JP2617700B2 - 細胞接着活性コア配列の繰り返し構造からなるポリペプチド - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、細胞接着活性蛋白質の
接着コア・アミノ酸配列の繰り返し構造からなるポリペ
プチドおよび該ポリペプチドの癌転移抑制剤その他の医
薬としての用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】フィブロネクチン、ラミニンおよびビト
ロネクチン等は、細胞と間質結合組織との接着に関与
し、動物細胞の細胞機能に関連した多彩な生理活性を持
つ蛋白質であり、細胞接着活性蛋白質と総称される。例
えば、フィブロネクチンは肝臓で合成され、ヒト血漿中
に約０．３mg／mlの濃度で存在する糖蛋白質である。

【０００３】フィブロネクチンは、分子量約２５０Ｋの
ポリペプチドＡ鎖と約２４０ＫのＢ鎖がカルボキシル末
端近くでジスルフィド結合し、二量体を形成している。
フィブロネクチンの一次構造は、コーンブリットら（Ｋ
ｏｒｎｂｌｉｈｔｔ，Ａ．Ｒ．ｅｔ ａｌ： ＥＭＢＯ
Ｊｏｕｒｎａｌ，４，１７５５（１９８５））により
分子クローニング技術を用いて決定されている。また、
ラミニンの一次構造は佐々木ら（Ｓａｓａｋｉ，Ｍ．ｅ
ｔ ａｌ： Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．
ＵＳＡ，８４，９３５，１９８７； Ｓａｓａｋｉ，
Ｍ．ｅｔ ａｌ： Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６
２，１７１１１（１９８７））により、そしてビトロネ
クチンは鈴木ら（Ｓｕｚｕｋｉ，Ｓ．ｅｔ ａｌ： Ｅ
ＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ，４，２５１９（１９８５））
によってそれぞれ決定されている。

【０００４】そして、細胞接着活性に関与する結合部位
の研究も行われ、フィブロネクチンを蛋白質分解酵素で
限定分解して得られる断片のヘパリン、コラーゲン、細
胞および細菌への結合の研究から、それぞれＡ鎖、Ｂ鎖
の両鎖とも結合部位が決定されている（Ｙａｍａｄａ，
Ｋ．Ｍ．： Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５
２，７６１（１９８３））。さらに、その細胞結合部の
コア配列はＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）であるこ
とが１９８４年に解明された（Ｐｉｅｒｓｃｈｂａｃｈ
ｅｒ，Ｍ．Ｄ．ｅｔ ａｌ： Ｎａｔｕｒｅ，３０９，
３０（１９８４））。このＲＧＤ配列は、ビトロネクチ
ンなど他の接着性蛋白質にも存在していることが明らか
になっている。また、ラミニン分子中の細胞接着部位の
コア配列はＴｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇで
あることも解明されている（Ｇｒａｆ，Ｊ．ｅｔ ａ
ｌ： Ｃｅｌｌ，４８，９８９（１９８７））。

【０００５】フィブロネクチンやラミニンは上記コア配
列を介して、被接着細胞のレセプターと接合し、その情
報を接着細胞に伝達しており、また、ヘパリン、コラー
ゲン、フィブリン等の生体高分子との結合能を有し、細
胞と間質結合組織との接着、細胞の分化、増殖に関与し
ていると考えられている（Ｙａｍａｄａ，Ｋ．Ｍ．：Ａ
ｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，５２，７６１（１９
８３））。

【０００６】このように、細胞接着活性蛋白質は、種々
の生物活性を有するため、医薬等への応用が研究されて
いる。例えば、血漿中のフィブロネクチン量が低下する
と網内皮系の機能が低下する。このような場合として
は、外科手術や外傷による敗血症、播種性血管内血液凝
固、火傷、重症感染症や外科的ショック等が挙げられ
る。それらの症状の改善のために、フィブロネクチンの
投与が有効であると考えられている。また、フィブロネ
クチンは繊維芽細胞やマクロファージの遊走能を刺激す
ることから、創傷の治癒や免疫能の機能の調整への応用
が考えられている。特に、創傷の治癒促進効果を利用し
た角膜障害への局所治療は既に試みられている（Ｆｕｊ
ｉｋａｗａ，Ｌ．Ｓ．ｅｔ ａｌ： Ｌａｂ．Ｉｎｖｅ
ｓｔ．，４５，１２０（１９８１））。

【０００７】一方、ラミニンはコラーゲンIV型、ヘパリ
ン硫酸、プロテオグリカンや細胞に対して結合能を有す
る。また、ラミニンは神経細胞に作用して、神経突起伸
長を促進する効果があり、その生体内での作用が注目さ
れている。

【０００８】更に、細胞接着活性蛋白質は、癌転移に関
係する物質としても注目されている。癌転移の一連の段
階では、癌細胞は種々の宿主細胞や生体高分子と接触す
る。この時、フィブロネクチンやラミニンのような細胞
接着分子が存在すると、該細胞は多細胞塊を形成し、癌
細胞の増殖や生存をより容易にする。事実、ラミニンを
癌細胞と混合して動物に投与すると、癌転移が増強する
ことが認められている。

