JP2735298B2 - 新規な血小板凝集阻害剤 - Google Patents

新規な血小板凝集阻害剤

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Description

【発明の詳細な説明】 発明の背景 本発明は、血小板凝集の阻害剤としての活性を有する
新規なペプチド様化合物に関する。
フイブリノーゲンは血漿の正常成分として存在する糖
タンパク質である。これは、血液凝固機構における血小
板凝集とフイブリン形成に関与する。
血小板は全血中に存在する細胞成分であつて、同じく
血液凝固に関与している。血小板へのフイブリノーゲン
の結合は、血液凝固機構における正常な血小板機能とし
て重要である。血管が傷害を受けた場合、フイブリノー
ゲンに結合した血小板が凝集を開始して、血栓を形成す
る。フイブリノーゲンの血小板との相互作用はgp II b/
III aとして知られている膜糖タンパク質複合体を介し
て起こる。これは血小板機能の重要な特徴である。この
相互作用の阻害剤は血小板血栓形成の調節に有用であ
る。
また、主要な細胞外マトリツクスタンパク質であり、
フイブロネクチンと呼ばれる他の大きな糖タンパク質
が、フイブリノーゲンやフイブリン、および他の構造分
子たとえばアクチン、コラーゲン、プロテオグリカンと
相互作用することも知られている。フイブロネクチンの
細胞結合性領域の様々な比較的大きいポリペプチドフラ
グメントが、細胞接着活性をもつことが明らかにされて
いる（たとえば米国特許第4,517,686号、第4,589,881号
および第4,661,111号参照）。これらのポリペプチドはA
rg−Gly−Asp−Serの内部アミノ酸配列を包含する。同
じ分子からある種の比較的短いペプチドが、基質上に固
定化された場合には基質への細胞の付着を促進し、また
溶解もしくは懸濁型では付着を阻害することも明らかに
されている（米国特許第4,578,079号および第4,614,517
号参照）。これらのペプチドは次式 Ｘ−Arg−Gly−Asp−Ｒ−Ｙ （式中、ＸはＨまたはアミノ酸であり、ＲはThrまたはC
ysである）および Ｘ−Arg−Gly−Asp−Ser−Ｙ （式中、ＸはＨまたはアミノ酸であり、ＹはOHまたはア
ミノ酸である）によつて定義された。
米国特許第4,683,291号には、血小板へのフイブリノ
ーゲン結合の高度な親和性アンタゴニストとして設計さ
れた合成ペプチドによる血小板機能の阻害が開示されて
いる。これらの合成ペプチドは、Ｃ末端結合 Arg−Gly−Asp−Valまたは Arg−Gly−Asp−Ser を有する16個までのアミノ酸残基から構成されている。
Arg−Gly−Asp配列を含有する類似の合成ペプチドお
よびそれらの血小板へのフイブリノーゲン結合阻害剤と
しての使用はKoczewiakら（Biochemistry,23:1767−177
4,1984）、Plowら（Proc.Natl.Acad.Sci.,82:8057−806
1,1985）、Ruggeriら（Ibid.,83:5708−5712,1986）、G
insbergら（J.Biol.Chem.,260（７）:3931−3936,198
5）およびHaverstickら（Blood,66（４）:946−952,198
5）によつて開示されている。
同時に係属中の特許出願第128,379号（1987年12月３
日出願）には、血小板凝集阻害剤として強力な活性を有
するある種の新規なテトラペプチド誘導体が開示されて
いる。これらのテトラペプチド誘導体は、配列 Ｘ−Gly−Asp−Ｙ （式中、ＸおよびＹは様々な有機残基からなる旨定義さ
れている）を含有する。好ましい例としてはArg−Gly−
Asp−（Ｏ−メチル−Tyr）−NH2が挙げられている。
発明の簡単な説明 本発明は、血小板凝集阻害剤として有用な新規のペプ
チド様化合物を提供する。これらの化合物はフイブリノ
ーゲンおよび／または細胞外マトリツクスタンパク質と
血小板gp II b/III a受容体の間の相互作用に拮抗する
ことによつて作用すると考えられている。これらの新規
な阻害剤化合物は次の化学式 （式中、ｘは６〜10であり、ｙは０〜４であり、ＺはH,
COOH,CONH2またはＣ１〜６アルキルであり、Arはそれぞ
れ１〜３個のメトキシ基で置換されたフエニル、ビフエ
ニルもしくはナフチルまたは非置換のフエニル、ビフエ
ニル、ナフチル、ピリジルもしくはチエニル基であり、
Aspはアスパラギン酸残基である）で表すことができ
