CN112770772A - 新型富亮氨酸重复神经元蛋白1(lrrn1)抗体和其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了单克隆抗体或其抗原结合部分，所述单克隆抗体或其抗原结合部分与胎‑胚胎去分化抗原，如在分化成胚状体之前在人胚胎干细胞的表面上大量表达的表面糖蛋白富亮氨酸重复神经元蛋白1(LRRN1)结合。本文还公开了新型LRRN1抗体的用途。

Description

新型富亮氨酸重复神经元蛋白1(LRRN1)抗体和其用途

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年5月16日提交的美国专利申请第62/672,363号的权益，所述美国专利申请的公开内容通过全文引用的方式并入本文。

技术领域

本发明涉及针对富亮氨酸重复神经元蛋白1(LRRN1)的抗体，包含对LRRN1具有特异性的特异性部分或变体，以及编码此类抗体的核酸，以及其使用方法，包含包括抗体的治疗调配物和药物组合物。进一步地，提供了施用本发明的抗体的方法，向受试者施用本发明的抗体有效抑制癌细胞或干细胞。

背景技术

对包含人胚胎干细胞(hESC)和癌症干细胞在内的干细胞的研究表明，干细胞表面标志物对于监测分化状态或理解干细胞的功能属性至关重要。使用糖蛋白质组学，发现富亮氨酸重复神经元蛋白1(LRRN1)是人胚胎干细胞(ESC)的新型表面标志物，所述新型表面标志物在分化成胚状体(EB)时消失。

LRRN1还可以在许多恶性肿瘤细胞中表达，包含卵巢癌、肝癌、胰腺癌、肺癌、结直肠癌和乳腺癌，参见https://www.proteinatlas.org/ENSG00000175928-LRRN1/ pathology。

由于对有效治疗和/或预防癌症的需求仍未得到满足，故这些发现为针对如LRRN1等干细胞表面糖蛋白的抗体的研发提供了基本原理。本发明提供了针对干细胞表面糖蛋白的抗体，以满足这些和其它需求。

发明内容

本发明公开了一种抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包括：(a)重链可变结构域，所述重链可变结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列约90％到100％相同；以及(b)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:2的氨基酸序列约90到100％相同。

本发明还公开了一种抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包括：(a)第一重链互补决定区(HCDR1)，所述HCDR1的氨基酸序列与SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:15约90％到100％相同；(b)第二重链互补决定区(HCDR2)，所述HCDR2的氨基酸序列与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:16约90％到100％相同；(c)第三重链互补决定区(HCDR3)，所述HCDR3的氨基酸序列与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:17约90％到100％相同；(d)第一轻链互补决定区(LCDR1)，所述LCDR1的氨基酸序列与SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:18约90％到100％相同；(e)第二轻链互补决定区(LCDR2)，所述LCDR2的氨基酸序列与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:19约90％到100％相同；以及(f)第三轻链互补决定区(LCDR3)，所述LCDR3的氨基酸序列与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:20约90％到100％相同。

还提供了缀合物，所述缀合物包括本文所描述的抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分可操作地附着到治疗剂或诊断剂。

还提供了用于通过向有需要的受试者施用本文所描述的抗体或其抗原结合部分来抑制癌细胞的方法。

本专利中使用的术语“发明(invention)”、“本发明(the invention)”、“本发明(this invention)”和“本发明(the present invention)”旨在广义地指代本专利的主题和下面的专利权利要求全部。含有这些术语的陈述应被理解为不限制本文所述的主题或不限制下面的专利权利要求的含义或范围。本专利所覆盖的本发明的实施例由下面的权利要求而非本概述来限定。本概述是本发明的各个方面的高级概括并且介绍了在下面的具体实施方式部分中进一步描述的概念中的一些概念。本概述不旨在标识所要求保护的主题的关键或必要特征，也不旨在单独使用以确定所要求保护的主题的范围。应当通过参考整个说明书的适当部分、任何或所有附图和每个权利要求来理解本主题。

附图说明

本专利含有至少一张彩色附图。在请求并支付必要的费用后，官方将会提供带有彩色附图的本专利的副本。

下面参考附图对本发明的说明性实施例进行详细描述。

图1是示出了通过AKT介导的LRRN1对干性维持和中内胚层分化的作用的图形摘要。

图2A和图2B是展示了Alexa

488标记的LRRN1单克隆抗体在乳腺癌细胞中的内化的荧光显微镜术图像。

图3是展示了LRRN1 E36单克隆抗体在有或没有PBMC温育的情况下相比于对照组以及有或没有PBMC温育的IgG的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的条形图。

具体实施方式

如本文所使用的，冠词“一个/一种(a/an)”是指冠词的一个或多于一个(即，至少一个)语法对象。

术语“受试者”可以指怀疑患有癌症的脊椎动物。受试者包含温血动物，如哺乳动物，如灵长类动物，并且更优选地，人。非人灵长类动物也是受试者。术语受试者包含如猫、狗等家养动物、家畜(例如，牛、马、猪、绵羊、山羊等)和实验动物(例如，小鼠、兔、大鼠、沙鼠、豚鼠等)。如本文所使用的“有效量”是指足以减轻癌症的症状和体征，如体重减轻、疼痛和可触知的肿块的抗体或缀合物的剂量，所述可触知的肿块是在临床上作为可触知的肿块或在放射学上通过各种成像手段可检测的。术语“有效量”和“治疗有效量”可互换使用。

本文中的所有数字均可以被理解为由“约”修饰。如本文所使用的，术语“约”意指涵盖±10％的变化。

抗体

如本文所使用的术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即，含有免疫特异性地结合糖蛋白的抗原结合部分的分子。这样，术语抗体不仅涵盖完整的抗体分子，而且还涵盖抗体片段以及抗体和抗体片段的变体(包含衍生物)。在天然抗体中，两条重链通过二硫键相互连接，并且每条重链通过二硫键与轻链连接。有两种类型的轻链，λ(l)和κ(k)。有五个主要的重链类别(或同种型)决定抗体分子的功能活性：IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。每条链含有不同的序列结构域。轻链包含两个结构域，可变结构域(VL)和恒定结构域(CL)。重链包含四个结构域，可变结构域(VH)和三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3，统称为CH)。轻链(VL)和重链(VH)两者的可变区决定了对干细胞表面糖蛋白的结合识别和特异性。抗体的轻链和重链各自具有三个互补决定区(CDR)，分别指定为LCDR1、LCDR2、LCDR3和HCDR1、HCDR2、HCDR3。因此，抗原结合位点包含六个CDR，包括来自重链可变区和轻链可变区中的每个可变区的CDR组。框架区(FR)是指插入在CDR之间的氨基酸序列。

关于本发明的指定氨基酸序列的一致性或同源性在本文中被定义为，在比对序列并在必要时引入缺口以实现最大同源性或一致性百分比之后并且在不将任何保守取代视为序列同源性或一致性的一部分的情况下，候选序列中的与指定残基相同的氨基酸残基的百分比。指定序列的N端、C端或内部延伸、缺失或插入均不应被解释为影响同源性或一致性。用于比较的序列比对方法在本领域中是众所周知的。虽然可以使用常规方法手动完成此类比对，但以下中描述了各种程序和比对算法：Smith和Waterman,《应用数学进展(Adv.Appl.Math.)》2:482,1981；Needleman和Wunsch,《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》48:443,1970；Pearson和Lipman,《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)》85:2444,1988；Higgins和Sharp,《基因(Gene)》73:237,1988；Higgins和Sharp,CABIOS 5:151,1989；Corpet等人,《核酸研究(Nucleic Acids Research)》16:10881,1988；以及Pearson和Lipman,《美国国家科学院院刊》85:2444,1988。Altschul等人,《自然·遗传学(Nature Genet.)》6:119,1994，提出了对序列比对方法和同源性/一致性计算的详细考虑。NCBI基本局部比对搜索工具(BLAST(Altschul等人,《分子生物学杂志》215:403,1990))可从若干个来源获得，包含国家生物技术信息中心(National Center for BiotechnologyInformation)(NCBI，马里兰州贝塞斯达(Bethesda,Md.))和在网上，以用于与序列分析程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx结合使用。在NCBI网站上可获得如何使用此程序测定序列一致性或同源性的说明。

本发明的抗体还包含从本发明的抗体产生的嵌合化或人源化单克隆抗体。在一个实施例中，人源化抗体是来自非人物种的抗体分子，所述抗体分子具有来自非人物种的一个、两个或所有CDR以及来自人免疫球蛋白分子的一个、两个或所有三个框架区。嵌合抗体是其中不同部分衍生自不同动物物种的分子。例如，抗体可以含有衍生自鼠类mAb的可变区以及人免疫球蛋白恒定区。嵌合抗体可以通过重组DNA技术产生。Morrison等人,《美国国家科学院院刊》,81:6851-6855(1984)。例如，用限制性酶来消化编码鼠类(或其它物种)抗体分子的基因以除去编码鼠类Fc的区域，并且然后将编码人Fc恒定区的基因的等价部分取代到重组DNA分子中。嵌合抗体也可以通过重组DNA技术产生，其中编码鼠类V区的DNA可以与编码人恒定区的DNA连接。Better等人,《科学(Science)》,1988,240:1041-1043。Liu等人,《美国国家科学院院刊》,198784:3439-3443。Liu等人,《免疫学杂志(J.Immunol.)》,1987,139:3521-3526。Sun等人,《美国国家科学院院刊》,1987,84:214-218。Nishimura等人,《癌症研究(Canc.Res.)》,1987,47:999-1005。Wood等人,《自然(Nature)》,1985,314:446-449。Shaw等人,《美国国立癌症研究所杂志(J.Natl.Cancer Inst.)》,1988,80:1553-1559。国际专利公开号WO 1987002671和WO 86/01533。欧洲专利申请号184,187；171,496；125,023；以及173,494。美国专利号4,816,567。

因此，本发明的LRRN1抗体包含与非鼠源，优选地人源的重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、框架区或其任何部分之组合，这可以并入本发明的抗体中。

本发明的抗体能够在体外、原位和/或在体内调节、减少、拮抗、减轻、缓解、阻断、抑制、消除和/或干扰至少一种LRRN1表达性细胞(例如，表达LRRN1的癌细胞或干细胞)活性，如干性或分化。

术语“抗体”进一步旨在涵盖抗体、消化片段、其指定部分和变体，包含抗体模拟物或包括模拟抗癌抗体或其指定片段或部分的结构和/或功能的抗体部分，包含单链抗体和其片段，每个单链抗体和其片段含有衍生自本发明的抗癌抗体的至少一个CDR。功能片段包含与LRRN1结合的抗原结合部分。例如，本发明涵盖能够与LRRN1或其各部分结合的抗体片段，包含但不限于Fab(例如，通过木瓜蛋白酶消化)、Fab'(例如，通过胃蛋白酶消化和部分还原)和F(ab')₂(例如，通过胃蛋白酶消化)、facb(例如，通过纤溶酶消化)、pFc'(例如，通过胃蛋白酶或纤溶酶消化)、Fd(例如，通过胃蛋白酶消化、部分还原和重聚)、Fv或scFv(例如，通过分子生物学技术)片段、分离的CDR、双抗体、三抗体、四抗体、线性抗体、单链抗体分子以及由抗体片段形成的多特异性抗体。本发明还涵盖通过使用重组方法或合成连接子连接抗体片段而产生的单链抗体。Bird等人,《科学》,1988,242:423-426。Huston等人,《美国国家科学院院刊》,1988,85:5879-5883。

抗体的抗原结合部分可以包含抗体的与干细胞表面糖蛋白(例如，LRRN1)特异性结合的部分。

根据本发明的一方面，通过以下方法之一来确定VH和VL的CDR和框架残基的位置：E A Kabat等人,(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins ofImmunological Interest)》,第五版,美国卫生与公共事业部(U.S.Department of Healthand Human Services),NIH公开号91-3242；MB Swindells等人,“abYsis：整合抗体序列和结构—管理、分析和预测(abYsis:Integrated Antibody Sequence and Structure-Management,Analysis,and Prediction)”《分子生物学杂志》2017年2月3日；429(3):356-364.doi:10.1016/j.jmb.2016.08.019；J Ye等人,“IgBLAST：免疫球蛋白可变结构域序列分析工具(IgBLAST:an immunoglobulin variable domain sequence analysis tool)”《核酸研究》203；41(Web服务器问题(Web server issue)):W34-40.doi:10.1093/nar/gkt38；V Kunik等人,“抗体的结构共识定义了抗原结合位点(Structural Consensusamong Antibodies Defines the Antigen Binding Site)”《PLoS计算生物学(PLoSComput Biol)》2012年；8(2):e1002388.doi:10.1371/journal.pcbi.1002388；或V Kunik等人,“Paratome：用于基于序列或结构系统地鉴别抗体中的抗原结合区的在线工具(Paratome:An online tool for systematic identification of antigen bindingregions in antibodies based on sequence or structure)”《核酸研究》2012年7月；40(Web服务器问题):W521-4.doi:10.1093/nar/gks480.电子版2012年6月6日。

根据本发明的另一方面，抗体或其抗原结合部分可以具有以下结构：

前导序列-FW1-CDR1-FW2-CDR2-FW3-CDR3-

本发明还涵盖抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包括一个或两个如本文所公开的可变区，其中其它区域被来自至少一种不同物种的序列置换，所述至少一种不同的物种包含但不限于人、兔、绵羊、狗、猫、奶牛、马、山羊、猪、猴、猿、大猩猩、黑猩猩、鸭、鹅、鸡、两栖动物、爬行动物和其它动物。

本发明的抗体或其抗原结合部分可以是单特异性、双特异性或多特异性的。多特异性或双特异性抗体或其片段可以对一个靶干细胞表面糖蛋白(例如，LRRN1)的不同表位具有特异性。在一个实施例中，多特异性抗体或其抗原结合部分包括至少两个不同的可变结构域，其中每个可变结构域能够与单独的表位或同一干细胞表面糖蛋白上的不同表位特异性结合。参见Tutt等人,1991,《免疫学杂志》147:60-69以及Kufer等人,2004,《生物技术趋势(Trends Biotechnol.)》22:238-244。

本发明涵盖所有抗体同种型，包含IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA(IgA1、IgA2)、IgD或IgE(本发明涵盖所有类别和子类别)。抗体或其抗原结合部分可以是哺乳动物(例如，小鼠、人)抗体或其抗原结合部分。抗体的轻链可以是κ或λ类型。

本发明提供了如单克隆抗体等抗体或其抗原结合部分，所述抗体或其抗原结合部分包括与干细胞表面糖蛋白(如LRRN1)或其片段结合的可变区。

LRRN1敲低降低了hESC的自我更新能力并使分化朝向内胚层/中胚层谱系偏斜。从机制上讲，LRRN1沉默会降低AKT磷酸化、使多能性因子OCT4、SOX2和NANOG从细胞核易位到细胞质，这会导致降解。因此，LRRN1对于维持hESC自我更新和多能性至关重要。

在本发明的一方面，抗体或其抗原结合部分包括重链可变区，其中所述重链可变区包括三个CDR，即，HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中HCDR1的氨基酸序列与SEQ ID NO:3、9或15中所示的氨基酸序列约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同，HCDR2的氨基酸序列与SEQ ID NO:4、10或16中所示的氨基酸序列约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同，HCDR3的氨基酸序列与SEQ ID NO:5、11或17中所示的氨基酸序列约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同。

在本发明的另一方面，抗体或其抗原结合部分包括轻链可变区，其中所述轻链可变区包括三个互补决定区(CDR)，即，LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中LCDR1的氨基酸序列与SEQID NO:6、12或18中所示的氨基酸序列约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同，LCDR2的氨基酸序列与SEQ ID NO:7、13或19中所示的氨基酸序列约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同，LCDR3的氨基酸序列与SEQ ID NO:8、14或20中所示的氨基酸序列约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同。

在一个实施例中，抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)，所述VH的氨基酸序列与SEQ ID NO:1约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同，和/或轻链可变区(VL)包括轻链，所述轻链的氨基酸序列与SEQ ID NO:2约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％同源或相同。

表1示出了本发明的抗体的一个实施例的重链可变区、轻链可变区和CDR的氨基酸序列。

表1.本发明的LRRN1抗体的氨基酸序列

1.序列是根据以下确定的：Swindells MB、Porter CT、Couch M等人,(2017)abYsis：整合抗体序列和结构—管理、分析和预测《分子生物学杂志》2017年2月3日；429(3):356-364.doi:10.1016/j.jmb.2016.08.019。

2.序列是根据以下确定的：Ye J、Ma N、Madden TL和Ostell JM(2013).IgBLAST：免疫球蛋白可变结构域序列分析工具《核酸研究》41(Web服务器问题):W34-40.doi:10.1093/nar/gkt382

3.序列是根据以下确定的：Kunik V、Peters B、Ofran Y(2012).抗体的结构共识定义了抗原结合位点《PLoS计算生物学》8(2):e1002388.doi:10.1371/journal.pcbi.1002388。

4.序列是根据以下确定的：Kunik V、Ashkenazi S、Ofran Y(2012).Paratome：用于基于序列或结构系统地鉴别抗体中的抗原结合区的在线工具《核酸研究》2012年7月；40(Web服务器问题):W521-4.doi:10.1093/nar/gks480.电子版2012年6月6日

在一个实施例中，抗体或其抗原结合部分与包含但不限于LRRN1的干细胞表面糖蛋白结合。

在一个实施例中，抗体或其抗原结合部分具有体外和体内治疗、预防和/或诊断用途。例如，可以将这些抗体例如在体外或离体地施用于培养物中的细胞或例如在体内施用于受试者，以治疗、抑制、预防复发和/或诊断疾病，如癌症。

