RO120850B1 - "notch" - Google Patents
"notch" Download PDFInfo
- Publication number
- RO120850B1 RO120850B1 RO99-00524A RO9900524A RO120850B1 RO 120850 B1 RO120850 B1 RO 120850B1 RO 9900524 A RO9900524 A RO 9900524A RO 120850 B1 RO120850 B1 RO 120850B1
- Authority
- RO
- Romania
- Prior art keywords
- cells
- notch
- delta
- serrate
- cell
- Prior art date
Links
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 56
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 47
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 230000007815 allergy Effects 0.000 claims abstract description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 claims abstract description 3
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 claims abstract description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 20
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 4
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 claims description 3
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims 3
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims 3
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 112
- 108010070047 Notch Receptors Proteins 0.000 abstract description 82
- 102000005650 Notch Receptors Human genes 0.000 abstract description 81
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 43
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 43
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 18
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 4
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 46
- 108010036039 Serrate-Jagged Proteins Proteins 0.000 description 42
- 102000011842 Serrate-Jagged Proteins Human genes 0.000 description 41
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 38
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 32
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 32
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 20
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 17
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 16
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 15
- 230000004044 response Effects 0.000 description 14
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 12
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 11
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 10
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 101001100327 Homo sapiens RNA-binding protein 45 Proteins 0.000 description 8
- 108700037638 Neurogenic locus notch homolog protein 1 Proteins 0.000 description 8
- 102100023181 Neurogenic locus notch homolog protein 1 Human genes 0.000 description 8
- 102100038823 RNA-binding protein 45 Human genes 0.000 description 8
- 108700041286 delta Proteins 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 8
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 230000024664 tolerance induction Effects 0.000 description 7
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 6
- 102000049556 Jagged-1 Human genes 0.000 description 5
- 108700003486 Jagged-1 Proteins 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 4
- 101000914947 Bungarus multicinctus Long neurotoxin homolog TA-bm16 Proteins 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 4
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 4
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 3
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 3
- 241000238711 Pyroglyphidae Species 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 102000006533 chordin Human genes 0.000 description 3
- 108010008846 chordin Proteins 0.000 description 3
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 229940046533 house dust mites Drugs 0.000 description 3
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000004073 interleukin-2 production Effects 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 102000045246 noggin Human genes 0.000 description 3
- 108700007229 noggin Proteins 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 3
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 101100510615 Caenorhabditis elegans lag-2 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100074828 Caenorhabditis elegans lin-12 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150014361 Delta gene Proteins 0.000 description 2
- 241001663879 Deltaretrovirus Species 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 2
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 2
- 101150021185 FGF gene Proteins 0.000 description 2
- 102000016970 Follistatin Human genes 0.000 description 2
- 108010014612 Follistatin Proteins 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101001124893 Xenopus laevis Nodal homolog 3-A Proteins 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 229960004784 allergens Drugs 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 2
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108030001653 Adamalysin Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 238000011746 C57BL/6J (JAX™ mouse strain) Methods 0.000 description 1
- 101100379376 Caenorhabditis elegans apx-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100337060 Caenorhabditis elegans glp-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- -1 Delta Proteins 0.000 description 1
- 241001533413 Deltavirus Species 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001288713 Escherichia coli MC1061 Species 0.000 description 1
- 102100040485 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain Human genes 0.000 description 1
- 108010039343 HLA-DRB1 Chains Proteins 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000049546 Jagged-2 Human genes 0.000 description 1
- 108700003489 Jagged-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 229940124761 MMP inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 101710167839 Morphogenetic protein Proteins 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000580858 Simian-Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N Thiotepa Chemical compound C1CN1P(N1CC1)(=S)N1CC1 FOCVUCIESVLUNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000002657 Thymus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000007303 Thymus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000223996 Toxoplasma Species 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000003352 cell adhesion assay Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008614 cellular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 210000001280 germinal center Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 210000002861 immature t-cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000007233 immunological mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 210000001986 peyer's patch Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000001585 thymus vulgaris Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 1
- 102000027257 transmembrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008578 transmembrane receptors Proteins 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
- A61P33/06—Antimalarials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5047—Cells of the immune system
- G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2799/00—Uses of viruses
- C12N2799/02—Uses of viruses as vector
- C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
- C12N2799/027—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a retrovirus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/02—Screening involving studying the effect of compounds C on the interaction between interacting molecules A and B (e.g. A = enzyme and B = substrate for A, or A = receptor and B = ligand for the receptor)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
Abstract
Prezenta invenţie se referă la folosirea unor compuşi terapeutici, la modificarea celulelor T ale antigenului prezent în celule T care interacţionează şi la reacţia dintre organismele patogene şi celulele imunitare ale gazdei. În particular, invenţia se referă la folosirea acestor compuşi în modularea reacţiei între proteinele Notch şi liganzii acestora şi utilizarea acestor compuşi în tratamentul respingerii implanturilor, în reacţii autoimune,alergii şi astm, boli infecţioase şi tumori.
Description
Prezenta invenție se referă la compuși terapeutici utilizați pentru modificarea activării celulelor T. în detaliu, invenția se referă la utilizarea lor pentru modularea interacțiunii între proteinele din familia Notch și liganzii lor, și la utilizarea unor astfel de compuși la tratamentul afecțiunilor reprezentate de respingerea grefei, reacții autoimune, alergie, astm, boli infecțioase și tumori.
Controlul interacțiunii între celulele T și între celulele prezentatoare de antigen (APC) și celulele T este vital pentru funcționarea sistemului imun uman. Cu toate acestea, în anumite situații patologice, modificarea în sens pozitiv sau negativ, a acestor interacțiuni, poate fi benefică din punct de vedere terapeutic. De exemplu, în cazul unor afecțiuni precum bolile autoimune, alergiile, respingerea grefei, este indicată inducerea inhibiției răspunsului imun prin stimularea interacțiunii negative între celulele T sau între celulele T și APC. Modelele de toleranță la infecție și supresie secundară sugerează faptul că toleranța poate fi indusă unui număr mic de celule T, și aceste celule T transmit apoi această toleranță la alte celule T, prevenind astfel declanșarea unei reacții imune eficiente. în cazul altor stări patologice precum imunodepresia indusă de tumori, în infecții parazitare, bacteriene și virale, starea de imunodepresie este o trăsătură comună. în astfel de cazuri, se dorește inhibarea interacțiunilor între celulele T, depășindu-se starea de toleranță la infecție.
Cu toate acestea, mecanismele care stau la baza acestor interacțiuni între celulele T și între celulele T și APC, nu au fost explicate până acum.
Brevetul WO 92/19734 susține descrierea unor secvențe de nucleotide ale genelor umane Notch și Delta, și a secvențelor de aminoacizi ale proteinelor codificate de acestea. Descrierea arată că familia genelor Notch a fost caracterizată ca fiind esențială pentru evoluția corectă a liniei celulare embrionare la insecte precum Drosophila.
Proteinele care fac parte din familia Notch sunt receptori transmembranari care conțin câteva motive peptidice constante. Fiecare proteină din familie prezintă elemente repetitive extracelulare de tip EGF (factor de creștere epidermală) caracteristice, și un motiv Lin-12/Notch juxtamembranar. Mai mult, fiecare proteină are 6-8 motive repetitive de tip ankrină, la nivelul porțiunii citoplasmatice, împreună cu o secvență PEST. Liganzii Notch au un domeniu de diagnostic DSL (D. Delta, S, Serrate, L, Lag2) care conține 20-22 de aminoacizi la capătul amino terminal al proteinei și între 3 și 8 motive repetitive de tip EGF pe suprafața extracelulară. Proteinele au o porțiune citoplasmatică scurtă fără domenii funcționale păstrate.
