovaly se acetonem chlazeným na ledu a barvily se polyklonálními protilátkami specifickými pro Notch 1 a Serrate 1. Vázané protilátky se detekovaly za použití křenové peroxidázy spojené s kozími anti-králičími protilátkami, kde se jako substrát používá diamínobenzidin. Protilátky specifické pro Delta 1 nejsou dostupné pro studium. V případě hybridizace in šitu se zmrazené tkáně nařezaly a fixovaly se 4 % formaldehydem. Sekce se hybridizovaly dioxigeninem spojeným se sondami antimediátorové RNA, které jsou specifické pro Notch 1, Serrate 1 a Delta 1 při teplotě 65 °C. Navázaná sonda se detekovala alkalickou fosfatázou spojenou s kozími antidioxigeninovými protilátkami, které se zviditelnily za použití NBT a BCIP jako substrátu. Data v tabulce č. 1 a 2 se získala metodami imunohistologie respektive hybridizací in šitu. Data reprezentují analýzu tkání z 5 myší po intranazální aplikaci samotného peptidu (PBS/pl 10-131 primárně) nebo po intranazální a podkožní aplikaci antigenu (PBS/pl 10-131 opětovná imunizace).
-11 CZ 295997 B6
Vysvětlivky:
+ slabé zbarvení ++ střední zbarvení +++ silné zbarvení.
Základní množství proteinů Notch, Delta a Serrate se exprimuje v kontrolních myších, kterým se aplikovalo pouze PBS. Myši, kterým se intranazálně aplikovalo PBS a podkožně antigen, vykalo zují během 8 dní po aplikaci antigenu mírné zesílení exprese všech tří molekul. Zvířata, kterým se aplikoval buď intranazálně samotný peptid, nebo intranazálně peptid a pak dávka antigenu, vykazují stejný patern zesílení exprese genu Notch, Delta a Serrate. Exprese byla rychlejší a silnější ve srovnání s kontrolními zvířaty.
- 12CZ 295997 B6
Tabulka č. 1: Exprese proteinů Notch a Serrate během indukce tolerance
OJ rt ω Q + 4 4* 4* 4- 4+ 4- 4- 4- 4- 4-4-/4- 4 4 4- + 4- 4-
Den 8 + 4· 4 4- + + 4- + 4- 4- 4- 4- 4- 4- 4- 4- 4- 4+ 4-
Den 4 4 + 4- + 4- 4- 4- 4 4 4 4
Den 1 + 4· 4* 4- 4- 4- 4- 4-
Den 0 + 4 4- 4- 4 4 4- 4
Léčba PBS primárně PBS opětovná imunizace i -—- - - . - - . pllO-131 primárně pllO-131 opětovná imunizace MU β Mtí β -rt a ω ω PBS opětovná imunizace pllO-131 primárně pllO-131 opětovná imunizace
Notch 1 r-4 <D 4-> ίΰ μ μ tu ω
-13CZ 295997 B6
Tabulka č. 2: Exprese transkriptů Notch, Delta a Searrate během indukce tolerance
O) r—1 β Φ Q 4 + + X. + 4 4 4 + ·+· + + 4* 4 4- + + + + + +
a> 4 4*
β 4· 4- + + 4 +
Φ •χ. + + + +
O + 4 + + + + 4 4
M·
β 0) + + 4> 4
a + 4 4- + + 4- + +
r—1
β
Φ
Q 4 + 4 + + 4- + +
o
β
Φ
Q 4 + 4 + + + 4 4
'Φ Ό3
>φ β >φ g
β ί> β Ρ>
Μ Ο Ο
44 φ φ MTÍ 44 Φ Φ
β XD υ r—1 >φ r—t Όϊ ο & >Φ υ τΗ >φ <—< OJ Ο
•Η Λ <β η β <η Ο φ Ή α « <Ώ β m <0
Μ 0 Ν rH Μ νΗ ρ 03 $4 ο Ν τΗ 54 r-H 0 Ν
Γ0 α •Η 1 1 ο Ή & Ή 1 Ό3 1 -Η
Λ β ο β ο 44 β β ο β ο 44 β
KJ ω V) β γΗ Ή τ—1 >Φ β C0 <Ζ) 5 γΗ *Η τΗ >Φ 2
'Φ Λ m β γΗ Μ τΗ α β CQ 0Q β γΗ Í4 t-4 Λ β
Ρμ ix. -Η ft Ο, .0-4 ο -Η CL CU -Η CU íi 0-4 Ο •Η
τ—<
γΗ φ
44
Λ Λ
υ 14
ρ 14
ο Φ
Ά ω
-14CZ 295997 B6
4* +/++ + + + 4* 4- 4-
+ 4 4· 4 + + + + +
+· + + + 4 4
4 4· 4· +
4 + +
PBS primárně PBS opětovná imunizace pllO-131 primárně pllO-131 opětovná imunizace
Delta 1
- 15CZ 295997 B6