【０００９】ところが、ラミニン由来のプロテアーゼ分
解フラグメントは、逆に癌転移阻害活性を有することが
報告されている（Ｂａｒｓｋｙ，Ｓ．Ｈ．ｅｔ ａｌ：
Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，７４，８４３（１９
８４）。同様に、フィブロネクチンの接着コアであるト
リペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（Ｈｕｍｐｈｒｉｅ
ｓ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ ａｌ： Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３，
４６７（１９８６））やラミニンの接着コアであるペン
タペプチドＴｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ
（Ｉｗａｍｏｔｏ，Ｙ．ｅｔ ａｌ： Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ，２３８，１１３２（１９８７））も癌の転移を抑制
することが確認されている。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】上述のように、フィブ
ロネクチンやラミニン等の細胞接着性蛋白質は、様々な
生物活性を有しており、その関連物質を医薬として応用
する技術の開発が望まれていた。特に、フィブロネクチ
ンやラミニン等の接着コア配列の癌転移抑制作用は、医
薬としての応用価値の高いものと考えられるが、該コア
配列の細胞接着活性が充分でないため、それらの癌転移
抑制作用は実際の医療に応用するためには充分満足でき
るものではなく、この点で、更に高い活性を持つ物質の
開発が望まれていた。しかしながら、細胞接着性蛋白質
は天然物質であるからその供給に制限があり、しかも糖
蛋白質であるから、合成法や遺伝子工学的に効率良く生
産するのも非常に困難である。

【００１１】そこで、本発明者らは、細胞接着性蛋白質
の持つ種々の生物活性を充分に保持し、合成も容易で且
つ生体に重大な副作用を示さない新規な化合物を求めて
鋭意研究を行った結果、上記コア配列に比して癌転移阻
害活性が極めて大きいポリペプチド化合物を見出し、本
発明を完成した。本発明の新規化合物は、癌転移阻害活
性の他にも、免疫調整活性、創傷治癒効果、血小板凝集
抑制効果、神経疾患治癒効果も有することが見出され
た。

【００１２】従って、本発明の目的の一つは、より簡便
な手段で生産可能な、細胞接着性蛋白質様の各種活性を
有する、比較的低分子の新規ポリペプチド化合物を提供
することである。

【００１３】本発明はさらに、癌転移阻害活性の高い新
規ポリペプチド化合物を提供することを目的とする。

【００１４】本発明はさらに、上記新規ポリペプチド化
合物を含有する医薬組成物の提供も目的とする。

【００１５】

【課題を解決するための手段】本発明のポリペプチド
は、細胞接着活性蛋白質の接着コア・アミノ酸配列の繰
り返し構造からなることを特徴とする。本発明の好まし
いポリペプチド化合物は、次式： （Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ）ｎ （式中、ｎは２ないし２０の数を表す。）で表される。
その中でも、分子量が約５０００ないし約１５０００、
特に約１００００であるものが、生物活性が充分大き
く、かつ水性の溶媒に対する溶解性も大きいことから好
ましい。

【００１６】製造方法 本発明の化合物は、慣用方法で合成された相当する短鎖
ペプチド例えば、Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａ
ｒｇを、ジフェニルフォスフォリル・アジド（ＤＰＰ
Ａ）による連続的重合化法（Ｎｉｓｈｉ，Ｎ．ｅｔ ａ
ｌ： Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．，
２，５３（１９８０）； Ｎｉｓｈｉ，Ｎ．ｅｔ ａ
ｌ： Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｒｅｓ．，３０，２７５，１９８７）で重合させて製造
することができる。

【００１７】さらに、遺伝子工学的手法で本発明の化合
物を製造することも可能であろう。

【００１８】本発明のポリペプチド化合物には、Ｌ−型
アミノ酸からなるもの、およびＤ−型アミノ酸からなる
ものいずれも含まれる。また、本発明の化合物は、医薬
品として用いるために、薬学的に許容される塩、例えば
塩酸塩、硫酸塩等の無機酸との塩や、酢酸塩、トリフル
オロ酢酸塩、乳酸塩、酒石酸塩等の有機酸との塩にして
も良く、そのような塩への変換は、慣用手段で行う事が
できる。

【００１９】作用 本発明のポリペプチド化合物は、細胞接着性蛋白質のコ
ア配列を繰り返して有し、該コア配列を介して細胞接着
性蛋白質と同様の機序で細胞に接着する。そのため、細
胞接着性蛋白質のアゴニストまたはアンタゴニストとし
て種々の生物活性を示す。特に、細胞接着性蛋白質のコ
ア配列に比べて６〜１０倍強い癌転移阻害作用を有す
る。その他にも、免疫調整作用、創傷治癒作用、毛細血
管中で起こる癌細胞による血小板凝集の抑制作用、神経
疾患治癒作用等の広範な生物活性が認められている。ま
た、本発明のポリペプチド化合物は、マウスを用いて調
べたところ、毒性は全く認められていない。

【００２０】従って、本発明のポリペプチド化合物は、
その少なくとも一種を、場合により慣用の担体または医
薬用助剤とともに、癌転移抑制剤、創傷治癒剤、免疫調
整剤、血小板凝集抑制剤または神経疾患治癒剤として患
者に投与することが可能である。その投与量は、０．２
μg ／kg〜４００mg／kgの範囲で、症状、年令、体重等
に基づいて決定される。

【００２１】本発明のポリペプチドは、ペプチド系医薬
に一般に使用されている投与方法、即ち非経口投与方
法、例えば静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与等によっ
て投与するのが好ましい。そのような注射用製剤を製造
する場合、本発明のポリペプチドを例えば、後記実施例
で示すようにＰＢＳまたは生理食塩水に溶解して、注射
用製剤としてもよく、あるいは０．１Ｎ程度の酢酸水等
に溶解した後、凍結乾燥製剤としてもよい。このような
製剤には、グリシンやアルブミン等の慣用の安定化剤を
添加してもよく、血中半減期を延長させる等の目的のた
めに、コラーゲンやリポゾームを担体として用いてもよ
い。

【００２２】さらに、本発明のポリペプチドは、例えば
リポゾーム中に包容したマイクロカプセル剤とすれば、
経口投与剤とすることも可能であり、座剤、舌下錠、点
鼻スプレー剤等の形にすれば、消化管以外の粘膜から吸
収させることも可能である。

