CZ287002B6 - Benzamide derivative, pharmaceutical preparation containing thereof and use of the derivative - Google Patents

Benzamide derivative, pharmaceutical preparation containing thereof and use of the derivative Download PDF

Info

Publication number
CZ287002B6
CZ287002B6 CZ19962959A CZ295996A CZ287002B6 CZ 287002 B6 CZ287002 B6 CZ 287002B6 CZ 19962959 A CZ19962959 A CZ 19962959A CZ 295996 A CZ295996 A CZ 295996A CZ 287002 B6 CZ287002 B6 CZ 287002B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
formula
derivative
pharmaceutical composition
benzamide derivative
benzamide
Prior art date
Application number
CZ19962959A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ295996A3 (en
Inventor
Jean Francois Rossignol
Original Assignee
Rossignol Jean Franaois
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27397680&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ287002(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from US08/227,033 external-priority patent/US5387598A/en
Priority claimed from US08/301,407 external-priority patent/US5578621A/en
Application filed by Rossignol Jean Franaois filed Critical Rossignol Jean Franaois
Publication of CZ295996A3 publication Critical patent/CZ295996A3/cs
Publication of CZ287002B6 publication Critical patent/CZ287002B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/32—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/58—Nitro radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/426—1,3-Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1635—Organic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/1652—Polysaccharides, e.g. alginate, cellulose derivatives; Cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Derivát benzamidu, farmaceutický prostředek jej obsahující a použití derivátu
Oblast techniky
Vynález se týká derivátu benzamidu, farmaceutického prostředku jej obsahujícího a použití uvedeného derivátu, který působí bezprostředně proti parazitům, houbám a bakteriím a je účinný i proti virům. Vynález se také týká farmaceutického prostředku k ošetřování infekcí spodní části břicha.
Dosavadní stav techniky
Nitrothiazolová sloučenina PH 5776 2-(acetyloxy)-N-(5-nitro-2-thiazolyl)benzamid je sloučenina obecného vzorce II
kde znamená
Ri skupinu O-COCH3
R2, R3, R4, R5 atom vodíku.
Příprava a použití této sloučeniny (označované zde nadále jako sloučenina B obecného vzorce II) jsou popsány v americkém patentovém spise číslo 3 950351.
V americkém patentovém spise číslo 3 950351 se popisuje způsob přípravy sloučeniny uvedeného obecného vzorce II tak, že se nechává reagovat
Hal -
kde znamená Hal halogenid se sloučeninou vzorce
Tato reakce však není vhodná pro přípravu čisté sloučeniny uvedeného obecného vzorce II
-1 CZ 287002 B6 kde znamená jeden ze symbolů Rb R2, R3, R4 a R5 hydroxylovou skupinou a zbylé symboly znamenají atom vodíku.
Kromě toho oproti očekávání na základě známého stavu techniky, to je že přítomnost acyloxyskupiny nutná pro dodání aktivity sloučenině proti bakteriím a parazitům, se nyní zjistilo, že sloučenina uvedeného obecného vzorce II, kde znamená jeden ze symbolů Rb R2, R3, R4 a R5 hydroxylovou skupinu a zbylé symboly znamenají atom vodíku, vykazuje vynikající účinnost proti parazitům, bakteriím, houbám ačkoliv neobsahuje acyloxyskupinu. Tato sloučenina obecného vzorce II má v podstatě bezprostřední působení proti parazitům, houbám a bakteriím. Zjistilo se také, že tato sloučenina je aktivní proti virům.
Zjistilo se také, že prostředek, obsahující sloučeninu obecného vzorce II, obsahuje s výhodou také smáčedlo. Nejvýhodnější je prostředek, který obsahuje smáčedlo a derivát škrobu. Provedené testy podle vynálezu také doložily, že současné použití sloučeniny obecného vzorce II podle vynálezu a smáčedla drasticky zvyšuje účinnost sloučeniny obecného vzorce II a že použití takové směsi umožňuje ošetřovat potíže dolní části břicha, střevní potíže (průjem), gastrointestinální infekce, enterické infekce, infekce sexuálně přenášené, vaginální infekce a urogenitální infekce.
Patentové spisy FR 2 240 010 a US 4 315 018 popisují nitrotriazolové deriváty vzorce
v němž alespoň jeden ze substituentů Rb R2, R3, R4 a R5 je acyloxyskupina, zatímco ostatní symboly značí atom vodíku. V uvedených spisech se popisují také takové molekuly, v nichž jeden z uvedených atomů vodíku je nahražen alkoxyskupinou nebo atomem halogenu. Takové sloučeniny se mohou používat jako paraziticidy, fungistatika a moluscitidy (proti měkkýšům).
Dokument FR 2 435 905 popisuje sloučeniny shora uvedeného vzorce, v němž jeden nebo dva ze substituentů Rb R2, R3, R4 a R5 značí atom halogenu a zbývající substituenty značí atomy vodíku. Takovéto deriváty jsou vhodné jako moluscitidy.
V M 716 jsou popisovány farmaceutické paraziticity obecného vzorce
v němž R je alifatický uhlovodíkový řetězec nebo cyklický či heterocyklický radikál. Podrobněji se zde popisují deriváty vzorce A, v němž jeden ze substituentů Rb R2, R3, R4 a R5 je -OCH3 nebo -CH3 a ostatní substituenty značí atomy vodíku, nebo dva z Rb R2, R3, R4 a R5 značí -Cl a
-2CZ 287002 B6 ostatní substituenty jsou atomy vodíku. Způsoby přípravy takovýchto sloučenin jsou popisovány v patentovém spise FR 1 306 603.
V žádném z uvedených dokumentů není popisována sloučenina podle tohoto vynálezu.
Je obecně známo, že farmaceutická aktivita nové sloučeniny není předem předvídatelná. Změnou jediného substituentu se může aktivní složka změnit v neaktivní nebo dokonce v toxickou.
Vzhledem k dosavadnímu známému stavu techniky v tomto oboru přihlašovatel zcela neočekávaně zjistil, že nová sloučenina podle vynálezu, tj. bez acyloxysubstituentu, má výborné účinky proti parazitům, houbám a bakteriím a kromě toho je účinná proti virům.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je derivát benzamidu vzorce A no2
(A)
Předmětem vynálezu je též farmaceutický prostředek s antibakteriálními, antivirálními, antiparazitními a antifungálními účinky, které jako účinnou látku obsahuje derivát benzamidu shora uvedeného vzorce A.
Farmaceutický prostředek podle vynálezu jako účinnou látku dále obsahuje derivát benzamidu vzorce B
NO
N
Farmaceutický prostředek podle vynálezu může být ve formě pro orální podávání a v tom případě dále obsahuje smáčecí činidlo.
Farmaceutický prostředek podle vynálezu s výhodou obsahuje alespoň jedno smáčecí činidlo vybrané z aniontových povrchově aktivních látek.
Smáčecí činidlo se volí ze skupiny zahrnující estery cukru, polyoxyethylen, polyoxypropylen, deriváty anhydrohexitolu, mastné alkanolamidy, mastné aminoxidy, sacharózu, mannitol, sorbitol, lecitiny, polyvinylpyrolidony, estery mastných kyselin, glyceridy sacharózy, estery xylozy, polyoxyethylenglyceridy, estery mastných kyselin a polyoxyethylenetheru mastných alkoholů a poloxyethylenestery mastných kyselin sorbitonu a glyceridpolyglycidové estery alkoholových polyglyceridů a jejich směsi.
