PT93245B

PT93245B - Processo para a preparacao de novos derivados de glicina e de composicoes farmaceuticas que os contem

Info

Publication number: PT93245B
Application number: PT93245A
Authority: PT
Inventors: Leo Alig; Albrecht Edenhofer; Marcel Muller; Arnold Trzeciak; Thomas Weller
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1989-02-23
Filing date: 1990-02-22
Publication date: 1996-01-31
Also published as: PT93245A; CA2008116A1; FI900864A0; MC2097A1; HUT52784A; IL93422A0; EP0384362A2; NO900839L; CZ282730B6; JPH0662672B2; US5663297A; CS9000745A2; EP0384362A3; ATE187737T1; IL93422A; JPH02264795A; CA2008116C; ES2141079T3; DZ1396A1; FI900864A7

Description

PATENTE DE INVENÇÃO

N.° 93.245

REQUERENTE: F.HOFFMANN-LA ROCHE AG, suíça, com sede em 124 Grenzacherstrasse, CH-4002 Basileia, Suíça,

EPÍGRAFE: Processo para a preparação de novos derivados de glicina e de composições farmacêuticas que os contêm

INVENTORES: Leo Aliq,

Aibrecht Edenhofer, Mareei Muller, Arnold Trzeciak, Thomas Woller,

Reivindicação do direiro de çrioridads ao abrigo do amigo 4° da Convenção de Paris de 20 de Março de ISS3.

Suíça, 23 de Fevereiro de 1989, sob ο NQ 669/89 Suíça, 29 de Novembro de 1989, sob o NQ 4265/89

F. HOFFMANN-LA ROCHS AO

PROCESSO PARA A PREPARAÇAO DE NOVOS DERIVADOS DE GLICINA E DS COMPOSIÇOES FARMACÊUTICAS QUE·

OS CONTÊM

A presente invenção diz resieito a novos derivados de glicina, a um processo para a sua preparação, a composições farmacêuticas que contêm estes derivados, assim como ao uso dos derivados de gliclnana preparação de composições farmacêuticas.

Os novos derivados de glicina são compostos de fórmula geral I,

R-C0NH-CR₂-C0NH-CH(R')-CK₂C00H I

na	qual
R	repre	senta um grupo de fórmula geral
	(D	-CH (NH-Rj-(CH₂)₁_₆-NH-R_b ;
	(2)	-(T)₁ ou ₀-0₆Η^-0Η₂ΝΗ-Κ_ο i
	(3)	-^(T)1 ou ₀-C₆V(NH)_n-(C<NH)-I,	; ou
	(4)	-^(T)i ou o~<( Ç.ncinhwh₂,	em que
^Ra	representa um átomo de hidrogénio ,	um grupo

-COO-alquilo C₁_₁₊, -COC^H^, -COC^N , ^-S0₂C^H^ ou -S0₂-naftilo ou um grupo de fórmula geral z ou coch₂ n(y)-ch₂ch₂nh-y em que Z representa um grupo benziloxicarbonilo e

Y rempresenta um átomo de hidrogénio ou um grupo T-but©xicer-. bonilo (EOC) ou benziloxicarbonilo (2)· ,2 representa um grupo -C(NH) (CH^Íq ó”^CH3

OH ou também amidino quando R representa um grupo -COC^H^N^, -SO₂C^C ou S0₂-naftilo ou um grupo de fórmula geral -C0CH₂N (Y )-CK₂CK.,NH-Y ;

R_c representa um átomo de hidrogénio ou um grupo amidino,

T representa um grupo -CH₂-(0)_{1 ou} θ-, -CH=CH- ou -CH₂C0pelo que um grupo carbonilo presente no grupo representado pelo símbolo T pode apresentar-se também sob a forma de um cetal ou representa um grupo de fórmula geral -CH(R^)-CH2 na qual R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula geral -NH-R : N representa zero ou o número inteiro 1; e s

L representa um grupo amino ou representa , também, um gru po -(0Η₂)₀_β-0Η^ quano N representa o número inteiro 1; e R' representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula geral -C0-R_o na qual R_Q representa um grupo amino, -NH-alquilo C₁__l+, NH(CH₂)₁_h^C6^H5’ ⁾l-4^C6^Hl+^Halogér‘^eo’

NH-C^H^-COOH ou -NH-C^H^-COO-alquilo ou um -amino-r ãcido carboxílico ligado vi? o grupo amino, assim como os seus hidratos ou produtos de solvatação e sais acei táveis sob o ponto de vist? fisiológico.

No âmbito da presente invenção, Me representa um grupo metiio, Bzl representa um grupo benzilo, tBu representa t-bu-

tilo, Hal representa um dos U átomos de haiogéneo, Boc represen ta t-butoxicarbonilo, 2 representa um grupo benziloxicarboni lo, Ac representa um grupo acetilo,So representa succinimida, ^moc representa 9H-fluoren-9-il-metoxicarbonilo, Arg representa L-arginilo, Orn representa L-ornitilo, Vai representa L-valilo, Phe representa L-fenilalanilo, Leu representa L-leúcilo, Ile representa L-lsoleúcilo, Lis representa lisilo, Ser representa L-serilo, Thr representa L-treonllo, Gll representa gllcilo, Ala representa L-alanilo, Asp representa L-0<-aspartilo, Aeg representa N-(2-amlnoetil)-glicllo e Nal(l) representa 3-(1-naftilo)-L-alanilo.

Exemplos de ácidos -amlnocarboxílicos ligados através de um grupo amino são Vai, Phe, Leu, Tir, Ser, Thr, Nal(l), N-isopropil-gli, p-ciclohexil-Ala e cicloleucina.

Os compostos de fórmula geral I podem formar produtos de solvatação, especialmente hidratos. A hidratação pode efectuar-se no decurso do processo de preparação ou pode ocorrer gradual mente como uma consequência de propriedades higroscóplcas de um composto inicialmente anidro de fórmula geral I.

Exemplos de sais compatíveis, do ponto de vista fisioló gico, os compostos de fórmula geral I são os sais de ácidos inor gânicos fisiologicamente compatíveis tais como o ácido clorídrico, ácido sulfúrico ou ácido fosfórico ou de ácidos orgânicos tais como o ácido metanossulfónico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido cítrico, ácido fumárico, ãcido succínico ou áci do salicíllco. Os compostos de fórmula geral I podem tamcém for mar sais com bases aceitáveis sob o ponto de viste fisitílógiço. Exemplos destes sais são os sais de metais alcalinos, sais de

metais alcalino-terrosos, sais de amónio e sais de alquilamónio tais como os sais de sódio, de potássio, de cálcio ou de trimetilamónio. Os compostos de fórmula geral I que contêm um grupo amino, amidino ou guanidino, podem também apresentar-se sob a forma de iões complexos.

Os compostos de fórmula geral I que contêm um ou mais átomos de carbono assimétrico podem estar presentes sob a forma de enantiómeros, diasteriómeros ou as suas misturas, por exem pio racematos.

Os compostos preferidos, de fórmula geral I, são aqueles em que o grupo R-CO- representa o grupo Aeg-Arg-, Z-Aeg(Z)-Arg-, 2-naftil-SO2~Arg, o-azidobenzoí 1-Arg-, ^-Βοο-Νθ-(1-iminoetil)-Lis-, ^-Boc-N^-(3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-3a,7a-dihidroxi-lH-benzimidazol-2-il)-Om-, p-(aminometil)-hidrocinamoílo, p-aminohidrocinamoílo, 3-(p-amidinofenil ou p-guanidinofenilo)-alanilo, N-Z- ou N-Boc-3-(p-amidinofenil)-alanilo, N-Boc-3-(p-guanidinofenil)-alanilo, p-amidinofenoxiacetilo ou p-amidinof enilacetilo .

Além disso os compostos de fórmula geral I na qual R' representa um átomo de hidrogénio, ou um grupo -CO-Val-OH, C0-Ser-OH-, -CO-Phe-OH-, l-carboxi-2-(1-naftil)-etilidenocarbamoílo, -CO-Ile-OH, carboxifenilcarbamoílo, isobutilcarbamoílo ou p-fluorometilcarbamoílo são compostos preferidos.

Os compostos que se seguem são compostos especialmente preferidos.

[3-(p-Amidinofenil)-DL-alanil]-Gly-Asp-Val-OH,

Z-Aeg(Z)-Arg-Gly-Asp-Val-OH,

Aeg-Arg-Gly-Asp-Val-OH, ./

Aeg-Arg-Gly-Asp-Ser-OH,

N-Aeg-Arg-Gly-Asp-Nal(l)-OH,

Aeg-Arg-Gly-Asp-Ile-OH, [N^-Boc-N^-(1-iminoetil)-L-lisil]-Gli-Asp-Val-OH,

N-[(o-azidobenzoíl)-Arg-Gli-Asp]-antranílico ácido, t^-Boc-N^- (3a,4,5,6,7,7a-hexahidro-3a , 7a-dihidroxi-1H-benzimidazol-2-il)-L-ornitil-Gli-Asp-Val-OH, [N-Boc-3-(p-guanidinofenil)-DL-alanil]-Gli-Asp-Val-OH, [3-(p-amidinofenil)-DL-alanil]-Gli-Asp-(Nal(1)-OH, [N-Boc-3-(p-amidinofenil)-DL-alanil]-Gli-Asp-Val-OH, (p-amidinohidrocinamoí1)-Gli-Asp-Nal(1)-OH, [3- (p-amidinofenil)-D-alanil]-Gli-Asp-Val-OH, (p-aminometil-hidrocinamoíl)-Gli-Asp-Val-OH, (p-amidinohidrocinamoí1)-Gli-Asp-Val-OH, [3-(p-amidinofenil)-L-alanil]-Gli-Asp-Val-OH, (p-amidinofenoxi)acetil-Gli-Asp-Val-OH e (p-amidinofenil)acetil-Gli-Asp-Val-OH.

Os compostos da presente invenção podem preparar-se de um modo conhecido por (a) Eliminação do(s) grupo(s) éster e um ou mais grupo(s) amino, amidino ou guanidino protegido(s) presentes em um composto de fórmula geral r₂-conh-ch₂-conh-ch(r₄)-ch₂coor₃ II na qual

R₂ representa um grupo de fórmula geral (la) -CH(NH-R )-CH-). <-R_c, a z ±—□ ^(2a) -^(T)1 ou 0-^C6Wó i (3a) -(TJj _QU g-C^-K? , ou (ka) -(T^ _{ou 0} ^NC(í)H)NH₂ ; en que

Ra e T têm os significados definidos antes, representa um grupo guanidino protegido ou um grupo de fórmula geral -NH-P^ na qual R_b ^{tem os si}ê^niflcados definidos antes, Rg representa um grupo amino ou guanidino protegido ou um grupo de fórmula geral

-Nh-R na qual F tem os significados definidos anc c tes e Ry representa um grupo amidino ou guanidino even tualmente protegido;

R^ representa um átomo de hidrogénio ou uma função éster facilmente eliminável, e

R^ tem o significado definido antes para o símbolo R¹ ou representa um grupo de fórmula geral -CORg na qual Rg representa um éster de um ácido Qd-aminocartoxílico ligado via o grupo amino facilmente eliminável, com a condição de R₂ conter, pelo menos, um grupo guanidi no, amino ou amidino protegido representado pelos símbolos R^, Rg ou R-, e de não representar um po de fórmula geral (la) ~(í)]_ _ou q—^NC(NH)NH₂ quando R^ representa um átomo de hidrogénio e R^ tem o significado definido antes para o símbolo R' ;

ou (b) reacção com uma amina de fórmula geral,

CH(NH-)-(CH-).g-NH-C(NH)NHIII conh-ch₂-conh-ch(R')-ch₂cooh na qual

R' tem os significados definidos antes, com um agente capaz de introduzir um grupo -COCgHç-, -SC^CgH^ou SC>₂-naftilo ou um grupo de fórmula geral -COCH₂N(Y)-CH₂CH₂NH-Y, na qual Y tem os significados definidos antes;

ou (c) reacção com uma amina de fórmula geral

CH(NH-R₉-(CH₂)₁_₆-nh_{2 iv}

CONH-CH₂-CONH-CH(R’)-CHjCOOH na qual

R_g representa um grupo -COO-alquilo-C₁_₄, , -COCgHg, -COCg-H^N^, -SO₂CgH₅ ou SC>₂—naftilo ou um grupo de fórmula geral Z ou -COCH₂N(Y') -Ο^Ο^ΝΗ-Υ' em que Z representa um grupo benziloxicarbonilo e Y' representa um grupo T-butoxicarbonilo (Boc) ou benziloxicarbonilo, e

R' tem os significados definidos antes, com um agente capaz de introduzir um grupo -C(NH)(CH₂)_Q_g-CH₂; ou (d) reacção com um derivado da guanidina de fórmula geral

CH(NH-R_Q)-(CH_O). --NHC(NH)NH„

921-6 2 _v

CONH-CH₂-CONH-CH(R')-CH₂COOH na qual

Rg e R' têm os significados definidos antes,

com 1,2-ciclo-hexanodiona ou (e) conversão do grupo amino em unia, amina de fórmula geral IV, citada antes, ou uma amina de fórmula geral,

VI

NH-CH₂-C0NH-CH(R’)-CH₂-COOK

na qual

Rl tem os significados definidos antes, e L representa um grupo -01^(0)^ _ou θ- ou -CH₂=CH- ou um grupo de fórmula geral -CH(NH-R^)-CH₂ na qual R^ tem os significados definidos antes;

ou um grupo guanidino;

óu' (f) hidrogenaçao de um nitrilo de fórmula geral,

N=C—_{ou 0}-C0NH-CH₂-C0NH-CH(R’)-CH₂C00H VII na qual

T e R¹ têm os significados definidos antes, para sê obter uma amina, (g) modificação,eventual, sob o ponto de vista funcional de um substituinte reactivo presente num grupo representado pelo símoolo R de um composto de fórmula geral I, e

(h) conversão, eventual, de um composto de fórmula geral I em um seu sal ou um sal de um composto de fórmula geral I no com posto de fórmula geral I livre.

Exemplos de grupos amino, amidino ou guanidino protegidos são os grupos -NH-Z e -NH-Boc, -C(NH)NH-Z, -NHC(NH)NH-NOg, -NHC(N-Boc)-NH-Boc e -NHC(N-Z)-NH-Z. Exemplos de grupos éster fa cilmente elimináveis de fórmula geral COORg são os grupos metoxicarbonilo, t-butoxicarbonilo e benziloxicarbonilo. Exemplos de um resíduo representado por Rg são -Vai-OtBu, -Val-OBzl e -Ser(tBu)-OtBu.