【００２３】生物活性試験 次に、本発明の化合物の生物活性を、薬理試験等の結果
に基づいて説明する。

【００２４】(1) 標的細胞への接着能 済木らの方法（Ｓａｉｋｉ，Ｉ．ｅｔ ａｌ； Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．，
２２，１２５（１９８６））に従い、本発明の化合物の
標的細胞への接着能を検討した。即ち、後記合成例１で
合成した、（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）ｎの構造を持つ
分子量約５０００の本発明のポリペプチドおよび、合成
例３で合成したＡｒｇ、ＧｌｙおよびＡｓｐの各アミノ
酸のランダムな配列を持つ平均分子量約５０００の比較
用ポリペプチド（Ａｒｇ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ）ｎ を用
い、これらの化合物の標的細胞への接着能を、マウスの
Ｂ１６−ＢＬ６メラノーマ細胞で検討した。

【００２５】先ず、試験すべきポリペプチド２０μg ／
mlまたは、陽性対照としてマウスのフィブロネクチン
（生化学工業より購入）５μg ／mlでマイクロカルチャ
ーウエルを予めコートし、その後に放射活性ヨード化化
合物〔¹²⁵Ｉ〕ＩＵｄＲで標識されたＢ１６−ＢＬ６メ
ラノーマ（２×１０⁴ ）を１ウエルあたり０．０５mlに
なるように加えて、３７℃で２０分間培養し、培養ウエ
ルに吸着した細胞数を放射活性の測定により決定した。
陰性対照としては、１％の牛血清アルブミン（ＢＳＡ）
を用いた。尚、Ｂ１６−ＢＬ６メラノーマの標識は、
０．３μＣｉ／mlの〔¹²⁵Ｉ〕ＩＵｄＲ（２００ｍＣｉ
／mmol，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ，Ｂ
ｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓ．，ＵＳＡ）を添加した５％ＦＢ
Ｓを含むＭＥＭ培地で、２４時間対数増殖期にある細胞
を培養することにより行った。

【００２６】標識された細胞は、生理食塩水で２回洗浄
し、０．０２％ＥＤＴＡに１分間懸濁した後細胞を集め
た。その後、細胞は血清を含まないＭＥＭ培地に懸濁し
て、単細胞懸濁液として上述の実験に用いた。培養ウエ
ルに吸着しない細胞をＰＢＳで４回洗浄して除いた後、
培養ウエルに吸着した細胞は０．１Ｎ ＮａＯＨを０．
１ml添加することにより溶解させた。培養ウエルに吸着
した細胞数は、細胞溶解物の放射活性を測定することに
より計測した。

【００２７】第１表に結果を示す。この結果から明らか
なように、本発明のＰｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ）とフィブロネクチンはＢ１６−ＢＬ６メラノーマ細
胞の吸着を促進したが、ランダム配列のＰｏｌｙ（Ａｒ
ｇ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ）およびＢＳＡの処理によっては殆
ど細胞は吸着されなかった。この結果は、本発明のポリ
ペプチドがフィブロネクチンと同等の細胞接着活性を有
していることを示している。

【００２８】

【表１】 第１表には、Ｐｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）とフ
ィブロネクチンの細胞接着の特異性の検討結果も示され
ている。即ち、上記の実験と同様にして調製した培養ウ
エルに２×１０⁴ のＢ１６−ＢＬ６細胞を入れ、それを
合成ペプチド１００または５００μg ／mlのＡｒｇ−Ｇ
ｌｙ−Ａｓｐ、１００または５００μg／mlのＰｏｌｙ
（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）または５００μg ／mlのＨ
ｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙの存在下で３７℃で２０分間培養
した。その結果、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＡｓｐまたはＰｏｌ
ｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）の存在下で細胞を培養す
ると、フィブロネクチンの細胞への接着能は阻害される
が、Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙの存在下ではそのような阻
害は第１表の結果からは認められなかった。

【００２９】また、フィブロネクチンの細胞接着能は、
合成トリペプチドＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐにより用量依
存的に阻害され、さらに５mMＥＤＴＡによっても阻害さ
れた。これらの結果は、Ｐｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａ
ｓｐ）の細胞への接着は、カルシウムやマグネシウムの
ような二価金属イオンと、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ配列
の存在に依存した特異的なメカニズムによることを示し
ている。即ち、Ｐｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）は
フィブロネクチンと同じレセプターを介して細胞と接着
していることを示唆している。

【００３０】上記の実験から、本発明のポリペプチド化
合物が持つ、フィブロネクチンのアゴニストまたはアン
タゴニストとしての活性を、医薬として応用する可能性
が示された。

【００３１】(2) 癌転移阻止作用 ａ） 次に、コア配列Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐの繰り返
し構造を持つ本発明の化合物の癌転移阻止作用について
検討した。分子量約５０００の合成ポリペプチドＰｏｌ
ｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）、トリペプチドＡｒｇ−
Ｇｌｙ−Ａｓｐおよび分子量約５０００のＰｏｌｙ（Ａ
ｒｇ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ）を各々５００μg と、非常に転
移性の強い癌細胞としてＢ１６−ＢＬ６メラノーマ細胞
（上記(1) で示した対数増殖期のもの５×１０⁴ ）を各
々ＰＢＳ中で混合後、その０．２mlを１群５匹のＣ５７
ＢＬ／６の雄マウスに静脈注射した。投与１４日後にマ
ウスの肺の癌コロニー数を数えて、対照のＰＢＳ投与群
と比較した。その結果を第２−１表の実験１に示す。こ
の結果によれば、Ｐｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）
の投与により、肺への癌転移は顕著に抑制された。これ
に対して、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−ＡｓｐおよびＰｏｌｙ（Ａ
ｒｇ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ）の投与ではそのような転移の抑
制は認められなかった。さらに、同表に示すように、Ａ
ｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐの場合、Ｐｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌ
ｙ−Ａｓｐ）と同等の顕著な転移抑制効果を得るには、
約６倍に相当する３０００μg の投与量が必要であっ
た。