る。
これらの新規なペプチド様化合物の好ましい群におい
ては、ｘは７〜８である。
同時に係属中の特許出願第128,379号のArg−Gly−Asp
−（Ｏ−メチル−Tyr）−NH2および他のテトラペプチド
と構造を比べると、本発明の化合物においては、ペプチ
ド結合 が偽ペプチドまたはペプチド様結合 （−CH2−CH2−） によつて置換されていることがわかる。すなわち、上述
の群においてｘが７、ｙが１、ＺがＨ、Arがｐ−メトキ
シフエニルである代表的な好ましい化合物、８−グアニ
ジノ−オクタノイル−Asp−２−（４−メトキシフエニ
ル）エチルアミドでは、Ｎ−末端残基とグリシン残基の
間のアミド結合が偽ペプチド結合で置換されている。
本発明の新規な阻害剤化合物は、偽ペプチド結合をも
たない以前の阻害剤よりも蛋白分解に対して抵抗性を示
し、したがつて活性は長く持続する。これらの新規な化
合物は、血小板凝集の活性な阻害剤である。in vivoに
おける血小板減少症アツセイでは、好ましい８−グアニ
ジノ−オクタノイル−Asp−２−（４−メトキシフエニ
ル）−エチルアミドは、係属中の出願第128,379号のArg
−Gly−Asp−（Ｏ−メチル−Tyr）−NH2が同等の阻害活
性を示すのに必要な濃度の約1/8の用量で活性を示し
た。
発明の詳細な説明 本発明の新規な血小板凝集阻害剤は、慣用のペプチド
合成と同様な方法で製造することができる。すなわち、
合成の適当な方法は、Merrifieldの固相合成（J.Amer.C
hem.Soc.,85:2149〜2154,1963;Science,150:178〜185,1
965;同誌，232:341〜347,1986）とほぼ同様である。
固相合成は、固体支持体たとえばクロロメチル化ポリ
スチレン樹脂また、ペプチドアミド誘導体を合成する場
合にはｐ−メチルベンズヒドリルアミン樹脂に、カルボ
キシル末端を繋留したペプチド鎖を生長させていく方法
である。慣用のペプチド固相合成法においては、様々な
Ｎ−保護基たとえばカルボベンジルオキシ基、ｔ−ブチ
ルオキシカルボニル基（BOC）またはＮ−（９−フルオ
レニル−メチルカルボニル）基（Fmoc）、様様なカツプ
リング剤たとえばジシクロヘキシルカルボジイミド（DC
C）またはカルボニルジイミダゾール、各種の分解試薬
たとえばメチレンクロリド（CH2Cl2）中トリフルオロ酢
酸（TFA）、およびその他の古典的溶液相ペプチド合成
の試薬も使用することができる。
本発明においては、固相合成を開始するため、ペプチ
ド様化合物のＣ−末端残基としてはアスパラギン酸を使
用し、保護はFmoc保護試薬で行うのが好ましい。好まし
い固体樹脂はSasrin 樹脂であり、これはBachem Biosc
iences（Philadelphia,Pa）およびSigma Chemical Co.
（St.Louis,Mo.）から市販品を入手できる。Fmoc−Ｏ−
ｔ−ブチル−Ｌ−アスパラギン酸を適当なアリールアミ
ンたとえば４−メトキシフエニルエチルアミンでアミド
化し、ｔ−ブチル基を除去したのち、生成物を固相樹脂
に結合させる。次の工程で、アスパラギン酸残基からFm
oc基を除去し、それにFmoc保護アミノアルカノイル基を
カツプリングさせる。後者のFmoc基を除去したのち、ア
ミノ基をグアニジル化し、ついで樹脂を切断すると、所
望のペプチド様生成物が生成する。
以下の反応図は、好ましい８−グアニジノ−オクタノ
イル−Asp−２−（４−メトキシフエニル）−エチルア
ミドの上述の固相合成を概略例示するものである。
本発明の血小板凝集阻害剤の合成の他の適当な方法は
溶接法による合成である。この方法はアスパルチルアミ
ドの製造で開始し、ついでこれを、８−グアニジノ−オ
クタノイル−Asp−２−（４−メトキシフエニル）−エ
チルアミドの合成を例に以下の反応式に示すように、グ
アニジノアルカン酸とカツプリングさせる。
本発明のペプチド様化合物の血小板結合阻害活性は様
々な検定法によつて明らかにすることができる。一検定
法では、フイブリノーゲンおよび他の血漿蛋白質にも富
んだ多血小板血漿で、血小板凝集を調べる。試験化合物
の存在および不存在下における血小板凝集の程度を比較
して、試験化合物の％阻害率を求める。
他の試験では、コラーゲン誘発血小板減少症（血小板
凝集）に対するペプチド様化合物の効果を、ラツトを用
いin vivoで測定する。この場合も、試験化合物につい
て％阻害率を求め、試験化合物の不存在下における食塩
水またはエタノールビークルに対して比較する。