As eliminações de acordo com o processo descrito na alínea a) podem realizar-se de acordo com um modo conhecido. Assim, os grupos ésteres tais como t-butoxicarbonilo podem eliminar-se com um ácido como por exemplo o ácido fórmico, ácido trifluoroacético (TFA) ou ácido clorídrico no seio de um dissolvente como o cloreto de metileno, tetrahidrofurano (THF) ou acetato de etilo, a uma temperatura até cerca de 4 0°C, de preferência, entre cerca de 0°C e a temperatura ambiente. Os grupos de protecção amino, guanidino ou amídino tais como o Boc que estão presentes no substituinte representado pelo símbolo Rg, são, portanto, simultaneamente eliminados. Deste modo, os compostos de fórmula geral II que são obtidos por síntese em fase sólida, podem também eliminar-se do veículo por exemplo uma resina de estireno divenilbenzénica a 1% contendo resíduos de álcool p-benziloxibenzílico.

Os grupos éster tais como metoxicarbonilo podem saponificar-se com uma base como por exemplo um hidróxido de metal al calino, como o hidrÕxido de sódio no seio de um dissolvente como a acetona, a uma temperatura de cerca de 40°C, de preferência à temperatura ambiente. Os ésteres benzilicos podem eliminar-se por hidrogenação na presença de um catalisador de um metal nobre como o paládio sobre carvão (Pd/C) no seio de um dis10

(.

solvente tal como metanol, etanol, ácido fórmico ou ácido acético, a uma temperatura atá cerca de de preferência à tem peratura ambiente. Os grupos de protecção amino ou amidino tais como os representados por Z; ou grupos de protecção guanidino tais como N0~ ^e Z que estão presentes no grupo represen tados por são? portanto eliminados simultaneamente.

processo descrito na alínea b>, pode também realizar-se de um modo conhecido. Para a introdução do grupo -COCxH^N^, faz-se reagir um composto de fórmula geral III com cloridrato de piridina na presença de uma base como por exemplo a N-etildiisopropilamlna (DIPEA) e de hexafluorofosfato de 1,1,3,3-tetrsmetil-ã-Z^—oxo-l ,2,3-benzotriazin-3(^lrH)-il _7-urónio no seio de um dissolvente como a dimetilformamida. Pars s introdução de um grupo -SQ2~naftilo, pode tratar-se um composto de fórmula geral III por exemplo com cloreto de naftaleno-2-sulfonilo e uma base como o carbonato de hidrogénio e sódio no seio de um dissolvente como a acetona ou a água. Para a introdução de um grupo -COCr^NCYj-Cf^CH^.NH-Y pode fazer-se reagir um composto de fórmula geral III, por exemplo com Z-Aeg(Z)-OSu na presença de uma ba se como o cloridrato de piridina no seio de um dissolvente como a dim.etilformamida. Estas reacçoes realizam-se de uma forma conveniente a uma temperatura sté cerca de 40°C, de preferência à temperatura ambiente.

Exemplos de agentes que introduzem um grupo -C(Nn)-(CH_S)„ -,-CH são os éteres de fórmula MeOC( NH)-(CH_O) _ , -Cn-, , <- u-_, z u~3 o cor exemplo, acetímidsto de metilo. A reacção, de acordo com o processo descrito na alínea c), pode realizsr-se utilizando-se cloridrato de tal éter na presença de uma base como o hidróxido de sódio no seio de um dissolvente como por exemplo 3'

11,

água, a uma temperatura ate cerca de 40°C,de preferência à tem peratura ambiente.

A reacção de acordo com o processo descrito na alínea

d) pode realizar-se no seio de um tampão de borato· de sódio, numa atmosfera inerte como o árgon, a uma temperatura até cerca de 40°C, de preferência à temperatura ambiente.

processo descrito na alínea e) pode realizar-se por meio da reacção de uma amina de fórmula geral VI no seio de um dissolvente como a água, com uma base, por exemplo, carbonato de potássio ou ácido aminoiminometanossulfónico a uma temperatura até cerca de 40°G, de preferência à temperatura ambiente.

método descrito na alínea f) pode realizar-se por hidrogenação do nitrilo de fórmula VII em meio alcoólico por exem pio em solução de amoníaco metanÓlica na presença de um catalisador como por exemplo o níquel de Raney a uma temperatura até cerca de Uo°C, de preferência à temperatura ambiente.

A modificação funcional, de acordo com o método descrito na alínea g), também se pode realizar de acordo com métodos con vencionais. Portanto, os grupos de protecção podem separar-se de um grupo protegido de fórmula geral R-CO- tal como Z-Aeg-(Z) -Arg ou -N-Boc-3-(p-amidinofenil)-D,L-alanil, como por exemplo, descrito anteriormente em relação ao método da alíne a).

Um grupo amino primário que está presente num substituinte representado por R pode converter-se num grupo -NH-Boc, por exemplo, por meio de dicarbonato de di-t-butilo no seio de um dissolvente como a dimetilformamida, na presença de uma base como a trietilamina, a uma temperatura até cerca bO°C, de prefe rência à temperatura ambiente.

·»

Os compostos de fórmula geral II são novos e também constituem um objectivo da presente invenção. A sua preparação pode efectuar-se a partir de compostos conhecidos, de acor do com os métodos conhecidos e que sao familiares para os técni cos. Portanto, as amidinas de fórmula geral II na qual representa um grupo - (T) ou θ-CgH^-C (NH) NH₂ podem preparar-se a partir dos nitrilos correspondentes de fórmula geral

NC-CgH₄-(T)·!· ou ₀-CONH-CH₂-CONH-CH(R₄)-CH₂COOR₃ VIII através das correspondentes tioamidas e ésteres S-metilimínicos. Por exemplo, o nitrilo de fórmula geral VIII pode fazer-se reagir com ácido sulfidrico e trietilamina no seio de piridina e a tiamida obtifa fazer-se reagir com iodeto de metilo em acetona e subsequentemente com acetato de amónio em metanol.

Um derivado de guanidina de fórmula geral II na qual R₂representa um grupo de fórmula -(T)^ ou θ-Cgf^-NHC (NH) NH₂ pode preparar-se a partir do correspondente composto nitro de fórmula geral,

NHCO-(T)₁ ou ₀-C_gH₄-NO₂

IX

CH₂-CONH-CH(R₄)-CH₂COOR₃ através da amina primária correspondente e do derivado de guanidina correspondente protegido por um grupo nitro. Assim, o composto nitro de fórmula geral IX pode ser hidrogenado na presença de paládio sobre carvão para fornecer uma amina primária e esta última pode reagir com 3,5-dimetil-N-nitro-lH-pirazole-1-carboxamidina em etanol e separar-se o grupo nitro por hidro genação na presença de paládio sobre carvão em ãcido acético.

Um composto de fórmula geral II que se liga a um veículo pode preparar-se por síntese em fase sólida mediante aplicação de um método conhecido. Assim, pode subemeter-se uma suspensão de uma substância veicular constituída por resina de estireno divinilbenzénica contendo resíduos de álcool p-benziloxibenzili co em dimetilformamida a tratamento com N-(9H-fluoren-9-il-metoxicarbonil)-3-(l-naftil)-L-alanina, e em seguida com hexafluorofosfato de 2-(lH-benzotriazol-l-il)-l,1,3,3-tetrametilurónio (HBTU), h-dimetilaminopiridina e DIPEA. Os grupos hidroxi livres podem ser acetilados com anidrido acético na presença de DIPEA e de dimetilformamida . Subsequentemente , os aminoácidos individuais protegidos tais como Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Gli-OH, Fmoc-Arg-OH.HCl e Boc-Aeg(Boc)-OSu podem acoplar-se su cessivamente a um composto de fórmula geral ,

Boc-Aeg(Boc)-Arg-Gly-As p(0But)-Nal(l)-0-veículo por exemplo de acordo com o protocolo reaccional descrito no exemplo 10.

Os ácidos de fórmula geral III tais como H-Arg-01i-Asp-Val-OH e H-Arg-Gli-Asp-Ser-OH são conhecidos e podem de um modo conhecido, por exemplo, mediante reacção de um éster correspondente de fórmula geral

K₂N-CH₂-C0NH-CH(R')-CK₂C00-t-Bu X com Z-Arg(Z₂)-0Su, eliminação do grupo éster e eliminação dos grupos de protecção arginina que estejam presentes obtendo-se deste modo o produto por hidrogenação catalítica no seio de metanol e na presença de paládio sobre carvão.

Uma amina de fórmula geral IV, na qual, por exemplo R' representa o grupo -CO-Val-OH e o símbolo Rg representa um grupo -COO-C^_^-alquilo pode preparar-se a partir do diéster correspondente, por exemplo, Η-Gli-Asp(OBzl)-Val-OBzl via o derivado de lisina Boc-Lis(Z)-Gli-Asp(O-BZl)-Val-OBzl. Portan to, pode-se fazer reagir o diéster referido com Boc-Lis (Z)-OSu no seio de dimetilformamida na presença de N-metilmorfolina e o derivado de lisina obtido pode hidrogenar-se cataliticamen te obtendo-se a amina correspondente, de fórmula geral IV, Boc-Lis-Gli-Asp-Val-OH.

□m derivado de guanidina de fórmula geral V na qual, por exemplo, o símbolo Rg representa um grupo -COO-alquilo-C^_^ pode preparar-se mediante reacção do composto correspondente, de fórmula geral III, com dicarbonato de di-t-butilo, na presença de bromidrato de piridina no seio de dioxano aquoso.

Uma amina de fórmula geral VI, por exemplo, Boc-D,L-Phe (P-NH2)-Gli-Asp-Val-OH pode preparar-se a partir de um di éster correspondente, por exemplo Η-Gli-Asp-(OBzl)-Val-OBzl em TFA através do composto nitro Boc-D,L-Phe(P-NO2)-Gli-Asp-(OBz1)-Val-OBzl. Assim, pode-se submeter o diéster referido a tratamento com 3oc-D,L-Phe-(p-NO₂)-OH em dimetilformamida na presença de HBTU e de DIPEA e hidrogenar-se cataliticamente o composto nitro obtido para se obter a amina desejada.

Pode preparar-se um nitrilo de fórmula geral VII na qual, por exemplo o símbolo R' representa um grupo -CO-Val-OH, por acopla mento de um diéster correspondente, por exemplo Η-Gli-Asp-(OtBu)-Val-OtBu e um nitro correspondente tal como o ácido p-ciano-hi-

.¾ drocinâmico para se obter p-ciano-hidrocinamoíl -Gli-Asp(OtBu)-Val-OtBu que se submete a acidólise.

Pode preparar-se um nitrílo de fórmula geral VIII, na qual, por exemplo, o símbolo R^ representa um grupo -CO-Ser(tBu)-OtBu, por acoplamento de um diéster correspondente, por exemplo H-Kjli-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-OtBu com rac-Z-(p-cianofenil)-alanina em dimetilformamida em atmosfera de argon, na presença de N-metilmorfolina e de HBTU.

Analogamente, pode-se acoplar um dióster como por exem pio, K-Gli-Asp(0tEu)-Val-0t5u com Boc-Phe (4-NO„)-OH para se obter o composto nitro correspondente de fórmula geral IX, por exemplo Z*N-3oc-3-(ρ-nitrofenil)-L-alanil _7-Gli-Asp(0t3u)-Val-OtBu.

Podem preoarar-se compostos de fórmula geral x, por exemplo o ácido N-Z'H-Gli-Asp(Ot3u) _7-antranílico por acoplamen to de Z-Asp(0t3u)-0H e tosilato de antranilato de benzilo em dimetilformamida com tetrafluoro borato de 1,1,3?3-tetrametil-2-Z*'->--oxo-l, t. ,3-benzotriazin-3(4H)-il _7urór.io (TGBTU) e N-etildiisopropil -amina (DIPZA), eliminação do grupo Z do ester obtido, acoplamento do composto resultante, o ácido d-x/H-Asp(.GtBuj _7-ant”anílico cem Z-Gii-03u e eliminação do grupe Z do produto resultante oor hidrogenação.

fedem crecarar-se nc diesteres como material inicia' tal como H-Gli-Asp(33zl )-V?.l-Jõzi -,m iPi. por acoplamento de

Doc-As pkòPzl y-úã com insilafo d-ρ ã-Val-GBnl na presença de

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>

i %

tante com Eoc-Gll-OSu e N-metilmorfolina em acetato de etilo e subsequente acidólise.

Pode preparar-se um diéster tal como H-Gli-Asp(OtBu)-Nal(i)-OMe por acoplamento de ZZ-Gly-OH com H-Asp(OtBu)-OMe, saponificação do produto resultante Z-Gly-Asp(OtBu)-OMe com hidróxido de sddio em acetona, acoplamento do Z-Gly-Asp(OtBu)-0H resultante com H-Nal(1)-Ome e hidrogenólise de Z-Gly-Asp(OtBu)-ííal(l )-QMq. resultante.

Podem preparar-se diésteres como por exemplo H-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu por condensação de Z-Asp(OtEu)-OH e H-Val-OtBu para se obter Z-Asp(OtBu)-Val-OtBu, hidrogenólise deste último, acoplamento da H-Asp(OtBu)-Val-OtBu resultante com Z-Giy-OSu para se obter Z-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu e hidrogenólise deste· último.

Os derivados de glicina de fórmula geral I, os seus produtos de solvatação e os seus saís, inibem não somente a ligação do fibrinogénio, fibrônectina e factor de Willebrand aos receptores do fibrinogénio das plaquetas sanguíneas (glicoproteina Ilb/IIIa), mas também inibem a ligação destas e outras proteínas aderentes tais como a vitronectina, o colagénio e a laminina, aos receptores correspondentes na superfície dos dife rentes tipos de células. Os referidos compostos, portanto, influenciam as interacções célula a célula e célula-matriz. Em especial, elas impedem a formação dos trombos de plaquetas sanguíneas e podem ser utilizadas no controlo e prevenção de doenças como a trombose, o ataque, o enfarte cardíaco, a inflamação e a arterioesclerose. Além disso, estes compostos têm um efeito sobre as células tumorais de forma a inibir as metástases.

ζ

ι;

Deste modo, podem ainda utilizar-se como agentes anti-tumorais.

A inibição da ligação do fibrinogénio aos receptores do fibrinogénio, glicoproteina Ilb/IIIa pode demonstrar-se como se segue:

Obteve-se glicoproteina Ilb/IIIa a partir de extractos de Triton X-100 de plaquetas sanguíneas humanas e purificou-se por cromatografia de afinidade de lectina (Analitical Biochemistry; 151; 1985; p. 169-177, e cromatografia numa coluna de actividade Arg-Gly-Asρ-Ser (Science; 231; 1986, p. 1559-62). A proteina receptora obtida deste modo ligou-se a placas tíiicrotituladoras. A ligação específica do fibrinogénio aos receptores imobilizados determinou-se com o auxílio de um sistema ELISA (imunò-ensaio ligado a enzima).

Os valores das ΟΙ^θ citados posteriormente correspondem à con centração da substância em ensaio que é necessária para inibir em 50 % a ligação do fibrinogénio com os receptores imobi lizados.

