CZ282730B6 - Způsob výroby nových derivátů glycinu - Google Patents

Abstract

Popisuje se způsob výroby sloučenin vzorce R-CONH-CH.sub.2.n.-CONH-CH(R')-CH.sub.2.n.COOH, kde R znamená-CH(NH-R.sup.a.n.)-(CH.sub.2.n.).sub.1-6.n.-NH-R.sup.b.n., -(T).sub.1 .n.nebo .sub.0.n.-C.sub.6.n.H.sub.4.n.--CH.sub.2.n.NH-R.sup.c.n., -(T).sub.1 .n.nebo .sub.O.n.-C.sub.6.n.H.sub.4.n.-(NH).sub.n.n.-C(NH)-L neboskupinu (R-4) a R.sup.a .n. znamená vodík, -COO-C.sub.1-4.n.--alkyl, -Z, -COC.sub.6.n.H.sub.5.n., -COC.sub.6.n.H.sub.4.n.N.sub.3.n., -SO.sub.2.n.C.sub.6.n.H.sub.5.n., -SO.sub.2.n.-naftyl nebo -CO-CH.sub.2.n.N(Y)-CH.sub.2.n.CH.sub.2.n.NH-Y, Y zna-mená vodík, Boc nebo Z, R.sup.b .n.znamená skupinu-C(NH)(CH.sub.2.n.).sub.0-3.n.-CH.sub.3 .n. nebo skupinu vzorce (a), nebo, jestliže R.sup.a .n. znamená skupinu -COC.sub.6.n.H.sub.4.n.N.sub.3.n.,-SO.sub.2.n.C.sub.6.n.H.sub.5.n., -SO.sub.2.n.-naftyl nebo -COCH.sub.2.n.N(Y)--CH.sub.2.n.C.sub.H2.n.NH-Y, pak znamená také amidinoskupinu,R.sup.c .n.znamená vodík nebo aminidoskupinu, n znamená číslo 1 nebo 0, L znamená aminoskupiŕ

Description

Vynález se týká derivátů glycinu, jejich použití a farmaceutického prostředku na jejich bázi.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu jsou deriváty glycinu obecného vzorce I

R-CONH-CH₂-CONH-CH(R')-CH₂COOH (I) ve kterém

R znamená skupinu vzorce -CH(NH-R^a)-(CH2)^-NH-R^b ~(T)i nebo 0-C6H4-CH₂NH-R^c -(T)2 nebo 0-C6H4-(NH)n-C(NH)-L nebo skupinu vzorce -(Th neboO^^N(WH2 (R-l) (R-2) (R-3) (R-4) a

R^a znamená atom vodíku, -COO-alkylovou skupinu, ve které alkyl obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu -Z, -COC₆H₅, -COC6H4N3, -SO₂C₆H₅, -SO₂-naftylovou skupinu nebo skupinu -CO-CH₂N(Y)-CH₂CH₂NH-Y,

Y znamená atom vodíku, skupinu Boc nebo skupinu Z,

R^b znamená skupinu vzorce -C(NH)(CH₂)o-3-CH₃ nebo skupinu vzorce

nebo, jestliže R^a znamená skupinu vzorce -COC6H4N3, -SO₂C6H₅, SO₂-naftyl nebo COCH₂N(Y)-CH₂CH₂NH-Y, pak znamená také amidinoskupinu,

R^c znamená atom vodíku nebo amidinoskupinu, n znamená číslo 1 nebo 0,

L znamená aminoskupinu, nebo, jestliže n znamená číslo 1, také skupinu -(CH₂)o.3-CH3,

T znamená skupinu vzorce -CH₂-(O)i nebo 0-, -CH=CH-, -CH(R^d)-CH₂- nebo -CH₂CO-, přičemž karbonylová skupina obsažená ve skupině T může být přítomna ve formě ketalu,

- 1 CZ 282730 B6

R^d znamená atom vodíku nebo skupinu -NH-R^a,

R' znamená atom vodíku nebo skupinu -CO-R⁰,

R° znamená aminoskupinu, -NH-alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu, NH(CH₂)_M-C₆H₅, -NH(CH₂)i.4-C6HrHal, NH-C₆H₄-COOH, -NH-C₆H₄-COO-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu nebo zbytek α-aminokarboxylové kyseliny vázaný přes aminoskupinu,

Hal představuje fluor, chlor, brom nebo jod,

Z představuje benzyloxykarbonylskupinu,

Su představuje sukcinimidovou skupinu,

Aeg představuje N-(2-aminoethyl)glycylskupinu a

Nal( 1) představuje 3-( 1 -nafityl)-L-alanylovou skupinu, jakož i jejich hydráty nebo solváty a jejich fyziologicky použitelné soli.

Předmětem vynálezu jsou dále deriváty glycinu obecného vzorce Ipro použití jako léčiva, zejména jako inhibitory vazby adhezivních proteinů na krevní destičky, inhibitory agregace krevních destiček a inhibitory intercelulámí adheze.

Předmětem vynálezu je také farmaceutický prostředek zejména pro léčení a profylaxi chorob vyvolaných vazbou adhezivních proteinů na krevní destičky, agregací krevních destiček a intercelulámí adhezí, jehož podstata spočívá v tom, že jako účinnou složku obsahuje derivát glycinu obecného vzorce I.

Konečně je předmětem vynálezu také použití derivátů glycinu obecného vzorce I pro výrobu léčiva pro léčení a profylaxi chorob vyvolaných vazbou adhezivních proteinů na krevní destičky, agregací krevních destiček a intercelulámí adhezí.

V rámci předloženého vynálezu označuje Me methylovou skupinu, Bzl benzylovou skupinu, tBu terc.butylovou skupinu, Hal některý ze čtyř atomů halogenu, Boc ter.butoxykarbonylovou skupinu, Z benzyloxykarbonylovou skupinu, Ac acetylovou skupinu, Su sukcinimidovou skupinu, Fmoc 9H-fluoren-9-ylmethoxykarbonylovou skupinu, Arg L-arginyl, Om L-omithyl, Val L-valyl, Phe L-fenylalanyl, Leu L-leucyl, Ile L-isoleucyl, Lys lysyl, Ser L-seryl, Thr Lthreonyl, Gly glycyl, Ala L-alanyl, Asp L-a-aspartyl, Aeg N-(2-aminoethyl)glycyl, Nal(l) 3-(lnaftyl)-L-alanyl.

Jako příklady α-aminokarboxylových kyselin vázaných přes aminoskupinu lze uvést Val, Phe, Leu, Ile, Ser, Thr, Nal(l), N-isopropyl-Gly, β-cyklohexyl-Ala a cykloleucin.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou tvořit solváty, zejména hydráty. K hydrataci může dojít v souvislosti se způsobem výroby nebo pozvolna v důsledku hygroskopickych vlastností zprvu bezvodé sloučeniny vzorce I.

Jako příklady fyziologicky použitelných solí sloučenin vzorce I lze uvést soli s fyziologicky snášenlivými minerálními kyselinami, jako je chlorovodíková kyselina, sírová kyselina nebo fosforečná kyselina, nebo soli s organickými kyselinami, jako je methansulfonová kyselina, octová kyselina, trifluoroctová kyselina, citrónová kyselina, fumarová kyselina, jantarová

-2CZ 282730 B6 kyselina nebo salicylová kyselina. Sloučeniny vzorce I mohou tvořit také soli s fyziologicky snášenlivými bázemi. Jako příklady takových solí lze uvést soli s alkalickými kovy, soli s kovy alkalických zemin, amonné soli a alkylamoniové soli, jako je sůl sodná, draselná, vápenatá nebo triethylamoniová sůl. Sloučeniny obecného vzorce I, které obsahují aminoskupinu, amidinoskupinu nebo guanidinoskupinu, mohou být přítomny také ve formě obojetného iontu.

Sloučeniny vzorce I, které obsahují jeden nebo několik asymetrických atomů uhlíku, mohou být přítomny také ve formě enantiomerů, ve formě diastereomerů nebo ve formě jejich směsí, například jako racemáty.

Výhodnými sloučeninami obecného vzorce I jsou takové sloučeniny, ve kterých je skupina RCO- představována skupinou Aeg-Arg-, Z-Aeg(Z)-Arg-, 2-naftyl-SO₂-Arg-, o-azidobenzoyl-Arg-, N²-Boc-N⁶-( 1 -iminoethyl)-Lys-, N²-Boc-N⁵-(3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3a,7a-dihydroxy-l H-benzimidazol-2-yl)-Om-, p-(aminomethyl)hydrocinnamoylovou skupinou, p-amidinohydrocinnamoylovou skupinou, 3-(p-amidinofenyl nebo p-guanidinofenyl)alanylovou skupinou, skupinou N-Z- nebo N-Boc-3-(p-amidinofenyI)alanylovou skupinou, N-Boc-3-(p-guanidinofenyl)alanylovou skupinou, p-amidinofenoxyacetylovou skupinou nebo p-amidinofenacetylovou skupinou.

Výhodné jsou dále sloučeniny obecného vzorce I, ve kterém R' znamená atom vodíku, skupinu CO-Val-OH, -CO-Ser-OH, -CO-Phe-OH, l-karboxy-2-(l-naftyl)ethylidenkarbamoylovou skupinu, skupinu -CO-Ile-OH, karboxyfenylkarbamoylovou skupinu, isobutylkarbamoylovou skupinu nebo p-fluorfenethylkarbamoylovou skupinu.

Zvláště výhodné jsou následující sloučeniny:

[3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH,

Z-Aeg(Z)-Arg-Gly-Asp-V al-OH, Aeg-Arg-Gly-Asp-V al-OH, Aeg-Arg-Gly-Asp-Ser-OH, N-Aeg-Arg-Gly-Asp-Nal( 1 )-OH, Aeg-Arg-Gly-Asp-Ile-OH, (N²-Boc-N⁶-( 1 -iminoethy l)-L-lysy 1]-Gly-Asp-V al-OH, N-[(o-azidobenzoyl)-Arg-Gly-Asp)anthranilová kyselina, N²-Boc-N⁵-(3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3a,7a-dihydroxy-lH-benzimidazol-2-yl)-L-omithyl]-GlyAsp-Val-OH, [N-Boc-3-(p-guanidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH, [3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Nal( 1 )-OH, [N-Boc-3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH, (p-amidinohydrocinnamoyl)-Gly-Asp-Nal( 1 )-OH, [3-(p-amidinofenyl)-D-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH, (p-aminomethylhydrocinnamoyl)-Gly-Asp-Val-OH, (p-amidinohydrocinnamoyl)-Gly-Asp-Val-OH, [3-(p-amidinofenyl)-L-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH, (p-amidinofenox)acetyl-Gly-Asp-V al-OH a (p-amidinofenyl)acetyl-Gly-Asp-Val-OH.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu lze vyrábět o sobě známým způsobem, který spočívá například v tom, že se

a) ve sloučenině obecného vzorce Π

R² - CONH - CH2 - CONH - CH(R⁴) - CH2COOR³ (Π), ve kterém

-3CZ 282730 B6

R² znamená skupinu vzorce

-CH(NH-R^a)-(CH₂),.₆-R⁵ (R-la)

-(T)i nebo ₀-C₆H4-CH₂-R⁶ (R-2a) nebo

-(T)i nebo ₀-C₆H₄-R⁷ (R-3a) přičemž

R⁵ znamená chráněnou guanidinoskupinu nebo skupinu -NH-R^b,

R⁶ znamená chráněnou amino- nebo guanidinoskupinu nebo skupinu -NH-R^C,

R⁷ znamená popřípadě chráněnou amidinoskupinu nebo guanidinoskupinu,

R³ znamená atom vodíku nebo snadno odštěpitelnou esterovou skupinu,

R⁴ má stejný význam jako R' nebo znamená skupinu -COR⁸, kde

R⁸ znamená přes aminoskupinou vázaný snadno štěpitelný ester a-aminokarboxylové kyseliny, .

přičemž v případě, že R³ znamená atom vodíku a R⁴ má stejný význam jako R', pak R² má obsahovat alespoň jednu chráněnou guanidinoskupinu, aminoskupinu nebo amidinoskupinu R⁵, R⁶ popřípadě R⁷, a

R^a, R^b, R^c, R' a T mají shora uvedený význam, štěpí přítomná esterová skupina či přítomné esterové skupiny a jedna nebo několik přítomných chráněných aminoskupin, amidinoskupin nebo guanidinoskupin, nebo se

b) amin obecného vzorce ΠΙ

CH(NH₂)-(CH₂)^-NH-C(NH)NH₂

I

CONH - CH₂ - CONH - CH(R')-CH₂COOH (ΙΠ ), ve kterém

R' má shora uvedený význam, nechá reagovat s činidlem zavádějícím skupinu -COC₆H₅, -SO₂CeH5, -SO₂-naftyl nebo -COCH₂N(YjCH₂CH₂NH-Y, přičemž Y má shora uvedený význam, nebo se

-4CZ 282730 B6 (IV)

c) amin obecného vzorce IV

CH(NH-R’>(CH₂)i^-NH₂

I CONH-CH₂-CONH-CH(R')-CH₂COOH ve kterém

R⁹ znamená skupinu -COO-Ci-4-alkyl, Z, -COCóH₅, -COC6H4N3, -SO₂C6H₅, -SO₂-nafíyl nebo -COCH₂N(Y’>CH₂CH₂NH-Y’, kde

Y' znamená Boc nebo Z, a

R' má shora uvedený význam, nechá reagovat s činidlem zavádějícím skupinu -C(NH)(CH₂)o-3-CH3, nebo se

d) derivát guanidinu obecného vzorce V

CH(NH-R⁹)-(CH₂)i_₆-NHC(NH)NH₂

I CONH-CH₂-CONH-CH(R>CH₂COOH ( V ), ve kterém

R' a R⁹ mají shora uvedené významy, nechá reagovat s 1,2-cyklohexandionem, nebo se

e) v aminu obecného vzorce IV nebo v aminu obecného vzorce VI

NH-CH₂-CONH-CH(R’)-CH₂-COOH

CO-(L)i nebo o-QHHCHj)! nebo ₀-NH₂ (VI) ve kterém

L znamená skupinu -CH₂(O)i nebo 0-, -CH=CHnebo -CH(NH-R⁹>CH₂-, a R' a R⁹ mají shora uvedený význam, přemění aminoskupina na guanidinoskupinu, nebo se

f) hydrogenuje nitril obecného vzorce VII

-5CZ 282730 B6

N^C-C₆H₄-(T)_l nebo ₀-CONH-CH₂-CONH-CH(R')-CH₂COOH (VII), ve kterém

T a R' mají shora uvedené významy, na amin, nebo se

g) popřípadě funkčně obmění reaktivní substituent obsažený ve skupině R sloučeniny vzorce I a

h) popřípadě se sloučenina vzorce I převede na sůl nebo se sůl sloučeniny vzorce I převede na volnou sloučeninu vzorce I.

