CZ163999A3 - Proteiny rodiny Notch, jejich geny ligandy - Google Patents

Proteiny rodiny Notch, jejich geny ligandy Download PDF

Info

Publication number
CZ163999A3
CZ163999A3 CZ991639A CZ163999A CZ163999A3 CZ 163999 A3 CZ163999 A3 CZ 163999A3 CZ 991639 A CZ991639 A CZ 991639A CZ 163999 A CZ163999 A CZ 163999A CZ 163999 A3 CZ163999 A3 CZ 163999A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
notch
cells
ligand
delta
serrate
Prior art date
Application number
CZ991639A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ295997B6 (cs
Inventor
Jonathan Robert Lamb
Margaret Jane Dallman
Gerald Francis Hoyne
Original Assignee
Lorantis Limited
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9623236.8A external-priority patent/GB9623236D0/en
Priority claimed from GBGB9715674.9A external-priority patent/GB9715674D0/en
Priority claimed from GBGB9719350.2A external-priority patent/GB9719350D0/en
Application filed by Lorantis Limited filed Critical Lorantis Limited
Publication of CZ163999A3 publication Critical patent/CZ163999A3/cs
Publication of CZ295997B6 publication Critical patent/CZ295997B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
    • G01N33/5047—Cells of the immune system
    • G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2799/00—Uses of viruses
    • C12N2799/02—Uses of viruses as vector
    • C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
    • C12N2799/027—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a retrovirus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
    • G01N2500/02—Screening involving studying the effect of compounds C on the interaction between interacting molecules A and B (e.g. A = enzyme and B = substrate for A, or A = receptor and B = ligand for the receptor)
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)