Produto do Exemplo	2 6	7	8	10	11 12	13
CI_5O (^1)	0,016 0,15	0,09	0,11	0,038	0,12 0,11	0,11

Produto do Exemplo	14 15	16	17	19	20
ci₅₀ 9«)	0,054 ο,οδ	0,022	0,016	0,011	0,022

Produto do Exemplo	23	24	25	26	27
CI₅₀ 9*!)	0,21	0,035	0,023	0,005	0,0019

Os compostos de fórmula geral I apresentam uma toxicidade baixa. Assim, o produto obtido no exemplo 2 tem uma de 600 mgAg por via endovenosa no murganho.

Como se referiu anteriormente, os medicamentos contendo um derivado de glicina de fórmula geral I, um seu produto de solvatação ou um seu sal são igualmente objecto da presente invenção, tal como um processo para a preparação dos medicamentos que contêm um ou mais dos referidos compostos e, se apropriado, uma ou mais de outras substâncias com valor terapêuti12 co, numa forma de administração galénica. Os medicamentos podem ser administrados por via entérica, por exemplo oral, sob a forma de comprimidos, comprimidos revestidos, drageias, cápsulas de gelatina dura e gelatina mole, soluções, emulsões ou suspensões ou por via rectal, por exemplo,sob a forma de supositórios ou sob a forma de um spray. A administração, contutudo, pode ainda efectuar-se por via parentérica, por exemplo, sob a forma de soluções injectáveis.

Pode misturar-se o componente activo com excipientes farmaceuticamente inertes, orgânicos ou inorgânicos, para a pre paração de comprimidos, comprimidos revestidos, drageias e cápsulas de gelatina dura. A lactose, o amido de milho ou os seus derivados, o talco, o ácido esteárico ou os seus sais podem uti lizar-se como excipientes para comprimidos, drageias e cápsulas de gelatina dura. Excipientes apropriados para cápsulas de.gela tina mole são, por exemplo, os óleos vegetais, as ceras, as gor duras e os polióis semi-líquidos ou líquidos, dependendo da na tureza do componente activo. Contudo, não são geralmente neces. sários excipientes para a preparação de cápsulas de gelatina mo le. Excipientes apropriados para a preparaçao de soluções e de xaropes são, por exemplo, a água, os polióis, a sacarose,o açú car invertido e a glucose, excipientes apropriados para soluções injectáveis são. por exemplo, água, álcoois,polióis, glicerina, óleos vegetais e excipientes apropriados para supositórios são os óleos naturais ou endurecidos ,ceras , gorduras e polióis semi-líquidos. As preparações farmacêuticas podem conter ainda agen tes conservantes, agentes solubilizantes,agentes estabilizantes, agentes molhantes, agentes síiulsiíicantes, agentes apala20 /

* dantes, agentes de coloração, agentes edulcorantes, sais para alteração da pressão osmôtica, agentes tampãp, agentes de revestimento e agentes anti-oxidantes.

Para o controlo e prevenção das doenças citadas anteriormente, a dose de componente activo pode variar dentro de grandes limites e isso dependerá,evidentemente, das exigências individuais de cada caso particular. Em geral, no caso de administração oral ou parentérica, uma dose entre cerca de 0,1 e 20 mg Ag, de preferência de cerca de 0,5 a 4 mg/kg por dia deve ser apropriada para adultos embora o limite superior indicado possa ser excedido quando se demonstrar adequado.

Exemplo 1

A) Manteve-se à temperatura ambiente uma solução de 55 mg do iodldrato de 33- (p-aminofenll )-DL-alanil _7-Gly-Asp(0tBu)-Ser(tBu)-0tBu durante 2 horas em atmosfera de árgon numa mistu ra de 10 ml de cloreto de metileno e 5 ml de ácido trifluoroac tico. Após evaporação do dissolvente, obtiveram-se 4-3 mg (rendimento 86 %) de trifluoroacetato de 33~(P-amidinofenil)-DL-alanil _7-Giy_Asp-Ser-0H (2:3), F· F. 223-224-ⁿC de acetato de etilo e éter isopropílico.

B) Preparou-se o éster que serviu como material inicial do seguinte modo:

s) Uma solução, arrefecida a 0°C de 1,95 g de tosilato de

H-Ser(tBu)-0tBu em dimetilformamida foi corrigida para pK 8 mediante adição de N-metilmorfolina. Sm seguida adicionou-se

Ό)'

uma soluçãode2,l g de Z-Asp(OtBu)-OSu em 1Ó0 ml de dimetilformamida. Agitou-se a mistura à temperatura de 0°C em atmosfera de árgon durante 1 hora e manteve-se em refrigeração durante a noite. 0 resíduo que restou da evaporação do dissolvente retomou-se com acetato de etilo e lavou-se com uma solução saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, uma solução de hidro genossulfato de potássio a 10 % e água; secou-se, filtrou-se e evaporou-se obtendo-se 2,09 g (rendimento 30 %) de A-Asp(OtBu) -Ser(tBu)-0tBu, P. F. 79—8o°C, no seio de acetato de etilo/n-hexano.

b) Hidrogenaram-se 1,9 g de Z-Asp(OtEu)-Ser(tBu)-0tBu em

100 ml de metanol na presença de 0,1 g de paládio sobre carvão a 10 %. Após a absorção da quantidade teórica de hidrogénio filtrou-se a mistura e evaporou-se o filtrado até à secagem.

A cromatografia em gel de sílica usando como eluente cloreto de metileno/álcool metílico a 98 : 2, originou 1,28 g (rendimento

%) de H-Asp(0tEu)-Ser(t3u)-0tBu, MS: 389 (M+H)⁺.

c) Analogamente à descrição da alínea a) e a partir

Z-Gly-OSu e de Η-Asp(OtBu)-Ser(tBu)-0tBu obteve-se Z-Gly (3t3u)-Ser(t3u)-0cõu com um rendimento de 8c (c 0,9, metanol).

de

As 0.. o ’ 1 x

d) Analogamente ao processo descrito r.a a hidrogendlise de Z-Gly-Asp( ôtBu>-Ser< oõu>-0 t2u -Asp(OtBu)-Ser(tBu)-0tBu com um rendimento de ínea b), por •obt ove-se H-Gly75 /, EM; 44c (M+H) .

e) Adicionaram-se 67 mg de N-metilmorfolina e 250 mg de

HETU a uma solução de 200 mg de rac Ν-Σ-β-(ρ-cianofenil)-alani22

na (Pharmazie; 4-0, 1965; P· 305) θ 294 mg ce H-uly-Asp(0tBu)-Ser(tõu)-0tBu em 10 ml de dimetilformamida em atmosfera de árgon e manteve-se em mistura durante a noite. Obteve-se um óleo após evaporação do dissolvente que se dissolveu em acetato de etilo, lavou-se a solução com uma solução de carbonato de hidrogénio e sódio a 5 X θ água, secou-se e evaporou-se. Croma tografou-se o resíduo em gel de sílica com acetato de etilo como eluente. Obtiveram-se 1Ó0 mg.de ZN-Z-3-( p-cianofenil )-DL-alanil _7-Gly-Asp(0tBu)-Ser(tBc)-0tBu, mistura de epimeros a 1 : 1,

P. F. 117 - 119°C, no seio de éter dietílico/n-hexano.

f) Uma solução de 362 mg do produto obtido na alínea e) em

4-0 ml de piridina e 3 nil de trietilamina foi conservada durante 3 dias, após saturação com ácido sulfídrlco e em seguida agitada com água e extraída com acetato de etilo. Cromatografou-se o produto em gel de sílica com cloreto de metileno/metanol como eluente. Obtiveram-se 270 mg de /”\^T-Z-3-( p-tiocarboxamidofenil) -DL-alanil_7-Gly-Asp(0tBu)-Ser(tBu)-0tBu, mistura de epimeros a : 1, 3M: 786 (M+H)⁺.

g) Dissolveu-se a tioamida da fase anterior em 3θ ml de acetona, tratou-se com 16 ml de iodeto de metilo e aqueceu-se à temperatura de refluxo durante 3 horas. Após filtração e concentração precipitou o produto por adição de éter dietílico. Cbtiveram-se lSl mg (rendimento 57 X) de iodidrato de ζΓΝ-Ζ-3- ( p-metiltloca rboximidofenil)-DL-alanil -AspÇOtBu )-£er(tBu)-OtBu, (mistura de epíueros a 1 : 1), P.F. 136 - 138^cC.

h) Tratou-se uma solução de lêO mg do iodeto obtido na fase anterior em 33 ml de metanol, com 36 mg de acetato de amónio e

aqueceu-se à temperatura de 60°C durante 5 horas. Após arrefecimento e filtração o produto precipitou no seio de éter dietílico. Obtiveram-se 89 mg (rendimento 51 %) de 2Tn-Z-3-(p-amidinofenil)-DL-alanil_7-Gly-Asp(0tBu)-Ser(tBu)-0tBu sob a forma de iodidrato (mistura de epímeros a 1 : 1), P. F. 150°C (com decomposição), no seio de acetato de etilo/n-hexano.

i) De um modo análogo ao descrito na alínea b), por hidro genólise do produto obtido na alínea h), obteve-se o iodidrato de Zj-(p-amidinofenil-DL-alanil_7_Giy_Asp(0tBu)-Ser(tBu)-0tBu mistura de epímeros a 1 ; 1), P. F. 163 - l64-°C, no seio de acetato de etilo/n-hexano com um rendimento de 70 %.

Exemplo 2

A) Analogamente ao método descrito no exemplo IA, e median te utilização do acetato do iodidrato de /N-Boc-3(p-amidinofe nll)-DL-alanil_7-Gly-Asp(0tBu)-Val-0tBu a 1 : 1 obteve-se o trifluoroacetato de Zf3-(P“^a®idinofenil)-DL-alanil _T-Gly-Asp-Val-OH a 1 : 2, P. F. 174-°C (com decomposição) no seio de metanol/acetato de etilo com um rendimento de 75

B) Pode preparar-se o material inicial do seguinte modo:

a) Por condensação de Z-Asp(OtBu)-OH e H-Val-OtBu obtém-se Z-Asp(0t3u)-Val-0tBu, ? F. 75°C (n-hexano), rendimento 93

b) Por hidrogenólise do produto obtido na alínea a) obteve-se K-Asp(0tBu)-Val-0tBu, P F. 71°C (n-hexano), rendimento 93

c) Por acoplamento de Z-Gly-OSu-e H-Asp(0tBu)-Val-0tBu ob24

teve-se Z-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu, P. F. 132°C (acetato de eti lo), rendimento 8?

d) Por hidrogenólise do produto obtido na alínea c) obteve-se H-Gly-Asp(OtEu)-Val-OtBu, com um rendimento de 8? % teórico, ₌ -33,2° (c 0,6, MeOH).

e) Por acoplamento de rac N-Boc-3-(p-cianofenil)-alanina (Memória Descritiva publicada francesa de 2593 8l4) e H-Gly-Asp(0tBu)-Val-0tBu obteve-se ZN-Boc-3-(ρ-cianofenil)-DL-alanil __7-Gly-Asp(0tBu)-Val-0tBu, P. F. 140 - ΐ45°0 no seio de ace tato de etilo e éter isopropílico, rendimento 66

f) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 E) f), g), h), a partir do composto anterior através de /N-Boc-3-(p-tiocarboxamidofenil)-DL-aianil_J7-Gly-Asp(0t3u)-Val-0t3u, (mistura de epímeros a 1 : 1), rendimento 96 %, EM: 708 (M+H)⁺, e via

Z N-Boc-3-(p-metiltiocarboxamidofenil)-DL-elanil _7-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu sob a forma de iodidrato, (mistura de epímeros a 1 : 1} P. F. 1OO°C Ccom decomposição), rendimento 82 obteve-se o acetato do iodidrato de ^N-3oc-3-(p-amidinofenil)-DL-elanil _7-Gly-Asp(0tBu)-Val-0tBu, (mistura de epímeros a 1 : 1),

?. F. 154-15ó°C com decomposição (acetato de etilo), rendimento.. 89 %.

Exemplo 3

A) Dissolveram-se >5 mg de z7N-Eoc-3-( p-guanidinofenil)-L-slanil J7-_uly-Asp(0tEu)-Val-0t5u em 10 ml de acetato de etilo e trataram-se com 5 ml de acido clorídrico 2,5N em acetato de etilo. Após agitação à temperatura ambiente durante 4 horas, filtrou-se a mistura e lavou-se 0 precipitado com acetato de etilo. Obtiveram-se 44 mg (rendimento 53%) do pentacloridrato de [3-(p-guanidinofenil]-L-alanil-Gly-Asp-Val-OH, P.F. 215°C (com decomposição) no seio de dioxano.

B) Pode preparar-se o material inicial do seguinte modo:

a) Por condensação de N-Boc-3-(p-nitrofenil)-L-alanina e Η-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu obteve-se [N-Boc-3-(p-nitrofenil)-L-alanil]-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu, P.F. 106°C (n-hexano). Rendimento: 72%.

b) Hidrogenou-se uma solução de 890 mg do produto obtido na alínea a) em 15 ml de metanol durante 3 horas, na presença de 200 mg de paládio sobre carvão a 10%. Obteve-se uma espuma após filtração e evaporação do dissolbente que se cromatografou em gel de sílica com acetato de etilo/metanol a 95:5 e cristalizou no seio de éter isopropílico. Obtiveram-se 670 mg (rendimento 79%) de [N-Boc-3-(p-aminofenil)-L-alanil]-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu, P.F. 110 - 112°C.

c) Uma solução de 200 mg do produto obtido na alínea b) e 60 mg de 3,5-dimetil-N-nitro-lH-pirazol-l-carboxamida em 3 ml de etanol, foi submetida a aquecimento â temperatura de refluxo durante 24 horas. Evaporou-se o dissolvente e cromatogrãfou-se o resíduo com gel de sílica em cloreto de metileno/metanol a 98:2. Após recristalização no seio de acetato de etilo/n-hexano obtiveram-se 148 mg (rendimento 66%) de [N-Boc-3-[p-(3-nitroguanidino)-fenil]-L-alanil]-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu,

P.F. 141 - 143°C.

d) Hidrogenou-se uma solução de 118 mg do produto obtido '·>

P.F. 69 na fase anterior em 3 ml de acetato de etilo durante 3 dias na presença de 30 mg de paládio sobre carvão. Após eliminação do dissolvente cromatografou-se o filtrado em gel de sílica com acetato de etilo/metanol a 99:1 para se obterem 59 mg (rendimento 54%) de (N-Boc-3-p-guaninofenil)-L-alanil]-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu, EM: 706 (M*H)⁺.

Exemplo 4

A) Analogamente ao descrito no exemplo 3A, por hidrólise ácida do iodidrato de isobutilamida e [N-Boc-3-(p-amidinofenil)-DL-alanil]-Gly-Asp (OtBu) obteve-se o cloridrato de isobutilamida e [3-(p-amidinofenil)-DL-alanil]-Gly-Asp uma mistura de epímeros a 1:1, P.F. 195 - 198°C (com decomposição) no seio de dioxano, com um rendimento quantitativo.