用于抑制癌细胞或人干细胞的方法

本发明的抗体或缀合物能够在体外、原位和/或在体内调节、减少、拮抗、减轻、缓解、阻断、抑制、消除和/或干扰至少一种干细胞表面糖蛋白或其片段。

本发明还提供了用于在体外、离体或在体内抑制癌细胞或干细胞的生长的方法，其中癌细胞或干细胞与有效量的如本文所描述的抗体或缀合物接触。癌细胞和干细胞表达干细胞表面糖蛋白，如LRRN1。LRRN1表达性癌症的非限制性实例包含胶质瘤、淋巴瘤、肺癌、胰腺癌、类癌、结直肠癌、头颈癌、胃癌、肾癌、尿路上皮癌、睾丸癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、皮肤癌或黑素瘤。

可以使用本领域众所周知的方法来确定本发明抗体或缀合物的体外功效。MTT测定基于代谢活性细胞摄取MTT四唑盐的原理，在所述代谢活性细胞中，MTT被代谢成可以用光谱法读取的蓝色的甲瓒产物。《免疫学方法杂志(J.of Immunological Methods)》65:5563,1983。本发明抗体或其抗原结合部分的细胞毒性可以通过克隆形成测定来研究。可以通过ELISA执行用于结合LRRN1的功能测定。可以通过标准碘化丙啶(PI)染色和流式细胞术来研究抗体或其抗原结合部分的细胞周期阻断。侵袭抑制可以通过博伊登室(Boydenchamber)研究。在此测定中，将重组基底膜基质胶的层涂覆在趋化性滤器上并充当细胞在博伊登室中迁移的屏障。只有具有侵袭能力的细胞才可以穿过基质胶屏障。其它测定包含但不限于细胞活力测定、凋亡测定和形态学测定。也可以使用鼠类模型在体内进行测定。参见例如，B.Teicher,用于功效确定的肿瘤模型(Tumor Models for EfficacyDetermination)《分子癌症治疗学(Mol Cancer Ther)》2006；5:2435-2443。

缀合物

在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分可以与另一个功能分子，例如诊断剂或治疗剂连接或共表达，以形成缀合物。例如，抗体或其抗原结合部分可以可操作地附着到(例如，通过化学偶联、遗传融合、重组表达、可裂解间隔子或连接子、共价或非共价缔合或其它方式)一个或多个其它分子实体。

在一个实施例中，治疗剂可以增强并且甚至协同本发明的抗体的作用。治疗剂的非限制性实例包含化学治疗剂、抗血管生成剂、凋亡诱导剂和抗微管蛋白药物或第二单克隆抗体或多克隆抗体。

示例性化学治疗剂包含：类固醇；细胞因子；抗代谢物，如阿糖胞苷、氟尿嘧啶、甲氨蝶呤或氨基喋呤；蒽环类药物；丝裂霉素C；长春花生物碱；抗生素；地美可辛；依托泊苷；光神霉素；以及抗肿瘤烷化剂，如苯丁酸氮芥或美法仑。示例性抗血管生成剂包含血管抑素(angiostatin)、内皮抑素、血管抑制素(vasculostatin)、血管能抑素和乳腺丝抑蛋白。示例性抗微管蛋白药物包含秋水仙碱、紫杉醇、长春花碱、长春新碱、长春地辛(vindesine)和康普瑞汀(例如，康普瑞汀A、B和/或D)。示例性抗微管蛋白药物是秋水仙碱；紫杉烷，如紫杉醇；长春花生物碱，如长春花碱、长春新碱和长春地辛；以及康普瑞汀。

据报道，以下治疗剂与抗体缀合：阿霉素、道诺霉素、甲氨蝶呤和长春花碱新制癌菌素、大分子霉素、三亚胺醌(trenimon)和α-鹅膏蕈碱(参见美国专利第5,660,827号、第5,855,866号和第5,965,132号)。

本发明抗体和缀合物的施用途径包含但不限于静脉内、肌肉内、鼻内、皮下(subcutaneous)、口服、局部、皮内、透皮、真皮下(subdermal)、肠胃外、直肠、脊柱或表皮施用。

出于预防或治愈目的等，抗体或缀合物可以在适合于受试者的年龄、体重和病状、所使用的特定组合物以及施用途径的时间表和时间段内以单剂量治疗或以多剂量治疗施用。例如，在一个实施例中，根据本发明的抗体或缀合物按每月一次、每月两次、每月三次、每隔一周一次(qow)、每周一次(qw)、每周两次(biw)、每周三次(tiw)、每周四次、每周五次、每周六次、每隔一天一次(qod)、每天一次(qd)、一天两次(qid)或一天三次(tid)施用。

为了易于施用和剂量均匀，可以使用口服或肠胃外剂量单位形式。如本文所使用的，剂量单位形式是指适合作为单一剂量用于待治疗受试者的物理上离散的单位；每个单位含有经计算以产生期望的治疗效果的预定量的抗体。

从细胞培养测定和动物研究获得的数据可以用于配制用于在人类中使用的一系列剂量。在一个实施例中，抗体或缀合物的剂量在包含ED₅₀在内的有很小毒性或没有毒性的循环浓度范围内。剂量可以取决于所采用的剂型和所利用的施用途径而在此范围内变化。在另一个实施例中，治疗有效剂量可以最初根据细胞培养测定估计。在动物模型中可以将剂量配制为实现包含如在细胞培养中测定的IC₅₀(即，测试化合物的实现症状的半数最大抑制的浓度)在内的循环血浆浓度范围。Sonderstrup,斯普林格出版社(Springer),《免疫病理学研讨会(Sem.Immunopathol.)》25:35-45,2003。Nikula等人,《吸入毒理学(Inhal.Toxicol.)》4(12):123-53,2000。

抗体或缀合物的有效量取决于受试者和待治疗病状。在一个实施例中，本发明抗体或其抗原结合部分以范围为以下的剂量施用：约0.01mg到约10g、约0.1mg到约9g、约1mg到约8g、约2mg到约7g、约3mg到约6g、约10mg到约5g、约20mg到约1g、约50mg到约800mg、约100mg到约500mg、约0.01μg到约10g、约0.05μg到约1.5mg、约10μg到约1mg蛋白质、约30μg到约500μg、约40μg到约300μg、约0.1μg到约200μg、约0.1μg到约5μg、约5μg到约10μg、约10μg到约25μg、约25μg到约50μg、约50μg到约100μg、约100μg到约500μg、约500μg到约1mg、约1mg到约2mg。任何特定受试者的具体剂量水平取决于各种各样的因素，包含特异性肽的活性、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、施用时间、施用途径和排泄率、药物组合以及经受疗法的特定疾病的严重性并且可以由本领域普通技术人员确定，而无需过多的实验。

以下用于执行本发明的具体方面的实例仅出于说明性目的提供，而不旨在以任何方式限制本发明的范围。

实例

材料与方法

细胞培养和试剂

从胚胎干细胞国际公司(ES Cell International)(ESI，新加坡)和WiCell研究所(WiCell Research Institute)(美国)获得hESC细胞系HES-5和H9，并在基质胶涂覆的板中在辐射小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)层上进行培养。hESC生长培养基由80％DMEM/F12、20％敲除血清替代品(美国英杰公司(Invitrogen,USA))、1mM L-谷氨酰胺、0.1mMβ-巯基乙醇和4ng/mL FGF-2(英杰公司)组成。在使用前，以1.2×10⁵个细胞/mL的密度，将hESC生长培养基在丝裂霉素C(美国西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich,USA))灭活的MEF上调节24小时。

为了诱导hESC到EB的分化，用1mg/mL分散酶处理hESC大约30分钟，直到细胞完全从板脱离。然后，将细胞悬浮液转移到锥形管中。在细胞通过重力沉降后，除去培养基，并用hESC生长培养基洗涤细胞两次。为了诱导EB长出，将细胞转移到含有无FGF-2的hESC生长培养基的超低附着细胞培养烧瓶(康宁公司(Corning))中大约48小时。然后，使样品在明胶涂覆的组织培养皿或具有培养基的烧瓶中另外生长2周，所述培养基由80％DMEM/F12、20％FBS、1mM L-谷氨酰胺、0.1mMβ-巯基乙醇和0.5％青霉素和链霉素组成。培养基每隔一天进行更换。

质粒产生和慢病毒转导

为了质粒构建，将人LRRN1的全长编码序列(LRRN1，登录号NM_020873.5，SEQ IDNO:21)用特异性正向引物(GATCGGATCCATGGCTAGGATGAGCTTTGTTATAGCA，SEQ ID NO:22)和反向引物(GATCCTCGAGTTACCACATGTAATAGCTTCTGGATGTGT，SEQ ID NO:23)克隆到pLKOAS3W.puro载体(国家型RNAi核心设施(National RNAi Core Facility))中。通过添加8μg/mL聚凝胺(西格玛奥德里奇公司)，由病毒以感染复数(MOI)10感染细胞。

定量RT-PCR

使用RNeasy迷你试剂盒从hESCs和EB生长细胞中提取总RNA，并根据制造商的方案用不含RNase的DNase I组(德国希尔登的凯杰公司(Qiagen,Hilden,Germany))进行处理。使用低聚核苷酸(dT)₁₅引物和逆转录系统(普洛麦格公司(Promega))对总RNA(1μg)进行逆转录。使用LightCycler 480SYBR Green I主混合物(罗氏公司(Roche))执行定量RT-PCR(qPCR)，并用LightCycler 480II实时PCR系统(罗氏公司)进行分析。研究了以下标志物基因以分化滋养外胚层、内胚层、中胚层和外胚层：GAPDH、LRRN1、OCT4、NANOG、SOX2、CDX2、EOMES、HAND1、GATA6、GATA4、SOX17、AFP、Brachyury、WT1、TWIST、BMP4、SOX1、PAX6和NEUROD1。使用GAPDH作为内部对照组。

蛋白质印迹

从悬浮于具有蛋白酶抑制剂(罗氏公司，瑞士)的RIPA裂解缓冲液中的细胞制备细胞提取物。离心后，将上清液溶解在Laemmli样品缓冲液(美国伯乐公司(Bio-Rad,USA))中，以进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。在SDS-PAGE中分离出大约50μg蛋白质，并将其电转移到PVDF膜上。将膜用5％脱脂乳阻断并且然后在4度下用以下第一抗体探测过夜：抗LRRN1(AF4990，美国R&D系统公司(R&DSystems,USA))、抗OCT4(sc-5279，美国圣克鲁兹生物技术公司(Santa Cruz Biotechnology,USA))、抗NANOG(ab21624，英国艾博抗公司(Abcam,UK))、抗SOX2(MAB4343，,美国默克密理博公司(Merck Millipore,USA))、抗磷酸化AKT(4060，美国细胞信号传导技术公司(Cell Signaling Technology,USA))、抗AKT(sc-8312，圣克鲁兹公司)和抗ACTIN(A5441，西格玛奥德里奇公司)。在与辣根过氧化物酶缀合的第二抗体(美国杰克逊免疫研究公司(Jackson ImmunoResearch,USA))温育后，然后使用Immobilon Western化学发光HRP底物(密理博公司)使膜可视化。用Image-Quant5.2软件(美国通用电器医疗集团(GE Healthcare,USA))对蛋白质印迹结果进行定量。

从半对数转换的最佳拟合线的斜率计算OCT4、NANOG和SOX2蛋白的半衰期。衰减曲线使用蛋白质数量的线性回归进行单独分析并表达为剩余蛋白质相对于时间的百分比，如先前在以下中描述的：O.Adewumi等人,国际干细胞研究组织对人胚胎干细胞系的表征(Characterization of human embryonic stem cell lines by the InternationalStem Cell Initiative)《自然生物技术(Nature biotechnology)》2007；25:803。

蛋白质稳定性测定

为了测定OCT4、NANOG和SOX2的稳定性，使用慢病毒质粒(可从中央研究院分子生物学研究所的国家型RNAi核心设施获得)沉默hESC中LRRN1的表达。用100μg/mL的环己酰亚胺(密理博公司)处理LRRN1沉默的细胞和对照细胞，以抑制蛋白质合成，并且随后在0、30、60、90和120分钟后收获。为了检查通过蛋白酶体降解对OCT4、NANOG和SOX2的衰减，在与CHX温育之前，将LRRN1沉默的hESC用10μM苄氧羰基-Leu-Leu-亮氨酸(MG132)(西格玛奥德里奇公司)进行预处理，以抑制蛋白酶体活性2小时。然后，在30、60、90和120分钟收获细胞，并对样品进行处理以用于蛋白质印迹分析。

细胞增殖测定

根据制造商的说明书，使用

(启用激光的分析和处理)细胞处理工作站(美国英创松公司(Intrexon Corp,USA))测定细胞增殖。简而言之，将对照细胞和LRRN1沉默的hESC以每孔5×10³个细胞接种在96孔板中。然后，将细胞在第1到3天分别用DAPI(西格玛奥德里奇公司)进行染色并使用

可视化。使用

工作站在第1天、第2天和第3天测量对照hESC和LRRN1沉默的hESC的生长曲线，以从DAPI染色细胞核测定细胞数。

细胞活力测定

通过与10％AlamarBlue试剂(美国Biosource国际公司(BiosourceInternational,USA))温育2小时、随后使用分光光度计(Spectramax 190，美国分子仪器公司(Molecular Devices,USA))进行荧光测量(激发：544nm，发射：590nm)来测定细胞活力。

流式细胞术和共聚焦显微镜分析

为了检查LRRN1的表面表达，用抗LRRN1(E36)单克隆抗体进行流式细胞术分析。制备hESC(H9)和13天EB的单细胞悬浮液，并将其与本发明的LRRN1 E36单克隆抗体在4℃下共温育60分钟。用冷PBS洗涤后，在4℃下添加与Alexa Fluor 488(杰克逊免疫研究公司)和7-AAD(BD生物科学公司(BD Biosciences))缀合的第二抗体，持续20分钟。洗涤样品并用流式细胞仪(EC-800仪器，美国索尼生物科技公司(Sony Biotecnology,USA))测定。用FlowJo软件进行数据分析。在对活细胞群(即，7-AAD^-细胞)进行门控后，分析抗LRRN1⁺细胞的百分比。

为了进行共聚焦成像分析，将hESC接种到隔室型载玻片(chamber slide)(易必迪公司(Ibidi))上，如上文所描述地生长，用PBS洗涤，在4℃下用4％多聚甲醛/PBS固定15分钟，在PBS中漂洗并且在室温下用5％BSA/PBS阻断30分钟。将样品与IgG对照组和LRRN1 E36单克隆抗体(1:100)在室温下温育1小时。然后，将细胞用PBS洗涤并与Alexa Fluor488AffiniPure山羊抗人IgG第二抗体(杰克逊免疫研究公司)在室温下温育1小时并且用DAPI复染。通过共聚焦显微镜术(LEICA TCS SP8)监测LRRN1染色的强度和定位；结合混合检测器，用100x/1.4油浸物镜收集DAPI和Alexa-488图像。使用LAS X软件(徕卡公司(LEICA))分析所得的z堆叠荧光图像。

免疫荧光分析

在hESC转导7天后，将对照hESC和LRRN1沉默的hESC(使用慢病毒质粒)在室温下在4％多聚甲醛/磷酸盐缓冲盐水(PBS)中固定15分钟、在PBS中用0.5％Triton X-100渗透5分钟，并且然后用5％牛血清白蛋白(BSA)/PBS阻断细胞30分钟。然后将细胞与第一抗体在4℃下温育。为了进行胚层标志物分析，使用了以下第一抗体：抗HAND1(sc-9413，圣克鲁兹公司)、抗SOX17(AF1924，R&D公司)、抗α-胎蛋白(ab21624，艾博抗公司)、抗WT1(sc-192，圣克鲁兹公司)和抗PAX6(sc-53106，圣克鲁兹公司)。为了进行细胞核定位分析，使用识别了OCT4(圣克鲁兹公司)、NANOG(艾博抗公司)和SOX2(密理博公司)的第一抗体。

在与第一抗体温育过夜后，将细胞用PBS洗涤三次并在室温下与第二抗体温育1小时。所使用的第二抗体是Alexa Fluor 488缀合的山羊抗小鼠和抗兔IgG以及Alexa Fluor555缀合的山羊抗小鼠和抗兔IgG(英杰公司)。用PBS洗涤后，将细胞与DAPI温育以进行细胞核染色并且然后通过荧光显微镜术(LEICA DMI3000B)可视化。为了阻断OCT4、NANOG和SOX2的细胞核输出，在MG132存在的情况下，将LRRN1沉默的hESC用MG132处理2小时并且然后用20ng/mL轻肌蛋白B(LMB，西格玛奥德里奇公司)另外处理6小时。

畸胎瘤形成

将大约2-5×10⁶个hESC或LRRN1沉默的hESC(使用慢病毒质粒，中央研究院)重悬于200μL的汉克平衡盐溶液(Hank's Balanced Salt Solution)中并皮下注射到五周龄的NOD/SCID小鼠中。8周后，通过手术收集形成畸胎瘤的对照hESC和LRRN1沉默的hESC，并且然后用4％甲醛固定并石蜡包埋。进行免疫组织化学分析以鉴别三个胚胎胚层。为了用针对三种胚层标志物SOX17(内胚层标志物)、αSMA(中胚层标志物)和NESTIN(外胚层标志物)的抗体进行标记，进行一般免疫组织化学染色方案。

使用Stemformics数据库进行数据挖掘

使用Stemformatics(www.stemformatics.org)数据库分析未分化的hESC或iPSC中LRRN1 mRNA相比于其各种分化衍生物的相对表达。从不同的数据集中整理LRRN1结果的Log2表达，并针对LRRN1的差异表达进行评估。选择含有干细胞和分化细胞两者的数据集，排除从疾病样品中读出的结果，并收集野生型或健康供体细胞。所使用的数据集是Maherali_2008_18786420、Guenther_2010_20682450、Marchetto_2010_21074045、Jia_2010_20139967、Hu_2011_21296996、Zhang_2011_21185252、Koyanagi-Aoi_2013_24259714a和Petrova_2014_24936454。