Dovezi recente sugerează că transmiterea de semnale Notch contribuie la diferențierea celulelor T imature în timus, polarizând evoluția timocitelor spre linia celulară CD8+, care este independentă de recunoașterea CMH (Robey E, et al., Cell 1996, 87: 484 - 492). în timpul maturării la nivelul timusului, celulele T dobândesc capacitatea de a recunoaște antigenele proprii de antigenele non-self, acest proces fiind cunoscut sub numele de seif toleranță, (von BoehmerH, etal., Ann. Rev.lmmunol.1990; 8:531). Există și în periferie mecanisme de inducere și păstrare a toleranței și în multe privințe importanța lor este subestimată. Există multe modele experimentale de respingere a grefei, de boli autoimune și de răspunsuri specifice la alergeni, care ilustrează în mod clar capacitatea de inducere a unei stări de toleranță specifică (lipsă a răspunsului) la gazdă prin imunizare cu un antigen. Din aceste sisteme reies două descoperiri importante. Prima se referă la faptul că imunizarea cu un fragment peptidic de antigen în situații selecționate poate inhiba răspunsurile specifice nu numai la acest fragment, ci și la alte regiuni ale aceleiași molecule ale proteinei intacte utilizată pentru imunizarea provocată (supresie secundară; Hoyne GF, et al., J. Exp. Med. 1993; 178:183 și Metzler B, Wraith DC., Int. Immunol 1993; 5:1159). A doua este reprezentată de fenomenul de toleranță la infecție descris cel mai bine în modele experimentale de
RO 120850 Β1 transplant. Conceptul de toleranță la infecție afirmă că celulele imuno-competente, care 1 sunt făcute să devină tolerante față de un antigen specific, sunt capabile să inhibe și răspunsul celorlalte celule, și astfel, această populație celulară secundară devine reglatoare 3 și tolerantă (Qin SX, et al., Science 1993; 258:974). Mecanismele imunologice care stau la baza acestor fenomene nu au fost încă explicate. 5
Prezenta invenție constă în descoperirea faptului că familia de receptori Notch și liganzii acestora, Delta și Serrate, se exprimă la nivelul suprafeței celulelor normale adulte 7 ale sistemului imun periferic.
Prin urmare, în conformitate cu prezenta invenție, s-a dovedit eficientă utilizarea unui 9 ligand Notch pentru prepararea unui medicament folosit în imunoterapie.
Modelul de expresie a familiei de receptori Notch și a liganzilor acestora în sistemul 11 imun periferic adult normal nu a fost descris anterior, dar autorii acestei invenții au arătat că celulele T exprimă ARNm Notch 1 ca fiind component de bază al celulei, în timp ce expresia 13 Delta este limitată doar la un singur subgrup de celule T în țesutul limfatic periferic. Expresia Serrate pare a fi limitată la un singur subgrup de celule prezentatoare de antigen (APC) în 15 periferie (fig. 1). Astfel, această familie de liganzi ai receptorilor poate continua să influențeze soarta celulelor în sistemul imun, așa cum s-a arătat și în cazul altor țesuturi, ulterior evoluției 17 embrionare (Ellisen L. W, et. al., Cell 1991; 66:649). Transmiterea de semnale Notch poate juca un rol principal în inducerea toleranței periferice (lipsa răspunsului imun) și poate repre- 19 zenta o explicație fizică a supresiei secundare și a toleranței la infecție.
în continuare, prezenta invenție se referă la utilizarea unui ligand Notch la tratamentul 21 afecțiunilor în care există reacții imune mediate de celule T. Astfel, s-a observat că în urma expunerii unei populații de celule T naive la un ligand Notch exprimat de o celulă APC, în 23 prezența unui antigen sau a unui alergen, ligandul Notch este capabil să transforme populația respectivă de celule T într-o populație celulară tolerantă față de antigenul sau alergenul 25 respectiv. în plus, atunci când această populație de celule T interacționează la rândul ei cu o a doua populație de celule T naive, este capabilă să transmită acesteia toleranța față de 27 antigenul sau alergenul menționat
Astfel, invenția se referă de asemenea și la utilizarea unui ligand Notch în vederea 29 influențării toleranței secundare și/sau a toleranței martor (cunoscută în domeniu și ca toleranță la infecție). 31
Un alt obiect al invenției se referă la utilizarea unui ligand Notch pentru modularea expresiei unei proteine funcționale Notch sau a unor căi de transmitere a semnalelor Notch. 33 în conformitate cu variantele descrise mai sus, ale acestei invenții, ligandul Notch poate fi expus celulelor T prin incubarea/amestecarea celulelor T cu celulele prezentatoare 35 de antigen (APC) sau altele de acest fel, care exprimă sau supraexprimă un ligand Notch în prezența unui alergen sau a unui antigen. (Supra)Expresia unei gene a ligandului Notch se 37 poate realiza prin transfecția celulelor APC cu o genă capabilă să exprime un ligand Notch sau prin expunerea celulelor APC la un agent capabil să stimuleze expresia unei gene (unor 39 gene) endogene pentru ligandul Notch.
Agenți adecvați care influențează expresia liganzilor Notch sunt reprezentați de 41 agenți care acționează asupra expresiei genelor Delta și/sau Serrate. De exemplu, în cazul expresiei Delta, în urma legării proteinelor BMP extracelulare (proteine morfogenetice ale 43 osului, Wilson, P. A. și Hemmati-Brivanlou A. 1997, Neuron 18:699-710, Hemmati-Brivanlou, A și Melton, D. 1997, Cell 88:13-17) la receptorii lor, se produce inhibarea transcrierii Delta 45 datorită inhibării expresiei factorului de transcriere reprezentat de complexul Achaete/Scute.
Se presupune că acest complex este implicat direct în reglarea expresiei Delta. Deci, orice 47 agent care inhibă legarea proteinelor BMP la receptorii lor, este capabil să determine o
RO 120850 Β1 creștere a expresiei Delta și/sau Serrate. Astfel de agenți sunt reprezentați de Noggin, Chordin, Follistatin, Xnr3, FGF, Fringe, precum și derivați sau variante ale acestora (vezi referințele pentru noggin-Smith W. C. și Harland, R.M., Cell 70:829-840, chordin - Sasai, Yet al., 1994, Cell 79: 770-790). Noggin și Chordin se leagă la proteinele BMP, prevenind astfel activarea cascadei de semnale pe care acestea o declanșează și determinând astfel o scădere a transcrierii Delta.
în unele stări patologice, organismul poate fi imunodeprimat și este de dorit să se obțină inhibarea expresiei Delta și/sau Serrate în scopul tratării imunosupresiei provocate. în aceste cazuri se pot utiliza agenți care inhibă expresia Delta și/sau Serrate. Un exemplu de astfel de agenți care inhibă expresia Delta și/sau Serrate este reprezentat de proteina Toii (Medzhitov, R. et. al. 1997, Nature 388:394-397), proteinele BMP și alți agenți care scad sau interferează cu producția de Noggin, Chordin, Follistatin, Xnr3, FGF și Fringe. Prin urmare, invenția se referă în continuare la utilizarea unui agent capabil să inhibe expresia proteinelor Delta sau Serrate, la prepararea unui medicament destinat utilizării în scopul tratării imunodepresiei determinate de tumori sau de infecții bacteriene.
Așa cum s-a discutat mai sus, invenția se ocupă și de modificarea expresiei proteinelor Notch, de modificarea prezentării acestora la nivelul membranelor celulare, sau de modificarea căilor de transmitere a semnalelor Notch. S-a arătat că acestea sunt implicate în răspunsurile imune mediate de celulele T care participă la inducerea toleranței (secundare sau martor). Agenți care cresc expresia unei proteine Notch complet funcționale la nivelul suprafeței celulare, sunt reprezentați de metaloproteinaze ale matricei precum produsul genei Kuzbanian de la Drosophila (Dkuz, Pan, D. și Rubin, G.M. 1997, Ce//90:271-280) și alți membri ai familiei de gene ADAMALYSIN. Agenți care reduc sau interferează cu prezentarea acesteia ca proteină complet funcțională a membranei celulare pot fi reprezentați de inhibitori ai MMP precum inhibitori pe bază de hidroximat.
Termenul de celulă prezentatoare de antigen sau altele de acest fel, așa cum este utilizat în această descriere, nu se limitează doar la celulele APC. Specialiștii în domeniu pot sesiza că se poate utiliza orice vehicul capabil să prezinte celulelor T ligandul Notch dorit, iar termenul APC cuprinde din comoditate toate aceste situații. Astfel, exemple de celule APC adecvate pot fi celule dendritice, celule L, hibridoame, limfoame, macrofage, celule B sau celule APC sintetice precum membranele lipidice.
Atunci când se realizează transfecția celulelor APC cu o genă capabilă să exprime un ligand Notch, se utilizează pentru transfecție un virus, cum ar fi un retrovirus sau un adenovirus, sau orice alt vehicul sau metodă prin care se poate introduce o genă în celule. Acestea sunt reprezentate de orice vehicul sau metodă care au eficiență în terapia cu gene, și anume retrovirusuri, lipozomi, electroporație, alte virusuri precum adenovirusuri, virusuri adenoasociate, virusul herpes, vaccina, ADN precipitat cu fosfat de calciu, transfecție asistată cu dextran DEAE, microinjecție, polietilenglicol, complexe ADN-proteină.