B) Pode preparar-se o material inicial do seguinte modo:

a) Dissolveram-se 5,5 g de isobutilamina em 5 ml de tetrahidrofurano e adicionaram-se, gota a gota, a uma mistura preparada à temperatura de -10°C constituída por 5,12 g do hidrato de Ζ-Asp(OtBu)-OH, 1,65 ml de N-metilmorfolina e 2 ml de cloro formato de isobutilo em 15 ml de tetrahidrofurano. Após 3 horas estava eliminado o dissolvente e o resíduo retomou-se com acetato de etilo/carbonato de hidrogénio e sõdio a 5%, lavou-se a fase orgânica até se obter ãgua de pH neutro e após seca gem e evaporação do dissolvente com cromatografia do õleo resultante em gel de sílica e acetato de etilo como eluente obtiveram-se 4,53 g de Ζ-Asp (OtBu)-OH-isobutilamida (rendimento 80%), - 70°C no seio de N-hexano.

£Ζ

b) ror hidrogenólise do produto obtido na alínea a) obteve-se Η-Asp(Otbu)-isobutilamida com o rendimento de 97

SM: 189 - 171.

c) Por acoplamento de Z-Gly-OH com o produto obtido na alí nea b) obteve-se a isobutilamida de H-Gly-Asp(OtBu) com o rendimento de 87 SM: *+36, (M+H) ⁺ .

d) Por hidrogenólise do produto obtido na fase anterior obteve-se a isobutilamida de H-Gly-Asp(OtBu) com o rendimento de 42 %, SM: 302, (M+H)⁺.

e) Por acoplamento da N-Boc-3-(p-cianofenil)-alanina racémica e da isobutilamida de K-Gly-Asp(OtBu) racémica obteve-se a isobutilamida de Z*N-Boc-3-(p-cianofenil)-DL-alanil_7-Gly-Asp(OtBu) numa mistura de epímeros a 1 : 1, P F. 117-119°C (acetato de atilo/n-hexano), rendimento 27 %.

f) Analogamente aos métodos descritos no exemplo IB alíneas f), g) eh), por intermédio da isobutilamida de ZTN-Boc-3-(p-tiocarboxamidofenil)-DL-alanil ^T-Gly-Asp(OtBu), mistura de epímeros a 1 : 1, e do iodidrato de isobutilamida de /'N-Boc-3-(p-metiltiocarboximidofenil)-DL-alanil _7-Gly-Asp(OtBu), mistura de epímeros a 1 : 1, P. F. 14$ - 147°G com decomposição, ren dimento: 72 obteve-se 0 iodidrato ds isobutilamida de

-Boc-3-(p-amidinofenil)-DL-alanil -Asp(OtBu)(mistura de epí meros a 1 : 1), P. F. 175 - 178°C com o rendimento de ÓO %.

Exemplo 5

A) Analogamente ao método descrito no exemplo IA e mediante utilização da isobutilamida de (p-amidinofenil)-

ϊ

-DL-alanil J7-Gly-Asp(0t3u) obteve-se o trifluoroacetato de /N-Z-3-( p-amic ir.of enil )-LL-alanil J7-G1>-Asp-isocutilamica mistura de epímeros a 1 : 1), P. F. l4l - l43°C em éter dietílico com um rendimento de 91 7.

B) Pode preparar-se o material inicial do seguinte modo:

a) Por acoplamento de N-Z-3-(p-cianofenil)-alanina racémica e de isobutilamida de H-Gly-Asp(Gtõu). Obteve-se a isobutilamida de Z'N-Z-3-(p-cianofenil)-DL-alanil _7-Gly-Asp(0tBu) (mistura de epímeros a 1 : 1), P„F. 121-123°C (acetato de eti lo/n-hexano) com o rendimento de 91 /·

b) Anagolamente ao método descrito no exemplo ÍB alíneas f), g) e h) por intermédio da isobutilamida de /N-Z-3-(P-tiocarboxamidofenil)-DL-alanil _7-Gly-Asp(0tBu) (mistura de epímeros a 1 : 1) e do iodidrato da isobutilamida de /N-Z-3-(p-metiltiocarboximidofenil)-DL-slanil _7-Gly-Asp(0tBu) obteve-se o iodidrato da isobutilamida de /N-Z-3- ( p-amidir.ofenil )-DL-alanil _7-Gly-Asp(0tBu) (mistura de epímeros) a 1 : 1),

P. F. 160 - 1Ó3°C ^com ° rendimento de 37 fi·

Exemplo ó

Uma solução de '+00 mg de H-Arg-Gly-Asp-Val-OH (Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 82, SO57, 1985 θ de 143 mg de bromidrato de piridina em 15 ml de dimetilformamida foi submetida a tratamento com 435 mg de Z-Aeg(Z)-OSU. Ajustou-se o pK da mistura reaccional para 8,5 com N-metilmorfolina, agitou-se durante a noite e evaporou-se em seguida. Dissolveu-se o resíduo com aci do acético 0,2N e cromatografou-se numa resina poli-sacerídi22.

/ ca (Sephadex 0-10) coe ácido acético 0,2'í. Reuniram-se as fracções uniformes e licfilizaram-se. Cromatografou-se uma solução aquosa do liofilizado numa resina de poliestireno sob a forma de acetato (Dowex 4-4·). Liofilizou-se o eluato. Obti veram-se 14-3 mg de Z-Aeg(Z)-Arg-Gly-Asp-Val-OH; EM: 814- (M+H)⁺.

Exemplo 7

Ridrogenou-se uma solução de 120 mg de Z-Aeg(Z)-Arg-Gly -Asp-Val-OH (exemplo 6) em c.0 ml de ácido acético Ο,ΙΝ na presen ça de paládio sobre carvão analogamente ao descrito no exemplo 1E) alínea b). Filtrou-se o catalisador e liofilizou-se o filtrado. Obtiveram-se 72 mg do acetato de Aeg-Gly-Asp-Val-OH a 1 : 1; EM: 5^6 (M+H)⁺.

Exemplo 8

Tratou-se uma solução de 216 mg de H-Arg-Gly-Asp-Ser-OH (patente de invenção norte-americana NQ 4-578079) em 5 ml de dimetilformamida e 5 ml de água, com 24-2 mg de Z-Aeg(Z)-0Su e 0,11 ml de N-metilmorfolina. Agitou-se a mistura reaccional durante 18 horas e em seguida corrigiu-se o pH para 5,3 com ácido acéti co. Extraiu-se a mistura reaccional com acetato de etilo. Tratou-se a fase aquosa com paládio sobre carvão e hidrogenou-se durante 2 horas. Filtrou-se o catalisador soc sucção e liofilizou-se o filtrado. Dissolveu-se o liofilizado em ácido acético 0,2N e cromatografou-se numa resina poli-sacarídica (Sephadex 0 25S) com ácido acético 0,2N. Liofilizaram-se as fracções uniformes reunidas. Obtiveram-se 150 mg co acetato de

Ζ ζ

'**'£«** *** ·>

Aeg-Arg-Gly-Asp-Ser-OK (1 : 2)-, SM: 53^ (Μ+Η)⁺.

Exemplo 9

Tratou-se uma solução de 237,5 ug de H-Arg-Gly-Asp-Val-OH em 5 ul de acetona e 5 ul de água com 22ó mg de cloreto de sulfonil-2-naftaleno e em seguida com 168 mg de carbonato de hidrogénio e sódio. Apo's agitação durante 2 horas, acidificou-se a mistura com ácido acético e destilou-se a acetona. Cromatografou-se o resíduo aquoso em Sephadex G-25S com ácido acético 0,2N. Reuniram-se as fracções uniformes que se liofilizaramv Obtiveram-se 172 mg de (2-naftilsulfonil )-Arg-Gly-Asp-val-OH; EM: 636 (M+R)⁺.

Exemplo 10

Uma suspensão de 3 & de um veículo constituído por resina de estireno divinilbenzénica a 1 % contendo resíduos de álcool p-benziloxibenzílico em 30 ul de dimetilformamida, foi submetida a tratamento com 0,6 g de Fmoc-Nal(1)-0H (pedido de patente de Invenção europeia 126762) e em seguida com 523 mg de HBTU, 16,8 mg de 4-dimetilaminopiridina e depois com 0,24 ml de DIFEA. Agitou-se a mistura reaccional durante 24 horas, fil trou-se a resina em seguida por sucção e lavou-se com dimetilformamida. Acetilaram-se os grupos hidroxilo livres durante 30 minutos com 1,13 ul de anidrido acético, 2,05 ul de N-etilildiiscpropilamina em 3θ ul de dimetilformamida. 0 ciclo de síntese está descrito no protocolo seguinte:

Fase

Reagente

Tempo â£·· f '^X

1	DMF		2	X	1 min.
2	20 % piperidina/DMF	1	X	7 min.
3	DMF		5	X	1 min.
4	2,5 eq.	Acido Fmoc-amino/DMF
	+ 2,5 eq.	HBTU
	+ 2,5 eq .	N-etildiisopropilamina	1	X	90 min.
5	DMF		3	X	1 min.
6	Álcool isopropilico	2	X	1 min.

Utilizou-se em cada fase 30 ml de dissolvente. 0 aco plamento de Fmoc-Asp-OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Arg(HCl)-0H foi realizado de acordo com o protocolo citado antes. Introdu ziu-se na cadeia peptídica Boc-Aeg(Boc)-OSu. Após terminação da síntese secou-se a resina peptídica e dividiu-se ao meio. Suspendeu-se esta em 10 ml de TFA/5 ml de cloreto de metileno e 1 ml de água agitando-se durante 90 minutos. Retirou-se a re sina por filtração e concentrou-se o filtrado. Liofilizou-se o resíduo no seio de água. Cromatografou-se o liofilizado numa coluna de Sephadex G-25S em ácido acético 0,2N. Liofilizaram-se as fracções uniformes reunidas. Cromatografou-se o liofilizado em Dowex M+ e liofilizou-se o eluído. Obtiveram-se 4-9 mg do acetato de N-Aeg-Arg-Gly-Asp-Nal(1)-0H (1 ; 1), EM: 6M+ (M+H)⁺.

Exemplo 11

Analogamente ao método descrito no exemplo 10 e partindo de 1,05 g de Fmoc-Ile-OH, obtiveram-se 73,5 mg de Aeg-Arg-GlyJ2

-Asp-Ile-OH, TFA (1 : 1); SM: 5^0 (M+H) ⁺ .

Exemplo 12

A) Hidrogenou-se uma solução de 230 mg de Boc—Lys(Z)-Gly-Asp(0Bzl)-Val-0Bzl em 10 ml de metanol na presença de paládio sobre carvão. Filtrou-se o catalisador e concentrou-se o filtrado. Dissolveu-se o resíduo em 2 ml de água, ajustou-se o pH para 9,5 com hidróxido de sódio 2N e tratou-se com 109 mg de cloridrato de acetimidato de metilo. Corrigiu-se novamente o valor do pH para 9,5 θ agitou-se em seguida durante 90 minutos a mistura reaccionai que se acidificou para pH 4 com ácido clorídrico IN e que se cromatografou em Sephadex G-25S com ácido acético 0,2N. Reuniram-se as fracções uniformes e liofilizaram -se. Obtiveram-se 72 mg de /'N2-Boc-N6-(l-iminoetil)-L-LisilJ-Gly-Asp-Val-OH, EM: 559 (K+H)⁺.

B) Preparou-se o material inicial do seguinte modo:

Uma solução de 5δβ mg H-Gly-Asp(OBzl)-Val-OBzl (exemplo 15 Bb) e de 477,5 mg de Boc-Lys(Z)-OSu em 10 ml de dimetllformamida foi corrigida para um pK de 8,5 com N-metilmorfolina.

Após agitação durante 18 horas concentrou-se a mistura e distribuiu-se o resíduo entre acetato de etilo e água. Lavou -se a fase orgânica com uma solução aquosa saturada de carbona* to de hidrogénio e sódio, uma solução de sulfidrato de potássio a 5 %/sulfato de potássio a 10 % e uma solução saturada de cloreto de sódio. Secou-se e filtrou-se. Concentrou-se o filtrado e cristalizou-se o resíduo no seio de éter dietíiico. Obtiveram-se 3θ5 mg de Boc-Lys(Z)-Gly-Asp(JBzl)-Val-OBzl, r.F. 95-1O1°C.

Exemplo 13

A.) Dissolveram-se 37θ mg de ácido o-/Z-Arg(Z2)-Gly-Asp(OtBu)-NH j7-benzói co, 5θ ml de metanol e hidrogenou-se na presen ça de paládio sobre carvão . Cõncentrou-se o filtrado do ça talisador no vácuo, dissolveu-se o resíduo em 50 ml de dimetllformamlda e tratou-se com h6 mg de cloridrato de piridina e 0,07 ml de DIPEA. Introduziram-se 203 mg de HOBTU em 100 ml de dimetilformamida e adicionou-se a solução preparada anteriormen te, gota a gota, em atmosfera de árgon, Após agitação durante 20 minutos adicionou-se mais 101,5 mg de HOBTU e 0,035 ml de DIPEA. Agitou-se a mistura reaccional durante 18 horas e concentrou-se, dissolveu-se o resíduo em metanol e água e cromatografou-se em Dowex hh. Concentrou-se o eluído e dissolveu-se o resíduo em 20 ml de TFA e concentrou-se após 30 minutos.

Após cromatografia em gel de sílica modificada quimicamente (Lichorosorb RPlS), eluído com TFA a 0,1/etanol obtiveram-se 102 mg de trifluoroaceto de ácido N-Z (o-azidobenzoíl )-Arg-Gly-Asp_7-antranílico a 1:1, EM: 6ll (M+H)⁺.

B) Preparou-se o material ácido inicial do seguinte modo:

a) Tratou-se uma solução de 1,6 g de Z-Asp<0tBu)-0H e 2 g do tosilato do antranilato de benzilo em 10 ml de dimetilformamida com 1,92 g de TOBTU e 1,78 ml de DIPEA. Após agitação durante 20 horas distribuiu-se a mistura reaccional entre acetato de etilo e água. Lavou-se a fase orgânica com uma solução de sulfidrato de potássio a 5 % e de sulfato de potássio a 10 água, solução saturada de carbonato de hidrogénio e sódio, água

e solução saturada de cloreto de sódio e secou-se sobre sulfato de sódio. Retirou-se o agente de secagem por filtração e con centrou-se o filtrado. Após cristalização no seio de etanol ob tiveram-se 0,75 S do ácido N-fZ-Asp(OtEu) _7-antranílico.