これらの検定においては、試験化合物の結果をつい
で、既知の活性阻害剤テトラペプチドArg−Gly−Asp−S
erの活性と比較する。
得られた試験結果に基づき、これらの化合物は、たと
えば線維素溶解療法、血栓溶解療法、血管形成術および
冠副側路形成手術後のような再疎通処置後の再閉塞の防
止等、各種の二次的療法に有用であると考えられる。そ
の他の考えられる適応には、心筋梗塞、再発性心筋梗
塞、不安定狭心症、抹消動脈疾患、脳虚血、卒中および
血小板凝集亢進症の予防、血液透析時、短絡形成術の閉
塞の予防、ならびに動脈硬化の進行の防止がある。
以下の実施例によつて本発明をさらに詳細に説明する
が、本発明はこれらの特定の例によつて限定されるもの
ではない。
例Ｉ ８−グアニジノ−オクタノイル−Asp−２−（４−メト
キシフエニル）−エチルアミドの固相合成 A. Fmoc−Asp（OtBu）−２−（４−メトキシフエニ
ル）エチルアミド Fmoc−Asp（OtBu）−OH（32.6g:79.3ミリモル）をCH2
Cl2中に溶解し、氷浴中で冷却した。DCC（16.3g;79.3ミ
リモル）を最小量のCH2Cl2に溶かして、上記混合物に撹
拌しながら加えた。５分間撹拌したのち、４−メトキシ
フエニルエチルアミン（10.0g;66.1ミリモル）を滴加し
た。混合物を一夜撹拌し、濾過した。濾液を蒸発乾固
し、残留物を酢酸エチルに溶解し、冷蔵した。さらに得
られた固体を濾過し、濾液を飽和NaHCO3で３回、0.1N
HClで１回洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥
し、濾過し、蒸発させ、残留物を酢酸エチル／ヘキサン
から再結晶した。
標記化合物の構造はFAB−MSで確認された。
B. Fmoc−Asp−２−（４−メトキシフエニル）エチル
アミド Fmoc−Asp（OtBu）−２−（４−メトキシフエニル）
−エチルアミド（5.44g;10ミリモル）を50％TFA/CH2Cl2
により、室温で90分間処理した。溶媒を蒸発させ、残留
物をエチルエーテル／石油エーテルと磨砕した。沈殿を
乾燥し、さらに精製することなくそのまま使用した。
C. ８−（Fmoc−アミノ）−オクタン酸 ８−アミノ−オクタン酸（3.98g;25ミリモル）を飽和
炭酸ナトリウムに溶解し、この溶液を、ジオキサンに溶
解したフルオレニルメチルカルボニルコハク酸イミドエ
ステル（8.4g;25ミリモル）に加えた。混合物を一夜撹
拌し、溶媒を蒸発させた。残留物をクロロホルム（200m
l）に再び溶解し、0.5NHCl各50mlで３回、水50mlで洗浄
した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濾過し、蒸
発乾固し、残留物を酢酸エチル／石油エーテルから再結
晶した。収量:12.8g;FAB−MS:（Ｍ＋Ｈ）＝382 ＢからのFmoc−Asp−２−（４−メトキシフエニル）
エチルアミド（８ミリモル）を、N,N−ジメチルホルム
アミド（DMF）（50ml）中、ジシクロヘキシルカルボジ
イミド（８ミリモル）および４−ジメチルアミノ−ピリ
ジン（0.5g）の存在下にSasrin樹脂（7g;0.7ミリモルOH
/g樹脂）とカツプリングした。反応を一夜行つたのち、
樹脂をDMF各40mlで５回、CH2Cl2各20mlで２回洗浄し
た。置換はアミノ酸分析により、0.326ミリモルAsp/g樹
脂であることが認められた。
E. ８−グアニジノ−オクタノイル−Asp−２−（４−
メトキシフエニル）エチルアミド Ｄからの （４−メトキシフエニル）エチルアミドを20％ピペリジ
ン/DMF（３×５分）で処理し、DMF（６×20ml）で完全
に洗浄した。８−（Fmoc−アミノ）−オクタン酸（1.9
g;5ミリモル）を、ついでDMF/CH2Cl2（2:1:20ml）中ジ
シクロヘキシルカルボジイミド（1.03g;5ミリモル）の
存在下、樹脂と一夜カツプリングされた。DMFで数回洗
浄したのち、上述のように20％ピペリジン/DMFでFmoc基
を除去した。樹脂をDMF（40ml）中3,5−ジメチル−ピラ
ゾール−１−カルボキシアミジン（2.1g;10ミリモル）
と一夜反応させ、樹脂をDMF（６×40ml）およびCH2Cl2
（２×40ml）で洗浄した。生成物を、２％TFA/CH2Cl
2（３×15分）を用いて樹脂から切断し、Ｃ−18μ Bond
pak逆相HPLCカラム（1.9cm×15cm）上で精製した。化合
物を15％CH3CN中に溶解し、カラムに適用し、15％CH3CN