【００３２】ｂ） 次に、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐの繰
り返し配列を持ち、分子量が１５００および５０００の
二種のＰｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）−１５００
およびＰｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）−５０００
の癌転移抑制活性を検討した。それぞれの化合物１００
０μg を上記実験１と同様の方法でマウスに投与したと
き、その効果を検討した。第２−１表の実験２に示す結
果によれば、両化合物のいずれも、対照のＰＢＳ投与群
に比べて顕著な転移抑制効果を示した。

【００３３】また、Ｐｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ）−５０００をＢ１６−ＢＬ６細胞と混合せずに、Ｂ
１６−ＢＬ６細胞を投与した５分後にマウスに静脈投与
しても、やはり高い転移抑制効果が得られた。この結果
は、本発明の化合物を静脈注射等の適当な方法で投与し
て、癌の転移抑制効果が得られることを示している。

【００３４】

【表２】 ｃ） 次に、ラミニンの細胞接着のコア配列Ｔｙｒ−Ｉ
ｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇの繰り返し構造を持つ、
分子量約１００００のポリペプチド化合物Ｐｏｌｙ（Ｔ
ｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ）（後記合成例
４で合成した）についても、癌の転移阻止作用を検討し
た。即ち、上記化合物の５、２０または１００μg を、
それぞれ５×１０⁴ のＢ１６−ＢＬ６細胞または３×１
０⁴ のルイス肺癌細胞（３ＬＬ）細胞と混合した後、前
記ｂ）に示したのと同様の方法でマウスＣ５７ＢＬ／６
に投与して癌の転移抑制作用を調べた。その結果を第２
−２表に示す。同表から明らかなとおり、Ｐｏｌｙ（Ｔ
ｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ）の投与により
肺への癌の転移は顕著に抑制された。これに対して、ペ
ンタペプチドＴｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ
を１００μg 投与しても殆ど転移抑制効果は認められ
ず、同表には示されていないが、有意な効果を得るには
２００μg 以上の投与が必要であった。この結果から、
ペンタペプチドの繰り返し配列を有する本発明のポリペ
プチドは、元のペンタペプチドに比べ、約１０倍の癌転
移抑制活性を持つことが確認された。

【００３５】

【表３】 (3) 癌細胞の肺での滞留の抑制効果 上記(2) と同様の実験により、本発明の化合物が癌細胞
の肺での滞留を抑制することを確認した。対数増殖期の
Ｂ１６−ＢＬ６細胞を〔¹²⁵Ｉ〕−ＩＵｄＲで標識し、
この標識細胞(2×10⁴/マウス) と分子量５０００のＰｏ
ｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）（５００μg ／マウ
ス）とを含む０．２mlの液をＣ５７ＢＬ／６マウスの尾
静脈より投与した。投与後３０分と２４時間後に各マウ
スより、肝臓、腎臓、脾臓、肺および血液を採取し、そ
の放射活性を測定した。ＰＢＳを対照として用いた。結
果を第３表に示す。血液を含め、検討した他の臓器では
対照群とＰｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）との間に
顕著な差異は認められなかったが、肺においてはＰｏｌ
ｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）投与群の方が顕著に放射
活性は低く、肺での癌細胞の滞留が顕著に抑制されてい
ることが確認された。

【００３６】

【表４】 (4) 自然転移モデルによる癌転移抑制効果 さらに、本発明の化合物が癌の転移を抑制することを自
然転移モデルによって確認した。即ち、Ｂ１６−ＢＬ６
細胞を１群５匹のＣ５７ＢＬ／マウスの足蹠に移植し、
移植後一定期間内に分子量約５０００のＰｏｌｙ（Ａｒ
ｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）１００μg または５０μg を、移
植癌部に直接単回または複数回局所投与した。移植癌は
２１日目に切除し、その２週間後にマウスを解剖し、肺
への癌の転移を調べた。その結果を第４表に示す。癌移
植後１または７日目に化合物１００μg を単回投与する
ことにより、または７、１０、１３、および１６日目に
５０μg づつ複数回投与することにより、移植癌自体の
増殖は抑制されなかったものの、肺への癌の転移は顕著
に抑制された。

【００３７】これに対して、無秩序なアミノ酸配列を持
つＰｏｌｙ（Ａｒｇ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ）１００μg を７
日目に投与しても、肺への癌の転移抑制活性は認められ
なかった。