Claims (17)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použití ligandu Notch nebo jeho fragmentu nebo derivátu nebo kódového polynukleotidu pro ligand Notch nebo jeho fragment nebo derivát pro výrobu léčiva pro použití při imunoterapii.
  2. 2. Použití podle nároku 1, při němž se imunoterapie týká léčby onemocnění, zprostředkovaného T-buňkami nebo infekčního onemocnění.
  3. 3. Použití podle nároku 2, při němž je onemocnění, zprostředkovaným T-buňkami nebo infekčním onemocněním jedno nebo větší počet onemocnění ze skupiny zahrnující alergii autoimunitní onemocnění, odmítnutí transplantátu, nádorem vyvolané odchylky systému T-buněk a infekční onemocnění, vyvolané například čeledí Plasmodium nebo Microfilariae, hlísty, Mycobacteria, HIV, Cytomegalovirus, Pseudomonas, Toxoplasma, Echinococcus, Haemophilus influenzae typ B, morbilli, Hepatitis B nebo Toxicara.
  4. 4. Použití podle některého z nároků 1 až 3, při němž se ligand Notch volí ze skupiny zahrnující Serrate, Delta nebo jejich fragmenty nebo deriváty.
  5. 5. Použití ligandu Notch nebo jeho fragmentu nebo derivátu nebo kódového polynukleotidu pro ligand Notch nebo pro fragment nebo derivát pro výrobu léčiva pro použití k ovlivnění vázané suprese.
  6. 6. Použití ligandu Notch nebo jeho fragmentu nebo derivátu nebo kódového polynukleotidu pro ligand Notch nebo jeho fragment nebo derivát pro výrobu léčiva pro použití k ovlivnění infekční tolerance.
  7. 7. Způsob tvorby T-buněk, tolerantních vůči alergenu nebo antigenu in vitro, vyznačující se tím, že se T-buňky v přítomnosti uvedeného alergenu nebo antigenu in vitro inkubují/vystaví působení buněk, prezentujících antigen a exprimujících nebo nadměrně exprimujících ligand Notch.
  8. 8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že exprese nebo nadměrná exprese ligandu Notch je způsobena antigen prezentujícími buňkami, které jsou transfekovány virem, schopným exprimovat ligand Notch.
  9. 9. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že exprese nebo nadměrná exprese ligandu Notch je způsobena antigen prezentujícími buňkami, které jsou stimulovány prostředkem, zesilujícím expresi genu exprimujícího ligand Notch.
  10. 10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že se prostředek volí ze skupiny, zahrnující Noggin, Chordin, Follistatin, Xnr3, fibroblastové růstové faktory nebo jejich deriváty nebo fragmenty.
  11. 11. Způsob podle nároků 7, 8, 9 nebo 10, v y z n a č u j í c í se tím , že se antigen prezentující buňky volí ze skupiny zahrnující dendritické buňky, L-buňky, hybridomy, lymfomy, makrofágy, B-buňky nebo syntetické antigeny prezentující buňky, jako lipidové membrány.
  12. 12. Způsob podle některého z nároků 7 až 11,vyznačuj ící se tím, že se ligand Notch volí ze skupiny, zahrnující Serrate, Delta nebo jejich fragmenty nebo deriváty.
    -16CZ 295997 B6
  13. 13. Molekula pro použití podle nároku 1, obsahují část ligandu Notch, operabilně spojenou s částí T-buněčného alergenu nebo antigenu tak, že při exposici T-buňkách jsou obě části schopny se navázat na svá příslušná místa.
  14. 14. Molekula podle nároku 13, v níž se část ligandu Notch volí ze skupiny zahrnující Serrate, Delta nebo jejich fragmenty nebo deriváty.
  15. 15. Použití složeného proteinu obsahujícího segment extracelulámí oblasti ligandu Notch a segment imunoglobulinu Fc pro výrobu léčiva pro použití při imunoterapii.
  16. 16. Použití podle nároku 15, při němž je extracelulámí oblast ligandu Notch odvozena od Notch, Delta nebo Serrate.
  17. 17. Použití podle nároku 15 nebo 16, při němž se segment Fc volí ze skupiny IgGFc nebo IgMFc.
    10 výkresů
CZ19991639A 1996-11-07 1997-11-06 Farmaceutický prostředek s obsahem ligandu Notch a způsob tvorby T-buněk CZ295997B6 (cs)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9623236.8A GB9623236D0 (en) 1996-11-07 1996-11-07 Notch
GBGB9715674.9A GB9715674D0 (en) 1997-07-24 1997-07-24 Notch
GBGB9719350.2A GB9719350D0 (en) 1997-09-11 1997-09-11 Notch