/H2O/0.5％TFAを用い、流速9ml/分で溶出した。
例II ８−グアニジノ−オクタノイル−Asp−２−（４−メト
キシフエニル）エチルアミドの溶液合成 A. ８−グアニジノ−オクタン酸 3,5−ジメチル−ピラゾール−１−カルボキシアミジ
ン（100g;0.5モル）およびN,N−ジイソプロピルエチル
アミン（DIEA）（65g;0.5モル）をジオキサン（300ml）
および水（115ml）に懸濁した。８−アミノ−オクタン
酸（48g;0.3モル）を撹拌下に混合物に添加した。無色
の溶液をついで２日間還流した。生成物を濾過し、水
（３×50ml）で洗浄した。
乾燥物質の重量は60g;FAB−MS:（Ｍ＋Ｈ）＝202であ
つた。
B. Boc−Asp（OBzl）−２−（４−メトキシフエニル）
エチルアミド Boc−Asp（OBzl）−OH（38.8g;0.12モル）をCH2Cl
2（250ml）に溶解し、ドライアイス／アセトン浴中で冷
却した。CH2Cl2（50ml）に溶解したDCC（24.75g;0.12モ
ル）を徐々に加えた。10分間撹拌したのち、４−メトキ
シフエニルエチルアミン（15.1g;0.1モル）を滴加し、
撹拌をさらに１時間、室温で継続した。混合物を濾過
し、濾液を飽和NaHCO3溶液（３×50ml）および1N HCl
（50ml）で洗浄した。有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥
し、蒸発させると油状物が得られた。収量:41.5g;FAB−
MS:（Ｍ＋Li）＝463であつた。
C. HCl・Asp（OBzl）−２−（４−メトキシフエニル）
エチルアミド ＢからのBoc−Asp（OBzl）−２−（４−メトキシフエ
ニル）エチルアミド（0.91モル）を4N HCl/ジオキサン
（80ml）で１時間処理した。この溶液を蒸発させ、得ら
れた油状物をさらに精製することなくそのまま次工程に
用いた。
D. ８−グアニジノ−オクタノイル−Asp−（OBzl）−
２−（４−メトキシフエニル）エチルアミド ８−グアニジノ−オクタン酸塩酸塩（0.11モル）をDM
F（100ml）およびピリジン（20ml）に懸濁した。ジスク
シニミジル二炭酸塩（DSC）（25.6g、0.1モル）および
４−ジメチル−アミノ−ピリジン（1g）を懸濁液に加
え、15分間撹拌すると澄明な溶液となつた。混合物を２
時間撹拌し、この時点でＣからのHCl・Asp（OBzl）−２
−（４−メトキシフエニル）エチルアミドおよびDIEA
（12.9g;0.1モル）を加えた。撹拌しながら一夜反応さ
せたのち、蒸発乾固した。
E. ８−グアニジノ−オクタノイル−Asp−２−（４−
メトキシフエニル）エチルアミド Ｄからの粗生成物およびギ酸アンモニウム（5g）をメ
タノール（600ml）に溶解し、窒素気相下に保持した。
この溶液を10％ pd/C（10g）に徐々に添加し、混合物
を一夜撹拌した。触媒を濾去し、濾液を蒸発させて油状
物（200ml）を得た。粗生成物を15％アセトニトリルに
溶解し、Ｃ−18μ Bondapakカラム（5cm×30cm;15〜20
μシリカ）上、化合物のカラムへの注入10分後に開始し
て１％Ａ〜30％Ａの直線勾配で溶出することによつて精
製した（Ａ＝100％CH3CN/0.05％TFA;B＝15％CH3CN/H2O/
0.05％TFA） 例III ９−グアニジノ−ノナノイル−Asp−２−（４−メトキ
シフエニル）エチルアミドの溶液合成 A. 遊離グアニジンの生成 グアニジン炭酸塩（11.41g;63.3ミリモル）を水25ml
に溶解し、硫酸（3.52ml;63.3ミリモル）および水酸化
バリウム（19.97g;63.3ミリモル）を加えた。混合物を
撹拌し、氷上で冷却した。沈殿を濾過または遠心分離に
よつて除去し、遊離のグアニジンを含有する溶液をその
まま次工程に使用した。
B. ９−グアニジノ−ノナン酸の合成 ９−ブロモ−ノナン酸（5g;21.1ミリモル）をジオキ
サン（50ml）に溶解し、Ａからの遊離グアニジン溶液を
加えた。混合物を一夜還流し、白色の沈殿を濾過し、冷
水で３回洗浄し、ついで１当量の0.5M HClから凍結乾
燥した。収量は2.77g（85％）で、標記化合物の構造はF
AB−MS、NMRおよび元素分析によつて確認した。
C. ９−グアニジノ−ノナノイル−Asp−２−（４−メ
トキシフエニル）エチルアミドの合成 Fmoc−Asp（OtBu）−２−（４−メトキシフエニル）
エチルアミド（3g;5.5ミリモル、I.A.から）を10％ジエ