结果

LRRN1在hESC中高度表达

通过以下方式使用糖蛋白质组学分析来比较未分化hESC(HES-5)和16天EB生长细胞的糖蛋白表达模式：(i)与ManNAcyne温育并通过hESC和EB生长细胞中的聚糖生物合成机制将ManNAcyne掺入唾液酸化蛋白中；(ii)细胞裂解和点击化学反应以连接炔基唾液酸化糖缀合物和生物素叠氮化物；(iii)用链霉亲和素琼脂糖珠对生物素标记的唾液酸化糖缀合物进行亲和力捕获；(iv)珠上的唾液酸化糖蛋白的胰蛋白酶消化、随后用PNGase F消化；以及(v)肽混合物的LC-MS/MS分析，这鉴别了hESC中富含的N连接的唾液酸糖蛋白。糖蛋白质组学分析表明，与EB相比，ALPL、PROM1、THY1和LRRN1在hESC中具有更高的表达。

为了检查LRRN1的细胞定位，使用完整细胞进行流式细胞术分析和共聚焦显微镜术分析。特异性识别LRRN1(关于氨基酸序列，参见表1)的LRRN1 E36单克隆抗体用于完整细胞的流式细胞术分析中。

LRRN1 E36单克隆抗体是从已知的噬菌体展示的scFv抗体文库技术平台生成的，以分离与人胚胎干细胞(hESC)的质膜标志物特异性结合的靶向配体。已经鉴别了特异性噬菌体克隆，所述特异性噬菌体克隆可以与未分化人胚胎干细胞结合并根据这些表面标志物的表达水平监测干细胞分化和发展的阶段。此外，特异性靶向配体用于未分化的hESC，以纯化、表征干细胞(例如，LRRN1)上的靶蛋白并进行其功能研究。然后，确定带有靶配体的噬菌体颗粒的单一克隆的序列；并且将DNA插入质粒中并在293T细胞中产生以用于mAb产生。发现LRRN 1E36抗体的表位定位于LRRN1的LRR结构域。

如使用LRRN1 E36单克隆抗体测定的，针对LRRN1表达，90.7％的hESC和11.8％的EB生长细胞呈阳性。经过免疫染色的未分化的hESC的共聚焦显微镜术表明，LRRN1定位于细胞的表面。此外，与EB生长细胞相比，hESC细胞中LRRN1的mRNA水平高至少4倍。与EB生长细胞相比，HES-5和H9 hESC两者中LRRN1的蛋白水平高4到10倍。

在诱导分化之前hESC中的LRRN1表达显著高于分化的衍生物(在各种数据集中为20-800倍)。与成纤维细胞中相比，LRRN1的mRNA水平在iPSC中表达更高(增加430±111倍)。iPSC分化后，LRRN1的mRNA水平下降到13.5±8.9。总体而言，这些数据证实，LRRN1的表达可以是未分化的hESC的独特标志物。

LRRN1基因敲低在hESC中的作用

使用慢病毒质粒(中央研究院)在hESC中沉默LRRN1表达3天，将LRRN1的蛋白质表达敲低约90％(相对倍数为1.0到0.1)。由于培养7天后细胞凋亡增加，因此LRRN1敲低导致hESC增殖明显减少。

LRRN1沉默在hESC中的作用

在第7天通过qPCR测量对照hESC和LRRN1沉默的hESC中三种胚层标志物的mRNA水平(使用慢病毒质粒，可从中央研究院获得)。与对照hESC相比，LRRN1沉默的细胞中EOMES、GATA4、α-胎蛋白(AFP)、SOX17、Brachyury、WT1和TWIST上调了至少4倍。相比之下，LRRN1沉默对SOX1、PAX6和NEUROD1的水平具有很小作用。这些结果表明，LRRN1对于hESC的多能性的维持至关重要。通过免疫荧光染色未观察到PAX6表达，这表明LRRN1沉默后缺乏朝向外胚层谱系的分化)。

在体内畸胎瘤形成测定中，hESC可以分化为三个胚层。然而，在LRRN1沉默的hESC中仅观察到内胚层和中胚层。因此，LRRN1在hESC中的功能丧失导致在体外和在畸胎瘤测定中朝向内胚层和中胚层谱系的发展倾斜。

使用qPCR分析基因表达谱，并且在hESC中有或没有LRRN1沉默的情况下，OCT4、NANOG和SOX2的mRNA水平未示出显著差异。总体而言，hESC中LRRN1的沉默不会影响多能性因子的mRNA水平，但会以某种方式影响hESC的分化能力。

LRRN1对多能性因子的作用

如通过感染5天后的蛋白质印迹分析所示，LRRN1沉默的细胞中的NANOG和SOX2蛋白水平分别下降到对照值的30％和20％。相比之下，OCT4蛋白表达仅略有下降(对照值的70％)。

用抑制新蛋白质合成的环己酰亚胺(CHX)处理对照hESC和LRRN1沉默的hESC，随后进行蛋白质印迹分析以检查内源OCT4、NANOG和SOX2的稳定性。CHX处理后收获细胞，其示出在对照hESC和LRRN1沉默的hESC两者中，OCT4、NANOG和SOX2蛋白水平在CHX处理的2小时内有所下降。在对照细胞中，OCT4、NANOG和SOX2展现出半衰期分别为118、69和58分钟。然而，在LRRN1沉默的细胞中，OCT4、NANOG和SOX2具有缩短的半衰期：71、35和21分钟。

评估在MG132(蛋白酶体抑制剂)存在的情况下hESC中OCT4、NANOG和SOX2的稳定性，以确定LRRN1沉默后OCT4、NANOG和SOX2的不稳定性是否可以归因于蛋白酶体途径。CHX接种前，用MG132预处理LRRN1沉默的细胞2小时。然后收获细胞并通过蛋白质印迹分析针对OCT4、NANOG和SOX2进行分析。MG132的添加增加了由LRRN1沉默引起的OCT4、NANOG和SOX2的表达水平和半衰期。这些结果表明，下降的LRRN1表达通过活化蛋白酶体降解来抑制OCT4、NANOG和SOX2表达。

使用免疫荧光染色检查LRRN1沉默对hESC中OCT4、NANOG和SOX2蛋白的易位的作用。在对照细胞中，OCT4、NANOG和SOX2蛋白主要定位于细胞核中并且不定位于细胞质中，而在LRRN1沉默后，这些蛋白质展现出显著更少的细胞核绿色荧光，但在细胞质中未观察到荧光。值得注意的是，MG132处理增加了细胞质中OCT4(36％)、NANOG(32％)和SOX2(42％)的细胞百分比。此外，用细胞核输出受体CRM1的特异性抑制剂LMB进行治疗降低了细胞质中OCT4(6％)、NANOG(8％)和SOX2(10％)的细胞百分比。LMB治疗逆转了LRRN1沉默的作用这一观察表明，细胞核OCT4、NANOG和SOX2向细胞质的易位至少部分地取决于CRM1介导的细胞核输出途径。

鉴于LRRN1沉默会缩短多能性因子(OCT4、NANOG和SOX2)的半衰期，检查AKT信号传导在影响多能性因子的稳定性中的作用。LRRN1沉默的细胞示出显著较低的AKT磷酸化水平。与对照组的水平相比，p-AKT(S473)和p-AKT(T308)水平均分别下降到48％和35％。

由于碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是AKT信号传导的关键活化剂，因此研究了从生长培养基中除去bFGF时LRRN1过表达补偿减少的AKT信号传导的可能性。用表达全长LRRN1的慢病毒将hESC转染24小时，从而导致LRRN1过表达并在没有bFGF的生长培养基中另外培养24或48小时。在除去bFGF后0小时，对照细胞和LRRN1过表达性细胞中的p-AKT(S473)蛋白水平类似。然而，撤回bFGF 24或48小时后，对照细胞中p-AKT(S473)的水平以时间依赖性方式降低。相比之下，LRRN1的过度表达阻止了由bFGF的不存在引起的p-AKT(S473)下降。

检查在bFGF刺激不存在的情况下LRRN1过表达对hESC中OCT4、NANOG和SOX2从细胞核到细胞质的易位的作用。在具有bFGF的对照细胞中，在细胞核中均观察到荧光标记的OCT4、NANOG和SOX2蛋白。从对照细胞中除去bFGF后，标记的OCT4、NANOG和SOX2蛋白示出较少的细胞核荧光。然而，在没有bFGF的hESC中的LRRN1过表达显著恢复了OCT4、NANOG和SOX2的细胞核荧光标记。这些数据表明，LRRN1活化了hESC中的AKT，并且此活化可以影响多能性因子的亚细胞分布。

使用特异性AKT抑制剂(AKTi-1/2)研究了AKT抑制和LRRN1沉默对多能性因子表达的作用。结果表明，在浓度高达40μM时，AKTi-1/2处理不会影响hESC的活力，并且OCT4和SOX2蛋白水平呈剂量依赖性下降，同时pAKT水平下降。相比之下，NANOG蛋白水平在AKTi-1/2浓度高达20μM时仅略有下降，但在AKTi-1/2浓度增加到40uM时显著下降。在MG132和LMB存在或不存在的情况下进行AKTi-1/2处理后对hESC进行免疫染色。在未处理的细胞中，OCT4、NANOG和SOX2蛋白全部累积在细胞核中，而在AKTi-1/2处理后，OCT4和SOX2标记展现出较低强度的细胞核荧光。NANOG标记在细胞核中展示出更强的荧光。MG132处理显著增加了具有来自经过AKTi-1/2处理的细胞的细胞质中OCT4(从0到49％)、NANOG(从0到45％)和SOX2(从0到48％)的荧光的细胞的百分比。

评估将LMB添加到用AKTi-1/2和MG132预处理的细胞中后多能性因子的定位。结果表明，阻断细胞核输出逆转了MG132的作用并且由于细胞质中的OCT4(从31％到8％)、NANOG(从45％到5％)和SOX2(从48％到0)而因此降低了具有荧光的细胞的百分比。

这些结果表明，AKT的磷酸化在OCT4、NANOG和SOX2的亚细胞分布中起重要作用，并且LRRN1沉默对多能性蛋白的细胞核易位和蛋白水解的作用可以通过AKT抑制来介导，如图1所展示的。

抗体-药物缀合物

为了验证本发明的LRRN1 E36单克隆抗体可以用作抗体-药物缀合物(ADC)媒剂，使用荧光显微镜术在MCF7乳腺癌细胞中进行了抗体内化测定。将乳腺癌细胞在冰上用LRRN1 E36单克隆抗体染色1小时并且然后在冰上与山羊抗人IgG缀合的alexa fluor-488一起另外掺入1小时。之后，将经过LRRN1 E36单克隆抗体处理的乳腺癌细胞在4℃或37℃下温育3小时。参考图2A和图2B，免疫荧光分析示出，在37℃下，Alexa

488标记的LRRN1E36单克隆抗体内化到乳腺癌细胞中(在细胞内以绿色显露)，这表明有可能研发LRRN1 E36单克隆抗体作为抗体-药物缀合物。

抗体依赖性细胞毒性(ADCC)

使用具有LRRN1表达的人胚胎肾293T细胞进行体外研究以检查本发明的LRRN1E36单克隆抗体的ADCC活性。用

EuTDA细胞毒性试剂(美国珀金埃尔默公司(PerkinElmer,USA))标记细胞，并在有或没有外周血单核细胞(PBMC)的情况下结合人IgG(对照组)或LRRN1 E36单克隆抗体培养。图3示出了与用仅IgG或IgG与PBMC处理的那些细胞相比，本发明的LRRN1 E36单克隆抗体增强了靶细胞杀伤。

结果表明，LRRN1 E36单克隆抗体通过抗体依赖性细胞毒性有效地抑制LRRN1表达性癌细胞。

序列表

<110> 长庚医疗财团法人林口长庚纪念医院（Chang Gung Memorial Hospital,Linkou）

<120> 新型富亮氨酸重复神经元蛋白1（LRRN1）抗体和其用途

<130> CGMH-LK-18005-PCT

<160> 23

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LRRN1单克隆抗体人工序列的VH

<400> 1

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ser Ser Gly Leu Ser Ile Ser Asp Arg

20 25 30

Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Lys Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asp Ile Glu His Asp Gly Arg Ala Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Ser Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Thr Trp Ala Gly Pro Asn Trp Arg Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 2

<211> 109

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LRRN1单克隆抗体的VL

<400> 2

Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser

20 25 30

Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro

85 90 95

Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 3

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCDR1

<400> 3

Gly Leu Ser Ile Ser Asp Arg

1 5

<210> 4

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCDR2

<400> 4

Glu His Asp Gly Arg Ala

1 5

<210> 5

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCDR3

<400> 5

Trp Ala Gly Pro Asn Trp Arg Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 6

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LCDR1

<400> 6

Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 7

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LCDR2

<400> 7

Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5

<210> 8

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LCDR3

<400> 8

Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro Leu Thr

1 5

<210> 9

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCDR1

<400> 9

Gly Leu Ser Ile Ser Asp Arg Trp

1 5

<210> 10

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCDR2

<400> 10

Ile Glu His Asp Gly Arg Ala Lys

1 5

<210> 11

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCDR3

<400> 11

Ala Thr Trp Ala Gly Pro Asn Trp Arg Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 12

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LCDR1

<400> 12

Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr

1 5

<210> 13

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LCDR2

<400> 13

Gly Ala Ser

1

<210> 14

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LCDR3

<400> 14

Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro Leu Thr

1 5

<210> 15

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCDR1

<400> 15

Leu Ser Ile Ser Asp Arg Trp Met Ser

1 5

<210> 16

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCDR2

<400> 16

Trp Val Ala Asp Ile Glu His Asp Gly Arg Ala Lys Tyr Tyr

1 5 10

<210> 17

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HCDR3

<400> 17

Thr Trp Ala Gly Pro Asn Trp Arg Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 18