S výhodou farmaceutický prostředek podle vynálezu dále obsahuje derivát škrobu.
-3CZ 287002 B6
Obvykle farmaceutický prostředek podle tohoto vynálezu obsahuje karboxymethylový škrob nebo jeho sůl.
Farmaceutický prostředek podle vynálezu obsahuje až 20 % hmotnostních povrchově aktivního 5 činidla a až 20 % hmotnostních škrobového derivátu, vztaženo na hmotnost aktivních látek.
Farmaceutický prostředek ve formě pro orální podávání obsahuje jádro, které obsahuje směs obsahující
a) účinné množství derivátu benzamiodu vzorce A podle vynálezu, popřípadě dále derivát benzamidu vzorce B, podle vynálezu,
b) smáčecí činidlo a
c) škrobový derivát, přičemž obsah vody ve farmaceutické prostředku je do 25 % hmotnostních,.
S výhodou farmaceutický prostředek podle vynálezu obsahuje karboxymethylový škrob nebo jeho sůl.
Farmaceutický prostředek může být ve formě masti k léčení a potlačování potíží spodního břicha a v tom případě obsahuje
a) účinné množství derivátu benzamidu vzorce A, popřípadě dále derivát benzamidu vzorce B, a
b) smáčecí činidlo.
Je výhodné, když předchozí farmaceutický prostředek dále obsahuje škrobový derivát.
Předmětem vynálezu je rovněž použití derivátu benzamidu vzorce A podle vynálezu pro přípravu 30 antiparazitního činidla.
Další použití podle vynálezu se týká směsi derivátu benzamidu vzorce A a derivátu benzamidu vzorce B pro přípravu antiparazitního činidla.
Další použití derivátu benzamidu vzorce A podle vynálezu je pro přípravu antibakteriálního činidla.
V tomto případě se použití týká pro přípravu antibakteriálního činidla proti bakteriím vybraným ze skupiny zahrnující Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Shigella sonei, Helicobacter 40 pyroli, Bacteroides fragilis, Fusobacterium ulcerans, Veillonella alcadescens a Gardnerella vaginalis.
Výhodné je též použití podle vynálezu pro přípravu antibakteriálního činidla účinného proti Helicobacter pyroli.
Další použití derivátu benzamidu vzorce A podle vynálezu je určeno pro přípravu antifungálního činidla.
Výhodné je použití směsi derivátu benzamidu vzorce A a derivátu benzamidu vzorce B pro 50 přípravu antifungicidního činidla.
Použití derivátu benzamidu vzorce A podle vynálezu nebo derivátu benzamidu vzorce B podle vynálezu, nebo jejich směsi, je výhodné pro přípravu antivirálního činidla.
-4CZ 287002 B6
Ještě jiné použití derivátu benzamidu vzorce A popřípadě dále derivátu benzamidu vzorce B se týká použití ke konzervaci potravin, popřípadě v spojení se škrobovým derivátem.
Farmaceutický prostředek podle vynálezu, který je s výhodou tuhý a určený pro orální podávání k potírání potíží nebo infekcí dolního břicha, zvláště střevních a vaginálních potíží, obsahuje účinné množství derivátu shora uvedeného vzorce B, smáčedlo a popřípadě avšak výhodně alespoň jeden derivát škrobu.
Tento prostředek může obsahovat také další účinné látky, například anthelminticé činidlo například febantel, praziquantel, levamisol, albendazol, oxfendazol, moxidectin, ivermectin a milbemyciny.
Způsob přípravy a použití sloučeniny B je popsán v americkém patentovém spise číslo 3 950351 a4315018.
Smáčedlo, obsažené v prostředku obsahujícím sloučeninu C obecného vzorce I (například sloučeninu A) a/nebo sloučeninu B, je s výhodou aniontové povrchově aktivní činidlo a je s výhodou voleno ze souboru zahrnujícího estery cukru, polyoxyethylen, polyoxypropylen, deriváty anhydrohexitolu, amidy mastných alkanolů, oxidy mastných aminů, sacharózu, mannitol, sorbitol, lecithiny, polyvinylpyrrolidony, estery mastné kyseliny, glyceridy sacharózy, estery xylózy, polyoxyethylenglyceridy, estery mastných kyselin a polyoxyethylenethery mastných alkoholů a estery polyoxyethylenmastných kyselin sorbitonu, polyoxyethylenestery mastných kyselin sobritanu, glyceridpolyglycidy, estery alkoholpolyglycidů a jejich směsí. Obzvláště vhodnými smáčedly jsou například distearát sacharózy a polyvinylpyrrolidon.
Prostředky podle vynálezu obsahují s výhodou derivát škrobu, zvláště karboxyderivát škrobu, například karboxymethylovaný škrob a jeho sodný derivát nebo jeho sůl.
Prostředek podle vynálezu obsahuje například hmotnostně až 20%, s výhodu 1 až 10% povrchově aktivního činidla, a až 20 %, s výhodou 1 až 10 % derivátu škrobu, vztaženo vždy na hmotnost účinné látky.
Vynález se také týká galenického prostředku pro orální podání, účinného proti virům a/nebo pro boj s potížemi spodní části břicha, jako jsou například střevní, vaginální, urogenitální chorobné stavy nebo poruchy, přičemž takový galenický prostředek má jádro obsahující prostředek, který tvoří účinné množství účinné látky, kterou je sloučenina C a/nebo A a/nebo B, smáčedlo a popřípadě avšak s výhodou derivát škrobu nebo jeho sůl, přičemž obsah vody v takovém prostředku je menší než hmotnostně 20 % a jádro je s výhodou povlečeno membránou. Takovou membránou může být membrána nerozpustná v kyselém prostředí žaludku avšak rozpustná ve střevech.
Výhodné prostředky, smáčedla a podobně galenických prostředků podle vynálezu jsou pro prostředky podle vynálezu shora uvedeny.
Vynález se také týká použití prostředků nebo galenických farmaceutických prostředků podle vynálezu pro ošetřování průjmů, pro ošetřování nemocí jater.
Vynález se také týká mastí nebo gelů, krému nebo čípků pro ošetřování orgánů spodní části břicha, jako jsou vaginální a urogenitální stavy nebo poruchy a potíže rekta. Mast, s výhodou ve formě gelu, obsahuje sloučeninu obecného vzorce I a/ nebo sloučeninu B, smáčedlo, jakož také excipient.
-5CZ 287002 B6
Smáčedlem je s výhodou některé ze shora jmenovaných smáčedel pro prostředek a/nebo pro galenický prostředek.
Vynález se také týká antibakteriálního prostředku obsahujícího sloučeninu C obecného vzorce I a/nebo sloučeninu B a smáčedlo. Takový prostředek je účinný proti aerobním jakož také anaerobním bakteriím a má proto velmi široké spektrum účinnosti.
Vynález se proto také týká způsobu zabíjení bakterií nebo prevence přítomnosti nebo růstu bakterií v prostředí. Při tomto způsobu se bakterie nebo prostředí ošetřují baktericidním prostředkem podle vynálezu, například nastříkáním prostředku na bakterie nebo ponořením nosiče do prostředí.
Vynález se také týká způsobu ošetřování průjmu živočichů s výhodou lidí, při kterém se orálně podává prostředek, který tvoří účinné množství účinné látky, kterou je sloučenina C a/nebo B, smáčedlo a derivát škrobu.
Vynález se také týká potravinářského výrobku, například potravinové pasty nebo jogurty obsahujícího jako konzervační činidlo účinné množství účinné látky, kterou je sloučenina C obecného vzorce I (s výhodou sloučenina A) a/nebo B, popřípadě avšak s výhodou spolu se smáčedlem derivát škrobu.