チルアミン/DMF 30mlに溶解して、Fmoc保護基を除去し
た。混合物を１時間撹拌し、蒸発乾固した。９−グアニ
ジノ−ノナン酸（1.54g;7.16ミリモル）を10％ピリジン
/DMFに懸濁し、シユウ酸ジ−（Ｎ−スクシニミジル）エ
ステル（2.44g;8.59ミリモル）および４−ジメチルアミ
ノ−ピリジン（0.5g）を懸濁液に加えた。１時間撹拌
後、混合物を上述の脱保護されたAsp（OtBu）−２−
（４−メトキシフエニル）エチルアミドに加え、一夜撹
拌した。白色の沈殿を濾過し、濾液を蒸発乾固した。得
られた生成物を50％TFA/CH2Cl2で30分間処理してｔ−ブ
チル保護基を除去し、ついで蒸発させると粗生成物が得
られた。この粗成物をデシケーターに保存し、μ Bonda
pak C−18カラム（1.9cm×15cm）上、10〜30％CH3CN/H2
Oで溶出して精製した。
本明細書に定義された本発明の他のペプチド様化合物
の例は、上記例Ｉ〜IIIに記載したと同様の方法によ
り、上記例における８−アミノオクタン酸の代わりに当
量の他の適当なω−アミノアルカン酸たとえば７−アミ
ノヘプタン酸もしくは10−アミノデカン酸、またはω−
ブロモアルカン酸たとえば９−ブロモノナン酸を用い、
および／または、４−メトキシフエネチルアミンの代わ
りに当量の他の適当なアリールアミンたとえば４−メト
キシベンジルアミン、２−（3,4−メトキシフエニル）
エチルアミン、ナフチルエチルアミンもしくは２−チエ
ニルエチルアミンを用いて製造される。これらのペプチ
ド様化合物の例はついで、in vitroでヒト多血小板血漿
におけるADP誘発血小板凝集の阻害（例IV）およびIn vi
voでコラーゲン誘発ラツト血小板減少症の阻害（例Ｖ）
について試験する。このようにして製造され、試験され
た化合物およびそれらの試験結果は、それぞれ例IVおよ
びＶに続く第Ｉ表および第II表に示す。
例IV PRPにおけるin−vitroヒト血小板凝集 少なくとも２週間は抗血小板薬剤を服用していない健
康な男性または女性被験者を採血前８時間絶食させたの
ち、双翼状採血針と0.129M緩衝クエン酸ナトリウム（3.
8％）3ml含有30ccプラスチツクシリンジを用いて全血30
mlを捕集した。血液の吸引とともにシリンジを注意深く
回転させて、クエン酸塩を混合させる。多血小板血漿
（PRP）は室温において100×ｇで10分間遠心分離し、遠
心分離はブレーキをかけずに停止するまで惰性で回転さ
せ製造した。PRPをプラスチツクピペツトで血液から分
離し、プラスチツク栓のついた50mlのコーニング円錐
形、滅菌遠沈管に取り、室温に置いた。寡血小板血漿
（PPP）は、残つた血液を室温において2,000×ｇで15分
間遠心分離し、遠心分離物はブレーキをかけないで停止
するまで惰性で回転させて調製した。PRPは血小板数が
２〜３×108個/mlになるようにPPPで調整した。PRPプレ
パレーシヨン400μと試験すべき化合物または食塩水5
0μをPayton凝集計（Payton Scientific,Inc.,Buffal
o,NY）中、37℃で１分間プレインキユベートした。アデ
ノシン５′二リン酸（ADP）（50μＭ）50μをキユベ
ツトに加え、凝集を１分間監視した。化合物はすべて２
回試験する。結果は次のように計算する。
阻害率（％）＝100−対照百分率 試験した化合物ならびにその活性結果を10-4Mにおけ
る阻害率（％）および50％阻止濃度（IC50）を第Ｉ表に
示す。IC50は（化合物が50％阻止を示した場合には）、
用量反応曲線の線形回帰によつて計算した。
例Ｖ in vivoラツト血小板減少症 雄性ラツト［Charles River,CRL:CD（SD）,400〜450
g］を使用した。ラツトはナトリウムペンタバルビター
ル（65mg/kg,Vet Labs,Limited,Inc.,Lenexa,KA）で麻
酔した。切開して両頸静脈を露出させた。注入ポンプ
（Harvard Apparatus,South Natick,Mass.）および19
g、双翼状注射針つき5ccシリンジを用いて、試験化合物
またはビークルを左頸静脈に0.39/mlの速度で３分間注
入した。化合物／ビークル注入２分後に、コラーゲン
（60μg/kg）（Helena Laboratories,Beaumont,TX）
を、1mlシリンジで右頸静脈に注射した。体腔を開いて
大静脈を採血用に露出させた。コラーゲン注射１分後に
化合物の注入を停止し、4.5％EDTA/Tris（0.1M）（pH7.