P. F. 123 - 124°C.

b) Analogamente ao método descrito no exemplo 7, por hidro genação do produto obtido na alínea a) obtiveram-se 401 mg do ácido N-Z*H-Asp(OtBu) _7-antranílico.

c) Tratou-se uma suspensão de 401 mg do produto obtido na alínea b) em 10 ml de dimetilformamida com Ó12 mg de Z-Gly-OSU. Ajustou-se o pH da mistura reaccional para 8,5 com N-metilmorfo lina e agitou-se durante 4 horas. Tratou-se a solução reaccional com 0,52 ml de dietilaminoetilamina, agitou-se durante 10 minutos e em seguida distribuiu-se entre acetato de etilo e sul fidrato de potássio a 5 ^/sulfato de potássio a 10 % em solução. Lavou-se a fase orgânica com uma solução saturada de cloreto de sódio e secou-se. Após filtração concentrou-se o filtrado, dis solveu-se o resísduo em metanol e hidrogenou-se na presença de paládio sobre carvão. Retirou-se o catalisador por filtração, concentrou-se o filtrado e dissolveu-se o resíduo em 10 ml de

CO~rigiu-se ο ρΗ para 3,5 com N-metilmorfolina. Após agitação durante 13 horas precipitou-se o produto vertendo-o numa solução de sulfidrato de potássio a 5 X e sulfato de potássio a 10 %.

Por cromatografia em gel de sílica ccm cloreto de metileno/metanol obtiveram-se, após cristalização no seio de etanol, 410 mg do ácido o-Z'Z-Arg(2₂)-61y-Asp(0tBu)-BH _7-benzóico,

P. F. 102 - 103°C.

dimetilformamida, tratou-se ccm. Ó73 mg de Ζ-Arg(Z₂)-OSU

Exemplo 14

A) Tratou-se uma soluçso de 109 mg de Boc-Arg-óly-Val-Gn em 3 ml de um tampão de borato de sódio 0,2N de pH 9, com 55,5 mg de 1,2-ciclohexenodiona e em seguida agitou-se em atmosfera de árgon durante 24 horas. Acidificou-se a solução reaccional para pH 4 com ácido acético e crcmatografou-se em SephadexG-25S com ácido acético 0,2N. Reuniram-se as fracções uniformes e licfilizaram-se, obtendo-se 46 mg ce 2TN2-5oc-N5-(3^aj4>5, 6,7,7a-hexahidro~3a,7a-dihidro-lK-benzimidazól-2-il-L-ornitil _7 -Gly-Asp-Val-OK, EM: 653 (M+H)⁺.

3) Para s preparação do ácido que constituiu o material in.

ciai £ratou-se uma solução de 1 g de H-Arg-Gly-Asp-Val-OH e de 340 mg de bromidrato de piridina em 15 ml de dioxano e 15 ml de água, sucessivamente, com 43o mg do dicarbonato de di-t-butilo e 0,59 g de carbonato de hidrogénio e sódio. Após agitação durante lô horas concentrou-se a mistura reaccional e purificou-se o resíduo numa resina copolimérica porosa de estireno-divinidbenzeno (MCI gel CHR2QP) com água etanol. As fracções reuni das uniformes concentraram-se e liofilizaram-se com água. Obti veram-se 260 mg de Boc-Arg-Gly-Val-OH, EM: 5*+6 (1:+3()^-1-.

Exemplo 15

A) Tretou-se, sucessivamsnte uma solução de 275,5 ml de

X-5oc-3-(p-3minofenil)-DL-slanil-Glj-Asp-Val-OH em 3 ml de água com 13Ó mg de carbonato de potássio e 124 mg de ácido aminoiminometanossulfónico. Após agitação durante 15 horas acidificou-

-se a mistura reaccional coc ácido acético glacial e cromatografou-se em Sephadex 0-252 com ácido acético 0,2N. Reuniram-se as fracções uniformes e liofilizaram-se obtendo-se 205 mg do sal potássico de Z*M-Eoc-3-(p-guanidinofenil)-DL-slanil_7-Oly-Asρ-Val-OH (a 1:1), SR: 632 (M+h)⁺.

B) Preparou-se o material inicial do seguinte modo:

a) Tratou-se uma solução arrefecida para a temperatura de

20°C de 32,3 o de Boc-Asp(0Bzl)-0H em 150 ml de dimetilformami da com 11 ml de N-metilmorfolina e 13,07 ml de cloroformato de isobutilo. Obteve-se uma suspensão que se agitou à temperatura de -15°C e tratou-se com uma suspensão à temperatura de -20°C de 37,95 g de tosilato de Η-Val-OBzl e 11 ml de N-metilmorfolina em 150 ml de dimetilformamida. Agitou-se a mistura reaccional a uma temperatura inferior a -10°C durante 10 minutos e em seguida à temperatura ambiente durante 2 horas, filtrou-se e concentrou-se o filtrado. Dissolveu-se o residuo em acetato de etilo, lavou-se com uma solução de sulfato de hidro gênio e potássio a 5 % s sulfato de potássio a 10 %,com água, com solução saturada de carbonato de hidrdgénio e sodio, com água e com solução saturada de cloreto de sódio e secou-se. Concentrou-se a fase orgânica obtendo-se 52,9 g de Boc-Asp(OBzl )-Val-0Bzl. Retiraram-se 10,29- g e dissolveram-se em 30 ml de tetrahidrofurano e em seguida concentrou-se. Cristalizou-se o resíduo no seio de acetato de etilo/hexano obtendo-se 8,3 g de R-Asp(0Bzl)-Val-0Bzl. TFA a 1 : 1, p. F. 147-19-õ°C

c) Tratou-se sucessivamente uma solução de 4,2 g de H-Asp(OBzl)-Val-0Bzl. TFA em 50 ml de acetato de etilo com 2,72 mg de boc-Gly-OSu e 0,3S ml de N-metilmorfolina agitando-se _PIr.

ΔΖ *

seguida à temperatura de 20°C, durante 72 horas. Distribuiu-se a mistura reaccional entre acetato de etilo e a'gua e lavou-se a fase orgânica com uma solução de sulfato de hidrogénio e potássio a 5 % e sulfato de potássio a 10 %, água, solu ção saturada de carbonato de hidrogénio e de potássio, água e solução saturada de cloreto de sódio. Após secagem concentrou-se a solução, dissolveu-se o resíduo em 30 ml de ácido tri fluoroacético, manteve-se 20 minutos à temperatura de 20°C e em seguida concentrou-se. Após cristalização com acetato de etilo/ /hexano obtiveram-se 3,5 ê de H-Gly-Asp(OBzl)-Val-0Bzl, TFA 1:1, P. F. 150 - 151°C.

c) Tratou-se sucessivamente uma solução de 1,08 g de N-Boc-3-(^-nitrofenil)-alanina racémica e de 2,0% g de K-Gly-Asp(OBzl) -Val-OBzl. TFA em 15 ml de dimetilformamida com 1,% g de HBTU e 1,23 ml de N-etildiisopropilamina. Após agitaçáo durante 3 ho ras, distribuiu-se a mistura reaccional entre acetato de etilo e água. Continuou-se a transformação de acordo com o método descrito na alínea b) e, após cristalização no seio de acetato de etilo/hexano obtiveram-se 1,8 g de N-Boc-3-(%-nitrofenii)-DL-alanil-Gly-Asp(0Bzl)-Val-03zl, P. F. 155 - 157°C.

d) Hidrogenou-se uma solução de 1,5 g de N-3oc-3~(%-nitro fenil)-DL-alanil-uly-Asp(OEzl)-Val-0Bzl em 50 ml de ácido acético glacial a 90 na presença de paládio sobre carvão a 10%. netirou-se o catalisador por filtração e liofilizou-se em água. Obtiveram-se 910 mg de N-Boc-3-(%-aminofenil)-DL-alanil-óly-Asp-Val-OH, SM: 552 (M+H)⁺.

Exem±3 z

Exemple 16

A) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 alínea A), mediante acidólise de/N-Eoc-3-(ρ-amidinofenil)-DL-alani^-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-OHj obteve-se /73-( p-amidinofenil)-DL-alani^-Gly-Asp-Nal(l)-OH.TFA a 1 : 2 (mistura de epímeros a 1 : 1),

P. F. 17'0°C com decomposição, (etanol/acetato de etilo).

B) nreparou-se o material inicial do seguinte modo:

a) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 B),alínea

a) por acoplamento de Z-Gly-OH e H-Asp(CtBu)-OMe obteve-se Z-Gly-Asp(0t3u)-0Me, P. F. 92 - 95°C, no seio de hexano, rendimento 89 % do teo'rico.

b) Adicionaram-se, gota a gota, com arrefecimento, 70 ml de hidróxido de sódio IN a uma solução arrefecida de 27,0 g do composto obtido na fase ?nterior em 200 ml de acetona e agitou-se continuamente durante 2 horas. Corrigiu-se o pH para 4 por adição de ácido cítrico aquoso a 10 % e evaporou-se o dissolven te,obtendo-se deste modo um produto impuro. Após recristalieação no selo de éter distílico/hexano obtiveram-se 19,04 g de Z-Gly-Asp(0tBU)-0H, P. F. 101 - 104°C, com rendirrento de 70 %.

c) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 B) alínea

a) por acoplamento do produto obtido na fase anterior com K-Nal(l)-0Me, obteve-se Z-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-OMe, P. F. 59°C (em hexano) ccm o rendimento de 34

d) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 B) alínea

b) por hidrogenólise do produto obtido na fase anterior obteve-se H-Gly-Asp(0tBu)-Nal(1)-OMe, P. F. 67 - 6ô°C (em hexano) com o rendimento de da 72 %

e) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 B) alínea e) por acoplamento de N-Boc-3-(p-cianofenil)-DL-alanina com o produto obtido na fase anterior obteve-se [N-Boc-3-(p-cianofenil)-DL-alanil]-Gly-Asp(OtBu)-Nal(1)-OMe (epímeros) com um rendimen to quantitativo, EM: 730 (M+H)⁺.

f) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 Β), alínea

f) por tionilação do produto obtido na fase anterior obteve-se [N-Boc-3-[p-(tiocarbamoí1)-fenil]-DL-alanil]-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-OMe (epímeros), P.F. 110 - 112°C, com um rendimento de 75%.

g) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 Β), alínea

g) , por metilação do produto obtido na fase anterior obteve-se o iodidrato de [N-Boc-3-[p-[(metiltio)-formimidoíl]-fenil]-DL-alanil]-Gly-Asp(OtBu)-Nal(1)-OMe (epímeros), P.F. 128-130°C (éter, com um rendimento de 64%.

h) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 B) alínea

h) por reacção do produto obtido na fase anterior com acetato de amónio obteve-se o iodidrato de [N-Boc-3-(p-amidinofenil)-DL-alanil]-Gly-Asp(OtBu)-Nal(1)-OMe (epímeros), P.F. 139 - 141°C (éter), com um rendimento de 70%.

i) De um modo análogo ao descrito na alínea b), a partir do produto obtido na fase anterior obteve-se [N-Boc-3-(p-amidinofenil) -DL-alanil]-Gly-Asp(OtBu)-Nal(1)-OH (epímeros),

P.F. 206°C (acetato de etilo) com um rendimento de 97%.

Exemplo 17

Adicionaram-se 30 mg de trietilamina e 24 mg de dicarbo nato de di-t-butilo, á temperatura ambiente gaseificando com

4θ

t árgon, a uma solução de 70 mg de trifluoroacetllo de Z~3-(p-ami dinofenil)-DL-alanil_7-Gly-Asp-Val-OK a 1 : 2 (mistura de epímeros a 1 : 1) (exemplo 2), em 0,6 ml de dimetilformamida a agi tou-se a mistura durante 75 minutos. Após a adição de ácido ace tico para se obter um pH de 4 evaporou-se a mistura até à secagem e cristalizou-se o resíduo no seio de acetato de etilo.

Após recristalização no seio de metanol/acetato de etilo obteve-se yTN-Boc-3-(p-amidinofenil)-DL-alanil_7-Gly-Asp-Val-0H a 1 : 1 (epímeros), rendimento: 63 %.

Exemplo 18

A) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 A, utilizando o iodidrato de p-fluorofenetiltilainida de Z'N-Boc-3-( p-ami dinofenil)-DL-alanil_7-Gly-Asp(0tBu) (epímeros a 1 : 1) obteve-se o trifluoroacetato da p-fluorofenetilamida de 3-(p-amidino fenil )-DL-alanil _7-Gly-Asp (epímeros 5 : δ), P. F. 192-195°C (etanol/acetato de etilo), rendimento: 6l %.

B) 0 éster que serviu como material inicial preparou-se como se segue:

a) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 B) alínea

e),por acoplamento de Z-Gly-Asp(0tBu)-0H (exemplo 16 B, alínea

b) com 4-fluorofenetilamina e HBTU obteve-se p-fluorofenetilami da de Z-Gly-Asp(OtBu); SM: 502 (M+H)⁺.

b) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 3 alínea b) por hidrogenólise catalítica do produto obtido na fase anterior obteve-se p-fluorofenetilamida de H-Gly-Asp(OtBu); SM: 360 ·Λ+Η.)⁺.

c) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 3 alínea e), por acoplamento de N-Eoc-3-(p-cianofenil)-alanina racémica, com

4-1 λΛ\ι o produtoobtido na fase anterior, obteve-se a p-fluorofenetilamida de /N-Boc-j-Cp-cianofenil)-DL-alanil_7-Gly-Asp(0tBu) (epímeros a 1 : 1), EM: 662 (M+Na)⁺.

d) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 B alínea f), por reacção do produto obtido na fase anterior com ácido sulfldrico obteve-se /N-Boc-3-77p-tiocarbarcoíl)-fenil^-DL-alanilJ²-Gly-Asp(OtBu)-p-fluorofenetilamida (epímeros a 1 : 1), EM: 6/4(M+H) .

e) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 B) alínea

g), por reacção do produto obtido na fase anterior com iodeto de metilo, obteve-se o iodidrato de p-fluorofenetilamida de /”N-Boc -3-/*ρ-(metiltioformimidoíl)-fenil)-DL-alanil _7-Gly-Asp(0tBu) (epímeros a 1 : 1), P. F.. 134· - 13ó°C, com decomposição (éter).

f) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 B alínea h), por reacção do produto obtido na fase anterior com acetato de amdnio, obteve-se o iodidrato de p-fluorofenetilamida de /'(-Soc -3-p-emidinofenil)-Dl-alanil _7-0iy-Asp(0t3u) (epímeros a 1 : 1), P. F. 90 - 92°C < com decomposição a partir de éter dietílico.

Exemplo 19

A) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 A, mediante aplicação de (p-amidino-nidrocinamoíl)-Gly-Asp(0tBu)-Nal(l)-0H, obteve-se o trifluoroacetato de (p-amidino-hidrccinamoíD-Gly-Asp-Nal(1)-0H (1 : 1), τ. F. 19o - 199°C com um rendimento de 48 (etanol/étsr).