Description

Proteiny rodiny Notch, jejich geny a ligandy
Oblast techniky
Vynález se týká použiti terapeutických sloučenin při modifikaci aktivace T-buněk. Zvláště se vztahuje k jejich použiti při modulaci interakce mezi proteiny rodiny Notch a jejich ligandy a dále k použití těchto látek při terapii stavů, jako je odmítnutí transplantátu, autoimunita, astma, infekční onemocnění a nádory.
Dosavadní stav techniky
Řízená interakce mezi T-buňkami a buňkami vykazujícími antigen (ACP) je životně důležitá funkce lidského imunitního systému. U jistých patologických stavů může být terapeuticky výhodné modifikovat takové interakce, ať už pozitivně nebo negativně. Při stavech, jako je například autoimunita, alergie a odmítnutí transplantátu, je nutné vyvolat tlumení imunitní odezvy stimulací negativní interakce T-buněk nebo interakce Tbuňka-APC. Modely „infekční tolerance a „vázané suprese naznačují, že stačí indukovat malé množství T-buněk a tyto Tbuňky pak přenášejí tuto toleranci na jiné T-buňky a tak se předchází účinnému imunologickému účinku. Při jiných patologických stavech, jako je nádorem indukovaná imunosuprese, parazitická virová nebo bakteriální infekce, je imunosuprese běžným jevem. Při takových stavech je proto nutné inhibovat interakce T-buněk probíhající při infekční toleranci.
Doposud však není znám mechanizmus, který probíhá při interakci T-buněk a T-buňka-APC. Dokument WO 92/19734 popisuje nukleotidové sekvence lidských genů Notch a Delta a aminokyselinové sekvence proteinů, které kódují. Popis ukazuje, že rodina genů Notch je důležitá při regulaci vývoje embryonální buněčné linie hmyzu, jako je Drosophila.
····· · · 0 000 9 * « • · · · · · • · ·· 0 09 ··
Proteiny patřící do rodiny Notch jsou transmembránové receptory, které obsahují několik konzervativních peptidových motivů. Každý protein rodiny vykazuje přítomnost charakteristické repetice podobné extracelulárnímu EGF (epidermální růstový faktor) a juxta-membránovému Lin-12/Notch motivu. Každý protein má navíc na konci uloženém v cytoplazmě 6-8 motivů repetice ankyrinu spolu se sekvencí PĚST. Ligandy Notch mají diagnostickou doménu DSL (kde D znamená Delta, S znamená Serrate a L je Lag2), která obsahuje na N-konci proteinu 20 až 22 aminokyselin a na extracelulárním povrchu obsahuje 3 až 8 repetic podobných EGF. Proteiny mají krátký konec uložený v cytoplazmě, jehož funkční domény nejsou konzervativní.
Současné důkazy naznačují, že signál Notch se podílí na vývoji nezralých T-buněk v thymu a směruje vývoj thymocytů směrem k linii CD8+, která je nezávislá na rozeznání MHC (Robey E., et al. Cell 1996, 87: 483-492). Během zrání v thymu buňky získávají schopnost rozlišit vlastní antigeny od těch, které jim nejsou vlastní. Tento proces se nazývá autotolerance (von Boehmer H, et al. Ann Rev Immunol. 1990; 8:
531) . Důležitost mechanizmů indukce a udržení tolerance je v mnoha ohledech podhodnocena. Existuje řada experimentálních modelů odmítnutí transplantátu, autoimunitního onemocnění a specifické odezvy na alergeny, které jasně ukazují schopnost indukovat stav, kdy u recipienta imunizovaného antigenem nedochází ke specifické odezvě (tolerance nebo alergie). Při použití těchto systémů se došlo ke dvěma důležitým zjištěním. Za prvé, imunizace peptidovým fragmentem antigenů za určitých podminek může inhibovat specifickou odezvu ne pouze na tento fragment, ale také i na jiné oblasti stejné molekuly, přičemž se intaktní protein používá při opakované imunizaci (vázaná suprese; Hoyne GF, et al. J. Exp. Med. 1993; 178:183 a Metzler B, Wraith DC. Int. Immunol. 193; 5:1159). Za druhé, při použití experimentálních modelů transplantace je nejlépe ·· ······ ·· ·· • ·· · ···· ····· · · · ··· ··· • · · · · · ·· ·· · ·· ·· popsaným jevem „infekční tolerance, kde se praví, že imunokompetentní buňky, které jsou tolerantní ke specifickému antigenu, jsou schopny inhibovat odezvu jiných buněk a dále že tato druhá populace buněk se stává regulační a tolerantní populací (Qin SX, et al. Science 1993; 258:974). Imunologické mechanizmy probíhající při těchto jevech nebyly dosud charakterizovány.
Vynález vznikl na základě objevu receptoru rodiny Notch a jeho ligandů, Delta a Serrate, které se exprimují na buněčném povrchu normálních zralých buněk periferního imunitního systému.
Podstata vynálezu
Vynález popisuje použití ligandu Notch při výrobě léčiva pro použití v imunoterapii.
Expresivní patern receptorů rodiny Notch a jejich ligandů v normálním periferním dospělém imunitním systému nebyl doposud popsán, ale vynález ukazuje, že T-buňky mají vrozenou expresi mRNA Notch 1, zatímco exprese Delta je omezena pouze na nastavení T-buněk v periferních lymfatických tkáních. Exprese Sterrate je omezena na úlohu buněk nesoucích antigen (APC) v periferním imunitním systému (obrázek č. 1) . Proto tato rodina receptorových ligandů může pokračovat v regulaci rozhodování o osudu buněk v imunitním systému, stejně jak je tomu v jiných tkáních během embryonálního vývoje (Ellisen LW, et al. Cell 1991; 66:649). Signály Notch mají ústřední úlohu při indukci stavu, kdy nedochází k periferní odezvě (tolerance nebo anergie) a mohou poskytnout fyzikální vysvětlení vázané suprese a infekční tolerance.
Vynález dále popisuje použití ligandu Notch při ošetření reakce zprostředkované T-buňkami. Pozorovalo se, že při expozici populace prvně použitých T-buněk ligandu Notch, které exprimují APC v přítomnosti alergenu nebo antigenu, je ligand Notch schopen vytvořit populaci T-buněk tolerantní vůči • · 99 9 9 • · · 9 · · ♦••i :··:·:::···; ··:
··· ·· ·· · ·» ·· uvedenému antigenu nebo alergenu. Tato populace T-buněk, když je následně vystavena druhé populaci poprvé použitých T-buněk, je schopna učinit druhou populaci tolerantní vůči uvedenému alergenu nebo antigenu.
Vynález se také týká použití ligandu-Notch při vázané toleranci a/nebo infekční toleranci.
Další provedení vynálezu se týká použití ligandu Notch při modulaci exprese funkčního proteinu Notch nebo signální cesty Notch.
Ve shora popsaných provedeních vynálezu se ligand Notch může aplikovat na T-buňky inkubací/smícháním T-buněk s buňkami nesoucími antigen (APC), které v přítomnosti antigenu nebo alergenu exprimuji nebo nadměrně exprimuji ligand Notch. (Nadměrné) exprese genu ligandu Notch lze dosáhnout tak, že APC se transfekuji genem schopným exprimovat ligand Notch nebo APC jsou vystaveny působení činidla schopného zvýšit expresi endogenního genu(ů) ligandu Notch.
Vhodná činidla, která ovlivňují expresi ligandu Notch, zahrnují činidla, která způsobují expresi genů Delta a/nebo Serrate. Například' v případě exprese genu Delta se navážou extracelulární BMP (kostní morfogenní proteiny, Wilson, P.A. and Hemmati-Brivanlou A. 1997 Neuron 18: 699-710, HemmatiBrivanlou, A and Melton, D. 1997 Cell 88: 13-17) na jejich receptory, přičemž se zeslabuje transkripce genu Delta, což způsobila inhibice exprese transkripčního faktoru komplexu achaete/scute. Věří se, že tento komplex se přímo podílí na regulaci exprese genu Delta. Libovolné činidlo, které inhibuje navázání BMP na jejich receptory je schopné zesílit expresí genu Delta a/nebo Serrate. Taková činidla zahrnují noggin, chordin, follistatin, Xnr3, FGF, fringe a jejich deriváty nebo varianty (činidlo noggin se popisuje v publikaci Smith W. C. and Harland, R. M. Cell 70: 829-840, činidlo chordin se popisuje v publikaci Sasai, Y. et al., 1994 Cell 79: 779-790). Činidla noggin a chordin se váží na BMP, přičemž
zamezují aktivaci jejich signální kaskády, která vede ke zeslabení transkripce genu Delta.
V některých stádiích onemocnění může být imunitní systém těla oslaben a je nutné zeslabit expresi genů Delta a/nebo Serrate za účelem obejít vynucenou imuno-supresi. V takovém případě se mohou použít činidla, která inhibují expresi genu Delta a/nebo Serrate. Příklady činidel, která inhibují expresi genu Delta a/nebo Serrate, zahrnují protein toll (Medzhitov, R. et al., 1997 Nátuře 388: 394-397), BMP a jiná činidla, která snižují nebo interferují s produkcí činidel noggin, chordin, follistatin, Xnr3,FGF a fringe. Vynález dále popisuje použití činidla schopného snižovat expresi proteinů Delta nebo Serrate při výrobě léčiv používaných při léčení bakteriálních infekcí nebo nádorem indukované imunosuprese.