Utilizând astfel de vehiculi sau metode, separat sau în combinație, este posibilă orientarea introducerii genei spre situsul respectiv, într-o anumită populație de celule, ceea ce permite aplicarea in vivo a metodei acestei invenții. De exemplu, se poate utiliza un virus în combinație cu lipozomi pentru a crește eficiența absorbției ADN. Specificitatea introducerii genei într-un anumit situs se poate obține prin includerea de proteine specifice (de exemplu, un anticorp cu lanț unic care interacționează cu CD1 Ic de la celule dendritice/macrofage) în învelișul viral sau în lipozom.
Preferabil, se utilizează structuri prin intermediul cărora expresia genei (de exemplu Serrate) este secundară expresiei antigenului. Celulele APC care (supra)exprimă Serrate vor exprima de asemenea cantități crescute din antigenul respectiv și deci vor interacționa în special cu celule T cu specificitate adecvată.
RO 120850 Β1
O altă variantă a prezentei invenții se referă la o moleculă care conține un fragment 1 de ligand Notch, legat în mod operabil la un alergen sau fragment de antigen al celulei T, astfel că în urma expunerii la celulele T, ambele fragmente sunt capabile să se lege la situsu- 3 rile lor corespunzătoare. O astfel de moleculă are capacitatea de a face ca celulele T specifice pentru un antigen/alergen să fie tolerante față de antigenul sau alergenul de la care 5 provine fragmentul antigenic sau alergenic respectiv, specificitatea dorită a fragmentului de ligand Notch fiind dată de apropierea fragmentului de alergen sau antigen. 7
Fragmentul de antigen sau de alergen poate fi, de exemplu, un complex peptidic CMH sintetic. Acesta este un fragment de moleculă CMH, care are zona de recunoaștere 9 a antigenului cuplată cu un element de antigen. Astfel de complexe au fost descrise de Altman J. D. et al, Science 1996 274:94-6. 11 într-o altă variantă preferată a invenției, compusul este reprezentat de o proteină rezultată prin fuziunea unui segment de Notch sau de domeniul extracelular al ligandului 13 Notch și al unui segment Fc de imunoglobulină, preferabil IgGFc sau IgMFc în toate variantele descrise mai sus, ale prezentei invenții, se preferă ca ligandul 15 Notch să fie o proteină, din familia Serrate sau Delta, sau un derivat, un fragment sau un analog al acestora. 17
Stările infecțioase sau de boală, care potfi descrise ca stări mediate de celule T, sunt reprezentate de astm, alergie, respingerea grefei, boli autoimune, anomalii ale sistemului de 19 celule T induse de tumori, și boli infecțioase precum cele cauzate de specii de Plasmodium, de Microfilaria, de helminți, Mycobacterii, HIV, Citomegalovirus, Pseudomonas, Toxoplasma, 21 Echinoccocus, Haemophilus influenza tip B, pojar, hepatită C sau Toxicara. Prin urmare, utilizând alergenul sau antigenul corespunzător, se poate folosi un ligand Notch în confor- 23 mitate cu prezenta invenție, pentru tratarea bolilor sau infecțiilor menționate.
Invenția se referă și la o metodă de detectare a imunodepresiei induse de un micro- 25 organism invaziv. Astfel de microorganisme pot genera forme solubile de proteine din familia Serrate, Notch și/sau Delta, sau derivați ai acestora, sau proteine care afectează expresia 27 acestora in vivo, provocând astfel imunodepresie și toleranță la infecție. Metoda constă în analiza prezenței Serrate, Delta, Notch, sau a derivaților acestora, nelegați la membrane, și 29 utilizează în mod preferabil un anticorp complementar față de Serrate, Delta sau Notch, sau față de derivații acestora. 31
Metodele utilizate în testele de screening, destinate sesizării nivelurilor crescute sau scăzute de expresie și/sau prelucrare pentru Notch, Delta/Serrate, sunt reprezentate de:33
1. Evaluarea expresiei Delta/Serrate, Notch și Fringe după expunerea celulelor izolate la compușii destinați testării în culturi, utilizându-se de exemplu:35 (a) la nivel de proteine, colorarea cu anticorpi specifici, utilizând metode imunohisto- chimice sau citometria de flux.37 (b) la nivel de ARN, reacția de polimerizare în lanț cu revers transcriptază (RT-PCR). Reacția RT-PCR se poate realiza cu ajutorul unei plasmide martor cu standarde interne 39 pentru măsurarea expresiei genei endogene cu primeri specifici pentru Notch 1 și Notch 2, pentru Serrate 1 și Serrate 2, pentru Delta 1 și Delta 2, Delta 3 și Fringe. Această structură 41 poate fi modificată pe măsură ce se identifică noi membri ai ligandului.
(c) la nivel funcțional în teste de adeziune celulară. 43
Creșterea expresiei Delta/Serrate sau Notch determină creșterea adeziunii între celulele care exprimă Notch și liganzii săi Delta/Serrate. Celulele testate vor fi supuse unui 45 tratament special în cultură, după care se vor suprapune peste ele celule țintă marcate radioactiv sau cu fluoresceină (transfectate cu proteine Notch/Delta/Serrate). Amestecurile 47 de celule vor fi incubate la 37°C, timp de două ore. Celulele neaderate se vor îndepărta prin spălare și se va măsura gradul de aderență prin măsurarea radioactivității sau a imuno- 49 fluorescenței la nivelul suprafeței mediului de cultură.
RO 120850 Β1
Utilizând astfel de metode, se pot identifica compușii sau liganzii Notch care afectează expresia sau prelucrarea unei proteine Notch sau a unui ligand Notch. Invenția are de asemenea ca obiect și compuși sau liganzi Notch detectabili prin aceste metode de testare.
Invenția se referă, de asemenea și la o metodă de testare, care constă în punerea în contact (a) a unei proteine Notch și a unui ligand capabil să se lege la proteina Notch cu (b) un compus; și determinarea influenței pe care compusul o are asupra legării ligandului la proteina Notch, preferabil proteina Notch fiind asociată cu o celulă T.
Liganzii Notch care se utilizează în prezenta invenție sunt în mod preferabil reprezentați de proteine sau polipeptide ale familiei Delta sau Serrate, sau derivați ai acestora. Aceștia se obțin în mod preferabil prin tehnici standard de tehnologie recombinantă, bine cunoscute de specialiștii în domeniu. Secvențe genice adecvate, care se pot utiliza la obținerea unor astfel de compuși ai prezentei invenții, pot fi găsite în publicații precum WO 97/01571, 96/27610 și 92/19734. Cu toate acestea, invenția nu se limitează la secvențele Notch, Delta și Serrate, descrise în aceste publicații. în mod preferabil, astfel de proteine, polipeptide sau derivați ai acestora, care fac parte din familia Notch, Delta sau Serrate, sunt reprezentate de fragmente ale domeniilor extracelulare ale Notch, Delta sau Serrate, sau ale membrilor acestor familii sau sunt reprezentate de derivați ai acestor fragmente. Așa cum este utilizat în prezenta, termenul de ligand Notch” include în plus, orice ligand sau membru al familiei de liganzi care interacționează cu un membru al familiei de proteine Notch și include grupul de proteine denumite proteine toporitmice, și anume proteinele care reprezintă produsul genelor Delta, Serrate, Deltexși Enhancerofsplit, precum și al altor membri ai acestor familii de gene, care pot fi identificați datorită capacității secvențelor genei acestora de a se hibridiza cu proteinele Notch, Delta sau Serrate, sau datorită omologiei lor cu aceste proteine sau a capacității genelor lor de a prezenta interacțiuni fenotipice.
Notch, Delta și Serrate au fost descrise inițial la Drosophila și reprezintă deci proteine prototip pentru receptorii Notch și respectiv pentru familia de liganzi Notch. S-au descris numeroase proteine Notch și liganzi Notch la multe specii de vertebrate și de nevertebrate, dar nomenclatura acestora diferă de cea utilizată la muscă. De exemplu, Notch este un omolog al Lin 12 și Glp 1, iar Serrate/Delta sunt omologi ai Jagged, Apx1 și Lag-2.
Se pot prepara formulări farmaceutice ale prezentei invenții în conformitate cu principii bine cunoscute în domeniu. Astfel, natura excipientului și intensitatea acțiunii vor varia în funcție de compusul prezentei invenții care se utilizează în formulare.
Preferabil, compozițiile farmaceutice sunt în formă de dozaj unitară.
Dozele de compuși ai prezentei invenții, care se vor administra unui pacient sub formă de formulare farmaceutică, vor fi determinate de un medic de specialitate corespunzătoare.