Jako příklady chráněných amino-, amidino- a guanidino-skupin lze uvést skupiny -NH-Z a -NHBoc, -C(NH)NH-Z, -NHC(NH)NH-NO₂, -NHC(N-Boc)-NH-Boc a -NHC(N-Z>NH-Z.

Jako příklady snadno štěpitelných esterových skupin COOR³ lze uvést methoxy-, terc.butoxya benzyloxykarbonyl. Jako příklady substituentu R⁸ lze uvést -Val-OtBu, -Val-OBzl a-Ser(tBu)OtBu.

Odštěpování skupin podle varianty a) postupu podle vynálezu se dá provádět o sobě známým způsobem. Tak lze odštěpit esterové skupiny, jako terc.butoxykarbonylovou skupinu, působením kyseliny, jako mravenčí kyseliny, trifluoroctové kyseliny (TFA) nebo chlorovodíkové kyseliny, v rozpouštědle, jako v methylenchloridu, tetrahydrofuranu (THF) nebo ethylacetátu, při teplotě až do asi 40 °C, výhodně při teplotě mezi asi 0 °C a teplotou místnosti. Přitom se současně odštěpují chránící skupiny aminoskupiny, guanidinoskupiny nebo amidinoskupiny, jako Boc, obsažené v substituentu R². Tímto způsobem se dají odstranit také sloučeniny vzorce II získané syntézou v pevné fázi z nosiče, například z divinylbenzen-styrenové pryskyřice obsahující pbenzyloxybenzylalkoholové zbytky.

Esterové skupiny, jako methoxykarbonylová skupina, se může zmýdelnit působením báze, jako hydroxidu alkalického kovu, například hydroxidu sodného, v rozpouštědle, jako v acetonu, při teplotě až do asi 40 °C, výhodně při teplotě místnosti. Benzylesterové skupiny se mohou štěpit hydrogenací v přítomnosti katalyzátoru na bázi vzácného kovu, jako paladia na uhlí (Pd/C) v rozpouštědle, jako methanolu, ethanolu, mravenčí kyselině nebo octové kyselině, při teplotě až do asi 40 °C, výhodně při teplotě místnosti. Přitom se odštěpuje současně krycí skupina aminoskupiny nebo krycí skupina amidinoskupiny obsažená ve skupině R², jako skupina Z; popřípadě krycí skupiny guanidinoskupiny, jako nitroskupina a Z.

Postup podle varianty b) se může rovněž provádět o sobě známým způsobem. K zavedení skupiny -COC6H4N3 se může nechat reagovat sloučenina vzorce ΠΙ s pyridinhydrochloridem v přítomnosti báze, jako N-ethyldiisopropylaminu (DIPEA), a l,l,3,3-tetramethyl-2-[4-oxol,2,3-benzotriazin-3(4H)-yl]uroniumhexafluorfosfátu (HOBTU) v rozpouštědle, jako v dimethylformamidu. K zavedení skupiny -SO₂-nafityl se může ke sloučenině vzorce ΙΠ přidat například naftalen-2-sulfonylchlorid a báze, jako hydrogenuhličitan sodný, v rozpouštědle, jako v acetonu a vodě. K. zavedení skupiny -COCH₂N(Y)-CH₂CH₂NH-Y lze nechat reagovat sloučeninu obecného vzorce ΠΙ například se sloučeninou Z-Aeg(Z)-OSu v přítomnosti báze, jako například pyridinhydrochloridu, v rozpouštědle, jako v dimethylformamidu. Účelně se dají tyto reakce provádět při teplotě až do asi 40 °C, výhodně při teplotě místnosti.

-6CZ 282730 B6

Jako příklady činidel k zavedení skupiny -C(NH)-(CH₂)o.3-CH3 lze uvést ethery vzorce MeOC(NH)-(CH2)o-3-CH3, jako například methylacetimidát. Reakce podle varianty c) postupu podle vynálezu se může provádět například za použití chlorhydrátu takového etheru v přítomnosti báze, jako hydroxidu sodného, v rozpouštědle, jako je voda, při teplotě až do teploty asi 40 °C, výhodně při teplotě místnosti.

Reakce podle varianty d) postupu podle vynálezu se může provádět v natriumborátovém pufru pod atmosférou inertního plynu, jako argonu, při teplotě až do asi 40 °C, výhodně při teplotě místnosti.

Za účelem provádění varianty e) postupu podle vynálezu lze nechat reagovat amin obecného vzorce VI v rozpouštědle, jako je voda, s bází, například s uhličitanem draselným, a aminoiminomethansulfonovou kyselinou při teplotě místnosti až do teploty asi 40 °C, výhodně při teplotě místnosti.

Za účelem provádění varianty f) postupu podle vynálezu lze hydrogenovat nitril obecného vzorce VII v alkoholickém, například v methanolickém roztoku amoniaku v přítomnosti katalyzátoru, jako Raney-niklu, při teplotě až do asi 40 °C, výhodně při teplotě místnosti.

Funkční obměny podle varianty g) postupu podle vynálezu se dají rovněž provádět běžnými metodami. Tak lze z chráněné skupiny R-CO-, jako je Z-Aeg(Z)-Arg- nebo N-Boc-3-(pamidinofenyl)-D,L-alanyl, odštěpit chránící skupiny, například způsobem popsaným shora v souvislosti s variantou a) postupu podle vynálezu.

Primární aminoskupina obsažená v substituentu R se může převést na skupinu -NH-Boc, například působením di-terc.butyldikarbonátu v rozpouštědle, jako v dimethylformamidu, v přítomnosti báze, jako triethylaminu, při teplotě až do asi 40 °C, výhodně při teplotě místnosti.

Sloučeniny obecného vzorce II jsou nové a rovněž tvoří předmět tohoto vynálezu. Mohou se připravovat ze známých sloučenin podle o sobě známých a odborníkovi běžných metod. Tak se dají amidiny obecného vzorce II, ve kterém R² znamená skupinu -(T)j nebo O-C₆H4-C(NH)NH₂, vyrábět z odpovídajících nitrilů obecného vzorce VIII

NC-C₆H₄-(T), nebo ₀-CONH-CH₂-CONH-CH(R⁴)-CH₂COOR³ (Vffl) ve kterém

R³, R⁴ a T mají shora uvedené významy, přes odpovídající thioamidy a S-methyliminoesteiy.

Tak například se nechá reagovat nitril obecného vzorce VHI se sirovodíkem a triethylaminem v pyridinu a získaný thioamid se poté nechá reagovat s methyljodidem v acetonu a potom s octanem amonným v methanolu.

Derivát guanidinu obecného vzorce Π, ve kterém R² znamená skupinu obecného vzorce -(T)i nebo o-C₆H._t-NHC(NH)-NH₂, lze připravovat z odpovídajícího nitroderivátu obecného vzorce IX

NHCO-(T)! nebo ₀-C₆H4-NO₂

CH₂-CONH-CH(R⁴)-CH₂COOR³ (IX), ve kterém

-7CZ 282730 B6

R³, R⁴ a T mají shora uvedené významy, přes odpovídající primární amin a odpovídající guanidinderivát chráněný nitroskupinou. Tak lze nitroderivát vzorce IX hydrogenovat v přítomnosti paladia na uhlí na primární amin, získaný produkt nechat reagovat s 3,5-dimethyl-N-nitro-lH-pyrazol-l-karboxamidinem v ethanolu a poté odštěpit nitroskupinu hydrogenací v přítomnosti paladia na uhlí v kyselině octové.

Syntézou v pevné fázi se dají připravit o sobě známým způsobem sloučeniny vzorce Π vázané na nosiči. Tak lze k suspenzi nosiče sestávající ze styren-divinylbenzenové pryskyřice obsahující zbytky p-benzyloxybenzylalkoholu v dimethylformamidu přidat N-(9H-fluoren-9-ylmethoxykarbonyl)-3 -(1 -naftyl)-L-alanin, potom 2-( 1 H-benzotriazol-1 -y 1)-1,1,3,3 -tetramethyluroniumhexafluorfosfát (HBTU), 4-dimethylaminopyridin a N-ethyldiisopropylamin (DLPEA). Volné hydroxylové skupiny lze acetylovat acetanhydridem v přítomnosti DIPEA v dimethylformamidu. Potom lze, například postupem popsaným v příkladu 10, kopulovat jednotlivé chráněné aminokyseliny, jako Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Arg-OH.HCl a Boc-Aeg(Boc)OSu, postupně na sloučeninu obecného vzorce

Boc-Aeg(Boc)-Arg-Gly-Asp(OBut)-Nal( 1 )-0-nosič.

Kyseliny vzorce ΠΙ, jako H-Arg-Gly-Asp-Val-OH a H-Arg-Gly-Asp-Ser-OH, jsou známé nebo se mohou připravovat o sobě známým způsobem, například reakcí odpovídajícího esteru vzorce X

H₂N-CH₂-CONH-CH(R')-CH₂COO-t-Bu (X ) s Z-Arg[Z₂]-OSu, odštěpením esterové skupiny a odstraněním chránících skupin arginu, přítomných v takto získaném produktu, katalytickou hydrogenací v methanolu za přítomnosti paladia na uhlí.

Amin obecného vzorce IV, například amin, ve kterém R' znamená skupinu -CO-Val-OH a R⁹ znamená skupinu -COO-C_M-alkyl, se dá připravit z odpovídajícího diesteru, například z H-GlyAsp(OBzl)-Val-OBzl přes derivát lysinu Boc-Lys(Z)-Gly-Asp(O-Bzl)-Val-OBzl. Tak lze zmíněný diester nechat reagovat s Boc-Lys(Z)-OSu v dimethylformamidu v přítomnosti Nmethylmorfolinu a takto získaný derivát lysinu pak katalyticky hydrogenovat na odpovídající amin vzorce IV, tj. Boc-Lys-Gly-Asp-Val-OH.

Derivát guanidinu vzorce V, například takový, ve kterém R⁹ znamená skupinu -COO-C_M-alkyl, lze připravovat reakcí odpovídající sloučeniny vzorce ΠΙ s di-terc.butyl-dikarbonátem v přítomnosti pyridinhydrobromidu ve vodném dioxanu.

Amin vzorce VI, například Boc-D,L-Phe(p-NH₂-Gly-Asp-Val-OH, se nechá vyrobit zodpovídajícího diesteru, například zH-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl.TFA, přes nitroderivát BocD,L-Phe(p-NO₂)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl. Tak lze zmíněný diester smísit s Boc-D,L-Phe(pNO₂)-OH v dimethylformamidu v přítomnosti HBTU a DIPEA a získaný nitroderivát pak katalyticky hydrogenovat na žádaný amin.

Nitril obecného vzorce VHI, například nitril, ve kterém R⁴ znamená skupinu -CO-Ser(tBu)-OtBu, se dá vyrobit kopulací odpovídajícího diesteru, například H-Gly-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu, s rac.-Z-(p-kyanfenyl)alaninem v dimethylformamidu pod atmosférou argonu v přítomnosti N-methylmorfolinu a 2-( 1 H-benzotriazol-1 -y 1)-1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfátem (HBTU).

Analogickým způsobem lze diester, jako například H-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu kopulovat s Boc-Phe(4-NO2)-OH na odpovídající nitroderivát vzorce IX, například [N-Boc-3-(pnitrofenyl)-L-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu.