35）0.35mgと150μＭのインドメサシンを含む3ccシリン
ジを用いて大静脈から血液を採取した（30秒以内）。血
液を126×ｇで10分間遠心分離して、多血小板血漿（PR
P）を調製した。５μのPRPについて、Isoton III 2
0ml中、コールターカウンターを用いて計測した。
コラーゲン誘発凝集の阻害百分率は、試験化合物とコ
ラーゲンで処置した動物の血小板数を（ａ）コラーゲン
を注射しなかつた動物の血小板数（コラーゲン非投与対
照）および（ｂ）ビークルとコラーゲンで処置した動物
の血小板数（凝集対照）と比較して計算した。
試験化合物のin vivoにおける血小板凝集阻害率％お
よび50％有効用量（ED50）を以下の第II表に示す。
新規な８−グアニジノ−オクタノイル−Asp−２−
（４−メトキシフエニル）−エチルアミドもラツトに経
口的に投与した場合、活性を示し、ED50は7.8mg/kgであ
つた。
本発明の新規なペプチド様化合物は、ヒトに、非経口
または経口投与方法のような慣用手段により、好ましく
は医薬的に許容される希釈剤または担体との組成物とし
て投与することができる。血小板凝集阻害剤として好ま
しい投与結路は、非経口投与、とくに静脈内投与であ
る。本発明のペプチド様化合物の静脈内投与に際して
は、たとえば、正常生理食塩水、ヒトアルブミンおよび
その他の希釈剤および担体との溶液とすることができ
る。本発明の活性ペプチド様化合物を医薬的に許容され
る希釈剤および担体中に、治療用投与剤型とした他の適
当な組成物は、製薬技術分野における一般的参考書、た
とえばRemigton's Pharmaceutical Sciences,Arthur Os
ol編、第16版、Mack Publishinga Co.,Easton,Philadep
hia,1980年刊を参考にして製造することができる。
以上の本明細書の開示から、本技術分野の熟練者によ
れば、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、
様々な他の例が明白であろう。このような例はすべて、
本特許請求の範囲に包含されるものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｃ 279/14 Ｃ０７Ｄ 213/38 Ｃ０７Ｄ 213/38 333/20 333/20 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＣＢ

Claims (5)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】次の化学構造式 （式中、ｘは６〜10であり、ｙは０〜４であり、Ｚは
    Ｈ、COOH、CONH2またはＣ１〜６アルキルであり、Arは
    それぞれ１〜３個のメトキシ基で置換されたフエニル、
    ビフエニルもしくはナフチルまたは非置換のフエニル、
    ビフエニル、ナフチル、ピリジルもしくはチエニル基で
    あり、Aspはアスパラギン酸残基である）を有するペプ
    チド様化合物。
  2. 【請求項２】８−グアニジノ−オクタノイル−Asp−２
    −（４−メトキシフエニル）−エチルアミド、 ８−グアニジノ−オクタノイル−Asp−２−（3,4−ジメ
    トキシフエニル）−エチルアミド、 ８−グアニジノ−オクタノイル−Asp−４−メトキシベ
    ンジルアミド、 ８−グアニジノ−オクタノイル−Asp−（４−フエニ
    ル）−フエニルアラニンアミド、 ９−グアニジノ−ノナノイル−Asp−２−（４−メトキ
    シフエニル）−エチルアミド、 10−グアニジノ−デカノイル−Asp−２−（４−メトキ
    シフエニル）−エチルアミド、および ７−グアニジノ−ヘプタノイル−Asp−２−（４−メト
    キシフエニル）−エチルアミドからなる群から選択され
    る特許請求の範囲第１項の化合物。
  3. 【請求項３】医薬的に許容される担体中特許請求の範囲
    第１項に記載のペプチド様化合物の有効量を含有する温
    血哺乳動物の血小板凝集を阻害する医薬組成物。
  4. 【請求項４】医薬的に許容される担体中特許請求の範囲
    第１項に記載のペプチド様化合物の有効量を含有する温
    血哺乳動物の血栓形成を阻害する医薬組成物。
  5. 【請求項５】医薬として許容される担体中の特許請求の
    範囲第１項に記載のペプチド様化合物。
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ES (1) ES2059825T3 (ja)

Families Citing this family (72)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU639409B2 (en) * 1987-12-10 1993-07-29 La Jolla Cancer Research Foundation Conformationally stabilized cell adhesion peptides
US5827821A (en) * 1987-12-10 1998-10-27 The Burnham Institute Conformationally stabilized cell adhesion peptides
US5037808A (en) * 1988-07-20 1991-08-06 Monsanto Co. Indolyl platelet-aggregation inhibitors
US5053393A (en) * 1988-07-20 1991-10-01 Monsanto Company Novel platelet-aggregation inhibitor
US5780595A (en) * 1989-06-16 1998-07-14 Cor Therapeutics, Inc. Platelet aggregation inhibitors
US5686570A (en) * 1989-06-16 1997-11-11 Cor Therapeutics, Inc. Platelet aggregation inhibitors
US5384309A (en) * 1989-07-17 1995-01-24 Genentech, Inc. Cyclized peptides and their use as platelet aggregation inhibitors
US5332726A (en) * 1989-09-29 1994-07-26 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Antithrombotic peptides and pseudopeptides
AU660926B2 (en) * 1990-04-06 1995-07-13 La Jolla Cancer Research Foundation Method and composition for treating thrombosis
US5780303A (en) * 1990-04-06 1998-07-14 La Jolla Cancer Research Foundation Method and composition for treating thrombosis
US5612311A (en) * 1990-04-06 1997-03-18 La Jolla Cancer Research Foundation Method and composition for treating thrombosis
US5648330A (en) * 1990-04-06 1997-07-15 La Jolla Cancer Research Foundation Method and composition for treating vascular graft occlusion
US5672585A (en) * 1990-04-06 1997-09-30 La Jolla Cancer Research Foundation Method and composition for treating thrombosis
US6521594B1 (en) 1990-04-06 2003-02-18 La Jolla Cancer Research Foundation Method and composition for treating thrombosis
TW201303B (ja) * 1990-07-05 1993-03-01 Hoffmann La Roche
US5260277A (en) * 1990-09-10 1993-11-09 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Guanidinyl and related cell adhesion modulation compounds
US5264420A (en) * 1990-09-27 1993-11-23 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
DE69200766T2 (de) * 1991-03-06 1995-05-04 G.D. Searle & Co., Chicago, Ill. Phenylamidinderivate als plättchenaggregationsinhibitoren.