Calea preferată de administrare a unei formulări a prezentei invenții poate fi oricare dintre căile uzuale, și anume administrare intramusculară și intraperitoneală, injecție intravenoasă, inhalare intranazală, intrapulmonară, administrare subcutană, intradermică, intraarticulară, intratecală, locală și pe cale enterală (de exemplu, prin patch-uri Peyers).
Termenul derivat, așa cum se utilizează în prezenta, referitor la proteinele sau la polipeptidele prezentei invenții, include orice substituție, variație, modificare, înlocuire, deleție sau adăugare a unuia sau mai multor resturi de aminoacizi, din sau în secvența respectivă, cu condiția ca proteina rezultată să aibă capacitatea de a modula interacțiunile Notch - ligand Notch.
Termenul de analog, așa cum este utilizat în prezenta, referitor la proteine sau la polipeptide ale prezentei invenții, include orice compus peptidomimetic, care este un compus chimic cu capacitatea de a modula interacțiunile Notch-lingand Notch în mod similar cu proteina sau cu polipeptidul original. Aceștia includ compuși care pot fi agoniști sau antagoniști ai expresiei sau ai acțiunii unei proteine Notch sau a unui ligand Notch.
RO 120850 Β1
Se poate considera că un compus modulează interacțiunile ligand Notch-Notch, dacă 1 este capabil să inhibe sau să stimuleze interacțiunea Notch cu liganzii săi, preferabil într-o măsură suficientă pentru a asigura eficiență terapeutică. 3
Expresia ligand Notch-Notch, așa cum este utilizată în prezenta, semnifică interacțiunea între un membru al familiei Notch și un ligand care posedă capacitatea de a se lega 5 la unul sau la mai mulți membri de acest fel.
Termenul terapie, așa cum este utilizat în prezenta, cuprinde aplicații cu scop diag- 7 nostic și profilactic.
Termenul medical include utilizare atât la om, cât și în medicina veterinară. 9
Așa cum se utilizează în această descriere, termenii proteină și polipeptid pot fi considerați ca sinonome, termenul de proteină fiind utilizat în sens general pentru a indica 11 o secvență de aminoacizi ceva mai lungă decât cea prezentă în structura unui polipeptid.
Prezenta invenție va fi descrisă în continuare prin exemple care nu limitează dome- 13 niul invenției, aceste exemple având trimiteri la figurile anexate, în care:
- fig. 1 prezintă rezultatele unor hibridizări in situ realizate așa cum s-a descris în 15 exemplul 1;
- fig. 2, prezintă rezultatele experimentului descris în exemplul 4;17
- fig. 3, prezintă rezultatele experimentului descris în exemplul 5;
- fig. 4, prezintă rezultatele experimentului descris în exemplul 6;19
- fig. 5, prezintă rezultatele experimentului descris în exemplul 7;
- fig. 6, prezintă rezultatele experimentului descris în exemplul 8;21
- fig. 7, prezintă rezultatele experimentului descris în exemplul 9;
- fig. 8a și 8b, prezintă rezultatele experimentului descris în exemplul 10;23
- fig. 9, prezintă rezultatele experimentului descris în exemplul 11.
Exemplul 1. Notch, Delta și Serrate sunt exprimate la nivelul sistemului imun 25 periferic.
S-au sintetizat sonde ARN antisens specifice pentru Notch 1, Delta 1 și Serrate 1 și 27 au fost încorporate cu UTP marcat cu digoxigenină. S-a dizolvat fiecare sondă în soluție tampon de hibridizare, s-a încălzit amestecul la 70°C, timp de 5...10 min și s-a turnat pe lame 29 acoperite cu TESPA, pe care se află secțiuni de splină sau de timus, care au fost fixate în prealabil cu paraformaldehidă 4% + PBS. Preparatele au fost hibridizate peste noapte la 31
65“C. în ziua următoare, s-au spălat preparatele de două ori la 65°C și de două ori la temperatura camerei, cu 1 x SSC/50% Formamidă/0,1% Tween 20. S-au spălat preparatele de 33 două ori cu acid maleic 0,1 M/NaCI 0,15 M/Tween 20 0,1%, soluție tampon (MABT) pH 7,5 la temperatura camerei și apoi s-au blocat timp de două ore cu MABT + ser de capră 20% 35 + reactiv de blocare Boehringer 296 (BBR). Preparatele au fost incubate peste noapte la temperatura camerei, cu fragmente Fab de antidigoxigenină. După patru spălări cu MABT, 37 preparatele au fost spălate încă de două ori în soluție tampon pentru substrat alcalin. S-a detectat prezența sondelor ARN antisens legate, prin incubarea la întuneric a preparatelor 39 în soluție tampon pentru substrat care conține NBT+BCIP. Preparatele au fost colorate cu hematoxilină și au fost fixate în mediu de fixare Depx. 41
Rezultate: Rezultatele acestor hibridizări sunt prezentate în fig. 1, care arată că într-o splină de la un șoarece în vârstă de 3 luni, Delta și Serrate sunt exprimate de celule izolate, 43 în teaca periarteriolară și nu în centrul germinativ (gc). Notch este exprimat în multe celule, de asemenea, la nivelul tecii periarteriolare. 45
RO 120850 Β1
Exemplul 2. Obținerea proteinei de fuziune Fc-Delta.
Cu ajutorul vectorului de expresie p1 G-1 [D. Simmons, Clonarea moleculeleor suprafeței celulare prin expresie tranzitorie la nivelul suprafeței celuleleorde mamifer pg.93-128, Cellular Interactions in Development, Ed. D. Hartley, pub. Ox. Uni. Press (1993)] s-a realizat obținerea unei proteine de fuziune care conține porțiunea extracelulară a proteinei Delta 1, legată la domeniul Fc al IgG 1 umane. A fost donat în vectorul plG-1 un fragment al unei enzime de restricție care conține doar domeniul extracelular al proteinei Delta 1. Plasmida rezultată a fost transformată în E. coli MC 1061 și cultivată în SOB cu conținut de tetraciclină/ampicilină 10 pg/ml. S-a utilizat vector purificat pentru transfecția celulelor COS in vitro. Celulele COS au fost cultivate la o confluență de 50...75% și apoi au fost transfectate cu câte 10 pg de ADN plasmidic în fiecare vas prin metoda DEAE-dextran. La 24 h după transfecție, mediul de cultură a fost înlocuit cu mediu de cultură ce conține FCS 1% și celulele au fost cultivate încă 3...6 zile in vitro. Celulele au fost centrifugate timp de 5 min la 5000 rpm, pentru separarea celulelor și detritusurilor, iar supernatantul a fost prelevat și păstrat până ce a fost necesar. S-a purificat proteina de fuziune Fc-Delta din supernatanții culturilor, prin adăugarea a 2 ml de suspensie 50% de proteină Sepharose (Pharmacia) și s-a centrifugat peste noapte la 4°C. S-au izolat perlele de Sepharose prin trecerea supernatanților printr-un filtru de 0,45 mm, au fost spălate și transferate într-o coloană de plastic de 10 ml. Produsul de fuziune Fc-Delta a fost eluat cu 2 ml de tampon de eluare, pH 4,0. Eluatul a fost neutralizat prin adăugare de bază Tris 1M.
Exemplul 3. Exemple de modele experimentale în care se poate investiga calea de transmitere a semnalelor ligandului Notch.
Toleranța periferică față de antigenele proprii poate fi analizată la receptori ai celulelor T (TCR), la șoareci transgenici la care lingandul TCR este exprimat ca antigen seif doar în periferie. Toleranța periferică față de antigene de transplant poate fi indusă prin câteva metode printre care tratamentul prealabil al gazdei cu anticorpi ai celulelor T sau prin blocarea costimulării. Se pot demonstra astfel atât imunodepresia secundară, cât și toleranța la infecție. Toleranța periferică la alergeni poate fi indusă prin administrarea intranazală de peptide derivate din alergeni. Expresia complexelor Notch-ligant Notch se măsoară pe celule recoltate din căile aeriene și/sau din țesutul limfatic după inhalarea alergenilor și se demonstrează modificările de toleranță. Mai mult, se poate măsura expresia complexelor Notch - ligand Notch în modele experimentale de infecție cu agenți infecțioși, la organismul (patogen) și la celulele imunocompetente ale gazdei.
Exemplul 4. Hibridoame cu expresie Delta pot inhiba răspunsurile imune ale limfocitelor inițiate cu antigen.