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ163999A3 CZ163999A3 (cs) 1999-10-13
CZ295997B6 true CZ295997B6 (cs) 2005-12-14

Family

ID=27268574

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19991639A CZ295997B6 (cs) 1996-11-07 1997-11-06 Farmaceutický prostředek s obsahem ligandu Notch a způsob tvorby T-buněk

Country Status (20)

Country Link
EP (2) EP0942998B1 (cs)
JP (1) JP4339406B2 (cs)
KR (1) KR100393234B1 (cs)
CN (2) CN1160371C (cs)
AT (1) ATE299184T1 (cs)
AU (1) AU736361B2 (cs)
BG (1) BG103444A (cs)
CA (1) CA2271248C (cs)
CZ (1) CZ295997B6 (cs)
DE (1) DE69733695T2 (cs)
ES (1) ES2243986T3 (cs)
GB (2) GB2353094B (cs)
GE (1) GEP20043390B (cs)
IL (1) IL129531A0 (cs)
NO (1) NO992196L (cs)
NZ (1) NZ335549A (cs)
PL (1) PL333302A1 (cs)
RO (1) RO120850B1 (cs)
TR (1) TR199901000T2 (cs)
WO (1) WO1998020142A1 (cs)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2226087C (en) 1995-06-28 2012-01-31 Imperial Cancer Research Technology, Ltd. Nucleotide and protein sequences of vertebrate delta genes and methods based thereon
US5780300A (en) * 1995-09-29 1998-07-14 Yale University Manipulation of non-terminally differentiated cells using the notch pathway
GB9824045D0 (en) * 1998-11-03 1998-12-30 European Molecular Biology Lab Embl Regulator protein
GB9827604D0 (en) * 1998-12-15 1999-02-10 Lorantis Ltd Methods of immunosuppression
GB9927328D0 (en) * 1999-11-18 2000-01-12 Lorantis Ltd Immunotherapy
GB0019242D0 (en) * 2000-08-04 2000-09-27 Lorantis Ltd Assay
US6689744B2 (en) 2000-09-22 2004-02-10 Genentech, Inc. Notch receptor agonists and uses
JP4365583B2 (ja) * 2000-09-22 2009-11-18 ジェネンテック・インコーポレーテッド ノッチレセプターアゴニスト及び用途
JP2004537314A (ja) * 2001-07-25 2004-12-16 ロランティス リミテッド ノッチシグナル伝達モジュレーターを検出する方法
GB0118155D0 (en) 2001-07-25 2001-09-19 Lorantis Ltd Superantigen
GB0123379D0 (en) * 2001-09-28 2001-11-21 Lorantis Ltd Modulators
AU2003207064B2 (en) * 2002-02-06 2006-07-13 Sanbio, Inc. Method of differentiating/inducing bone marrow interstitial cells into nerve cells and skeleton muscle cells by transferring Notch gene
WO2003087159A2 (en) * 2002-04-05 2003-10-23 Lorantis Limited Modulators of the notch signalling pathway and uses thereof in medical treatment
EP1525221A1 (en) * 2002-08-03 2005-04-27 Lorantis Limited Conjugate of notch signalling pathway modulators and their use in medical treatment
GB0218879D0 (en) * 2002-08-14 2002-09-25 Lorantis Ltd Medical treatment
GB0220658D0 (en) * 2002-09-05 2002-10-16 Lorantis Ltd Immunotherapy
WO2004032969A1 (en) * 2002-10-09 2004-04-22 Lorantis Limited Modulation of immune function
WO2004060262A2 (en) * 2003-01-07 2004-07-22 Lorantis Limited Modulators of notch signalling for use in immunotherpapy
GB0300428D0 (en) * 2003-01-09 2003-02-05 Lorantis Ltd Medical treatment
WO2004064863A1 (en) * 2003-01-23 2004-08-05 Lorantis Limited Treatment of autoimmune diseases using an activator for the notch signaling pathway