【００３８】

【表５】 (5) 癌細胞による血小板凝集を抑制する効果 さらに、癌細胞によって誘発される血小板凝集へのＰｏ
ｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）の影響を検討した。Ｃ
５７ＢＬ／６マウスより血液を採取し、それを１６０×
ｇで１５分間遠心して、血小板リッチな分画（ＰＲＰ）
を得た。対照としては血液を１０００×ｇで１０分間遠
心分離した血小板微量分画（ＰＰＰ）を用いた。分子量
５０００のＰｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）を前記
のＰＲＰまたはＰＰＰ分画（５×１０⁵ ／μl ）２５０
μl に加えて５〜７分間前培養した液を、生理食塩水に
懸濁したＢ１６−ＢＬ６細胞（約１０⁶ ／ml）に加えた
後、３７℃で１０００rpm で攪拌しながら、デュアル・
アグリゴメータ（ＤｕａｌＡｇｇｒｅｇｏｍｅｔｅｒ）
モデル４４０（Ｃｈｒｏｎｏ−Ｌｏｇ，ＵＳＡ）で凝集
を観察した。比較対照として、Ｐｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌ
ｙ−Ａｓｐ）の代わりにＰｏｌｙ（Ａｒｇ，Ｇｌｙ，Ａ
ｓｐ）を用いた。第１図〜第３図に結果を示す。各図は
それぞれ、Ｂ１６−ＢＬ６メラノーマ細胞を添加した時
点（図中、矢印）の７分前にヘパリン化ＰＲＰを、 ＰＢＳで処理した場合・・・・・・・・第１図 Ｐｏｌ
ｙ（Ａｒｇ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ） １００μg ／mlで処理した場合・・・・第２図 Ｐｏｌ
ｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ） １００μg ／mlで処理した場合・・・・第３図の凝集を
表す。本発明の化合物Ｐｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ）は血小板の凝集を完全に抑制した（第３図）が、比
較対照のＰｏｌｙ（Ａｒｇ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ）は殆ど抑
制効果を示さなかった（第２図）。

【００３９】(6) 毒性 上記(1) 〜(5) の試験において、分子量５０００または
１５００のＰｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）および
分子量１００００のＰｏｌｙ（Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ
−Ｓｅｒ−Ａｒｇ）は、宿主マウスの赤血球細胞や脾臓
および胸腺細胞に対する細胞毒性や、血清蛋白質に対す
る好ましくない凝集作用を有しないことが確認された。

【００４０】

【実施例】合成例 次に、本発明の化合物の製造例を記載する。アミノ酸誘
導体はペプチド研究所より購入した。ペプチド合成は液
相法により行い、純度の推定および目的物の同定は、薄
層クロマトグラフィー（展開溶媒：（Ａ）ｎ−ブタノー
ル：酢酸：水＝４：１：５の上層部，（Ｂ）ｎ−ブタノ
ール：ピリジン：酢酸：水＝１５：１０：３：１２，
（Ｃ）アンモニア水飽和ｎ−ブタノール等）、元素分
析、赤外吸収スペクトルで行った。規則配列並びにラン
ダム配列のポリペプチド合成は、ＤＰＰＡ（Ｄｉｐｈｅ
ｎｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ ａｚｉｄｅ）を用いる方
法により行い、側鎖官能基の保護基（ＭｔｓおよびＢｚ
ｌ基）はメタンスルホン酸−アニソールまたはトリフル
オロメタンスルホン酸−チオアニソールで除去し、最後
にアルギニン側鎖のグアニド基をイオン交換樹脂（アン
バーライト ＩＲＡ−４００）で塩酸塩に変換した。保
護基の除去は、赤外吸収スペクトルにより確認し、大ま
かな分子量は、０．１％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウ
ム）存在下でのポリアクリルアミドゲル電気泳動（ゲル
濃度１３％）で推定した。

【００４１】合成例１ （分子量約５０００のポリペプ
チド） (1) ｔ−ブトキシカルボニルグリシル−β−ベンジル−
Ｌ−アスパラギン酸（Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＯＢｚ
ｌ）−ＯＨ （Ｉ） ｔ−ブトキシカルボニルグリシン（５．３ｇ，３０mmo
l）を精製ＴＨＦ（１００ml）に溶解し、−１５℃でト
リエチルアミン（４．６ml，３３mmol）およびイソブチ
ルクロロホルメート（４．３３ml，３３mmol）を加え、
その温度で１０分間攪拌する。この混合酸無水物溶液
に、β−ベンジル−Ｌ−アスパラギン酸（８．０ｇ，３
６mmol）およびトリエチルアミン（５．０２ml，３６mm
ol）を水に溶かし０℃に冷却した溶液を加え、０℃で１
時間そして室温で１５時間攪拌する。減圧濃縮によりＴ
ＨＦを留去し、冷１０％クエン酸を加えると沈澱が生成
する。酢酸エチルでこの沈澱物を２回抽出し、抽出液を
合わせた後、この酢酸エチル抽出液を１／５倍量の５％
クエン酸で５回および１／１０倍量の水で１０回洗浄す
る。無水硫酸ナトリウムで溶液を脱水し、濃縮乾固す
る。エーテルに溶かし、ｎ−ヘキサンで沈澱させる操作
を３回行い乾燥する。これにより、表題化合物が６．９
ｇ得られた。

【００４２】(2) グリシル−β−ベンジル−Ｌ−アスパ
ラテート塩酸塩（ＨＣｌ・Ｈ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＯＢｚ
ｌ）−ＯＨ） （II） 上記(1) で得られた化合物（Ｉ）（３．２ｇ）を精製ジ
オキサン８０mlに溶解し、４Ｎ ＨＣｌ／ジオキサン８
０mlを加えて室温で１時間攪拌する。濃縮乾固した後、
乾燥エーテルを加えて結晶化させ、遠心分離して目的物
を集め、乾燥エーテルで数回洗い乾燥する。これによ
り、２．４ｇの表題化合物が得られた。