Jak se popisuje shora v textu, vynález popisuje modifikaci exprese proteinu Notch nebo jeho prezentaci na buněčné membráně nebo signální cestu. Tyto uvedené postupy jsou zahrnuty v odezvách zprostředkovaných T-buňkami, které se podílejí na indukci tolerance (vázané a/nebo infekční). Činidla, která zesilují prezentaci plně funkčního proteinu Notch na povrchu buněk zahrnují matrixovou metaloproteinázu, jako je produkt Kuzbanianova genu u hmyzu Drosophila (Dkuz, Pan, D and Rubín, G.M. 1997 Cell 90: 271-280) a dalších členů rodiny genů ADAMALYSIN. Činidla, která redukují nebo interferují s jejich přítomností, jako jsou plně funkční buněčný membránový protein může zahrnovat MMP inhibitory, jako jsou inhibitory založené na hydroxymatu.
Termín „buňka vykazující antigen nebo podobně není omezen na APC. Odborníkovi je zřejmé, že se může použít libovolný nástroj schopný prezentovat požadovaný ligand Notch vůči populaci T-buněk. Je výhodné, aby termín APC zahrnoval všechny tyto možnosti. Příklady vhodných APC zahrnují dendritické buňky, L-buňky, hybridomy, lymfomy, makrofagy, B-buňky nebo syntetické APC, jako jsou lipidové membrány.
* · · · » · · * ··· ···
V případě, že APC se transfekují genem schopným exprimovat ligand Notch, transfekci lze provést virem, jako je například retrovirus nebo adenovirus nebo libovolným jiným nástrojem nebo způsobem, jenž je schopný zavést gen do buněk. Mezi ně patří libovolný nástroj nebo způsob, který je účinný při genové terapii a zahrnuje retroviry, lipozomy, elektroporací, jiné viry, jako jsou adenovirus, adeno-asociovaný virus, herpesvirus, vakcinii, DNA sráženou fosforečnanem vápenatým, DEAE dextranovou transfekci, mikroinjekce, polyethylenglykol, komplexy DNA-protein.
Pří použití takových nástrojů a způsobů samotných nebo v kombinaci je možné řídit zavedení genu na určité místo určité populace buněk, což umožňuje, aby se metody podle vynálezu uskutečnily in vivo. Virus se může použít v kombinaci s lipozomy za účelem zvýšit účinnost přijmutí DNA. Specifity pro určité místo lze dosáhnout inkluzí specifických proteinů (například jednořetězcové protilátky, které reagují s CDllc v případě dendritických buněk/makrofágů) ve virovém obalu nebo lipozomu.
Upřednostňuje se použití konstrukce, kde exprese genu (například serrate) je spojena s expresí antigenu. APC, které (nadměrně) exprimují gen serrate, budou také exprimovat velké množství relevantního antigenu a tak budou přednostně interaktovat s T-buňkami správné specifity.
Další provedení vynálezu se vztahuje k molekule, která obsahuje část ligandu Notch, spojenou s částí alergenu nebo antigenu T-buňky tak, že při vystavení T-buňkám jsou obě části schopny se navázat na svá místa. Taková molekula je schopna učinit T buňku specifickou pro tento antigen/alergen tolerantní vůči tomuto antigenu nebo alergenu, jehož základ tvoří uvedená část antigenu nebo alergenu. Specifitu části ligandu Notch zaručuje příbuznost částí alergenu nebo antigenu.
Ί
999 99 99
999 999 způsobené
Helminths,
Toxoplasma,
Částí alergenu nebo antigenů může například být komplex syntetický MHC-peptid. Jde o fragment molekuly MHC nesoucí zámek antigenů, který nese element antigenů. Takové komplexy se popisují v publikaci Altman J. D. et al., Science 1996,
274: 94-6.
V dalším provedení vynálezu je sloučeninou fúzní protein, který obsahuje segment Notch nebo extracelulární domény ligandu Notch a Fc segment imunoglobinu. S výhodou jsou to segmenty IgGFc nebo IgMFc.
Ve všech shora popsaných provedeních vynálezu je výhodné, aby ligand Notch pocházel z proteinové rodiny Searrate nebo Delta nebo byl jejich derivátem, fragmentem nebo analogem.
Stádium onemocnění nebo infekce se může popsat jako onemocnění zprostředkované T-buňkami a může zahrnovat buď astma, alergii, odmítnutí transplantátu, autoimunitu, nádorem indukované aberace systému T-buněk a infekční onemocnění například specie Plasmodium, Microfilariae, Mycobacteria, HIV, Cytomegalovirus, Pseudomonas, Echinococcus, Haemophilus influenza typ B,
Hepatitis C nebo Toxicara nebo spalničky. Když se použije správný antigen nebo alergen, je možné použít ligand Notch podle vynálezu k léčbě uvedeného onemocnění nebo infekce..
Vynález dále popisuje způsob detekce imunitní suprese indukovaný organizmem, který napadl jedince. Takové organizmy mohou produkovat rozpustné formy členů rodiny Serrate, Notch a/nebo Delta nebo jejich derivátů nebo proteiny, které způsobují jejich expresi in vivo, čímž indukují infekční tolerantní imunosupresi. Uvedený způsob zahrnuje test přítomnosti Serrate, Delta, Notch nebo jejich derivátů, které nejsou vázány in vivo na membráně. S výhodou obsahuje protilátky proti Serrate, Delta nebo Notch nebo jejich deriváty.
·· ·· φφφφ ·· ·· • φ φ φ φ φ φ φ φφφφφ φ φ φ φ φ · • · · · · φφφ φφφ
Způsoby použití při testech detekce zeslabené nebo zesílené exprese a/nebo úpravu proteinu Notch, Delta/Serrate zahrnují body:
1. Exprese genů Delta/Serrate, Notch a Fringe lze stanovit expozicí izolovaných buněk testovacím látkám v kultuře, což se používá například:
(a) při stanovení množství proteinu specifickým barvením protilátek za použití imunochemie nebo průtokové cytometrie.
(b) při stanovení množství RNA kvantitativní polymerázovou řetězcovou reakcí za použití reverzní transkriptázy (RTPCR) . RT-PCR se může uskutečnit za použití kontrolního plazmidu s vestavěnými standardy vhodnými pro měření exprese endogenních genů a primerů, které jsou specifické pro Notch 1 a Notch 2, Serrate 1 a Serrate 2, Delta 1 a Delta 2, Delta 3 a Fringe. Tato konstrukce se může modifikovat jako nový člen ligandů.
(c) při stanovení funkčního množství při testech buněčné adheze.
Zesílená exprese Delta/Serrate nebo Notch by měla vést k zesílení adheze mezi buňkami, které exprimují Notch a své ligandy Delta/Serrate. Testované buňky se určitým způsobem ošetří v kultuře a cílové buňky značené radioaktivně nebo fluoresceinem (transfekované proteinem Notch/Delta/Serrate) se přes ně přelijí. Směs buněk se inkubuje při teplotě 37 °C po dobu 2 hodin. Buňky, které se nezachytily, se odstraní promýváním. Stupeň adherence se měří stanovením radioaktivity/imunofluorescence na povrchu plotny.
Za použití uvedených metod je možné detekovat látky nebo ligandy Notch, které způsobují expresi nebo zpracování proteinu Notch nebo ligandu Notch. Vynález se také popisuje látky nebo ligandy Notch detekovatelné použitím uvedených testovacích metod.
·· · ·
4 4
4
Vynález také zahrnuje způsoby testování, které zahrnují kontakt (a) proteinu Notch a ligandu schopného vázat se na protein Notch s (b) sločeninou; a stanovení, zda sloučenina umožňuje navázání ligandu na protein Notch přednostně tam, kde protein Notch je spojen s T-buňkou.
Přednostně používané ligandy Notch podle vynálezu jsou proteiny rodiny Delta nebo Serrate nebo pólypeptidy nebo jejich deriváty. Tyto proteiny lze s výhodou získat za použití standardních metod rekombinace, které jsou dobře známy v oboru. Sekvence genů vhodné pro použití při tvorbě takových látek podle vynálezu je možné získat z publikací, jako jsou WO 97/01571, WO 96/27610 a WO 92/19734. Vynález se však neomezuje pouze na v publikacích popsané sekvence Notch, Delta a Serrate. Upřednostňuje se, aby Notch, Delta nebo Serrate nebo členové rodiny, proteiny nebo pólypeptidy nebo jejich deriváty byly fragmenty extracelulárních domén Notch, Delta nebo Serrate nebo členů rodiny nebo jsou deriváty takových fragmentů. Termín „ligand Notch dále zahrnuje libovolný ligand nebo člena ligandové rodiny, které interagují s členem rodiny proteinů Notch a zahrnují skupinu proteinů, které jsou známy jako „toporytmické proteiny. Jsou to proteinové produkty genů Delta, Serrate, Deltex a zesilovačů split genů stejně jako jiných členů této rodiny genů, které je možné identifikovat na základě schopnosti jejich genové sekvence hybridizovat s proteiny Notch, Delta nebo Serrate, nebo na základě homologie s těmito proteiny nebo na základě schopnosti jejich genů vykazovat fenotypické interakce.