GB0303663D0 (en) * 2003-02-18 2003-03-19 Lorantis Ltd Assays and medical treatments
WO2004083372A2 (en) * 2003-03-21 2004-09-30 Lorantis Limited Modulators of the notch signaling pathway immobilized on particles for modifying immune responses
ATE474593T1 (de) * 2003-03-21 2010-08-15 Celldex Therapeutics Ltd Behandlung von allergischen erkrankungen unter verwendung eines modulators des notch signaling pathway
GB0307472D0 (en) * 2003-04-01 2003-05-07 Lorantis Ltd Medical treatment
US7919092B2 (en) 2006-06-13 2011-04-05 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Antibodies to notch receptors
JP5618544B2 (ja) 2007-01-24 2014-11-05 オンコメッドファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 癌の診断および処置のための組成物および方法
ES2535614T3 (es) 2008-07-08 2015-05-13 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Agentes de unión a Notch y antagonistas y métodos de uso de los mismos
EP2326345B1 (en) * 2008-08-22 2015-01-14 The Trustees of Columbia University in the City of New York Human notch3 based fusion proteins as decoy inhibitors of notch3 signaling
US8709710B2 (en) 2009-02-16 2014-04-29 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Methods of modulating interleukin-22 and immune response by notch regulators
PE20121647A1 (es) 2009-08-29 2012-12-31 Abbvie Inc Proteinas terapeuticas de union a dll4
RU2605928C2 (ru) 2010-03-02 2016-12-27 Эббви Инк. Терапевтические dll4-связывающие белки
US8785190B2 (en) * 2011-04-06 2014-07-22 Sanbio, Inc. Methods and compositions for modulating peripheral immune function
CN104105702B (zh) * 2011-11-16 2016-11-23 昂考梅德药品有限公司 人notch受体突变及其应用
WO2013167620A1 (en) * 2012-05-10 2013-11-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Immunomodulatory methods using notch agonists
KR101573650B1 (ko) * 2015-02-04 2015-12-01 성균관대학교산학협력단 Hcmv 바이러스 복제 억제용 조성물
CN112930393A (zh) * 2018-08-28 2021-06-08 福瑞德哈金森癌症研究中心 结合诱导的Notch信号传导的过继T细胞疗法的方法和组合物

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL101728A (en) * 1991-05-03 2007-08-19 Univ Yale Human Abandonment and Delta, Restrictive Areas of Effect in Tophoric Proteins, and Methods Based on Them
US5869282A (en) * 1991-12-11 1999-02-09 Imperial Cancer Research Technology, Ltd. Nucleotide and protein sequences of the serrate gene and methods based thereon
US5786158A (en) * 1992-04-30 1998-07-28 Yale University Therapeutic and diagnostic methods and compositions based on notch proteins and nucleic acids
ATE203274T1 (de) * 1994-02-01 2001-08-15 Nasa Fusionierte proteine die antikörper-teile und nicht-antikörper-teile enthalten
US5780300A (en) * 1995-09-29 1998-07-14 Yale University Manipulation of non-terminally differentiated cells using the notch pathway
WO1997019172A1 (fr) * 1995-11-17 1997-05-29 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Polypeptide suppresseur et de differenciation