【００４３】(3) Ｎ^α−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^ω
−メシチレンスルホニル−Ｌ−アルギニルグリシル−β
−ベンジル−Ｌ−アスパラテート（Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｍ
ｔｓ）−Ｇｌｙ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨ）（III） Ｎ^α−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^ω−メシチレンスル
ホニル−Ｌ−アルギニン（３．４ｇ，７．４mmol）を精
製ＴＨＦ（７０ml）に溶解し、−１５℃でトリエチルア
ミン（１．１３ml，８．１mmol）およびイソブチルクロ
ロフォルメート（１．０７ml，８．１mmol）を加え、そ
の温度で１０分間攪拌する（混合酸無水物生成）。上記
(2) の化合物（II）（２．４ｇ，約８．０mmol）および
トリエチルアミン（２．６８ml，１９．２mmol）をＴＨ
Ｆ（７０ml）、ＤＭＦ（５０ml）、水（１０ml）の混合
溶媒に溶かし、５℃に冷却する。この溶媒を上記混合酸
無水物溶液に加え、５℃で１時間、室温で１５時間攪拌
する。減圧濃縮でＴＨＦおよび水を留去し、残渣のＤＭ
Ｆ溶液に５％クエン酸を加え、生成する沈澱をデカンテ
ーションで分離する。５％クエン酸および水で充分に洗
って乾燥する。エーテルで２回洗浄した後、残渣をメタ
ノール−エーテルで再沈澱し、デカンテーションで分離
する。エーテルで処理すると、粉末になるので、遠心
し、エーテルで洗い、乾燥する。これにより、表題の化
合物が３．９ｇ得られた。

【００４４】(4) Ｎ^ω−メシチレンスルホニル−Ｌ−ア
ルギニルグリシル−β−ベンジル−Ｌ−アスパラテート
塩酸塩（ＨＣｌ・Ｈ−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）−ＯＨ） （IV） 化合物（III）（１．５ｇ，２．１mmol）を精製ジオキ
サン（３０ml）に溶かし、４Ｎ ＨＣｌ／ジオキサン
（３０ml）を加えて１時間攪拌する。濃縮乾固し、乾燥
エーテルを加えて結晶化させ、遠心分離し、乾燥エーテ
ルで数回洗い乾燥する。これにより、表題の化合物が
１．３ｇ得られた。

【００４５】(5) Ｌ−アルギニルグリシルアスパラギン
酸・塩酸塩（２ＨＣｌ・Ｈ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−
ＯＨ） （Ｖ） 化合物（III）（３００mg）をメタンスルホン酸（４m
l）−アニソール（１ml）混合物に溶解し、室温で１．
５時間攪拌する。乾燥エーテルを加え、沈澱をデカンテ
ーションで分離し、さらに乾燥エーテルでよく洗い、乾
燥する。これを少量の水に溶かし、アンバーライト（Ａ
ｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＩＲＡ−４００（Ｃｌ型）に通し、
目的化合物を含むフラクションを濃縮乾固し、残渣をメ
タノール−エーテルで処理して結晶させる。遠心分離
し、エーテルで洗い乾燥する。これにより表題の化合物
を１１７mg得た。

【００４６】(6) ポリ（Ｎ^ω−メシチレンスルホニル−
Ｌ−アルギニルグリシル−β−ベンジル−Ｌ−アスパラ
テート）（Ｐｏｌｙ（Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−Ｇｌｙ−Ａｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）） （VI） 化合物（IV）（４００mg，０．５８mmol）を精製ＤＭＳ
Ｏ（１．２ml）に溶かし、ＤＰＰＡ（０．１９ml，０．
８７mmol）およびトリエチルアミン（０．２８５ml，
２．０３mmol）を加え、５〜８℃で１時間そして室温で
２日間攪拌する。同量のＤＰＰＡおよびトリエチルアミ
ンを加え、さらに２日間重合反応を進める。水でポリマ
ーを沈澱させ、遠心分離し、水およびメタノールでよく
洗い、乾燥させる。これにより、表題化合物が２９５mg
得られた。

【００４７】(7) ポリ（Ｌ−アルギニルグリシル−Ｌ−
アスパラギン酸塩酸塩）（Ｐｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−
Ａｓｐ）ＨＣｌ） （VII） 化合物（VI）（１００mg）をメタンスルホン酸（２ml）
−アニソール（０．４ml）混合物で処理し、側鎖保護基
を除去し、イオン交換樹脂で塩酸塩に変換する。操作法
は化合物（Ｖ）の合成法と同様である。表題の化合物が
６０mg得られた。この化合物の分子量は、約５０００で
あった。

【００４８】合成例２ （ランダム配列の比較化合物） (1) コポリ（Ｎ^ω−メシチレンスルホニル−Ｌ−アルギ
ニン，グリシン，β−ベンジル−Ｌ−アスパルテート）
（Ｃｏｐｏｌｙ（Ａｒｇ（Ｍｔｓ），Ｇｌｙ，Ａｓｐ
（ＯＢｚｌ）） （VIII） Ｎ^ω−メシチレンスルホニル−Ｌ−アルギニン（３５６
mg，１．０mmol）、グリシン（７５mg，１．０mmol）お
よびβ−ベンジル−Ｌ−アスパルテート（２２３mg，
１．０mmol）の混合物を精製ＤＭＳＯ（２．０ml）中、
ＤＰＰＡ（０．９７ml，４．５mmol）およびトリエチル
アミン（１．０５ml，７．５mmol）で重合させる。操作
法は化合物（VI）の合成と同様である。

【００４９】(2) コポリ（Ｌ−アルギニン塩酸塩、グリ
シン、Ｌ−アスパラギン酸）（Ｃｏｐｏｌｙ（Ａｒｇ，
Ｇｌｙ，Ａｓｐ）ＨＣｌ） （IX） 化合物（VIII）（１００mg）をメタンスルホン酸（２m
l）−アニソール（０．４ml）の混合物で処理して、側
鎖保護基を除去し、イオン交換樹脂で塩酸塩に変換し
た。操作法は化合物（Ｖ）の合成法と同様である。これ
により、表題化合物が５０mg得られた。この化合物の分
子量は、約５０００であった。