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LCDR1

<400> 18

Gln Ser Val Thr Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5

<210> 19

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> LCDR2

<400> 19

Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr

1 5 10

<210> 20

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> QQYGNSPL

<400> 20

Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro Leu

1 5

<210> 21

<211> 50404

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 人LRRN1

<400> 21

gagcacaaag cggggcgcac cgcgggcgcc ggcaacgagc cggtgaacga ggcgaggccc 60

gtgcgcccgc ggctgcaagc gcccgcctgg cggggagagg ggccgacggc gtcagcccgg 120

gcggcggcat ccctaggcgc ctggggcgcc ttcctccgga cctggccgct cgctgccccg 180

ccctctgcac cccacttctc cgaccctcct tcccagtcct gcctccccct gccctggcct 240

ctgagagccg actgagccca gccccgtgca gcagcggttg cctgtgtcgc cgcctagtct 300

ccggtcttgg tgctctcccg ggggtgcccc aaggagccag tgcgcgctgc gggctgggaa 360

ggaggcgccg ctcagctagt cctcctcctc ctcctcgtct ttctcctcct cctgctgctg 420

ctgccgccgc cgccgccgtg ggtgccgggt ccgcgcgcac cccaacaccc ccaccagctg 480

ggcctcgggg taagtccctg gccggccgcg ccgcggcagg aggtgtggga ggcagcgagg 540

ggaagtcgag gcaaacttgg tggcgtggga gaccctacgg ggtctgggga acctcagggt 600

aagatcgcgg gcctgagggg gacgaggggg cgcggctcac ggagctgggg aaaatgacga 660

agtcgggaaa cgagaatata gtgccccgtt tccccccgtc ccccttgcca aaaaaaaaaa 720

aaaaaaggtg tgggagagcg atagttggga aggcaggcca gatagaaaca ggcaaaaaaa 780

ggcagtgacc ggagccgagc ctgctggatt tcaggggccg accaggggag ggaggtgccc 840

ggggacgggg agggaggagg gctgccggga tgtgaaccgg ggaaggcagc tggggctgga 900

gagcagcgcg gaaagggggc ccagggagct ggaaagaggg ccaagaggag ggcaaggaag 960

gtggcgggcg acggggagag gaaagaaaaa gggtgtcttg gcggtggcct tggtaagaga 1020

aaggggcaag gggtataatt gacaaggcac tgaaagtatt gaagtcagag ccttgggaag 1080

gatctaccga actctcggcg gtccacgcgg ggacagacct cagcccgtga gccttgagct 1140

ccacgcgggg acagacctca gcccgtgagc cttgagctcc acgcggggac agacctcagc 1200

ccgtgagcct tgagctccac gcggggacag acctcagccc gtgagccttg agctccacgc 1260

ggggacagac ctcagcccgt gagccttgag ctccacgcgg ggacagacct cagcccgtga 1320

gccttgagcc cagaaggagt ggcagcctca ggacgtttgc caggtggcct ggaatgtgag 1380

ggaagcctca gccccgccag gaacagagct ggcgctgagt tcccggctcg gcccgggtca 1440

gaagcgagga aagtttgccg gcgagtgtcc tttgtgctgc gtggagaggg gtgtgggcgg 1500

ccgccgactc ggcgcttccc cgccgcccgc ccagggagtc cctgcctggc aagctggggc 1560

tcggggaaaa gtccagcagc gagagggccg cgtgtcccgg gacggttcca ggggagcccg 1620

cgcggaaacg cggaccaggc gcttcggccc ggatgccgga tccaggagaa ggggacctcg 1680

cttgccgtgt ccaccgccgc ggccccagcg ccaagaacag agcctggccg tgagtgaacg 1740

actggccggg gtacaaatgg ttctgaagca cttgaagctc acaggcaaag gctaagagtc 1800

taaatcccat cccgccgtaa gtattttcat tcccaaacct aaatcgtaaa ggaaaagtgg 1860

aattctaatt gggtgaggga acaggtgctg ccgactctgg cttttgcgtg gaggattttc 1920

taaaagacaa catgttttgt tttgtcttgc catgacaatc taaatcatgt tagtggaata 1980

ggctcattat ttcattttta aaagctaggg ctggaggagt ggaaagttca ggaaggcact 2040

ttgatcagta taaatctaga gtaaaagtgt tattggctcc agggccatat gtgtcccgaa 2100

gtctctgatt tgcatgcaaa tgtgagcgga tcctggcaga tgtctggcct catccattca 2160

catgaaggaa tttgaaaaga caaggagtct tcagttaaca atagacctta agaaaagaga 2220

ataaagacgc agtgtgagtt tttctgtttg ggaattccat ggtttgctga cacctttatt 2280

caggagccaa attctttaag tgctattgta ttgaaagctc aaagtgctgc ttgctcttta 2340

cctggctgta tatattcgtg caatattcaa gctggatatt ctaagctagt taggaaaagg 2400

tttgtgtgaa gcagacagta actttaaccc acttctggcg gcttgaagtg atttctgaat 2460

tgacccctca acttttcgag ttttctttta ataatttgac tcttgctcaa atttggtcct 2520

catcttcaga gctattcatt atagtagaag atcgttgtcg ttgaccgaca tgaagatttc 2580

ctgagaatgt ccactgtcta gctgagaatg tccactgtct agccaaagtc atttcggttc 2640

ttaaggcacc aaactgtaga actgcaggtg atgcaactgt cccaacccta gttacccgag 2700

tggttttcag gtcacataac agtgaacggg gaggtagtcg tgcagtagac tctggagcaa 2760

gggcctttct gccgtgtcta acattagctg cgtgaccaca ctgcactgtt cacctcttgg 2820

cgttgtgcga cagctgaaca aaaggcaggc agtgtgggcc gcacgtgagg caggcgatta 2880

tattaatacc tacgactaac cagccccagt ggcctcttct tttgtcaacc tcaaacactg 2940

ttgaagggaa aaagaaccta ttcacggaac agcatttgcc ccagtattct atatattcac 3000

tgaaagggac attaaaatac aacacccccc caacccccgc cagaaaaaaa agacaacatt 3060

gttttggagg gctcagtgtt tcgggggagg ggtggacaac agatgttagt ctgctatttt 3120

acatgttcct ttaagttatt tttgcaggtt cagtgccttt tatacataag gcaatatttt 3180

cacaggatgg ggaaaaatga attgaatcaa atttaagtaa gaaaatgtta tagccaagtt 3240

tgcattttgt gtcttagagc tatatagaag tcagaaagta acaaatcatt ctaataaact 3300

cttaatttga ctctacacgc ctgatgtctt cctgatagag ttgaagggta acttaaaata 3360

aacttgacat ttctagacta taaaccattt tgttgtaaag ttatctagat atttttgaaa 3420

cctggtaagt taaaaatgac cctcacattt gtgaaacctt atctttggca attaacctgc 3480

ctgtgtaatc gttattctgc aagtctaatg aaaggacaga ttagaactca ttccttggta 3540

aataaaactg ataaagtgtt taattattag aaaaggatca ttctgctaaa taaaagatct 3600

caagaccaga tccaactgca gactgtgttt ctaaaacata acctcagcta gctctggtta 3660

atgtctgaaa ttctgggaaa gcaaggaaaa actcaaccat tgatctctct ctggttagtc 3720

tgtgctaagg ccaccttctt gatctaaact gctagagcca ttaccacata ttctaaagca 3780

gtgacactca tgggaatata ctaggtacta aagaaaatcg gtctctacgg agttatattg 3840

ctacttccca agccagtgga atataaataa taatgataaa taatcagaat ggtgggcttt 3900

ttataccacc ataagtaggc cataagtcat aaataaaata tggtaaatta taggatgcag 3960

atgccagttt tacgagactt gcacaatgct tacttaaaat ttatttttaa gttacaaaat 4020

aatagttccc cgaatgattc atttcagcac taatgtcagg ttattcaaat attgtattta 4080

attttaaaaa attatgctga acatctgttt tgggttaagc caatctggag ataaagcaaa 4140

ttccattgta gaatcatatg atcatttaga atcatatgtt tctgggaaca atgaaagtat 4200

ctttaactca tgaatagagc tctgattaat atttaattca ggatgaaatt atatggatga 4260

agtcagaaaa acatttattc tctcttgttt tggctcaaag tacagaatag agataaaagt 4320

taaaccctat ctgtaaaatt caatacttta gtgaccaagg gatccatttg ttctaaaggt 4380

ctttttaggt gaagtttgct ttttaatttc ttgttttagc atatattagc attcacctgc 4440

tttacagatc tgttacagaa tgtagcctcc cgagttctga aacatagata aatgcatgat 4500

aaatggttta ttgacattgc attataatcc atgataaaat gataaatgtt tccagacttt 4560

atgggcaccc tgtagaactg ttaagcatat tatccaataa ttaaaataca taccatttta 4620

tgttacagtt ttttaaaaga aacaatatgc aagctttact actatttata ttttctactt 4680

tttgaatgtt ttcaaagctc taggcaaatg tcgggagtta ttaacaattt tatcagttga 4740

ttggttggtt agcaagctat tatccagtcg tagctggatg atcttggatc agttgcttaa 4800

ccccatacca accttcaatt ttgtcatgta taacataatc gagttgggag aataacgctg 4860

gaaggactaa ctgccataat cagtgagatt actaaaaggt ttatgtaagc catgcctcca 4920

gtaccacaat taacatcaac atttaactta tatggaacca ttgtacctaa tgaactgagg 4980

atcattcctg agatgcggag aatctagggg tgaacttgga ataatacatt cccaaggtcc 5040

tgtccactct gactttagag taccctctaa agatgctgct gtatcagctt aagacactta 5100

gttttaaaat ctatggagtg aaaactgctt ttagagtggc ttattgcctt ccatttatac 5160

tctttattgc tcagaggtta gagtgttatt tgaaagctcc gattaatata aatgagttgt 5220

aattttccaa cccaggctgt cctagctcac atctattata ccactggcag acatgtggac 5280

tccacagctg tcccctcatt tgtgtatgaa acagacacac tggtggcatt ttttggttac 5340

catagttaca ttaacaatgt acatgtgaca tccttctatg tgaaaggttt ctgtggcaga 5400

tattttgtag aactgggagt aaaggaaaac tatttaaagt ttggggaaca cataaattag 5460

tctgccattg tattccggag ccaccatttc aatccaggga agagagccat cctacagtgg 5520

tgtccaggaa aggacaatct tggaaacaaa gattttcaag ggaggcattt ccagcaatgc 5580

ctaacctctt caggagagtg tccatttaat attcatttca aaatatttgc tcttcctatt 5640

tgtgactgcc ctttgtgaga taatgtatta gcatagtcat tttcaatttg cagggggaca 5700

gtgggcagca ccaatattag cacctatctc agtaagacct aggaaacaaa aaaggagttt 5760

gcactattaa gcagtgagcc acagaaagaa tcatccttta gaaaaactaa aaaagcttta 5820

aaagagagaa aggtggctta attggtttca tgcctataat tttcccctct agaaagaaaa 5880

atgttagcat ggcaataaag aatatcatta acctgcattg ttatttcaca atagtgataa 5940

gtcttagttt gcatccataa taatcagtgt aatcaagtac tgtacagaga atcaggaagg 6000

cgcaggctca attcccagca atgacactaa tgactcaatg tctgaccttc tggatgtcct 6060

gcaaccatcc cggtgcttca tggctctatc agagttgtgc gttaaaggat ccaggaacac 6120

tggtagatga tttcaatatc accagtgcga ataatttgat ttctgcccca agagctagaa 6180

ttatatggag agctaatggt ctgggtacag cccctacctt tctgcaaggt gatgtttctg 6240

gtccctaatc ccatagctaa gagattttgt tgttcttttt aaaattttct ctccctagca 6300

ttgacagttt ctcaccacct cacctgggcc cgcttgaggg gaaaaatttt accaggggta 6360

caggaagcca tttacaatca ttaaacattt gttcacctca caagtatata ttgagcacct 6420

gctgtatgcc aggcattaca gaaggcagta aaactgaaat aagttagctt gatttttctg 6480

cagcttgtac attggagcat tttgtttcca tcaacctatg cattctccta caagtattta 6540

ttgagtgctc tgtaggaaaa aggcactctg cacagaggat ttcaaccaag ggtgattttt 6600

gcctctgagg ggacattagg caatatttgg agccttcttt ttgtcatcgc tgtcacaagt 6660

gagggtggga tgagggtgtt ataccggcat ctaatgggat gctgctcaac atcctaaaat 6720

gcatagcaca ggaagcccca cgacggagaa ttatctggtc caaatgtcag tagtcgcaag 6780

gatcctgcct ctgccctcag tgagcttcag tctagtcggg gttacagaaa ggagactgac 6840

aagtgcagca tagcgtgcta tgatggtggg agtgcaggct acacaagtac agaagcagca 6900

gccttaactc agatgtcagc tgccagcaga ggctttaaga aacagactgg ttaattcaca 6960

gaacaggctt tcacctgcca cacaagtgct cagcaggaga cgattttcca tctagcctct 7020

ttgaacataa gggggttgga tggttgcttg agagagggta gactccttaa gtttgtcaag 7080

aactttaaac tgaagatgga gttaattcct tgtaggagtt ggtcagaatt cagtgtgtct 7140

tgagtaaacg ggagaggagg ctggaaacag agagaaagtc gatagcaata gacataggac 7200

agcacaagct gcatgaagag aagatgcagc tgagttgaca aagctgtcac tgcctcatat 7260

tttagagctt taaactttgc caaatcctta aatatttatc tcatttgacc tataacatcc 7320

tgagaaacca aatgtgattg ttctttctcc ttttccccag taactgaggg acaagagtca 7380

tggagaggtt cattgtgact gtggacaagt cactcgatga agtttatctg taaaaggaga 7440

ggtcttgtga ggctcctctt cccagcacaa gttgaatttg tctagggtca cccatctagg 7500

gggagactgg aggtgggata agacctgaga ctcctgtctc tctcagacct agtgtcttcc 7560

actcagatgg tagcagcttc ctagaccgtg gagtcctaac aggtaacaag ctgacggtga 7620

ctcagcatgc tagctcttgg gttaccgaag aaagcaagga cctacgatgc atcggttaaa 7680

aagtatcatg cagagaaact taagctgggt ttcccctata cctaaggatt aaccacgccc 7740

cctacctaat ggcttatctt aagctgacct tagccactta aaaaaagact tgtgacaatc 7800

tgggaagaaa ggttcatagg agagtgcagc tagagttaga aaacgagata gaaaatggga 7860

caacccagaa catgtgggaa gaatggactg cctagaatag atgttatagt ggtatcattt 7920

tctgttttca ttgatttttg ttttttcttt gataggagcg ttttaacttt cctatcagag 7980

aataatgacc agtgtataca gatatgcaca cttacatgca cacacatcac acatatagag 8040

caggggagac agatttcata caagtttatg tttctttctt gtttgtttag taagacttgc 8100

acgtcagaac gagttttgga gagaaccttc cctcaaggtc ttatttctgg tttctctggg 8160

ataatgagtg taaggtttcc tatgagaagt aagactgaga agccacatga ctactcaagg 8220

ttcttttcat tctctgtggt ttccaggatc aggagtgaga gttaggtagg acttcaacca 8280

tatcctgaga gtttccagga cacatgtgga atctacatga actcatcaga ccatcagaga 8340

accataagga cagtggagta gcaatgactg gctttctcca ggttgttatt ccagctgact 8400

gtggttctgt gcagtgagga ctacatgtaa ggcctaaccc cccaaaggac cagttagctt 8460

tgctgtgttc cacagggaca cagccagcct cctcacgtac tcagaaactc atcctttctc 8520

atggggaggc catgtgaaaa atgtaggtca cttcaaagcc atctgaaggc aaaacacaaa 8580

atatgtgggc aaaggctggt gggatatgtt tctcttcatg cattcattca cactgtcaaa 8640

ttggagtcct ggtgaacaag ttcccaaatg gcttcactac caggattgag cactggagcg 8700

gagattagtt ctatgcaaat gagatgcttt agtgatcgag aggaaaatat tacatagagc 8760

tcccaaattc tatccccaga gcccaccatt tttcctaacg tagcatacag tagtagcagt 8820

agaataatga tactctacac tgtgcctttc caatgtgttg ggacccatca ccaacacctt 8880

atgtgcatta actcctttaa tccttgcaac aactctgtaa tgtagacacc cactttatag 8940

ctcaggaaac taaggcagac cgcaactaag taccttgccc aaggtcaaac aactagtgtg 9000

tatgtaataa atatttgtca agtgaatgaa tgaatgaatg aatgggtaca catctgtttt 9060

agaggagaga gtcctttatt tgaattctca gtttatggca ttcctgcttt ccaggcagag 9120

cattttcaag aactgcctct gtgacttgtg aatgataggg gaagagctgg tcggtggaga 9180

agcaggggtt gaacttgggt ctgtctgact ctaaacctgt actgttaaag tgcttggcta 9240

tatttcttcc tctttaattg cagctataaa acaagaggac tggactacgt tagctctctt 9300

agcccattcc actcaaaaag ttacataatt ccatattaaa gtctatgtaa aataaatcac 9360

ttttttttta ttttactact tttaattttg aaatctagtt tggtattttt atttaaccaa 9420

tcattgaatt atcttttaaa attatattag aattattaac agaacatatt tataaaccct 9480

ctttaaatca ttttaaatgg atgagaatgc atagttacag attgcattct cctaaccctt 9540

accatctcac tgcctattaa gttatatcat cattgtctaa atttaggtgt ctaaaaattg 9600

aaaagcatct tttgttacac agggaaaaga caggtaaagt gattaatttt gaaaaaatta 9660

ctgccgatat ttgcagaaat aagtaggttg ctgaatctaa tgaatagtat tgaatgattt 9720

ttttttcttt aagatggagc cttgtttctg tcgcccaggc tggagtgcag gggcgtgatc 9780

ttggctcact gcagcctctg cctccggggt tcaagcaagt cttgtgcctc agcctcctgt 9840

gtagctggga tcacaggtgc ctgccaccat gcccagctaa tttttgtatt tttagtagag 9900

acagggtttc accatgttaa ccaggctggt ctcggactcc tgacctcaag atatccacct 9960

gcctcggtct cccaaagtgc tgggattaca ggcgtgagcc actgcccccg gccatgaaaa 10020

gtattgaatg atttttatga gcttcaaact gctagcaata ttaaaagcta ctacttgaga 10080

ttcgcttcta aggattgttt tgctttaagg tatcctcctg acatgcaagt gaagcatcag 10140

agcaatgtgt cagtcattgc cgtagtgtta caggacatgc agcccaaggc aggggaagga 10200

gtgggtaaca aggcatgtcc tagatttggg aagagttagt ttcagaactg cttctcagct 10260

ctgtgatcta gagtgatttc atggaacctc agtatctaca tctgcaaaat ggggatgata 10320

atagagcccg cctcttagaa tcactagaat cattcagtga gaacatgcat ataaagtcct 10380

tagcacagtt cctcttccaa ggtacatact tagtatacag tagcaatgag tagaagtggt 10440

atttgtgttc aaatctgaca tttctgcctg ctacaaagtc tgcattctga ggatgctaat 10500

tctgaggcaa gtggagagat tttaagggac aagaagactc agactagata ttttatgaag 10560

tccgtagttg acatggttgt cacctttcgt ggtggacccc tagagtgctt tatgtttgtc 10620

tagacatgag aaatatggat tccactgatg tgctttgaaa gaattggcaa acaggtgaat 10680

acattagagc cttttttgtt tgtttccaga ttctcttctg tatcccactc tctcttttct 10740

ctctgaaaat attataatgc ccctaaatgg tgattcatgg aatcacattt tctaaataaa 10800

gagaataggt taggttcaga gatatcattc caccaagagg agctgaattt aagacattgt 10860

agcaaacaaa cccaaaagct tcacctctct gcctccactg tgatatgaag gttggccatg 10920

taaaactctt agaacaatgc tgagcgtgtt gtaaatggtc catagacaat gcagctacca 10980

ttgttactgt taattcttag tatcatcgtc atcatacaat atcatcatct tgtatcttga 11040

ccaaaccaca aggcttctgg ttaggaccag attagaacag tgcagtttaa ccacaaatct 11100

ttctggaagc aagagaaagt caccaggtat gctgggcatg gtggtgcaca cctgtagtcc 11160

cagttacttg ggaggctgag gtgggaggat cacctgaacc caggagattc aggctgcagt 11220

gattcctgat cacaccactg tactctagcc tgagtgacaa agcaagatgt tgtctcttta 11280

agaaaaggaa agaaagaaaa gaaaaagaga cagtcaccag gcaagccaaa tcaggtgtga 11340

tccttaggga gatgaaccca cagaggccag ttgctatgag ttggcctccc tggcacctcc 11400

cgtgttttag ctagctgatt ttcacttgca catgaaggga agagttgaga ataccattaa 11460

cttgattttc tttgaattct ttgtgaaatg gaaatagtaa ttatttgtgg agaacttcat 11520

tgtcttgttt aatcctcgtc atcagtgctt cccaattgct gtgaccacat ttacaggtta 11580

attgtagata tccatactct tagctctggg ggaaagccag taccacacag ctggtcacct 11640

ggctaccctt gcaggccaat aaatagagtt ttctaagtgt gctgagagga acacatacca 11700

actctgggag ttatgtatta tccccatttt aaagatgtgg aaaaaaaacc ctagacaagg 11760

atcttgccca gtatcgtaca gctagtaaga agtatgcata ggaacaatac tcttaactct 11820

ggttttcctc cagactgagt tagtcacatt gtccttgatc ttcccacatc tccttgtcct 11880

cactcaagtc tagcatgtgt tatctttatt tacatcctgt agtaccacca ccaccaagca 11940

gcttcgtaag ggaaaaggct atgactgagt cttaggtccc tggcacctat aaaagcattt 12000

ggcacatgga aaatgtactt agcaaatatt cagtcgttga aagaggaaag gggcttccgt 12060

atcatatgtc tatttcattt tgccatattg ctgctttaaa ataatttgta caaagttatt 12120

tcatctgtat tttggtagaa aatgagtagt tcataaacct gtattatact cagagatatt 12180

actatgttac tgctttagag agcttattat agaaagttga actcatttgg gaatgctttt 12240

tgtgatatta ttgccaagga agtgttatta atcaaaaagt attcattaaa tgcatgtcga 12300

atatcaagtg ctattagaaa ggtgatatga gggttgaaga aaatgtacat ggtgttattt 12360

ctgtccagat gagcttccag actcattggg gaggtagagt gaatagaatc aaatcaaaat 12420

aattaagtga tcatctgtag gaattctgca acaaagcaga aaaacagggg ctcagaccag 12480

acgggtttga atctcaactt tgtcacgtaa tagctgtgct cagtattggt taaaagactc 12540

aatttattga ccgcaaactc atctgtagaa tggaggaata atgtctaccc ttagggctgc 12600

tatgagaatg tatgggaaag cacttggtac aattcttaga acatgacagt cattcactgc 12660

aatcatttgg cagatatcta cagccccact tgtgtgcaga tctttttctg ggagtacagt 12720

ggtgagcaaa acagatgatg tgtgttcctt tcccatgtgg agcttgctgt ctgatgtgag 12780

ataaaagcaa taatccaatt atcacacaag taaatgtaaa atgatggctg tgttaagtcc 12840

agtgaagaag aagtacacga ggccaggaga atgtaacata aagccttcta agagaagacc 12900

ttcctaaaga actgacactt atttaagcca aaatctgaag gtcatgggag agttagccag 12960

gcaaagcgta tggagaggga agatctttgt aagccaaagc ccagaggtga gaaggacttt 13020

ggtatgcttg atcaacaggg agaagaccag tgtggcttag aatagaataa aagggtactt 13080

tcttttctgc ctacttccaa agtgcacttg gagttcagag aaggcagaac ttgtacaaag 13140

ttcagcgaag gaagagactg catcctatac cgaagagata tgtcaccatg acagaaggct 13200

tgaattggtg gagagggaaa ttgtgtgagt aattctattg agtcttggct ggttaggtgg 13260

catgtcattg tcttacatgt gtggactggc atatgccaag tcgggcacac caggaagaaa 13320

gtttctcctc catttctgtg tggctttgag catgctgatt aacttctctg aatcttggtt 13380

gtaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaagatgtag caccacaagt ttgtgaagtt tgtgggaatg 13440