-8CZ 282730 B6

Sloučenina obecného vzorce X, například kyselina N-[H-Gly-Asp(OtBu)]anthranilová, se může vyrobit kopulací Z-Asp(OtBu)-OH a tosylátu benzylesteru anthranilové kyseliny v dimethylformamidu s 1,1,3,3-tetramethyl-2-[4-oxo-1,2,3-benzotriazin-3(4H)-yl]uroniumtetrafluorborátem TOBTU) a DIPEA, odštěpením skupiny Z ze získaného esteru, kopulací získané sloučeniny, tj. N-[H-Asp(OtBu)anthranilové kyseliny, sZ-Gly-OSu a odstraněním skupiny Z ze získaného produktu hydrogenací.

Výchozí diester, jako H-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl.TFA, se dá vyrobit kopulací Boc-Asp(OBzl)OH s H-Val-OBzl.tosylátem v přítomnosti N-methylmorfolinu a isobutylesteru chlormravenčí kyseliny v dimethylformamidu, acidolýzou získaného BOC-Asp(OBzl)-Val-OBzl pomocí TFA, kopulací získaného H-Asp(OBzl)-Val-OBzl.TFA sBoc-Gly-OSu a s N-methylmorfolinem v ethylacetátu a následující acidolýzou.

Diester, jako H-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-OMe, lze připravit kopulací Z-Gly-OH s H-Asp-(OtBu)OMe, zmýdelněním získaného Z-Gly-Asp(OtBu)-OMe hydroxidem sodným v acetonu, kopulací získaného Z-Gly-Asp(OtBu)-OH s H-Nal(l)-OMe a hydrogenolýzou získaného Z-GlyAsp(OtBu)-Nal( 1 )-OMe.

Diester, jako H-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu, se dá připravit kondenzací Z-Asp(OtBu)-OH aHVal-OtBu za vzniku Z-Asp(OtBu)-Val-OtBu, hydrogenolýzou posléze zmíněné sloučeniny, kopulací získaného H-Asp(OtBu)-Val-OtBu s Z-Gly-Osu za vzniku Z-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu a hydrogenolýzou této sloučeniny.

Deriváty glycinu obecného vzorce I, jejich solváty a jejich soli, inhibují jak vazbu fibrinogenu, fibronektinu a Willebrandova faktoru na receptor fibrinogenu krevních destiček (glykoprotein Hb/IIIa), tak i vazbu těchto látek a dalších adhezivních proteinů, jako vitronektinu, kolagenu a lamininu, na odpovídající receptory na povrchu různých typů buněk. Sloučeniny podle předloženého vynálezu ovlivňují tudíž vzájemné působení (interakci) buňka-buňka abuňkamatrice. Zejména pak tyto sloučeniny zabraňují vzniku sraženin krevních destiček (trombocytů) a mohou se tudíž používat k léčení, popřípadě k prevenci chorob, jako jsou trombóza, mozková mrtvice, srdeční infarkt, zánětlivá onemocnění a arteriosklerosa. Dále mají uvedené sloučeniny účinek na nádorové buňky tím, že potlačují vznik jejich metastáz. Na základě tohoto účinku se mohou používat také jako protinádorové prostředky.

Inhibici vazby fibrinogenu na receptor fibrinogenu (glykoprotein ílb/IIIa) lze prokázat dále popsaným pokusem:

Glykoprotein nb/Ma se získá z extraktů lidských krevních destiček v tritonu X-100 a čistí se chromatografováním (chromatografie s afinitou na lektin; srov. Analytical Biochemistry 151, 1985, 169-177) jakož i sloupcovou chromatografií (afinita na Arg-Gly-Asp-Ser; srov. Science 231, 1986, 1559-62). Takto získaný proteinový receptor se váže na mikrotitrační desky. Specifická vazba fibrinogenu na ímobilizovaný receptor se stanovuje pomocí systému ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). Následující hodnoty IC50 odpovídají těm koncentracím testované látky, které jsou potřebné k tomu, aby o 50 % inhibovaly vazbu fibrinogenu na ímobilizovaný receptor:

sloučenina z příkladu č. IC₅₀ (pmol)

0,016

0,15

0,09

0,11

0,038

-9CZ 282730 B6

0,12

0,11

0,11

0,054

0,08

0,022

0,016

0,011

0,022

0,21

0,035

0,023

0,005

0,0019

Sloučeniny vzorce I mají nepatrnou toxicitu. Tak má produkt z příkladu 2 hodnotu LD₅₀ 600 mg/kg při intravenosní aplikaci myši.

Jak již bylo shora uvedeno, jsou předmětem předloženého vynálezu rovněž léčiva, která obsahují derivát glycinu vzorce I, sůl této sloučeniny nebo solvát této sloučeniny. Předmětem vynálezu je rovněž způsob výroby takových léčiv, který spočívá v tom, že se alespoň jedna ze zmíněných sloučenin a popřípadě jedna nebo několik dalších terapeuticky cenných látek převede na galenickou aplikační formu. Léčiva se mohou aplikovat enterálně, například perorálně ve formě tablet, lakovaných tablet, dražé, tvrdých a měkkých želatinových kapslí, roztoků, emulzí nebo suspenzí, nebo rektálně, například ve formě čípků, nebo ve formě spraye. Aplikace se může provádět také parenterálně, například ve formě injekčních roztoků.

Za účelem výroby tablet, lakovaných tablet, dražé a tvrdých želatinových kapslí, se může účinná látka mísit s farmaceuticky inertními, anorganickými nebo organickými pomocnými látkami. Jako takovéto pomocné látky se mohou pro tablety, dražé a tvrdé želatinové kapsle používat například mléčný cukr, kukuřičný škrob nebo jeho deriváty, mastek, kyselina stearová nebo její soli. Pro měkké želatinové kapsle se jako pomocné látky hodí například rostlinné oleje, vosky, tuky, polopevné a kapalné polyoly; podle skupenství účinné látky však není v měkkých želatinových kapslích zapotřebí vůbec žádných pomocných látek. K výrobě roztoků a sirupů jsou vhodné jako pomocné látky například voda, polyoly, sacharosa, invertní cukr a glukosa; pro injekční roztoky se hodí například voda, alkoholy, polyoly, glycerol a rostlinné oleje, a pro čípky se hodí například přírodní nebo ztužené oleje, vosky, tuky a polokapalné nebo kapalné polyoly. Farmaceutické přípravky mohou vedle toho obsahovat ještě konzervační prostředky, pomocná rozpouštědla, stabilizátory, smáčedla, emulgátory, sladidla, barviva, aromatizující prostředky, soli ke změně osmotického tlaku, pufry, povlakové prostředky nebo antioxidační prostředky.

K léčení, popřípadě za účelem prevence shora uvedených chorob se může dávka účinné látky měnit v širokých mezích a může se přirozeně přizpůsobit v každém jednotlivém případě individuálním okolnostem. Obecně by při perorální aplikaci měla činit dávka účinné látky od asi 0,1 do 20 mg/kg, výhodně od asi 0,5 do 4 mg/kg/den pro dospělé pacienty. Pokud se to ukáže nutným, může se však i horní uvedená mez překročit nebo se naopak dolní uvedená mez nemusí dodržet a dávka může být ještě nižší.

Vynález blíže ilustrují následující příklady. Tyto příklady však rozsah vynálezu v žádném směru neomezují.

-10CZ 282730 B6

Příklad 1

A) Roztok 55 mg [3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu-hydrojodidu ve směsi 10 ml methylenchloridu a 5 ml trifluoroctové kyseliny se ponechá pod atmosférou argonu po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Po odpaření rozpouštědla se získá 43 mg (86 % teorie) [3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Ser-OH-trifluoracetátu (2 : 3). Teplota tání 223 až 224 °C (ze směsi ethylacetátu a isopropyletheru).

B) Výchozí ester se připraví následujícím způsobem:

a) Roztok 1,95 g H-Ser(tBu)-OtBu-tosylátu v dimethylformamidu ochlazený na teplotu 0 °C se přidáním N-methylmorfolinu upraví na pH 8. K takto upravenému reakčnímu roztoku se přidá roztok 2,1 g Z-Asp(OtBu)-OSu ve 160 ml dimethylformamidu. Reakční směs se míchá 1 hodinu při teplotě 0 °C a ponechá se přes noc v chladničce. Zbytek, získaný po odpaření rozpouštědla, se vyjme ethylacetátem a ethylacetátový roztok se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, 10% roztokem hydrogenuhličitanu draselného a vodou, vysuší se, zfiltruje se a odpaří se. Získá se 2,09 g (80 % teorie) Z-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu, teplota tání 79 až 80 °C (ze směsi ethylacetátu a hexanu).

b) 1,9 g Z-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu ve 100 ml methanolu se hydrogenuje v přítomnosti 0,1 g paladia na uhlí (10%) jako katalyzátoru. Po spotřebování teoretického množství vodíku se směs zfiltruje a filtrát se odpaří k suchu. Chromatografováním na silikagelu se získá za použití směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 98 : 2 jako elučního činidla 1,28 g (91 % teorie) H-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu. Hmotové spektrum MS: 389 (M+H)⁺.

c) Analogickým postupem jako je popsán v odst. a) se z Z-Gly-OSu a H-Asp(OtBu)Ser(tBu)-OtBu získá Z-Gly-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu. Výtěžek: 86 %. [a]_D = -6,9 ° (c = 0,9, methanol).

d) Analogickým postupem jako je popsán v odstavci b) se hydrogenolýzou Z-GlyAsp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu získá H-Gly-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu. Výtěžek: 75 %. MS: 446 (M + H)⁺.

e) K. roztoku 200 mg rac. N-Z-3-(p-kyanfenyl)alaninu (Pharmazie 40, 1985, 305) a 294 mg H-GIy-Asp(OtBu)-Ser(ťBu)-OtBu v 10 ml dimethylformamidu se pod atmosférou argonu přidá 67 mg N-methylmorfolinu a 250 mg HBTU a směs se ponechá v klidu přes noc. Olej získaný po odpaření rozpouštědla se rozpustí v ethylacetátu, ethylacetátový roztok se promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, vysuší se a odpaří se. Zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití ethylacetátu jako elučního činidla. Získá se 160 mg [N-Z-3-(p-kyanfenyl)DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu (směs epimerů 1:1). Teplota tání 117 až 119 °C (ze směsi etheru a n-hexanu).

f) Roztok 362 g produktu z odstavce e) ve 40 ml pyridinu a 3 ml triethylaminu se po nasycení sirovodíkem uchovává po dobu 2 dnů, potom se vmíchá do vody a extrahuje se ethylacetátem. Produkt se potom chromatografuje na silikagelu za použití směsi methylenchloridu a methanolu jako elučního činidla. Získá se 270 mg (N-Z-3-(p-thiokarboxamidofenyl)DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu (směs epimerů 1:1). MS: 786 (M+H)⁺.

g) Kthioamidu z předchozího stupně se po rozpuštění ve 30 ml acetonu přidá 0,6 ml methyljodidu a reakční směs se zahřívá 3 hodiny kvaru pod zpětným chladičem. Po filtraci a zahuštění se produkt vysráží přidáním etheru. Získá se 181 mg (57 % teorie) [N-Z-3-(pmethylthiokarboximidofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu-hydrojodidu (směs epimerů 1 : 1). Teplota tání 136 až 138 °C.

-11 CZ 282730 B6

h) K roztoku 180 mg jodidu z předchozího stupně ve 30 ml methanolu se přidá 36 mg octanu amonného a směs se zahřívá 5 hodin na teplotu 60 °C. Po ochlazení a filtraci se produkt vysráží etherem. Získá se 89 mg (51 % teorie) [N-Z-3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-GlyAsp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu-hydrojodidu (směs epimerů 1:1). Teplota tání 150 °C (rozklad) (ze směsi ethylacetátu a n-hexanu).

i) Analogickým způsobem jako je popsán v odstavci b) se hydrogenolýzou produktu z odstavce h) získá [3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu-hydrojodid (směs epimerů 1:1). Teplota tání 163 až 164 °C (ze směsi ethylacetátu a n-hexanu). Výtěžek 70 % teorie.

Příklad 2

A) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1A se za použití [N-Boc-3-(pamidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu-hydrojodid-acetátu (1 : 1) získá [3-(pamidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH-trifluoracetát (1 : 2), teplota tání 174 °C (rozklad) (ze směsi methanolu a ethylacetátu). Výtěžek 75 % teorie.

B) Výchozí látku lze vyrobit následujícím způsobem:

a) Při kondenzaci Z-Asp(OtBu)-OH aH-Val-OtBu se získá Z-Asp(OtBu)-Val-OtBu. Teplota tání 75 °C (z n-hexanu). Výtěžek 93 % teorie.

b) Hydrogenolýzou produktu z odstavce a) se získá H-Asp(OtBu)-Val-OtBu. Teplota tání 71 °C (z n-hexanu). Výtěžek 93 % teorie.

c) Kopulací Z-Gly-OSu a H-Asp(OtBu)-Val-OtBu se získá Z-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu, teplota tání 132 °C (z ethylacetátu). Výtěžek: 87 %.

d) Hydrogenolýzou produktu z odstavce c) se získá H-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu. Výtěžek 87 % teorie. [a]o = -33,2 ° (c = 0,6; methanol).

e) Kopulací rac. N-Boc-3-(p-kyanfenyl)alaninu (srov. francouzský zveřejňovací spis 2 593 814) a H-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu se získá [N-Boc-3-(p-kyanfenyl)-DL-alanyl]-GlyAsp(OtBu)-Val-OtBu, teplota tání 140 až 145 °C (ze směsi ethylacetátu a isopropyletheru). Výtěžek: 66 % teorie.

f) Analogickým postupem jako v příkladu IB), odst. f), g) ah) se ze sloučeniny získané v předcházejícím odstavci přes (N-Boc-3-(p-thiokarboxamidofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)Val-OtBu (směs epimerů 1 : 1), výtěžek 96 %; MS: 708 (M+H)⁺ a přes [N-Boc-3-(p-methylthiokarboximidofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu-hydrojodid (směs epimerů 1:1), teplota tání 100 °C (rozklad); Výtěžek: 82 % teorie získá [N-Boc-3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu-hydrojodid-acetát (směs epimerů 1 : 1), teplota tání 154 až 156 °C (rozklad) (z ethylacetátu).