Příklady provedení vynálezu
Příprava sloučeniny A
Sloučenina A se může připravovat tímto způsobem:
Do suspenze v 20 ml roztoku 37% kyseliny chlorovodíkové se převedou 2 g 2-(acetyloxy)-N(5-nitro-2-thiazolyl)benzamidu (to je PH 5776), sloučeniny B, připravené způsobem opsaným v americkém patentovém spise číslo 3 950351. Prostředí se udržuje na teplotě 50 °C po dobu 24 hodin a pomalu se míchá. Po tomto zpracování se prostředí zfiltruje za získání pevných částic. Tyto pevné částice se promyjí vodou až do hodnoty pH 7 a vysuší se v pícce při teplotě 50 °C.
Získaným produktem jsou žluté mikrokrystalické jehlice o teplotě tání 254 °C (teplota tání se měří kapitámími stanovením za použití aparatury Mettler FP).
Identifikace struktury se provádí centesimální analýzou, zjištěním UV spektra (obr. 1), IR spektra (obr. 2), hmotového spektra plynové chromatografie (obr. 3). Na základě analýzy zjištěn vzorec:,
C10H7N3O4Si; 258
vypočteno (%) C 46,51 H2,71 N 16,40 S 12,40
nalezeno (%) C 45,98 H2,63 N 16,71 S 12,67
lamdamax = 350 nm (OD - 0,605)
-6CZ 287002 B6
Test 1
Příprava prostředku O
Prostředek podle vynálezu se připravuje smíšením PH 5776 a shora připravené sloučeniny, přičemž hmotnostní obsah shora připravené sloučeniny se zřetelem na hmotnost této sloučeniny apH 5776 je 4%.
Prostředek AI
Smísí se 100 g nitazoxanidu (PH 5776) ve 100 ml vody s 10 g polyvinylpyrrolidonu (smáčedlo) a 5 g karboxymethylovaného škrobu. Směs se vysuší ve vakuu. Tohoto prostředku se pak může použít pro přípravu granulí, sáčků, tablet nebo kapslí pro orální podávání.
Prostředky Bl, Cl, Dl, El, Fl, G1
Připraví se podobné prostředky jako AI stou výjimkou, že se použije jen 5 g a 2 g polyvinylpyrrolidonu a 2 g a 1 g karboxymethylovaného škrobu. V následující tabulce je uveden obsah (v gramech) nitazoxanidu „N“, polyvinylpyrrolidonu „PVP“ a „karboxymethylovaného škrobu „CS“ v prostředcích.
Prostředek N (g) PVP (g) CS (g)
Bl 100 5 5
Cl 100 5 2
El 100 5 1
Fl 100 2 1
G1 100 5 0
Prostředky Hl, II, JI
Prostředky, obsahující nitazoxanid jakož také jiné účinné látky, se připravují tak, že se připraví vodné prostředí obsahující polyvinylpyrrolidon a karboxymethylovaný škrob a do tohoto prostředí se přidá nitazoxanid a další účinná látka. Prostředí se pak vysuší na obsah vody nižší než 5 %.
Prostředek N g PVP g CS g Další účinná látka* g Voda %
Hl 50 5 2 50 2
11 75 5 2 50 1
JI 75 5 2 50 2
*další účinnou látkou je praziquantel
Prostředky A2 až J2
Připraví se prostředky podobného složení jako mají prostředky AI až JI. Prostředky A2 až J2 se liší od prostředků AI až JI pouze tím, že obsahují směs nitazoxanidu (PH 5776 - sloučenina B) a sloučeniny A vzorce
NO
H místo samotného nitazoxanidu v prostředcích A1 až JI. V následující tabulce se udává množství sloučeniny A a B použité pro přípravu prostředku A2 až J2.
Prostředek Sloučenina A (g) Sloučenina B (g)
A2 až G2 4 96
H2 2 48
12 3 72
J2 3 72
Příprava galenických farmaceutických prostředků
Farmaceutický prostředek K1
Smísí se 500 g nitazoxanidu ve formě prášku s 10 g polyvinylpyrrolidonu, 20 g karboxymethylovaného škrobu, 25 g kukuřičného škrobu, 5 g stearátu hořečnatého a 50 g vody a takto získaná směs se zpracuje na granule o hmotnosti 560 mg (to je granule obsahuje 500 mg účinné látky). Granule, které mají průměr 1 cm, se pak suší při teplotě přibližně 50 °C. Takto získané 15 granule se pak povléknou nastříkáním horkého cukerného roztoku. Cukrový povlak vytvoří membránu.
Farmaceutický prostředek K2
Smísí se 480 g nitazoxanidu (PH 5776) ve formě prášku a 20 g sloučeniny A s 10 g polyvinylpyrrolidonu, 20 g karboxymethylovaného škrobu, 25 g kukuřičného škrobu, 5 g stearátu hořečnatého a 50 g vody a takto získaná směs se zpracuje na granule o hmotnosti 560 mg (to je granule obsahuje 500 mg účinné látky). Granule, které mají průměr 1 cm, se pak suší při teplotě přibližně 50 °C. Takto získané granule se pak povléknou nastříkáním horkého cukerného 25 roztoku. Cukrový povlak vytvoří membránu.
Je samozřejmé, že granule mohou obsahovat také alespoň jeden excipient nebo jiné účinné látky, například mikrokrystalickou celulózu (AvicelR FMC), methylcelulózu, ethylcelulózu, karboxymethylcelulózu, hydroxyethylcelulózu, hydroxypropylcelulózu nebo škrob.
Při stejném způsobu může membrána také obsahovat farmakologicky vhodný excipient například změkčovadlo, pigment, plnidlo, smáčedlo, mazadlo, nebo jejich směs a filmotvomou látku, která obsahuje látku nerozpustnou v žaludeční kyselině avšak rozpustnou ve střevech (polymemí nebo nepolymemí, například acetoftalát celulózy, polyvinylacetoftalát, hydroypropylmethylcelulózu.)
Testy
Test 1
V průběhu fáze I farmakokinetické studie se podá šesti dobrovolníkům jediná 500 mg orální dávka prostředku O. Přibližně 3 mcg/ml 2-{hydroxy)-N-(5-nitro-2-thiazolyl)benzamidu se
-8CZ 287002 B6 může zjistit v krvi vysokotlakovou kapalinovou chromatografíí. Tento produkt se také exkretuje nezměněný močí v průběhu prvních 24 hodin po ošetření. V krvi ani v moči se nezjistí ani stopa 2-(acetyloxy)-N-(5-nitro-2-thiazolyl)benzamidu.
V průběhu fáze II klinické studie na celkem 80 pacientech se po opakovaném ošetření zkoumá fekální a/nebo vaginální výtěr dokládající, že 500 mg prostředku AI, podávaného dvakrát denně po dobu 3 až 7 následujících dní, je vysoce účinné (60 až 95 %) proti Trichomonas vaginalis, Entamoeba histolytica, Gardia lamblia, Enterobius vermicularis, Ascaris lumbricoides, Necator americanus, Ancylostoma duodenale, Trichuris trichiura, Strongyloides stercoralis, Taenia saginata, Taenia solium, Diphylobottrium latum a Hymenolepis nana. Snášenlivost je dobrá a pozoruje se pouze malé epigastrické potíže, dávení, zvracení a průjem u přibližně 10% pacientů v závislosti na délce doby ošetřování. Chemický rozbor krve a hematologie prováděné před ošetřením a po ošetření jsou prostředky neovlivněny.