MX9201416A (es) * 1991-03-28 1992-10-01 Rhone Poulenc Rorer Int Peptidos y pseudopeptidos antitromboticos.
AU666853B2 (en) * 1991-04-05 1996-02-29 Genentech Inc. Platelet aggregation inhibitors having high specificity for GP IIbIIIa
WO1992018117A1 (en) * 1991-04-11 1992-10-29 Rhone-Poulenc Rorer International (Holdings), Inc. Anti-thrombotic peptide and pseudopeptide derivatives
HUT68769A (en) * 1991-05-07 1995-07-28 Merck & Co Inc FIBRINOGéN RECEPTOR ANTAGONIST COMPOUNDS AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING THEM AS EFFECTIVE SUBSTANCE
US5220050A (en) * 1991-05-17 1993-06-15 G. D. Searle & Co. Peptide mimetic compounds useful as platelet aggregation inhibitors
EP0630366B1 (en) * 1991-10-15 2003-01-02 G.D. Searle & Co. Substituted heterocyclic derivatives useful as platelet aggregation inhibitors
US5254573A (en) * 1991-10-15 1993-10-19 Monsanto Company Substituted heterocyclic derivatives useful as platelet aggregation inhibitors
US5625093A (en) * 1991-10-15 1997-04-29 G. D. Searle & Co. Substituted β-amino acid derivatives useful as platelet aggregation inhibitors
US5239113A (en) * 1991-10-15 1993-08-24 Monsanto Company Substituted β-amino acid derivatives useful as platelet aggregation inhibitors and intermediates thereof
US5389631A (en) * 1991-10-29 1995-02-14 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
US5272158A (en) * 1991-10-29 1993-12-21 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
WO1993008823A1 (en) * 1991-11-06 1993-05-13 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Guanidinyl and related cell adhesion modulation compounds
JPH07503944A (ja) * 1991-11-22 1995-04-27 イエダ　リサーチ　アンド　デベロツプメント　カンパニー　リミテツド Ａｒｇ−ｇｌｙ−ａｓｐ配列の非ペプチド代替物およびそれらからなる医薬組成物
WO1993012103A1 (en) * 1991-12-13 1993-06-24 G.D. Searle & Co. Phenyl amidines lactones useful as platelet aggregation inhibitors
US5258398A (en) * 1991-12-16 1993-11-02 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Antithrombotic diaminoalkanoic acid derivatives
US5424334A (en) * 1991-12-19 1995-06-13 G. D. Searle & Co. Peptide mimetic compounds useful as platelet aggregation inhibitors
US5264457A (en) * 1992-02-14 1993-11-23 G. D. Searle & Co. Phenyl amidines sulfonamides useful as platelet aggregation inhibitors
US5227490A (en) * 1992-02-21 1993-07-13 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
TW223629B (ja) * 1992-03-06 1994-05-11 Hoffmann La Roche
HUT63609A (en) * 1992-03-10 1993-09-28 Sandoz Ag Process for producing new derivatives and isosters of beta-amino acids and pharmaceutical compositions comprising such compounds
DE4212304A1 (de) * 1992-04-13 1993-10-14 Cassella Ag Asparaginsäurederivate, ihre Herstellung und Verwendung
AU4540693A (en) * 1992-06-25 1994-01-24 G.D. Searle & Co. Phenyl amidine alkanoic acids and lactones useful as platelet aggregation inhibitors
US5338725A (en) * 1992-06-30 1994-08-16 The Research Foundation Of The State University Of New York Anti-aggregatory agents for platelets
WO1994008577A1 (en) * 1992-10-14 1994-04-28 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
US5358956A (en) * 1992-10-14 1994-10-25 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
DE69327536T2 (de) * 1992-10-14 2000-07-06 Merck & Co Inc Fibrinogenrezeptor-antagonisten
US5340798A (en) * 1992-10-14 1994-08-23 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
CA2150550A1 (en) * 1992-12-01 1994-06-09 Melissa S. Egbertson Fibrinogen receptor antagonists
DE4301747A1 (de) * 1993-01-23 1994-07-28 Cassella Ag Substituierte Aminoverbindungen, ihre Herstellung und ihre Verwendung
US5314902A (en) * 1993-01-27 1994-05-24 Monsanto Company Urea derivatives useful as platelet aggregation inhibitors
AU687790B2 (en) * 1993-02-09 1998-03-05 Biogen Idec Ma Inc. Treatment for insulin dependent diabetes
US5409939A (en) * 1993-02-12 1995-04-25 G. D. Searle & Co. Phenyl amidine thio derivatives useful as platelet aggregation inhibitors
US5614539A (en) * 1993-03-15 1997-03-25 G. D. Searle & Co. Urea compounds which are useful as platelet aggregation inhibitors