Výtěžek: 89 % teorie.

Příklad 3

A) 95 mg [N-Boc-3-(p-guanidinofenyl)-L-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu se rozpustí v 10 ml ethylacetátu a k získanému roztoku se přidá 5 ml 2,5N roztoku chlorovodíkové kyseliny

- 12CZ 282730 B6 v ethylacetátu. Po 4 hodinách míchání při teplotě místnosti se reakční směs zfiltruje a sraženina se promyje ethylacetátem. Získá se 44 mg (53 % teorie) [3-(p-guanidinofenyl)-L-alanyl]-GlyAsp-Val-OH-pentahydrochloridu o teplotě tání 215 °C (rozklad) [z dioxanu].

B) Výchozí látku lze připravit následujícím způsobem:

a) Kondenzací N-Boc-3-(p-nitrofenyl)-L-alaninu a H-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu se získá [N-Boc-3-(p-nitrofenyl)-L-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu, teplota tání 106 °C (z n-hexanu). Výtěžek 72 % teorie.

b) Roztok 890 mg produktu z odstavce a) v 15 ml methanolu se hydrogenuje 3 hodiny v přítomnosti 200 mg 10 % paladia na uhlí. Po filtraci a odpaření rozpouštědla se zbylá pěna chromatografuje na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a methanolu (95 : 5) jako elučního činidla. Potom se produkt překrystaluje z isopropyletheru. Získá s 670 mg (79 % teorie) [N-Boc-

3-(p-aminofenyl)-L-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu o teplotě tání 110ažll2°C.

c) Roztok 200 mg produktu z odstavce b) a 60 mg 3,5-dimethyl-N-nitro-lH-pyrazol-lkarboxamidinu ve 3 ml ethanolu se zahřívá 24 hodin kvaru pod zpětným chladičem. Poté se rozpouštědlo odpaří a zbytek se chromatografuje na silikagelu za použití směsi methylenchloridu a methanolu (98 : 2) jako elučního činidla. Po překrystalování ze směsi ethylacetátu a n-hexanu se získá 148 mg (66 % teorie) (N-Boc-3-[p-(3-nitroguanidino)fenyl]-L-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)Val-OtBu o teplotě tání 141 až 143 °C.

d) Roztok 118 mg sloučeniny získané v předcházejícím stupni ve 3 ml octové kyseliny se hydrogenuje v přítomnosti 30 mg paladia na uhlí po dobu 3 dnů. Po odstranění rozpouštědla se filtrát chromatografuje na silikagelu za použití směsi ethylacetátu a methanolu v poměru 99 : 1 jako elučního činidla. Získá se 59 mg (54 % teorie) [N-Boc-3-(p-guanidinofenyl)-L-alanyl]-GlyAsp(OtBu)-Val-OtBu, MS: 706 (M+H)⁺.

Příklad 4

A) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 3A se kyselou hydrolýzou [N-Boc-3(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)isobutylamid-hydrojodidu získá [3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-isobutylamid-hydrochlorid (směs epimerů 1:1). Teplota tání 195 až 198 °C (rozklad) z dioxanu. Výtěžek: kvantitativní.

B) Výchozí látka se může vyrobit následujícím postupem:

a) Ke směsi 5,12 g Z-Asp(OtBu)-OH-hydrátu, 1,65 ml N-methylmorfolinu a 2 ml isobutylesteru chlormravenčí kyseliny v 15 ml tetrahydrofuranu připravené při teplotě -10 °C se přikape roztok 5,5 g isobutylaminu v 5 ml tetrahydrofuranu. Po 3 hodinách se rozpouštědlo odstraní, zbytek se vyjme směsí ethylacetátu a 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a organická fáze se promyje vodou do neutrální reakce. Po vysušení, odpaření rozpouštědla a chromatografii získaného oleje na silikagelu za použití ethylacetátu jako elučního činidla se získá 4,53 g (80 % teorie) Z-Asp(OtBu)isobutylamidu o teplotě tání 69 až 70 °C z n-hexanu.

b) Hydrogenolýzou produktu získaného v odstavci a) se získá H-Asp(OtBu)isobutylamid. Výtěžek: 97 % teorie. MS: 189,171.

c) Kopulací Z-Gly-OH s produktem z odstavce b) se získá Z-Gly-Asp(OtBu)isobutylamid. Výtěžek: 87 % teorie. MS: 436 (M+H)⁺.

-13CZ 282730 B6

d) Hydrogenolýzou produktu z předchozího stupně se získá H-Gíy-Asp(OtBu)isobutylamid. Výtěžek: 42 % teorie. MS: 302 (M+H)⁺.

e) Kopulací rac.N-Boc-3-(p-kyanfenyl)alaninu a H-Gly-Asp(OtBu)isobutylamidu se získá 5 [N-Boc-3-(p-kyanfenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)isobutylamid (směs epimerů 1:1) o teplotě tání 117 až 119 °C (ze směsi ethylacetátu a n-hexanu). Výtěžek: 27 % teorie.

f) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu odst. f), g) a h) se přes [N-Boc-3-(pthiokarboxamidofenyl -DL-alanyl]-GIy-Asp(OtBu)isobutylamid (směs epimerů 1 : 1), a přes [N- ío Boc-3-(p-methylthiokarboximidofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)isobutylamid-hydrojodid (směs epimerů 1:1), teplota tání 145 až 147 °C (rozklad); výtěžek: 72 % teorie;

získá [N-Boc-3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(C)tBu)isobutylamid-hydrojodid (směs epimerů 1 : 1), teplota tání 175 až 178 °C. Výtěžek: 60 % teorie.

Příklad 5

A) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu se za použití [N-Z-3-(p-amidinofenyl)20 DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-isobutylamidu jako výchozí látky získá (N-Z-3-(p-amidinofenyl)-

DL-alanyl]-Gly-Asp-isobutylamid-trifluoracetát (směs epimerů 1 : 1) o teplotě tání 141 až 143 °C (z etheru). Výtěžek 91 % teorie.

B) Výchozí látka se může připravit následujícím postupem:

a) Kopulací rac.N-Z-3-(p-kyanfenyl)alaninu a H-Gly-Asp(OtBu)isobutylamidu se získá [NZ-3-(p-kyanfenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)isobutylamid (směs epimerů 1:1) o teplotě tání 121 až 123 °C (ze směsi ethylacetátu a n-hexanu). Výtěžek: 91 % teorie.

b) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. f), g) a h) se přes [N-Z-3-(pthiokarboxamidofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)isobutylamid (směs epimerů 1:1) a přes [NZ-3-(p-methylthiokarboximidofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)isobutylamid-hydrojodid (směs epimerů 1:1) získá [N-Z-3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)isobutylamid-hydrojodid (směs epimerů 1 :

1) o teplotě tání 160 až 163 °C. Výtěžek 37 % teorie.

Příklad 6

K roztoku 400 mg H-Arg-Gly-Asp-Val-OH (srov. Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 82, 1985, 8057) a 143 mg pyridin-hydrobromidu v 15 ml dimethylformamidu se přidá 435 mg Z-Aeg(Z)-OSu. Pomocí N-methylmorfolinu se pH reakční směsi upraví na 8,5, směs se míchá přes noc a potom se odpaří. Zbytek se rozpustí v 0,2N roztoku kyseliny octové a roztok se chromatografuje na 45 polysacharidové pryskyřici (Sephadex G-10 za použití 0,2N roztoku kyseliny octové jako elučního činidla. Jednotné frakce se spojí a lyofilizují se. Vodný roztok lyofilizátu se potom chromatografuje na polystyrénové pryskyřici v acetátové formě (Dowex 44). Eluát se lyofílizuje. Získá se 143 mg Z-Aeg(Z)-Arg-Gly-Asp-Val-OH; MS: 814 (M+H)⁺.

Příklad 7

Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. b), se hydrogenuje roztok 120 mg ZAeg(Z)-Arg-Gly-Asp-Val-OH (příklad 6) ve 20 ml 0,lN roztoku kyseliny octové v přítomnosti

- 14CZ 282730 B6 paladia na uhlí. Katalyzátor se poté odfiltruje a filtrát se lyofilizuje. Získá se 72 mg Aeg-ArgGly-Asp-Val-OH-acetátu (1 : 1); MS: 546 (M+H)⁺.

Příklad 8

K roztoku 216 mg H-Arg-Gly-Asp-Ser-OH (srov. americký patentový spis č. 4 578 079) v 5 ml dimethylformamidu a 5 ml vody se přidá 242 mg Z-Aeg(Z)-OSu a 0,11 ml N-methylmorfolinu. Reakční směs se míchá 18 hodin a potom se upraví přidáním kyseliny octové na pH 5,3. Reakční io směs se extrahuje ethylacetátem. Vodná fáze se smísí s přídavkem paladia na uhlí jako katalyzátoru a hydrogenuje se po dobu 2 hodin. Poté se katalyzátor odfiltruje a filtrát se odfiltruje. Lyofilizát se rozpustí v 0,2N roztoku kyseliny octové a tento roztok se chromatografuje na polysacharidové pryskyřici (Sephadex G 25S) za použití 0,2N roztoku kyseliny octové jako elučního činidla. Spojené jednotné frakce se lyofilizují. Získá se 150 mg Aeg-Arg-Gly-Asp15 Ser-OH.acetátu (1:2). MS: 534 (M+H)⁺.

Příklad 9

K roztoku 237,5 mg H-Arg-Gly-Asp-Val-OH v 5 ml acetonu a 5 ml vody se postupně přidá 226 mg naftalen-2 -sulfonylchloridu a 168 mg hydrogenuhličitanu sodného. Po 2 hodinách míchání se směs okyselí kyselinou octovou a aceton se oddestiluje. Vodný zbytek se chromatografuje na pryskyřici Sephadex G-25S za použití 0,2N roztoku kyseliny octové jako elučního činidla. Spojené jednotné frakce se lyofilizují. Získá se 172 mg (2-naftylsulfonyl)-Arg-Gly-Asp-Val-OH;

MS: 636 (M+H)⁺.

Příklad 10

K suspenzi 3 g nosiče sestávajícího z styren-divinylbenzenové pryskyřice (1 % divinylbenzenu), která obsahuje zbytky p-benzyloxybenzylalkoholu, ve 30 ml dimethylformamidu se postupně přidá 0,6 g Fmoc-Nal(l)-OH (srov. evropská patentová přihláška 128762), 523 mg HBTU, 16,8 mg 4-dimethylaminopyridinu a 0,24 ml DIPEA. Reakční směs se protřepává 24 hodin, potom se pryskyřice odfiltruje a promyje se dimethylformamidem. Volné hydroxylové skupiny se acetylují 35 přidáním 1,13 ml acetanhydridu a 2,05 ml N-ethyldiisopropylaminu ve 30 ml dimethylformamidu po dobu 30 minut. Průběh syntézy je blíže popsán v další části:

stupeň	reakční činidlo	doba
1	dimethylformamid	2 x 1 min
2	směs 20 % piperidinu a dimethylformamidu	1x7 min
3	dimethylformamid	5 x 1 min
4	2,5 ekvivalentu Fmoc-aminokyselina/DMF + 2,5 ekvivalentu HBTU + 2,5 ekvivalentu N-ethyldiisopropylaminu	1 x 90 min
5	dimethylformamid	3x1 min
6	isopropylalkohol	2 x 1 min

V každém stupni se použije 30 ml rozpouštědla. Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, FmocArg(HCl)-OH se kopulují podle shora uvedeného předpisu. Boc-Aeg(Boc)-OSu se zavede do

- 15CZ 282730 B6 peptidového řetězce. Po ukončení syntézy se peptidová pryskyřice vysuší a rozdělí se na dvě části. Část se suspenduje ve směsi 10 ml trifluoroctové kyseliny a 5 ml methylenchloridu a 1 ml vody a směs se protřepává po dobu 90 minut. Poté se pryskyřice odfiltruje a filtrát se zahustí. Zbytek se lyofilisuje zH₂O. Lyofilizát se chromatografuje na piyskyřici Sephadex G-25S za použití 0,2N roztoku kyseliny octové jako elučního činidla. Spojené jednotné frakce se lyofilisují. Lyofilizát se chromatografuje na pryskyřici Dowex 44. Eluát se lyofilisuje. Získá se 49 mgN-Aeg-Arg-Gly-Asp-Nal(l)-OH.acetátu (1 : 1). MS: 644 (M+H)⁺.