Při studiích in vitro proti Trichomanas vaginalis se ukázalo, že zatímco 2-(acetyloxy)-N-(5nitro-2-thiazolyl)benzamid vykazuje minimální inhibiční koncentraci 0,5 až 1,25 mcg/nl, 2(hydroxy)-N-(5-nitro-2-thiazolyl)benzamid za stejných pokusných podmínek vykazuje minimální inhibiční koncentraci 1 až 1,25 mcg/ml. To dokládá, že 2-(hydroxy)-N-(5-nitro-2thiazolyl)benzamid má antiparasitickou účinnost stejnou jako 2-(acetoxy)~N-(5-nitro-2thiazolyl)benzamid. Tyto studie však ukázaly, že 2-(hydroxy)-N-(5-nitro-2-thiazolyl)benzamid má v podstatě bezprostřední působení, což neplatí pro 2-(acetyloxy)-N-(5-nitro-2thiazolyl)benzamid.
Konečně zkoušky in vitro doložily, že je prostředek účinný proti gram positivním a gram negativním earobním bakteriím, jako jsou například Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Shigella sonei, Heliobacter pylori, anaerobním bakteriím, jako jsou bacteroides fragilis, Fusobacterium ulcerans, Veillonella alcadescens, Gardnerella vaginalis, dermatophytes kvasinek a hub, například Trichophyton mentographytes, Microsporum audovini Epidermophyton Flocosum a Candida albicans.
Použitím sloučeniny obecného vzorce I
kde znamená jeden ze symbolů Rb R2, R3, R4 a R5 hydroxylovou skupinu a zbylé symboly znamenají atom vodíku, s výhodou sloučeniny A i ve velmi malém množství je možno zvýšit účinnost sloučeniny obecného vzorce I, zvláště sloučeniny PH 5776 nebo sloučeniny B.
Test 2 a 3
K doložení účinnosti prostředku podle vynálezu se zkoušejí dvě skupiny po 5 myších (ve stáří 4 až 8 týdnů a o hmotnosti 18 až 20 g) infikované Cryptospooridium parvum. Infikované myši trpí chronickým průjmem. Před ošetřením se snadno zjistí myši trpící chronickým průjmem analýzou fekálií. Ošetření se provádí prostředkem Dl nitazoxanidu, shora popsaným. Myším, trpícím
-9CZ 287002 B6 chronickým průjmem, se podává ústní sondou po dobu jednoho týdne denně přibližně 0,01 g nitazoxanidu (to je přibližně 0,6 g/kg myši). Po jednotýdenním ošetřování není již možno stanovit analýzou fekálií, které myši trpěly průjmem.
Infikované myši se také ošetřují prostředkem D2. Těmto myším se podává orální sondou po dobu jednoho týdne každý den přibližně 0,0096 g nitazoxanidu a přibližně 0,0004 g sloučeniny A vzorce III. Před koncem jednotýdenního ošetřování nebylo již možné stanovit fekální analýzou, která skupina trpěla průjmem.
Test 4
Připraví se vodný prostředek (100 g) obsahující 10 g účinné látky. Prostředek, obsahující nitazoxanid nebo směs nitazoxanidu (9,6 g) a sloučeniny A jakožto účinnou látku, obsahuje dále 0,5 g distearátu sacharózy. Prostředků se používá pro ošetřování různých parazitů, helmithů, 15 bakterií a hub. Účinnost prostředků je uvedena v následující tabulce:
AKTIVITA
PÍ P2 P3 P4 P5
Protozoa ÍDrvoci) Trichomonas vaginalis + + 0 o +
Trichomonas íntestinalis + + o o +
Entamoeba histolytica + + 0 o +
Entamoeba dispar + + 0 o +
Entamoeba coli + + 0 o +
Endolimax nana + + 0 0 +
Balantidium coli + + o o +
Dientamoeba fragilis + + 0 0 +
Giarda lamblia + + 0 0 +
Isospora belli + + +/- o +
Cryptosporidium parvum + + 0 0 0
Bladtocystis hominis + + 0 0 o
Enterocytozoon bieneusi + 4- 0 0 0
Septata Íntestinalis + + 0 0 o
Helmintv (červi) Enterobius vermicularis + + + + 0
Ascaris lumbricoide + + + + 0
Necator americanus + + + + o
Anycylosloma duodenale + + + + 0
Trichuris trichiura + + + + 0
Strongyloides stercoralis + + 0 0 0
Taenia saginata + + 0 o 0
Taenia solium + + 0 0 0
Hymenolepis nana + + 0 0 0
PÍ = Nitazoxanid + distearát sacharózy
P2 = Nitazoxanid + sloučenina A = distearát sacharózy P3 = Albendazol
P4 = Mebendazol
P5 = Metronidazol
O = žádná aktivita
-10CZ 287002 B6
AKTIVITA
PÍ P2 P3 P4 P5
Bacterie aerobní Staphylococcus aureus + + 0 0 0
Escherichia coli + + 0 o o
Protens vulgaris + + 0 0 o
Bacterie anaerobní Clostridum speciae + + 0 o +
Bacteroides species + + 0 0 +
Peptococcus species + + 0 0 +
Peptostreptococcus SPP Fosubacterium SPP + + 0 0 +
Fungus (houbv) Candida Albicans + + 0 o 0
Trochophyton Mentagrophytes + + + 0 o
Mentagrophytes + + + 0 o
Microsporum audovini + + + 0 0
Epidermophyton flocosum + + + o 0
PÍ = Nitazoxanid + distearát sacharózy
P2 = Nitazoxanid + sloučenina A + distearát sacharózy P3 = Albendazol
P4 = Mebendazol
P5 = Metronidazol o = žádná aktivita
Test 5
Obecné postupy stanovení antivirové účinnosti a toxicity
Laboratorní způsob stanovení protivirové účinnosti a toxicity
A. Příprava lidských předkožkových fibroblastových buněk
Novorozenecké lidské předkožky se získají tak brzy, jak je jen možno po obříznutí a umístí se v minimu esenciálního prostředku (MEM), obsahujícího vancomycin, fungizone, penicillin a gentamycin v běžně používaných koncentracích na dobu čtyř hodin. Prostředí se pak odstraní, předkožky se rozřežou na malé kousky a promyjí se opakovaně až již červené buňky nejsou obsaženy. Tkáň se pak trypsinuje za použití trypsinu o koncentraci 0,25% za kontinuálního míchání po dobu 15 minut při teplotě 37 °C v prostředí oxidu uhličitého v inkubátoru. Na konci každé 15 minutové periody se tkáň nechá usadit na dnu baňky. Supematant, obsahující buňky, se slije přes sterilní fáčovinu do baňky obsahující MEM a 10 % zárodečného hovězího séra. Baňka, obsahující prostředí, se udržuje v ledu po celou dobu trypsinizační procedury. Po každém přidání buněk se fáčovina promyje malým množstvím MEM obsahujícím sérum. Po každé se přidá čerstvý trypsin ke kouskům předkožky a procedura se opakuje až již nejsou získatelné žádné buňky. Prostředí, obsahující buňky, se pak odstřeďuje za počtu otáček 1000/min při teplotě 4 °C po dobu 10 minut. Kapalný supematant se vyhodí a buňky se resuspendují v malém množství MEM s 10 % zárodečného hovězího séra (FBS). Buňky se vnesou ve vhodném počtu do 25 cm2 tkáňové kultivační baňky. Jakmile buňky slinou a potřebují trypsinizaci, nechají se postupně expandovat do větších baněk. Buňky se udržují na vancomycinu a fungizonu pro čtyři pasáže.