Notch, Delta, Serrate se poprvé popisují u hmyzu Drosophila a proto reprezentují prototypové proteiny receptorů Notch a členů rodiny ligandu Notch. U řady druhů bezobratlých a obratlovců se popisuje řada proteinů Notch a ligandů. Jejich názvosloví se však může lišit od názvosloví používaných u hmyzu. Například Notch je homolog Linl2 a Gpl 1, Serrate/Delta jsou homology Jagged, Apxl a Lag-2.
Farmaceutické kompozice podle vynálezu se mohou vytvořit podle principů, které jsou dobře známy v oboru. Podstata ekcipienta a síla aktivity závisí na vytvořené sloučenině podle vynálezu.
Upřednostňuje se, aby farmaceutické kompozice byly ve formě jednotkových dávek. Dávku látky podle vynálezu vhodnou pro aplikaci pacientovi ve formě farmaceutické kompozice stanoví lékař.
Preferovaným způsobem aplikace formulace podle vynálezu je libovolná z obvyklých metod aplikace, které zahrnují intramuskulární a intraperitonální, intravenózní injekce, inhalaci nosem, inhalaci do plic, podkožní, intradermální, intra-artikulární, intratekální aplikaci, povrchovou aplikaci a aplikaci prostřednictvím zažívacího traktu (například Peyerovy náplasti).
Termín „derivát se používá ve vztahu k proteinům nebo polypeptidům podle vynálezu, které zahrnují libovolnou substituci, variaci, modifikaci, nahrazení, deleci nebo adici jednoho (nebo více) aminokyselinových zbytků sekvence, přičemž výsledný protein má schopnost modulovat interakce Notchligandu Notch.
Termín „varianta ve vztahu k proteinům nebo polypeptidům podle vynálezu zahrnuje libovolnou substituci, variaci, modifikaci, nahrazení, deleci nebo adici jednoho (nebo více) aminokyselinových zbytků sekvence, přičemž výsledný protein má schopnost modulovat interakce Notch-ligandu Notch.
Termín „analog ve vztahu k proteinům nebo polypeptidům podle vynálezu zahrnuje libovolnou peptidomimetickou sloučeninu, kterou je chemická látka, a má schopnost modulovat interakce Wotch-ligandu Notch stejným způsobem jako rodičovský protein nebo polypeptid. Patří sem sloučeniny, které jsou agonisty nebo antagonisty exprese nebo aktivity proteinu Notch nebo ligandu Notch.
·♦ · · ·· • · · · · · · • · » · ·· ·· ·
Uvažuje se, že sloučenina moduluje interakce Notch-ligand Notch, jestliže je schopna buď inhibovat nebo zesilovat interakci Notch s jeho ligandy v rozsahu dostatečným pro účinnou terapii.
Exprese „Notch-ligand Notch znamená interakci mezi členem rodiny Notch a ligandem schopným vázat jeden nebo více takových členů.
Termín „terapie (léčba) zde znamená diagnostické a profylaktické aplikace.
Termín „medicínský znamená aplikace na zvířata a lidi.
Termín „protein a polypeptid je synonymem pro protein, který se často používá v obecném smyslu pro indikaci relativně delších sekvencí aminokyselin, které se nacházejí v polypeptidu.
Přehled obrázků na výkrese
Obrázek č. 1 zobrazuje výsledky hybridizace in sítu provedené způsobem, který se popisuje v příkladu 1.
Obrázek č. 2 zobrazuje
v příkladu 4. Obrázek č. 3 zobrazuje
v příkladu 5. Obrázek č. 4 zobrazuje
v příkladu 6. Obrázek č. 5 zobrazuj e
v příkladu 7. Obrázek č. 6 zobrazuje
v příkladu 8. Obrázek č. 7 zobrazuje
v příkladu 9. Obrázek č. 8a a 8b
popsaného v příkladu 10.
Obrázek č. 9 zobrazuje
výsledky experimentu popsaného
výsledky experimentu popsaného
výsledky experimentu popsaného
výsledky experimentu popsaného
výsledky experimentu popsaného
výsledky experimentu popsaného
zobrazuje výsledky experimentu
výsledky experimentu popsaného
v příkladu 11.
• 44 »444 44 4« •4 44 44 * *444
444 44 4 4444
44« 4444 4 444 «44 • 4 4 4 4 4 4 • ♦ 4 44 44 4 4« 44
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: geny Notch, Delta a Serrate se exprimují v periferním imunitním systému
Syntetizovaly se sondy antimediátorové RNA specifické pro Notch 1, Delta 1 a Serrate 1 a začlenil se do nich dioxigeninem značený UTP. Každá sonda se rozpustila v hybridizačním pufru, zahřívala se na teplotu 50 °C po dobu 5 až 10 minut a přidaly se podložní sklíčka potažené materiálem TESPA, které obsahují 10 milimetrové sekce sleziny a thymu, jenž se před tím fixovaly 4 % paraformaldehydem a PBS. Materiál na sklíčkách se podrobil hybridizaci přes noc při teplotě 65 °C. Následující den se sklíčka promyla dvakrát při teplotě místnosti (RT) pufrem, který obsahuje lxSSC /50% formamidu/ 0,1 % Tween 20. Dále se sklíčka dvakrát promyla pufrem MABT, který obsahuje 0,1 M kyselinu maleinovou/0,15 M NaCl/0,1 % Tween 20 pH 7,5, při teplotě místnosti a pak se materiál blokoval po dobu 2 hodin pufrem MABT + 20 % kozí sérum + 296 Boehringerovým blokovacím činidlem (BBR). Sklíčka se inkubovala přes noc při teplotě místnosti s antidigoxigeninovými fragmenty Fab. Po čtyřech promytí pufrem MABT se sklíčka dále promyly dvakrát v alkalickém substrátovém pufru. Přítomnost navázaných sond antimediátorové RNA se detekovala inkubací pruhů v substrátovém pufru, který obsahuje NBT + BCIP, ve tmě. Pruhy se barvily haemotoxylinem a hodnotily se v médiu Depx.
Výsledky těchto hybridizaci jsou uvedeny na obrázku č. 1, který ukazuje, že ve slezině myší, které jsou tři měsíce staré, exprimují gen Delta a Serrate izolované buňky v periarteriolární membráně a nikoli v centru zárodku. Gen Notch je exprimován řadou buněk v periarteriolární membráně.
Příklad 2: produkce fúzního proteinu Delta-Fc ·· ΒΒΒ» • Β·
ΒΒ Β Β Β « • · Β · Β • BBB Β · « • Β Β Β ··♦ ·Β BB ββ ΒΒ Β · * Β
Β Β « Β ♦Ββ ΒΒΒ » Β • Β ΒΒ
Expresivní vektor pIG-1 (D. Simmons, „Clonning cell surface molecules by transient surface experssion in mammalían cells pp 93-128, Cellular Interactions in Development Ed. D. Hartley, pub. Ox. Uni. Press (1993)) umožňuje produkci fúzního proteinu, který obsahuje extracelulární část Delta 1 spojenou s oblastí lidského IgGl-Fc. Fragment restrikčního enzymu , který obsahoval pouze extracelulární doménu proteinu Delta 1 se klonoval do vektoru pIG-1. Výsledný plazmid se transformoval do kmene E. coli MC 1061 a kultivoval se v kultivačním médiu SOB, které obsahuje 10 ug/ml tetracyklinu /ampicilinu. Pro transfekci buněk COS in vitro se použil izolovaný vektor. Buňky COS se kultivovaly až do dosažení 50 až 75 % konfluence a transfekovaly se 10 ug plazmidové DNA na jednu plotnu za použití metody DEAE-dextran. 24 hodin po transfekci se vyměnilo kultivační médium za kultivační médium, které obsahuje 1 % FCS, a buňky se kultivovaly po další 3 až 6 dní in vitro. Buňky se centrifugovaly po dobu 5 minut pří 5 000 ot./min., aby vznikl pelet buněk a odpadního materiálu. Supernatant se odstranil a uskladnil se pro další použití. Fúze Delta-Fc se izolovala ze supernatantů kultury přidáním 2 ml 50 % suspenze proteinu a sefarózy (Pharmacia) a směs se centrifugovala přes noc při teplotě 4 °C. Kuličky sefarózy se izolovaly tak, že supernatant kultury procházel filtrem o velikosti pórů 0,45 mm, kuličky se promyly a přenesly se na plastovou kolonu o objemu 10 ml. Fúzní konstrukce Delta-Fc se eluovala elučním pufrem s pH 4,0 o objemu 2 ml. Eluát se neutralizoval přidáním 1M Tris-báze.
Příklad 3: Příklady modelů, ve kterých se může zkoumat signální cesta ligandu Notch
Periferní tolerance na vlastní antigeny se může analyzovat v transgenních myších, které nesou receptor T-buněk (TCR), kde ligandy TCR se exprimuji jako vlastní antigen pouze v periferním imunitním systému. Periferní tolerance vůči ·· ·· transplantovaným, antigenům se může indukovat několika způsoby, které zahrnují pre-aplikaci recipientu T-buněčné protilátky nebo zablokování ko-stimulace. Tímto způsobem je možné ukázat vázanou supresi tak i infekční toleranci. Periferní tolerance vůči alergenům se může indukovat intranasálním zavedením peptidů odvozených z alergenů. Exprese Notch-ligand Notch se měří v buňkách získaných z tkání dýchacích cest a/nebo z lymfoidních tkání po inhalaci alergenu a demonstrují se modifikace tolerance. V experimetnálních modelech infekcí infekčními činidly se exprese Notch-ligand Notch může měřit pomocí organizmu (patogen) a imunokompetentních buněk hostitele.
Příklad 4: Hybridomy exprimující gen Delta mohou inhibovat odezvy lymfocytů upravených antigenem
Myši se imunizovaly syntetickým peptidem , který obsahuje imunodominantní epitop alergenu roztoče (HDM; house dust mite) Der pl (pllO-31), nebo ovalbuminem (OVA, protein bílku vajec slepic) . 0 týden později se izolovaly buňky lymfatických žláz (LNC) a připravila se buněčná kultura. Lymfatické žlázy získané ze zvířat, která se imunizovala různými antigeny, se udržovaly odděleně. Tyto buňky se nazvaly upravené LCD.