Preparo u-se

ε) por

Analogamente acoplamento do á o éster inicial, do seguinte modo: ao método descrito no exemplo 1 B.slíne eido 3-(P-cisnofenil)-propiénico com H-01

X.

-Asp(0t5u)-Nal(1)-OMe (exemplo ló E) alínea d) obteve-se (p-cia no-hicrocir.amóil)-ulj-Asp(OtBu)-Nal(l>-0Me, P. F. 112 - 113°C (cloreto de metileno/hexano).

c) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 B, alíneas

f), g), h), por reacção do produto obtido na fase anterior sucessivamente com ácido sulfidrico, iodeto de metilo e acetato de amónio, obteve-se o iodidrato de (p-amidino-hidrocinamoíl)-Gly-Asp(OtBu)-Nai(l)-OMe, P. F. 140 - 142°C (éter dietílico).

c) Analogamente ao método descrito no exemplo 16 3, alínea

b) por saponificação alcalina do produto obtido na fase anterior, obteve-se (p-amidino-hidrocinamoíl)-Gly-Asp(OtBu)-Nal(l)-0H, P. F. 236 - 237°G, (água).

Exemplo 20

Analogamente ao me'todo descrito no exemplo 1 A), median te utilização do iodidrato de /7M-Boc-3-( p-amidinofenii )-D-alanil J7-Gly-Asp(0tBu)-Val-0tBu, obteve-se o trifluoroacetato de /73- ( p-amidinofenil )-D-alanil _7-Gly-As p-Val-OK (1 : 2),

P< F. 128°C (com decomposição) e rendimento quantitativo (éter dietílico).

Exemplo 21

A) De um modo análogo ao descrito no exemplo 16 3) alínea

b), por saponificação do iodidrato de /“M-Z/ N-Boc-3-(P-smidino fenil)-DL-alanil _7-Giy-Asp(CtBu) _7-p-amino_7-tenzoato de metilo (epímero 1:1), obteve-se 0 ácido £ N- /7/7-1-300-3^-( p-amidinofenil)-DL-alanil_7-Gly-;sp_7-p-?mino_7- benzóico (epímero 1:1),

%

P. F. 205 - 20ó°C, com o rendimento de 48 % (metanol).

B) Preparou-se o material inicial do seguinte modo:

a) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 3) alínea a), por acoplamento do p-aminobenzoato de benzilo e Z-Gly-As p(OtEu)-OK octeve-se Ζ N-Z Z-Gly-Asp(OtBu) _7-p-amino J7-benzoato de benzilo com o rendimento de 32 EM: 590 (M+H)⁺.

b) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 B) alínea

b) por hldrogenólise do produto obtido na fase anterior, obteve-se o ácido ZN-Gly-Asp(OtEu) J7-P-amino _7-benzóico, P.F. 1ÓO°C (com decomposição)no seio de metanol/acetato de etilo.

c) A partir do produto obtido na fase anterior por metilação com diazometsno obteve-se ZN-Z'Gly-Asp(OtBu)_7-p-amino_7-benzoato de metilo, P. F. 78 - 82°C, com rendimento de 77 % (hexano).

d) Analogamente ao método descrito no exemplo: 1 Β), alínea e) por acoplamento de N-Eoc-3-(4-cianofenil-alanina racémica e do produto obtido na fase anterior obteve-se Z”N-ZZ'N-Boc-3-( p-cianofenil)-DL-alanil JZ-õly-Asp(OtBu) JZ-p-amino _7benzoato de metilo (mistura de epímeros 1:1), P. F. 108°C (acetato de etilo/hexano), com rendimento de 51 %.

e) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 E), alíneas f), g), a partir do produto obtido na fase anterior por tio nilação e metilação obteve-se o iodidrato de Z*N-Z*ZN-Boc-3-(p-metiltioformimidoil)-fenil Z7-DL-alanil _7-óly-Asp(0t£u) J-p-amino JZ-oenzoato de metilo (epímeros 1:1),

p. F. 150 - 151°C, com rendimento de 77 7 (éter dietílico).

f) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 3, alínea

h) a psrtir do produto obtido nterior por amon^lise,

1+1+ obteve-se o iodidrato de Z*N-ZZN-boc-3-( p-amidinofenil )-DL-alanil _7-Gly-Asp(0tBu) JZ-p-amino _7-cenzoato de metilo (epímeros 1 : 1)₇ P. F. 179 - l3lⁿC, com decomposição e rendimen to de 79 % (éter dietilico).

Exemplo 22

Analogamente ao método descrito no exemplo 1 A), por hidrólise do produto obtido de acordo...com a descrição do exem pio 21, obteve-se o ácido Ζ’Ν-/'Z3^_( P~^aniidinofenil)-DL-alanil _7-Gly-Asp_7-p-amino J7- benzóico, P. F. 2l4-2l6ⁿC (MeOH), (epímeros 1 : 1), rendimento 78 %·

Exemplo 23

A) Uma solução de 1Õ0 mg de (p-ciano-hidrocinamoíl)-Gly-Asp-Val-OH numa mistura de 10 ml de metanol/solução aquosa concentrada de amoníaco (2 : 1), hidrogenou-se, na presença de l80 mg de níquel de Baney. Após 20 horas, filtrou-se o catalisador e evaporou-se o filtrado até secagem, purificou-se o resíduo por meio de resina de permuta iónica sob a forma de H⁺ e cristalizou-se no seio de hexano. Obteve-se (p-aminometil-hidrocinamoíl)-Gly-Asp-Val-0H, P. F. 175°C, com decomposição), rendimento: 25 t.

B) 0 material inicial nitrilo, P. ?. I32 - 13i+°C (aceta to de etilo/hexano), preparou-se com o rendimento de Ó9 Ã de um modo análogo ao descrito nc exemplo IA) por acidólise de (p-ciano-hidrocinamoíl)-Glj-Asp(0tBu)-Val-0tBu (exemplo 24 B) a ) .

Exemplo 24

A) Analogamente ao exemplo 19 A),-a partir de o iodidr»to de (p-amidino-hídrr>cinsmoil )-Gly-Asp(OtBu)-Val-Otbu obteve-se o trifluoroacetato de (p-amidino-hidrocinamoil)-Gly-Asp-Val-0H (1 : 1,1), P. F. l4l - l43°C , com rendimento quantitativo (éter dietílico).

B) Preparou-se o éster inicial do seguinte modo:

a) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 B), alínea e), por acoplamento do ácido ^-ciano-hidrocinâmico com H-Gly-Asp(OtBu)-Val-Ot£u, (exemplo 2 B), alínea d) obteve-se (p-ciano-hidrocinamoíl)-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu, P.F. 132-134°C, (acetato de etilo/hexano) com rendimento de 87 %.

b) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 3), alínea

f) , por tionilação do produto obtido na fase anterior obteve— -se p-(tlocarbamoíl)-hidrocinawaíI-Gly-Asp(QtBu)-Val-OtBu,

P. F. 7O-73°C com o rendimento de /2 % (hexano).

c) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 E), alínea

g) , por metilação do produto obtido na fase anterior, octeve-se o iodidrato de p-Z7(metiltio)-formimidoíl _7-hidrocinamoíl-uly-Asp(OtBu)-Val-OtBu, P. F. 55 - 60°C, rendimento de 94 % (éter dist Í1ico/hexano)

d) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 B), alínea

h) , por amonolização do produto obtido na fase anterior, obteve -se o iodidrato de (p-emidino-hidrocinamoil)-Gly-Asp(OtEu)-Val-OtBu, P. F. 116 - 120°C, com o rendimento de 90 / (hexano).

oxem46

Exemplo 25

Analogamente ao método descrito no exemplo IA), a par tir de o iodidrato de /'N-Boc-3-(p-amidinofenil)-L-alanil_7-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtBu, obteve-se Z3~.( p-amidinofenil )-L-ala nil _7-Gly-Asp-Val-0H sob a forma de trifluoroacetato (2 : 3),

P. F. 164 - 166°C com o rendimento de 75 > (etanol/acetato de etilo) ·

Exemplo 26

A) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 A), por acidóllse do iodidrato de /(p-amidinofenoxi)-acetil_7-Gly-Asp(OtBu)-Val-OtEu com ácido trifluoroacético, obteve-se o tri fluoroacetato de (p-smidinofenoxi)-acetil-Gl>-Asp-Val-QH,

P. F. 140 °C, com um rendimento de 6/ % \ acetato de. etiio/hexano) .

E) Preparou-se o éster inicial do seguinte modo:

a) Analogamente ao exemplo 1E), alínea e), por acoplamento do ácido p-cianofenoxiacético com H-Gly-Asp-(OtBu)-Val-OtBu, obteve-se /“p-(cianofenoxi)-acetil j7-Gly-Asp-(0tBu)-Val-OtBu, P. F. 55°C (acetato de etiio/hexano), com o rendimento de 81

b) Analogamente ao método descrito no exemplo IS, alínea f), mediante reacção do produto obtido na fase anterior com ácí do sulfídrico, obteve-se /ρ-(tiocarbamoíl)-fenoxiacetil _7-óly-Asp-(OtBu)-Val-GtBu, com o rendimento de tO À do teórico,

ΞΜ: 595 /G·

c) Analogamente ao métado descrito no exemplo 1B), alínea

3/

X f

g) ,mediante reacçao do produto obtido na fase anterior com iodeto de metilo, obteve-se o iodidrato de Z*p-metiltio)-formími doil J7-fenoxiacetil-uly-Asp-(0tBu)-Val-0t5u, com o rendimento de 83 %, EM: 609 (M+H)⁺.

d) Analogamente ao método descrito no exemplo 1B), alínea

h) , mediante reacção do produto obtido na fase anterior com acetato de amónio, obteve-se o iodidrato de Z* (p-amidinofenoxi)

-acetil _7-uly-Asp-(0t3u)-Val-0tBu, P. F. 102 - 10ó°C, com o rendimento de 83 % (acetato de etilo/hexano).

Exemplo 2/

A) Analogamente ao método descrito no exemplo IA), por uti lização do iodidrato de (p-amidinofenil)-acetil-Gly-Asp-(0t3u)-Val-OtBu obteve-se o trifluoroacetato de (p— amldinofenil)-ace til-Gly-Asp-Val-OH (5 : *+). P. F. 175 - 178°C, com um rendimen to de 53 % (acetonitrilo/metanol).

B) Preparou-se o éster inicial do seguinte modo.

á) Analogamente ao método descrito no exemplo 1B), elinea

e) , por acoplamento do ácido p-cianofenilacético (j. Chem. Soc.; 7hh; 19hl) com Η-Gly-Asp-(OtBu)-Val-OtBu obtido no exemplo 23), alínea d), obteve-se p-(cianofenil)-acetil-Gly-Asp-0tBu)-Val-0tBu, P. F. 111°C (acetato de etilo/hexano).

b) Analogamente ao mét^dn descrito no exemplo lfi), alíneas

f) , g) eh), mediante reacção do produto obtido na fase anterior com ácido suifídrico, iodeto de metilo e acetato de amónio ©feteve-se (p-amidinofenil)-acetil-Gly-A5p-(OtBu)-Val-OtBu,

EF.: 562 (y.+H) .

^— Ζ

Λ

Exemplo 28

Α) Agitaram-se em atmosfera de hidrogénio, durante 28 horas,

216 mg do éster benzílico de Ν-/ Ν-/. N-( benziloxicarbonil) -3-f z N-(benziloxicarbonil)-amidino U-fenil ^-DL-alanil J-Glicil -alanina e 72 mg de paládio sobre acrvão em 4,3 ml de etanol(ácido acético a 19 : 1. Cromatografou-se o resíduo em gel de sílica com metanol/ácido acético a 9 : 1· Evaporaram-se as fracções puras e dissolveu-se o resíduo em ácido clorídrico diluído, filtrou-se, neutralizou-se com amoníaco diluído, e evaporou-se o filtrado. Retomou-se o resíduo com metanol, filtrou-se e tratou-se o filtado com éter dietílico. 0 precipitado foi eliminado por centrifugação, lavado com éter dietílico e seco. Obtiveram-se 28 mg do dicloridrato de N-/ N-3-(p-amidinofenil)-DL-alanil J -glicil /] - p-alanina , EM: 336 (27, M+H) ⁺ .

B) Para a preparação do éster inicial, acoplou-se N-(benziloxicarbonil)-3-(p-cianofenil)-DL-alanina com o trifluoroacetato do éster benzílico de N-glicil--alanina, para se obter o éster benzílico de N-) N-/~N-(benziloxicarbonil)-3-(P-cianofenil)-DL-alanil J-glicilJ- -alanina, P.F. 1 34- 1 35°C.

Em seguida, com sulfureto de hidrogénio e trietilamina em piridina obteve-se o éster benzílico de N-£” Ν-/ N-(benziloxicarbonil)-3-f p- (tiocarbamoíl)-fenil )-DL-alanil nina, P.F. 150 - 151°C. A reacção com iodeto de metilo em acetona, subsequente reacção com acetato de amónio em metanol e tratamento com cloroformato de benzilo e trietilamina em tetrahidrofurano, obteve-se o éster benzílico de N-^_ N-^N-Cbenziloxicarbonil)-3-fp- £N-(benziloxicarbonil)-amidinojf - fenil

-DL-alanil J-glicil J-β -alanina. EM: 694 ( 100, M+H).

Exemplo 29

A partir de 178 mg do iodidrato do éster t-butílico de N-f N-f N-f (p -amidinofenoxi)-acetil J-glicil-3-t-butoxi-L-ala nilJ-3-fenil-L-alanina obteve-se, após tratamento com ácido trifluoroacético em cloreto de metileno, como descrito no méto do que consta do exemplo 1, 91 mg do trifluoroacetato de

-fN-f N-f ( p-amidinof enoxi )-acetil J -glicil J- L-QÍ-aspar tilj? -3-fenil-L-alanina, P.F. 175 - 179°C.