-11CZ 287002 B6
B. Cytopatický efekt inhibiční zkoušky HSV, HCMV, N7N
Nízkopasážované lidské předkožkové fibroblastové buňky se očkují do 96 dálkových kultivačních destiček pro kultivaci tkání 24 hodin před použitím při koncentraci buněk 2,5 x 104 buněk na ml a 0,1 ml minimálního esenciálního prostředí (MEM) doplněného 10% hovězího zárodečného séra (FBS). Buňky se pak inkubují po dobu 24 hodin při teplotě 37 °C v inkubátoru s oxidem uhličitým. Po inkubaci se prostředí odstraní a do všech důlků kromě první řady se přidá 100 μΐ MEM obsahujícího 2% FBS. Do první řady se přidá 125 μΐ experimentální drogy do trojnásobku důlků. Samotné prostředí se přidá jak do důlků s buňkami, tak do kontrolních důlků tak s virem. Droga v první řadě důlků se pak zředí sériově 1:5 ve zbylých důlcích přenosem 25 μΐ za použití zařízení Cetus Liquid Handling Machine. Po zředění drogy se přidá 100 μΐ vhodné koncentrace viru do každého důlku s výjimkou kontrolních důlků, do kterých se vneslo 100 μΐ MEM. Pro zkoušky HSV-1 a HSV-2 může být použita koncentrace viru 1000 PFU na důlek. Pro zkoušky CMZ a VZV přidaná koncentrace viru může být 2500 PFU na důlek. Destičky se pak inkubují při teplotě 37 °C v inkubátoru s oxidem uhličitým po dobu tří dnů pro HSV-1 a HSV-2 nebo 10 dnů pro N7N nebo 14 dnů pro CMV. Po inkubační periodě se prostředí odstraní a buňky se zabarvují 0,1 % roztokem krystalové violeti po dobu 30 minut. Zabarvovací roztok se pak odstraní a destičky se oplachují vodou z vodovodu až do odstranění zabarvovacího roztoku. Destičky se nechají sušit po dobu 24 hodin a hodnotí se na zařízení Skatron Plate Reader při 620 nm.
C. Zkouška redukce povlaku pro HSC-1 a HSV-2 za použití polopevného překiytí
Dva dny před použití se nanesou HFF (=Human Feroskin Fibro Blast = lidské předkožkové buňky) do šestidůlkové destičky a inkubují se při teplotě 37 °C v prostředí 5% oxidu uhličitého a 90% vlhkosti. V den zkoušky se připraví droga až v dvojnásobku žádané koncentrace v 2 x MEM a pak se sériově ředí 1:5 v 2xMEM a pak se sériově ředí 1:5 v 2x MEM za použití šesti koncentrací drogy. Počáteční výchozí koncentrace je zpravidla 200 pg/ml až do 0,06 pg/ml. Používaný vir se zředí v MEM obsahujícím 10 % FBS na žádanou koncentraci, která poskytuje 20 až 30 povlaků na důlek. Prostředí se pak odstraní z důlků a přidá se 0,2 ml viru do každého důlku ve zdvojení s 0,2 ml prostředí do drogových toxicitních důlků. Destičky se pak inkubují po dobu jedné hodiny za protřepávání každých 15 minut. Po inkubační periodě se přidá stejné množství 1% agarózy do stejného objemu každého zředění drogy. Tím se získá konečná koncentrace drogy počínaje od 100 pg/ml po 0,03 pg/ml a na konečnou koncentraci agarózového překrytí 0,5 %. Směs drogy a agarózy se vnese do každého důlku v 2 ml objemu a destičky se pak inkubují po dobu tří dnů, načež se buňky zabarvují 1,5% roztokem neutrální červeně. Na konci čtyřhodinové až šestihodinové inkubace se zabarvovací roztok odstraní a povlaky se hodnotí za použití stereomikroskopu při desetinásobném zvětšení. EC5o (50% účinná koncentrace) je koncentrace potřebná k inhibicí virální cytopathogenicity o 50 %, IC50 (50% inhibiční koncentrace) je koncentrace potřebná k inhibicí proliferace buněk o 50 %. Selektivní index (S.I.) je IC5o/EC5o.
D. Povlaková redukční zkouška - polopevné překrytí
Postup je v podstatě stejný jako pro HSV povlakovou zkouškou shora popsanou s výjimkou, že
1. po přidání drogy se destičky inkubují po dobu deseti dní,
2. třetí a šestý den se přidá další 1 ml překrytí se stejným množstvím 2 x MEM a 1 % agarózy.
E. Povlaková zkouška CMV - polopevné překrytí
Postup je opět téměř stejný jako v HSV povlakovou zkoušku shora popsanou s několika drobnými změnami. Použití agaróza jak pro počáteční překrytí, tak pro dvě následná překrytí je
-12CZ 287002 B6
0,8% spíše než 1%. Vzorky se inkubují po dobu 14 dní s přidaným 1 ml překrytím, které se aplikuje čtvrtý a osmý den.
F. Zkouška redukce povlaku za použití překrytí kapalných prostředí
Postup pro povlakovou zkoušku překrytí tekutým prostředím je podobný jako překrytí agarózou. Procedura pro přidání viru je stejná jako pro obvyklou zkoušku povlaku. Používá se koncentrace plochy drogy v MEM s 2 % FBS. Droby se neupravují na dvojnásobek koncentrace jako v dřívějších zkouškách, nýbrž se upravují při žádané koncentraci. Pro zkoušky HSV-1 a HSV-2 se protilátkový preparát, získaný od organizace Baxter Health Care Corporation“ ředí 1:500 a přidá se do prostředí, ve kterém je zředěná droga. Pro CMV a N7N se v překrytí nepoužívá protilátky. Pro zkoušku CMV se přidává přídavné prostředí bez nové drogy pátý den a nechává se inkubovat po celkem 10 dní. Pro N7N se přidává přídavné prostředí pátý den a inkubuje se po dobu celkem 10 dní. Na konci inkubační doby pro všechny zkoušky se přidává 2 ml zředění 1:10 zásobního neutrálního roztoku do každého důlku a inkubuje se po dobu šesti hodin. Kapalina se pak odstraní a povlaky se hodnotí za použití stereomikroskopu.
Scríning a potvrzovací zkoušky pro EBV
1. Virus
Jsou dva prototypy infekčního EBV. Příkladem jednoho je virus odvozený ze supematantové kapaliny buněčné linie P3HR-1. Tato buněčná linie produkuje netransformační virus, který způsobuje produkci původního antigenu (EA) po primární infekci nebo superinfekci buněčných linií B. Příkladem jiného prototypu je B-95-8 virus. Tento virus usmrcuje lymfocyty mišní krve a navozuje nádory svišťů. Nenavozuje však nevydařenou produktivní infekci ani v buněčných liniích majících kopie EBV genomu.