Příklad 11

Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 10 se za použiti 1,05 g Fmoc-Ile-OH jako výchozí látky získá 73,5 mg Aeg-Arg-Gly-Asp-Ile-OH.TFA (1 : 1). MS: 560 (M+H)⁺.

Příklad 12

A) Roztok 230 mg Boc-Lys(Z)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl v 10 ml methanolu se hydrogenuje v přítomnosti paladia na uhlí. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahustí. Zbytek se rozpustí ve 2 ml vody, roztok se upraví přidáním 2N roztoku hydroxidu sodného na pH 9,5 a přidá se 109 mg methylacetimidát.HCl. Hodnota pH se znovu upraví na 9,5. Po 90 minutách míchání se reakční směs okyselí 1N roztokem chlorovodíkové kyseliny na pH 4 a roztok se chromatografuje na pryskyřici Sephadex G-25S za použití 0,2N roztoku octové kyseliny jako elučního činidla. Jednotné frakce se spojí a lyofilisují se. Získá se 72 mg [N²-Boc-N⁶-(1iminoethyl)-L-lysyl]-Gly-Asp-Val-OH. MS: 559 (M+H)⁺.

B) Výchozí látka se může připravit následujícím způsobem:

Roztok 583 mg H-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl (příklad 15B), odst. b)) a 477,5 mg Boc-Lys(Z)-Osu v 10 ml dimethylformamidu se upraví přidáním N-methylmorfolinu na pH 8,5. Po 18 hodinách míchání se reakční směs zahustí a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a vodu. Organická fáze se promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, dále roztokem směsi 5% hydrogensíranu draselného a 10% síranu draselného a nasyceným roztokem chloridu sodného, poté se vysuší a zflltruje se. Filtrát se zahustí a zbytek se nechá vykrystalovat z etheru. Získá se 385 mg Boc-Lys(Z)-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl, teplota tání 95 až 101 °C.

Příklad 13

A) 370 mg o-[Z-Arg(Z2)-Gly-Asp(OtBu)-NH]benzoové kyseliny se rozpustí v 50 ml methanolu a získaný roztok se hydrogenuje v přítomnosti paladia na uhlí. Po odfiltrování katalyzátoru se filtrát zahustí za sníženého tlaku, zbytek se rozpustí v 50 ml dimethylformamidu a k získanému roztoku se přidá 46 mg pyridinhydrochloridu a 0,07 ml DIPEA. Ve 100 ml dimethylformamidu se předloží 203 mg HOBTU a shora uvedený roztok se přikape pod atmosférou argonu. Po 20 hodinách míchání se přidá dalších 101,5 mg HOBTU a 0,035 ml DIPEA. Reakční směs se míchá 18 hodin a potom se zahustí. Zbytek se rozpustí ve směsi methanolu a vody a získaný roztok se chromatografuje na pryskyřici Dowex 44. Eluát se zahustí, zbytek se rozpustí ve 20 ml trifluoroctové kyseliny a roztok se po 30 minutách zahustí. Po chromatografování na chemicky modifikovaném silikagelu (Lichrosorb RP18) za použití směsi trifluoroctové kyseliny a ethanolu s obsahem 0,1 % trifluoroctové kyseliny jako elučního činidla se získá 102 mg trifluoracetátu N-[(o-azidobenzoyl)-Arg-Gly-Asp]anthranilové kyseliny (1 : 1). MS: 611 (M+H)⁺.

B) Kyselina, která se používá jako výchozí látka, se vyrobí následujícím způsobem:

- 16CZ 282730 B6

a) K roztoku 1,6 g Z-Asp(OtBu)-OH a 2 g tosylátu benzylesteru anthranilové kyseliny v 10 ml dimethylformamidu se přidá 1,92 g TOBTU a 1,78 ml DIPEA. Po 20 hodinách míchání se reakční směs rozdělí mezi ethylacetát a vodu. Organická fáze se promyje roztokem směsi 5% hydrogensíranu draselného a 10% síranu draselného, vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se síranem sodným. Vysoušedlo se odfiltruje a filtrát se zahustí. Po kiystalizaci z ethanolu se získá 0,75 g N-[ZAsp(OtBu))]anthranilové kyseliny o teplotě tání 123 až 124 °C.

b) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu Ί se hydrogenací produktu z odstavce

a) získá 401 mg N-[H-Asp-(OtBu))]anthranilové kyseliny.

c) K suspenzi 401 mg produktu z odstavce b) v 10 ml dimethylformamidu se přidá 612 mg Z-Gly-Osu. Přidáním N-methylmorfolinu se upraví reakční směs na pH 8,5 a míchá se po dobu 4 hodin. Kreakčnímu roztoku se poté přidá 0,52 ml diethylaminoethylaminu, reakční směs se míchá 10 minut a potom se rozdělí mezi ethylacetát a roztok směsi 5% hydrogensíranu draselného a 10% síranu draselného. Organická fáze se poté promyje nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší se. Po filtraci se filtrát zahustí. Zbytek se rozpustí v methanolu a získaný roztok se hydrogenuje v přítomnosti paladia na uhlí jako katalyzátoru. Katalyzátor se odfiltruje a filtrát se zahustí. Zbytek se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu, k získanému roztoku se přidá 673 mg Z-Arg(Z2)-OSu a přidáním N-methylmorfolinu se hodnota pH upraví na 8,5. Po 18 hodinách míchání se produkt vysráží vlitím do roztoku směsi 5% hydrogensíranu draselného a 10% síranu draselného. Chromatografováním na silikagelu za použití směsi methylenchloridu a methanolu jako elučního činidla a po překrystalování z ethanolu se získá 410 mg o-[Z-Arg(Z₂)-Gly-Asp(OtBu)-NH]benzoové kyseliny o teplotě tání 102 až 103 °C.

Příklad 14

A) k roztoku 109 mg Boc-Arg-Gly-Asp-Val-OH ve 3 ml 0,2M natriumborátového pufřu (pH 9) se přidá 55,5 mg 1,2-cyklohexandionu a poté se směs míchá 24 hodin pod atmosférou argonu. Reakční roztok se okyselí octovou kyselinou na pH 4 a chromatografuje se na pryskyřici Sephadex G-25S za použití 0,2N roztoku kyseliny octové jako elučního činidla. Jednotné frakce se spojí a lyofilizují se. Získá se 46 mg [N²-Boc-N⁵-(3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3a,7a-dihydroxylH-benzimidazol-2-yl)-L-omithyI]-Gly-Asp-Val-OH, MS: 658 (M+H)⁺.

b) Za účelem výroby kyseliny, která se používá jako výchozí látka, se k roztoku 1 g H-ArgGly-Asp-Val-OH a 340 mg pyridinhydrobromidu v 15 ml dioxanu a 15 ml vody postupně přidá 480 mg di-terc.butyldikarbonátu a 0,59 g hydrogenuhličitanu sodného. Po 18 hodinách míchání se reakční směs zahustí. Zbytek se čistí chromatografováním na porézní pryskyřici na bázi kopolymeru styrenu a divinylbenzenu (MCI-gel CHP2OP) za použití směsi vody a ethanolu jako elučního činidla. Spojené jednotné frakce se zahustí a lyofilisují se z vody. Získá se 260 mg BocArg-Gly-Asp-Val-OH. MS: 546 (M+H)⁺.

Příklad 15

A) K roztoku 275,5 mg N-Boc-3-(p-aminofenyl)-DL-alanyl-Gly-Asp-Val-OH ve 3 ml vody se postupně přidá 138 mg uhličitanu draselného a 124 mg aminoiminomethansulfonové kyseliny. Po 18 hodinách míchání se reakční směs okyselí ledovou kyselinou octovou a chromatografuje se na pryskyřici Sephadex G-25S za použití 0,2N roztoku kyseliny octové jako elučního činidla. Jednotné frakce se spojí a lyofilisují se. Získá se 205 mg [N-Boc-3-(p-guanidinofenyl)-DLalanyl]-Gly-Asp-Val-OH ve formě draselné soli (1 : 1). MS: 632 (M+H)⁺.

B) Výchozí látka se může připravit následujícím způsobem:

- 17CZ 282730 B6

a) K roztoku 32,3 g Boc-Asp(OBzl)-OH ve 150 ml dimethylformamidu, ochlazenému na teplotu -20 °C, se přidá 11 ml N-methylmorfolinu a 13,07 ml isobutylesteru chlormravenčí kyseliny. Získaná suspenze se míchá při teplotě -15 °C a přidá se kní na teplotu -20 °C ochlazená suspenze 37,95 g H-Val-OBzl.tosylátu a 11 ml N-methylmorfolinu ve 150 ml dimethylformamidu. Reakční směs se míchá 10 minut při teplotě -10 °C a 2 hodiny při teplotě místnosti, potom se zfiltruje a filtrát se zahustí. Zbytek se rozpustí v ethylacetátu aethylacetátový roztok se promyje roztokem směsi 5% hydrogensulfátu draselného a 10% síranu draselného, vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného a poté se vysuší. Organická fáze se zahustí. Získá se 52,9 g BocAsp(OBzl)-Val-OBzl. 10,24 g tohoto produktu se rozpustí ve 30 ml trifluoroctové kyseliny a potom se roztok zahustí. Zbytek se nechá vykrystalovat ze směsi ethylacetátu a hexanu. Získá se 8,3 g H-Asp(OBzl)-Val-OBzl.trifluoracetátu o teplotě tání 147 až 148 °C.

b) K roztoku 4,2 g H-Asp(OBzl)-Val-OBzl-trifluoracetátu v 50 ml ethylacetátu se postupně přidá 2,72 g Boc-Gly-OSu a 0,88 ml N-methylmorfolinu a potom se směs míchá 72 hodin při teplotě 20 °C. Reakční směs se potom rozdělí mezi ethylacetát a vodu a organická fáze se promyje roztokem směsi 5% hydrogensíranu draselného a 10% síranu draselného, vodou, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po vysušení se roztok zahustí. Zbytek se rozpustí ve 30 ml trifluoroctové kyseliny, získaný roztok se udržuje 20 minut při teplotě 20 °C a potom se zahustí. Po překrystalování ze směsi ethylacetátu a hexanu se získá 3,5 g H-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl-trifluoracetátu (1:1) o teplotě tání 150 až 151 °C.

c) K roztoku 1,08 g rac.N-Boc-3-(4-nitrofenyl)alaninu a 2,04 g H-Gly-Asp(OBzl)-ValOBzl-trifluoracetátu v 15 ml dimethylformamidu se postupně přidá 1,4 g 2-(lH-benzotriazol-lyl)-l,l,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfátu (HBTU) a 1,23 ml N-ethyldiisopropylaminu. Po 3 hodinách míchání se reakční směs rozdělí mezi ethylacetát a vodu. Reakční směs se zpracuje stejným způsobem jako je popsán v odstavci b) a po krystalizaci ze směsi ethylacetátu a hexanu se získá 1,8 g N-Boc-3-(4-nitrofenyl)-DL-alanyl-Gly -Asp(OBzl)-Val-OBzl o teplotě tání 155 až 157 °C.

d) Roztok 1,5 g N-Boc-3-(4-nitrofenyl)-DL-alanyl-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl v 50 ml 90 % kyseliny octové se hydrogenuje v přítomnosti 10% paladia na uhlí jako katalyzátoru. Filtrát se po odfiltrování katalyzátoru lyofilizuje z vody. Získá se 910 mgN-Boc-3-(4-aminofenyl)-DL-alanyIGly-Asp-Val-OH. Hmotové spektrum (MS): 552 (M+H)⁺.

Příklad 16

A) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1A) se acidolýzou [N-Boc-3-(pamidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Nal( 1 )-OH získá [3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-GlyAsp-Nal(l)-OH-trifluoracetát (1:2) (směs epimerů 1:1). Teplota tání 170 °C (rozklad) (ze směsi ethanolu a ethylacetátu).

B) Výchozí látka se připraví následujícím způsobem:

a) Analogickým způsobem jako je popsán v příkladu 1B) odst. a) se kopulací Z-Gly-OH a H-Asp(OtBu)-OMe získá Z-Gly-Asp(OtBu)-OMe o teplotě tání 92 až 95 °C (z hexanu). Výtěžek 89 % teorie.

b) K. roztoku 27,0 g produktu z předcházejícího stupně ve 200 ml acetonu se za chlazení přikape 70 ml 1N roztoku hydroxidu sodného a vmíchání se pokračuje po dobu 2 hodin. Přidáním 10% vodného roztoku citrónové kyseliny se hodnota pH upraví na 4 a rozpouštědlo se odpaří, přičemž se vyloučí surový produkt. Po překrystalování ze směsi etheru a hexanu se získá

- 18CZ 282730 B6

19,04 g Z-Gly-Asp(OtBu)-OH o teplotě tání 101 až 104 °C. Výtěžek 70 % teorie.

c) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. a), se kopulací produktu z předcházejícího stupně s H-Nal(I)-OMe získá Z-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-OMe o teplotě tání 59 °C (z hexanu). Výtěžek 34 % teorie.

d) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. b), se hydrogenolýzou produktu z předcházejícího stupně získá H-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-OMe o teplotě tání 67 až 68 °C (z hexanu). Výtěžek 72 % teorie.

e) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. e), se kopulací N-Boc-3-(pkyanfenyl)-DL-alaninu s produktem z předcházejícího stupně získá [N-Boc-3-(p-kyanfenyl)-DLalanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-OMe (epimer). Výtěžek: kvantitativní. Hmotové spektrum (MS): 730 (M+H)⁺.

f) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B) odst. f), se thionací produktu z předchozího stupně získá (N-Boc-3-[p-(thiokarbamoyl)fenyl]-DL-alanyl]-Gly-Asp(tBu)-Nal(l)Ome (epimer) o teplotě tání 110ažll2°C. Výtěžek: 75 % teorie.

g) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B) odst. g), se methylací produktu z předchozího stupně získá [N-Boc-3-[p-(methylthio)formimidoyl]fenyl]-DL-alanyl]-GlyAsp(OtBu)-Nal(l)-OMe-hydrojodid (epimery) o teplotě tání 128 až 130 °C (z etheru). Výtěžek: 64 % teorie.

h) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. h), se reakcí produktu z předchozího stupně s NH₄OAc získá [N-Boc-3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)Nal(l)-OMe-hydrojodid (epimery) o teplotě tání 139 až 141 °C (z etheru). Výtěžek: 70 % teorie.

i) Způsobem popsaným v odst. b) se z produktu z předchozího stupně získá [N-Boc-330 (p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-OH (epimery). Teplota tání 206 °C (z ethylacetátu). Výtěžek 97 % teorie.