Au fost imunizați șoareci cu un peptid sintetic care conține un epitop imunodominant al alergenului conținut de moliile de praf de casă (HDM), Der p1 /p110 -131), sau cu ovalbumină (OVA, proteină a albușului din oul de găină). După o săptămână s-au recoltat celulele ganglionare limfatice (LNC) și s-au preparat suspensii celulare. Ganglionii limfatici de la animale imunizate cu diverși antigeni au fost păstrați separat. Aceste celule sunt denumite LNC inițiate.
Hibridoame de celule T au fost transfectate fie cu genă Delta completă, fie cu o plasmidă martor, astfel încât Delta să fie exprimată ca proteină membranară. După două zile în cultură, hibridoamele au fost iradiate pentru a preveni proliferarea lor sau producția de citokine. Astfel, singurul răspuns care a fost măsurat în cursul acestui test se datorează doar celulelor ganglionilor limfatici.
S-au adăugat hibridoame iradiate în număr crescând, în culturi care conțin LNC inițiate. S-a adăugat antigenul corespunzător (și anume p 110-131 sau OVA) și celulele au fost cultivate timp de 24 h. Lichidele supernatante au fost apoi colectate și analizate din punct de vedere al conținutului în IL-2 (un factor major de creștere a celulelor T). S-au măsurat de asemenea răspunsurile proliferative ale celulelor ganglionilor limfatici după 72 h.
RO 120850 Β1
Rezultate: Celulele limfatice ganglionare, cultivate în prezența hibridoamelor iradiate 1 care exprimă o plasmidă martor, au proliferat în continuare, așa cum se arată în fig. 2, și au secretat IL-2, atunci când au fost stimulate în cultură cu antigenul adecvat. Responsivitatea 3 lor s-a păstrat într-un raport de 1:1, LNC: hibridom. în schimb, răspunsul proliferativ și producția de IL-2 ale celulelor limfatice ganglionare au fost reduse cu cel puțin 88%, atunci când 5 s-au cultivat împreună cu hibridoame ce exprimă gena Delta completă (în raport 1:1) cu antigenul corespunzător. Hibridoamele transfectate cu virus martor (cercuri deschise), cu 7 virus Delta (pătrate deschise). Fig. 2 exprimă datele prezentate ca numărători pe minut (cpm) ale încorporării de 3H-Tdr la 72 h de la începutul culturii. Cpm ale celulelor ganglionare 9 limfatice (LNC), cultivate cu hibridoame care exprimă structuri Delta sau martor. Numărul total de celule/cavitate = 4 x 105 (și anume numărul de LNC variază în funcție de raportul 11 hibridoamelor față de LNC, astfel că și cpm variază), p110-131 LNC sunt celule inițiate cu Der p1 (p110-131), OVA LNC sunt celule inițiale cu OVA. 2BB11 și 2BC3 sunt două 13 hibridoame reactive Der p1 diferite.
Aceste date arată că inhibiția răspunsurilor imune cu celule T care exprimă delta 15 poate fi realizată în trans. Deși în acest sistem de culturi, hibridoamele T care exprimă delta, specifice pentru Derp 1, au fost capabile să inhibe răspunsul celulelor T inițiate OVA, 17 această lipsă aparentă de specificitate pare să fie datorată apropierii forțate a celulelor, determinată de sistemul de cultură. într-adevăr, datele prezentate în fig. 8a și 8b arată că la 19 animale, hibridoamele cu expresie Delta trebuie să aibă specificitate de antigen în raport cu imunogenul respectiv, astfel încât să se obțină un efect de modulare a răspunsului imun față 21 de imunogenul respectiv. în acest caz, se pare că celulele T care exprimă delta pot fi aduse în apropierea celulelor T reactive, doar dacă recunosc același antigen pe aceleași celule 23 APC.
Exemplul 5. Celulele dendritice care exprimă Serrate previn inițierea cu antigen a 25 limfocitelor.
Celulele dendritice (DC) sunt celulele prezentatoare de antigen primare în sistemul 27 imun și sunt esențiale pentru stimularea răspunsului imun al celulelor T. Celulele dendritice au fost recoltate din splină și transfectate fie cu un retrovirus care permite expresia proteinei 29 Serrate complete, fie cu un retrovirus martor. Celulele dendritice au fost de asemenea stimulate cu peptid HDM p110-131, timp de 3 h, in vitro, la 37°C. Celulele dendritice au fost apoi 31 spălate și utilizate pentru imunizarea unor șoareci naivi, subcutanat, cu 10 celule/șoarece.
După 7 zile, celulele LNC colectate au fost recuperate și restimulate în cultură cu peptid, la 33 4 x 105 celule/cultură. Deoarece șoarecii au fost imunizați doar cu celule dendritice stimulate cu peptid, se poate măsura capacitatea acestor celule de a iniția răspunsul imun. 35
Rezultate: Fig. 3 prezintă datele exprimate ca cpm ale LNC, după 72 h de cultură, de la animale imunizate cu celule dendritice transfectate cu martor (cercuri deschise) sau cu 37 Serrate (pătrate deschise).
Imunizarea șoarecilor cu celule dendritice care exprimă Serrate a determinat o 39 scădere de 10 ori a numărului de celule recuperate din ganglionii limfatici comparativ cu imunizarea cu celule dendritice martor. Noi am descoperit în plus că celulele LNC de la șoareci 41 imunizați cu celule dendritice + Serrate nu au mai proliferat (reducere 93% față de valorile martor, fig. 3) sau nu au mai secretat IL-2 comparativ cu celulele de la șoareci imunizați cu 43 celule dendritice martor.
Exemplul 6. Hibridoamele de celule T care exprimă Delta sunt capabile să inhibe 45 dezvoltarea imunității față de antigen Der p1 la animale.
Hibridoame de celule T (reactive la Der p1) au fost transfectate cu un retrovirus care 47 conține Delta de șoarece, astfel încât Delta a fost exprimată pe suprafața celulară, sau cu un retrovirus martor. S-au injectat intraperitoneal șoareci 57 BL, cu 10 milioane de celule de 49 hibridom iradiate, și s-au imunizat cu 50 pg de Der p1 emulsifiat în adjuvant complet Freunds
RO 120850 Β1 (CFA) subcutanat. După 7 zile, celulele ganglionare limfatice atrase au fost colectate și cultivate la o densitate de 4 x 105 celule /cavitate cu Der p1 (10 pg/ml), peptid 110-131 de la Der p1 (10 pg/ml), sau peptid 81 -102 de la Der p1 (10 pg/ml). Culturile au fost incubate la 37’C, timp de 72 h și s-a adăugat timidină tritiată în ultimele 8 h de cultivare. Rezultatele testelor de proliferare a celulelor de la animale injectate cu celule transfectate cu martor (puro) sau cu celule transfectate cu Delta (Delta-FL) sunt prezentate în fig. 4.
Rezultate: Celulele LNC de la animale injectate cu hibridoame transfectate cu virus martor au produs niveluri crescute de IL-2 și au proliferat în cultură, în prezența peptidului 110-131 sau a peptidului 81-102, Der p1. Spre deosebire de acestea, celulele de la animale injectate cu hibridoame ce exprimă Delta nu au determinat răspuns la nici unul dintre antigenii Der p1 (fig. 4).
Exemplul 7. Celulele T umane care exprimă Delta pot bloca răspunsul celulelor T normale.
S-a transfectat o clonă de celule T umane sensibile la Haemophilus influenza, cu Delta de la șoarece, utilizând o structură retrovirală, pentru obținerea expresiei proteinei Delta la suprafața celulelor. Prin amestecarea acestei populații celulare cu celule HA 1,7 normale, s-a prevenit reactivitatea secundară a acestor celule HA 1,7 față de peptidul HA 306-318 și de celulele prezentatoare de antigen. S-au amestecat 5 x 105 celule HA 1,7 cu 1 x 106 celule mononucleare din sângele periferic (PBMC) DRB1*0101 iradiate + 1 pg de celule HA 306-318, și s-au cultivat la 37’C. După 6 h s-a adăugat mediu de cultură pentru limfocite 5% (cu conținut în IL-2) într-un volum total de 1 ml. După 24 h de la inițierea culturii, s-a adăugat retrovirus cu Delta, retrovirus martor sau nu s-a adăugat nimic. La 7 zile de la inițierea culturii, s-au recoltat celulele, s-au spălat, iar celulele transfectate au fost iradiate. S-au amestecat celulele transfectate într-un raport de 2:1 cu celule HA 1.7 netratate și s-au cultivat timp de 2 zile. Culturile amestecate au fost apoi recoltate, spălate și însămânțate, utilizând 2 x 104 celule viabile/cavitate, împreună cu:
a) 2.5 x 104 DRB1* 0101 PBMC (mediu),
b) 2.5 x 104 DRB1* 0101 PBMC + peptid (Ag + APC),
c) 5% limfocult (IL-2).