2. Buněčné linie
Ramos je výjimečná B buněčná linie odvozená z nádoru Burkitt lymphoma avšak neobsahují zjistitelné EBV genomové kopie a je EBNA negativní. Ramos/AW se získá infekcí in vitro Ramos virem P3HR-1 a obsahuje jeden systém resistentní EBV genomové kopie/buňka. Ráji je Burkittova buněčná linie lymphoma obsahující 60 EBV genomů/buňka a bude primární buňkou použitou pro skríning antivirální aktivity proti EBV EA expresi. Daudi je nízkoůrovňový producent, kteiý obsahuje 152 EBV genomových kopií/buňka. Spontánně expresuje EBV EA v 0,25 až 0,5 % buněk. Použije se ho v následujících studiích k potvrzení aktivity. Tyto buněčné linie odpovídají superinfekci EBV expresováním EA(D), EA(R) a VCA. Všechny buněčné linie se udržují vRPMI-1640 prostředí doplněném 10 % FCS, L-glutaminem a 100pg/ml gentamicinu. Kultury jsou podávány dvakrát týdně a koncentrace buněk se upravuje na 3 x 105/ml. Buňky se udržují na teplotě 37 °C ve vlhkém prostředí s 5 % oxidu uhličitého.
3. Zkoušky imunofluorescence s monoklonálními protilátkami
Buňky se infikují kmenem P3HR-1 EBV a zkoušené drogy se přidávají po adsorpci (45 minut při teplotě 37 °C) a promytí buněčných kultur. Kultury se inkubují po dobu dvou dní v kompletním prostředí k umožnění virální genové exprese. Po 48 hodinové inkubační periodě se počítá počet buněk v každém vzorku a provedou se výtěry. Monoklonální protilátky se pak přidají do různých EA složek a VCA do buněk inkubovaných a promytých. Tomu následuje fluoreceinem konjugovaná králičí protimyši Ig protilátka a zjišťuje se počet fluorescenčně pozitivních buněk ve výtěru. Celkový počet buněk v pozitivních kulturách pro EA nebo VCA se pak vypočte a porovná.
-13CZ 287002 B6
H. Zkouška proliferace buněk - toxicity
Do šestidůlkových destiček se 24 hodin před zkouškou očkují HFF buňky v koncentraci 2,5 x 104 buněk na důlek v MEM obsahujícím 10 % FBS: V den zkoušky se droga ředí sériově v MEM obsahujícím 10% FBS při přírůstcích 1:5 pokrývajících obor lOOpg/ml až 0,03 pg/ml. Pro drogy, které se solubilizují v dimethylsulfoxidu se do kontrolních důlků vnáší MEM obsahující 10% dimethylsulfoxidu. Prostředí z důlků se pak odstraní a 2 ml každé koncentrace drogy se přidá do každého důlku. Buňky se inkubují v prostředí oxidu uhličitého při teplotě 37 °C po dobu 72 hodin. Na konci této doby se roztok prostředí a drogy odstraní a buňky se promyjí. Přidá se 1 ml 0,25% trypsinu do každého důlku a inkubuje se až do počátku odstraňování buněk z destičky. Směs buněk a prostředí se pak odpipetuje a intenzivně se protřepe až do rozrušení suspenze a 0,2 ml směsi se přidá do 9,8 ml isotonu III a hodnotí se za použití zařízení Coulter Counter. Každý vzorek se hodnotí třikrát se třemi replikami důlků na vzorek.
I. MTT zkouška na buněčnou cytotoxicitu
Buňky HFF se 24 hodin před zkouškou nanesou na 96 důlkovou destičku v koncentraci 2,5 x 104 buněk na důlek. Po 24 hodinách se prostředí odstraní a přidá se 125 mikrolitrů drogy do první řady důlků a pak sériové zředění 1 : 5 za použití systému Cetus Liquid Handling Systém podobným způsobem jako v případě zkoušky CPE. Destičky se pak inkubují v inkubátoru s oxidem uhličitým při teplotě 37 °C po dobu několika dní. V této době se do každého důlku vnese 50 mikrolitrů 1 pg/ml roztoku MTT v fosfátem pufrované solance Dulbecco. Destičky se pak inkubují po dobu dalších čtyř hodin. V této době se prostředí odstraní a nahradí se 100 pg 0,04 N kyselinou chlorovodíkovou v isopropanolu. Krátce se protřepá a destičky se hodnotí na čítači při 550 nm.
J. Zkouška přijímání neutrální červeně - toxicita
Nanesení buněk na destičku a přidání drogy je stejné jako při zkoušce MTT.
Po přidání drogy se destičky inkubují v inkubátoru s oxidem uhličitým při teplotě 37 °C po dobu sedmi dní. V této době se systém prostředí/droga odstraní a přidá se 200 μΐ/důlek 0,01% neutrální červeně v DPBS. Vše se inkubuje v inkubátoru s oxidem uhličitým po dobu jedné hodiny. Barvivo se odstraní a buňky se promyjí za použití pračky destiček Nunc. Po odstranění DPBS promytím se přidá 200 pg/důlek systému 50 % ethanolu/1 % ledové kyseliny octové (ve vodě). Destičky se nechávají rotovat po dobu 15 minut a optická hustota se stanoví při 550 nm na destičkovém čtecím přístroji.
Test 5a
Antivirová účinnost proti replikaci HBV v kulturách (Hepatites B)
Protokol zkoušky anti-HBV sloučenin v kulturách 2.2.15 buněk se může krátce shrnout následovně (Korba a Milman, Anvitiral Res. 217, str. 217, 1991):
Chronicky HBV produkující lidské jatemí buňky (Acs a kol., PNAS, 84, str. 4641, 1987) se očkují do 24 důlkové tkáňové kultivační destičky a nechají se růst do slinutí.
Zkoušené sloučeniny se přidávají denně kontinuálně po dobu devíti dnů. Kultivační prostředí (měněné denně v průběhu periody ošetřování) se shromažďuje a ukládá se pro analýzu extracelulámí (virion) NBV DNA po 0., 3., 6. a 9. dnu ošetření. Ošetřené buňky se lyžují 24 hodin po devátém dni ošetření pro analýzu intracelulámích HBV genomických forem.
-14CZ 287002 B6
HBV DNA se pak analyzuje kvantitativně a kvalitativně pro celkový obsah HBV DNA (jak extracelulámí tak intracelulámí DNA) a se zřetelem na relativní míru replikace HBV (intracelulámí DNA).
Protokol pro stanovení toxicity sloučenin v kulturách 2.2.15 buněk se může krátce shrnout následovně (Kroba a Gerin, dáno ke zveřejnění):
2.2.15 buňky se nechají růst až do slinutí v 96 důlkové tkáňové kultivační destičce s plochým dnem a zpracují se sloučeniny (0,2 ml kultivačního prostředí/důlek) shora popsanou. Zkoušejí se čtyři koncentrace každé sloučeniny, vždy ve třech kulturách, 3 až 10 x.
Neošetřené kontrolní kultury se udržují na každé 96 důlkové destičce. Na každé 96 důlkové destičce se používají důlky prosté buněk ke korekci na rozptyl světla.
Toxicita se stanovuje inhibicí příjmu neutrálního červeného barviva absorbancí při 510 nm se zřetelem na absorbanci pro neošetřené buňky (Finter a kol., J. Med. Chem., 5, str. 419, 1969) 24 hodin po devátém dni ošetření.
Antivirová aktivita sloučeniny A se porovnává s antivirovou aktivitou Zalcitabinu.
Zjistilo se, že při použití sloučeniny A je účinná koncentrace (EC50) 1,8 ± 0,1 pg/ml pro 50% inhibici virové cytopatogenicity, zatímco cytotoxická koncentrace (pro 50% inhibici proliferace buněk) je větší než 1000 pg/ml.
Selektivní index S.I. pro sloučeninu A je proto > 1000/1,8, to znamená, že index je vyšší než 500.