US5441952A (en) * 1993-04-05 1995-08-15 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
US5334596A (en) * 1993-05-11 1994-08-02 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
GB9312315D0 (en) * 1993-06-15 1993-07-28 Poston Robin Leukocyte adhesion assay
US5612355A (en) * 1993-06-23 1997-03-18 G. D. Searle & Co. Phenyl amidine lactones useful as platelet aggregation inhibitors
US5397791A (en) * 1993-08-09 1995-03-14 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
TW394760B (en) * 1993-09-07 2000-06-21 Hoffmann La Roche Novel Carboxamides, process for their preparation and pharmaceutical composition containing the same
HU222248B1 (hu) * 1993-10-15 2003-05-28 Aventis Pharmaceuticals Inc. Trombózis elleni hatású (aza-cikloalkil)-alkanoil-peptidek, -pszeudopeptidek és ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények
US5780590A (en) * 1993-10-15 1998-07-14 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Antithrombotic azacycloalkylalkanoyl peptides and pseudopeptides
US5821241A (en) * 1994-02-22 1998-10-13 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
US6387880B1 (en) 1994-10-24 2002-05-14 G.D. Searle & Co. Transdermal N-[N-[5-[4-(aminoiminomethly)phenyl]-1-oxopentyl]-L-α-aspartyl]-L-phenylalainine or its esters and their pharmaceutically acceptable salts
US5639765A (en) * 1995-01-17 1997-06-17 G. D. Searle & Co. Guanidinoalkyl glycine β-amino acids useful for inhibiting bone loss
US5602155A (en) * 1995-01-17 1997-02-11 G. D. Searle & Co. Platelet aggregation inhibitors
US5719144A (en) * 1995-02-22 1998-02-17 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
US5681820A (en) * 1995-05-16 1997-10-28 G. D. Searle & Co. Guanidinoalkyl glycine β-amino acids useful for inhibiting tumor metastasis
US5852045A (en) * 1995-10-19 1998-12-22 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
US5789421A (en) * 1995-10-26 1998-08-04 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonist
US5780480A (en) * 1996-02-28 1998-07-14 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonists
US5889023A (en) * 1996-05-10 1999-03-30 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonist
IL129877A (en) * 1996-11-27 2004-08-31 Aventis Pharm Prod Inc A pharmaceutical preparation containing a component having an Xa antagonist activity and an antifouling agent
US5981584A (en) * 1997-02-06 1999-11-09 Merck & Co., Inc. Fibrinogen receptor antagonist prodrugs
US5872122A (en) * 1997-10-16 1999-02-16 Monsanto Company Pyrimidinylamidino β-amino acid derivatives useful as inhibitors of platelet aggregation

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2215948B1 (ja) * 1973-02-01 1976-05-14 Centre Etd Ind Pharma
US4127580A (en) * 1975-02-07 1978-11-28 Parcor Process for the preparation of thieno-pyridine derivatives
US4589881A (en) * 1982-08-04 1986-05-20 La Jolla Cancer Research Foundation Polypeptide
US4517686A (en) * 1982-08-04 1985-05-21 La Jolla Cancer Research Foundation Polypeptide
US4578079A (en) * 1982-08-04 1986-03-25 La Jolla Cancer Research Foundation Tetrapeptide
US4661111A (en) * 1982-08-04 1987-04-28 La Jolla Cancer Research Foundation Polypeptide
US4614517A (en) * 1982-08-04 1986-09-30 La Jolla Cancer Research Foundation Tetrapeptide
JPS5942356A (ja) * 1982-09-02 1984-03-08 Microbial Chem Res Found スパガリン関連化合物およびその製造法
US4683291A (en) * 1985-10-28 1987-07-28 Scripps Clinic And Research Foundation Platelet binding inhibitors
FR2608160B1 (fr) * 1986-12-15 1989-03-31 Inst Nat Sante Rech Med Nouveaux derives peptidiques et leur application notamment en therapeutique
US4857508A (en) * 1987-12-03 1989-08-15 Monsanto Company Novel platelet-aggregation inhibitor peptide derivatives

Also Published As

Publication number Publication date
EP0352249B1 (en) 1993-09-08
EP0352249A1 (en) 1990-01-24
CA1326326C (en) 1994-01-18
DE68908981D1 (de) 1993-10-14
ATE94167T1 (de) 1993-09-15
ES2059825T3 (es) 1994-11-16
DE68908981T2 (de) 1994-04-21
US4879313A (en) 1989-11-07
JPH0278653A (ja) 1990-03-19

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