S-au recoltat celulele după 68 h, adăugându-se timidină tritiată în ultimele 8 h. Rezultatele sunt prezentate în fig. 5.
Rezultate: După cultivare separat sau cu celule HA 1.7 transfectate cu virus martor, celulele HA 1,7 netratate răspund bine la peptid + celule prezentatoare de antigen. Incubarea cu celule HA 1.7 transfectate cu Delta și iradiate previne complet răspunsul celulelor HA 1.7 la antigen + APC. Cu toate acestea, celulele de acest fel răspund la IL-2 la fel ca și celulele HA 1.7 netratate sau incubate cu virus martor, ceea ce arată că nu sunt doar incapabile să prolifereze (fig. 5).
Exemplul 8. Expresia Serrate de către celulele prezentatoare de antigen previne răspunsul celulelor T.
S-a amestecat o clonă HA 1.7 cu peptid HA 306-318 (1.0 pg/ml) în prezența celulelor L care exprimă HLA-DRB1*0101 (ca celule prezentatoare de antigen), utilizând 2 x 104 din fiecare tip de celule. Celulele L au fost transfectate cu retrovirus care exprimă fie un martor (puro), fie Serrate (celule L Serrate). Răspunsul proliferativ a fost măsurat după 72 h, după adăugarea de timidină tritiată în ultimele 8 h de cultură. Rezultatele sunt prezentate în fig. 6 pentru culturile HA 1.7.
a) separat pn
b) IL-2 O
c) + peptid + celule DRB1 * 0101-L 0
d) + peptid + celule DRB1 * 0101-L-transfectate cu virus martor £
e) + peptid + celule DRB1 * 0101-L-transfectate cu virus serrate s
RO 120850 Β1
Rezultate: HA 1,7 stimulate de celule L ce exprimă Serrate au răspuns slab la antigen 1 comparativ cu cele stimulate de celulele L transfectate cu martor (fig. 6).
Exemplul 9. Celule prezentatoare de antigen care exprimă Serrate induc celule T 3 reglatoare.
S-a amestecat o clonă HA 1,7 cu peptid HA 306-318 și celule L (care exprimă 5 DRBI*0101 ca celule prezentatoare de antigen) în prezență de IL-2 2%. Celulele L au fost transfectate fie cu retrovirus martor, fie cu retrovirus ce exprimă Serrate. După 7 zile de 7 cultură, s-au recoltat celulele HA 1,7, s-au spălat și s-au iradiat înainte de a fi amestecate cu celule HA 1,7 proaspete (2 χ 107 fiecare populație de celule). Celulele au fost cultivate9 pentru încă 2 zile înainte de a fi stimulate cu peptid (1.0 pg/ml) + celule prezentatoare de antigen normale (DRB1* 0101 PBMC). S-a măsurat răspunsul proliferativ după 72 h, după 11 adăugarea de timidină tritiată în ultimele 8 h de cultivare.
Rezultatele sunt prezentate în fig. 7 pentru celule HA 1,7 proaspete cultivate:13
a) separat £3
b) + IL-2 O15
c) + HA 1,7 induse cu virus martor, apoi peptid - DRB 1*0101 PBMC §
d) + HA 1,7 induse cu virus serrate, apoi peptid - DRB1* 0101 PBMC KJ17
Rezultate: HA 1,7 induse de celule L ce exprimă Serrate (HA 1,7 induse cu Serrate) au prevenit răspunsul celulelor HA 1,7 normale față de stimulul antigenic normal (fig. 7).19
Aceasta demonstrează capacitatea celulelor devenite tolerante prin expunere la Serrate, de a transmite toleranța lor la o populație de celule naive (toleranță la infecție/martor).21
Exemplul 10. Reglarea indusă de celule Tce exprimă Delta este antigen specifică.
S-au injectat șoareci cu 107 celule T hibridoame transduse fie cu retrovirus Delta, fie 23 cu retrovirus martor. Hibridomul a fost 2BC3, care are specificitate pentru peptidul 110-131 de la Der p1. în același timp, animalele au primit fie Der p1, fie ovalbumină, emulsifiate în 25 adjuvant complet Freund. După 7 zile s-au recoltat celulele din ganglionii limfatici și s-au cultivat 4 x 105 celule, în prezență de Der pi sau de ovalbumină (utilizând același antigen cu 27 care s-a realizat imunizarea lor).
S-a măsurat producția de IL-2, la 24 h de la începutul culturii. Indicii de stimulare 29 pentru producția de IL-2 sunt prezentați în fig. 8a (răspunsul animalelor imunizate cu Derpl) și 8b (răspunsul animalelor imunizate cu OVA), pentru animalele injectate cu hibridoame 31 transfectate cu retrovirus martor (puro) sau cu retrovirus Delta (delta).
Rezultate: Răspunsul la Der p1 în cazul animalelor injectate cu hibridoame 2BC3 33 care exprimă Delta a fost în mod real complet abolit, în timp ce răspunsul la ovalbumină nu a fost influențat. Aceste date sunt prezentate în fig. 8a și 8b, fiecare punct reprezintă pro- 35 ducția de IL-2, determinată de antigen la un șoarece, exprimată ca indice de stimulare (SI) a răspunsului martor (fără antigen). 37
Exemplul 11. Delta este exprimată de celule T în timpul inducerii toleranței.
S-au cultivat celule HA 1,7 în prezența peptidului HA306-318 (50 pg/ml) în absența 39 celulelor APC. Aceste condiții determină o stare de toleranță a celulelor HA 1,7. După 0, 30, 120, 240 sau 360 min, s-au recoltat celule (1,5 x 106), s-au centrifugat și au fost înghețate. 41 S-a preparat ARN din sedimentele celulare, prin omogenizare în soluție de tiocianat de guanidină, urmate de centrifugare de densitate CsCI. S-a transformat 1 pg de ARN în ADNC, utili- 43 zând un oligoprimer dT. S-a utilizat 1/20 din ADNc-ul rezultat, în reacția POR (40 de cicluri), utilizând primeri specifici pentru omologul delta uman. S-au analizat probe PCR prin electro- 45 foreză în gel (fig. 9), în care banda 1 reprezintă markerul, banda 2, t = 0, banda 3, t = 30 min, banda 4, t = 120 min, banda 5, t = 240 min, banda 6, t = 360 min și banda 7 reprezintă 47 martorul negativ.
Rezultate: Celulele HA 1,7 în repaus nu au exprimat ARNm Delta, dar transcrierile 49 au apărut la 2 h de la inițierea protocolului de inducere a toleranței.
RO 120850 Β1
Exemplul 12. Analiza expresiei Notch 1, Serrate 1 și Delta 1 în timpul inducerii toleranței prin metode imunohistologice și hibridizare in situ.
Șoarecii C57BL/6J au fost tratați intranazal fie cu 100 pg de peptid 110-131 Der p1, fie cu o soluție martor (soluție salină tamponată cu fosfat, PBS), timp de trei zile consecutive. Se știe că administrarea intranazală de acest fel a antigenului induce toleranță față de antigenul respectiv. Câteva dintre animale au fost lăsate în repaus timp de 2 săptămâni, înainte de a fi restimulate cu antigen, prin injectarea a 50 pg Der p1/CFA subcutanat la baza cozii. După aceea s-au recoltat ganglionii limfatici superficiali și splinele animalelor la diverse momente de timp (dO fiind prima zi de tratament intranazal sau restimulare antigenică) și au fost preparate pentru analiză imunohistologică sau hibridizare in situ. în vederea analizei imunohistologice, țesuturile au fost congelate și s-au tăiat secțiuni de 3 j.m, s-au fixat în acetonă rece de la gheață după care s-au colorat cu anticorpi policlonali specifici pentru Notch 1 și Serrate 1. S-au detectat anticorpii legați, utilizând anticorpi de capră anti-iepure, conjugați cu peroxidază de hrean, developând cu diaminobenzidină ca substrat. Anticorpii specifici pentru Delta 1 nu au fost disponibili pentru studiu. în vederea hibridizării in situ, țesuturile congelate au fost secționate și fixate în paraformaldehidă 4%. Secțiunile au fost hibridizate cu sonde de ARN antisens cuplate cu digoxigenină, specifice pentru Notch 1, Serrate 1 și Delta 1, la 65°C. Sonda legată a fost detectată cu anticorpi de capră antidigoxigenină conjugați cu fosfatază alcalină, developând cu NBT și BCIP ca substrat. Datele prezentate în tabelele 1 și 2 corespund analizei imunohistologice și respectiv hibridizării in situ. Datele reprezintă analiza țesuturilor de la 5 șoareci separați, după administrare intranazală de peptid singur (PBS/p 110-131 primar) sau restimulare antigenică intranazal 20 sau subcutanat (PBS/p 110-131 restimulare) + colorare slabă ++ colorare moderată +++ colorare intensă
Rezultate: Nivelurile bazale de Notch, Delta și Serrate sunt exprimate la șoareci martor care au primit doar PBS. Șoarecii cărora li s-a administrat intranazal PBS și subcutanat antigen au prezentat o creștere moderată a expresiei celor trei molecule, în cursul a 8 zile de restimulare. Animalele care au primit fie peptid administrat intranazal, singur sau urmat de restimulare antigenică, au prezentat aceeași schemă de creștere a expresiei Notch, Delta și Serrate, care a fost mai rapidă și mai intensă decât la șoarecii martor.