Příklad 17

K roztoku 70 mg [3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH-trifluoracetátu (1 : 2) (směs epimerů 1:1) (příklad 2) v 0,6 ml dimethylformamidu se při teplotě místnosti pod atmosférou argonu přidá 30 mg triethylaminu a 24 mg di-terc.butyldikarbonátu a směs se míchá po dobu 75 minut. Po přidání kyseliny octové až k pH 4 se reakční směs odpaří k suchu a zbytek se přivede 40 ke krystalizaci přidáním ethylacetátu. Po překrystalování ze směsi methanolu a ethylacetátu se získá [N-Boc-3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH (epimery, 1:1). Výtěžek: 63 % teorie.

Příklad 18

A) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1A se za použití [N-Boc-3-(pamidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)-p-fluorfenethylamid-hydrojodidu (epimery, 1 : l)jako výchozí látky získá 3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl-Gly-Asp-p-fluorfenethylamid-trifluoracetát (5 : 8) (epimery) o teplotě tání 192 až 195 °C (ze směsi ethanolu a ethylacetátu). Výtěžek: 61 % teorie.

B) Ester, který se používá jako výchozí látka, se vyrobí následujícím postupem:

- 19CZ 282730 B6

a) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. e) se kopulací Z-GlyAsp(OtBu)-OH (srov. příklad 16B), odst. b)) a 4-fluorfenethylaminu s 2-(lH-benzotriazol-l-yl>1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfátem (HBTU) získá Z-Gly-Asp(OtBu)-p-fluorfenethylamid. MS: 502 (M+H)⁺.

b) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. b) se katalytickou hydrogenolýzou produktu z předchozího stupně získá H-Gly-Asp(OtBu)-p fluorfenethylamid. MS: 368 (M+H)⁺.

c) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. e) se kopulací rac.N-Boc-3(p-kyanfenyl)alaninu s produktem z předcházejícího stupně získá [N-Boc-3-(p-kyanfenyl)-DLalanyl]-Gly-Asp(OtBu)-p-fluorfenethylamid(epimery, 1:1). MS: 662 (M+Na⁺).

d) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. g) se reakcí produktu z předchozího stupně s methyljodidem získá [N-Boc-3-[p-(methylthioformimidoyl)fenyl]-DLalanyl]-Gly-Asp(OtBu)-p-fluorfenethylamid-hydrojodid (epimery, 1 : 1). Teplota tání 134 až 136 °C (rozklad) (z etheru).

f) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. h) se reakcí produktu z předchozího stupně s octanem amonným získá [N-Boc-3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-GlyAsp(OtBu)-p-fluorfenethylamid-hydrojodid (epimery, 1 : 1) o teplotě tání 90 až 92 °C (rozklad) z etheru.

Příklad 19

A) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu IA) se za použití (pamidinohydrocinnamoyl)-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-OH jako výchozí látky získá (pamidinohydrocinnamoyl)-Gly-Asp-Nal(l)-OH-trifluoracetát (1 : 1), teplota tání 196 až 199 °C (ze směsi ethanolu a etheru). Výtěžek: 48 % teorie.

B) Ester, který se používá jako výchozí látka, se vyrobí následujícím postupem:

a) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. e) se kopulací 3-(pkyanfenyl)propionové kyseliny a H-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-OMe (srov. příklad 16B), odst. d)) získá (p-kyanhydrocinnamoyl)-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-OMe, teplota tání 112 až 113 °C (ze směsi methylenchloridu a hexanu).

b) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. f), g) a h) se reakcí produktu z předchozího stupně postupně se sirovodíkem, methyljodidem a octanem amonným získá (pamidinohydrocinnamoyl)-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-OMe-hydrojodid, teplota tání 140 až 142 °C (z etheru).

c) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 16B), odst. b) se alkalickým zmýdelněním produktu z předchozího stupně získá (p-amidinohydrocinnamoyl)-Gly-Asp(OtBu)Nal(l)-OH, teplota tání 236 až 237 °C (z vody).

Příklad 20

Analogickým postupem jako je popsán v příkladu IA) se při použití [N-Boc-3-(p-amidinofenyl)D-alanyl]-Gly-Asp(OtBu-Val-OtBu-hydrojodidu jako výchozí látky získá [3-(p-amidinofenyl)-Dalanyl]-Gly-Asp-Val-OH-trifluoracetát (1 : 2) o teplotě tání 128 °C (rozklad) (z etheru). Výtěžek: kvantitativní.

-20CZ 282730 B6

Příklad 21

A) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 16B), odst. b) se zmýdelněním hydrojodidu methylesteru [N-[[N-Boc-3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)]-paminojbenzoové kyseliny (epimery, 1:1) získá [N-[[N-Boc-3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-GlyAsp]-p-amino]benzoová kyselina (epimeiy, 1:1) o teplotě tání 205 až 206 °C (z methanolu). Výtěžek: 48 %.

B) Výchozí látka se připravuje následujícím způsobem:

a) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. a) se kopulací Z-GlyAsp(OtBu>OH a benzylesteru p-aminobenzoové kyseliny získá benzylester [N-[Z-GlyAsp(OtBu)]-p-amino]benzoové kyseliny. Výtěžek: 32 % teorie. MS: 590 (M+H)⁺.

b) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. b) se hydrogenolýzou produktu z předchozího stupně získá [N-[Gly-Asp(OtBu)]-p-amino]benzoová kyselina o teplotě tání 160 °C (rozklad) ze směsi methanolu a ethylacetátu.

c) Z produktu z předchozího stupně se methylací diazomethanem získá methylester [N[Gly-Asp(OtBu)]-p-amino]benzoové kyseliny o teplotě tání 78 až 82 °C (z hexanu). Výtěžek: 77 % teorie.

d) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. e) se kopulací rac.N-Boc-3(4-kyanfenyl)alaninu a produktu z předchozího stupně získá methylester [N-[[N-Boc-3-(p-kyan fenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)]-p-amino]benzoové kyseliny (směs epimerů 1:1) o teplotě tání 108 °C (ze směsi ethylacetátu a hexanu). Výtěžek: 51 % teorie.

e) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. f) a g) se z produktu z předchozího stupně thionací a methylací získá hydrojodid methylesteru [N-[[N-Boc-3-[p(methylthioformimidoyl)fenyl]-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)]-p-amino]benzoové kyseliny (epimery, 1 : 1) o teplotě tání 150 až 151 °C (z etheru). Výtěžek: 77 % teorie.

f) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. h) se z produktu z předchozího stupně amonolýzou získá hydrojodid methylesteru [N-[[N-Boc-3-(pamidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp(OtBu)]-p-amino]benzoové kyseliny (epimery, 1:1), teplota tání 179 až 181 °C (rozklad) (z etheru). Výtěžek: 79 % teorie.

Příklad 22

Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1A) se hydrolýzou produktu z příkladu 21 získá [N-[[3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp]-p-amino]benzoová kyselina (epimer, 1:1) o teplotě tání 214 až 216 °C (z methanolu). Výtěžek: 78 % teorie.

Příklad 23

A) Roztok 180 mg (p-kyanhydrocinnamoyl)-Gly-Asp-Val-OH ve směsi 10 ml methanolu a koncentrovaného vodného roztoku amoniaku (2 : 1) se hydrogenuje v přítomnosti 180 mg Raney-niklu. Po 20 hodinách se katalyzátor odfiltruje a filtrát se odpaří k suchu. Zbytek se čistí na iontoměničové piyskyrici vFT-cyklu a poté se přidáním hexanu uvede ke krystalizaci. Získá se (p-aminomethylhydrocinnamoyl)-Gly-Asp-Val-OH o teplotě tání 175 °C (rozklad). Výtěžek: 25 % teorie.

-21 CZ 282730 B6

B) Nitril o teplotě tání 132 až 134 °C (ze směsi ethylacetátu a hexanu), který se používá jako výchozí látka, se vyrobí analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1 A) (výtěžek 69 %) acidolýzou (p-kyanhydrocinnamoyl)-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu (příklad 24 B), odst. a)).

Příklad 24

A) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 19A) se z (p-amidinohydrocinnamoyl)-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu-hydrojodidu získá (p-amidinohydrocinnamoyl)-Gly-AspVal-OH-trifluoracetát(l : 1,1). Teplota tání 141 až 143 °C (z etheru). Výtěžek: kvantitativní.

B) Ester, který se používá jako výchozí látka, se vyrobí následujícím způsobem:

a) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. E) se kopulací pkyanhydroskořicové kyseliny s H-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu (srov. příklad 2B), odst. d)) získá (p-kyanhydrocinnamoyl)-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu o teplotě tání 132 až 134 °C (ze směsi ethylacetátu a hexanu). Výtěžek: 87 % teorie.

b) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. f) se thionací produktu z předchozího stupně získá p-(thiokarbamoyl)hydrocinnamoyl-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu o teplotě tání 70 až 73 °C (z hexanu). Výtěžek: 72 % teorie.

c) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. g) se methylací produktu z předchozího stupně získá p-[(methylthio)formimidoyl]hydrocinnamoyl-Gly-Asp(OtBu)-ValOtBu-hydrojodid, teplota táni 55 až 60 °C (z ether/hexan). Výtěžek: 94 % teorie.

d) Analogickým postupem, jako je popsán v příkladu 1B) odst. h) se amonolýzou produktu z předchozího stupně získá (p-amidinohydrocinnamoyl)-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu-hydrojodid o teplotě tání 116 až 120 °C (z hexanu). Výtěžek: 90 % teorie.

Příklad 25

Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1A) se z [N-Boc-3-(p-amidinofenyl)-L-alanyl]Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu-hydrojodidu získá [3-(p-amidinofenyl)-L-alanyl]-Gly-Asp-Val-OHtrifluoracetát (2 : 3) o teplotě tání 164 až 166 °C (ze směsi ethanolu a ethylacetátu). Výtěžek: 75 % teorie.

Příklad 26

A) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1A) se acidolýzou [(p-amidinofenoxy)acetyl]-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu-hydrojodidu působením trifluoroctové kyseliny získá (p-amidinofenoxy)acetyl-Gly-Asp-Val-OH-trifluoracetát o teplotě tání 140 °C (ze směsi ethylacetátu a hexanu). Výtěžek: 67 % teorie.

B) Výchozí ester se může připravit následujícím způsobem:

a) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. e) se kopulací p-kyanfenoxyoctové kyseliny a H-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu získá [p-(kyanfenoxy)acetyl]-GlyAsp(OtBu)-Val-OtBu o teplotě tání 55 °C (ze směsi ethylacetátu a hexanu). Výtěžek: 81 % teorie.

b) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. f) se reakcí produktu z předchozího stupně se sirovodíkem získá [p-(thiokarbamoyl)fenoxyacetyl]-Gly-Asp(OtBu)-22CZ 282730 B6

Val-OtBu. Výtěžek: 80 % teorie. MS: 595 (M+H)⁺.

c) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. g) se reakcí produktu z předchozího stupně s methyljodidem získá p-[(methylthio)formimidoyl]fenoxyacetyl-GlyAsp(OtBu)-Val-OtBu-hydrojodid. Výtěžek: 83 % teorie. MS: 609 (M+H)⁺.

d) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. h) se reakcí produktu z předchozího stupně s octanem amonným získá [(p-amidinofenoxy)acetyl]-Gly-Asp(OtBu)-ValOtBu-hydrojodid o teplotě 102 až 106 °C (ze směsi ethylacetátu a hexanu). Výtěžek: 83 % teorie.

Příklad 27

A) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1A) se za použití (p-amidinofenyl)acetyl-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu-hydrojodidu získá (p-amidinofenyl)acetyl-Gly-Asp-ValOH-trifluoracetát (5 : 4) o teplotě tání 175 až 178 °C (ze směsi acetonitrilu amethanolu). Výtěžek: 53 % teorie.