Hybridomy T-buněk se transfekovaly buď genem Delta v plné délce nebo kontrolním plazmidem tak, že delta se exprimoval jako membránový protein. Po dvou dnech kultivace se hybridomy ozářily, aby se zabránilo jejich proliferaci nebo produkci cytokinů. Proto v testu měřená odezva pochází pouze ze samotných buněk lymfatických žláz.
Ozářené hybridomy se přidaly do kultury, která obsahuje upravené LNC. Pak se přidal vhodný antigen (to je pllO-131 nebo OVA) a buňky se inkubovaly po dobu 24 hodin. Pak se získal supernatant a stanovil se v něm obsah IL-2 (hlavní růstový faktor T-buněk) . Měřila se také proliferační odezva buněk lymfatických Žláz po 72 hodinách.
Výsledky ukazují, že buňky lymfatických žláz kultivované v přítomnosti ozářených hybridomů , které exprimují kontrolní plazmid, se stále pomnožují, jak je zobrazeno na obrázku č. 2, a v případě, že se kultura stimuluje vhodným antigenem vylučují 11-2. Jejich odezva se udržuje v poměru 1:1 LNC:hybridom. V případě, že se buňky lymfatických žláz inkubovaly v přítomnosti hybridomů, které exprimují gen Delta v plné délce, a vhodného antigenu (v poměru 1:1), proliferační odezva a produkce 11-2 se snížila alespoň o 88 %. Hybridomy se transfekovaly kontrolním virem (prázdná kolečka) a delta virem (prázdné čtverce). Obrázek č. 2 ukazuje data, které se prezentují jako počet impulzů za jednu minutu (cpm) 3H-Tdr začleněného po 72 hodinách od začátku inkubace. Dále obrázek zobrazuje hodnotu cpm buněk lymfatických žláz (LNC) kultivovaných v přítomnosti hybridomů, které exprimují gen delta nebo kontrolní konstrukce. Celkový počet buněk v misce je 4 x 105 (počet LNC kolísá v závislosti na poměru hybridomů a LNC, také cpm bude kolísat) . P110-131 LNC jsou buňky ošetřené antigenem Der pl (pil0-131). OVA LNC jsou buňky ošetřené antigenem OVA). 2BB11 a 2BC3 jsou dva rozdílné hybridomy, které reagují s antigenem Der pl.
Tato data ukazují, že inhibice odezvy T-buněk, které exprimují gen Delta, se může zavést ve formě trans. Ačkoli v této kultuře systém Delta exprimujících T-hybridomy specifické pro antigen Derp 1 byly schopny inhibovat odezvu Tbuněk ošetřených antigenem OVA, tento zjevný nedostatek specifity se jeví být způsoben blízkostí buněk ovlivněných kultivačním systémem. Tato data jsou uvedena na obrázku č. 8a a 8b a ukazují, že hybridomy exprimující ve zvířatech gen delta musí sdílet antigenní specifitu s imunogenem, aby došlo k modulačnímu účinku na imunitní odezvu vůči imunogenu. V tomto případě je zřejmé, že T-buňky exprimující gen delta se mohou dostat do blízkosti T-buněk vykazujících odezvu, jestliže rozeznávají stejný antigen na stejné APC.
Příklad 5: Dendritické buňky exprimující Serrate brání navázání antigenu na T-lymfocyty
Dendritické buňky (DC) jsou buňky nesoucí primární antigen v imunitním systému a jsou nutné pro stimulaci odezvy T-buněk. Dendritické buňky se získaly ze sleziny a transfekovaly se buď retrovirem, který umožňuje expresi proteinu Serrate v plné délce nebo kontrolním retrovirem. Dendritické buňky se také podrobily pulzům HDM peptidem pllO-131 po dobu 3 hodin in vitro při teplotě 37 °C. Dendritické buňky se promyly a použily se k podkožní imunizaci poprvé použitých myší za použití 105 buněk/myš. Po 7 dnech se získaly buňky LNC a znovu se stimulovaly v kultuře peptidem při koncentraci 4x105 buněk/prohlubeň. Protože myši se imunizovaly pouze dendritickými buňkami, které se vystavily peptidovým pulzům, měřením se získala schopnost těchto buněk vyvolat imunitní odezvu.
Na obrázku č. 3 jsou data prezentována jako hodnoty cpm LNC 72 hodin po kultivaci získaná ze zvířat, která se imunizovala kontrolními transfekovanými dendritickými buňkami (prázdný kruh) nebo dendritickými buňkami transfekovanými genem Serrate (prázdné čtverce).
Výsledkem imunizace myší dendritickými buňkami, které exprimují gen Serrate, je desetinásobné zvýšení počtu buněk získaných z lymfatických žláz v porovnání s imunizací kontrolními DC. Dále jsme zjistily, že LNC z myší, které se imunizovaly DC+Serrate, snížily proliferaci (93 % snížení kontrolní hodnoty, obrázek č. 3) nebo ve srovnání s buňkami imunizovanými kontrolními DC vylučují IL-2.
Příklad 6: Hybridomy T-buněk exprimující gen Delta jsou u zvířat schopny inhibovat vývoj imunity proti antigenu Der pl • fe „ _ ········· . · · · .
fefe fefe · ···
Hybridomy T buněk (reagují s antigenem Der pl) se transfekovaly retrovirem, který obsahuje myší gen Delta tak, že gen Delta se exprimoval na buněčném povrchu nebo kontrolním retrovirem. Myším C57 BL se podkožní injekcí aplikovalo 10 miliónů ozářených hybridómů a imunizovaly se 50 mikrogramy antigenu Der pl, který tvoří emulzi s kompletním Freundovým adjuvans (CFA). Po sedmi dnech se izolovaly buňky lymfatických žláz a kultivovaly se s antigenem Der pl (koncentrace antigenu je 10 ug/ml), s peptidem 110-131 antigenu Der pl (koncentrace peptidu je 10 ug/ml) nebo s peptidem 81-102 antigenu Der pl (v koncentraci 10 ug/ml). Koncentrace buněk je 4 χ 105 buněk/prohluběň. Kultura se ínkubovaía při teplotě 37 °C po dobu 72 hodin a na posledních 8 hodin kultivace se přidal thymidin značený tritiem. Výsledky testů proliferace buněk pocházejících ze zvířat, kterým se injekcí zavedly hybridomy transfekované jako kontroly (čisté) nebo transfekované genem Delta (Delta-FL) jsou zobrazeny na obrázku č. 4.
LNC pocházející ze zvířat, kterým se injekcí zavedly hybridomy transfekované kontrolním virem produkují velké množství IL-2 a proliferují v kultuře v přítomnosti antigenu Der pl, peptidu 110-31 nebo peptidu 81-102. Naopak buňky, které pocházejí ze zvířat, kterým se injekcí aplikovaly hybridomy exprimující gen Delta nevykazují žádnou odezvu na libovolný z antigenů Der pl (obrázek č. 4).
Příklad 7: Lidské T-buňky exprimující gen Delta mohou blokovat odezvu normálních T-buněk.
Klon T-buněk (HA1.7), který reaguje na virus chřipky, se transfekoval myším genem Delta za použití retrovirové konstrukce, aby došlo k expresi proteinu Delta na povrchu buněk. Smícháním této populace buněk s normálními buňkami HA1.7 se předešlo následné reakci normálních buněk HA1.7 s peptidem HA306-318 a s buňkami nesoucími ántigen. Buňky HA1.7 v koncentraci 5 χ 105 se smíchaly s 1 χ 106 ozářenými
DRB1*O1O1 priferálními krevními mononukleárními buňkami (PBMC) + 1 mikrogramem HA306-318 a kultivovaly se při teplotě 37 °C. 0 6 hodin později se přidala 5 % lymfo-kult (kultivační médium obsahující IL-2) v celkovém množství 1 ml. 24 hodin po iniciaci kultury Delta nebo kontrolního retroviru se nic nepřidává. 7 dní po začátku kultivace se buňky shromáždily, promyly se a transfekované buňky se ozářily. Transfekované buňky se smíchaly v poměru 2:1 s buňkami HA1.7, které nebyly ošetřeny, a kultivovaly se po dobu 2 dnů. Pak se smíchaná kultura izolovala, promyla se a nanesla se na plotny v koncentraci 2 x 104 buněk/prohlubeň spolu s
a) 2,5 x 104 DRB*0101 PBMC (médium)
b) 2,5 x 104 DRB*0101 PBMC + peptid (Ag+APC)
c) 5 % lymfo-kult (IL-2)
Na posledních 8 hodin kultivace se přidal thymidin značený tritiem a po 68 hodinách se buňky sklidily. Výsledky jsou uvedeny na obrázku č. 5.
Samotná kultura nebo kultura HA1.7 transfekované kontrolním virem nebo neošetřená kultura buněk HA1.7 vykazují odezvu na peptid + buňky nesoucí antigen. Inkubace s ozářenými buňkami HA1.7 transfekovanými genem Delta zcela brání odezvě neošetřených buněk HA1.7 na antigen + APC.
Uvedené buňky vykazují odezvu stejně jako neošetřené buňky nebo buňky HA1.7 transfekované kontrolním virem na IL-2, což ukazuje, že nejsou schopny se množit (obrázek č. 5).
Příklad 8: Exprese genu Serrate buňkami vykazujícími antigen předchází odezvě T-buněk
Klón HA1.7 se smíchal s peptidem HA306-318 (1,0 ug/ml) v přítomnosti L-buněk exprimující HLA-DRBl*0101 (buňky vykazující antigen), přičemž každý typ buněk se použil v koncentraci 2 x 104. L-buňky se transfekovaly kontrolním retrovirem (tzv. čisté buňky) nebo retrovirem exprimujícím gen Serrate (Serrate L-buňky). Proliferační odezva se • ·· fcfc fcfc·· ·· fcfc ···· ·· fc fcfcfcfc fc·· ·· · · fcfcfc • fcfcfc fcfcfcfc · fcfcfc fcfcfc • fcfcfcfc · · • ••fcfc fcfc fc fcfc fcfc měřila po 72 hodinách po přidání thymidinu značeného tritiem, který byl přítomen v kultivačním médiu posledních 8 hodin. Výsledky v případě kultury HA1.7 jsou uvedeny na obrázku č. 6:
a) samotná kultura 0
b) + IL-2 0
c) + peptid +DRBl*0101-L-buňky B
d) + peptid +DRBl*0101-L-buňky transfekované kontrolním virem §
e) + peptid + DRBl*0101-L-buňky transfekované virem exprimujícím gen Serrate fS
Buňky HA1.7 stimulované L-buňkami exprimující gen Serrate vykazují slabou odezvu na antigen na rozdíl od buněk, které jsou stimulované L-buňkami transfekovanými kontrolním vektorem (obrázek č. 6) .
Příklad 9: Buňky vykazující antigen exprimující gen Serrate indukují regulační T-buňky
Klon HA1.7 se smíchal s peptidem HA306-318 a s L-buňkami (exprimující DRBl*0101 jako buňky vykazující antigen) DRBl*0101 v přítomnosti 2 % IL-2. L-buňky se transfekovaly buď kontrolním retrovirem nebo retrovirem, který exprimuje Serrate. Po sedmi dnech kultivace se buňky HA1.7 sklidily, promyly a ozářily, pak se smíchaly s čerstvými buňkami HA1.7 (každá populace se použila v množství 2 x 104 ) . Buňky se kultivovaly další dva dny a pak se stimulovaly peptidem (v koncentraci 1,0 ug/ml) + normálními buňkami vykazujícími antigen (DRBl*0101 PBMC). Proliferační odezva se měřila po 72 hodinách následujících po přidání tritiovaného thymidinu, který byl přítomen v kultuře posledních 8 hodin kultivace. Výsledky týkající se čerstvé kultury HA1.7 jsou uvedeny na obrázku č. 7:
a) samotná kultura Sf
b) + IL-2 a
c) + kontrolním virem indukované buňky HA1.7, pak peptid +DRBl*0101 PBMC S
d) + virem, který exprimuje gen Serrate, indukované buňky HA1.7, pak peptid +DRBl*0101 PBMC 0
HA1.7 indukované L-buňkami, které exprimují Serrate, brání odezvě normálních HA1.7 na normální stimuly antigenů (obrázek č. 7) . To ukazuje schopnost buněk, které se staly tolerantními expozicí Serrate, přenést jejich toleranci na poprvé použitou buněčnou populaci (infekční tolerance).
Příklad 10: Regulace indukována T-buňkami, které exprimují gen Delta, je specifická pro antigen
Myším se injekcí aplikovaly buňky hybridomů T-buněk v množství 107, které jsou transdukovány buď kontrolním retrovirem nebo retrovirem obsahujícím gen Delta. Hybridomem je 2BC3, který je specifický pro peptid 110-131 antigenů Der pl. Ve stejnou dobu se zvířatům aplikoval buď antigen Der pl nebo ovalbumin, které tvoří emulzi z kompletním Freundovým adjuvans. O sedm dní později se izolovaly buňky lymfatických žláz a 4 χ 105 buněk se kultivovalo v přítomnosti antigenů Der pl nebo ovalbumin (používá se stejný antigen, kterým se už imunizovaly).
Produkce IL-2 se měřila 24 hodin po začátku kultivace. Stimulační indexy produkce IL-2 jsou uvedeny na obrázku č. 8a (odezvy u zvířat imunizovaných antigenem Der pl) a na obrázku č. 8b (odezvy u zvířat imunizovaných OVA) v případě zvířat, kterým se injekcí aplikovaly hybridomy transfekované kontrolním retrovirem (čisté) nebo retrovirem s genem Delta (delta).
Zvířata, kterým se injekcí aplikovaly hybridomy 2BC3 exprimující gen Delta, nevykazují žádnou odezvu na antigen Der pl, zatímco odezva zvířat, kterým se aplikoval OVA zůstala stejná. Tato data jsou uvedena na obrázku č. 8a a 8b, kde • ·· ·· ···· 0« ·· • 0 « · ·· 0 0000 • 0 0 ·0 · · 0 · 0
000 0 0 0 0 0 «0« «00 «'0 0 0 0 0 0
000«« «0 « «0 «0 každý bod reprezentuje produkci IL-2 každé myši jako stimulační index (SI) kontrolní odezvy (není přidán antigen).
Příklad 11: T-buňky exprimují gen Delta během indukce tolerance
Buňky HA1.7 se kultivovaly v přítomnosti peptidu HA306-318 (50 ug/ml) , aniž jsou přítomny APC. Takové podmínky navozují u HA1.7 stádium tolerance. Buňky se sklízely po 0, 30, 120 nebo 360 minutách v množství 1,5 x 106 buněk, vytvořil se pelet buněk a zamrazily se. RNA se připravila z buněčných peletů homogenizací v roztoku guanidiumthiokyanát centrifugací v CsCl gradientu. 1 ug RNA se převedl na cDNA za použití oligo-dT primerů. Z výsledné cDNA se jedna dvacetina použila pro PCR (40 cyklů) za použití primerů, které jsou specifické pro lidský homolog genu Delta. Vzorky PCR se analyzovaly elektroforézou na gelu (obrázek č. 9), kde v dráze 1 je markér, v dráze 2 je vzorky v čase 0, v dráze 3 jsou vzorky v čase 30 minut, v dráze 4 jsou vzorky v čase 120 minut, v dráze 5 jsou vzorky v čase 240 minut, v dráze 6 jsou vzorky v čase 360 minut a v dráze 7 je negativní kontrola.
Zbývající HA1.7 neexprimují mRNA Delta, ale transkripty se objevily ve dvou hodinách iniciace protokolu získání tolerance.
Příklad 12: Analýza exprese Notch 1, Serrate 1 a Delta 1 během indukce tolerance imunohistologií a in šitu hybridizací.
Myším C57 BL/6J se intranasálně ve třech po sobě jdoucích dnech aplikovalo buď 100 mikrogramů antigenu Der pl, peptidu 110-131 nebo kontrolní roztok (fyziologický roztok pufrovaný fosforečnanem, PBS). Je známo, že intranasální aplikace antigenu tímto způsobem indukuje toleranci vůči uvedenému antigenu. Některá zvířata se pak testovala po dobu dvou týdnů. Pak se jim do báze ocasu opět injekcí podkožně aplikoval
antigen v množství 50 ug/CFA. Superficiální lymfatické žlázy a slezina zvířat se získala v různém čase (den 0 je první den intranasální aplikace nebo opětovná imunizace antigenem). Vzorky se zpracovaly imunohistoligickými metodami nebo hybridizací in šitu. V případě metod imunohistologie se tkáň zmrazila a nařezaly se 3 um sekce, fixovaly se acetonem chlazeným na ledu a barvily se polyklonálními protilátkami specifickými pro Notch 1 a Serrate 1. Vázané protilátky se detekovaly za použití křenové peroxidázy spojené s kozími anti-králičími protilátkami, kde se jako substrát používá diaminobenzidin. Protilátky specifické pro Delta. 1 nejsou dostupné pro studium. V případě hybridizace in šitu se zmrazené tkáně nařezaly a fixovaly se 4 % formaldehydem.
Sekce se hybridizovaly dioxigeninem spojeným se sondami antimediátorové RNA, které jsou specifické pro Notch 1, Serrate 1 a Delta 1 při teplotě 65 °C. Navázaná sonda se detekovala alkalickou fosfatázou spojenou s kozími antidioxigeninovými protilátkami, které se zviditelnily za použití NBT a BCIP jako substrátu.Data v tabulce č. 1 a 2 se získala metodami imunohistologie respektive hybridizací in šitu. Data reprezentují analýzu tkání z 5 myší po intranasální aplikaci samotného peptidu (PBS/pllO-131 primárně) nebo po intranasální a podkožní aplikaci antigenu (PBS/pllO-131 opětovná imunizace).
Vysvětlivky:
+ slabé zbarvení ++ střední zbarvení +++ silné zbarvení.
Základní množství proteinů Notch, Delta a Serrate se exprimuje v kontrolních myších, kterým se aplikovalo pouze PBS. Myši, kterým se intranasálně aplikovalo PBS a podkožně antigen, vykazují během 8 dní po aplikaci antigenu mírné zesílení exprese všech tří molekul. Zvířata, kterým se aplikoval buď intranasálně samotný peptid nebo intranasálně ·· ···· ♦ 9 ·· • ·
90
peptid a pak dávka antigenů, vykazují stejný patern zesílení exprese genu Notch, Delta a Serrate. Exrese byla rychlejší a silnější ve srovnání s kontrolními zvířaty.
Serrate 1 1 Notch 1
pllO-131 opětovná imunizace pllO-131 primárně PBS opětovná imunizace PBS primárně pllO-131 opětovná imunizace pllO-131 primárně PBS opětovná imunizace PBS primárně Léčba
+ + + + + + + + Den 0
+ + + + + + + + Den 1
+ + + + + + + + ++ + + Den 4
+ + + + + + + + + + + + + +++ + /++ + Den 8
+++ +++ + + + + + + + + + + + /++ + Den 12
Tabulka č. 1: Exprese proteinů Notch a Serrate během indukce tolerance «·· ·
9 9 9
9 9 9
99999 9
9 9
99 99
99
9 9 9
9 9 9
999 9»9
9
99
Serrate 1 Notch 1
pllO-131 opětovná imunizace pllO-131 primárně PBS opětovná imunizace PBS primárně pllO-131 opětovná jimunizace i pllO-131 primárně PBS opětovná imunizace PBS primárně Léčba
+ +· + + + + + + Den 0
+ + + + 4- + + + Den 1
+ + -f* + + + ++ + + + + Den 4
+ + + + -i- + ++/+ + + + + + + + + /++ + Den 8
+++ + + + + /++ + + + + + + + + /++ + Den 12
Tabulka č. 2: Exprese transkriptů Notch, Delta a Searrate během indukce tolerance φ ·· φφ » φ · · φφφ · * • ··· · · · • · φ · φφφ φφ φφ ·· ·· • φφφφ φ · · φ • φφφ φφφ • φ • Φ φφ
Delta 1
pllO-131 opětovná imunizace pllO-131 primárně PBS opětovná 1 imunizace PBS primárně
+ + + +
+ + + +
+ + ++ + +
+ + + + + + + + + +
4- + + + + + ++/ + +