Preparou-se o material inicial do seguinte modo:

a) Por acoplamento de 7,0 g de Z-Asp(OtBu)-O-Su com 4,72 de Phe-0-tBu-HCl, de acordo com o método descrito no exemplo

B), alínea a), após transformação, cromatografia em gel sílica e recristalização em acetato de etilo isolaram-se 7,1 g do éster t-butílico de N-£ N-£~ (benziloxi)-carbonil· 7^-3-(t-butoxicarbonil)-L-alanil ~J-3-fenil-alanina , P.F. 94 - 95°C.

b) Após hidrogenação catalítica do produto obtido na fase anterior em etanol na presença de paládio sobre carvão a 10 % à temperatura ambiente e à pressão normal, obtiveram-se, depois da cromatografia em gel de sílica com acetato de etilo, 5,94 g de H-Asp(OtBu)-Phe-O-tBU, /^^ = + 9 , 16° (c = 0,6, metanol).

c) Como descrito no exemplo 1 Β) , alínea a), a partir da reacção de 4 g de Η-Asp(OtBu)-Phe-O-tBu com 3,43 g de Z-Gly-OSu, obteve-se, após cromatografia em gel de sílica com acetato de etilo, 3,9 g do éster t-butílico de N-/ N-/~ N-/~ (benziloxi) carbonil 7^-gli^cil^_3-(t-butoxicarbonil)-L-CX.-aspartil 3-fenil ~J-L-alanina.

d) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1, por hidrogenólise do produto obtido na fase anterior, (2,19 g), obteve-se após cromatografia com cloreto de metileno/álcool metílico a 9= 1 e recristalização, 909 mg do éster t-butílico de N-£ N-glicil-3-(t-butoxicarbonil)-L-OC-aspartil J-3-fenil-L-alanina, P.F. 99 - 100°C.

e) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 B), alínea

e) , por acoplamento de 675 mg do produto obtido na fase anterior com 266 mg do ácido p-cianofenoxiacético, obteve-se, após cromatografia em gel de sílica e usando ccmoeluente, o acetato de etilo, e recristalização, 687 mg do éster t-butílico de Nj_3-(t-butoxicarbonil)-N-£, N-^ ( p-cianof enoxi)-acetil ££-glicil ~J -L-alanil £J-3-fenil-L-alanina, P.F. 83 - 85°C (acetato de etilo/ /hexano).

f) De um modo análogo ao descrito no exemplo 1 B), alínea

f) , após reacção do produto da fase anterior, 650 mg, com ácido sulfídrico, isolou-se, após cromatografia (acetato de etilo) e recristalização, 405 mg do éster t-butílico de N-£ 3-(t-butoxicarbonil)-N-£ N- p- tiocarbamoil)- f enoxi ace til j^-glicil J-L-alanil 2/-3-fenil-L-alanina, P.F. 83 - 86°C (hexano).

g) A partir de 390 mg do produto obtido na fase anterior, apos metilação e de acordo com o método descrito no exemplo 1 B) alínea g), obtiveram-se 375 mg do iodidrato do éster t-butílico de N-£ 3-(t-butoxicarbonil)-N-£ N-£ /. £ p-( 1-metiltio)-formimidoíl ~J-fenoxi 2J-ace til _^-glicil ^-L-al an i 1 - 3-f enil-L-alanina,

P.F. 162°C (acetato de etilo/metanol).

h) A reacção de 358 mg do material obtido na fase anterior com acetato de amónio, de acordo com o método descrito no exemplo 1 Β), alínea h), forneceu 267 mg do iodidrato do éster t-butílico de N- L N-fhl-f (p-amidinofenoxi)-acetil ^/-glicilίΐ

Ζ *

-3-t-butoxi-L-alanil _7-3-fsnil-L-alanina, com decomposição,

P. F. 76°C (acetato de etilo/hexano).

Exemplo 30 tratamento de 140 mg do iodidrato de éster t-butílico de N-Z. Ν-/ΓΝ-/7/f2-( p-amidinofenil )-l ,3-dioxolan—2-il_7-acetil_7-glicil-3-(t-butoxicarbonil)-L-alanil^7-J-fenil-L-alanina, com ácido trifluoroacético em cloreto de metileno forneceu 15θ mg do trifluoroacetato de N-/N-/’N-/~/2-( p-amidinofenil)-l,3-dioxolan-2-il _7-acetil_7-glicil J7-L- -aspartil _7-3-í^Qnil“L-alanina (1 : 1). Uma porção deste material purificou-se por cromatografia (fase inversa-lS, eluiçao com água e em seguida com água/acetonitrilo 2 : 1) e recristalizou-se obtendo-se deste modo, um produto com P. F. 242 - 245°C.

Pode preparar-se o material inicial do seguinte modo:

a) Uma mistura de 8 g de 4-cianobenzoíl acetato de etilo, ml de etilenoglicol, 0,3 g de ácido p-toluenossulfénico e 250 ml de tolueno foi submetido a ebulição num separador de água. Apés β reacção completa, eliminou-se o dissolvente e distribuiu-se o resíduo entre cloreto de metileno e uma solução de hidróxido de sódio 0,1‘i. Secaram-se os extractos orgânicos, fil traram-se e concentraram-se. Após cromatografia em gel de sílica: hexano/acetato de etilo 1 : 1, obtiveram-se 4,4 g de um óleo incolor que se dissolveu em 3θ ml de etanol. Adicionou-se a eg ta solução, gota a gota, 15 ml de hidróxido de sódio IN com arrefecimento em banho de gelo e em seguida manteve-se a mistura à temperatura ambiente durante 6 horas. Apés eliminação do eta

* nol, extraiu-se a fase aquosa com acetato de etilo e neutralizou-se com ácido clorídrico IN. Separaram-se cristais que se filtraram, lavaram com água e secaram. Obtiveram-se 2,3 g do etileno cetal do ácido 4-ciano'cenzoilacético, P.F-, 151-152°C

b) De um modo análogo ao método descrito no exemplo 1 B), alínea 9), por acoplamento de 25ó mg de etileno cetal do ácido 4-cianobenzoilacético e 44-9 mg de H-Gly-Asp(OtBu)-Phe-OtBu (exemplo 29 d) octiveram-se, após cromatografia e recristaliza. ção, 390 mg do éster t-butílico de N-Z^_38utoxicarbonil)-N-ZN-Z“ Z~2-( p-cianofenil )-l, 3-dioxolan-2-il _7-acetil _7-glicil£-L-ala.nil_7-3-fenil~L-alanina, P. F. 8l - 82°C, (hexano).

c) Fez-se reagir 360 mg do produto obtido na fase anterior com ácido sulfídrico, como descrito no método que consta do exemplo 1 B) f), para se obterem 3^3 mg do éster t-butílico de N-Z^-3-(t-butoxicarbonil )-N-ZN-Z* Z2-( p-tiocarbamoíl )-fenil J7-1,3-dioxolan-2-il__7-acetil JZ-glicil J^-lL-àlariil_/-3-fenil-L-alanina, P. F. 98 - 98°C (hexano).

d) A metilação de 28θ mg do produto obtido na fase anterior realizou-se de acordo com o método descrito no exemplo 1 B)

g) fornecendo 324 mg do iodidrato do éster t-butílico de N-Z'3-(t-butoxicarbonil 2-Z p-zfl-(metiltio )-formiwidoil_7-fenil _7-l ,3-dioxolan-2-il _7-acetil JX-glicil _7-L-alanil .7-3-fenil-L-alanina, (1 : 1), P. F. 110 - 112°C, (acetona/éster dietl etílico).

e) A amonólise de 2^0 mg do produto obtido na fase anterior, de um modo análogo ao descrito no exemplo 1 5), alínea h), forneceu 200 mg do iodidrâtõ do éster t-butílico de Μ-Ζ’Ν-Ζ'Ν-

*

-CC 2-(p-amidinofenil)-l,3-dioxolan-2-il_7-acetil_7-glicilJ-3-(t-butoxicarbcnil)-L-alanil _/-3-fenil-L-alanina, (1 : 1,

P. F. 129 - 130°C.

sxemplo 31

Manteve-se à temperatura ambiente durante a noite uma solução de 100 mg do trifluoroacetato de N-£N-£N-/£2-(p-amidinofenil )-l ,3-dioxolan-2-il _7-acetil_7-glicil J7-L- G/ -aspartil_7-3-fenil-L-alanina em 10 ml de ácido trifluoroacético/água 9 : 1. Apás eliminação do dissolvente, cromatografia do resfduo (fase inversa-l8, eluição com água-água/acetonitrilo 1 : 1) e recristalização, obtiveram-se 33 mg do triflu oroacetato de N-/N-/CN-zT(p-amidinobenzoíl )-acetil _7-glicil-L-aspartilJT-j-fçníl-L-alanina <1 .· 1>, P. F. 225 - 23O°C (com decomposição).

Exemplo 3²

A partir de 50 mg do éster t-butílico de N-/N-zTN-/”3 - (l-?midino-4-piperidinil }-propionil _7-glicil _7-3-t-butoxicarb; niI)-L-alanil _7-3-fenil-L-alanina obtiveram-se, de acordo com um método análogo ao descrito no exemplo 1 A, apos recristal!zação, 32 mg do trifluoroacetato de N-/.I-ZN^T-Z3-(l-smidino-4— -piperidinil )-prcpioníl__7-glicil _7-L- -aspartii _/-3-feniI-L-alanina (1 : 1), ?. F. 14c - l4ô°C (éter dietílico: decomposição ).

Pode preparar-se o material inicial do seguinte modo:

a) Adicicnaram-se 7ÒQ de ácido 4-piperidinopropirfnico, à temperatura de 2°0, s uma solução de 553 mg de sulfato de /

S-metil-isotioureia em 3,2 ml de solução de hidróxido de sédio 2N. Após repouso à temperatura ambiente durante a noite, sepa raram-se cristais que se filtraram, lavaram-se com água, aceto na e éter dietílico e secaram-se. Obtiveram-se deste modo 600 mg do ácido l-amidino-4-piperidinopropiónico, P. F. acima de 275°C.

b) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 B),alínea

e) por acoplamento de 1,6 g do ãcido l-amidino-4-piperidir.opro piónico com 1,8 g de H-Gly-Asp(OtBu)-?he-C‘tBu na presença de 928 mg de cloridrato de piridínio, obteve-se 2,1 g do éster t-butílico de \^T-/~N- /N-/73“ (l-amidino-4-piperidinil )-propionil_7-glicil __7-3-t-butoxicarbor.il )-L-alanil _7-3-fenil-L-elanir.a,

P. F. 104 - 10ó°C (éster di-isopropílico; com decomposição).

Exemplo 33

De um modo análogo ao método descrito no exemplo 1 A), a partir de 17 mg do ácido l-//N-/’N-(p-amidino-hidrocinamoíl>-glicil _7-3~(t-butoxica rbonil)-L-alanil _7-amino ciciopentanocarboxílico obtiveram-se, após cristalização, 15 mg do triíluoroacetato do ácido l-^fz/N-TÍN-(p-amidino-hidrocinamoíl )-glicil /7-L-Qd.-aspartil _7-amino _J7-ciclcpente.noca rboxílico (1 : 1). P. F. 136 - 13S°C (éster dietílico-, com decomposição) .

Pode preparar-se o material inicial do seguinte modo:

a) Analogamente ao método descrito no exemplo 1 Ξ), alínea

e) a partir da 761 mg de Z-vly-Asp(0t3u)-0H exemplo 16 e de 359 mg do cloridrato do éster metílico do ácido l-amino-ciclopentanocarboxílico em tetrahidrofurano, obtiveram-se, após cro

Γ c ζ_Ζ

matografia em gel de sílica com acetato de etilo como eluente, 920 mg do éster t-butílico óe N-Z~N-benziloxicarbonilglicilJ-3-Z/~l-(cetoxicarbonil)-ciclopsntil _7-cerbamoíl _7- -alanina, SM (FAB)! 50Ó (M+l)⁺.

b) Por hidrogenólise, dum modo análogo ao descrito no exemple 1B) b), obtiveram-se, a partir de 880 mg do produto ob tido na fase anterior, Ó20 mg do éster metílico do ácido 1-ZZ3^_(t-butoxicarbonil)-M-glicil-L-alanil _7-amino_7-ciclcpen tanocarboxílico, espectro de massa de bombardeamento atómico rápido: 372 (M+l)⁺.

c) De um modo análogo ao método descrito no exemplo 1B) e), por acoplamento de 310 mg do ácido 3-(p-^ci^an°f®ⁿil)P^r°pi8nico com 600 mg do produto obtido na fase anterior, obtiveram-se, após cromatografia para purificação, em gel de sílica, com acetato de etilo-acetato de etilo/metanol 9 : 1_} como eluente,

Ó35 mg do éster metílico do ácido l-/“/'3-(t-butoxicarbonil)-N-/TM-(p-ciano-hidrocinamoíl)-glicil _7-L-alanil_7-amino _7-ciclopentanocarboxílico, SM: 5%6 (M+NH_l+) ⁺ .

d) De um modo análogo ao método descrito no exemplo 1E)

f) g) e h), por reacção sucessiva de ÓOO mg do produto obtido r.a fase anterior com ácido sulfídrico, iodeto de metilo e acetato de amónio, octiveram-se 279 mg do iodidrato do éster metí lico do ácido 1-Z/Ν-Ζ^-( p-amidino-hidrocinam^íl)-glicil _7-3~

-(t-butoxicarbonil)-L-alanilj7-sminn_7-ciclopentanocarboxílico, r-. F. 9S°C (com decomposição), espectro de massa de bombardeamento atómico rápido: 5%6 (Μ+1)⁺.

e) Por hidrólise alcalina de 157 mg do produto obtido na fase anterior, como descrito no método do exemplo 1ÓB) b) ooti

'3

veram-se 24 mg do ácido Ι-Ζ’/'Ν-Ζ’Ν-(p-amidino-hidrocinamoíi)-glicil_7-3-(t-butoxicarbonil)-L-alanilJ-amino_7-ciclopentanocarboxílico, ?. F_r I63 - ló4°C.

Exemplo 3^

Tratou-se uma solução de 275,5 mg de N-Boc-3-(4-aminofenil)-DL-alanil-óly-Asp-Val-OH (exemplo 155;, alínea· d)) em 3 ml de água com pH corrigido para 9,5 com hidróxido de sódio IN, com 219 mg do cloridrato de acetimidato de metiio e corrigiu-se o valor do pH para 9,5 com ácido clorídrico IN. Após agitação durante 2 horas, acidificou-se a mistura reaccional para un. pK de 4 com ácido clorídrico IN e cromatografou-se numa coluna de Sephadex U-25S em ácido acético 0,2N. Liofilizou-. -se a fracção principal e purificou-se por Lichrosorb FrlS com acetato de amónio 0,05M-etanol. Liofiiizou-se a fracção uniforme com água. Obtiveram-se 25 mg de Z~3-Zp-(acetimidoilami no)-fenil_7-N-(t-butoxicarbonil)-DL-alanil J7-Gly-Asp-Val-0H,

EM: 593 (M+H)\

Exemplo A

Pode utilizar-se um composto de fórmula geral I dum modo conhecido como componente activo para a preparação de compri midos com a composição seguinte:

ΣΖ

Por comprimido

Componente activo	200	mg
Celulose microcristalina	155	mg
Amido de milho	25	mg
Talco	25	mg
Hidroxipropilmetilcelulose	20	mg

425 mg

Exemplo B

Pode utilizar-se um composto de fórmula geral I dum mo do conhecido, como componente activo, para a preparação de cápsulas com a composição seguinte:

Por cápsula

Componente activo	100,0	mg
Amido de milho	20,0	mg
Lactose	95,0	mg
Talco		mg
Estearato de magnésio	0,5	mg

220,0 mg

ReiΖ 58 ζ — !