Pro Zalcitabin poskytuje zkouška typu výsledky:
EC5o l,8±0,2pg/ml
CC5o 261,0 ± 24 pg/ml to znamená selektivní index S.I. je 261/1,8, to je přibližně 145.
Je tedy zřejmé, že sloučenina A je méně toxická než Zalcitabin, přičemž se může dosáhnout vhodnějšího ošetření proti replikaci HBV s menším sekundárním působením.
Test 5b
Antivirová účinnost proti VZV
Směs Nitazoxanidu (96 %) a sloučeniny A (4 %) se rovněž použije pro stanovení (účinnosti proti viru Varicella Zoster (standardní laboratorní kmen).
Zjistilo se EC5o 4 pg/ml a CC50 34 pg/ml pro tuto směs proti viru Varicella Zoster, to znamená selektivní index přibližně 8,5.
Se zřetelem na nízkou toxicitu se účinnost směsi je tato směs obzvláště vhodná pro ošetřování viru Varicella Zoster, o němž je známo, že je odolný pro antivirálnímu činidlu, jako je například Acyclovir.
Sloučenina A a farmaceutický prostředek podle vynálezu se mohou podávat orálně například ve formě tablet.
-15CZ 287002 B6
Prostředky podle vynálezu, zvláště farmaceutické prostředky obsahující PH 5776 a/nebo další protivirové činidlo jsou prostředky se širokým spektrem účinnosti na viru Herpes, jako jsou například:
Herpes Simplex Virus typ 1 (HSV-1, HSV-1 odolný k acycloviru),
Herpes Simplex Virus typu 2 (HSV-S, HSV-2 odolný k acyloviru),
Human Cytomegalovirus (HCMV, HCMV odolný k gancicloviru), Epsteinův tyčinkový Birruss (EBV)
Myší Cytomegalovirus (MCMV)
Farmaceutické prostředky podle vynálezu mohou obsahovat excipienty známé pro tyto účely pro přípravu forem vhodných pro orální podání.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu obsahují s výhodou smáčedlo a po možnosti derivát škrobu.
Průmyslová využitelnost
Použití nového derivát benzamidu jako účinné látky pro farmaceutické prostředky s protiparazitickým, protibakteriálním, protihoubovým nebo protivirovým účinkem nebo jako konzervační přísady do potravin.

Claims (22)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Derivát benzamidu vzorce A
  2. 2. Farmaceutický prostředek s antibakteriálními, antivirálními, antiparazitními a antifungálními účinky, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje derivát benzamidu vzorce A podle nároku 1.
  3. 3. Farmaceutický prostředek podle nároku 2, vyznačující se tím, že jako účinnou látku dále obsahuje derivát benzamidu vzorce B
    CB)
    -16CZ 287002 B6
  4. 4. Farmaceutický prostředek podle nároku 2 nebo 3, ve formě pro orální podávání, vyznačující se tím, že dále obsahuje smáčecí činidlo.
  5. 5. Farmaceutický prostředek podle nároku 4, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jedno smáčecí činidlo vybrané z aniontových povrchově aktivních látek.
  6. 6. Farmaceutický prostředek podle nároku 4, vyznačující se tím, že obsahuje smáčecí činidlo vybrané ze skupiny zahrnující estery cukru, polyoxyethylen, polyoxypropylen, deriváty anhydrohexitolu, mastné alkanolamidy, mastné aminoxidy, sacharózu, mannitol, sorbitol, lecitiny, polyvinylpyrrolidony, estery mastných kyselin, glyceridy sacharózy, estery xylózy, polyoxyethylenglyceridy, estery mastných kyselin a polyoxyethylenetheru mastných alkoholů a polyoxyethylenestery mastných kyselin sorbitanu a glyceridpolyglycidové estery alkoholových polyglycidů a jejich směsi.
  7. 7. Farmaceutický prostředek podle kteréhokoliv z předchozích nároků, vyznačující se tím, že dále obsahuje derivát škrobu.
  8. 8. Farmaceutický prostředek podle nároku 7, vyznačující se tím, že obsahuje karboxymethylový škrob nebo jeho sůl.
  9. 9. Farmaceutický prostředek podle nároku 7, vyznačující se tím, že obsahuje až 20 % hmotnostních povrchově aktivního činidla a až 20 % hmotnostních škrobového derivátu, vztaženo na hmotnost aktivních látek.
  10. 10. Farmaceutický prostředek ve formě pro orální podávání, podle nároku 4, vyznačující se tím, že obsahuje jádro, které obsahuje směs obsahující
    a) účinné množství derivátu benzamidu vzorce A, podle nároku 1, popřípadě dále derivát benzamidu vzorce B, podle nároku 3,
    b) smáčecí činidlo a
    c) škrobový derivát, přičemž obsah vody ve farmaceutickém prostředkuje do 25 % hmotnostních.
  11. 11. Farmaceutický prostředek podle nároku 10, vyznačující se tím, že obsahuje karboxymethylový škrob nebo jeho sůl.
  12. 12. Farmaceutický prostředek ve formě masti k léčení a potlačování potíží spodního břicha, vyznačující se tím, že obsahuje
    a) účinné množství derivátu benzamidu vzorce A, podle nároku 1, popřípadě dále derivát benzamidu vzorce B, podle nároku 3, a
    b) smáčecí činidlo.
  13. 13. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, vyznačující se tím, že dále obsahuje škrobový derivát.
  14. 14. Použití derivátu benzamidu vzorce A, podle nároku 1, pro přípravu antiparazitního činidla.
    -17CZ 287002 B6
  15. 15. Použití směsi derivátu benzamidu vzorce A, podle nároku 1, a derivátu benzamidu vzorce B, podle nároku 3, pro přípravu antiparazitního činidla.
  16. 16. Použití derivátu benzamidu vzorce A, podle nároku 1, pro přípravu antibakteriálního činidla.
  17. 17. Použití podle nároku 16 pro přípravu antibakteriálního činidla proti bakteriím vybraným ze skupiny zahrnující Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Shigella sonei, Helicobacter pyroli, Bacteroides fragilis, Fusobacterium ulcerans, Veillonella alcadescens a Gardnerella vaginalis.
  18. 18. Použití podle nároku 17 pro přípravu antibakteriálního činidla účinného proti Helicobacter pyroli.
  19. 19. Použití derivátu benzamidu vzorce A, podle nároku 1, pro přípravu antifungálního činidla.
  20. 20. Použití směsi derivátu benzamidu vzorce A, podle nároku 1, a derivátu benzamidu vzorce B, podle nároku 3, pro přípravu antifungálního činidla.
  21. 21. Použití derivátu benzamidu vzorce A, podle nároku 1, nebo derivátu benzamidu vzorce B, podle nároku 3, nebo jejich směsi, pro přípravu antivirálního činidla.
  22. 22. Použití derivátu benzamidu vzorce A, podle nároku 1, popřípadě dále derivátu benzamidu vzorce B, podle nároku 3, ke konzervaci potravin, popřípadě ve spojení se škrobovým derivátem.