B) Výchozí ester se připraví následujícím postupem:

a) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. e) se kopulací p-kyanfenyloctové kyseliny (J. Chem. Soc. 1941, 744) a H-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu (příklad 2B), odst. d)) získá (p-kyanfenyl)acetyl-GIy-Asp(OtBu)-Val-OtBu o teplotě tání 111 °C (ze směsi ethylacetátu a hexanu).

b) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. f), g) a h) je reakcí produktu z předchozího stupně se sirovodíkem, methyljodidem a octanem amonným získá (p-amidinofenyl)acetyl-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu. MS: 562 (M+H)⁺.

Příklad 28

A) 216 mg benzylesteru N-[N-[N-(benzyloxykarbonyl)-3-[p-[N-(benzyloxykarbonyl)amidino]fenyl]-DL-alanyl]glycyl]-p-alaninu a 72 mg 5% paladia na uhlí se míchá v 4,3 ml směsi ethanolu a octové kyseliny (19 : 1) 28 hodin pod atmosférou vodíku. Získaný produkt se chromatografuje na silikagelu za použití směsi methanolu a octové kyseliny v poměru 9:1. Čisté frakce se odpaří, odparek se rozpustí ve zředěné kyselině chlorovodíkové, získaný roztok se zfiltruje, filtrát se zneutralizuje zředěným amoniakem, poté se znovu zfiltruje a filtrát se odpaří. Zbytek po odpaření se vyjme methanolem, methanolický roztok se zfiltruje a k filtrátu se přidá ether. Sraženina se odstředí, promyje se etherem a vysuší se. Získá se 28 mg N-[N-[3-(pamidinofenyl)-DL-alanyl]glycyl]-p-alanin-dihydrochloridu. MS: 336 (27, M+H).

B) Za účelem výroby výchozího esteru se kopuluje N-(benzyloxykarbonyl)-3-(p-kyanfenyl)DL-alanin a trifluoracetát benzylesteru N-glycyl-|3-alaninu za vzniku benzylesteru N-[N-[N(benzyloxykarbonyl)-3-(p-kyanfenyl)-DL-alanyl]glycyl]-(3-alaninu o teplotě tání 134 až 135 °C. Z této látky se působením sirovodíku a triethylaminu v pyridinu získá benzylester N-[N-[N(benzyloxykarbonyl)-3-[p-(thiokarbamoyl)fenyl]-DL-alanyl]-glycyl]-P-alaninu o teplotě tání 150 až 151 °C. Reakcí s methyljodidem v acetonu, následující reakcí s octanem amonným v methanolu a působením benzylesteru chlormravenčí kyseliny a triethylaminu v tetrahydrofuranu se získá benzylester N-[N-[N-(benzyloxykarbonyl)-3-[p-[N-(benzyIoxykarbonyl)amidino]fenyl]-DL-alanyl]glycyl]-p-alaninu. MS: 694 (100, M+H).

-23CZ 282730 B6

Příklad 29

Ze 178 mg hydrojodidu terc.butylesteru N-[N-[N-[(p-amidinofenoxy)acetyl]glycyl]-3-terc. butoxy-L-alanyl]-3-fenyl-L-alaninu se získá reakcí s trifluoroctovou kyselinou vmethylen5 chloridu způsobem popsaným v příkladu 1 91 mg trifluoracetátu N-[N-[(p-amidinofenoxy)acetyl]glycyl]-L-a-aspartyl]-3-fenyl-L-alaninu o teplotě tání 175 až 179 °C.

Výchozí látka se může vyrobit následujícím postupem:

ío a) Kopulací 7,0 g Z-Asp(OtBu)-O-Su s4,72 g Phe-O-tBu.HCl způsobem popsaným v příkladu 1B), odst. a) se po zpracování, chromatografování na silikagelu (za použití ethylacetátu jako elučního činidla) a překrystalováním izoluje 7,1 g terc.butylesteru N-[N[(benzyloxy)karbonyl]-3-(terc.butoxykarbonyl)-L-alanyl]-3-fenyl-L-alaninu o teplotě tání 94 až 95 °C.

b) Po katalytické hydrogenaci produktu z předchozího stupně (10,3 g) vethanolu v přítomnosti 10% paladia na uhlí při teplotě místnosti a atmosférickém tlaku se po chromatografování na silikagelu za použití ethylacetátu jako elučního činidla získá 5,94 g H-Asp(OtBu)Phe-O-tBu, [a]_D = +9,16 ° (c = 0,6, methanol).

c) Stejným způsobem jako je popsán v příkladu 1B), odst. a) se reakcí 4 g H-Asp(OtBu)Phe-O-tBu a 3,43 g Z-Gly-OSu po chromatografování na silikagelu za použití ethylacetátu jako elučního činidla získá 3,9 g terc.butylesteru N-[N-[N-[(benzyloxy)karbonyl]glycyl]-3-(terc. butoxykarbonyl)-L-a-aspartyl]-3-fenyl-L-alaninu.

d) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1 se hydrogenolýzou 2,19 g produktu z předchozího stupně po chromatografování (za použití směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 9 : 1 jako elučního činidla) a překrystalování získá 909 mg terc.butylesteru N-[Nglycyl-3-(terc.butoxykarbonyl)-L-a-aspartyl]-3-fenyl-L-alaninu o teplotě tání 99 až 100 °C.

e) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. e) se kopulací 675 mg produktu z předchozího stupně s 266 mg p-kyanfenoxyoctové kyseliny po chromatografování na silikagelu (za použití ethylacetátu jako elučního činidla) a po překrystalování získá 687 mg terc.butylesteru N-[2-terc.butoxykarbonyl)-N-[N-[(p-kyanfenoxy)acetyl]glycyl]-L-alanyl]-3- fenyl-L-alaninu o teplotě tání 83 až 85 °C (ze směsi ethylacetátu a hexanu).

f) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. f) se po reakci 650 mg produktu z předchozího stupně se sirovodíkem, po chromatografování (za použití ethylacetátu jako elučního činidla) a po krystalizaci izoluje 405 mg terc.butylesteru N-[2-(terc.butoxy- karbonyl)-N-[N-[[(p-thiokarbamoyl)fenoxy]acetyl]glycyl]-L-alanyl]-3-fenyl-L-alaninu o teplotě tání 83 až 86 °C (z hexanu).

g) Z 390 mg produktu z předchozího stupně se methylací postupem podle příkladu 1B), odst. g) získá 375 mg hydrojodidu terc.butylesteru N-[3-(terc.butoxykarbonyl)-N-[N-[[[p-(l- (methylthio)formimidoyl]fenoxy]acetyl]glycyl]-L-alanyl]-3-fenyl-L-alaninu o teplotě tání 162 °C (ze směsi ethylacetátu a methanolu).

h) Reakce 358 mg produktu z předchozího stupně s octanem amonným analogicky jako v příkladu 1B), odst. h) skýtá 267 mg hydrojodidu terc.butylesteru N-[N-[N-[(p-amidino- fenoxy)acetyl]glycyl]-3-terc.butoxy-L-alanyl]-3-fenyl-L-alaninu. Teplota rozkladu 76 °C (ze směsi ethylacetátu a hexanu).

-24CZ 282730 B6

Příklad 30

Reakce 140 mg hydrojodidu terc.butylesteru N-[N-[N-[[2-(p-amidinofenyl)-l,3-dioxolan-2yl]acetyl]glycyl]-3-(terc.butoxykarbonyl)-L-alanyl]-3-fenyl-L-alaninu s trifluoroctovou kyselinou v methylenchloridu skýtá 158 mg trifluoracetátu N-[N-[N-[[2-(p-amidinofenyl)-l,3-dioxolan-2yl]acetyl]glycyl]-L-a-aspartyl]-3-fenyl-L-alaninu (1 : 1). Část tohoto produktu se čistí chromatografováním (RP-18; eluce s vodou a potom směsí vody a acetonitrilu v poměru 2 : 1) a překrystalováním, přičemž se získá produkt o teplotě tání 242 až 245 °C.

Výchozí látka se může připravit následujícím postupem:

a) Směs 8 g ethylesteru 4-kyanbenzoyloctové kyseliny, 80 ml ethylenglykolu, 0,3 g ptoluensulfonové kyseliny a 250 ml toluenu se vaří za použití odlučovače vody. Po ukončení reakce se rozpouštědlo odstraní a zbytek se rozdělí mezi směs methylenchloridu a 0,lN roztoku hydroxidu sodného. Organické extrakty se vysuší, zfiltrují se a zahustí se. Po chromatografování (silikagel; směs hexanu a ethylacetátu 1 : 1) se získá 4,4 g bezbarvého oleje, který se rozpustí ve 30 ml ethanolu. K tomuto roztoku se přikape za chlazení na ledové lázni 15 ml IN roztoku hydroxidu sodného a poté se směs ponechá 6 hodin v klidu při teplotě místnosti. Po odstranění ethanolu se vodná fáze extrahuje ethylacetátem a poté se zneutralizuje IN roztokem chlorovodíkové kyseliny. Vyloučené krystaly se odfiltrují, promyjí se vodou a vysuší se. Získá se 2,3 g ethylenketalu 4-kyanbenzoyloctové kyseliny o teplotě tání 151 až 152 °C.

b) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), e) se kopulací 256 mg ethylenketalu 4-kyanbenzoyloctové kyseliny a 449 mg H-Gly-Asp(OtBu)-Phe-OtBu (příklad 29g) po chromatografování a překrystalování získá 390 mg terc.butylesteru N-[3-(terc.butoxykarbonyl)N-[N-[[2-(p-kyanfenyl)-l,3-dioxolan-2-yl]acetyl]glycyl]-L-alanyl]-3-fenyl-L-alaninu o teplotě tání 81 až 82 °C (z hexanu).

c) Produkt z předchozího stupně (360 mg) se nechá reagovat stejným způsobem jako je popsán v příkladu 1B), odst. f) se sirovodíkem za vzniku 323 mg terc.butylesteru N-[3(terc.butoxykarbonyl)-N-[N-[[2-[p-(thiokarbamoyl)fenyl]-l,3-dioxolan-2-yl]acetyl]glycyl]-Lalanyl]-3-fenyl-L-alaninu o teplotě tání 96 až 98 °C (z hexanu).

d) Methylací 280 mg produktu z předchozího stupně stejným způsobem jako je popsán v příkladu 1B), odst. g) se získá 324 mg hydrojodidu terc.butylesteru N-[3-(terc.butoxykarbonyl)-N-[N-[[2-[p-[l-(methylthio)formimidoyl]fenyl]-l,3-dioxolan-2-yl]acetyl]glycyl]-Lalanyl]-3-fenyl-L-alaninu (1 : 1) o teplotě tání 110 až 112 °C (ze směsi acetonu a diethyletheru).

e) Amonolýzou 250 mg produktu z předchozího stupně analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. h) se získá 200 mg hydrojodidu terc.butylesteru N-[N-[N-[[2-(pamidinofenyl)-l,3-dioxolan-2-yllacetyllglycyll-3-(terc.butoxykarbonyl)-L-alanyl]-3-fenyl-Lalaninu (1 : 1) o teplotě tání 129 až 130 °C.

Příklad 31

Roztok 100 mg trifluoracetátu N-[N-[N-[[2-(p-amidinofenyl)-l,3-dioxolan-2-yl]acetyl]glycyl]-La-aspartyl]-3-fenyl-L-alaninu v 10 ml směsi trifluoroctové kyseliny a vody v poměru 9 : 1 se nechá v klidu přes noc při teplotě místnosti. Po odstranění rozpouštědla, chromatografování zbytku (RP-18; eluce vodou a směsí vody a acetonitrilu 1 : 1) a překrystalování se získá 33 mg trifluoracetátu N-[N-[N-[(p-amidinobenzoyl)acetyl]glycyl]-L-aspartyl]-3-fenyl-L-alaninu (1:1) o teplotě tání 225 až 230 °C (rozklad).

-25CZ 282730 B6

Příklad 32

Z 50 mg terc.butylesteru N-[N-[N-[3-(l-amidino-4-piperidinyl)propionyl]glycyl]-3-terc.butoxykarbonyl)-L-alanyl]-3-fenyl-L-alaninu se analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1A) získá po překrystalování 32 mg trifluoracetátu N-[N-[N-[3-(l-amidino-4-piperidinyl)propionylJglycyl]-L-a-aspartyl]-3-fenyl-L-alaninu (1 : 1) o teplotě tání 146 až 148 °C (z etheru; rozklad). Výchozí látka se může vyrobit následujícím postupem:

a) K roztoku 553 mg sulfátu S-methylisothiomočoviny v 3,2 ml 2N roztoku hydroxidu sodného se přidá při teplotě 2 °C 500 mg 4-piperidinpropionové kyseliny. Reakční směs se ponechá stát přes noc při teplotě místnosti, načež se vyloučené krystaly odfiltrují, promyjí se vodou, acetonem a etherem a vysuší se. Získá se 600 mg l-amidino-4-piperidinpropionové kyseliny o teplotě tání nad 275 °C.

b) Analogickým postupem jak je popsáno v příkladu 1B), odst. e) se kopulací 1,6 g 1amidino-4-piperidinpropionové kyseliny s 1,8 g H-Gly-Asp(OtBu)-Phe-OtBu v přítomnosti 928 mg pyridiniumhydrochloridu získá 2,1 g terc.butylesteru N-[N-[N-[3-(l-amidino-4-piperidinyl)propionyl]glycyl]-3-terc.butoxykarbonyl)-L-alanyl]-3-fenyl-L-alaninu o teplotě tání 104 až 106 °C (z diisopropyletheru; rozklad).