【００５０】合成例３ （分子量約１５００のポリペプ
チド）ポリ（Ｌ−アルギニル−グリシル−Ｌ−アスパラギン
酸）塩酸塩（Ｏｌｉｇｏ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）・
ＨＣｌ） （Ｘ） 化合物（VI）合成の重合反応を９０分間で停止させ、側
鎖保護オリゴペプチドを得たのち、化合物（VII）合成
と同様の操作で目的物を得た。この化合物の平均分子量
は、約１５００であった。

【００５１】合成例４ （分子量約１００００のポリペ
プチド） (1) Ｎ^ω−メシチレンスルホニル−Ｌ−アルギニン−Ｏ
−メチルエステル塩酸塩（ＨＣｌ−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−
ＯＭｅ） （XI） Ｎ^ω−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^ω−メシチレンスル
ホニル−Ｌ−アルギニン（Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−
ＯＨ）２．１０ｇを乾燥ジオキサン（３１ml）に溶解
し、４Ｎ ＨＣｌ−ジオキサン（３１ml）を加え、室温
で１時間攪拌する。この溶液を減圧濃縮して乾固した
後、乾燥エーテルを加えて結晶化させ、遠心分離操作で
目的物を収集し、乾燥エーテルで更に数回洗浄した後、
デシケーター中で乾燥する。これにより、Ｂｏｃ基が除
去されたＨＣｌ・Ｈ−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−ＯＨが１．１
ｇ得られた。これを、ＭｅＯＨ（１０．６ml））に対し
てＳＯＣｌ₂ （２．９ml）を徐々に加えて−１０℃で１
０分間攪拌して調整した溶液に加え、１５時間攪拌した
後、濃縮乾固し、乾燥エーテルで結晶化させ、遠心分離
し、乾燥エーテルで更に数回洗浄し乾燥する。これによ
り、ＨＣｌ・Ｈ−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−ＯＭｅが０．９４
ｇ得られた。

【００５２】(2) Ｎ^ω−ｔ−ブトキシカルボニル−β−
ベンジル−Ｌ−セリル−Ｎ^ω−メシチレンスルホニル−
Ｌ−アルギニンメチルエステル（Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚ
ｌ）−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−ＯＭｅ） （XII） Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ（０．６９ｇ，２．３
mmol）およびＨＣｌ−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−ＯＭｅ（０．
９４ｇ，２．３mmol）を精留ＤＭＦ（１６．３ml）−ジ
オキサン（１６．３ml）に溶解し、０℃で１０分間攪拌
した後、ＤＰＰＡ（０．７６ml，２．７６mmol）および
ＴＥＡ（０．７４ml，７．３６mmol）を加え、室温で２
４時間攪拌する。この溶液を減圧濃縮してジオキサンを
留去し、残渣に食塩水を加えることにより生成した沈澱
をデカンテーションで分離した後、水で洗い残渣を酢酸
エチルで抽出する。抽出液を５％クエン酸、水および重
曹でよく洗浄し、芒硝（Ｎａ₂ ＳＯ₄ ）で脱水した後、
濃縮乾固し、乾燥する。

【００５３】(3) Ｂｏｃ・Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−
Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−ＯＭｅ（XIII） 生成物（XII）（１．０３ｇ）を乾燥ジオキサン（２
５．３ml）に溶解し、４Ｎ−ＨＣｌ／ジオキサン（２
５．３ml）を加え、室温で１時間攪拌する。この溶液を
濃縮乾固し、乾燥エーテルを加えて結晶化させ、遠心分
離の後、乾燥エーテルで更に数回洗浄し乾燥する。これ
により、ＨＣｌ・Ｈ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｒｇ（Ｍｔ
ｓ）−ＯＭｅが０．６８ｇ（１．２mmol）得られた。こ
れをＢｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（０．２６ｇ，１．５mmol）
とともに、精留ＤＭＦ（９．４ml）／ジオキサン（９．
４ml）に溶解し、０℃で１０分間攪拌した後、ＤＰＰＡ
（０．５ml，１．８mmol）およびトリエチルアミン
（０．４９ml，４．８mmol）を加え、室温で２４時間攪
拌する。得られた溶液は化合物（XII）と同様の過程に
より減圧濃縮、食塩水の添加、生成した沈澱の洗浄およ
び乾燥を行い、酸性アルカリ性物質を除去することによ
り、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ９）−Ａｒｇ（Ｍ
ｔｓ）−ＯＭｅを０．４８ｇ得た。

【００５４】(4) Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｂ
ｚｌ）−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−ＯＭｅ（XIV） 生成物（XIII）から化合物（XI）と同様の方法でＢｏｃ
基を除去して、ＨＣｌ・Ｈ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）
−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−ＯＭｅを０．４０ｇ（０．６３mm
ol）得た。これを等モルのＢｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ（０．
１４ｇ）とともに精留ＤＭＦ（５．４ml）／ジオキサン
（５．４ml）に溶解し、０℃で１０分間攪拌の後、ＤＰ
ＰＡ（０．２１ml）およびトリエチルアミン（０．２０
ml）を加え、室温で２４時間攪拌する。得られた溶液は
化合物（XII）および（XIII）と同様にして、酸性およ
びアルカリ性物質の除去を行い乾燥する。こうして、Ｂ
ｏｃ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｒｇ（Ｍ
ｔｓ）−ＯＭｅを０．２８ｇ得た。