CZ19962959A 1994-04-13 1995-04-11 Benzamide derivative, pharmaceutical preparation containing thereof and use of the derivative CZ287002B6 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/227,033 US5387598A (en) 1994-04-13 1994-04-13 Composition and galenic formulation suitable for combatting affections of the lower abdomen
US08/301,407 US5578621A (en) 1994-09-08 1994-09-08 Benzamide derivatives
US38385595A 1995-02-06 1995-02-06

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ295996A3 CZ295996A3 (en) 1997-03-12
CZ287002B6 true CZ287002B6 (en) 2000-08-16

Family

ID=27397680

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ19962959A CZ287002B6 (en) 1994-04-13 1995-04-11 Benzamide derivative, pharmaceutical preparation containing thereof and use of the derivative

Country Status (24)

Country Link
EP (1) EP0755386B1 (cs)
JP (1) JP3224395B2 (cs)
KR (2) KR100348440B1 (cs)
CN (1) CN1072654C (cs)
AP (1) AP645A (cs)
AT (1) ATE218557T1 (cs)
AU (1) AU689582B2 (cs)
BG (1) BG62932B1 (cs)
BR (1) BR9507371A (cs)
CA (1) CA2187110C (cs)
CZ (1) CZ287002B6 (cs)
DE (1) DE69526936T2 (cs)
DK (1) DK0755386T3 (cs)
ES (1) ES2161201T3 (cs)
FI (1) FI120258B (cs)
HU (1) HUT77404A (cs)
NZ (1) NZ284800A (cs)
OA (1) OA10463A (cs)
PL (1) PL186504B1 (cs)
PT (1) PT755386E (cs)
RU (1) RU2140915C1 (cs)
SI (1) SI0755386T1 (cs)
SK (1) SK281949B6 (cs)
WO (1) WO1995028393A1 (cs)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5968961A (en) 1997-05-07 1999-10-19 Romark Laboratories, L.C. Pharmaceutical compositions of tizoxanide and nitazoxanide
US5856348A (en) * 1994-09-08 1999-01-05 Romark Laboratories, L.C. Method for treatment of trematodes with pharmaceutical compositions of tizoxanide and nitazoxanide
CA2467321A1 (en) 2004-05-14 2005-11-14 Paul J. Santerre Polymeric coupling agents and pharmaceutically-active polymers made therefrom
CA2574282A1 (en) 2004-07-21 2006-03-02 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Lentiviral vectors and uses thereof
UA90864C2 (en) * 2004-09-09 2010-06-10 Ромарк Лебораториз, Л.К. Halogenated benzamide derivatives
US8633230B2 (en) 2006-01-09 2014-01-21 Jean-Francois Rossignol Viral hepatitis treatment
BRPI0815057B8 (pt) 2007-08-03 2021-05-25 Romark Laboratories Lc composto, composição farmacêutica, e, uso de um composto
AP3074A (en) 2009-05-12 2014-12-31 Romark Lab Lc Haloalkyl heteroaryl benzamide compounds
JP5932640B2 (ja) * 2009-06-26 2016-06-08 ロマーク ラボラトリーズ エル．シー． インフルエンザを治療するための化合物および方法
CA2778182C (en) 2009-10-22 2018-04-17 Thomas Julius Borody Novel parasite therapy
CN104094927B (zh) * 2013-04-02 2016-06-01 兴邦（武汉）生物科技有限公司 一种处理植物的助剂组合物
TW201630606A (zh) * 2015-01-21 2016-09-01 諾華公司 包含局部藥物之蓋崙（ｇａｌｅｎｉｃ）調配物
WO2019148291A1 (en) 2018-02-02 2019-08-08 Interface Biologics, Inc. Ocular inserts comprising a covalently linked steroid dimer
WO2021220061A2 (en) 2020-05-01 2021-11-04 Ripple Therapeutics Corporation Heterodimer compositions and methods for the treatment of ocular disorders
EP4337200A1 (en) * 2021-05-28 2024-03-20 Henderson, Theodore Treatment using an antiviral compound and nitazoxanide

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR1306603A (fr) * 1958-08-14 1962-10-19 Innothera Lab Sa Dérivés thiazoliques et leur procédé de préparation
FR716M (cs) * 1960-08-05 1961-08-07
GB1437800A (en) * 1973-08-08 1976-06-03 Phavic Sprl Derivatives of 2-benzamido-5-nitro-thiazoles
FR2435905A1 (fr) * 1978-09-13 1980-04-11 Anvar Nouveaux agents molluscicides derives du benzamido-2 nitro-5 thiazole
US4315018A (en) * 1978-12-07 1982-02-09 Rossignol Jean F Specific parasiticidal use of 2-benzamido-5-nitro-thiazole derivatives
US4447414A (en) * 1982-12-21 1984-05-08 Cutter Laboratories, Inc. Carnivore anthelmintics

Also Published As

Publication number Publication date
EP0755386B1 (en) 2002-06-05
CZ295996A3 (en) 1997-03-12
AP645A (en) 1998-04-24
ES2161201T3 (es) 2002-12-01
FI964031A (fi) 1996-10-08
BG62932B1 (bg) 2000-11-30
DK0755386T3 (da) 2002-08-26
DE69526936T2 (de) 2003-02-20
FI964031A0 (fi) 1996-10-08
JPH09511997A (ja) 1997-12-02
KR100348440B1 (ko) 2002-11-29
CA2187110A1 (en) 1995-10-26
AU2344095A (en) 1995-11-10
HU9602798D0 (en) 1996-12-30
OA10463A (en) 2002-04-03
KR100373081B1 (ko) 2003-02-25
EP0755386A1 (en) 1997-01-29
NZ284800A (en) 1998-02-26
RU2140915C1 (ru) 1999-11-10
AP9600866A0 (en) 1996-10-31
WO1995028393A1 (en) 1995-10-26
JP3224395B2 (ja) 2001-10-29
ES2161201T1 (es) 2001-12-01
HUT77404A (hu) 1998-04-28
SI0755386T1 (en) 2002-10-31
SK130796A3 (en) 1997-06-04
CA2187110C (en) 2002-03-19
PL186504B1 (pl) 2004-01-30
BG100884A (en) 1997-07-31
CN1145621A (zh) 1997-03-19
PT755386E (pt) 2002-11-29
SK281949B6 (sk) 2001-09-11
FI120258B (fi) 2009-08-31
DE69526936D1 (de) 2002-07-11
ATE218557T1 (de) 2002-06-15
CN1072654C (zh) 2001-10-10
BR9507371A (pt) 1997-09-23
PL316757A1 (en) 1997-02-03
AU689582B2 (en) 1998-04-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ287002B6 (en) Benzamide derivative, pharmaceutical preparation containing thereof and use of the derivative
MXPA96004483A (en) Derivatives of benzamide, compositions that contain such derivative and use of the mis
JP4700808B2 (ja) フルボ酸、および種々の状態の処置におけるその使用
LT4751B (lt) Tizoksanido ir nitazoksanido farmacinės kompozicijos
AU740022B2 (en) Pharmaceutical compositions of tizoxanide and nitazoxanide
SK50696A3 (en) Flavin and its derivatives as anti-viral agents
EP2851368B1 (en) Complex compounds of germanium, methods for producing same, and drugs
MXPA00010855A (es) Uso de derivados de benzamida como agentes parasitarios, antibacterianos, antivirales y antifungicos
RO118293B1 (ro) Derivat de benzamida, compozitii continand acest derivat si utilizarea acestuia
US7704976B2 (en) Use of N-acetyl-D-glucosamine for preparing medicines for urogenital tract infection's treatment and prevention
RU2255086C1 (ru) 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6- броминдола мезилат, обладающий противовирусной активностью, и фармацевтическая композиция с его использованием
KR100718030B1 (ko) 변형성 관절증 치료제
AU756451B2 (en) Pharmaceutical compositions of tizoxanide and nitazoxanide
CN117503742A (zh) Endosidin-2在制备抗病毒药物中的应用
CS209860B2 (cs) Způsob výroby nových derivátů aminokyselin

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20120411