Also Published As

Publication number Publication date
GB9910276D0 (en) 1999-06-30
CN1242802A (zh) 2000-01-26
ATE299184T1 (de) 2005-07-15
EP0942998A1 (en) 1999-09-22
GB2335194B (en) 2001-04-25
AU4876597A (en) 1998-05-29
AU736361B2 (en) 2001-07-26
TR199901000T2 (xx) 1999-07-21
EP1616958A2 (en) 2006-01-18
KR100393234B1 (ko) 2003-07-31
KR20000053146A (ko) 2000-08-25
WO1998020142A1 (en) 1998-05-14
BG103444A (en) 2000-06-30
IL129531A0 (en) 2000-02-29
DE69733695T2 (de) 2006-05-18
JP2001504331A (ja) 2001-04-03
CA2271248A1 (en) 1998-05-14
GB2353094B (en) 2001-06-13
GB2335194A (en) 1999-09-15
GB0023691D0 (en) 2000-11-08
NO992196D0 (no) 1999-05-05
CN1160371C (zh) 2004-08-04
PL333302A1 (en) 1999-11-22
NO992196L (no) 1999-07-05
GEP20043390B (en) 2003-11-10
JP4339406B2 (ja) 2009-10-07
GB2353094A (en) 2001-02-14
NZ335549A (en) 2001-07-27
ES2243986T3 (es) 2005-12-01
RO120850B1 (ro) 2006-08-30
EP0942998B1 (en) 2005-07-06
CA2271248C (en) 2009-08-11
EP1616958A3 (en) 2006-02-08
CZ163999A3 (cs) 1999-10-13
DE69733695D1 (de) 2005-08-11
CN1524583A (zh) 2004-09-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ295997B6 (cs) Farmaceutický prostředek s obsahem ligandu Notch a způsob tvorby T-buněk
US10251912B2 (en) MHC class II restricted T cell epitopes from the cancer antigen, NY ESO-1
JP4222629B2 (ja) ニュールツリンおよび関連成長因子
JP5767733B2 (ja) ブラキュリポリペプチドおよび使用方法
HUE027179T2 (en) Angiogenesis and vasculogenesis modulator for Rspond
CA2220036A1 (en) Human neuropeptide receptor
JPH11502405A (ja) ｐ１５及びチロシナーゼ黒色腫抗原並びに診断及び治療方法におけるそれらの使用
CA2919477A1 (en) Compositions and methods for modulating thermogenesis using pth-related and egf-related molecules
KR20200116086A (ko) 종양 치료를 개선하기 위한 종양 미세환경에서 대사 조절인자의 발현
CA2621992A1 (en) Manipulation of regulatory t cell and dc function by targeting neuritin gene using antibodies, agonists and antagonists
US20060034857A1 (en) Notch
US20060286117A1 (en) Neuronally expressed stem cell factor modulates angiogenesis and neural stem cell migration to areas of brain injury
EP1641491B1 (en) Increased t-cell tumor infiltration by mutant light
RU2197262C2 (ru) Лиганд notch
US8481486B2 (en) Methods of treating neurological diseases by regulating migration of neuroblasts in the adult nervous system with tenascin-R
AU773479B2 (en) Notch
JP4989850B2 (ja) ＴＧＦ−βの遮断により腫瘍再発を防ぐ方法
MXPA99004282A (es) Notch
JP2003509472A (ja) Ｍ３ポリペプチドの治療的使用
JP4166254B2 (ja) ボールカインポリペプチド及び核酸
WO1998029547A1 (en) Modulators of radial glia-astrocyte differentiation and transformation, and diagnostic and therapeutic uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20061106