【００５５】(5) Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｉｌｅ−
Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−ＯＭｅ
（XV） 生成物（XIV）は、(1) と同様の方法でＢｏｃ基の除去
を行った。但し、ペプチド鎖の伸長と、Ｉｌｅ側鎖の立
体障害を考慮し、溶媒の量および反応時間を通常の２〜
３倍に増加した。即ち、 生成物（XIV）０．２８ｇ、
乾燥ジオキサン６．０ml、４Ｎ ＨＣｌ／ジオキサン
６．０ml、２時間攪拌の条件を用いた。得られたペプチ
ド（ＨＣｌ・Ｈ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−
Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−ＯＭｅ：収量０．１４ｇ，０．１９
mmol）は、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ０．１４ｇ
（０．１９mmol）とともに精留ＤＭＦ（２．８ml）／ジ
オキサン（２．８ml）に溶解し、０℃で１０分間攪拌し
た後、ＤＰＰＡ（０．１２ml）およびトリエチルアミン
（０．７２ml）を加え、室温で２４時間攪拌する。得ら
れた溶液は、化合物（XII）および（XIII）と同様に洗
浄し、乾燥する。これにより、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚ
ｌ）−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｒｇ（Ｍ
ｔｓ）−ＯＭｅを０．１２ｇ得た。

【００５６】(6) 生成物（XV）０．１４ｇ（０．１３mm
ol）を乾燥ジオキサン（１．９５ml）に溶解し、１Ｎ
ＮａＯＨ（０．６５ml）を加え、室温で３時間攪拌す
る。減圧濃縮によりジオキサンを除去した後、約２０ml
の水を加え、若干の不溶物を濾別除去する。濾液を冷却
し１０％クエン酸（０℃）を加え、沈澱を生成させる。
沈殿を濾過し少量の水で２回洗浄し、乾燥すると、Ｂｏ
ｃ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｂｚ
ｌ）−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−ＯＨが０．１０ｇ得られた。
さらに、これを乾燥ジオキサン（６．０ml）、４Ｎ Ｈ
Ｃｌ／ジオキサン（６．０ml）、攪拌３時間の条件でＢ
ｏｃ基の除去を行って、ＨＣｌ・Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）
−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｒｇ（Ｍｔ
ｓ）−ＯＨを０．０８ｇ得た。

【００５７】(7) Ｐｏｌｙ（Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−
Ｓｅｒ−Ａｒｇ）ＨＣｌ（XVII） ＨＣｌ・Ｈ−Ｔｙｒ（Ｂｚｌ）−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅ
ｒ（Ｂｚｌ）−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）−ＯＨ６０mg（０．０
６１mmol）を精留ＤＭＳＯ（０．２ml）に溶解し、ＤＰ
ＰＡ（０．０７ml）およびトリエチルアミン（０．０６
ml）を加え、０℃で１時間、さらに室温で４８時間攪拌
する。４８時間後、同量のＤＰＰＡおよびトリエチルア
ミンを再度加え、０℃で１時間そして室温で４８時間攪
拌する。得られた溶液に水を加え、数回遠心分離し、Ｄ
ＰＰＡ等を除去する。これをさらに少量のＭｅＯＨを加
えて４回遠心分離し、ＭｅＯＨに溶解して、低分子量ペ
プチドを除去する。再度にエーテルで１回遠心分離し、
乾燥する。側鎖保護基の除去のため、Ｐｏｌｙ（Ｔｙｒ
（Ｂｚｌ）−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）−Ａｒ
ｇ（Ｍｔｓ））４０mgをスカベンジャーであるチオアニ
ソール（１ml）とともにトリフルオロ酢酸（２ml）およ
びトリフルオロメタンスルホン酸（０．４ml）の混合溶
媒を加え、０℃で２時間攪拌する。この溶液を濃縮乾固
し、乾燥エーテルを加えて沈澱生成を行い、この沈澱を
エーテルで４回洗浄した後乾燥する。さらにこれを塩酸
塩に変換するため少量の水に溶解し、陰イオン交換樹脂
カラム（アンバーライト ＩＲＡ−４００：Ｃｌ型）に
通し、得られたフラクションのうち、目的物を含む画分
を濃縮乾固し、ＭｅＯＨ少量で残渣を析出させ、エーテ
ルで数回洗浄した後、乾燥し、Ｐｏｌｙ（Ｔｙｒ−Ｉｌ
ｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ）ＨＣｌを２２mg得た。こ
のポリペプチドの分子量は、約１００００であった。

【００５８】

【発明の効果】以上説明したとおり、本発明の繰り返し
構造を持つ新規ポリペプチド化合物は、細胞接着性蛋白
質のコア配列に比べて、細胞接着性が大きく、癌転移抑
制作用等の種々の生物活性を有し、毒性の問題も殆ど無
い。また、その構造は比較的単純であるため、合成が容
易であり、医薬として価値の高いものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＰＢＳが、癌誘発血小板凝集に及ぼす影響を示
すグラフである。

【図２】Ｐｏｌｙ（Ａｒｇ，Ｇｌｙ，Ａｓｐ）が、癌誘
発血小板凝集に及ぼす影響を示すグラフである。

【図３】Ｐｏｌｙ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）が、癌誘
発血小板凝集に及ぼす影響を示すグラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 戸倉 清一 北海道札幌市西区八軒５条西４丁目１番 13号

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式： （Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ）ｎ （式中、ｎは２ないし２０の数を表す。）で表される請
   求項１記載のポリペプチドおよびその薬学的に許容され
   る塩。
2. 【請求項２】分子量が、約１００００である請求項１記
   載のポリペプチド。
3. 【請求項３】式： （Ｔｙｒ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ）ｎ （式中、ｎは２ないし２０の数を表す。）で表される請
   求項１記載のポリペプチドまたはその薬学的に許容され
   る塩を有効成分として含有してなる癌転移抑制剤。