Alte modificări ale prezentei invenții vor fi evidente pentru specialiștii în acest domeniu.
Tabelul 1
Expresia proteinelor Notch și Serrate în cursul inducerii toleranței
| tratament | ziua 0 | ziua 1 | ziua 4 | ziua 8 | ziua 12 | |
| Notch 1 | PBS primar | + | + | + | l· | + |
| PBS. restimulare | + | + | + | +/++ | +/++ | |
| p 110-131 primar | + | + | ++ | +-++ | +++ | |
| p 110-131, restimulare | + | 4- | ++ | +++ | +++ | |
| Serrate 1 | PBS primar | 4- | + | 4- | + | + |
| PBS, restimulare | + | + | + | +/++- | +/++ | |
| p 110-131 primar | + | -u | 4-4- | +Ί-+ | ||
| p 110-131, restimulare | + | + | -H- | -H-+ | +++ |
RO 120850 Β1
Tabelul 2
Expresia transcrierilor Notch, Delta și Serrate în cursul inducerii toleranței
| tratament | ziua 0 | ziua 1 | ziua 4 | ziua 8 | ziua 12 | |
| Notch 1 | PBS primar | 4- | 4- | 4- | 4- | 4- |
| PBS, restimulare | + | 4- | “b | 4-/4-4- | +/++ | |
| p 110-131 primar | 4- | 4- | ++ | +++ | 4-4-4- | |
| p 110-131, restimulare | 4- | 4- | ++ | 4-4-4- | 444- | |
| Serrate 1 | PBS primar | + | 4- | 4- | + | 4- |
| PBS, restimulare | 4- | 4- | 4- | 4-/4—h | +/++ | |
| p 110-131 primar | 4- | 4- | 4-4- | 4-++ | 4-4-4- | |
| p 110-131, restimulare | 4- | 4- | 4-4- | 44—î- | 4-4-4- | |
| Delta 1 | PBS primar | 4~ | 4- | 4- | 4- | 4- |
| PBS, restimulare | 4- | 4- | 4- | +/+-+ | 4-/4—h | |
| p 110-131 primar | 4- | 4- | 4-4- | 44-4- | 4-44- | |
| p 110-131, restimulare | 4- | 4-4- | +4-+ | +++ |
Revendicări
Claims (6)
1. Utilizare a unui ligand Notch sau a unui fragment eficient din punct de vedere terapeutic sau a unui derivat al acestuia, sau a unei polinucleotide care codifică un ligand Notch sau un fragment eficient din punct de vedere terapeutic sau un derivat al acestuia, pentru fabricarea unui medicament folosit în imunoterapie.
2. Utilizare conform revendicării 1, la care imunoterapia se referă la tratamentul unei boli sau infecții mediate de celule T.
3. Utilizare conform revendicării 2, la care boala sau infecția mediată de celule T este determinată de unul sau mai mulți dintre următorii factori: alergie, reacție autoimună, respingere a grefei, anomalii ale celulelor T induse de tumori și boli infecțioase.
4. Utilizare conform oricăreia dintre revendicările 1 la 3, în care ligandul Notch este selectat dintre Serrate, Delta sau fragmente sau derivați ai acestora.
5. Utilizare a unui ligand Notch sau a unui fragment eficient din punct de vedere terapeutic sau a unui derivat al acestuia, sau a unei polinucleotide care codifică un ligand Notch sau un fragment eficient din punct de vedere terapeutic sau un derivat al acestuia, pentru fabricarea unui medicament pentru influențarea supresiei secundare.
6. Utilizare a unui ligand Notch sau a unui fragment eficient din punct de vedere terapeutic sau a unui derivat al acestuia, sau a unei polinucleotide care codifică un ligand Notch sau un fragment eficient din punct de vedere terapeutic sau un derivat al acestuia, pentru producerea unui medicament folosit pentru influențarea toleranței la infecție.
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB9623236.8A GB9623236D0 (en) | 1996-11-07 | 1996-11-07 | Notch |
| GBGB9715674.9A GB9715674D0 (en) | 1997-07-24 | 1997-07-24 | Notch |
| GBGB9719350.2A GB9719350D0 (en) | 1997-09-11 | 1997-09-11 | Notch |
| PCT/GB1997/003058 WO1998020142A1 (en) | 1996-11-07 | 1997-11-06 | Notch |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RO120850B1 true RO120850B1 (ro) | 2006-08-30 |
Family
ID=27268574
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RO99-00524A RO120850B1 (ro) | 1996-11-07 | 1997-11-06 | "notch" |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (2) | EP1616958A3 (ro) |
| JP (1) | JP4339406B2 (ro) |
| KR (1) | KR100393234B1 (ro) |
| CN (2) | CN1160371C (ro) |
| AT (1) | ATE299184T1 (ro) |
| AU (1) | AU736361B2 (ro) |
| BG (1) | BG103444A (ro) |
| CA (1) | CA2271248C (ro) |
| CZ (1) | CZ295997B6 (ro) |
| DE (1) | DE69733695T2 (ro) |
| ES (1) | ES2243986T3 (ro) |
| GB (2) | GB2353094B (ro) |
| GE (1) | GEP20043390B (ro) |
| IL (1) | IL129531A0 (ro) |
| NO (1) | NO992196L (ro) |
| NZ (1) | NZ335549A (ro) |
| PL (1) | PL333302A1 (ro) |
| RO (1) | RO120850B1 (ro) |
| TR (1) | TR199901000T2 (ro) |
| WO (1) | WO1998020142A1 (ro) |
Families Citing this family (36)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997001571A1 (en) | 1995-06-28 | 1997-01-16 | Imperial Cancer Research Technology, Ltd. | Nucleotide and protein sequences of vertebrate delta genes and methods based thereon |
| US5780300A (en) * | 1995-09-29 | 1998-07-14 | Yale University | Manipulation of non-terminally differentiated cells using the notch pathway |
| GB9824045D0 (en) * | 1998-11-03 | 1998-12-30 | European Molecular Biology Lab Embl | Regulator protein |
| GB9827604D0 (en) * | 1998-12-15 | 1999-02-10 | Lorantis Ltd | Methods of immunosuppression |
| GB9927328D0 (en) * | 1999-11-18 | 2000-01-12 | Lorantis Ltd | Immunotherapy |
| GB0019242D0 (en) * | 2000-08-04 | 2000-09-27 | Lorantis Ltd | Assay |
| US6689744B2 (en) | 2000-09-22 | 2004-02-10 | Genentech, Inc. | Notch receptor agonists and uses |
| AU9275001A (en) * | 2000-09-22 | 2002-04-02 | Genentech Inc | Notch receptor agonists and uses |
| GB0118155D0 (en) * | 2001-07-25 | 2001-09-19 | Lorantis Ltd | Superantigen |
| CA2454937A1 (en) * | 2001-07-25 | 2003-02-13 | Lorantis Limited | Modulators of notch signalling for use in immunotherapy |
| GB0123379D0 (en) * | 2001-09-28 | 2001-11-21 | Lorantis Ltd | Modulators |
| US7682825B2 (en) * | 2002-02-06 | 2010-03-23 | Sanbio, Inc. | Differentiation of bone marrow stromal cells to neural cells or skeletal muscle cells by introduction of notch gene |
| JP2006506322A (ja) * | 2002-04-05 | 2006-02-23 | ロランティス リミテッド | 内科療法 |
| AU2003255735A1 (en) * | 2002-08-03 | 2004-02-23 | Lorantis Limited | Conjugate of notch signalling pathway modulators and their use in medical treatment |
| GB0218879D0 (en) * | 2002-08-14 | 2002-09-25 | Lorantis Ltd | Medical treatment |
| GB0220658D0 (en) * | 2002-09-05 | 2002-10-16 | Lorantis Ltd | Immunotherapy |
| AU2003269268A1 (en) * | 2002-10-09 | 2004-05-04 | Lorantis Limited | Modulation of immune function |
| WO2004060262A2 (en) * | 2003-01-07 | 2004-07-22 | Lorantis Limited | Modulators of notch signalling for use in immunotherpapy |
| GB0300428D0 (en) * | 2003-01-09 | 2003-02-05 | Lorantis Ltd | Medical treatment |
| JP2006517533A (ja) * | 2003-01-23 | 2006-07-27 | ロランティス リミテッド | Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路のアクチベーターを用いる自己免疫疾患の治療 |
| GB0303663D0 (en) * | 2003-02-18 | 2003-03-19 | Lorantis Ltd | Assays and medical treatments |
| WO2004082710A1 (en) * | 2003-03-21 | 2004-09-30 | Lorantis Limited | Treatment of allergic diseases using a modulator of the notch signaling pathway |
| WO2004083372A2 (en) * | 2003-03-21 | 2004-09-30 | Lorantis Limited | Modulators of the notch signaling pathway immobilized on particles for modifying immune responses |