ggaagatata atgcatgtga acgtggcaca tagtgtctag taagttagct tagcttattt 13500

tattttctgc tcctcataac ctttttctcc ctgtactaca ctttcctttc attgtagtga 13560

acctctcatt atgatacttg ctaactgaga tcacatcacc tgtgttgctc acagatacag 13620

attttttata gtagtttggt gatagccgaa acatttctct tgcttggcat gcaaatgcta 13680

tcattctcgt tcatgaactc attgtgtaaa atgcacttag ccacatctgg ctgctgttcg 13740

catgaacaga ggtgactgct ggtgagtgga caagatcctt cacaagcttt agatggtaat 13800

ttcgtcggtg ctctaatgac cataacactt agttgttatt gatttgtcct cagtggagag 13860

atgtactttt ctgcctgatc ttaattatgg ttcataatat tagatcattt caacactgag 13920

ttagcatttt gcccttgtaa caatttgttt tagttccatc tttgtattga cttataagta 13980

aatttagaca ctattaccaa atacttatca gaaaaagata gtgggggtag agtgggttat 14040

ttttcagcaa gatgctgagt tatcctttat tacatgcttt atggcagtaa atcttggact 14100

cccttgcacc cttttattac taacctgctt ttctgtgtcc cttgagatct taagtcttct 14160

acttactaga ttatgagaaa aactcccaaa tttccctcca accataacct cacttccaaa 14220

ctccagtcct atatttccaa atgcctgctg gatattttca ccctgaaaat cccaacatca 14280

ccgaaggagc aagaggaaga ggtggtttcc aggatgcaga gtgaactgtg gctgtacaag 14340

aggagagaga acgtcctttt gcagaggaac gaagcccctg cctattgacc cagcagggag 14400

ggaaccagga ggagaagtac tccagcctct cttttcccac cctcttctaa tcattcaaat 14460

ggaaactcac cccactccca aaatgagctc ctgccattgc tggcccttat cttgttttga 14520

gaactgctat catcccatca ctcaggctca accttgaaat tatttgtaac acctccctcc 14580

cctgtctgca catctagtca actgcagtat ccaatagatg cctctctagt tatatttccc 14640

tagtgtcttt taaatatggc acttcttctt tgttcctgtc aacaccaccc gaattctagc 14700

cctcatcgcc tctcctttag cttattggaa gtgcttctta accagtttct ccctatctag 14760

tgtgcctcct ctccattctg acatagagct ggtggattca tctttcggaa ttatagaact 14820

gatcccatag ttcccctgta aagaggcatt aaatggtccc cctggctata gtaatgtgct 14880

ggatattctt gatgtccctc cagttccacc cagtacccct ttccactttg ctgtgtgccc 14940

caggaatcag atgtatatgg gctgtaccca taaatgggtc ccttgccatc tggcttcttg 15000

ttgggttctg catcctgcgg tagctcactc agggttgttt gcccatcctt tgtgagttga 15060

ctttaacctc gcccatccct tatgctattg tttgaatgta tgcatccctc taaaatttgt 15120

atattggaac ttaaacccca aggtgatggt attaagaagt ggggcctttt gggaagtgat 15180

gaagtaatca gggctctgcc ctcatgaatg gactaatgct cttataaaag agattgaagg 15240

gagttcctta gtctcctttt gtccttccat ctcctctgcc atgtgaggat gtgaggacac 15300

agcctcagtt ttgtctttgc ccccttctgc catgtgaaga cacagaaaga aggcaccatc 15360

ttcaaagcag aaagcagtcc tcaccagaca ccacatctcc tggtatattg attttggact 15420

tcccagcctc cagaactgtg agaaaataaa tttatattct ttataaatta cccagtctca 15480

ggtattttaa tatagtgaca ggaatggagt aagaatctta aaaatggtcc ctttttaaaa 15540

cttttctgta ttcattccct ttttaatgta ccatctgttt tcttctaagt ctctgacaag 15600

gatgagaaat cagagaaaac tccttagtga agcataaagg ccctccatat ctaggaacca 15660

tcctaccttc ctgtcttgat ttccatagct actgtggcat aaccaaaatc ccattcaaaa 15720

tgaaagcatt cctattctgt cccctattcc aagtctgctg ccctgacgcc tttacaccag 15780

tgtaaatgtt taacaactgg ctctccaaaa aggtaagccc tcctttttgt gaccaatttt 15840

aagctaccag tgtgatgtct ctgaactcag atttggaaag aaatgctcac aactgactca 15900

gaataccact gctttgtgta cagctcccca cctcccctgc cactgccctc agtgccttac 15960

acagaagagt tgctcaataa actattctaa ttcatttcta tcattcctgt gggcatttgg 16020

aatggtacag aaacctactt actagccaca tgttgatggt aatatttgtg tacccagaat 16080

tttttggtga gtgccaacat aggtactagc tggatttttg agacttgaaa acgctgaagt 16140

gaaaataaac taactacttg ctcacatttt gtgctaagtt gctgaagcat agcatactac 16200

ttaatgttgc ttaattctcc aataaaataa ttctcatttt ctgatcttgt tttcaaacca 16260

tgtcttcatt atcctcaatt aaatgtaatt tgaagtaata ataaaccacc attaaaatgt 16320

atttcctcac tattataacc atttgaatat tctatagttt atgtcccctt aaatcaaaaa 16380

ctctacagaa atttttaagg tacatgttca tcctagacat atatgattgc actgcaattt 16440

actctaaaat ttattttatt aagaaataac cctttcttag tctaagagat aactttaatt 16500

ttgcttcata taaaaaattt ctatattgaa agttcaaaat gcaactacaa tttctattag 16560

aaaaatagga ggtaagccaa taaagatgat cttatcatag cattggattc ttttgtattt 16620

taatggttat gaaggacaat atggatattc aactaaaatt attcttttta cttttaataa 16680

tgaacatatt agttgaagag ctattataga atgcactatg atttataatg cattttaatg 16740

ttctcagctg ttcctttgca ccatatgatt acacaagcct agactgtgta attaaggacc 16800

atccactaat gtgcactggt ggatttatgg tttccaggtc atcgatgatc tgagcacttt 16860

gagtattgga ccattagttt caaatgcata ctaagatagg ggaacacatt ggcatcaagg 16920

aaaatctaca ataagaaact ctttcaaatt cagggatgta actttcacct gattttaatt 16980

taccaaaaca attaaaaaac ctgattaaca gaaatcctaa ttaactagat cccctccacc 17040

ctcagtccac ttttagaaga aaagggaaga ttggaagaaa ataatttaac cagggctttc 17100

aattaagaaa aaaaaatatt ccaatatgag ttcattatta gggccttgaa gaaaactatg 17160

tcttagtaaa aaatatataa ccacccttat taaaggcaaa aatataggta ttacaatttg 17220

aaactataaa agctttctag gaaaccttca gtcaaacaga aaattaaatt tgcacattcc 17280

ctgagcctaa tgctctagtt aaccaaggtt tcgctctaca agttagcttt cttctacgtg 17340

tctaaaagaa ggctgcaatg tactcttggg gtccaataag acaattaagg caggtggtat 17400

cacagaaagg ccctgtgcaa cgaacttgac tttaacttca gctggttcac ttatagctgc 17460

gggaattgtg acattacttg aattagtcat gatttgccag agaaagagaa tgaataggat 17520

gggtgattga ttgattgatt gataagatag ataagatacg atagagagat ttattacagg 17580

aattagccta cgtgattatg gaggccgaga agccccacca cctgccatct ataagctgga 17640

aaactgatgt tctgtcccag tgttgtaaga atgtaagtaa agcacctttc acagtttctg 17700

ttttgtattc tgctccccat ccctgtcttt ggccacttcc ttaaagactc actgtggccc 17760

ccaagctttc agaggaaagg tttcaacaag caggcacacc tctacttcat tttcttgcgg 17820

cgattaaaaa tgtctagttc tttaagtcct tattagaaat agtcataaaa aatagtttag 17880

aaaaggaatt tgaaatcaag tttattttaa gagttcaggg gcagatggcg ttactttgct 17940

tctttaaaaa aagatggcat tcaatgtggt tgagttctat caagtcaaag gacaagtact 18000

gtctcattca cccaaacact gctgtcttta accttgacta gcgggaactt ctatgttaaa 18060

tgtatgcaca cttctgtaca tctgccttca aattttaaag gaacatttta atgtggaagg 18120

gatatgttct tgacattttc ttagtctaaa gtttaaacag cacttcgtct tctaattagg 18180

aagccctaag cagtcaggct ctttagagaa atatcactag atcagagcta aaggctcccg 18240

tcttaaggac attggatgtt agtttttttt ttttttaaat aaaaatgttg ttaaaatgtc 18300

agataattag tacagattac tactggttta aaaaatataa caaaagacag cgcagagctc 18360

tagatgagca gagaaaaatg caataaatgt tctgaaatga atgtgaaaat gttagccatt 18420

ttcttgatga ggagaattat cctcaccatt acaaactaaa cttaattcag tctgggagaa 18480

aagcaaatct gatgtagtct aatggaattg cttgacttga tcagcatcca aaaatctatg 18540

gctcagtatt agccgcctac atgttggcac tttcagtgcc cacagtgacg agtctatttt 18600

ttcactggtg tatgtgtagt gttgaatgta caatccggaa ccattgtagc aaccagttcc 18660

ttatgcaaca cttactaaca gggcatggcg aaatctgtcc gaagtgagaa tacccagtgc 18720

tatactgtga aagacttaaa cagaagtaat gcaactgggc cttccaggca tattaagcct 18780

gccaaagtaa agatttggca tttaacattt aatcatgcag ctaattacaa agcaattatt 18840

tcatatagac atattacagg gagagaatta aaataatctg taaaagacta aaattaattg 18900

atttcatggt agtttttaat aactacactt gctggtgctg aaaaggagca ataaaaacag 18960

cccagttgtt ggttgatgtt ttgttctgtg ctgggccttc tgtcagtttc tcaattcaat 19020

aatgttaaat tgccactttc atgattccag ctatgcaaat agtctatttc ttaaaaagaa 19080

aaaaacaact ttcttgatct tacaagtgat ttaaacagaa aaaaattttt cccgtcgtcc 19140

tactttcttt gcctgtcata gaatcttggg tttaaaaggg ctgtgaaaga ctaaaggctc 19200

gagattcttc aaactgtatc tggtgtgtga ctttcaaaac atgggaggaa aatgattttg 19260

gcacagagct aaggtatttc ttgaataatt ataagtttag cctgctgggt cctagaagaa 19320

gttataaaga tcatagagct taccacagct tttaaagtta aggaacaggt acctctgtct 19380

ccctatctgt aggatataca ggcaacagta gaaagcaaac tcttttcata atcagttgtg 19440

tgtagtaaga gtacaatggg gagaagtagg gtaaggaaag tcaggactct aagtatttga 19500

taaaataagc attcatataa aaataattta gatggcagtt aatacacata ttaattaact 19560

actttacttt tatttttttt gagacaagag tctcactctt tcacccagac tagaaggcag 19620

tggggtgatc acagctcact tgcagccttg aactcctggc agtcctcctg cttcagcctc 19680

ctaagtaggt aggactatag gcacacaccg ccatgcctgg ctaatttttg tattttttgt 19740

agggatggga tctcgctatg ttagcaggct ggtcttgaac tcctgggctc aagcaagcct 19800

cctgcctcag cttcccaaag cactggaatt acaggtgtga gccaatgtgc tcaacccaat 19860

attaactact ttaaaatctt acacttcttt agtttactag ggctgccgtg gcaatgtacc 19920

acaaactagg tggcttaaaa caacagaaat ttattatttc acagttctgt aggctagaag 19980

tccaagatga aagcatcaag gtgtcaacag ggccatgctc cctctgaaac ctgtaagaga 20040

ataagtcctt gcctcttagc ttctgggggt ttgctggcaa actttggcat tcctttgttt 20100

acagctgtgg aactccagtc tctgccttca ttgtcacatg gtgtttttgc tgtgtgtccc 20160

tgtcttcaca tcattttccc tcgtctttaa aggacaccag tcatattgga ttaggggcct 20220

agcctatagc ctactccagt agtctactcc tcatctaaac gaattgtatc tgcaatgacc 20280

ctgtttccaa aaaagggcca cattctgagg tccttgggat tgggacttca acatctcttt 20340

ttttgaatcc acaatccgta actaacaagc attttgaccc agatcatggg atacactgat 20400

ggtaaatggt gtaggcattt tgtgcatatt aactcatttc atctttttga caaccacatg 20460

aggaaaggat gctgacacta ctctcaaagg aagacacaga gactagaaaa gtatcatgtg 20520

tggagctgga ttttaatctc aaatctgttg actccgaagc ctatgctcat tctcgtattc 20580

taaagagctg ccttcccagg gatcctgttt tcccattctc ttttgttgtt gttgttgttg 20640

ttggaaaatc tagagataat ttcctgagtt ctcaaaaacc atgtctacct ttctcacaat 20700

aatattaatt tgccctgcta gtttttagaa ttacttttac ttcatatgtt ctgtaattac 20760

attgtccaag aatgtgatct agaaatgaca tatattttta ataggaagta actaaaatgc 20820

ctaaagtaca aaacacctaa aaggcatatt tgtgcattca acagtcattt tcgagtacct 20880

gctctagggc tagcattcta ctaggccctg tctagcaaat ttgccatcaa aagctcttaa 20940

tttctaaaaa gtttcattca gccttttctt tagggaatat ggtgggagtc atggcctttc 21000

atacagggct gaacattttt tgtttaagtt attttctatg taaaccgctc ttcatttatt 21060

caaatacaat aaataaggag agcaatggtg tactctgata cttgaaaaga ggagatctat 21120

tctgatggaa acctttgctt gcttccatcc taagggttta ggtaaaagaa ttcttatgta 21180

tttccttctg gattcaaatt acatgaactt tacgagtcca tacacctgtt tcagacaggc 21240

tttgttctcg caggtatagc gagagaaatg caataaatga agaaaggtct aaatatactt 21300

tgtgatgtac tctggttgtt gtttcattga acacttgcag gctagtcact gtgttaagtg 21360

cagtacctac caggatgaat aaaacataac cttggacttc aagagtttga gtcacctctg 21420

agaacactct gatgagtgac tggaagaatg aaacagtgtg gcttagagca aagccatggc 21480

tacctctgtc tttgcagtta ccaggcccca gctgacatgc ctgctggatc ctctgagcct 21540

gtgagtggtg gcaggtcaga gccagactaa ggctggaatc tttttaaacg tggtctgcat 21600

gacaggactc tggtgcttta aaaaatatac agatattccc agaccccatc ccagacttac 21660

tgaatcaaaa tctccatgag gcatgagaat gtgcattccc ttaaaacgat ctccagattc 21720

atgaacaact aagtttggag atatagggct gtgcatgcct agtgtggtgg ccactggtta 21780

catctggcta tttaaatgta attccagtca attgaaataa aatgtgaaac ctccatttct 21840

cattcccacc agctacgttt cacttgctca gtagccactc aggagctacc atgctaggca 21900

gtgcagactg aatatttctg aagttgcatt agatagtgct aatagagcaa acacaaatta 21960

gtaactctca ttcctccctc ccaaagatcc acctatctct ttactcctcc cttttgacat 22020

gtaccttttc tttttttttg agtaacttgt gtacttgtct tatacactcc ccttaagatt 22080

agaagctgtt taagggcagg gtctggtctt cctggccctg tgacacagca aacactgaat 22140

gtatttttaa ttaaatcagt gtgattcaat ttgcaccatt ttattggatc tcttttgcct 22200

ttcaactgac actagatttc atcagagtct agagaaaagg atggatcaca gaacaggttt 22260

gtctcaatca caaacagtag gatggatttt tgctaaattg caaggttttc ttaagcacaa 22320

aatgtagaaa agacccacca gagctgtgag tatttgcaag cctaaaccta ttgtcatatt 22380

tgggtaccta gaaagcacat ttgaattgat tcagctagct gtttgattta tctattgagt 22440

gcccactatg tagatgccag actcattgcc tcaccctgga atgactcaga gtgaacaaga 22500

cagaaacggg ttcctcactc catgagatgc acactctcat atggcatatt gaaatattgg 22560

caaggagtct ccctgcccag acggattggg atagaaaagc gatgcgattt gggttctggc 22620

atcagatgcc tggattcaca tagaacctca accactctgc tgtactagtt ccaagacctt 22680

gggtagttca ttttattttt ctgagtctcc attccatcac ccataaaaat aggaacatga 22740

tggcattcac ctcatagcgt tgcaagcatt ccatgaaata atttatgtaa atgattcaat 22800

gcagtgcatg ttgcataata agagcttaat aagaactaac tgctgttact cttacaacta 22860

ctactcagcc aaaactaccc tgcaattaac attaagatgt aaaaaattag gtgtctgcaa 22920

ggttagaaaa taactcatta tttggaaagg gtgttttctg tctttcttga gctagcagtt 22980