*

Claims

REIVINDICAÇÕES

1 ou 0 64 2 1 ou 0 2 em um grupo guanidino;

ou (f) em hidrogenar um nitrilo de fórmula geral

N=C-C-H - (Τ) _Ί -CONH—CH--CONH-CK(R' )-CH-COOH

1 ou 0 6 4 2 c especialmente um grupo em que R-CO- representa o grupo p-(aminometil)-hidrocinamoílo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

1 ou 0 6 4 2 c — (T) , _Λιι --C^H(NH) -C(NH)~L (R-3) i ou U o 4 n

L representa um grupo amino, T representa um grupo -CH.,- (0) . _n ou -CH=CH- ou um crrupo de fórmula ceral

-CH(R_d)-CH_?- e R_a, Y, R_fa, R , R^ e R' têm os significados definidos antes, caracterizado pelo facto de se utilizar composros iniciais correspondentemente substituídos.

1 ou

0 ^C6^H4 ou

-NH 0 2 na qual

R' tem os significados definidos antes, e

L reoresenta um grupo -CK_(0). . - ou -CH=CH- ou um grupo de fórmula geral -CH(ΝΉ-Rg)-CH₉ na gual Rg tem os significados definidos antes;

em um grupo guanidino;

ou (f) de se hidrogenar um nitrilo de fórmula geral /1 \

N=C-C_cH(Τ), _η-CONH—CH_Ό-CONH-CH(R¹)-CH-COOH (VII)

6 4 1 ou 0 2 2 na qual·

T e R' têm os significados definidos antes, para se obter uma amina;

(g) de se modificar, eventualmente, sob o ponto de vista funcional um substituinte reactivo presente num grupo representado pelo símbolo R de um composto de fórmula geral I;

e (h) de se converter, eventualmente, um composto de fórmula geral I em um seu sal ou um sal de um compsoto de fórmula geral I no compos to de fórmula geral I livre.

(1) - CH(NH-R 3. )- (ch₂) (2) - (T) . 1 ou 0 ^C6^H4 (3) - (T) , 1 ou 0 ’^C6^H4

.-NE-R^ í₂nh-r_c, ou (4) - (Τ)_{Σ ou} θ —J>NC(NK)NH₂, em gue

R_£ representa um átomo de hidrogénio, um grupo

-COO-alquilo C,_₄, -COCgíL·, -COC_gH Νμ -SO^gH- ou -S0₂~naftilo ou um grupo de fórmula geral

Z ou -COCH₂N(Y)-CH₉CH₂NE-Y em que Z representa um grupo benziloxicarbonilo e Y representa um átomo de hidrogénio ou um grupo t-butoxicarbonilo (Soc) ou benziloxicar59 bonilo (Ζ) ; R. representa um grupo -C (NK) (CH₂)₀_₂~CK₂ ou ou também amidino quando R^ representa um grupo -COCgH^Ny -SO^CgH- ou S0₂-naftilo ou um grupo de formula geral -COCH-jN (Y) -CH₉CH₂HH-Y ; R_c representa um átomo de hidrogénio ou um grupo amidino;

T representa um grupo -CH_?- (0) _qu -, -CH=CrI- ou -CH^COpelo que um grupo carbonilo presente, no grupo representado pelo símbolo T pode apresentar-se também sob a forma de um cetal ou representa um grupo de fórmula geral -CH(R^)-CH₂ na qual R^ representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula geral -NH-R ;

n representa zero ou o número inteiro 1; e

L representa um grupo amino ou representa, também, um grupo -(CH₂)g_g-CH₂ quando n representa o número inteiro 1 ; e

R' representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula geral -CO-R_Q na qual R_Q representa um grupo amino,

-NH-alauilo C. -NH(CK_O). -NK(CH-). ,-C,K.-halo1-4 2 1-4 6o 2 1-4 o 4 géneo, -NH-C,Η.-COOH ou -NH-C^K,-COO-alauilo C. . ou um 6 4 o 4 * 1-4

-aminoácido carboxílico ligado via o grupo amino, bem como dos seus hidratos ou produtos de solvatação e sais aceitáveis sob o ponto de vista fisiológico, caracterizado pelo facto (a) de se eliminar o(s) grupo(s) éster e um ou mais grupo (s) amino, amidino ou guanidino protegido (s) presentes em um composto de fórmula geral

R₂-CONH-CH₂-CONH-CH(R₄)-CH₂COOR₃ (II) na qual

R₂ representa um grupo de fórmula geral (la)- CH(NH-R )-(CH-)_n , -R_ ;

a z i— o □ ^<2a>- ^<T>1 ou 0 -^C6^H4-^CH2-^H6 (3a)- (T),

- -C_rH.-R_ ; ou ou 0 6 4 7 (4a)- (T)₁ ou u

NC(NK)NH₂; em que

R^ e T têm os significados definidos antes,

R_ representa um grupo guanidino protegido ou um grupo de fórmula geral -NH-R^ na qual R^ tem os significados definidos antes, R_g representa um grupo amino ou guanidino protegido ou um grupo de fórmula geral -NH-R na qual R_c tem os significados definidos antes e R^ representa um grupo amidino ou guanidino eventualmente protegido;

Rg representa um átomo de hidrogénio ou uma função éster facilmente eliminável, e

R^ tem o significado definido antes para o símbolo R' ou representa um grupo de fórmula geral -CORg na qual Rg representa um éster de um ácido tí/ -aminocarboxílico ligado *

via o grupo amino facilmente eliminável, com a condição de R₂ conter, pelo menos, um grupo guanidino, amino ou amidino protegido representado pelos símbolos R^, Rg ou R^ e de não representar um grupo de fórmula geral (la) ®lou 2^3NC (NH) NK₂ quando R^ representa um átomo de hidrogénio e R^ tem o significado definido antes para o símbolo R' ;

ou (b) de se fazer reagir uma amina de fórmula geral

CH(NH-)-(CH-). ,-NH-C(NH)NH- ,_T_-,

I 2 2 1-6 2 (IIx) conh-ch₂-conh-ch(r')-ch₂cooh na qual

R' tem os significados definidos antes, com um agente capaz de introduzir um grupo -COC,H_,

- O 3

-SO₂CgHç- ou -S0₂-naftiío ou um grupo de fórmula geral -COCH₂N(Y)-CH₂CH₂NH-Y na qual Y tem os significados definidos antes;

ou (c) de se fazer reagir uma amina de fórmula geral

CH(NH-Rg)-(CH₂)₁_₆-NH_{2 (iv)} conh-ch₂-comh-ch(R')-ch₂cooh na qual

Rg representa um grupo -COO-alguilo C_1-4,

-COC_cH_, -COC,H.N_, -SO-C^H, ou -SO-.-naf tilo, ou um 60 643 26o 2 grupo de fórmula gerai Z ou -C0CH₂N(Y')-CH-CH_?NH-Y' em que Z representa, um grupo benziloxicarbonilo e Y' representa um grupo t-butoxicarbonilo (3oc) ou benziloxicarbonilo, e

R' tem os significados definidos antes, com um agente capaz de introduzir um grupo -C(NH) (CK₂) o-3^_<^3' ou (d) de se fazer reagir um derivado da guanidina de fórmula geral

CH(NH-R-)-(CE_) . ,-NHC(NH)Nn_ (V) j y Z l-o Z conh-ch₂-conh-ch(R')-ch₂cooh na qual

Rg e R' têm os significados definidos antes, com 1,2-ciclo-hexanodiona;

ou (e) de se converter o grupo amino em uma amina de fórmula geral IV, citada antes, ou uma amina de fórmula geral

NH-CH--CONH-CH(R' )-CH_,-COOK I 2 Z (VI)

CO-(L)

1.- Processo para a preparaçao de compostos de formula geral R-CONH-CH₂-CONE-CH(R')-CH₂COOH (I) na qual

R representa um grupo de fórmula geral

2*3- (p-amidinof enil)-L-alanil _/-Glv-Asp-Vai-OH, (p-amidinof enoxi) -acetil-Gly-Asp-Val-OH e (p-amidinofenil) -acetil-Glv-Asp-Val-OK, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

9.- Processo para a preparação de composiçoes farmacêuticas, especialmente para utilização no tratamento ou profilaxia de doen67 ças provocadas pela ligação de proteínas adesivas as plaquetas sanguíneas bem como pela agregação das plaquetas do sangue e adesão entre células, ' caracterizado pelo facto de se converter em uma forma de dosagem galénica uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de fórmula geral I, quando preparado pelo processo de acordo com as reivindicações 1 a 8.

Lisboa, 22 de Fevereiro de 1990

RESUMO

PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE NOVOS DERIVADOS DE GLICINA E DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS QUE

OS CONTEM

Descreve-se um processo para a preparaçao de compostos de fõrmula geral

R-CONH-CH₂-CONH-CH(R')-CH₂COOE (I) bem como dos seus hidratos ou produtos de solvatação e sais aceita veis sob o ponto de vista fisiológico cue consiste (a) em eliminar o(s) grupo(s) éster e um ou mais grupo(s) amino, amidino ou guanidino protegido(s) presentes em um composto de fõrmula geral

R₂-CONE-CH₂-CONH-CH(R₄)-CH₂COOR₃ (II) ou (b) em fazer reagir uma amina de fõrmula geral

CH (NH_)-(CH_) . ,-NH-C (NH)NH-, (III) | λ λ 1-b í

C0NH-CK₉-C0NH-CH(R’)-CH COOH com um agente capaz de introduzir um grupo -COC^H^, -SO₂CgH.. ou -S0₂~naftilo ou um grupo de fõrmula geral -COCH₂N(Y)-CH₂CH₂NE-Y na cual Y tem os significados definidos antes;

ou (c) em fazer reagir uma amina de fórmula geral

CH(NH-Rg)-(CH₂)₁_₆-NH₂

CONH-CH₂-CONH-CH(R')-CH₂COOH %

com um agente capaz de introduzir um grupo -C(NH)(CH₂)_Q_₃-CK₃; ou (d) em fazer reagir um derivado da guanidina de fórmula geral jZH (NH-Rg)-(CH₂) ₁_g-NHC (NH)NH₂ (V) conh-ch₂-conh-ch(R')-ch₂cooh com 1,2-ciclo-haxanodiona;

ou (e) em converter o grupo amino em uma amina de fórmula geral IV, citada antes, ou uma amina de fórmula geral nh-ch₂-conh-ck(R')-ch₂-cooh (VI!

CO-ÍL). n~C,H (CH-,) . _ — NH_

2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a prepara ção de compostos de fórmula geral I na qual R representa um grupo de fórmula geral

-CH (NH-R_a) - (CH₂) ₁_₆-NH-R_fa (R-1)

- (T) , „-C,H,-Cl·’ NH-R (R-2)

3-(p-amidinofenil)-D-alanil _/-Gly-Asp-Val-OH, (p-aminometil-hidrocinamoí 1) -Gly-Asp-Val-OH, (p-amidino-hidrocinamoíl) -Gly-Asp-Val-OH,

3.- Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, para a preparação de

E 3-(p-amicinofenil)-DL-alanilJ-OIv-Asp-Va1-OH,

Ζ-Aeg (Z)-Arg-Gly-Asp-Val-OH,

Aeg-Arg-Gly-Asp-Val-OH,

Aeg-Arg-Gly-Asp-Ser-OH,

N-Aeg-Arg-Glv-Asp-Nal(1)-ΟΕ,

Aeg-Arg-Gly—Asp-Ile-OH,

N^-Boc-Ng- (1-iminoetil) -L-lisil ^7-Gly-Asp-Val-OH, ãcido N-/* (o-azidobenzoil)-Arg-Glv-Asp_7-antranílico, ^b^-Boc-N^-(3a,4,5,6,7,7a—hexa-hidro-3a,7a-di-hidroxi-lH-benzimidazol-2-il)-L-ornitil_7-Gly-Asp-Val-0H, /7 N-Boc-3- (p-guanidinofenil) -DL-alanil_7-Gly-Asp-Val-0H,

27 3-amidinofenil) -DL-alanil J7-Glv-Asp-Nal (1) -OH,

Γ N-3oc-3- (p-amidinofenil) -DL-alanil_/-Gly-Asp-Val-OE, (p-amidino-hidrocinamoíl) -Glv-Asp-Nal (1) -OH,

3.- Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, para a *

preparação de compostos de fórmula geral I na qual R representa um grupo de fórmula geral

-CH(NH-R )-(CH_). .-NH-R, (R-l) a 21—0 o especialmente um grupo em que R-CO representa um grupo Aeg-Arg-, Z-Aeg (Z)-Arg-, 2-naftil-SO^-Arg-, O-azidobenzoil-Arg-, Ν₂ ^-3οο-N_g-(1-iminoetil)-Lys- ou N₂-3oc-N^-(3a, 4, 5, 6, 7, 7a-hexa-hidro-3a,7a-di-bidroxi-lH-benzimidazol-2-il)-Om-, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

4. - Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R representa um grupo de fórmula geral

-(T), -C.H.-CH-NH-R (R-2)

5, - Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R' representa um grupo

-^(T>1 ou 0~^C6^H4-^(NH>n^-C(NH)(R-³>

especialmente um grupo em que R-CO- represente um grupo p-amidino-nidrocinamoílo, 3-(p-amidinofenil ou p-guanidinofenil)-alanilo,

-N-Z- ou N-3oc-3-(p-amidinofeni1)-alaniio, p-amidinofenoxiacetilo, p-amidinofenacetilo, 2-/ (p-amidinofenil)-1,3-dioxolan-2-il_/-acetilo, (p-amidinobenzoíl)-acetilo ou N-Boc-3-(p-acetimidoilaminofenil)-alanilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

6.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R representa um grupo de fórmula geral /' especialmente um grupo em que R-CO- represente um grupo 3-(1-amidino-4-piperidinil)-propionilo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

7.- Processo de acordo con uma qualcuer das reivindicações 1 a 4 , para a preparação de compostos de fórmula geral I na qual R' representa um ãtomo de hidrogénio ou um grupo -CO-Val-OH, -CO-Ser-OH, -CO-?he-OH, l-carboxi-2-(1-naftil)-etilideno-carbamoílo, -CO-Ile-OH, carboxifenilcarbamoílo, isobutilcarbamoílo ou ρ-fluorofenetilcarbamoílo, caracterizado pelo facto de se utilizar compostos iniciais correspondentemente substituídos.

6 4 i OU 0 2 2 (VII) para se obter uma amina;

(g) em modificar, eventualmente, sob o ponto de vista funcional um substituinte reactivo presente num grupo representado pelo símbolo R de um composto de fórmula geral I;

e (h) em converter, eventualmente, um composto de fórmula geral I em um seu sal ou um sal de um composto de fórmula geral I no composto de fórmula geral I livre.

Estes compostos utilizam-se no tratamento ou profilaxia de doenças provocadas pela ligação de proteínas adesivas ãs plaquetas sanguíneas bem como pela agregação das plaquetas do sangue e adesão entre células.

Lisboa, 22 de Fevereiro de 1990