| GB0307472D0 (en) * | 2003-04-01 | 2003-05-07 | Lorantis Ltd | Medical treatment |
| US7919092B2 (en) | 2006-06-13 | 2011-04-05 | Oncomed Pharmaceuticals, Inc. | Antibodies to notch receptors |
| EP2125887A4 (en) | 2007-01-24 | 2010-11-10 | Oncomed Pharm Inc | COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE DIAGNOSIS AND TREATMENT OF CANCER |
| JP5560270B2 (ja) | 2008-07-08 | 2014-07-23 | オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | Ｎｏｔｃｈ結合剤およびアンタゴニストならびにその使用方法 |
| US9475855B2 (en) * | 2008-08-22 | 2016-10-25 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Human Notch3 based fusion proteins as decoy inhibitors of Notch3 signaling |
| US8709710B2 (en) | 2009-02-16 | 2014-04-29 | Deutsches Rheuma-Forschungszentrum Berlin | Methods of modulating interleukin-22 and immune response by notch regulators |
| EP3029070A1 (en) | 2009-08-29 | 2016-06-08 | AbbVie Inc. | Therapeutic dll4 binding proteins |
| EP3680253A3 (en) | 2010-03-02 | 2020-09-30 | AbbVie Inc. | Therapeutic dll4 binding proteins |
| EP2694080B1 (en) * | 2011-04-06 | 2018-03-14 | SanBio, Inc. | Methods and compositions for modulating peripheral immune function |
| JP2015505668A (ja) * | 2011-11-16 | 2015-02-26 | オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | ヒトｎｏｔｃｈ受容体変異およびその使用 |
| WO2013167620A1 (en) * | 2012-05-10 | 2013-11-14 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Immunomodulatory methods using notch agonists |
| KR101573650B1 (ko) * | 2015-02-04 | 2015-12-01 | 성균관대학교산학협력단 | Hcmv 바이러스 복제 억제용 조성물 |
| CA3110089A1 (en) * | 2018-08-28 | 2020-03-05 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Methods and compositions for adoptive t cell therapy incorporating induced notch signaling |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IL101728A (en) * | 1991-05-03 | 2007-08-19 | Univ Yale | Human Abandonment and Delta, Restrictive Areas of Effect in Tophoric Proteins, and Methods Based on Them |
| US5869282A (en) * | 1991-12-11 | 1999-02-09 | Imperial Cancer Research Technology, Ltd. | Nucleotide and protein sequences of the serrate gene and methods based thereon |
| US5786158A (en) * | 1992-04-30 | 1998-07-28 | Yale University | Therapeutic and diagnostic methods and compositions based on notch proteins and nucleic acids |
| CA2182498A1 (en) * | 1994-02-01 | 1995-08-10 | William J. Larochelle | Fusion proteins that include antibody and nonantibody portions |
| US5780300A (en) * | 1995-09-29 | 1998-07-14 | Yale University | Manipulation of non-terminally differentiated cells using the notch pathway |
| ATE319827T1 (de) * | 1995-11-17 | 2006-03-15 | Asahi Chemical Ind | Polypeptid, das die differenzierung unterdrueckt |
-
1997
- 1997-11-06 TR TR1999/01000T patent/TR199901000T2/xx unknown
- 1997-11-06 WO PCT/GB1997/003058 patent/WO1998020142A1/en active IP Right Grant
- 1997-11-06 PL PL97333302A patent/PL333302A1/xx unknown
- 1997-11-06 AU AU48765/97A patent/AU736361B2/en not_active Ceased
- 1997-11-06 EP EP05076507A patent/EP1616958A3/en not_active Withdrawn
- 1997-11-06 CZ CZ19991639A patent/CZ295997B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1997-11-06 NZ NZ335549A patent/NZ335549A/en unknown
- 1997-11-06 CN CNB971811598A patent/CN1160371C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1997-11-06 DE DE69733695T patent/DE69733695T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-06 CA CA002271248A patent/CA2271248C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-11-06 JP JP52115098A patent/JP4339406B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-11-06 RO RO99-00524A patent/RO120850B1/ro unknown
- 1997-11-06 GE GE3531A patent/GEP20043390B/en unknown
- 1997-11-06 CN CNA2004100055918A patent/CN1524583A/zh active Pending
- 1997-11-06 EP EP97911353A patent/EP0942998B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-06 KR KR10-1999-7004079A patent/KR100393234B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1997-11-06 IL IL12953197A patent/IL129531A0/xx unknown
- 1997-11-06 ES ES97911353T patent/ES2243986T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-11-06 AT AT97911353T patent/ATE299184T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-11-06 GB GB0023691A patent/GB2353094B/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-11-06 GB GB9910276A patent/GB2335194B/en not_active Revoked
-
1999
- 1999-05-05 NO NO992196A patent/NO992196L/no unknown
- 1999-05-28 BG BG103444A patent/BG103444A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RO120850B1 (ro) | "notch" | |
| CA2169635C (en) | Method, compositions and devices for administration of naked polynucleotides which encode biologically active peptides | |
| US5830877A (en) | Method, compositions and devices for administration of naked polynucleotides which encode antigens and immunostimulatory | |
| US5985847A (en) | Devices for administration of naked polynucleotides which encode biologically active peptides | |
| Orimo et al. | Immunohistochemical analysis of perforin and granzyme A in inflammatory myopathies | |
| BRPI0815578B1 (pt) | peptídeo de cdca1, seu uso e composição imunogênica compreendendo o mesmo para induzir imunidade, tratar e/ou prevenir o câncer, bem como método in vitro para induzir uma célula apresentadora de antígeno e uma célula t citotóxica (killer) | |
| US20090220528A1 (en) | Stimulation of Toll-Like Receptors on T Cells | |
| CA2621992A1 (en) | Manipulation of regulatory t cell and dc function by targeting neuritin gene using antibodies, agonists and antagonists | |
| US20060034857A1 (en) | Notch | |
| EP1641491B1 (en) | Increased t-cell tumor infiltration by mutant light | |
| AU1789500A (en) | Methods of immunosuppression | |
| RU2197262C2 (ru) | Лиганд notch | |
| US20040043040A1 (en) | SDF-1 beta tumor vaccines and uses therefor | |
| US20010048930A1 (en) | Methods of immunosuppression | |
| AU773479B2 (en) | Notch | |
| US20030072743A1 (en) | Genetic manipulation of phagocytes for modulation of antigen processing and the immune response therefrom | |
| JPH10510707A (ja) | 哺乳動物細胞表面抗原をコードする精製された遺伝子；タンパク質および抗体 | |
| MXPA99004282A (es) | Notch | |
| EP0725828A1 (en) | Methods relating to ir-95 | |
| GB2273710A (en) | Peptide fragments of HIV | |
| Sukumar | Mechanisms of Rejection of High Grade B Cell Lymphoma in Mice | |
| Simon et al. | Skin Fibroblasts Enhance The Tumorigenicity of Human Neoplastic-Cells Transplanted Subcutaneously into Nude-Mice | |
| HELDIN et al. | TYROSINE KINASES: Joseph SCHLESSINGER (Dept. Pharmacology and Skirball Inst., NYU Med. Ctr.) Protein tyrosine kinases (PTK) play an important role in the control of cell growth, differentiation, as well as cell metabolism. Dimerization of growth factor receptors is driven by ligand binding | |
| WO1996040212A1 (en) | Retrovirus vectors for expression of cii-ta and activation of hla class ii gene expression and uses thereof |