Příklad 33

Analogickým postupem jako v příkladu 1A) se z 17 mg l-[[N-[N-(p-amidinohydroc innamoyl)glycyl]-3-(terc.butoxykarbonyl)-L-alanyl]amino]cyklopentankarboxylové kyseliny po krystalizaci získá 15 mg trifluoracetátu l-[[N-(N-(p-amidinohydrocinnamglycyl]-L-a-aspartyl]aminojcyklopentankarboxylové kyseliny (1 : 1) o teplotě tání 136 až 138 °C (z etheru; rozklad).

Výchozí látka se může vyrobit následujícím postupem:

a) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. e) se z 761 mg Z-GlyAsp(OtBu)-OH (příklad 16) a 359 mg hydrochloridu methylesteru 1-aminocyklopentankarboxylové kyseliny v tetrahydrofuranu po chromatografování na silikagelu za použití ethylacetátu jako elučního činidla získá 920 mg terc.butylesteru N-[N-benzyloxykarbonylglycyl]3-[[l-(methoxykarbonyl)cyklopentyl]karbamoyl]-[3-alaninu. MS (FAB): 506 (M+l)⁺.

b) Hydrogenolýzou analogickým způsobem jako je popsán v příkladu 1B) odst. b) se z 880 mg produktu z předchozího stupně získá 620 mg methylesteru l-[[3-(terc.butoxykarbonyl)-Nglycyl-L-alanyl]amino]cyklopentankarboxylové kyseliny. MS (FAB): 372 (M+l)⁺.

c) Analogickým postupem jako je popsán v příkladu 1B), odst. e) se kopulací 310 mg 3-(pkyanfenyl)propionové kyseliny a 600 mg produktu z předchozího stupně po chromatografíckém čištění (silikagel; za použití ethylacetátu a směsi ethylacetátu a methanolu 9:1) získá 635 mg methylesteru l-[[3-(terc.butoxykarbonyl)-N-[N-(p-kyanhydrocinnamoyl)glycyl]-L-alanyl]' aminojcyklopentankarboxylové kyseliny. MS: 546 (M+NHt)⁺.

d) Analogickým postupem jako je popsán v příkladech 1B) odst. g) a h) se reakcí 600 mg produktu z předchozího stupně postupně se sirovodíkem, methyljodidem a octanem amonným získá 279 mg hydrojodidu methylesteru l-[[N-[N-(p-amidinohydrocinnamoyl)glycyl]-3-(terc. butoxykarbonyl)-L-alanyl]amino]cyklo pentankarboxylové kyseliny o teplotě tání 98 °C (rozklad). MS (FAB): 546 (M+l)⁺.

CZ 282730 B6

e) Alkalickou hydrolýzou 157 mg produktu z předchozího stupně se postupem popsaným v příkladu 16B), odst. b) získá 24 mg l-[[N-[N-(p-amidinohydrocinnamoyl)glycyl]-3-(terc. butoxykarbonyl)-L-alanyl]amino]cyklopentakarboxylové kyseliny o teplotě tání 163 až 164 °C.

Příklad 34

Roztok 275,5 mg N-Boc-3-(4-aminofenyl)-DL-alanyl -Gly-Asp-Val-OH (příklad 15B), odst. d)) ve 3 ml vody se upraví přidáním IN roztoku hydroxidu sodného na pH 9,5. K získanému roztoku se přidá 219 mg hydrochloridu methylacetimidátu a hodnota pH se přidáním IN roztoku chlorovodíkové kyseliny znovu upraví na 9,5. Po dvouhodinovém míchání se reakční směs okyselí přidáním IN roztoku kyseliny chlorovodíkové na pH 4 a poté se chromatografuje na pryskyřici Sephadex G-25S na použití 0,2N roztoku kyseliny octové jako elučního činidla. Hlavní frakce se lyofilizuje a čistí se na přípravku Lichrosorb RP 18 za použití 0,05M roztoku octanu amonného v ethanolu. Jednotná frakce se lyofilizuje z vody. Získá se 25 mg [3-[p(acetimidoylamino)fenyl]-N-(terc.butoxykarbonyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH.

MS: 593 (M+H)⁺.

Příklad A

Sloučenina vzorce I se může o sobě známým způsobem používat jako účinná látka k výrobě

tablet následujícího složení:	na 1 tabletu
účinná látka mikrokrystalická celulóza kukuřičný škrob mastek hydroxypropylmethylcelulóza	200 mg 155 mg 25 mg 25 mg 20 mg 425 mg

Příklad B

Sloučenina vzorce I se může o sobě známým způsobem používat jako účinná látka k výrobě

kapslí následujícího složení:	na 1 kapsli
účinná látka kukuřičný škrob laktóza mastek hořečnatá sůl kyseliny stearové	100,0 mg 20,0 mg 95,0 mg 4,5 mg 0,5 mg 220,0 mg

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (11)

1. Deriváty glycinu obecného vzorce I

R-CONH-CH₂-CONH-CH(R’>CH₂COOH (I) ve kterém znamená skupinu vzorce -CH(NH-R^aXCH2)i^-NH-R^b -(T)i nebo 0-C6HrCH₂NH-R^c -(T)i nebo ₀-C₆H₄-(NH)_n-C(NH)-L nebo skupinu vzorce (R-l) (R-2) (R-3) (R-4)a

R^a znamená atom vodíku, -COO-alkylovou skupinu, ve které alkyl obsahuje 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu -Z, -COC₆H₅, -COC₆H₄N3, -SO₂C6H₅, -SO₂-naftylovou skupinu nebo skupinu -CO-CH₂N(Y)-CH₂CH₂NH-Y,

Y znamená atom vodíku, skupinu Boc nebo skupinu Z,

R^b znamená skupinu vzorce -C(NH)(CH₂)₀.3-CH₃ nebo skupinu vzorce nebo, jestliže R^a znamená skupinu vzorce -COC₆H₄N3, -SO₂C6H₅, SO₂-naftyl nebo COCH₂N(Y)-CH₂CH₂NH-Y, pak znamená také amidinoskupinu,

R^c znamená atom vodíku nebo amidinoskupinu, n znamená číslo 1 nebo 0,

L znamená aminoskupinu, nebo, jestliže n znamená číslo 1, také skupinu -(CH₂)o.3-CH3,

T znamená skupinu vzorce -CH₂-(O)i nebo ₀-, -CH=CH-, -CH(R^d)-CH₂- nebo -CH₂CO-, přičemž karbonylová skupina obsažená ve skupině T může být přítomna ve formě ketalu,

R^d znamená atom vodíku nebo skupinu -NH-R^a,

R' znamená atom vodíku nebo skupinu -CO-R°,

-28CZ 282730 B6

R° znamená aminoskupinu, -NH-alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu, NH(CH₂)_M-C6H₅, -NH(CH₂)_M-C₆H₄-Hal, NH-C₆H₄-COOH, -NH-C₅H₄-COO-alkyl s 1 až 4 atomy uhlíku v alkylu nebo zbytek α-aminokarboxylové kyseliny vázaný přes aminoskupinu,

Hal představuje fluor, chlor, brom nebo jod,

Z představuje benzyloxykarbonylskupinu,

Su představuje sukcinimidovou skupinu,

Aeg představuje N-(2-aminoethyl)glycylskupinu a

Nal( 1) představuj e 3-( 1 -naftyl)-L-alanylovou skupinu, jakož i jejich hydráty nebo solváty a jejich fyziologicky použitelné soli.

2. Deriváty glycinu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R znamená skupinu vzorce R-l, R-2 nebo R-3, L znamená aminoskupinu, T znamená skupinu vzorce -CH₂-(O)i nebo o-, -CH=CH- nebo -CH(R^d)-CH₂- a R^a, Y, R^b, R^c, R^d a R' mají významy uvedené v nároku 1, jakož i jejich hydráty nebo solváty a jejich fyziologicky použitelné soli.

3. Deriváty glycinu podle nároků 1 nebo 2 obecného vzorce I, kde R znamená skupinu vzorce R-l, zejména takovou, že R-CO- znamená Aeg-Arg-, Z-Aeg(Z)-Arg-, 2-naftyl-SO₂-Arg-, o-azidobenzoyl-Arg-, N²-Boc-N⁶-(l-iminoethyl)-Lys- nebo N²-Boc-N⁵-(3a,4,5,6,7,7a-hexahydro3a,7a-dihydroxy-lH-benzimidazol-2-yl)-Om- a ostatní substituenty mají význam uvedený v nároku 1 nebo 2, jakož i jejich hydráty nebo solváty a jejich fyziologicky použitelné soli.

4. Deriváty glycinu podle nároků 1 nebo 2 obecného vzorce I, kde R znamená skupinu R-2, zejména takovou, že R-CO- znamená p-(aminomethyl)hydrocinnamoylovou skupinu a ostatní substituenty mají význam uvedený v nároku 1 nebo 2, jakož i jejich hydráty nebo solváty a jejich fyziologicky použitelné soli.

5. Deriváty glycinu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde R znamená skupinu R-3, zejména takovou, že R-CO- znamená p-amidinohydrocinnamoyl, 3-(p-amidinofenyl nebo p-guanidinofenyl)alanyl, N-Z- nebo N-Boc-3-(p-amidinofenyl)alanyl, N-Boc-3-(p-guanidinofenyl)alanyl, p-amidinofenoxyacetyl, p-amidinofenacetyl, 2-[(p-amidinofenyl)-l,3-dioxolan-2-yl]acetyl, (pamidinobenzoyl)acetyl nebo N-boc-3-(p-acetimidoylaminofenyl)alanyl a ostatní substituenty mají význam uvedený v nároku 1, jakož i jejich hydráty nebo solváty a jejich fyziologicky použitelné soli.

6. Deriváty glycinu podle nároků 1 nebo 2 obecného vzorce I, kde R znamená skupinu vzorce R-4, zejména takovou, že R-CO- znamená 3-(l-amidino-4-piperidyl)propionylovou skupinu a ostatní substituenty mají význam uvedený v nároku 1 nebo 2, jakož i jejich hydráty nebo solváty a jejich fyziologicky použitelné soli.

7. Deriváty glycinu podle některého z nároků 1 až 4 obecného vzorce I, kde R' znamená atom vodíku, -CO-Val-OH, -CO-Ser-OH, -CO-Phe-OH, l-karboxy-2-(l-naftyl)ethylidenkarbamoyl, CO-Ile-OH, karboxyfenylkarbamoyl, isobutylkarbamoyl, p-fluorfenethylkarbamoyl nebo karboxycyklopentankarbamoyl a ostatní substituenty mají význam uvedený v nároku 1 až 4, jakož i jejich hydráty nebo solváty a jejich fyziologicky použitelné soli.

-29CZ 282730 B6

8. Deriváty glycinu podle nároků 1 nebo 2 zvolené ze souboru zahrnujícího [3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH, Z-Aeg(Z)-Arg-Gly-Asp-Val-OH,

Aeg- Arg-Gly-Asp-V al-OH,

Aeg-Arg-Gly-Asp-Ser-OH,

N-Aeg-Arg-Gly-Asp-Nal( 1 )-OH,

Aeg-Arg-Gly-Asp-Ile-OH, (N²-Boc-N⁶-( 1 -iminoethyl)-L-lysyl]-Gly-Asp-Val-OH, N-[(o-azidobenzoyl)-Arg-Gly-Asp)anthranilovou kyselinu, N²-Boc-N⁵-(3a,4,5,6,7,7a-hexahydro-3a,7a-dihydroxy-lH-benzimidazol-2-yl)-L-omithyl]Gly-Asp-Val-OH, [N-Boc-3-(p-guanidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH, [3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Nal( 1 )-OH, [N-Boc-3-(p-amidinofenyl)-DL-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH, (p-amidinohydrocinnamoyl)-Gly-Asp-Nal(l)-OH, [3-(p-amidinofenyl)-D-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH, (p-aminomethy lhydroc innamoyl)-Gly-Asp-V al-OH, (p-amidinohydroc innamoy 1)-Gly-Asp-Val-OH, [3-(p-amidinofenyl)-L-alanyl]-Gly-Asp-Val-OH, (p-amidinofenoxy)acetyl-GIy-Asp-Val-OH a (p-amidinofenyl)acetyl-Gly-Asp-Val-OH.

9. Deriváty glycinu podle některého z nároků 1 až 8 pro použití jako léčiva, zejména jako inhibitory vazby adhezivních proteinů na krevní destičky, inhibitory agregace krevních destiček a inhibitory intercelulámí adheze.

10. Farmaceutický prostředek zejména pro léčení a profylaxi chorob vyvolaných vazbou adhezivních proteinů na krevní destičky, agregací krevních destiček a intercelulámí adhezí, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje derivát glycinu podle některého z nároků 1 až 8.

11. Použití derivátů glycinu podle některého z nároků 1 až 8 pro výrobu léčiva pro léčení a profylaxi chorob vyvolaných vazbou adhezivních proteinů na krevní destičky, agregací krevních destiček a intercelulámí adhezí.