Claims (26)

1. Použití ligandu Notch při výrobě léčiva vhodného při použití v imunoterapii.
2. Použití podle nároku 1, přičemž imunoterapie zahrnuje léčbu onemocnění zprostředkovaného T-buňkami a infekčního onemocnění.
zahrnující alergii, nádorem indukované
3. Použití podle nároku 2, kde onemocnění zprostředkované T-buňkami a infekce je způsobeno libovolným jedním nebo více stavy ze skupiny autoimunitu, odmítnutí transplantátu, odchylky systému T-buněk a infekční onemocnění, jako jsou ty způsobená druhem Plasmodium, Microfilariae, Helminths,
Mycobacteria, HIV, Cytomegalovirus, Pseudomonas,
Echinicoccus, Haemophilus influenza typ B,
Hepatittis C nebo Toxicara.
Toxoplasma, morbilli,
4. Použití podle nároků 1 až 3, kde ligand-Notch se vybral ze skupiny zahrnující Serrate, Delta nebo jejich fragmenty, deriváty nebo analogy.
5. Ligand-Notch nebo jeho fragmenty, deriváty nebo analogy, které způsobují vázanou supresi.
6. Ligand- Notch nebo jeho fragmenty, deriváty nebo analogy, které způsobují infekční toleranci.
7. Způsob, jak vytvořit T-buňky tolerantní vůči alergenu nebo antigenů, vyznačující se tím, že zahrnuje inkubaci (vystavení) T-buněk s buňkami vykazujícími ·· ·· ···· 9 9 ·· • · · 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9
999 9 · · · * ··· 999
9 9 9 9 0 · • »e ·· ·· · ·· ·» antigen, které exprimují nebo nadměrně exprimuj! ligand-Notch, v přítomnosti uvedeného alergenu nebo antigenu.
8. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že (nadměrná) exprese ligandu Notch je způsobena APC, které se transfekují virem schopným exprimovat uvedený ligand.
9. Způsob podle nároku 7, vyznačující se tím, že (nadměrná) exprese ligandu Notch je způsobena APC, které se stimulují činidlem, které zesiluje expresi genu exprimujícího ligand-Notch.
10. Způsob podle nároku 9, vyznačující se tím, že činidlo se vybralo ze skupiny zahrnující Noggin, Chordin, Follistatin, Xnr3, fibroblastové růstové faktory nebo jejich deriváty nebo fragmenty.
11. Způsob podle nároku 7, 8, 9 nebo 10, vyznačující se tím, že APC se vybralo ze skupiny zahrnující dendritické buňky, L-buňky, hybridomy, lymfomy, makrofagy, B-buňky nebo syntetické APC, jako jsou lipidové membrány.
12. Způsob podle libovolného z nároků 7 až 11, vyznačujíc! se tim, že ligand-Notch se vybral ze skupiny zahrnující Serrate, Delta nebo jejich fragmenty, deriváty nebo analogy.
13. Molekula obsahující část ligandu-Notch operabilně spojená s T-buněčným alergenem nebo s částí antigenu tak, že při expozici T-buňkám jsou schopny se obě části navázat na svá příslušná místa.
0 0 0 0
0 0 0 0 0 0
14. Molekula podle nároku 12 nebo 13, kde část liganduNotch se vybrala ze skupiny zahrnující Serrate, Delta nebo jejich fragmenty, deriváty nebo analogy.
15. Fúzní protein obsahující segment extracelulární oblasti ligandu Notch a Fc segment imunoglobulinu.
16. Fúzní protein podle nároku 15, kde extracelulární oblast ligandu Notch je odvozená od Notch, Delta nebo Serrate.
17. Fúzní protein podle nároku 15 nebo 16, kde segment Fc je IgGFc nebo IgMFc.
18. Sada, vyznačující se tím, že obsahuje imobilizovaný Notch nebo členy rodiny, aby se umožnilo měření rozpustných ligandů Notch, které pochází z patogenů, z transplantovaných štěpů nebo buněk hostitele.
19. Způsob testování, vyznačující se tím, ž e zahrnuje kontakt: a) proteinu Notch a ligandu schopného se vázat na protein Notch se b) sloučeninou a stanovení, zda sloučenina způsobuje navázání ligandu na protein Notch.
20. Ligand schopný vázat proteiny Delta nebo Serrate nebo jejich deriváty, které se exprimují nebo vylučují patogenními organizmy, nádory nebo transplantované štěpy a které jsou vhodné pro použití při medicínské terapii.
21. Způsob testování, vyznačující se tím, ž e zahrnuje stanovení in vivo množství rozpustných volných členů rodiny Serrate, Notch a Delta nebo jejich forem.
22. Test pro detekci účinku sloučeniny na expresi nebo zpracování funkčního proteinu-Notch nebo ligandu-Notch, vyznačující se tím, že zahrnuje kontakt buněk, které exprimují protein-Notch nebo ligand- Notch se sloučeninou a sledování zesílení nebo zeslabení exprese nebo změny při zpracování uvedeného proteinu nebo ligandu.
23. Sloučeniny, ligandy-Notch, jejich deriváty, fragmenty nebo analogy, vyznačující se tím, že jsou detekovatelné testem podle nároku 22.
24. Použití činidla schopného zeslabit expresi proteinů Delta nebo Serrate nebo omezit jejich výskyt jako buněčný membránový protein při výrobě léčiva pro použití v případě reverzní bakterie, infekce nebo nádorem indukované imunosuprese.
25. Použití podle nároku 24, kde činidlem je protein Toll nebo protein morfogeneze kostí.
26. Použití ligandu-Notch při modulaci exprese funkčního proteinu-Notch nebo signální cesty Notch.
CZ19991639A 1996-11-07 1997-11-06 Farmaceutický prostředek s obsahem ligandu Notch a způsob tvorby T-buněk CZ295997B6 (cs)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB9623236.8A GB9623236D0 (en) 1996-11-07 1996-11-07 Notch
GBGB9715674.9A GB9715674D0 (en) 1997-07-24 1997-07-24 Notch
GBGB9719350.2A GB9719350D0 (en) 1997-09-11 1997-09-11 Notch