taattcctgt agcttactat ttacatcctt gcatcctaaa tcactgagat ggatatataa 23040

atgttttggt agatgcctat ctcttgtttt attttttatg tttctttggt gaaggattta 23100

acttgtttga aacacttctt tccagacaat taagaatagg gaaatgcttc aggtgtcatt 23160

caacctatct tggtgtagag agatcacaaa gaattcttta aagaggctta ccattaaact 23220

gcaaaactga aatcctaata actagaatgc aaatatttaa ttagcatttc tcattaaaat 23280

aaatgtgtga ctttttttct taccttcaaa aatgacatgg cctttgaaaa tacatactgg 23340

aaatgagctg ggaagagaag ggttggattt tgaaggcagc cacttgatac tggggagttt 23400

gcaagttgag ccttcctgag tccttcccat tctttcatcg gggggagaag aagactttgc 23460

tgtgcacctg tatataatag tgaaattaat ttcaaatcca ggacctgctt tattcttacc 23520

tcagattcca tgaaacctgc tttaaacttt ttctaatatt ctagaaatct actctatcct 23580

tacccaaggg atagaggata tttctgtggc acccaagcta ttcagtgaac agatgaactg 23640

tcccagggtc ttcactgtga ttggaggggc tcaagtcatt tgggaaaaat cggtgttggc 23700

ttcaagagct ataaatgctc ccaggtagcc agactatact attgatactt cattcatttg 23760

attcaaaatt gggggttttt gggatgactg tgtgtcctgt gggaggtggt acttagagca 23820

tgggctttga aaccaagacg atttcatttg attccttcct tcatcacttt ctagatgtgt 23880

accttgagca ggtatatctc tatgcatcta tttcctcagt gtaaaaaggg gacaatcata 23940

gtacctagct cctggggatg ttgtttaaaa aaaaaaagaa gaagaagaag gttaggttaa 24000

aagaagaaaa gttccagata attttcagga gattgttttc aggacataaa ttaattttct 24060

tatcggaaga gtagatatta acttaggttt tcagcacctg actctaattg tcttaagttg 24120

acgccaaagg aaatttgttg aaatcctgct atgatccact gctcaagaca tgttatctca 24180

tttaatcttc agaacatcca aatgaggtag gtataactat gcccatcaaa aagaggggga 24240

aaccagggct tagagaggtg gagtcatttg tcccaggtgg cataggtagt accaggatat 24300

ggacccagct ctgtctgcct cttgagactg tgcctttctt tttaattttt ttttaaagct 24360

aaacacagtt tctcttaaaa atctgggagc aagtgttttg ctcccaatca agaagtgctg 24420

cttaatgggt acctttaaga gcagaaacct gaacaaagca tcaaatactc aatacctgga 24480

gctggagccc tagtttcagc ccagcctcat catttagagg taggaaagat ggctaacatg 24540

cactgagctg gagtcaagac cagaggtaag gactcaggtc ccctaactct tggtccagtg 24600

ctccagcccc tgtaccgtgc tgcttctcaa actacctgag agtcagatag gactcagaac 24660

cagacagcat tcaggcatgg gccctatgtc catgacttac tagctcactt gagacaaatg 24720

agttgacatc attgtaaaga atagagatga tcataccata tacacgtaag tcactcagtg 24780

tagtggttag tacatagtct tttattaaag tgagtttact agtagagtta gttacattca 24840

tattattcat gagggctttc ctatcttgaa tgtccaactc caactcctaa ttattttaaa 24900

aatctatgca cttctttcac ttgaatttct atgccctcat agactttaca ggcacatgtt 24960

ctatcaccaa ttaagagaaa tttaacttac acattttaca acttatacat gcaatttggc 25020

tgtgcttata cagcacagat caacattaca atcaatttac tgccatgtta aaaaaaaaat 25080

cagtgaacat tgttcggctg acctgactaa ttttttgaaa taagttggcc atcagtgtaa 25140

ttgattgagc tatctgtaca acccccaacc tacctaagca aaggtcaaaa tggaggttat 25200

taaagaaaac cagccactga actatcccta aattgagtga tgttttcctg tgctactgat 25260

aaatgattca ttgatggagc actaaagact aatgtcattc aaagaactgt agaccctgcc 25320

ctcgtggcaa agaatatgaa tttaacctta gacaaagcaa agcaatgtgg gattgtctat 25380

ctagagtgca ggacagggtg cttggagagt ggagcttggc ctccaaatat gtgacctcac 25440

ctctctgagg tgtcctctgc aaaatgagag gttattgtag atgtgtcctg tgatctgtaa 25500

ggccgtctct acctttcaca gtttgcgcat ctgtatattt cacagggagg ctagcctgct 25560

tgcttttgat cagttgaagt caaatcagac tctgaggtcg acgttattcc ctagggctct 25620

ttcatagaca cccttcccgt ctgtcccaag acaccttcct gggtttggat tcatgccagc 25680

tggcactggg cttttggctt ttcatttttc ttttgctttt tacattttct gttgtaattc 25740

ttaagtccat ccagtccagc ctaccctgct tcccatgcct ggccaaccct cctgaaaggg 25800

ctaaagtgcc atccatgccc agttcctctt aggagctgaa tgaattgtga ccccagcttt 25860

tatgctcgac ttggagacca gctgcgcctt tgggcttttc ccagagatgt tggatgagac 25920

tgcacctgca gtgtgatgga tttgcccttg cctgaaagag gaaggaaaat gagggagaat 25980

caaaagatca cttgtatcca tccccttctt tgtacactag tacatttata tcaccagaga 26040

atttttgtct cgatgaatta atagtaataa catacaagaa aaaggagaaa aggaaaagaa 26100

aattaggggg aggacaatct aattttctct gggagccagt aaaaccaccc cagaaattta 26160

acatggtcag attaggaaac actgaatttg ggagcaaggc actcgagttt cattttgttc 26220

ccctgacaat taactgggtc aatttggatc acctagggga tctctaaggt cctgactacc 26280

ttttaaagta ggtcttctga aagaaaggag tgtaaaatga atttttggaa atgtaatgct 26340

tcttaaagca ctaaagaagt tttcttctga gcagagagtc acaccataat aaactgagtt 26400

tataattata gattttcacg tatggagtat ttgccaataa tatttgaaaa tttatatcta 26460

atcatctagt tatcatatat tccctttagc tcaccattat agatgctatt tttatactta 26520

tattcagagg ttgcaaactg gccatgggcc ataaagggac tctgaaagca ggtaggttct 26580

gtttggcctg cacagctaaa acattttggg ttgccttttg gaattcatgc actctccagc 26640

cttctacatg actactgctt cttactgtgt tagaatcaac tccctacacc tacctggccc 26700

tagaaagcat taagtttgag atctttgtca caatcaaact ccatccctcc aaaacaattt 26760

aataacacaa gaggaagaaa aaagaaggga agaaaggaag agaaagggag ggaggaagca 26820

ttgcctctct gaaaatgatt ggaagtaaag ttttccatga caccagagga aagggctgat 26880

gacttcctga ggttccttta ggcctgggaa gctatgacta cttaaggtaa gaaaaataaa 26940

ataggataca aagttacatg acttgttcaa ggtcgtccag aaagtttatg ctgaagccaa 27000

aattaagaat tcctttcttg gcgaacatcc ttgttctgtt gcctggccta ttgagatgtg 27060

tggccgccct gcttggtgat gaataatgtg ggcttttagg aacagttcct tatgcaaaag 27120

agcctcagga agatccattg tgtccttgca aggggataca ctatattgtt tccttaatgc 27180

attacggaga ctattatagc tcttcctctc atacgaccct ccatctgtga tcacttaaca 27240

cacactacag agtgttggct ttggataatg tgtgaaccag gaacataatt ttggaaaatg 27300

gttggagaaa gaaatctaag agtcagaaag ggtcaggtgc cagaaaaaag tctaagaaac 27360

taatgttttt aaaaagagtc tgtgcagatt cagcgttcag atcgtatgtg caaggccctc 27420

tttccttccc aagaggaata aaatacatcc tcaatacaaa atttactgta atttctctct 27480

ttgacccccc tgtactggct agctacatta tttaaggtac agaacttgta ctggatcata 27540

ccacaaaagg cattctctac tgatttcaac gatctatgcc ttactttcat cttcaacacc 27600

catgaaaaag actcagattc aatacgagac atcaatcctg taaataatag tagctaacat 27660

ctactcgggg cttgccatgt gccaggccct ctgccaaagg ctttacattt aacagttcat 27720

tctaattctc tcacagtcct tataaagcag gttttataat ctccattttc ttaaagagga 27780

aactgagact tagaaagttt caataactta cccaaggtca cagagctgaa tttgaaacca 27840

agtctgtctc tccagaagcc gcattcttaa ctttatgcta tactcttgtt tcagacatct 27900

gaaagccctt gttaagtatc acaatcagca ctggggcctg tagctgaagg cagagtggcc 27960

ttcagggaca ggaggatcct tctgggaggt cagtccacac agtggagtct gggtccatct 28020

tgcctcatgg agtagctaca ggcaatgttg gtgttgaggc aatctatttt tcttaaactc 28080

tgtaaggcaa gaaggaaatc ttggttgaac aaaaatccca tttccccatt attcaagcca 28140

ttcctaaaag aaaggaagca aatttgaatc ctgcatttgc catggatcta tttggagcct 28200

gagaaaaagc taaaagaatg atgttttttg aacattatct acatgatatg gatttggcca 28260

atccagaaag gatacataaa gctcatgccc tcagaaggca tttttcttca tttggggatc 28320

aaaattttag ttctttgctg tgattatact atctatgaga tggtgataat ttccaggttg 28380

gaggtttgtg ttttataaat tgcctggata gggtttcaat ttagctttaa tacaatattt 28440

ggtctctgga ttttattaat ttcaatgata atggttgaaa atataataga aatgacaaat 28500

aatattgata ataactcttt accaagtatc tgccatgccc aagggcctta aagagatcat 28560

tcattactcc caataacaag atgaaaatga aattcaaagg caaatctgat agggttccag 28620

aggttcaaaa ataagtattt gagggctcac tatgtgctgg atattttccc agtgtgttag 28680

ggttctctta gagggacaga attatatata tatatatata tattatatat atatctccca 28740

ttagtgtatg tgactattat atatataaag gggagtttat taaaccaatc acaaggtccc 28800

acaataggct gtctgcaagc tgaagagcaa ggagaccagt ctgagtccca agactgaaga 28860

acctggggtc tgatgttcca gggcaggaag catccagcac gggagaaaga tgtaggctag 28920

gaggctagac ccgtctctct ttttcacgtt tttctgcctg cctttttttt tgctggaagg 28980

tgattagatc gtgcccacca gattaagggt gggtctgcct tcccactgac tcaaatggta 29040

atctcttttg gcaacaccca cacacacaca cctaagatta atactttgta tccctcaatc 29100

caatcaagtt gacagtatta actatcacaa gtccatccct tgttaacttg aacacacatc 29160

tcctgagatc atacattacc ttaaatagag acaataatga ggtcataatt acacctaaca 29220

taactatcct tcccacaacc ggaaacacac taatccccaa cccaaatact gttacataaa 29280

gttaacaata cttaaatgct gatatgaagt caataaatct tatgtcacat gataaaggaa 29340

aaaaatgaag atattttctt agtacaggta tatacaggca caaacgtgtt tttaacaagg 29400

aggaaatact catgacagtt aacagtcctt gtttctgcac ttgtttctgc agctggtcat 29460

gtgatcgtag ctggtattga tgactacctt cttgtactac ccattctata ttccctttgc 29520

cttcagcaag cacctcagca ggttgtgttt tcttttcttt cttttttttt ttttttcctg 29580

gtggagtgac ccaaaccttc attcctgaaa ggtctgggcc atttgtagtc ctttctggat 29640

tgggctgttg tagttttcca ttgaccttaa tcacaggaca ttgtaatact aagagatatc 29700

ctaatggatc tcctgtattc catgcatact ctcccttact tccatcataa agtagtagac 29760

tgattccatt ttgataatct gggtcaatca caccagccaa aactgtaact cccttcttag 29820

cctgttgact taaaggtaga gggagcccaa agtgtccagg tggcaatctt ccagtttcat 29880

ggaatcgttg ttatgtctcc tggtggcagc gttcctcctc ctggaactaa gatgtctagg 29940

gtagcagaat gtaatgtcgt gggaatagga aacaaaaatt ttgctagtgg atcactaggg 30000

gtgatggtga gtggcgccac ttccacctgt tgattcctgg acccatgaat tctagctatg 30060

ggacaaacat taccatgtat tggatgctga ttcagagcat acacagcctt ctggagaact 30120

ttgctgcagc cctgcaaata ttgtcaccta gttggcattt taattgtgac ttcaaaaggc 30180

cattccactg ttctgtcaat ccagctgctt caggatgatg gggaccatgg taagaccagt 30240

gaattccatg agcatgagcc cactgccaca cttctttagc cgtaaagtga gtgtcttggt 30300

cagaggcaat gctgtatgga ataccatgat ggtggataag gctttccgtg agtccacaga 30360

tgttagtctt ggtaaaagca ctgcatgcag gataggcaaa ctcatatctg gagtaagtgt 30420

ctattccagt gaggacaaac ctctgccctt ttcatgatgg aagaggtcca atataatcag 30480

gtagctggct gatcatcccg aggaatggtg ctttatcgag ggctcagtgt tggtctctgc 30540

tgctggcaaa ttgggcactc agcagtgtct ggagccaggt cagccttggt gagcagaagt 30600

ccatgttgct gagcccatgt ttaacctata tccctgccac catggccact ttgttcatgg 30660

actctttgag caacgacagg ggtggctggg gaaagaggct gagtggtgtc cacggaatgg 30720

gtcatcctat ccagttgatt attaaaagcc tcctctgctg aggtcaccca ttggtgagca 30780

ctcacatggg atacaaacat cttcacagtt tttgaccact caggtcaatc cacatacctc 30840

ctccccaaat ttctttgtca ccaattttcc aatcatgttt cttccaagtc cctgaccatc 30900

cagccaaacc attggctaca gcccatgaat cggtatatac tcacacatct ggccatttct 30960

ccttccatcc aaagtgcaca accaggtgca ctgcttgaag ctctgcccac tgggaagatt 31020

accctccacc gctgtccttt agggatgtcc taaaaagggg ctgtagtgct gcagctgtcc 31080

attttcaggt ggtgtctgca tattgtgcag aaccatctgt gaaccaggcc ctagtcttct 31140

cttcctctgt caactgatca tagggaactc cccatgaggc catcagggca ggctggggga 31200

gagaaggcag ggtggcctga gtggagacca tgggcatttg agccacttcc ttatgtaact 31260

tacttgtgcc ttcaggacct gcttgagccc gatcatgtat ataccacttc catttgatga 31320

tggaatgctg ctgtgcatga cccactttat ggctagatgg gtcagaaagc acccagttta 31380

tgatagttca ggttgcatgg tagcttggtg acccatggtc aaacgttcag tttccaccaa 31440

agcctagtaa caggccaaga gctgtctctc aaaaggagag tagttatctg cagaagatgg 31500

cagggccttg ctccaaaatc ctagaggcct ccactgtgat tcatctatgg gggcctgcca 31560

aaggctccaa acagcatccc tgtctgccac tgacacctca agcaccattg ggtctcctgg 31620

gtcatatggc ccaagtggca gagcactttg cacagcagcc agggcttgtt gtagagcctg 31680

cttctgttct ggaccccact caaaactggc agcctctcag ttcacttgat aaatgggccg 31740

gagtaacaca ccccaacgag gaatgtgttg cctccaagat ccaaataggc ccactaggca 31800

ttctgcctct ttcttggttg taggaggggc caaatacagc aacttatcct tcaccttagg 31860

agtatctcac caggccccac accactggac ccctaaaaat tttactgagg gggaagattc 31920

ctgaatttta gtcagattta tttctcatcc tctggcacgc aaatgtctca ccaataagtc 31980

cattgtgttt gctacttctt gctcagtgga tccaatcagc atactgtcat caacgtaatg 32040

gaccattgtg atattttgcg gaagcaaaaa tgattaaggt ctctctgaat aagactatga 32100

cacggccggg cgcggtggct cacgcctgta atcccagcac tttgggaggc cgaggcgggt 32160

ggatcatgag gtcaggagat cgagaccatc ctggctaaca aggtgaaacc ccgtctctac 32220

taaaaataca aaaaattagc cgggcgcggt ggcgggcgcc tgtagtccca gctactcggg 32280

aggctgaggc aggagaatgg cgtgaacccg ggaagcggag cttgcagtga gccgagattg 32340

cgccactgca gtccgcagtc cgacctgggc gacagagcga gactccgtct caaaaaaaaa 32400

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa agactatgac acaaagctgg agagttgata tacccctggg 32460

gtaggacagt aaaggtatat tgctgtcctt gccagctgat ggcaaattgc ttctgatggg 32520

ccttatggac agaaatggag aaaaaggcat ttgccatgtc aatggctgca taccaggtac 32580

caggagacgt gttaatttgc tcaagcaatg aaaccacatc tgctgcaatt ggagtcacga 32640

cttagttaag ctcatgataa tctgctgtca ttctccaaga tgcatctgtc ttctgcacag 32700

gccaaatggg agagttgaat ggggttgtgg taggaatcac tacccctccg tctttcaagt 32760

ccttggtggt ggcactaatc tctgcaattg ctccaggatg caatattgtt tttgatttac 32820

tatttttcta ggtagaggca gctctaatgc cttccatttg gcctttctca ccataatagc 32880

cttccagtca gggagaaaat gtgggggttc tgccagctgc caagtatgtc tatgccaatt 32940

atgcattctg gcattgggga aatgaccaca gcatgagtca ggggacccac tgtaagttgg 33000

acctgagcta aaactccatg aattacctga cctgcataag cccctgcttt aactggagga 33060

ccacaatgat gttttgggtc tcctgggatc aacatcagct cagagccaga gtccagtagt 33120

ccccaaaatg tctgatcatt tccctttccc cagtgcagtt accctggtaa aatgctggag 33180

gtctcctagg ggaaggatgg aagaaagatt cactgcataa attgttggta atgtagtggg 33240

gtttttcctt aaagggaccc agcctcccct tcattcaagt ggttctggtt ccataaactg 33300

gctccagtct ggaaattgag cggtcatgat tctctgtttt tataattcaa attagtattt 33360

tgtccatgtg acctagaagt tttctgtttg tgtaatttaa gtaggaatgc agtaggcttc 33420

ctatcaattt cacttctagg aacaccgtga ttaattagcc aatggcagag ctctacatga 33480

gtcagattat tctgattgct gctttgcctc tgctgtccat tacagtagct atgcccactt 33540

tgcctttgac agttgagtgc tgccacttgg cccctgccac cttgggatcc aattcttccc 33600

actgtattta aattttgtag ttgagtgact gctgttccca ccgttagatc tgacatacag 33660

agaagagcaa ttacagggct cttcagagat gcaggtgctg ccctcacaaa tctattttgc 33720

agggcattgg tcaaggctat atcttctggg ccctcccaac tgggatgagt gggtctaaag 33780

tgactaatcc actccaccat ctcaatctcc ctaggccttt ggatcccttc ctctacatta 33840

aaccaaggga gatcaggcat ttccagcttg ctcactgtgg gccatctttt aatccatact 33900

tcagctaacc aagcaaataa actattagaa tcttttcaac ttcctgagct gcaacattaa 33960

atgcagagtt cctacttagt cggcccaaat caataagttc agcctgatcc agctctgtat 34020

tccttccacc attatcccat acccttaata tccattccca aacctgttct ccagattgct 34080

ctttatataa ttagagaatt caaacagttc ttttctagtg tagtgcagct cctcgtgggt 34140

cacactctca acctcacctc caggggccca tcgggatttt agttataggt ctagaagcaa 34200

acaggggtat taggggtggc tccggaggag aatcaacatt attttgcctg gcaactgcct 34260

caggagagag gccatcactg ttgcctcagg cagcgcaggg tttgtctcct cagacaaagg 34320

cggaaaggcc tatggcagca tgtgttgggg aggggatgtt gccactactg gggatgggga 34380

agctgtttct tctggcaaaa aaggtgcatc agagtttaca aacgtagtgt cctcagcttc 34440

atcagggtgc tcccacacat ccccattcca agttgcaggg ttgcattctt ttccaatcag 34500

tgccctcact ttaacagtag acacttggtg aggctgtgca tgcacctttc attgcaggtc 34560

acccactcgc atgataagag tttgtgtctg tttttccaca gtttcagctc tttctgtaca 34620

gaagacaaga ctctcactca gggtaatctt agcagatttg aggctcggta tctgcttctg 34680

aagccaggag acagaatccc tgagtccatc attttccatc attttctttc atcactttgt 34740

ccactgaact taggagcaac caaccagctt cattgtgttc ctcggttctc cacatatggt 34800

caaaggcatt atgtatagag tcactgaact ccttgcctct tacaagcagt gaatcaggag 34860

tgtcaaatgc atttattttg cataagtctc taaatagttt acaacaacga ctatcagtgt 34920

tctccatact attagaagta cagtccttag catttttggg tctaatcata ttaagcagcc 34980

aactccagaa accccaaaac caatgaaaga actccatcct ttaatattct gttcctttag 35040

aaccactcct ggtaccaaaa tctgtattag cgttctctta gagggacaga acaggatata 35100

tatatatata tatatatata tatgatatat atattattat acatattata tatcatattt 35160

tatatacatt atatatataa tatatgtaaa ggagagttta ttaagtatta acatgcatga 35220

tcacaaggtc ccacaatagg ctatctgcca gctgaggagc aaggagaacc agtctgagtc 35280

ctaaaactga agaacttgga gtctgatgtt cgagggcagg aagcatccag cacaggagaa 35340

agatgtaggc tgggaggcta ggcccatctc ttcttttcat gtttttctgc ctgctttata 35400

ttcactagaa gctgattaga ttgtccccac cagattaagg gtggatctgc cttccccagc 35460

ccactgactc aaatgttaat ttcttttggc aacaccctca cagacacaac cggggttaat 35520

gctttgtatc cctcaatcca gtcaagttga cactgggtat taaccatcat acccaggccc 35580

taggctgaat atttttacat aagtactttt ttgttatcat aatttacatg tatgaaccat 35640

atatacttag ccttaagttt agctatggaa actgaggcac agagaattta agtacagatg 35700

cttctcagct tatgataggg ttacgtcctg atacacccat cttaagttga aaatatcatt 35760

atgtttaaaa tgcatttaat acacctaacc taccaaacat catagcctac cttgaatatt 35820

gtcagaacat ttacattagt tttattgggc aaaatcatct accataaagt ctgtttgcta 35880

ataaagtgtt gaatttctca tgtaattgaa cactgcagtg acagtgaaaa ataggatgct 35940

atcatatagg tactcacagt atggtttcta ctaagtgtgt actgctttca cacctttgta 36000

aagtcaaaaa attgtaagtt gaactatcgt cagttgggga aggtctacag cttgcacaaa 36060

gtgacacatc tagtaagtgg agaagcataa ttcgaataca gaacacttga ttcctccagg 36120

gtagaattct ttctccaacc ccagagctgc ctgatttttt tttttttttt tttgcagtaa 36180

cagaaataca aataactagc ttgttactgt gagtatatat ttctttttgc ccaacttcat 36240

aagaagttaa tgcatataaa tcatagagct aagtcccacc gaataatgtc attctgttaa 36300

actaatatcc tatctgacac aatgctatgg ggaaagtgag agtctccgcc aagtgcagtg 36360

atggtgatga tcatgcagtt catttccttc agaattttat actcagaaca gagtgtccca 36420

aacatatcgt gttggaaaaa aaaaaagaag catcaaatgt aatgtataat tgtttgtggg 36480

actcttgaaa tgcatcccgt gccaattctg ggccttaaag ccatgttttg ttaattaaag 36540

gattgtttct ttaaactgcc agacttcttt gtggaacatc accctggtaa ttagcaggac 36600

attttcttct tacatttgat agatctagtc agtcagccct agaagaaagc aatttcactt 36660

aaaaaaaaaa atctattcca gccatttctt atttgttgca gaatttaaga taattaattt 36720

gtatatgtta taaaagttgg cctgaattat tatggcttcg ctttttttgt ggtaaaaaca 36780

cttaacatta aatttaccat ctctcaattt taagtgtaca gttcagttgt gttaagtata 36840

ttcacattat tgtgtaacag atctctagaa ctttgtcatc ttgcaaaact aaaactttat 36900

tcctattaaa cactaattcc ctctacctcc aagcccttgg caaccacctt tctactttct 36960

gtttctatga ttttggctac tttatatgaa tggaatcacg tactattcac gctattgtga 37020

atggcttatt tcataatgtc ctcaagattc atccgtgttg tagcatatga caggacttcc 37080

tttttaaagc tggatagtat tccattgtat gtacacacca cattttcgtg tgtgtgtgtt 37140

tgtgtgtgtg tatgtagtag tggtttttac tgattggcac aagatcacgg cctgtgcttc 37200

caataccctt ccctcctatg cagctcaaat ggaaggaaac tgattaacac ataggaagca 37260

atagcatgct tacaggttta aactcctttc gtttttacaa aaaggagtgg gatatggggg 37320

gtggtacaat tttaggggta gtagcaaaac tctccctaga ctacagtggg tgggcctgtc 37380

tgtcccctgt tgctggtacc acataagaag gttcatcagt aaaggaaaaa agggttacat 37440

gtggttggcc tgctattaag aggggaagat aggatggtat ctgctgtgta cctgtgttgg 37500

gccaaacctg ggactggacc agtgcccctt ttttcttggc ccacctacac aacccagctg 37560

tactgtctcc tgcacccatg ggaaggaggt gtgaaggaag ctgagaacat ccgccttgag 37620

aagatgaaac aggaaacctc actttccttt cactttctct ggactaaatt ccactcccct 37680

cagctctgga aagcactgca aaagtcttcc ttaggagtgc tgtgaagacg ctggggaaga 37740

tgccggccca ggcaggtggc cctgagtgtg caaaaagaaa aacttgactt tccatgcagt 37800

atcaagcaag gttactttgt aaacaaacaa aactggaaaa taagactaca tactaagtcc 37860

ttgagagcat ttggattggg ggcaagggct ttattactcc ttcccccccc cattttataa 37920

ccccacacca agtgtcaaga gctttaagga ccacaaccaa ccccaccttc ccttcaagca 37980

ccattccttg ggttcctcag ttttgttgag ctcatttggg gttattcctg ccaccctctt 38040

aaaaaatgac tcagcctgct ggttggtcca ttttctaccc tttctacaat tatgaaacac 38100

actctctaaa taggagatac ataagccctc actctatagt ccaaggaact aggtgatata 38160

atgccaggaa ggctaaattg tttgctttcc tgggtaatcc tgatgtgaat ggacagcagc 38220

agggttctgg tgggatcaga gcagtctagt ttgagccacc gcaccacatt tttttttctt 38280

tttttttaat taattttaat tttttttttt aaagctccag ggtacctgtg caggatgtgc 38340

aggtttgtta catgggtaaa cgtgtgccat ggtggtttgc tgcacctatc aacccatcac 38400

ctatgtatta agcccaacat gcattagctg tttttcctaa tgctctccct cccctcaccc 38460

caccacccaa caagccctgt gtgtgtcgtt cccctccctg tgtgtccatg tgttctcatt 38520

tttcagctcc cacttataag tgagaacatg tggtgtttgg ttttctgttc ctgcgttagt 38580

ttgctgagga taatggctgc cagcttcatc catgtccttg caaaggacat gatcttgttt 38640

ctttttataa ctcagaaata agaccaccca tctacaacca tctgatcttt gacaaaccta 38700

acaaaaacaa gcaatgggga aaggattccc tatttaataa atggtcctgg gagaactgac 38760

tactcatatg cagaaaattg aaactggacc ccttccttac accttataaa aaaactaact 38820

caagatagat taaagactta aatgtaaaac acaaaactat aaaaacccta gaagaaaatc 38880

aaggcaatac cattcaaaac ataagcacag gcaaaatcac caaaagcaat tgcagcaaaa 38940

gcaaaaattg acaaatggga tctaattaaa ccacattttc cttatccatt catttgtcaa 39000

tggacatttg ggctgcctct ccctcttggc tattgtgaat aataataggt gcaatgaacg 39060

tgggtgtaca aatatctctt taagattccg ctttaattct tttggatatg taccctgaac 39120

tgggacataa tcgtatggtg attatatttt caattttttg agaaatcact atattgtttt 39180

ccataatggt tgcaccattt tacattctct acaacagtga acaagggtta caatttctct 39240

acatcctttc caatgcctgt tattttctgt tgtgatagtg tccatcctaa tgagtatgag 39300

gtgatatttc attgtgcttt ttatttgcat ttctcttatg attagtgata tggagcattt 39360

tttcatatgc ttgtgggtca tttgtatgtc tttggagaat tgtctattta agcccttcac 39420

ccatttttta ataaggttat tttgttgtag gagtttataa tatattctgg atattaaccc 39480

tttatcatat atataattta aaaatattgt ctcccattct gtaggtcatc tttttttgct 39540

gttgattatc tcctttgatg cacagacctt aagtttgaaa tcatctcatt tgtcttctgt 39600

tgttgttgtc gttgcctgtg tttttggtgt catatctaag aaaccattgc caaataccct 39660

gaagcttttt ccttatgttt tcttctagga gttttatagg tttaggtctt atggttaggt 39720

ctttaatgca ttttgagtta atttttgtat atggcataag gtaagagtac aacctcattc 39780

ttttcatgta gatatccagt tttcctcaca caatttgttg aagaaactgt cctttattgt 39840

atagtcttgg cacccttgtc aaagatcata aagagcatgt atagaaggct ttatttctgg 39900

actctgttcc attggtctgt atgtctgcct ttatgtcagt accacaccat cttgattact 39960

gttgccttac agtatgtatt gaaatcaaga agtgtgaagt ctccaacatt gttctttttc 40020

aggattactt tggcaattta aaatctcttg atcttatatg aattttagat ttttttcctg 40080

tagaaattac cattgagatt ttgatagaga tggcattgat tctgtagatt gttttgggtg 40140

ttatagacag tatgacaata ttaaattttc cagtctataa acatgggatg tttcatcatt 40200

gtgtttatat catctttgat ttattttggt tatctcttaa caattttcat tgtacaagtc 40260

ttttgcctcc tcagttcgat tcattcctaa gcattgtatt ctttctgata cttttgtaaa 40320

tggggttgtt tccttaattt ccttttcaga ttagtcattg ttagtttatg gaaatataac 40380

tcatttgtgt gttgattttg tatcctgcaa atttgctaac atcatttatt agttttagtg 40440

ggttttttgt gggatcttta ggattttctg tatatatgag attatgtaat ctgggaacag 40500

ataattttac ttcttttcca tttgaatgcc ttttatttat ttttcttgtc taattgctgt 40560

gactagagtt tctagtactg tgttgaatag aaatggcaag aataggcatc ctttccttgt 40620

tcccattctt agaggagaaa ctttcagttt tttgctatta agaatcattt taactgtgga 40680

cttttcatat gtgactttta ttatgtgtag gtactttcct tccattcttc atttgttgag 40740

tgtttttatc atgaaaaagt gttgaatttt gtcagatggt tttgtgcatc aattgagatg 40800

atcatgtgtt tttacttctt cattctgtta atgtggcata ttatactgat agtttttcac 40860

atatggaacc ttccttgcat tcctggtata aatccaactt gttcatggta tataatcttt 40920

ttaatatgag aagttttgca tcagtatgca ttagggatat tggtctgtag ttttcttgtt 40980

gtgataatgg atttacattt aaacactatt ggcgagtagc tcctgagaaa tgccatacat 41040

tgtaaacatc taaaatggct taaggactct ataataaagt tgttctatgt ataatgtcac 41100

attaaaaaag tttggtgaaa tttgctaaag agaattcaga attaaataca aatagaaata 41160

tcttaaacat ctcctttttt attaaggatg tttaattcct tgctgccaaa ggaatgtctt 41220

ctaggatgtg gagaggaaat tcttatacat acattcttat agaatgtagg agaaaaaaat 41280

gtcttcctct gtgcttgatc tgatttctaa cattctgagt ttccatggtt gattggttgg 41340

ttagttgctt gaaaaaggta tgtgtgtatg tcaaagaaaa atttgaacat ttcaacacag 41400

ttatctcaaa tcatataatt taaactaaaa tgggggcatt agctataata atgttgaacc 41460

tatagcccca taaaggctat ttctcaatac taacagactg ttttggaagt ctctcacaca 41520

actttaatac atattttact tcttggtaca tttccttaca ttcaatagaa acataaaaat 41580

tagttgaggc tgggtgcggt ggctcacacc tgtaatccca gcactttggg aggccgaagt 41640

ggacggataa cgaagtcagg agatccagac catcctggct aatgtggcaa aaccttgtct 41700

ctactgaaaa tacaattagg tgtggtggca cgtgcctgta gtcccagcta ctcacaaggc 41760

taaggcagga gaattgctta aacccgggag gcagaggttg cagtgagccg agatcgcacc 41820

actgcactcc agcctgggcg acagagcgag actttgtctc aaaaaaaaaa aaaaaaaatt 41880

agttgaaatt ctgtctcagt tatgaaaggt agctttattc ttttggtttt ctattttgag 41940

ttatgactga gaaataacct gtggcagagg ttttcttaac aatgtattgt ggccagtgca 42000

cctgtttcaa gattactcta aacagaaaca agagtgaaat aaatttgtgg agttaataat 42060

aaaaatgtta ttctctgtgg tatgttttct tttcttttgt ttttttaaga cagggtcttg 42120

ctctgttgcc caggctggag tgcagtggcg ccatcttggc tcactgcaac ctctgcctcc 42180

caggttcaag cgattctcct gcctcaggcc cctgagtagc tgggattaca ggcacgtacc 42240

accacgccta gctaattttt atatttttag tagagacagg gtttcaccat gttggtcatg 42300

ttggtctcga actcctgacc tcatgatctg ccccctgcca gcctcccaca gtgctgggat 42360

tacaggcgtg agccaccgcg cccggcctgt attttttcat ttcatagaat ttccagataa 42420