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ163999A3 true CZ163999A3 (cs) 1999-10-13
CZ295997B6 CZ295997B6 (cs) 2005-12-14

Family

ID=27268574

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19991639A CZ295997B6 (cs) 1996-11-07 1997-11-06 Farmaceutický prostředek s obsahem ligandu Notch a způsob tvorby T-buněk

Country Status (20)

Country Link
EP (2) EP1616958A3 (cs)
JP (1) JP4339406B2 (cs)
KR (1) KR100393234B1 (cs)
CN (2) CN1160371C (cs)
AT (1) ATE299184T1 (cs)
AU (1) AU736361B2 (cs)
BG (1) BG103444A (cs)
CA (1) CA2271248C (cs)
CZ (1) CZ295997B6 (cs)
DE (1) DE69733695T2 (cs)
ES (1) ES2243986T3 (cs)
GB (2) GB2353094B (cs)
GE (1) GEP20043390B (cs)
IL (1) IL129531A0 (cs)
NO (1) NO992196L (cs)
NZ (1) NZ335549A (cs)
PL (1) PL333302A1 (cs)
RO (1) RO120850B1 (cs)
TR (1) TR199901000T2 (cs)
WO (1) WO1998020142A1 (cs)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997001571A1 (en) 1995-06-28 1997-01-16 Imperial Cancer Research Technology, Ltd. Nucleotide and protein sequences of vertebrate delta genes and methods based thereon
US5780300A (en) * 1995-09-29 1998-07-14 Yale University Manipulation of non-terminally differentiated cells using the notch pathway
GB9824045D0 (en) * 1998-11-03 1998-12-30 European Molecular Biology Lab Embl Regulator protein
GB9827604D0 (en) * 1998-12-15 1999-02-10 Lorantis Ltd Methods of immunosuppression
GB9927328D0 (en) * 1999-11-18 2000-01-12 Lorantis Ltd Immunotherapy
GB0019242D0 (en) * 2000-08-04 2000-09-27 Lorantis Ltd Assay
US6689744B2 (en) 2000-09-22 2004-02-10 Genentech, Inc. Notch receptor agonists and uses
AU9275001A (en) * 2000-09-22 2002-04-02 Genentech Inc Notch receptor agonists and uses
GB0118155D0 (en) * 2001-07-25 2001-09-19 Lorantis Ltd Superantigen
CA2454937A1 (en) * 2001-07-25 2003-02-13 Lorantis Limited Modulators of notch signalling for use in immunotherapy
GB0123379D0 (en) * 2001-09-28 2001-11-21 Lorantis Ltd Modulators
US7682825B2 (en) * 2002-02-06 2010-03-23 Sanbio, Inc. Differentiation of bone marrow stromal cells to neural cells or skeletal muscle cells by introduction of notch gene
JP2006506322A (ja) * 2002-04-05 2006-02-23 ロランティス リミテッド 内科療法
AU2003255735A1 (en) * 2002-08-03 2004-02-23 Lorantis Limited Conjugate of notch signalling pathway modulators and their use in medical treatment
GB0218879D0 (en) * 2002-08-14 2002-09-25 Lorantis Ltd Medical treatment
GB0220658D0 (en) * 2002-09-05 2002-10-16 Lorantis Ltd Immunotherapy
AU2003269268A1 (en) * 2002-10-09 2004-05-04 Lorantis Limited Modulation of immune function
WO2004060262A2 (en) * 2003-01-07 2004-07-22 Lorantis Limited Modulators of notch signalling for use in immunotherpapy
GB0300428D0 (en) * 2003-01-09 2003-02-05 Lorantis Ltd Medical treatment
JP2006517533A (ja) * 2003-01-23 2006-07-27 ロランティス リミテッド Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路のアクチベーターを用いる自己免疫疾患の治療
GB0303663D0 (en) * 2003-02-18 2003-03-19 Lorantis Ltd Assays and medical treatments
WO2004082710A1 (en) * 2003-03-21 2004-09-30 Lorantis Limited Treatment of allergic diseases using a modulator of the notch signaling pathway
WO2004083372A2 (en) * 2003-03-21 2004-09-30 Lorantis Limited Modulators of the notch signaling pathway immobilized on particles for modifying immune responses
GB0307472D0 (en) * 2003-04-01 2003-05-07 Lorantis Ltd Medical treatment
US7919092B2 (en) 2006-06-13 2011-04-05 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Antibodies to notch receptors
EP2125887A4 (en) 2007-01-24 2010-11-10 Oncomed Pharm Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE DIAGNOSIS AND TREATMENT OF CANCER
JP5560270B2 (ja) 2008-07-08 2014-07-23 オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｎｏｔｃｈ結合剤およびアンタゴニストならびにその使用方法
US9475855B2 (en) * 2008-08-22 2016-10-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Human Notch3 based fusion proteins as decoy inhibitors of Notch3 signaling
US8709710B2 (en) 2009-02-16 2014-04-29 Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin Methods of modulating interleukin-22 and immune response by notch regulators
EP3029070A1 (en) 2009-08-29 2016-06-08 AbbVie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
EP3680253A3 (en) 2010-03-02 2020-09-30 AbbVie Inc. Therapeutic dll4 binding proteins
EP2694080B1 (en) * 2011-04-06 2018-03-14 SanBio, Inc. Methods and compositions for modulating peripheral immune function
JP2015505668A (ja) * 2011-11-16 2015-02-26 オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ヒトｎｏｔｃｈ受容体変異およびその使用
WO2013167620A1 (en) * 2012-05-10 2013-11-14 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Immunomodulatory methods using notch agonists
KR101573650B1 (ko) * 2015-02-04 2015-12-01 성균관대학교산학협력단 Hcmv 바이러스 복제 억제용 조성물
CA3110089A1 (en) * 2018-08-28 2020-03-05 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods and compositions for adoptive t cell therapy incorporating induced notch signaling

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IL101728A (en) * 1991-05-03 2007-08-19 Univ Yale Human Abandonment and Delta, Restrictive Areas of Effect in Tophoric Proteins, and Methods Based on Them
US5869282A (en) * 1991-12-11 1999-02-09 Imperial Cancer Research Technology, Ltd. Nucleotide and protein sequences of the serrate gene and methods based thereon
US5786158A (en) * 1992-04-30 1998-07-28 Yale University Therapeutic and diagnostic methods and compositions based on notch proteins and nucleic acids
CA2182498A1 (en) * 1994-02-01 1995-08-10 William J. Larochelle Fusion proteins that include antibody and nonantibody portions
US5780300A (en) * 1995-09-29 1998-07-14 Yale University Manipulation of non-terminally differentiated cells using the notch pathway
ATE319827T1 (de) * 1995-11-17 2006-03-15 Asahi Chemical Ind Polypeptid, das die differenzierung unterdrueckt

Also Published As

Publication number Publication date
GB2353094A (en) 2001-02-14
CA2271248C (en) 2009-08-11
JP4339406B2 (ja) 2009-10-07
EP1616958A2 (en) 2006-01-18
CZ295997B6 (cs) 2005-12-14
GB9910276D0 (en) 1999-06-30
GB2335194B (en) 2001-04-25
EP1616958A3 (en) 2006-02-08
CN1242802A (zh) 2000-01-26
KR20000053146A (ko) 2000-08-25
ES2243986T3 (es) 2005-12-01
GB2353094B (en) 2001-06-13
RO120850B1 (ro) 2006-08-30
NZ335549A (en) 2001-07-27
EP0942998A1 (en) 1999-09-22
ATE299184T1 (de) 2005-07-15
CA2271248A1 (en) 1998-05-14
AU736361B2 (en) 2001-07-26
KR100393234B1 (ko) 2003-07-31
DE69733695D1 (de) 2005-08-11
GEP20043390B (en) 2003-11-10
TR199901000T2 (xx) 1999-07-21
AU4876597A (en) 1998-05-29
NO992196D0 (no) 1999-05-05
NO992196L (no) 1999-07-05
DE69733695T2 (de) 2006-05-18
IL129531A0 (en) 2000-02-29
JP2001504331A (ja) 2001-04-03
GB2335194A (en) 1999-09-15
WO1998020142A1 (en) 1998-05-14
CN1524583A (zh) 2004-09-01
EP0942998B1 (en) 2005-07-06
GB0023691D0 (en) 2000-11-08
PL333302A1 (en) 1999-11-22
CN1160371C (zh) 2004-08-04
BG103444A (en) 2000-06-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ163999A3 (cs) Proteiny rodiny Notch, jejich geny ligandy
US10251912B2 (en) MHC class II restricted T cell epitopes from the cancer antigen, NY ESO-1
KR101239542B1 (ko) 탈수초화를 수반하는 병의 치료
US6379925B1 (en) Angiogenic modulation by notch signal transduction
JP2002512602A (ja) 増殖性疾患の診断および治療のためのｉａｐ類およびｎａｉｐの検出および調節
US20060251604A1 (en) Method for diagnosing alopecia
CA2621992C (en) Manipulation of regulatory t cell and dc function by targeting neuritin gene using antibodies, agonists and antagonists
JPH11502405A (ja) ｐ１５及びチロシナーゼ黒色腫抗原並びに診断及び治療方法におけるそれらの使用
US20080199443A1 (en) Bone Morphogenetic Variants, Compositions and Methods of Treatment
US20060034857A1 (en) Notch
US20090131346A1 (en) Antibody and method for identification of dendritic cells
US7807784B2 (en) Increased T-cell tumor infiltration by mutant LIGHT
RU2197262C2 (ru) Лиганд notch
AU773479B2 (en) Notch
MXPA99004282A (es) Notch
US20190240327A9 (en) Manipulation of regulatory t cell and dc function by targeting neuritin gene using antibodies, agonists and antagonists

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20061106