aagtcagagt caactagttt tataatactg aaaagttttg caaatacaag catgtcactt 42480

aatgatgggg atgtgttctg agaaatgtgt cattaggtga ttccgtcatt gtgcaaatgt 42540

catagagtat acttacataa acctaggtgg tatgtagcct atatgatata tgtggcttat 42600

atgatatacc ctattgctcc taggctgcaa acctgtatag catgttacta tcctgaagtc 42660

aatgggcaat tgtaacacaa tggcaagtat ttgtgtattg aaacataagg gtatagtaaa 42720

aatatggtac tattaataca actgtatggg actaccattg tatatgcggt ccatcattgg 42780

ccaaactttc tttatggtgg cacaagacta cataataaat ggtaaagtaa ccagacttgg 42840

agatggggag gagggagaag aatgccaaat gtatgtttcc tcccacagac tagcaggcat 42900

ctagtatcag gcaacacact tatacaatca tttcctactc ctgtctcaca cttgccagaa 42960

tctggattta attttttttt tttattgtta gaccagtaat gcagttttca tattttgtat 43020

aacaaaaaag ttgtaggact tttccttctt actgtgaaaa tatgactcat taaatacata 43080

acttttagta ttggccattt gtattcttat actcttagtc acaaagataa ctacgtttta 43140

caaagtcgaa aggttaataa tagcagctag catgaattca gagcttgcta tgtattgagc 43200

actgggttta aacacatatg ctctatttta ttaagtcctt atagtaggaa agtgaagaat 43260

acactagtca ctgaagttcc ttcagtgctc aagactcaag tgcactatag caagacaaac 43320

accaggaaac atgtaactct gcttcgaata ctttagcaag tgaatggccc agtttgggaa 43380

agcaagacaa acactggatc cataatggct ttttacacct gattggaatg cagaaaaaat 43440

ggaaccacta actactaata ttatctttgc cagcaggtga gcagtacata cctgacttca 43500

gaggatttta ttgaaaccaa tagatgatgg ttaataaaaa caaatatcct cagctttcct 43560

tcttttactt gtcatctgac aaccactatt tagctaaaac taaaatggat tagagataca 43620

agatgatgaa taacaattat taacttttgt gagcatataa tgtgagtcag ctactacact 43680

aagaacttta catagattcc cttaattttc tcaataatcc tatgagaact gtccttgtat 43740

gagcaacccc attttatagc tgaagatact tgaggcttca agaggttata taaacatgtt 43800

catggtcaac agttattaag cagtgagtga cattctcacg agattaatga gatcatctgt 43860

gtgagataca aatacatcta ttgtgtatgt ttgtgttttt aatggagacc aatggtatga 43920

cagaatgaag tccttttatc agtcagtcaa gatctgatgt ggctattcaa atataggcaa 43980

aactgatgtt ttcctttttt agttaagtta aatgtaatat ttaaataact gtgaatattt 44040

agaatattca cagaattgtg caaccatcac cacaatcttt agaatatttt catcatctca 44100

aaaagatact ttgtagcctt tagcaccctt cccactgtac ccccccccat acccctggcc 44160

ataggcaact actaaattac tttctgtccc tgcaggttgt cctattctgg atactttgta 44220

tatgtggaat cataaaatag gtgatctttt atgactggca tctttcaagc atgtttttga 44280

tattttcatc catgttgtag gatattaaat taactttttg cataggaata actgagctag 44340

aaaagcattg gctgaatatg tctgcagaat gtagcattta gaaaagaaag acttccagga 44400

gacaaatgag gtagtaacta aaatgtaaat aactaaaaat tagctttgag tctttaataa 44460

actacctttc atgttttgct ttcactagga atgaactttt aattttttgg agctataaat 44520

acatgtagtt tctaaagaca tctttgtttt taaagaaaag acatctgcag gctttttctt 44580

agtgttccta ttaagtatgt atgagtgtgt gcatttgtgt gtgtgtgtgt gcatgtttag 44640

tgactttaca tgtgtataca tacaaatgta cacagtcata tatgactagt ggtacatgga 44700

atctcaattt aattgtaaaa gtgaaggagt tctaaaacta gttttagtat agtaagtggg 44760

atatagtaag aatgtcctac aatttaaaag cttatttggt tatcttcaat ggattttgaa 44820

tgtattcaat actagatttg cgagtgacta tgccttttta gtaaacaaaa gaaaggctat 44880

aatgtagaaa gtatatggaa taagcataac atctgtccta atctaatttt caggcacatc 44940

tccagacttc aatttggctg aaataattca tgccacggac ctgtgcacat gcctggaatt 45000

gagagacaca gttaaaagac tccaagttgc tttctgcctt ttgaaaactc ctgaaaacca 45060

tccctttgga ctctggaatt ctacacagct caaccaagac tttgcttgaa tgtttacatt 45120

ttctgctcgc tgtcctacat atcacaatat agtgttcacg ttttgttaaa actttggggt 45180

gtcaggagtt gagcttgctc agcaagccag catggctagg atgagctttg ttatagcagc 45240

ttgccaattg gtgctgggcc tactaatgac ttcattaacc gagtcttcca tacagaatag 45300

tgagtgtcca caactttgcg tatgtgaaat tcgtccctgg tttaccccac agtcaactta 45360

cagagaagcc accactgttg attgcaatga cctccgctta acaaggattc ccagtaacct 45420

ctctagtgac acacaagtgc ttctcttaca gagcaataac atcgcaaaga ctgtggatga 45480

gctgcagcag cttttcaact tgactgaact agatttctcc caaaacaact ttactaacat 45540

taaggaggtc gggctggcaa acctaaccca gctcacaacg ctgcatttgg aggaaaatca 45600

gattaccgag atgactgatt actgtctaca agacctcagc aaccttcaag aactctacat 45660

caaccacaac caaattagca ctatttctgc tcatgctttt gcaggcttaa aaaatctatt 45720

aaggctccac ctgaactcca acaaattgaa agttattgat agtcgctggt ttgattctac 45780

acccaacctg gaaattctca tgatcggaga aaaccctgtg attggaattc tggatatgaa 45840

cttcaaaccc ctcgcaaatt tgagaagctt agttttggca ggaatgtatc tcactgatat 45900

tcctggaaat gctttggtgg gtctggatag ccttgagagc ctgtcttttt atgataacaa 45960

actggttaaa gtccctcaac ttgccctgca aaaagttcca aatttgaaat tcttagacct 46020

caacaaaaac cccattcaca aaatccaaga aggggacttc aaaaatatgc ttcggttaaa 46080

agaactggga atcaacaata tgggcgagct cgtttctgtc gaccgctatg ccctggataa 46140

cttgcctgaa ctcacaaagc tggaagccac caataaccct aaactctctt acatccaccg 46200

cttggctttc cgaagtgtcc ctgctctgga aagcttgatg ctgaacaaca atgccttgaa 46260

tgccatttac caaaagacag tcgaatccct ccccaatctg cgtgagatca gtatccatag 46320

caatcccctc aggtgtgact gtgtgatcca ctggattaac tccaacaaaa ccaacatccg 46380

cttcatggag cccctgtcca tgttctgtgc catgccgccc gaatataaag ggcaccaggt 46440

gaaggaagtt ttaatccagg attcgagtga acagtgcctc ccaatgatat ctcacgacag 46500

cttcccaaat cgtttaaacg tggatatcgg cacgacggtt ttcctagact gtcgagccat 46560

ggctgagcca gaacctgaaa tttactgggt cactcccatt ggaaataaga taactgtgga 46620

aaccctttca gataaataca agctaagtag cgaaggtacc ttggaaatat ctaacataca 46680

aattgaagac tcaggaagat acacatgtgt tgcccagaat gtccaagggg cagacactcg 46740

ggtggcaaca attaaggtta atgggaccct tctggatggt acccaggtgc taaaaatata 46800

cgtcaagcag acagaatccc attccatctt agtgtcctgg aaagttaatt ccaatgtcat 46860

gacgtcaaac ttaaaatggt cgtctgccac catgaagatt gataaccctc acataacata 46920

tactgccagg gtcccagtcg atgtccatga atacaaccta acgcatctgc agccttccac 46980

agattatgaa gtgtgtctca cagtgtccaa tattcatcag cagactcaaa agtcatgcgt 47040

aaatgtcaca accaaaaatg ccgccttcgc agtggacatc tctgatcaag aaaccagtac 47100

agcccttgct gcagtaatgg ggtctatgtt tgccgtcatt agccttgcgt ccattgctgt 47160

gtactttgcc aaaagattta agagaaaaaa ctaccaccac tcattaaaaa agtatatgca 47220

aaaaacctct tcaatcccac taaatgagct gtacccacca ctcattaacc tctgggaagg 47280

tgacagcgag aaagacaaag atggttctgc agacaccaag ccaacccagg tcgacacatc 47340

cagaagctat tacatgtggt aactcagagg atattttgct tctggtagta aggagcacaa 47400

agacgttttt gctttattct gcaaaagtga acaagttgaa gacttttgta tttttgactt 47460

tgctagtttg tggcagagtg gagaggacgg gtggatattt caaatttttt tagtatagcg 47520

tatcgcaagg gtttgacacg gctgccagcg actctaggct tccagtctgt gtttggtttt 47580

tattcttatc attattatga ttgttattat attattattt tattttagtt gttgtgctaa 47640

actcaataat gctgttctaa ctacagtgct caataaaatg attaatgaca ggatggggtt 47700

cccctgtgct tttaccagta gcatgacccc ttctgaagcc atccgtagaa agtactttgt 47760

cctccaaaaa gctaacatac ggttttgaag cagcattgaa acttttgtag caatctggtc 47820

tatagacttt taactcaaga agctaaggct agacttgtta ccttcgttga atgatgttag 47880

ttgactgtac tgtaatgttg tatcaactga attgaatgtt tgcctttaaa caatgaattt 47940

tctttttctt tccttttttt tttttttgtt gtaatagtta aagaggctta gaacaagcta 48000

acaggcaata gaaatatgta tatcagattt tttaatgtaa caaactacat gttaattgtt 48060

atcttattct ttttatcttt agtagacact tttaaaagaa aagacaagtt tgttgtgttt 48120

aactcaccaa cacgtggtgt ataatgaaga cagaactata ataaattagt tttgttctga 48180

ttttttagaa cacttgcaat aatgtatcat ttatagttct tgctagttgc agtggtaata 48240

tttttcacat ccataaaaac aactaccaaa ataaatcagc tgtagcatgt tgctttttaa 48300

agctaggccc taaaaggttt taattctttt tctaagggaa gaaatgtcta ttttaattaa 48360

gatattttaa tgaacaggat ttctgtattt taaatagtac tgactagcac ctaatgggca 48420

gtgggagggt ggttcatatg aagaaaaaaa ggtgtattgt tgtatcccat gcataaataa 48480

aggtaaatat atatatacac caatatattc atatatactc acacacatcc caacctgtca 48540

cacacaatgc gtgtgtatat atatatgaat atattggata tgtcatttct gtaagagttt 48600

tgttaaaacc tgattttctt ttgtagtatc cacattcttc atcaaagtac aaaaacgtct 48660

gtggagtgtc acaaactgta tgacatgtta tttcttttta acagttgtct atatgcttag 48720

acccgtgtta gtctctatat ctgtgtggca atatctgctg agacaagtaa atgattaata 48780

gaaaacaaaa caacttccgt acagttcaaa cttttcatcc aaatatatat agacagtttt 48840

ggagaattgt ttcaagatta tagaggaaac atgtaacatt tagagcagat ggaactaggt 48900

ttaggtagaa ggccagttcc acaaagggca gagggaggga tgggatttaa taggtaaaga 48960

agaacccatt tgaaaataaa ggttgtttca aaaggcagct gccgccaggc acacagcatt 49020

ccatcagaca ggtgccagac aagcaaaagc aaggaagttg gcagaaagaa agtccaggtg 49080

atgtaggttg aggtatttct ttctttggca gtatcttgct tttgtgaatc actttattaa 49140

aaaaaatcac tttcttccca ttcttaaggg gttttggcaa acagaatttc agatcttgaa 49200

acaaatgagc tgcaacagaa aaataagtac ctgagctcga ggtatccctt cccaaagcct 49260

tcacttattg gtgagaaaaa cctgggccca gggagggctt gcagcttacc cagttcggac 49320

tcctgccagt tcagcgctct gcactccatt gattgttcta ggcccggcag cctgttaggt 49380

tcctgtgcag ggcccctctt ttgcagttct gaataacctc tagtgcccct gcttcaaaaa 49440

tgcagtacat cctcaagttc ccatttactc aggatacatt ttagcacagg gcagatcaga 49500

cggtgtctct actgttagta ttgcaaagta tgtatgggaa acacagagaa ttggagctgc 49560

gttgaatgca aacttgaggt gtttcccttg aggaattctt gtcttcaaac gtctgcagag 49620

taatggacca tgttacaact ttcctgttca tctgtgaacc atgaaaatgg atggcactga 49680

tgcattagac cctcagcagc ctgcaattgc aaatctgcga ggtttcattc ggcccataaa 49740

gcaaacattt gaacttacac agaatgagca cttaaatacg ggtgcaataa atgaagggaa 49800

aaacctcagc cgtttctcca ttctgaagat atagcaagca ccgggaaatc taagattttt 49860

catcaacaat atcttctgcc agcccagttt ggggggaaaa acccctttta catttttctt 49920

cagtaaagta ctggaactta cttttccctg tctgtgctaa tgagctgatt ttcagctgat 49980

agaaaacaaa atgatagagt acttttttcc ttggccaagt attttctcat ttgtatttaa 50040

tttcataaat tagacagcca gtgaaattag acctcaaact aggtcctgat ggataatgaa 50100

tgttatgtca cctttaacag tgaagtggtt attataggtc actttctaat ttcatatttt 50160

cccttttgct ttctgctgcc ttcagggtat atagtgtatc tctaacctga tttttcaagg 50220

ttatttttgg agcagtttct taaaacaggc attccctaac ttgctcattt aattaatgaa 50280

aaattgaact gatgccatgg atataaaaac aaatgtaatg tttgattgtc agtgtttctg 50340

atttggcaaa aaggaatcat ctctattttt ttgcaaacaa tatcaaagtg catattttct 50400

ctca 50404

<210> 22

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 正向引物

<400> 22

gatcggatcc atggctagga tgagctttgt tatagca 37

<210> 23

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 反向引物

<400> 23

gatcctcgag ttaccacatg taatagcttc tggatgtgt 39

Claims (13)

1.一种抗体或其抗原结合部分，其包括：

(a)重链可变结构域，所述重链可变结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有约90％到100％一致性；以及

(b)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域的氨基酸序列与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有约90到100％一致性。

2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述重链可变结构域是SEQ IDNO:1并且所述轻链可变结构域是SEQ ID NO:2。

3.一种抗体或其抗原结合部分，其包括：

第一重链互补决定区(HCDR1)，所述HCDR1的氨基酸序列与SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:15具有约90％到100％一致性，

第二重链互补决定区(HCDR2)，所述HCDR2的氨基酸序列与SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:16具有约90％到100％一致性，

第三重链互补决定区(HCDR3)，所述HCDR3的氨基酸序列与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:17具有约90％到100％一致性，

第一轻链互补决定区(LCDR1)，所述LCDR1的氨基酸序列与SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:18具有约90％到100％一致性，

第二轻链互补决定区(LCDR2)，所述LCDR2的氨基酸序列与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:19具有约90％到100％一致性，以及

第三轻链互补决定区(LCDR3)，所述LCDR3的氨基酸序列与SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:20具有约90％到100％一致性。

4.根据权利要求3所述的抗体或其抗原结合部分，其中，

所述HCDR1是SEQ ID NO:3，

所述HCDR2是SEQ ID NO:4，

所述HCDR3是SEQ ID NO:5，

所述LCDR1是SEQ ID NO:6，

所述LCDR2是SEQ ID NO:7，并且

所述LCDR3是SEQ ID NO:8。

5.根据权利要求3所述的抗体或其抗原结合部分，其中，

所述HCDR1是SEQ ID NO:9，

所述HCDR2是SEQ ID NO:10，

所述HCDR3是SEQ ID NO:11，

所述LCDR1是SEQ ID NO:12，

所述LCDR2是SEQ ID NO:13，并且

所述LCDR3是SEQ ID NO:14。

6.根据权利要求3所述的抗体或其抗原结合部分，其中，

所述HCDR1是SEQ ID NO:15，

所述HCDR2是SEQ ID NO:16，

所述HCDR3是SEQ ID NO:17，

所述LCDR1是SEQ ID NO:18，

所述LCDR2是SEQ ID NO:19，并且

所述LCDR3是SEQ ID NO:20。

7.根据权利要求1到6中任一项所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或所述其抗原结合部分与干细胞表面糖蛋白结合。

8.根据权利要求7所述的抗体或其抗原结合部分，其中所述干细胞表面糖蛋白是富亮氨酸重复神经元蛋白1(LRRN1)。

9.一种缀合物，其包括：

根据权利要求1到8中任一项所述的抗体或其抗原结合部分；所述抗体或其抗原结合部分可操作地附着到一治疗剂或一诊断剂。

10.根据权利要求9所述的缀合物，其中所述治疗剂是第二个抗体。

11.一种用于抑制癌细胞的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用根据权利要求1到8中任一项所述的抗体或其抗原结合部分。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述癌细胞表达富亮氨酸重复神经元蛋白1(LRRN1)。

13.根据权利要求11所述的方法，其中所述癌细胞是胶质瘤、淋巴瘤、肺癌、胰腺癌、类癌、结直肠癌、头颈癌、胃癌、肾癌、尿路上皮癌、睾丸癌、宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌、乳腺癌、皮肤癌或黑素瘤。

Images